CN116036382A - 一种微通道胞外基质神经支架制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种微通道胞外基质神经支架制备方法，制备纤维丝，将多个纤维丝捆扎修剪成束，将纤维丝束置于体内或体外环境，培养后能够被细胞外基质包裹成组织块；溶解组织块中的纤维丝，脱细胞后形成微通道胞外基质神经支架。通过本制备方法能够获得多孔的胞外基质导管，并形成多孔神经支架，其微通道是连通的；支架的导管是胞外基质沉积，经过脱细胞处理，没有免疫原性，能够更好的引导神经再生；导管形状由纤维丝决定，可任意调整其形状和直径。

Description

一种微通道胞外基质神经支架制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种微通道胞外基质神经支架制备方法。
背景技术
外周神经缺损和脊髓损伤一直是临床治疗难题，尤其长节段缺损，外周神经或脊髓组织脱细胞后其结构为微通道多孔状，可用于神经缺损的修补。组织工程神经导管是解决这一问题的必要手段，支架的仿生是获得功能的前提。微通道多孔神经支架一直是神经组织工程领域的制备难题。现有技术中，神经导管的制备大多为单通道，及单一的孔道，目前制备神经导管的方法有制备神经导管的方法有静电纺丝(CN201010595866.3，CN200910050507.7，CN201710606240.X)，相分离(冻干)(CN201310185808.7)、梯度冷凝(CN201210188002.9)、3D打印(CN201610573491.8)等。
静电纺丝神经导管只能制备单孔的，不能制备多孔的结构。无法做到结构仿生。冻干的神经导管可以形成单孔的这种，中间加一个圆柱形固体模具即可，但冻干的神经导管力学性能差，即便通过交联。不能制备Y型，分叉性的神经导管。无法做到结构仿生。梯度冷凝这种方法是采用对溶液一端梯度降温，实现冰晶的有序形成，有方向性，最后通过冻干形成多孔的支架。形成的支架力学性能也较差，比较脆，需要分子交联才能有所改善，通常选用一种或多种材料进行组合。但这种多孔的结构，尺寸无法控制，冰晶形成的速度，大小受温度的梯度影响，并且与模具的导热性能，大小有关。其次，这种多孔结构，各个孔道之间存在连通，神经沿着一端生长，可能未必沿着原来的孔道一直向远端生长，无法做到结构仿生。3D打印方式制备的导管对材料要求比较高，很多材料的粘性等等并不适合3D打印，比较常用的材料为胶原等，但打印精度较差，最高的打印精度只能到200μm，而且孔壁较厚，单位面积内并不能形成多个孔道，无法制备成微通道的结构。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种微通道胞外基质神经支架制备方法。
本发明采用的技术方案是：一种微通道胞外基质神经支架制备方法，包括：
制备纤维丝，捆扎修剪成束；
将纤维丝束置于体内或体外环境，培养后能够被细胞外基质包裹成组织块；
取出组织块，溶解纤维丝，脱细胞形成微通道胞外基质神经支架。
优选地，纤维丝为单根的聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)，聚已内酯(PCL)、聚L-丙交酯-己内酯(PLCL)、聚乳酸(PLA)、左旋聚乳酸(PLLA)、超支化聚乳酸(HPLA)、聚对苯二甲酸-1,4-环己烷二甲醇酯(PCTG)、聚对苯二甲酸乙二醇酯-1,4-环己烷二甲醇酯(PETG)、环己烷二甲醇共聚聚酯(PCTA)、聚碳酸酯(PC)或丙烯酸树脂丝。
优选地，采用三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯、丙酮和六氟异丙醇中的一种或多种的混合物溶解纤维丝。
优选地，采用SDS、十二烷基硫酸钠(SDS)、Triton X-100、Triton X-200、硫代甜菜碱10、硫代甜菜碱16和核酸酶中的一种或多种的混合物脱细胞。
优选地，将纤维丝困扎后修剪成线型、Y型或三叉型；
或者，在纤维丝束中部放置截面蝴蝶型的硅胶模具。
优选地，培养形成组织块时，纤维丝束外侧设有硬质防护网，硬质防护网为网状结构、镂空结构或弹簧状结构。
优选地，组织块培养过程中加入体外培养环境中的培养基中加入成纤维细胞生长因子(FGF)、层粘连蛋白(Laminin)、纤维连接蛋白、***生长因子(CTGF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT-3)，神经营养因子4(NT-4)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、脑源神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)、转化生长因子(TGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF)、***Ⅰ(IGF-Ⅰ)、角质化细胞生长因子(KGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)中的一种或多种。
优选地，通过湿纺或熔融纺丝获得单根聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)，聚已内酯(PCL)、聚L-丙交酯-己内酯(PLCL)、聚乳酸(PLA)、左旋聚乳酸(PLLA)、超支化聚乳酸(HPLA)、聚对苯二甲酸-1,4-环己烷二甲醇酯(PCTG)、聚对苯二甲酸乙二醇酯-1,4-环己烷二甲醇酯(PETG)、环己烷二甲醇共聚聚酯(PCTA)、聚碳酸酯(PC)或丙烯酸树脂纤纤维丝。
微通道胞外基质神经支架制备方法制备得到的微通道胞外基质神经支架。
微通道胞外基质神经支架在外周神经及脊髓修复材料中的应用。
本发明具有的优点和积极效果是：通过本制备方法能够获得多孔的胞外基质导管，并形成多孔神经支架，其微通道是连通的；支架的导管是胞外基质沉积，没有免疫原性，能够更好的引导神经再生；导管形状由纤维丝决定，可任意调整其形状和直径；纤维束可任意捆扎，能够根据需求制备线型、Y型或三叉型等多种形状。
附图说明
图1是微通道多孔胞外基质神经导管横截面图；
图2是微通道多孔胞外基质神经导管斜切面图；
图3添加TGF-β后导管层粘连蛋白免疫荧光染色；
图4不添加TGF-β后导管层粘连蛋白免疫荧光染色；
图5是具有蝴蝶型孔道的微通道多孔胞外基质神经导管横截面图；
图6两组大鼠术后BBB评分比较。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的实施例做出说明。
本发明涉及一种微通道胞外基质神经支架制备方法，制备纤维丝，将多个纤维丝捆扎修剪成束，将纤维丝束置于培养环境中，培养环境可以为体内或体外环境，体内培养环境可为皮下培养，体外培养环境可以为含有培养基的培养瓶，培养后能够被细胞外基质包裹成组织块；溶解组织块中的纤维丝，脱细胞后形成微通道胞外基质神经支架。其具体制备方法可按如下步骤：
步骤一：通过湿纺或熔融纺丝获得单根纤维丝，纤维丝可以为聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)，聚已内酯(PCL)、聚L-丙交酯-己内酯(PLCL)、聚乳酸(PLA)、左旋聚乳酸(PLLA)、超支化聚乳酸(HPLA)、聚对苯二甲酸-1,4-环己烷二甲醇酯(PCTG)、聚对苯二甲酸乙二醇酯-1,4-环己烷二甲醇酯(PETG)、环己烷二甲醇共聚聚酯(PCTA)、聚碳酸酯(PC)或丙烯酸树脂纤维丝，将纤维丝捆扎修剪成束；
步骤二：将纤维丝束置于体内或体外环境；为了避免在制备过程中由于受到外力挤压，导致纤维束变形，可在纤维丝束外侧套设硬质防护网，对放置其内的纤维丝束起到保护作用，尤其针对设计形状复杂的的支架，更需要配合的硬质防护网的保护；硬质防护网一般为硬质管状结构，其上设有空洞，避免影响细胞外基质的沉积，可为网状结构、镂空结构或弹簧状结构；
在培养过程中，纤维束被细胞外基质包裹形成组织块，可根据支架用途在组织块培养过程中加入生长因子，例如体外培养环境中的培养基中加入成纤维细胞生长因子(FGF)、层粘连蛋白(Laminin)、纤维连接蛋白、***生长因子(CTGF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT-3)，神经营养因子4(NT-4)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、脑源神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)、转化生长因子(TGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF)、***Ⅰ(IGF-Ⅰ)、角质化细胞生长因子(KGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)等，可根据微通道胞外基质神经导管的具体用途添加适合的生长因子；
步骤三：取出组织块，采用三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯、丙酮和六氟异丙醇中的一种或多种的混合物溶解纤维丝，上述溶剂能够对纤维丝进行溶解，而对细胞外基质不溶解，通过此方法可以获得多孔的胞外基质导管；再采用SDS、十二烷基硫酸钠(SDS)、Triton X-100、Triton X-200、硫代甜菜碱10、硫代甜菜碱16和核酸酶中的一种或多种的混合物对胞外基质导管脱细胞形成微通道胞外基质神经导管(PMEC)。制备得到的PMEC孔隙率较高，孔隙有序。
微通道胞外基质神经导管能够用作外周神经修复材料，可用于外周神经损伤修复，或可用于脊髓损伤修复。根据设计的支架形状可将纤维丝困扎修剪成线型、Y型或三叉型，相应的可根据设计支架的需求，选用不同直径或数量的的纤维丝进行捆扎，以达到不同的使用目的，适应外周神经损伤的修复；在本发明某些实施例中，还可以在纤维丝束中部放置截面蝴蝶型的硅胶模具，制备得到的神经导管中部具有蝴蝶型孔道，如图5所示，能够用于脊髓损伤的修复，蝴蝶型孔道可容纳脊髓灰质神经元胞体。
下面结合附图对本发明方案做出说明，其中，未具体说明操作步骤的实验方法，均按照相应商品说明书进行，实施例中所用到的仪器、试剂、耗材如无特殊说明，均可从商业公司购买得到。
实施例1：一种长条形可变形状微通道胞外基质神经支架的制备
1.1湿纺法制备不同直径PCL长纤维丝
取4gPCL颗粒(分子量80000)，将其溶解在20mL的三氯甲烷溶液中。在磁力搅拌器的充分搅拌下获得20％的PCL溶液，搅拌时间最少6h以上，以便充分溶解。溶解后静止1h使得气泡散出，用10mL注射器吸取10mL的PCL溶液，注射器接上17-19号不锈钢针头，流速调至4-8ml/h。凝固浴采用100％乙醇溶液，将注射器头深入凝固浴中，随着PCL在凝固浴中不断凝固及重力下沉作用，在凝固过程中可采用玻璃棒对纤维丝进行牵拉，可形成不同直径的纤维丝，以便满足不同的孔径需求，这样单根长PCL纤维丝即可形成。收集长PCL纤维丝并在真空干燥机中彻底挥发有机溶剂即可用于后续体内埋植。
1.2成束PCL纤维丝皮下埋植
为了制备符合外周神经尺寸的桥接导管，大鼠坐骨神经直径约为1.5mm，由于大鼠坐骨神经脱细胞后其孔隙直径平均30-40μm左右。采用40-50μm和/或70-80μm不同直径范围的PCL纤维丝成束捆扎进行体内埋植，大约选取300-500根上述不同直径范围的PCL纤维丝轻柔捆扎成束，丝束塞入直径相当的镂空模具或弹簧中，并行乙醇或环氧乙烷消毒处理。可根据丝束外层保护的镂空框架曲度，最终形成长条形或弧形的丝束。
选取成年SD大鼠，1％戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉及背部消毒后，背部脊柱两侧做1cm小切口，皮下有限分离。将PCL纤维束塞入皮下进行埋植。丝束周围注入1ml卡波姆胶混合的成纤维细胞生长因子(10μg/ml)。伤口缝合后正常饲养，生长4周后于原切口进入取出埋植物。
1.3丝束埋植物组织块的脱细胞和脱PCL处理及结构表征
剪刀修剪埋植物周围组织，去除丝束外层保护框架，生理盐水冲洗后采用40％、60％、80％和100％乙醇脱水(6h/步)。将埋植物在三氯甲烷中浸泡48h，以去除PCL纤维丝，每12小时更换一次氯仿。后采用100％、80％、60％、40％的乙醇再水化(6h/步)，再于无菌纯水中浸泡6h。将丝束埋植组织块浸泡于1％SDS溶液(0.1mol/L PBS配置)48h，然后用1％DNase I和RNase溶液在37℃下浸泡12h进行脱细胞及脱核酸处理。最后将上述处理的埋植物洗涤后冷冻干燥，即可获得有序微通道ECM神经导管(PMEC)。扫描电镜观察有序微通道导管的横切面及斜切片形态，如图1图2所示，制备得到的有序微通道ECM神经导孔隙率较高，孔隙有序。
实施例2：一种分叉型层粘连蛋白富集的微通道胞外基质神经支架的制备2.1湿纺法制备不同直径PLCL纤维丝
称取5g PLCL颗粒，将其溶解于25ml二氯甲烷与丙酮的混合溶液中(2:1，v/v)。搅拌混匀后装入20ml注射器中，连接16-19号不锈钢针头，微量注射泵调整流速为1-8ml/h。凝固浴采用纯大豆油，将注射器针头***凝固浴中，在凝固过程中可采用玻璃棒对纤维丝进行牵拉，可形成不同直径的纤维丝。收集单根PLCL纤维丝，并在真空干燥箱中去除有机溶剂。
2.2获得分叉型层粘连蛋白富集的微通道胞外基质神经支架
为了满足外周神经缺损移植的不同应用背景，面对外周神经分叉处的缺损，则需桥接分叉型的导管。将PLCL纤维丝捆绑成分叉形状，纤维丝可选取40-50μm和/或70-80μm不同直径范围。纤维丝束捆绑后其直径匹配周围神经直径即可。75％乙醇对丝束消毒。选取成年SD大鼠，1％戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔注射麻醉及背部消毒后，背部脊柱两侧做1cm小切口，皮下钝性分离，移植腔隙准备好后，采用无菌的金属锉对背部皮肤内层进行微损伤处理。将PLCL分叉纤维束塞入皮下进行埋植。丝束周围注入1ml卡波姆胶混合的转化生长因子β(transforming growth factor,TGF-β)(5μg/ml)。转化生长因子β可在体内有效激活成纤维细胞增殖及分泌层粘连蛋白。伤口缝合后正常饲养，生长4周后于原切口进入取出埋植物。
剪刀修剪埋植物周围组织，磷酸盐缓冲液冲洗后采用40％、60％、80％和100％乙醇脱水(6h/步)。将埋植物在二氯甲烷中浸泡48h，以去除PLCL纤维丝，每12小时更换一次二氯甲烷。后采用100％、80％、60％、40％的乙醇再水化(6h/步)，再于无菌纯水中浸泡6h。将丝束埋植组织块浸泡于1％SDS溶液(0.1mol/LPBS配置)48h，1％硫代甜菜碱16浸泡12h，然后用1％ DNase I和RNase溶液在37℃下浸泡12h进行脱细胞及脱核酸处理。最后将上述处理的埋植物洗涤后冷冻干燥，即可获得分叉型层粘连蛋白富集的微通道胞外基质神经支架。免疫荧光染色鉴定导管横断面层粘连蛋白表达及分布情况，ELISA法检测层粘连蛋白在导管中的浓度，并与不添加转化生长因子β的导管进行对比。结果见图3和图4，能够看出转化生长因子β的添加对制得的导管具有较大影响，如表1所示，添加转化生长因子β后，导管显著表达层粘连蛋白。
表1两组层粘连蛋白含量比较
层粘连蛋白含量(μg/mg)
添加TGF-β 232.7±28.4*
不添加TGF-β 16.1±4.9
*表示与不添加TGF-β组比P＜0.05
上述实施例仅采用的PCL和PLCL制备神经导管，采用本发明所公开的其他材质纤维丝也能够实现相似的作用，纤维丝的存在导向神经导管的生成，采用什么材质的纤维丝对所形成的神经导管影响较小，同样的用于去除纤维丝的三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯、丙酮和六氟异丙醇也能够实现相似的作用。
实施例3：一种长条形微通道胞外基质神经支架修复大鼠坐骨神经缺损的动物实验
将实施例1中制备的有序微通道胞外基质神经导管(PMEC)修剪为1.5cm长，用于大鼠坐骨神经缺损的修复。选成20只年雌性SD大鼠，将大鼠随机分为实验组与对照组，每组各10只。实验组采用有序微通道胞外基质神经导管桥接，而对照组则采用常规PCL单孔电纺导管桥接。大鼠用1％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉腹腔注射麻醉大鼠后，剃去股骨周围毛发，并用碘伏进行术区消毒。顺着股骨的长轴切开大腿后外侧皮肤，逐层分离肌肉直至暴露坐骨神经，游离坐骨神经并在其主干处剪断并造成1.5cm的缺损，将消毒好的1.5cm长的有序微通道胞外基质神经导管与坐骨神经两个断端进行吻合，后逐层关闭伤口。术后常规应用抗生素72小时避免伤口感染。术后12周时评价两组大鼠的运动功能恢复情况及再生神经的组织学结构。结果表明，实验组大鼠坐骨神经指数较对照组能够显著(表2)，实验组大鼠腓肠肌肌纤维面积也显著高于对照组(表2)，这表明有序微通道胞外基质神经导管能有效恢复坐骨神经长节段缺损的大鼠下肢运动功能。电生理检测结果显示，实验组大鼠腓肠肌复合肌肉动作电位值和再生神经电传导速度均显著高于对照组(表2)，说明制备得到的长条形微通道胞外基质神经支架具有较佳的修复效果。
表2两组大鼠术后12周运动功能及电生理评估对比
Figure BDA0004010715010000081
*与对照组相比，P＜0.05
实施例4：蝴蝶型空心微通道胞外基质支架修复大鼠脊髓缺损的动物实验
蝴蝶型空心微通道胞外基质支架的制备：根据实施例1中的方法制备微通道胞外基质支架，在制备过程中，纤维丝捆绑时将复合脊髓灰质形状的蝴蝶状硅胶模具放在纤维丝中。待体内埋置并脱高分子聚合物及脱细胞处理后可获得图5的的结构，用显微镊去掉中间的硅胶模具即可获得蝴蝶型空心微通道胞外基质支架。蝴蝶中空出可移植神经干细胞用于大鼠脊髓缺损修复。
神经干细胞的分离与培养：神经干细胞的提取方法如下：取胎龄14d的孕鼠，腹腔注射1％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后，常规消毒并置于超净台中解剖子宫，取出胎鼠放入4℃的D-Hank’s液中，显微镊剥离胎鼠的大脑皮层组织并转入冰的DMEM-F12培养基中，眼科剪将其剪碎，吸管吹打至无大组织块为止。1000rpm/min离心4分钟后，弃上清液，加入4mlDMEM/F12完全培养基{2％ B27添加剂，1％青链霉素，10ng/ml表皮生长因子(EGF)，10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)}。于T50培养瓶中，37℃，5％二氧化碳条件下培养，每3天换液一次。采用免疫荧光染色法对神经干细胞标志物nestin进行鉴定。
动物实验：取成年雌性SD大鼠12只，将其随机分为实验组和对照组，每组均为6只。腹腔注射1％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后，常规备皮消毒，在背部弓背最高处从正中切开4cm切口，逐层剥离椎旁肌，显露椎板及棘突。用微型椎板钳将T8-T9椎板去除，暴露背侧脊髓。用尖刀将脊髓切断并造成2mm缺损。取培养的神经干细胞1×106个，1300rpm/min离心3分钟后弃上清，将离心所得的细胞团块挑出并放在2mm的蝴蝶型空心微通道胞外基质支架的中空部。实验组植入含有神经干细胞团块的蝴蝶型空心微通道胞外基质支架。而对照组则不进行任何治疗处理，仅造成2mm的脊髓缺损。充分止血后，逐层缝合伤口。术后72小时内常规肌注抗生素预防感染。
运动功能评价：术后2、4、6、8周采用BBB(Basso Beattie Bresnahanlocomotorrating scale)评分对大鼠后肢各个关节的活动、负重及协调性进行评价。BBB评分的分值从0-21分，0分代表后肢无运动，21分代表完全正常。如图6所示，BBB评分结果显示实验组大鼠BBB评分在术后4、6、8周时均显著高于对照组，说明制备得到的蝴蝶型空心微通道胞外基质支架有效修复了大鼠脊髓缺损。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (10)

1.一种微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：包括：
制备纤维丝，捆扎修剪成束；
将纤维丝束置于培养环境中，培养后能够被细胞外基质包裹成组织块；
取出组织块，溶解纤维丝，脱细胞形成微通道胞外基质神经支架。
2.根据权利要求1所述的微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：纤维丝为单根的聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)，聚已内酯(PCL)、聚L-丙交酯-己内酯(PLCL)、聚乳酸(PLA)、左旋聚乳酸(PLLA)、超支化聚乳酸(HPLA)、聚对苯二甲酸-1,4-环己烷二甲醇酯(PCTG)、聚对苯二甲酸乙二醇酯-1,4-环己烷二甲醇酯(PETG)、环己烷二甲醇共聚聚酯(PCTA)、聚碳酸酯(PC)或丙烯酸树脂。
3.根据权利要求1所述的微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：采用三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯、丙酮和六氟异丙醇中的一种或多种的混合物溶解纤维丝。
4.根据权利要求1所述的微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：采用十二烷基硫酸钠(SDS)、Triton X-100、Triton X-200、硫代甜菜碱10、硫代甜菜碱16和核酸酶中的一种或多种的混合物脱细胞。
5.根据权利要求1-4中任一所述的微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：将纤维丝困扎后修剪成线型、Y型或三叉型；
或者，在纤维丝束中部放置截面蝴蝶型的硅胶模具。
6.根据权利要求5所述的微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：培养形成组织块时，纤维丝束外侧设有硬质防护网，硬质防护网为网状结构、镂空结构或弹簧状结构。
7.根据权利要求1所述的微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：组织块培养过程中加入体外培养环境中的培养基中加入成纤维细胞生长因子(FGF)、层粘连蛋白(Laminin)、纤维连接蛋白、***生长因子(CTGF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT-3)，神经营养因子4(NT-4)、胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、脑源神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)、转化生长因子(TGF)、表皮生长因子(EGF)、血小板源生长因子(PDGF)、***Ⅰ(IGF-Ⅰ)、角质化细胞生长因子(KGF-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)中的一种或多种。
8.根据权利要求2所述的微通道胞外基质神经支架制备方法，其特征在于：通过湿纺或熔融纺丝获得单根聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)，聚已内酯(PCL)、聚L-丙交酯-己内酯(PLCL)、聚乳酸(PLA)、左旋聚乳酸(PLLA)、超支化聚乳酸(HPLA)、聚对苯二甲酸-1,4-环己烷二甲醇酯(PCTG)、聚对苯二甲酸乙二醇酯-1,4-环己烷二甲醇酯(PETG)、环己烷二甲醇共聚聚酯(PCTA)、聚碳酸酯(PC)或丙烯酸树脂纤维丝。
9.权利要求1-8中任一所述的微通道胞外基质神经支架制备方法制备得到的微通道胞外基质神经支架。
10.权利要求9所述的微通道胞外基质神经支架在外周神经及脊髓修复材料中的应用。
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