CN116121211A - 一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的实施例公开了一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，包括：在发酵罐内配制复合益生菌发酵培养基；加入复合益生菌液菌种，所述复合益生菌液菌种包括酿酒酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌，所述复合益生菌液菌种的质量占所述发酵罐罐容的3～6％；在所述发酵罐内进行发酵；发酵时长T1后，加入山梨酸钾；发酵时长T2后，加入自噬诱导剂；发酵时长T3后，将所述发酵罐内的液体经过滤装置过滤，滤除菌体，过滤出来的即为复合益生菌抑菌生物酶。本发明能够产生大量的酶，其抑菌效果达到预期的同时，生产设备简单、能耗极低、发酵成本低，适合生物科技公司大规模生产应用，值得大力推广。
Description
技术领域
本发明涉及功能性复合益生菌产抑菌生物酶制剂技术领域，特别涉及一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法。
背景技术
酿酒酵母菌、植物乳酸菌、纳豆杆菌在现代的生产生活中常见常用的益生菌。酿酒酵母是与人类关系最广泛的一种酵母，它含丰富的蛋白质、维生素、矿物质、多糖和许多生物活性物质，有完整的酶系，能代谢含超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)，SOD可催化超氧阴离子的歧化反应，消除超氧阴离子的毒性，对机体具有保护作用，生活中常用于制作食品及食品添加剂、酿酒、保健品等领域；植物乳杆菌是乳酸菌的一种，发酵时能产乳酸杆菌素，乳酸杆菌素是一种生物型的防腐剂，常用于酸菜发酵、食品添加剂、免疫调节保健品等领域；纳豆杆菌属于枯草芽孢杆菌纳豆菌的亚种，主要作用是能够调解人体的内环境。
因为能够调解人体内的菌群，具有广谱的抗菌活性和极强的抗氧化能力，同时还有一定的耐酸和耐热特性，临床上可以用消化***疾病的调整等，可以调节肠道菌群增加细胞的免疫反应，而且能生成多种蛋白酶，特别是碱性蛋白酶、糖化酶、脂肪酶等营养物质，都能够增强人体的内分泌代谢，有利于营养物质的吸收，这样调节机体的免疫力之后，对于预防疾病的发生能够起到保健效果。这几种益生菌功能强大，应用广泛，但现阶段对这几种菌的应用大部分集中在对菌体本身的应用和如何提高这些菌的培养密度的方法的研究，市面上的产品也是相对应的益生菌保健品上面，现在逐渐出现的一些含益生菌的牙膏，算是益生菌的应用拓展，对这几种菌混合培养后如何提高它的代谢产物，以及这些代谢产物在抑菌方面的应用研究的比较少。
现有利用益生菌产酶的产品，比如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，是单一性的功能性产品。如蛋白酶的作用主要是把蛋白质分解为氨基酸；淀粉酶主要是淀粉水解为葡萄糖；脂肪酶是把脂肪分解为脂肪酸和甘油。产品中绝大部分为单一粉状产品，均是围绕这些产品的直接功能进行的产品开发，生产工艺复杂、投资大、利润低，投资回报比低。而将复合酶制剂产品应用于抑菌除臭的产品比较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，用于解决上述至少一个技术问题，通过这种方法培养出来的酶制剂，能够产生大量的酶，其抑菌效果达到预期的同时，生产设备简单、能耗极低、发酵成本低，适合生物科技公司大规模生产应用，值得大力推广。
本发明的实施例是这样实现的：
一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其包括：
在发酵罐内配制复合益生菌发酵培养基。
加入复合益生菌液菌种，所述复合益生菌液菌种包括酿酒酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌，所述复合益生菌液菌种的质量占所述发酵罐罐容的3～6％。
在所述发酵罐内进行发酵。
发酵时长T1后，加入山梨酸钾。
发酵时长T2后，加入自噬诱导剂。
发酵时长T3后，将所述发酵罐内的液体经过滤装置过滤，滤除菌体，过滤出来的即为复合益生菌抑菌生物酶。
发酵结束后经过滤装置过滤，再包装成品。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述复合益生菌发酵培养基的原料包括：无水葡萄糖、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钾、酵母粉、大豆蛋白胨和纯净水。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述复合益生菌发酵培养基中各原料的重量配比为无水葡萄糖1～30份、氯化钠1～30份、碳酸氢钠0.1～1份、磷酸二氢钾O.1～0.5份、酵母粉O.1～5份、大豆蛋白胨0.1～5份、山梨酸钾O.1～0.5份和纯净水1000份。
加入时搅拌机不断搅拌，让培养基充分融化。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述在发酵罐内配制复合益生菌发酵培养基的方法包括：
在所述发酵罐内加入纯净水。
通过将臭氧发生器连接所述发酵罐的增氧机对所述发酵罐内进行消毒。
静置50分钟后，加热至30～40度，同时进行搅拌，直至臭氧的氧化性完全消失，再加入所述复合益生菌发酵培养基除纯净水以外其余所有原料，继续搅拌，使培养基充分溶解，得到复合益生菌发酵培养基。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述在发酵罐内进行发酵包括：
关闭所述发酵罐的孔盖，进行密封，将安全泄压阀调节到预设值，安全泄压阀的压力预设值在0.05～0.1公斤压力之间。
打开所述发酵罐的增氧机进行增氧，溶解氧保持预设值，溶解氧的预设值设置在1～8mg/L之间。
所述发酵罐按照预设间隔进行搅拌，所述预设间隔为每60～600分钟搅拌一次。
温度保持预设值，温度的预设值设置在20～40度之间。
所述发酵罐的总装液容积不超过发酵罐罐容的70％。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述发酵时长T1后，加入山梨酸钾，包括：
发酵时长T1后，关闭增氧机，由好氧发酵转为缺氧和厌氧发酵状态。
加入山梨酸钾O.1～0.5份。
其中，T1至少为24小时。
其技术效果在于：加入山梨酸钾，抑制霉菌以及酿酒酵母和好氧性细菌的活性，阻止其继续增值，还能防止肉毒杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述发酵时长T2后，加入自噬诱导剂，包括：
发酵时长T21后，加入雷帕霉素。
或者，发酵时长T21后，加入二甲双胍。
或者，发酵时长T21后，加入雷帕霉素，发酵时长T22后，加入二甲双胍。
其中，T21至少为36小时，T22至少为72小时。
其技术效果在于：诱导快速发酵中的复合益生菌因氮饥饿而产生自噬行为，从而代谢出能够抑菌生物酶。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述雷帕霉素加入0.00001～0.01份。
其技术效果在于：雷帕霉素雷帕霉素(RAPA)是一种新型大环内酯类免疫抑制剂，也是一种优良的细胞诱导剂，能诱导细胞产生代谢酶，但在细胞代谢的酶出现后，又很容易被酶分解，所以又不会留下残留。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述二甲双胍加入0.00001～0.01份。
其技术效果在于：二甲双胍，是一种口服降血糖药，又是抗癌靶向药物，还是良好的诱导剂，除了能抑制细胞增殖外,还能诱发自噬。当菌液经过36小时或者72小时好氧发酵后，加入二甲双胍，既能抑制菌液中细胞继续增殖，又能诱发细胞进行自噬，从而诱导菌液中酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌产生我们所需要酶抑菌生物酶。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中发酵时长T3后，对所述发酵罐内的液体进行显微镜镜检，包括：
打开所述发酵罐，若闻到含乙醇的米酒香气味，且检测PH值在3.2～4之间，则对液体进行显微镜镜检。
观察液体中酿酒酵母、植物乳杆菌及纳豆芽孢杆菌的形态是否符合发酵后的形态。
其中，T3至少为96小时。
本发明实施例的有益效果是：
本发明通过酿酒酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌做产酶母菌，采用氮饥饿培养方式结合诱导剂两次诱导，利用先好氧，再兼性好氧培养的方式培养让细胞快速增殖，刺激酿酒酵母产生更大量的酶。通过在不同时间节点，分别添加诱导剂诱导益生菌产生具有抑菌作用的生物酶，使代谢产生的复合酶的U值更高，时间更少，在实际的抑菌使用场景中用量更少，效果更加明显，经济效益更加显著。其抑菌效果达到预期的同时，生产设备简单、能耗极低、发酵成本低，适合生物科技公司大规模生产应用，值得大力推广。本发明的复合生物酶可应用在口腔抑菌除臭，以及卫生间、垃圾中转站的抑菌除臭，可以抑制有害菌滋生，起到抑菌除臭，净化空气的作用，安全环保，快速有效，有广阔的市场空间。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法的流程示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件能够以各种不同的配置来布置和设计。
请参照图1，本发明的第实施例提供一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，包括：
在发酵罐内配制复合益生菌发酵培养基。
加入复合益生菌液菌种，所述复合益生菌液菌种包括酿酒酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌，所述复合益生菌液菌种的质量占所述发酵罐罐容的3～6％。
在所述发酵罐内进行发酵。
发酵时长T1后，加入山梨酸钾。
发酵时长T2后，加入自噬诱导剂。
发酵时长T3后，将所述发酵罐内的液体经过滤装置过滤，滤除菌体，过滤出来的即为复合益生菌抑菌生物酶。
发酵结束后经过滤装置过滤，再包装成品。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述复合益生菌发酵培养基的原料包括：无水葡萄糖、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钾、酵母粉、大豆蛋白胨和纯净水。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述复合益生菌发酵培养基中各原料的重量配比为无水葡萄糖1～30份、氯化钠1～30份、碳酸氢钠0.1～1份、磷酸二氢钾O.1～0.5份、酵母粉O.1～5份、大豆蛋白胨0.1～5份、山梨酸钾O.1～0.5份和纯净水1000份。
加入时搅拌机不断搅拌，让培养基充分溶解。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述在发酵罐内配制复合益生菌发酵培养基的方法包括：
在所述发酵罐内加入纯净水。
通过将臭氧发生器连接所述发酵罐的增氧机对所述发酵罐内进行消毒。
静置50分钟后，加热至30～40度，同时进行搅拌，直至臭氧的氧化性完全消失，再加入所述复合益生菌发酵培养基除纯净水以外其余所有原料，继续搅拌，使培养基充分溶解，得到复合益生菌发酵培养基。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述在发酵罐内进行发酵包括：
关闭所述发酵罐的孔盖，进行密封，将安全泄压阀调节到预设值，安全泄压阀的压力预设值在0.05～0.1公斤压力之间。
打开所述发酵罐的增氧机进行增氧，溶解氧保持预设值，溶解氧的预设值设置在1～8mg/L之间。
所述发酵罐按照预设间隔进行搅拌，所述预设间隔为每60～600分钟搅拌一次。
温度保持预设值，温度的预设值设置在20～40度之间。
所述发酵罐的总装液容积不超过发酵罐罐容的70％。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述发酵时长T1后，加入山梨酸钾，包括：
发酵时长T1后，关闭增氧机，由好氧发酵转为缺氧和厌氧发酵状态。
加入山梨酸钾O.1～0.5份。
其中，T1至少为24小时。
其技术效果在于：加入山梨酸钾，抑制霉菌以及酿酒酵母和好氧性细菌的活性，阻止其继续增值，还能防止肉毒杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述发酵时长T2后，加入自噬诱导剂，包括：
发酵时长T21后，加入雷帕霉素。
或者，发酵时长T21后，加入二甲双胍。
或者，发酵时长T21后，加入雷帕霉素，发酵时长T22后，加入二甲双胍。
其中，T21至少为36小时，T22至少为72小时。
其技术效果在于：诱导快速发酵中的复合益生菌因氮饥饿而产生自噬行为，从而代谢出能够抑菌生物酶。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述雷帕霉素加入0.00001～0.01份。
其技术效果在于：雷帕霉素雷帕霉素(RAPA)是一种新型大环内酯类免疫抑制剂，也是一种优良的细胞诱导剂，能诱导细胞产生代谢酶，但在细胞代谢的酶出现后，又很容易被酶分解，所以又不会留下残留。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中所述二甲双胍加入0.00001～0.01份。
其技术效果在于：二甲双胍，是一种口服降血糖药，又是抗癌靶向药物，还是良好的诱导剂，除了能抑制细胞增殖外,还能诱发自噬。当菌液经过36小时或者72小时好氧发酵后，加入二甲双胍，既能抑制菌液中细胞继续增殖，又能诱发细胞进行自噬，从而诱导菌液中酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌产生我们所需要酶抑菌生物酶。
在本发明较佳的实施例中，上述诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法中发酵时长T3后，对所述发酵罐内的液体进行显微镜镜检，包括：
打开所述发酵罐，若闻到含乙醇的米酒香气味，且检测PH值在3.2～4之间，则对液体进行显微镜镜检。
观察液体中酿酒酵母、植物乳杆菌及纳豆芽孢杆菌的形态是否符合发酵后的形态。
其中，T3至少为96小时。
其中，酿酒酵母、植物乳杆菌及纳豆芽孢杆菌发酵后的形态分别为：
酿酒酵母菌体内液泡和其它内含物消失不可见，且菌体出现1～5个类贮藏粒，菌体形态呈椭圆形或瓜子形态，呈单个，或者呈未脱落的芽体，和母细胞连在一起。
植物乳杆菌散落分布，呈单个杆状或呈2个连在一起或4个连在一起。
纳豆芽孢杆菌菌体聚集在一起，或者呈4～5个连在一起的链状。
本发明的第一个实施例提供一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，包括：
(1)准备不产醭的酿酒酵母、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌复合菌菌种60公斤备用，三种菌的比例为2:0.5:0.5。
(2)在发酵罐加入纯净水900升，开启臭氧发生器消毒30分钟后停机
(3)同时另一个灭菌罐内加入100升纯净水，开启加热装置，依次加入无水葡萄糖10公斤(10克/升)、氯化钠10公斤(10克/升)、碳酸氢钠200克(0.2克/升)、磷酸二氢钾100克(O.1克/升)、酵母粉2000克(2克/升)、大豆蛋白胨1000克(1克/升)，加入的时候搅拌机不断搅拌，充分溶解，关闭灭菌罐盖子，加热到100度维持5分钟即可停止，不需要加热到121度。
(4)将灭菌后的培养基溶液输入到臭氧消毒过的发酵罐内，启动恒温装置，将温度设定在37摄氏度。
(5)在温度在不高于37摄氏度时，加入已准备好的复合菌种60公斤，关闭发酵罐人孔盖，密封好，泄压阀调节到0.05公斤/厘米2，打开增氧机增氧，增氧泵压力设定在0.3公斤/厘米2，溶解氧保持在4mg/L，发酵罐的搅拌设定间隔每300分钟搅拌一次，每次搅拌1分钟。
(6)24小时后，关闭增氧机和增氧阀门，由好氧发酵转为缺氧和厌氧发酵状态。加入山梨酸钾100克(0.1克/升)，主要防止霉菌、葡萄球菌等有害微生物的生长。
(7)在发酵36小时时，按0.0001克/升的比例加入雷帕霉素0.1克，以诱导酵母产生自噬，继续发酵至72小时时，再按0.001克/升的比例加入盐酸二甲双胍1克，继续诱导菌体自噬，刺激菌体分泌生物酶。
(8)发酵96小时后，用取样阀取样，菌液能闻到含乙醇的米酒香气味，检测PH值在3.2-4左右，即可以结束发酵，如果PH值偏高，可以适当延长发酵时间，不会对产酶造成任何影响。
(9)发酵结束后放罐时，从侧面阀门放罐(底阀不要打开)，将罐内菌液的上清液经过滤器过滤，滤除菌体，过滤出来的即为复合益生菌抑菌酶，可以灌装，包装成品。
本发明的第二个实施例提供一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，包括：
(1)准备不产醭酿酒酵母、植物乳杆菌、纳豆芽孢杆菌复合菌菌种60公斤备用，三种菌的比例为2:0.7:0.3。
(2)在发酵罐加入纯净水900升，开启臭氧发生器消毒50分钟后停机
(3)同时另一个灭菌罐内加入100升纯净水，开启加热装置，依次加入无水葡萄糖8公斤(8克/升)、氯化钠7公斤(7克/升)、碳酸氢钠100克(0.1克/升)、磷酸二氢钾100克(O.1克/升)、酵母粉1500克(1.5克/升)、大豆蛋白胨500克(0.5克/升)，加入的时候搅拌机不断搅拌，充分溶解，关闭灭菌罐盖子，加热到100度维持5分钟即可停止，不需要加热到121度。
(4)将灭菌后的培养基溶液输入到臭氧消毒过的发酵罐内，启动恒温装置，将温度设定在37摄氏度。
(5)在温度在不高于37摄氏度时，加入已准备好的复合菌种60公斤，关闭发酵罐人孔盖，密封好，泄压阀调节到0.05公斤/厘米2，打开增氧机增氧，增氧泵压力设定在0.3公斤/厘米2，溶解氧保持在4mg/L，发酵罐的搅拌设定间隔每300分钟搅拌一次，每次搅拌1分钟。
(6)24小时后，关闭增氧机和增氧阀门，由好氧发酵转为缺氧和厌氧发酵状态。加入山梨酸钾100克(0.1克/升)，主要防止霉菌、葡萄球菌等有害微生物的生长。
(7)在发酵36小时时，按0.0001克/升的比例加入雷帕霉素0.2克，，继续发酵至96小时。
(8)发酵96小时后，用取样阀取样，菌液能闻到含乙醇的米酒香气味，检测PH值在3.2-4左右，即可以结束发酵，如果PH值偏高，可以适当延长发酵时间，不会对产酶造成任何影响。
(9)发酵结束后放罐时，从侧面阀门放罐(底阀不要打开)，将罐内菌液的上清液经过滤器过滤，滤除菌体，过滤出来的即为复合益生菌抑菌酶，可以灌装，包装成品。
本发明的第三个实施例提供本发明抑菌生物酶对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌的抑菌效果。
溶出性抑菌试验(金黄色葡萄球菌)经3次重复试验，抑菌生物酶对金黄色葡萄球菌作用2min、5min、10min、20min后，抑菌率见表1。
表1：抑菌生物酶对金黄色葡萄球菌抑菌效果
溶出性抑菌试验(白色念珠菌菌)经3次重复试验，抑菌生物酶对白色念珠菌菌作用2min、5min、10min、20min后，抑菌率见表2。
表2：抑菌生物酶对白色念珠菌抑菌效果
溶出性抑菌试验(大肠杆菌)经3次重复试验，抑菌生物酶对大肠杆菌作用2min、5min、10min、20min后，抑菌率见表3。
表3：抑菌生物酶对大肠杆菌抑菌效果
抑菌性能试验:经3次重复试验，结果表明这种由益生菌诱导产抑菌除臭酶制剂对作用2min的金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、大肠杆菌有明显抑菌作用。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。
Claims (10)
1.一种诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，包括：
在发酵罐内配制复合益生菌发酵培养基；
加入复合益生菌液菌种，所述复合益生菌液菌种包括酿酒酵母、植物乳杆菌和纳豆芽孢杆菌，所述复合益生菌液菌种的质量占所述发酵罐罐容的3～6％；
在所述发酵罐内进行发酵；
发酵时长T1后，加入山梨酸钾；
发酵时长T2后，加入自噬诱导剂；
发酵时长T3后，将所述发酵罐内的液体经过滤装置过滤，滤除菌体，过滤出来的即为复合益生菌抑菌生物酶。
2.根据权利要求1所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述复合益生菌发酵培养基的原料包括：无水葡萄糖、氯化钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钾、酵母粉、大豆蛋白胨和纯净水。
3.根据权利要求2所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述复合益生菌发酵培养基中各原料的重量配比为无水葡萄糖1～30份、氯化钠1～30份、碳酸氢钠0.1～1份、磷酸二氢钾O.1～0.5份、酵母粉O.1～5份、大豆蛋白胨0.1～5份、山梨酸钾O.1～0.5份和纯净水1000份。
4.根据权利要求2或3任一项所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述在发酵罐内配制复合益生菌发酵培养基的方法包括：
在所述发酵罐内加入纯净水；
通过将臭氧发生器连接所述发酵罐的增氧机对所述发酵罐内进行消毒；
静置50分钟后，加热至30～40度，同时进行搅拌，直至臭氧的氧化性完全消失，再加入所述复合益生菌发酵培养基除纯净水以外其余所有原料，继续搅拌，使培养基充分溶解，得到复合益生菌发酵培养基。
5.根据权利要求1所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述在发酵罐内进行发酵包括：
关闭所述发酵罐的孔盖，进行密封，将安全泄压阀调节到预设值，安全泄压阀的压力预设值在0.05～0.1公斤压力之间；
打开所述发酵罐的增氧机进行增氧，溶解氧保持预设值，溶解氧的预设值设置在1～8mg/L之间；
所述发酵罐按照预设间隔进行搅拌，所述预设间隔为每60～600分钟搅拌一次；
温度保持预设值，温度的预设值设置在20～40度之间；
所述发酵罐的总装液容积不超过发酵罐罐容的70％。
6.根据权利要求1所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述发酵时长T1后，加入山梨酸钾，包括：
发酵时长T1后，关闭增氧机，由好氧发酵转为缺氧和厌氧发酵状态；
加入山梨酸钾O.1～0.5份；
其中，T1至少为24小时。
7.根据权利要求1所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述发酵时长T2后，加入自噬诱导剂，包括：
发酵时长T21后，加入雷帕霉素；
或者，发酵时长T21后，加入二甲双胍；
或者，发酵时长T21后，加入雷帕霉素，发酵时长T22后，加入二甲双胍；
其中，T21至少为36小时，T22至少为72小时。
8.根据权利要求7所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述雷帕霉素加入0.00001～0.01份。
9.根据权利要求7所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，所述二甲双胍加入0.00001～0.01份。
10.根据权利要求1所述的诱导复合益生菌产抑菌生物酶的培养方法，其特征在于，发酵时长T3后，对所述发酵罐内的液体进行显微镜镜检，根据益生菌发酵后的形态判断是否得到抑菌生物酶成品，包括：
打开所述发酵罐，若闻到含乙醇的米酒香气味，且检测PH值在3.2～4之间，则对液体进行显微镜镜检；
观察液体中酿酒酵母、植物乳杆菌及纳豆芽孢杆菌的形态是否符合发酵后的形态；
若符合发酵后的形态，则判断得到抑菌生物酶成品；
其中，T3至少为96小时。
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| CN108883127A (zh) * | 2016-05-10 | 2018-11-23 | 夏友动天有限公司 | 用于预防和治疗***病的包含乳酸菌的组合物及其用途 |
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2022
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