CN116042692A - 一种萱草的遗传转化方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种萱草的遗传转化方法，包括如下步骤：使用农杆菌侵染液侵染萱草转化受体，农杆菌中包括目的基因和ANS的编码基因，农杆菌能够将目的基因和ANS的编码基因***到萱草转化受体中并使所述目的基因和ANS的编码基因共表达。本申请首次利用三色堇ANS基因侵染萱草愈伤组织，证明了如SEQ ID No.1序列的三色堇ANS基因可以有效提高萱草愈伤组织遗传转化的成功率，通过荧光显微镜下检测，平均阳性率可以达到65％，实现萱草遗转化体系的构建；在萱草愈伤组织筛选培养过程中逐渐降低抗生素浓度，可以有效降低萱草愈伤组织的褐化率及白化率，更加优化了萱草遗传转化体系，进一步提高了萱草遗传转化的成功率。

Description

一种萱草的遗传转化方法及其应用
技术领域
本申请涉及分子育种领域，尤其涉及一种萱草的遗传转化方法及其应用。
背景技术
萱草是百合科萱草属的多年生宿根草本，花型独特，花色繁多且易于栽培繁殖，既可以用于布置各式花坛、道路隔离带、疏林草坡，亦是很好的地被植物，具有很好的园林绿化效果。国内对萱草的研究主要集中在杂交及倍性育种、引种栽培和品种筛选评价等方面。国外对萱草的研究主要集中在抗性基因、倍性育种和遗传特性等方面。萱草的花色较为单一，因此花叶的观赏性研究也是进行品种选育需要着重考虑的因素。但是，传统的育种技术选育稀有花色或叶色品种的存在难度大、时间长的问题。因此，亟需建立一种高效可行的萱草遗传转化体系。
ANS基因是花色素重要的合成酶，是花青素合成下游途径中重要的调控基因，它可以催化无色的二氢黄酮醇形成砖红色的天竺葵色素、红色的矢车菊色素以及蓝紫色的飞燕草色素。很多品种的叶色观赏性不亚于花色，尤其是对于萱草这样花期较短的植物，可以拓展花色观赏价值，提高其商品价值。目前未有现有技术将ANS基因与萱草遗传转化进行联系。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效可行的萱草遗传转化体系，利用农杆菌将目的基因和三色堇ANS(VwANS)的编码基因***到萱草转化受体中，并使目的基因和ANS的编码基因共表达，提高了萱草遗传转化效率。
一方面，本申请提供了一种萱草的遗传转化方法，包括如下步骤：
使用农杆菌侵染液侵染萱草转化受体，所述农杆菌中包括目的基因和ANS的编码基因，所述农杆菌能够将目的基因和ANS的编码基因***到萱草转化受体中并使所述目的基因和ANS的编码基因共表达。
进一步的，所述ANS的编码基因来自三色堇、拟南芥、番木瓜、金钱橘、甜橙或苹果中；优选的，所述ANS的编码基因来自三色堇中；更优选的，所述ANS的编码基因包括SEQ IDNo.1所示序列和/或与SEQ ID No.1的序列具有至少90％以上序列同一性的序列。
本领域技术人员可根据常规技术手段设计获得ANS的编码基因的引物序列。
在一种优选的实施方式中，以三色堇为RNA模板，以SEQ ID No.2-3所示引物进行PCR扩增反应，获得如SEQ ID No.1所示ANS的编码基因。
VwANS-F(SEQ ID No.2)：GCTCTAGAGCCAGTTGGGCTGGGCTTAGAGVwANS-R(SEQ IDNo.3)：GCTCGAGCGGGACCATGTTGTGGAGGAT
进一步的，所述农杆菌为根癌农杆菌或发根农杆菌；优选的，所述农杆菌为根癌农杆菌；更优选的，所述根癌农杆菌选自EHA105、EHA101、LBA4404、GV3101、AGL1中的一种或多种；更优选的，所述根癌农杆菌为LBA4404。
进一步的，所述农杆菌中含有表达载体；优选的，所述表达载体选自PBI121、pCAMBIA1300、pCAMBIA1301、pCAMBIA3300中的一种或多种；更优选的，所述表达载体为PBI121；
优选的，所述目的基因和ANS的编码基因位于表达载体上。
优选的，所述表达载体为PBI121上带有荧光位点，更优选的，所述荧光位点为GEP荧光标记基因。
在一种优选的实施方式中，以GEP荧光基因作为目的基因，构建PBI121-GEP-ANS重组载体，并将重组载体转入农杆菌LBA4404中，利用农杆菌的特性侵染萱草愈伤组织。
本领域技术人员可以想到，使用本申请所述遗传转化方法时可根据实际情况选择目的基因，目的基因的选择并不影响本申请所述遗传转化方法的具体效果。
同样的，本领域技术人员也可以选择其他荧光基因作为荧光标记。
本申请中荧光标记的作用为辅助实验人员快速筛选和确定成功转入表达载体的植株或愈伤组织。其中，本领域技术人员可通过购买或合成获得已知荧光标记基因，并根据荧光标记基因设计并合成其对应引物。荧光标记基因可选自GEP、GFP、YFP、CFP、BFP中的一种或几种，只要能达到利用荧光标记进行筛选的作用即可，在此不做具体限制。
进一步的，所述农杆菌侵染液OD600的值为0.5-1.0，侵染时间为10-20min；优选的，所述农杆菌侵染液OD600的值为0.5，侵染时间为15min；
优选的，所述农杆菌侵染液中还包括乙酰丁香酮(AS)，所述乙酰丁香酮的浓度为100-200μmol/L；更优选的，所述乙酰丁香酮的浓度为150μmol/L。
进一步的，所述遗传转化方法还包括将完成侵染的萱草转化受体进行暗培养的步骤；优选的，所述暗培养条件包括：培养温度为22℃-30℃，暗培养时间为1-2d；更优选的，所述暗培养条件包括：培养温度为24℃-28℃，暗培养时间为2d。
在一种优选的实施方式中，萱草愈伤组织侵染，具体包括如下步骤：
将准备好的(PBI121-GEP-ANS)农杆菌LBA4404侵染液导入到100mL的锥形瓶中，按照侵染液浓度为OD600＝0.5，AS浓度为150(μmol/L)，侵染时间为15min进行愈伤组织的侵染。之后转入到MS+6-BA 0.6mg/L，温度24℃-28℃，暗培养2d。
进一步的，所述萱草转化受体包括萱草根、茎、叶、花和/或愈伤组织；优选的，愈伤组织。
本申请中发现萱草转化过程中萱草不同部位作为外植体诱导获得的愈伤组织未发现明显差异，因此对于愈伤组织的来源部位不作具体限定。
进一步的，所述愈伤组织完成侵染后在筛选培养基中进行筛选培养，所述筛选培养基包括抗生素；优选的，所述抗生素包括卡那霉素(Kan)、羧苄西林(Car)、噻孢霉素(Cef)中的一种或几种；优选的，所述抗生素包括卡那霉素和噻孢霉素；更优选的，所述抗生素包括50-200mg/L卡那霉素和100-200mg/L噻孢霉素；更优选的，所述抗生素包括50mg/L卡那霉素和200mg/L噻孢霉素；
更优选的，所述筛选培养基中抗生素浓度随培养过程逐渐降低至0mg/l。
具体的，培养第一阶段时，筛选培养基抗生素浓度为：Kan 50mg/L和Cef200mg/L；
培养第二阶段时，筛选培养基抗生素浓度为：Kan 25mg/L和Cef 200mg/L；
培养第三阶段时，筛选培养基抗生素浓度为：Kan 0mg/L和Cef 150mg/L；
培养第四阶段时，筛选培养基抗生素浓度为：Kan 0mg/L和Cef 100mg/L；
培养第五阶段时，筛选培养基抗生素浓度为：Kan 0mg/L和Cef 50mg/L；
培养第六阶段时，筛选培养基抗生素浓度为：Kan 0mg/L和Cef 25mg/L；
培养第七阶段时，筛选培养基抗生素浓度为：Kan 0mg/L和Cef 0mg/L。
所述每个阶段的培养时间可由本领域技术人员根据实际情况进行调整，本申请中以10天为例。
优选的，筛选培养基中还包括MS+6-BA 0.6mg/L+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
在一种优选的实施方式中，提供了一种利用三色堇ANS(VwANS)基因提高萱草愈伤组织遗传转化效率的方法，具体包括以下步骤：
1)使用健康的萱草愈伤组织，进行2次继代，选取无菌且不带有不定芽的萱草愈伤组织，在MS+6-BA 0.6mg/L预培养培养基中进行预培养2d；
2)进行三色堇ANS在萱草愈伤组织的遗传表达，具体为使用含有PBI121-GEP-ANS重组载体的农杆菌LBA4404侵染液侵染步骤1)中的萱草愈伤组织，侵染液浓度为OD600＝0.5，AS浓度为150μmol/L，侵染时间为15min，侵染完成后转入MS+6-BA0.6mg/L共培养培养基中，温度24℃-28℃，暗培养2d；
3)完成侵染的萱草愈伤组织进行脱菌，脱菌完成以后，转入到MS+6-BA0.6mg/L+Kan 50mg/L+Cef 200mg/L筛选培养基中进行筛选培养，筛选培养获得具有Kan、Cef抗性的转基因愈伤组织，在培养过程中逐渐降低抗生素浓度，在60d以后转入到无抗生素的MS+6-BA0.6mg/L+IAA0.1mg/L诱导培养基中；
4)对转基因愈伤进行荧光显微镜阳性检测、表型观察及PCR阳性鉴定。
本发明首次针对三色堇ANS基因对萱草建立并优化了其遗传转化体系，为萱草分子育种工作提供了理论基础与试验依据，将有效推动萱草遗传体系进程。
另一方面，本申请还提供了一种利用农杆菌进行萱草遗传转化的产品，所述产品中包括：利用上述的遗传转化方法能够将目的基因和ANS的编码基因***到萱草转化受体中并使所述目的基因和ANS的编码基因共表达的试剂，所述试剂包括农杆菌，所述农杆菌中包括目的基因和ANS的编码基因。
另一方面，本申请还提供了一种上述的遗传转化方法在制备萱草中的应用。
本发明具有如下有益效果：
1、本申请首次利用三色堇ANS基因侵染萱草愈伤组织，证明了如SEQ ID No.1序列的三色堇ANS基因可以有效提高萱草愈伤组织遗传转化的成功率，平均阳性率可以达到65％，最终PCR检测阳性率为41％，实现高效萱草遗转化体系的构建；
2、本申请中发现在萱草愈伤组织筛选培养过程中逐渐降低抗生素浓度至0mg/l，可以有效降低萱草愈伤组织的褐化率及白化率，最低可至2％以内，更加优化了萱草遗传转化体系，进一步提高了萱草遗传转化的成功率。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1是三色堇ANS核苷酸序列与氨基酸序列及其对应关系图；
图2是重组PBI121-GEP-ANS载体电泳图，其中M：Marker DL2000，1：PCR产物；
图3是筛选培养基优化试验折线图，其中横坐标为培养时间(d)，纵坐标为百分率；
图4是转基因植株鉴定荧光图，其中A：野生型萱草愈伤在自然灯光下的效果，B：野生型萱草愈伤在荧光显微镜下的效果，C：转基因萱草愈伤在自然灯光下的效果，D：转基因萱草愈伤在荧光显微镜下的效果；
图5是转基因植株鉴定电泳图，其中M：Marker DL2000，1-2：转基因植株DNA。
具体实施方式
为了更清楚的阐释本申请的整体构思，下面结合说明书附图以实施例的方式进行详细说明。在下文的描述中，给出了大量具体的细节以便提供对本发明更为彻底的理解。然而，对于本领域技术人员来说显而易见的是，本发明可以无需一个或多个这些细节而得以实施。在其他的例子中，为了避免与本发明发生混淆，对于本领域公知的一些技术特征未进行描述。
实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
如未特殊说明，在以下实施方式中，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本申请中涉及培养基及其配方如表1和表2所示：
表1
Figure BDA0003875748380000061
Figure BDA0003875748380000071
注：附加试剂可根据实际需求进行调整
表2
Figure BDA0003875748380000072
本领域技术人员可选择自己进行农杆菌感受态细胞的制备或者通过购买的方式获得农杆菌感受态细胞，农杆菌感受态细胞的制备方法为：
第一步：从LB平板上挑取新活化的LBA4404菌落接种于10mL LB液体培养基中，在28℃摇床震荡培养过夜；
第二步：取1mL菌液接种于100mL LB液体培养基中，28℃摇床震荡培养过夜，直至A600等于0.6；
第三步：将培养物放在冰上冰浴10min；
第四步：将培养物转移至50mL离心管中，在4℃条件下，4000rpm离心10min；
第五步：小心的移去上清，将菌体用30mL冷的0.1M CaCl2悬浮沉淀，冰浴20min，4000rpm，4℃离心10min；
第六步：小心的移去上清，将菌体用2mL冷的0.1M CaCl2悬浮沉淀，冰浴10min，将悬浮液以每管200μL分装于1.5mL离心管中。最后保存于-80℃中，农杆菌感受态细胞最好现用现配，以保证感受态细胞的活性。
实施例1重组PBI121-GEP-ANS的构建
1、三色堇ANS的克隆
以三色堇为RNA模板，以SEQ ID No.2-3所示引物进行PCR扩增反应，PCR反应程序为95℃预变性5min，94℃1min，58℃1min，72℃90s，共35个循环，72℃5min结束反应。
用琼脂糖凝胶电泳回收长度约为1000bp的基因序列，具体三色堇ANS基因序列如SEQ ID No.1所示，具体核苷酸序列与氨基酸序列及其对应关系如图1所示，与pMD18-T连接后转化大肠杆菌DH5α，进行LB+100mg/L氨苄青霉素平板培养，培养条件为37℃过夜培养，挑取白色单菌落接种于LB液体培养基进行培养，培养条件为37℃过夜培养，挑取含有目的ANS基因的质粒进行测序验证，具体验证结果如图2所示，由图2可见顺利获得连接三色堇ANS基因序列的pMD18-T重组质粒。
扩增引物(含有酶切位点)序列如下：
VwANS-F(SEQ ID No.2)：GCTCTAGAGCCAGTTGGGCTGGGCTTAGAG
VwANS-R(SEQ ID No.3)：GCTCGAGCGGGACCATGTTGTGGAGGAT
2、PBI121-GEP-ANS植物表达载体构建
用XbaⅠ和BamHⅠ分别双酶切上述重组质粒(含有测序结果正确的目的基因片段ANS)和PBI121-GEP，将2个质粒进行连接，转化大肠杆菌DH5α，进行LB+100mg/L卡那霉素平板培养，培养条件为37℃过夜培养，挑取白色单菌落接种于LB液体培养基进行培养，培养条件为37℃过夜培养，得到重组质粒PBI121-GEP-ANS。
3、农杆菌PBI121-GEP-ANS悬浮液(农杆菌侵染液)的制备
将酶切反应后提取的重组质粒与农杆菌进行转化，转化方法如下：
第一步：从-80℃中取出农杆菌感受态细胞(LBA4404)，冰上解冻，立即加入1-5μL质粒DNA与离心管中；
第二步：将离心管冰上放置30min；
第三步：将离心管放入液氮中冷冻1min；
第四步：将离心管放入到水浴锅37℃解冻5min；
第五步：向离心管中加入无抗生素的LB液体培养基800μL，28℃摇床震荡培养2-4h；
第六步：4000rpm离心5min，收集菌体，用100μL的LB液体培养基悬浮沉淀，吸出多余液体，将菌液均匀涂布于LB+100mg/L卡那霉素固体培养基，28℃静置培养2-3d。
挑取单菌落进行含有100mg/L卡那霉素抗性的LB液体培养基，在恒温摇床震荡培养，培养条件为28℃培养2d，至菌液OD600值0.5-1.0之间，获得农杆菌侵染液，用于侵染萱草的愈伤组织。
实施例2利用ANS基因转化萱草愈伤组织的方法
利用ANS基因转化萱草愈伤组织的方法，其特征在于包括以下步骤：
1)农杆菌菌液活化
挑取实施例1中农杆菌PBI121-GEP-ANS单菌落进行含有100mg/L卡那霉素抗性的LB液体培养基，在恒温摇床震荡培养，培养条件为28℃培养2d，至菌液OD600值0.5-1.0之间，用于侵染萱草的愈伤组织。
2)预培养
选取实验室培养的无菌且不带有不定芽的萱草愈伤组织，在MS+6-BA0.6mg/L预培养培养基中，在24℃-28℃，进行预培养2d。
3)共培养
由于目前未有完整的萱草愈伤遗传体系，因此，本申请中为了寻找适宜的侵染方法，通过设计以侵染液浓度的OD600值、侵染时间、AS浓度和培养条件等四个因素，设计四因素三水平的正交试验，每个处理进行3次重复，得到最适宜的侵染方案。具体正交试验设计如表3所示，具体结果如表4所示：
表3正交试验设计
Figure BDA0003875748380000101
表4试验数据统计
Figure BDA0003875748380000102
Figure BDA0003875748380000111
注：K1、K2为平均值，R1表示死亡率的极差值，R2表示阳性率的极差值。
由表4结果可见，从三个因素来看，结合R值(因素极差值)的大小对比可知：对于R1(死亡率，R值从小到大排列)来说，因素四培养条件是最优因素，其次是因素三AS浓度，再其次是因素一OD600值，最后是因素二侵染时间；对于R2(阳性率，R值从大到小排列)来说，因素一OD600值是最优因素，其次是因素二侵染时间和因素三AS浓度，最后是因素四培养条件。
具体结合各因子的最佳水平，考虑死亡率与阳性率可知(K1死亡率低，K2阳性率高)，因素一OD600值第一个水平最优为OD600＝0.5，因素二侵染时间第二个水平最优为15min，因素三AS浓度第二个水平最优为150μmol/L，因素四培养条件第一个水平最优为暗培养2d。
综上所述，萱草的遗传转化方法中最佳侵染方案为：农杆菌侵染液浓度为OD600＝0.5，AS浓度为150μmol/L，侵染时间为15min，暗培养2d。
按上述所得最佳侵染方案进行萱草愈伤组织侵染，具体包括如下步骤：
将准备好的农杆菌侵染液导入到100mL的锥形瓶中，按照侵染液浓度为OD600＝0.5，AS浓度为150(μmol/L)，侵染时间为15min进行愈伤组织的侵染。之后转入到MS+6-BA0.6mg/L共培养培养基上，温度26±2℃，暗培养2d。
实施例3萱草愈伤组织的培养
对实施例2所得完成侵染的萱草愈伤组织进行后续培养，具体包括脱菌和筛选培养两个步骤。
1、脱菌：
首先将愈伤组织浸泡在含有200mg/mLCar的灭菌水中清洗20min，倒掉灭菌水；然后将愈伤组织浸泡在含有150mg/mLCar的灭菌水中清洗15min，倒掉灭菌水；再然后将愈伤组织浸泡在含有100mg/mLCar的灭菌水中清洗10min，倒掉灭菌水；最后将愈伤组织浸泡在含有50mg/mLCar的灭菌水中清洗5min，倒掉灭菌水，用灭过菌的滤纸吸干愈伤表面的水分。
每隔10d对萱草愈伤组织进行以上脱菌处理。
2、筛选培养：
在转基因萱草培养过程中，会出现不同程度的白化以及褐化现象，已有文献证明，这与抗生素的浓度与种类有关，因此，本申请中选择使用同一侵染方案培养的萱草愈伤组织进行抗生素种类及浓度的正交试验，旨在选择出最适宜萱草愈伤组织生长的最佳抗生素组合及浓度，并用荧光显微镜进行初步的阳性率检测。每个处理进行3次重复，具体正交试验设计如表5所示与结果分析如表6所示：
表5培养基抗生素的筛选3因素3水平试验设计
Figure BDA0003875748380000121
表6培养基抗生素的筛选试验数据统计
Figure BDA0003875748380000122
Figure BDA0003875748380000131
注：K1、K2为平均值，R1表示死亡率的极差值，R2表示阳性率的极差值。
从极差分析表格可知：从三个因素来看，结合R值(因素极差值)的大小对比可知，对于R1(死亡率，R值从小到大排列)、R2(阳性率，R值从大到小排列)来说，最优因素为Cef的浓度，其次是Kan和Car的浓度。
具体结合各因子的最佳水平，考虑死亡率与阳性率可知(K1死亡率低，K2阳性率高)，因素一Kan第二水平最优为浓度50mg/L，因素二Car第一水平最优为0mg/L，第三因素Cef第三水平最优为200mg/L。
所有抗生素组合试验，均在最佳侵染组合的同一条件下进行的正交试验，从正交试验结果来看，最佳抗生素组合为Kan 50mg/L+Cef 200mg/L。
综上所述，完成侵染的萱草愈伤组织的培养方法为：脱菌完成以后，转入到MS+6-BA 0.6mg/L+Kan 50mg/L+Cef 200mg/L的筛选培养基中抑菌培养。
实施例4筛选培养基优化试验
本申请中发现，实施例3中筛选培养基中加入抗生素一方面能很好的抑制住农杆菌的生长，但是过高的抗生素浓度对植物生长有一定程度的抑制作用，为了改善农杆菌侵染后萱草愈伤的褐化、白化情况，以及能更好的优化萱草遗传转化体系，设定农杆菌侵染萱草愈伤组织最佳侵染浓度和时间不变，以最佳抗生素浓度为对照，随着萱草愈伤培养时间的增加进行降低培养基抗生素浓度试验，每组侵染萱草愈伤组织100块，3次重复。试验结果如表7和图3所示。
表7
Figure BDA0003875748380000141
图3为根据表7数据制作的折线图，其中：
荧光检测平均阳性率(％)：y＝-0.1521x+66.256，R2＝0.2727
萱草愈伤平均褐化率(％)：y＝-5.6568x+40.417，R2＝0.9953
萱草愈伤平均白化率(％)：y＝-2.1361x+15.99，R2＝0.9814
根据试验结果所示，随着培养时间的增加，逐渐降低培养基抗生素浓度，荧光检测平均阳性率基本稳定在65％左右，说明降低抗生素浓度并不会影响阳性率，尤其当抗生素Kan、Cef浓度都降为0时，愈伤褐化率降至2.01％，白化率降至1.57％，能更好的优化萱草遗传转化体系。
实施例5三色堇ANS基因阳性率与其他基因对比试验
在与实施例4正交试验因素与水平一致的条件下，利用矮牵牛F3’5’H基因侵染萱草愈伤，结果显示其平均阳性率为32.11％(具体数据如下表8所示)，这与其他萱草遗传转化试验结果基本一致，而三色堇ANS处理萱草的平均阳性率为65％，说明三色堇ANS基因可以提高愈伤组织的阳性率。
表8
Figure BDA0003875748380000142
Figure BDA0003875748380000151
实施例6转基因植株的获得
实施例4得到的转基因愈伤组织在荧光显微镜下进行观察，如图4所示，转基因愈伤在显微镜下呈现绿色荧光效果，而野生型则无此表现。
实施例7转基因植株生根培养
切下实施例4转基因萱草愈伤组织的不定芽放在1/2MS+NAA 0.5mg/L生根培养基中诱导生根30d，驯化移栽至大盆，能够获得阳性植株200棵。
通过提取转基因萱草植株的DNA，利用基因的特异性引物SEQ ID No.2-3，对阳性萱草进行PCR检测，如图5结果显示基因已成功转入到萱草中，且目的条带在1000bp左右，与目的基因大小一致，证明得到的萱草为带有三色堇ANS基因的转基因萱草，本次实验最终得到阳性苗数量为82棵。
以上所述仅为本申请的实施例而已，并不用于限制本申请。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的权利要求范围之内。

Claims (10)

1.一种萱草的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：
使用农杆菌侵染液侵染萱草转化受体，所述农杆菌中包括目的基因和ANS的编码基因，所述农杆菌能够将目的基因和ANS的编码基因***到萱草转化受体中并使所述目的基因和ANS的编码基因共表达。
2.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述ANS的编码基因来自三色堇、拟南芥、番木瓜、金钱橘、甜橙或苹果中；优选的，所述ANS的编码基因来自三色堇中；更优选的，所述ANS的编码基因包括SEQ ID No.1所示序列和/或与SEQ ID No.1的序列具有至少90％以上序列同一性的序列。
3.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌为根癌农杆菌或发根农杆菌；优选的，所述农杆菌为根癌农杆菌；更优选的，所述根癌农杆菌选自EHA105、EHA101、LBA4404、GV3101、AGL1中的一种或多种；更优选的，所述根癌农杆菌为LBA4404。
4.根据权利要求3所述的遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌中含有表达载体；优选的，所述表达载体选自PBI121、pCAMBIA1300、pCAMBIA1301、pCAMBIA3300中的一种或多种；更优选的，所述表达载体为PBI121；
优选的，所述目的基因和ANS的编码基因位于表达载体上。
5.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述农杆菌侵染液OD600的值为0.5-1.0，侵染时间为10-20min；优选的，所述农杆菌侵染液OD600的值为0.5，侵染时间为15min；
优选的，所述农杆菌侵染液中还包括乙酰丁香酮，所述乙酰丁香酮的浓度为100-200μmol/L；更优选的，所述乙酰丁香酮的浓度为150μmol/L。
6.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述遗传转化方法还包括将完成侵染的萱草转化受体进行暗培养的步骤；优选的，所述暗培养条件包括：培养温度为22℃-30℃，暗培养时间为1-2d；更优选的，所述暗培养条件包括：培养温度为24℃-28℃，暗培养时间为2d。
7.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于，所述萱草转化受体包括萱草根、茎、叶、花和/或愈伤组织；优选的，愈伤组织。
8.根据权利要求7所述的遗传转化方法，其特征在于，所述愈伤组织完成侵染后在筛选培养基中进行筛选培养，所述筛选培养基包括抗生素；优选的，所述抗生素包括卡那霉素、羧苄西林、噻孢霉素中的一种或几种；优选的，所述抗生素包括卡那霉素和噻孢霉素；更优选的，所述抗生素包括50-200mg/L卡那霉素和100-200mg/L噻孢霉素；更优选的，所述抗生素包括50mg/L卡那霉素和200mg/L噻孢霉素；
更优选的，所述筛选培养基中抗生素浓度随培养过程逐渐降低至0mg/l。
9.一种利用农杆菌进行萱草遗传转化的产品，其特征在于，所述产品中包括：利用如权利要求1所述的遗传转化方法能够将目的基因和ANS的编码基因***到萱草转化受体中并使所述目的基因和ANS的编码基因共表达的试剂，所述试剂包括农杆菌，所述农杆菌中包括目的基因和ANS的编码基因。
10.一种如权利要求1-8任一所述的遗传转化方法在制备萱草中的应用。
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