CN116024175A - 工程化免疫细胞及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种工程化免疫细胞，其表达特异性识别抗原的细胞表面分子和外源性TSLP以及任选的其他外源性细胞因子。本发明还提供了该工程化免疫细胞在治疗癌症、感染或自身免疫性疾病中的用途。与传统的工程化免疫细胞细胞相比，本发明的工程化免疫细胞具有显著提高的肿瘤杀伤活性。

Description

工程化免疫细胞及其用途
技术领域
本发明属于免疫治疗领域。更具体地，本发明涉及一种工程化免疫细胞，其表达特异性识别抗原的细胞表面分子和外源性的TSLP以及任选的其他外源性细胞因子。更优选地，所述特异性识别抗原的细胞表面分子是嵌合抗原受体。
背景技术
近年来，过继细胞疗法作为一种新兴的免疫疗法，已经在肿瘤治疗领域展现出巨大的优势。这种疗法通常需要先将细胞进行改造，例如通过基因编辑和/或转导等技术将细胞改造为携带嵌合抗原受体、重组T细胞受体等外源性蛋白，然后在体外进行扩增，并回输给患者。目前，这些疗法针对血液肿瘤已经显示出良好的疗效，但对于实体瘤而言，其功效尚不能令人满意，其中原因之一就是由于免疫抑制性的肿瘤微环境使得改造后的细胞无法有效到达肿瘤部位。
因此，仍然需要改进的细胞疗法，以抵抗肿瘤微环境的抑制作用，以加强抗肿瘤效果。
发明内容
在第一个方面，本发明提供一种新的工程化免疫细胞，其表达特异性识别抗原的细胞表面分子以及外源性的TSLP。
在一个实施方案中，所述工程化免疫细胞进一步表达一种或多种其他外源性的细胞因子，所述其他外源性的细胞因子选自IL7、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21、XCL1、XCL2、CX3CL1、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12。
在一个实施方案重，所述特异性识别抗原的细胞表面分子包含抗原结合区，并且是嵌合抗原受体、T细胞受体、T细胞融合蛋白或T细胞抗原耦合器，优选是嵌合抗原受体。
在一个实施方案中，抗原结合区可以选自IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fd′、Fv、scFv、sdFv、线性抗体、单结构域抗体、纳米抗体、双体、anticalin和DARPIN。优选地，所述抗原抗原结合区选自scFv、Fab、单结构域抗体和纳米抗体。
在一个实施方案中，所述特异性识别抗原的细胞表面分子与选自以下的一个或多个靶标结合：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD46、CD47、CD52、CD54、CD56、CD70、CD73、CD80、CD97、CD123、CD126、CD138、CD171、CD 179a、DR4、DR5、TAC、TEM1/CD248、VEGF、GUCY2C、EGP40、EGP-2、EGP-4、CD133、IFNAR1、DLL3、kappa轻链、TIM3、TSHR、CD19、BAFF-R、CLL-1、EGFRvIII、tEGFR、GD2、GD3、BCMA、Tn抗原、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、IL-llRa、IL-22Ra、IL-2、间皮素、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、PDGFR-β、SSEA-4、AFP、Folate受体α、ErbB2(Her2/neu)、ErbB3、ErbB4、MUC1、MUC16、EGFR、CS1、NCAM、Claudin18.2、c-Met、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gpl00、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、Folate受体β、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、豆荚蛋白、HPV E6、E7、ETV6-AML、***蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、PSA、存活蛋白和端粒酶、PCTA-l/Galectin 8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、TMPRSS2 ETS融合基因、NA17、PAX3、雄激素受体、孕酮受体、Cyclin Bl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES 1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、muthsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、APRIL、NKG2D、NKG2D配体，和/或病原体特异性抗原、生物素化分子、由HIV、HCV、HBV和/或其他病原体表达的分子；和/或新表位或新抗原。
在一个实施方案中，所述特异性识别抗原的细胞表面分子是嵌合抗原受体，其包含抗原结合区、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。
在一个实施方案中，所述跨膜结构域选自以下蛋白质的跨膜结构域：TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。优选地，跨膜结构域选自CD8α、CD4、CD28和CD278的跨膜结构域。
在一个实施方案中，所述初级信号传导结构域是选自以下蛋白的胞内区：FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。优选地，所述初级信号传导结构域包含CD3ζ胞内区。
在一个实施方案中，所述共刺激结构域包含一个或多个选自以下蛋白的胞内区：CD94、LTB、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、CARD11、CD2、CD7、CD8、CD18、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD270(HVEM)、CD272(BTLA)、CD276(B7-H3)、CD278(ICOS)、CD357(GITR)、DAP10、DAP12、LAT、NKG2C、SLP76、PD-1、LIGHT、TRIM、ZAP70以及它们的组合。优选地，所述共刺激结构域选自CD27、CD28、CD134、CD137、DAP10、DAP12或CD278的胞内区或它们的组合。
在一个实施方案中，所述免疫细胞选自T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞或NKT细胞。优选地，所述T细胞是CD4+CD8+T细胞、CD4+辅助T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-T细胞、肿瘤浸润细胞、记忆T细胞、幼稚T细胞、γδ-T细胞或αβ-T细胞。
在一个实施方案中，外源性的TSLP和/或其他外源性细胞因子的表达或活性是组成型表达。在另一个实施方案中，外源性的TSLP和/或其他外源性细胞因子的表达或活性是条件型表达。例如，通过将外源性基因与诱导型、阻遏型或组织特异性启动子可操作连接从而实现条件型表达。
在一个实施方案中，TSLP和/或其他外源性细胞因子可以与定位结构域可操作连接，所述定位结构域可以将本发明的外源性基因定位在特定的细胞位置上表达，例如细胞膜。在一个实施方案中，本发明的外源性基因例如TSLP和/或其他外源性细胞因子与跨膜结构域可操作连接，从而锚定在工程化免疫细胞的表面表达。
在第二个方面，本发明提供一种核酸分子，其包含编码特异性识别抗原的细胞表面分子的核酸序列和编码TSLP的核酸序列，优选进一步包含编码其他外源性细胞因子的核酸序列。优选地，所述特异性识别抗原的细胞表面分子是嵌合抗原受体、T细胞受体、T细胞融合蛋白或T细胞抗原耦合器，更优选嵌合抗原受体。
本发明还提供包含上述核酸分子的载体。具体地，所述载体选自质粒、逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、牛痘病毒、劳氏肉瘤病毒(RSV)、多瘤病毒和腺相关病毒(AAV)。在一些实施方案中，该载体还包含在免疫细胞中自主复制的起点、选择标记、限制酶切割位点、启动子、多聚腺苷酸尾(polyA)、3’UTR、5’UTR、增强子、终止子、绝缘子、操纵子、选择标记、报告基因、靶向序列和/或蛋白质纯化标签等元件。在一个具体的实施方案中，所述载体是体外转录的载体。
在一个实施方案中，本发明还提供一种药物组合物，其包含本发明所述的工程化免疫细胞、核酸分子或载体，和一种或多种药学上可接受的赋型剂。
在第三个方面，本发明还提供一种治疗患有癌症、感染或自身免疫性疾病的受试者的方法，包括向所述受试者施用有效量的根据本发明所述的免疫细胞、核酸分子、载体或药物组合物。
在第四个方面，本发明还提供一种组合疗法，其包含表达特异性识别抗原的细胞表面分子的工程化免疫细胞和外源性的TSLP。在一个实施方案中，所述组合疗法包含：(1)表达外源性TSLP的工程化免疫细胞和外源性细胞因子；(2)表达外源性细胞因子的工程化免疫细胞和外源性TSLP；或(3)工程化免疫细胞以及外源性的细胞因子和TSLP；其中所述工程化免疫细胞表达特异性识别抗原的细胞表面分子，所述细胞因子选自IL7、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21、XCL1、XCL2、CX3CL1、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12。
附图说明
图1：通过流式细胞术测定的CAR-T细胞的CAR表达水平。
图2：通过ELISA测定的CAR-T细胞的IL7的表达水平。
图3：通过ELISA测定的CAR-T细胞的TSLP的表达水平。
图4：CAR-T细胞分别与靶细胞和非靶细胞共培养后的IFN-γ释放水平。
图5：用CAR-T细胞治疗小鼠胰腺癌后，小鼠的体重变化曲线。
图6：用CAR-T细胞治疗小鼠胰腺癌后，小鼠的肿瘤生长曲线。
图7A和7B：共表达TSLP和其他细胞因子的CAR-T细胞分别与靶细胞和非靶细胞共培养后的IFN-γ释放水平。
图8A和8B：用共表达TSLP和其他细胞因子的CAR-T细胞治疗小鼠胰腺癌后，小鼠的体重变化曲线。
图9A和9B：用共表达TSLP和其他细胞因子的CAR-T细胞治疗小鼠胰腺癌后，小鼠的肿瘤生长曲线。
发明详述
除非另有说明，否则本文中所使用的所有科学技术术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解的相同。
特异性识别抗原的细胞表面分子
在第一个方面，本发明提供一种新的工程化免疫细胞，其表达特异性识别抗原的细胞表面分子和外源性的TSLP。
如本文所用，术语“特异性识别抗原的细胞表面分子”是指在细胞表面表达的能够与靶分子(例如抗原)特异性结合的分子。此类表面分子一般包含能够与抗原特异性结合的抗原结合区、将表面分子锚定在细胞表面的跨膜结构域，以及负责信号传递的胞内结构域。常见的此类表面分子的实例包括例如T细胞受体(TCR)、嵌合抗原受体(CAR)、T细胞融合蛋白(TFP)或T细胞抗原耦合器(TAC)。
如本文所用，术语“T细胞受体”或“TCR”是T细胞表面的特征性标志，以非共价键与CD3结合形成复合物。抗原呈递细胞通过主要组织相容性复合体分子(MHC)将抗原肽呈递至T细胞并且结合至TCR复合物以诱发一系列胞内信号传导。TCR由分别形成异二聚体的六条肽链组成，其一般分为αβ型和γδ型。每条肽链包括恒定区和可变区，其中可变区负责结合特异性的抗原和MHC分子。
如本文所用，术语“嵌合抗原受体”或“CAR”是指人工构建的杂合多肽，该杂合多肽一般包括抗原结合区(例如抗体的抗原结合部分)、跨膜结构域和胞内结构域(包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域)，各个结构域之间通过接头连接。CAR能够利用单克隆抗体的抗原结合特性以非MHC限制性的方式将T细胞和其它免疫细胞的特异性和反应性重定向至所选择的靶标。非MHC限制性的抗原识别给予CAR细胞与抗原处理无关的识别抗原的能力，因此绕过了肿瘤逃逸的主要机制。此外，当在T细胞内表达时，CAR有利地不与内源性T细胞受体(TCR)的α链和β链二聚化。
如本文所用，术语“T细胞融合蛋白”或“TFP”是指由TCR各组分衍生的重组多肽，通常由TCR亚基和与其连接的抗原结合区组成并在细胞表面表达。其中，TCR亚基包括至少部分TCR胞外结构域、跨膜结构域、TCR胞内信号结构域。
如本文所用，术语“T细胞抗原耦合器”或“TAC”包括三个功能结构域：1肿瘤靶向结构域，包括单链抗体、设计的锚蛋白重复蛋白(designed ankyrin repeat protein，DARPin)或其他靶向基团；2胞外区结构域，与CD3结合的单链抗体，从而使得TAC受体与TCR受体靠近；3跨膜区和CD4共受体的胞内区，其中，胞内区连接蛋白激酶LCK，催化TCR复合物的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)磷酸化作为T细胞活化的初始步骤。
如本文所用，“抗原结合区”是指可以与抗原结合的任何结构或其功能性变体。抗原结合区可以是抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体、鼠源抗体、嵌合抗体及其功能性片段。例如，抗原结合区包括但不限于IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fd′、Fv、scFv、sdFv、线性抗体、单结构域抗体、纳米抗体、双体、anticalin、DARPIN等，优选选自Fab、scFv、sdAb和纳米抗体。在本发明中，抗原结合区可以是单价或二价，且可以是单特异性、双特异性或多特异性的抗体。在另一个实施方案中，抗原结合区也可以是特定蛋白的特异性结合多肽或受体结构，所述特定蛋白是例如PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、APRIL和NKG2D。
术语“功能性变体”或“功能性片段”是指基本上包含亲本的氨基酸序列但与该亲本氨基酸序列相比含有至少一个氨基酸修饰(即取代、缺失或***)的变体，条件是所述变体保留亲本氨基酸序列的生物活性。在一个实施方案中，所述氨基酸修饰优选是保守型修饰。
如本文所用，术语“保守性修饰”是指不会明显影响或改变含有该氨基酸序列的抗体或抗体片段的结合特征的氨基酸修饰。这些保守修饰包括氨基酸取代、添加及缺失。修饰可以通过本领域中已知的标准技术，如定点诱变和PCR介导的诱变而引入本发明的嵌合抗原受体中。保守氨基酸取代是氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基置换的取代。具有类似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中有定义，包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)及芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。保守性修饰可以例如基于极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或所涉及残基的两亲性质的相似性来进行选择。
因此，“功能性变体”或“功能性片段”与亲本氨基酸序列具有至少75％，优选至少76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性，并且保留亲本氨基酸的生物活性，例如结合活性。
如本文所用，术语“序列同一性”表示两个(核苷酸或氨基酸)序列在比对中在相同位置处具有相同残基的程度，并且通常表示为百分数。优选地，同一性在被比较的序列的整体长度上确定。因此，具有完全相同序列的两个拷贝具有100％同一性。本领域技术人员将认识到，一些算法可以用于使用标准参数来确定序列同一性，例如Blast(Altschul等(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-3402)、Blast2(Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410)、Smith-Waterman(Smith等(1981)J.Mol.Biol.147：195-197)和ClustalW。
抗原结合区的选择取决于待识别的与具体疾病状态相关的靶细胞上的细胞表面标记，例如肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原。因此，在一个实施方案中，本发明的抗原结合区与选自以下的一个或多个靶标结合：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD46、CD47、CD52、CD54、CD56、CD70、CD73、CD80、CD97、CD123、CD126、CD138、CD171、CD 179a、DR4、DR5、TAC、TEM1/CD248、VEGF、GUCY2C、EGP40、EGP-2、EGP-4、CD133、IFNAR1、DLL3、kappa轻链、TIM3、TSHR、CD19、BAFF-R、CLL-1、EGFRvIII、tEGFR、GD2、GD3、BCMA、Tn抗原、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、IL-llRa、IL-22Ra、IL-2、间皮素、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、PDGFR-β、SSEA-4、AFP、Folate受体α、ErbB2(Her2/neu)、ErbB3、ErbB4、MUC1、MUC16、EGFR、CS1、NCAM、Claudin18.2、c-Met、Prostase、PAP、ELF2M、EphrinB2、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gpl00、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、Folate受体β、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、豆荚蛋白、HPV E6、E7、ETV6-AML、***蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、PSA、存活蛋白和端粒酶、PCTA-l/Galectin 8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、TMPRSS2ETS融合基因、NA17、PAX3、雄激素受体、孕酮受体、Cyclin Bl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES 1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、APRIL、NKG2D、NKG2D配体，和/或病原体特异性抗原、生物素化分子、由HIV、HCV、HBV和/或其他病原体表达的分子；和/或新表位或新抗原。根据待靶向的抗原，本发明的CAR可以被设计为包括对该抗原具有特异性的抗原结合区。优选地，所述靶标选自CD7、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD123、CD138、CD171、MUC1、AFP、Folate受体α、CEA、PSCA、PSMA、Her2、EGFR、IL13Ra2、GD2、NKG2D、Claudin18.2、ROR1、EGFRvIII、CS1、BCMA、GPRC5D、间皮素和它们的任意组合。例如，如果CD19是待靶向的抗原，则CD19抗体可用作本发明的抗原结合区。
如本文所用，术语“跨膜结构域”是指能够使嵌合抗原受体在免疫细胞(例如淋巴细胞、NK细胞或NKT细胞)表面上表达，并且引导免疫细胞针对靶细胞的细胞应答的多肽结构。跨膜结构域可以是天然或合成的，也可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。特别适用于本发明中的跨膜结构域可以源自例如TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154及其功能性片段。或者，跨膜结构域可以是合成的并且可以主要地包含疏水性残基如亮氨酸和缬氨酸。优选地，所述跨膜结构域源自CD28，其与SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；或源自CD8α，其与SEQ ID NO:4或5所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
在一个实施方案中，本发明的嵌合抗原受体还可以包含位于抗原结合区和跨膜结构域之间的铰链区。如本文所用，术语“铰链区”一般是指作用为连接跨膜结构域至抗原结合区的任何寡肽或多肽。具体地，铰链区用来为抗原结合区提供更大的灵活性和可及性。铰链区可以包含最多达300个氨基酸，优选10至100个氨基酸并且最优选25至50个氨基酸。铰链区可以全部或部分源自天然分子，如全部或部分源自CD8、FcγRIIIα受体、IgG4、IgG1、CD4或CD28的胞外区，或全部或部分源自抗体恒定区。或者，铰链区可以是对应于天然存在的铰链序列的合成序列，或可以是完全合成的铰链序列。在优选的实施方式中，所述铰链区包含CD28铰链，其与SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；或包含CD8α铰链，其与SEQ ID NO:16或17所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；或包含IgG4铰链，其与SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
如本文所用，术语“胞内结构域”是指转导效应子功能信号并指导细胞进行指定功能的蛋白质部分，其包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。胞内结构域负责在抗原结合区结合抗原以后的细胞内的信号传递，从而导致免疫细胞和免疫反应的活化。
在一个实施方案中，本发明的嵌合抗原受体包含初级信号传导结构域，其可以是在抗原受体结合以后一同起作用以引发初级信号传导的T细胞受体和共受体的细胞质序列，以及这些序列的任何衍生物或变体和具有相同或相似功能的任何合成序列。初级信号传导结构域可以包含许多免疫受体酪氨酸激活基序。本发明的初级信号传导结构域的非限制性施例包括但不限于源自FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些。在优选的实施方式中，本发明CAR的初级信号传导结构域可以包含CD3ζ胞内区，该信号传导结构域与SEQ ID NO:9、10或11所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
在一个实施方案中，本发明的嵌合抗原受体包含一个或多个共刺激结构域。共刺激结构域可以是来自共刺激分子的细胞内功能性信号传导结构域，其包含所述共刺激分子的整个细胞内部分，或其功能片段。“共刺激分子”是指在T细胞上与共刺激配体特异性结合，由此介导T细胞的共刺激反应(例如增殖)的同源结合配偶体。共刺激分子包括但不限于1类MHC分子、BTLA和Toll配体受体。本发明的共刺激结构域的非限制性施例包括但不限于源自以下蛋白质的胞内区：CD94、LTB、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、CARD11、CD2、CD7、CD8、CD18、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD270(HVEM)、CD272(BTLA)、CD276(B7-H3)、CD278(ICOS)、CD357(GITR)、DAP10、DAP12、LAT、NKG2C、SLP76、PD-1、LIGHT、TRIM以及ZAP70。优选地，本发明CAR的共刺激结构域来自4-1BB、CD28、CD27、OX40、ICOS、DAP10、DAP12或其组合。在一个实施方案中，本发明的CAR包含CD28共刺激结构域，其与SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；和/或包含4-1BB共刺激结构域，其与SEQ ID NO:7或8所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
在一个实施方案中，本发明的CAR还可以包含信号肽，使得当其在细胞例如T细胞中表达时，新生蛋白质被引导至内质网并随后引导至细胞表面。可用于本发明的信号肽是本领域技术人员熟知的，例如衍生自B2M、CD8α、IgG1、GM-CSFRα等的信号肽。在一个实施方案中，可用于本发明的信号肽是B2M信号肽，其与SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；或是CD8α信号肽，其与SEQ ID NO:13或14所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
外源性基因
除了特异性识别抗原的细胞表面分子，本发明的工程化免疫细胞还表达外源性的TSLP。
TSLP也称为胸腺基质淋巴细胞生成素，是一种由上皮细胞产生的细胞因子。它与IL-7密切相关，并与TSLPR(IL-7受体α链和TSLP受体链的异二聚体)结合。TSLP主要由胸腺、肺、皮肤、肠道和扁桃体中的上皮细胞，以及基质细胞和肥大细胞表达，同时还在多种免疫细胞(包括树突状细胞(DC)、T细胞、B细胞、肥大细胞、NK细胞和单核细胞)，以及心脏、骨骼肌、肾脏和肝脏等组织中被发现。研究表明，TSLP可以参与DC、肥大细胞、NK细胞和T细胞介导的天然免疫反应。
在一个实施方案中，本发明使用的TSLP可以是野生型、其变体或其功能性片段，所述变体或功能性片段与野生型具有相同或相似的生物学功能。例如，TSLP可以是野生型小鼠TSLP(氨基酸序列如SEQ ID NO：21所示，核酸序列如SEQ ID NO：20所示)或人TSLP(氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示，核酸序列如SEQ ID NO：22所示)，也可以是其功能性片段(例如SEQ ID NO：25，由SEQ ID NO：23的最后63个氨基酸组成)。具体地，TSLP与SEQ ID NO：21、23或25所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或TSLP的编码序列与SEQ ID NO：20、22或24所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，且与野生型CXCL10具有相当的活性。
在一个实施方案中，本发明的工程化免疫细胞还可以进一步表达一种或多种其他外源性的细胞因子，例如IL7、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21、XCL1、XCL2、CX3CL1、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12。本发明使用的IL7可以是野生型IL7、其变体或其功能性片段，所述变体或功能性片段与野生型IL7具有相同或相似的生物学功能。具体地，IL7与SEQ ID NO：27或29所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或IL7的编码序列与SEQ ID NO：26或28所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21均属于趋化因子中的CC家族。其中，CCL3、CCL4和CCL5具有较高的序列相似性，且均通过与CCR5结合来募集免疫细胞，例如未成熟的骨髓树突细胞、单核细胞、巨噬细胞、Th1、Treg、NK和浆细胞样树突细胞等定向迁移至炎性部位或肿瘤部位。CCL2、CCL7、CCL8、CCL12和CCL13均属于单核细胞趋化因子(Monocyte Chemoattractant Protein，MCP)，它们结合相同的受体CCR2，并吸引单核/巨噬细胞到炎症部位。CCL19和CCL21则均通过结合受体CCR7在冠心病、肺病、支气管哮喘、强制性脊柱炎等疾病的发生和发展中发挥重要作用。XCL1和XCL2是XC型趋化因子家族中的两个成员，主要由CD8+T细胞和自然杀伤细胞产生。XCL2与XCL1的核酸序列具有97％同一性，仅存在两个氨基酸残基的不同。研究发现，XCL2与XCL1在表达谱、结构和功能上均非常相似，例如与XCL1一样，XCL2也具有单体型和二聚体型两种可相互转换的蛋白空间构象。XCL1和XCL2的受体XCR1选择性地表达在具有抗原呈递能力的DC细胞上，有研究发现引入XCL1可有效提高抗肿瘤免疫治疗和靶向疫苗的疗效。CX3CL1是CX3C型家族趋化因子中的唯一成员，其唯一的受体为趋化因子受体CX3CR1。CX3CR1是一种7次跨膜G蛋白偶联受体。正常情况下，机体的NK细胞、单核细胞、肥大细胞、血小板和效应T细胞膜上均有CX3CR1的表达。CXCL9、CXCL10、CXCL11和CXCL12均属于CXC型趋化因子。其中，CXCL9、CXCL10和CXCL11具有共同受体CXCR3，该受体在结肠癌、黑素瘤、B淋巴瘤和乳腺癌等癌细胞中高表达。CXCL12与两种G蛋白偶联受体CXCR4和CXCR7结合，并参与许多发育和生理过程，包括造血和血管发生、调节免疫细胞浸润等。
本发明使用的这些外源性细胞因子可以是野生型、其变体或其功能性片段，所述变体或功能性片段与野生型具有相同或相似的生物学功能。例如，CCL2与SEQ ID NO：57或59所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL2的编码序列与SEQ ID NO：56或58所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL3与SEQID NO：61或63所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL3的编码序列与SEQ ID NO：60或62所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL4与SEQ ID NO：65或67所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL4的编码序列与SEQ ID NO：64或66所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL5与SEQ ID NO：69或71所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL5的编码序列与SEQ ID NO：68或70所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL7与SEQ ID NO：73或75所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL7的编码序列与SEQ ID NO：72或74所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL8与SEQ ID NO：77或79所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL8的编码序列与SEQ ID NO：76或78所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL12与SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL12的编码序列与SEQ ID NO：80所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL13与SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL13的编码序列与SEQ ID NO：82所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL19与SEQ ID NO：85或87所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL19的编码序列与SEQ ID NO：84或86所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CCL21与SEQ ID NO：89或91所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CCL21的编码序列与SEQ ID NO：88或90所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；XCL1与SEQID NO：47或49所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或XCL1的编码序列与SEQ ID NO：46或48所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；XCL2与SEQ ID NO：51所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或XCL2的编码序列与SEQ ID NO：50所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CX3CL1与SEQ ID NO：53或55所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CX3CL1的编码序列与SEQ ID NO：52或54所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CXCL9与SEQ ID NO：31或33所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CXCL9的编码序列与SEQ ID NO：30或32所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CXCL10与SEQ ID NO：35或37所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CXCL10的编码序列与SEQ ID NO：34或36所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CXCL11与SEQ ID NO：39或41所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CXCL11的编码序列与SEQ ID NO：38或40所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性；CXCL12与SEQ IDNO：43或45所示的氨基酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性，或CXCL12的编码序列与SEQ ID NO：42或44所示的核酸序列具有至少70％，优选至少80％，更优选至少90％、95％、97％或99％或100％的序列同一性。
本发明中的外源性基因，例如TSLP和/或其他外源性细胞因子的表达可以是组成型表达或条件型表达。在一个实施方案中，外源性基因的表达是条件型表达。例如，根据需要，可以将本发明的外源基因与诱导型、阻遏型或组织特异性启动子可操作连接，从而在特定的时间或特定的组织、细胞类型内调控引入的外源基因的表达水平。在一个实施方案中中，启动子是诱导型启动子，即，仅在特定环境条件、发育条件或诱导物存在下启动转录的启动子。在另一个实施方案中，启动子是阻遏型启动子，即，在存在对阻遏型启动子具有特异性的阻遏物的情况下，外源基因在细胞中的表达被抑制或不表达。
在一个实施方案中，本发明中的外源性基因的表达是分泌型表达。在另一个实施方案中，所述外源性基因是锚定型表达，例如与定位结构域可操作连接，所述定位结构域可以将本发明的外源性基因定位在特定的细胞位置上表达，例如细胞膜等。定位结构域包括但不限于核定位信号、引导肽、跨膜结构域等。在一个实施方案中，本发明的外源性基因与跨膜结构域可操作连接，从而锚定在工程化免疫细胞的表面表达。
核酸和载体
本发明还提供一种核酸分子，其包含编码特异性识别抗原的细胞表面分子的核酸序列和编码TSLP的核酸序列。在一个实施方案中，所述核酸分子进一步包含编码一种或多种其他外源性细胞因子的核酸序列。
在一个实施方案中，所述特异性识别抗原的细胞表面分子是T细胞受体或嵌合抗原受体，优选嵌合抗原受体。嵌合抗原受体的定义如上所述。
如本文所用，术语“核酸分子”包括核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸的序列，如经修饰的或未经修饰的RNA或DNA，各自为单链和/或双链形式的线性或环状，或它们的混合物(包括杂合分子)。因此，根据本发明的核酸包括DNA(比如dsDNA、ssDNA、cDNA)、RNA(比如dsRNA、ssRNA、mRNA、ivtRNA)，它们的组合或衍生物(比如PNA)。优选地，所述核酸是DNA或RNA，更优选mRNA。
本发明还提供一种载体，包含如本发明所述的核酸。其中，编码特异性识别抗原的细胞表面分子的核酸序列、编码外源性趋化因子的核酸序列和任选的编码IL7的核酸序列可以位于一个或多个载体中。当位于一个载体中时，各核酸序列可以通过2A肽可操作连接。
如本文所用，术语“载体”是用作将(外源)遗传材料转移到宿主细胞中的媒介核酸分子，在该宿主细胞中所述核酸分子可以例如复制和/或表达。
载体一般包括靶向载体和表达载体。“靶向载体”是通过例如同源重组或使用特异性靶向位点处序列的杂合重组酶将分离的核酸递送至细胞内部的介质。“表达载体”是用于异源核酸序列(例如编码本发明的嵌合抗原受体多肽的那些序列)在合适的宿主细胞中的转录以及它们的mRNA的翻译的载体。可用于本发明的合适载体是本领域已知的，并且许多可商购获得。在一个实施方案中，本发明的载体包括但不限于质粒、病毒(例如逆转录病毒、溶瘤病毒、慢病毒、腺病毒、牛痘病毒、劳氏肉瘤病毒、多瘤病毒和腺相关病毒(AAV)等)、噬菌体、噬菌粒、粘粒和人工染色体(包括BAC和YAC)。载体本身通常是核苷酸序列，通常是包含***物(转基因)的DNA序列和作为载体“骨架”的较大序列。工程化载体通常还包含在宿主细胞中自主复制的起点(如果需要多核苷酸的稳定表达)、选择标记和限制酶切割位点(如多克隆位点，MCS)。载体可另外包含启动子、多聚腺苷酸尾(polyA)、3’UTR、增强子、终止子、绝缘子、操纵子、选择标记、报告基因、靶向序列和/或蛋白质纯化标签等元件。在一个具体的实施方案中，所述载体是体外转录的载体。
工程化免疫细胞
本发明还提供一种工程化免疫细胞，其包含本发明的嵌合抗原受体、核酸或载体。换言之，本发明的工程化免疫细胞表达特异性识别抗原的细胞表面分子和TSLP。在一个实施方案中，本发明的工程化免疫细胞进一步表达一种或多种其他外源性的细胞因子，例如IL7、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21、XCL1、XCL2、CX3CL1、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12。
如本文所用，术语“免疫细胞”是指免疫***的具有一种或多种效应子功能(例如，细胞毒性细胞杀伤活性、分泌细胞因子、诱导ADCC和/或CDC)的任何细胞。例如，免疫细胞可以是T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞和/或NKT细胞，或者是从iPSC、ESC、造血干细胞等干细胞来源获得的免疫细胞。优选地，免疫细胞是T细胞。T细胞可以是任何T细胞，如体外培养的T细胞，例如原代T细胞，或者来自体外培养的T细胞系例如Jurkat、SupT1等的T细胞，或获得自受试者的T细胞。受试者的实例包括人、狗、猫、小鼠、大鼠及其转基因物种。T细胞可以从多种来源获得，包括外周血单核细胞、骨髓、***组织、脐血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸膜积液、脾组织及肿瘤。T细胞也可以被浓缩或纯化。T细胞可以处于任何发育阶段，包括但不限于，CD4+CD8+T细胞、CD4+辅助T细胞(例如Th1和Th2细胞)、CD8+T细胞(例如，细胞毒性T细胞)、CD4-CD8-T细胞、肿瘤浸润细胞、记忆T细胞、幼稚T细胞、γδ-T细胞、αβ-T细胞等。在一个优选的实施方案中，免疫细胞是人T细胞。可以使用本领域技术人员已知的多种技术，如Ficoll分离从受试者的血液获得T细胞。
在一个实施方案中，本发明的免疫细胞还包含至少一种内源性基因的表达被抑制或沉默，所述内源性基因选自以下：CD52、GR、TCRα、TCRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247ζ、HLA-I、HLA-II、B2M、免疫检查点基因如PD1、CTLA-4、LAG3和TIM3。更特别地，免疫细胞中的至少TCR组分(包括TCRα、TCRβ基因)或CD3组分(包括CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD247ζ)的表达被抑制或沉默。该策略对于避免移植物抗宿主病(GvHD)特别有用。抑制或沉默基因的方法是本领域已知的，例如通过大范围核酸酶、锌指核酸酶、TALEN核酸酶或CRISPR***中的Cas酶介导DNA断裂，从而敲除该基因；或通过shRNA、RNAi等方式抑制基因表达。
药物组合物和组合疗法
本发明还提供一种药物组合物，其包含本发明所述的工程化免疫细胞、核酸分子或载体作为活性剂，和一种或多种药学上可接受的赋型剂。因此，本发明还涵盖所述核酸分子、载体或工程化免疫细胞在制备药物组合物中的用途。
如本文所用，术语“药学上可接受的赋型剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容(即，能够引发所需的治疗效果而不会引起任何不希望的局部或全身作用)的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington'sPharmaceuticalSciences.Edited by Gennaro AR,19th ed.Pennsylvania:Mack Publishing Company,1995)。药学上可接受的赋型剂的实例包括但不限于填充剂、粘合剂、崩解剂、包衣剂、吸附剂、抗粘附剂、助流剂、抗氧化剂、调味剂、着色剂、甜味剂、溶剂、共溶剂、缓冲剂、螯合剂、表面活性剂、稀释剂、润湿剂、防腐剂、乳化剂、包覆剂、等渗剂、吸收延迟剂、稳定剂和张力调节剂。本领域技术人员已知选择合适的赋型剂以制备本发明期望的药物组合物。用于本发明的药物组合物中的示例性赋型剂包括盐水、缓冲盐水、葡萄糖和水。通常，合适的赋形剂的选择尤其取决于所使用的活性剂、待治疗的疾病和药物组合物的期望剂型。
根据本发明的药物组合物可适用于多种途径施用。通常，通过胃肠外完成施用。胃肠外递送方法包括局部、动脉内、肌内、皮下、髓内、鞘内、心室内、静脉内、腹膜内、子宫内、***内、舌下或鼻内施用。
根据本发明的药物组合物还可以与一种或多种适用于治疗和/或预防待治疗疾病的其它药剂组合施用。
本发明还提供一种组合疗法，其包含表达特异性识别抗原的细胞表面分子的工程化免疫细胞和外源性TSLP。在一个实施方案中，所述组合疗法包含：(1)表达外源性TSLP的工程化免疫细胞和一种或多种其他外源性的细胞因子；(2)表达一种或多种外源性细胞因子的工程化免疫细胞和外源性TSLP；或(3)工程化免疫细胞以及外源性的TSLP和一种或多种其他外源性的细胞因子；其中所述工程化免疫细胞表达特异性识别抗原的细胞表面分子，其中所述细胞因子选自IL7、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21、XCL1、XCL2、CX3CL1、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12。
治疗应用
本发明还提供一种治疗患有癌症、感染或自身免疫性疾病的受试者的方法，包括向所述受试者施用有效量的根据本发明所述的核酸分子、载体、工程化免疫细胞或药物组合物。因此，本发明还涵盖所述核酸分子、载体、工程化免疫细胞在制备治疗癌症、感染或自身免疫性疾病的药物中的用途。
在一个实施方案中，所述治疗方法包括向受试者施用有效量的本发明的免疫细胞和/或药物组合物。
在一个实施方案中，所述免疫细胞是自体或同种异体的细胞，优选T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞和/或NKT细胞，更优选T细胞、NK细胞或NKT细胞。
如本文所用，术语“自体”是指来源于个体的任何材料稍后将被再引入该相同个体中。如本文所用，术语“同种异体”是指任何材料来源于与引入该材料的个体相同物种的不同动物或不同患者。当在一个或多个基因座处的基因不同时，认为两个或更多个体彼此为同种异体的。在一些情况下，来自同一物种的各个体的同种异体材料在基因上的不同可能足以发生抗原相互作用。
如本文所用，术语“受试者”是哺乳动物。哺乳动物可以是人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或牛，但不限于这些实例。除人以外的哺乳动物可以有利地用作代表癌症动物模型的受试者。优选地，所述受试者是人。
在一个实施方案中，所述癌症是与抗原结合区结合的靶标表达有关的癌症，例如血液肿瘤或实体瘤。例如，所述癌症包括但不限于：脑神经胶质瘤、胚细胞瘤、肉瘤、白血病、基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑和CNS癌症、乳腺癌、腹膜癌、***、绒毛膜癌、结肠和直肠癌、***癌症、消化***的癌症、子宫内膜癌、食管癌、眼癌、头颈癌、胃癌(包括胃肠癌)、胶质母细胞瘤(GBM)、肝癌、肝细胞瘤、上皮内肿瘤、肾癌、喉癌、肝肿瘤、肺癌(例如小细胞肺癌、非小细胞肺癌、腺状肺癌和鳞状肺癌)、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、黑色素瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌(例如唇、舌、口和咽)、卵巢癌、胰腺癌、***癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、直肠癌、呼吸***的癌症、唾液腺癌、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫或子宫内膜癌、泌尿***的恶性肿瘤、外阴癌以及其它癌和肉瘤、以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性(SL)NHL、中间级/滤泡性NHL、中间级扩散性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级成淋巴细胞性NHL、高级小型非裂化细胞性NHL、大肿块病NHL)、B淋巴母细胞淋巴瘤(B-LBL)、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤、以及Waldenstrom巨球蛋白血症、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)、T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、伯基特氏淋巴瘤、弥散性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、慢性骨髓性白血病(CML)、恶性淋巴组织增生疾病、MALT淋巴瘤、毛细胞白血病、边缘区淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓发育不良、浆母细胞性淋巴瘤、白血病前期、浆细胞样树突状细胞瘤、以及移植后淋巴细胞增生性紊乱(PTLD)；以及其他与靶标表达有关的疾病。优选地，可以用本发明的工程化免疫细胞或药物组合物治疗的疾病选自：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑神经胶质瘤、胰腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、食道癌、甲状腺癌、***癌、骨癌、肺癌等。
在一个实施方案中，所述感染包括但不限于由病毒、细菌、真菌和寄生虫引起的感染。
在一个实施方案中，所述自身免疫性疾病包括但不限于I型糖尿病、腹腔疾病、格雷夫斯病、炎症性肠病、多发性硬化症、银屑病、类风湿性关节炎、艾迪生病、干燥综合征、桥本甲状腺炎、重症肌无力、血管炎、恶性贫血与***性红斑狼疮等。
在一个实施方案中，所述方法还进一步包括向所述受试者施用一种或多种额外的化疗剂、生物制剂、药物或治疗。在该实施方案中，化疗剂、生物制剂、药物或治疗选自放射疗法、手术、抗体试剂和/或小分子和它们的任意组合。
下面将参考附图并结合实例来详细说明本发明。需要说明的是，本领域的技术人员应该理解本发明的附图及其实施例仅仅是为了例举的目的，并不能对本发明构成任何限制。在不矛盾的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
具体实施方式
实施例1.制备CAR-T细胞
构建MSCV-mCD19-CAR质粒，其包含CD19-scFv(SEQ ID NO：2)、CD8α铰链区(SEQ IDNO：17)、CD8α跨膜区(SEQ ID NO：5)、41BB共刺激结构域(SEQ ID NO：8)和CD3ζ胞内区(SEQID NO：11)的编码序列。
构建MSCV-mCD19-CAR-IL7质粒，其是在MSCV-mCD19-CAR质粒的基础上进一步包含T2A(SEQ ID NO：19)和IL7(SEQ ID NO：23)的编码序列。
构建MSCV-mCD19-CAR-TSLP质粒，其是在MSCV-mCD19-CAR质粒的基础上进一步包含T2A(SEQ ID NO：19)和TSLP(SEQ ID NO：25)的编码序列。
将上述质粒包装入逆转录病毒，并进一步转染激活的T细胞，获得传统结构的mCD19-CAR细胞，以及表达IL7、TSLP及其组合的CAR-T细胞，即，mCD19-CAR+IL7细胞、mCD19-CAR+TSLP细胞、mCD19-CAR+IL7+TSLP细胞(用包装有MSCV-mCD19-CAR-IL7质粒的逆转录病毒和包装有MSCV-mCD19-CAR-TSLP质粒的逆转录病毒共转染所得)。
实施例2.检测CAR-T细胞的表达
2.1细胞表面CAR的表达水平
取出实施例1制备的2×105个CAR-T细胞，用Goat Anti-Rat IgG(H&L)Biotin(BioVision,货号6910-250)作为一抗，APC Streptavidin(BD Pharmingen，货号554067)作为二抗，通过流式细胞术检测CAR T细胞上的CAR的表达水平，结果如图1所示。可以看出，与未经处理的NT细胞相比，所有CAR-T细胞中的CAR均可有效表达。
2.2IL7的表达水平
收集CAR-T细胞的上清液，根据制造商的建议，用Mouse IL-7DuoSet ELISA kit试剂盒(R&D Systems,货号DY407)检测细胞中的IL7的分泌水平，结果如图2所示。可以看出，mCD19-CAR+IL7细胞和mCD19-CAR+IL7+TSLP细胞均可有效表达IL7。
2.3TSLP的表达水平
收集CAR-T细胞的上清液，根据制造商的建议，用Mouse TSLP DuoSet ELISA kit试剂盒(R&D Systems,货号DY555)检测细胞中的CXCL10的分泌水平，结果如图3所示。可以看出，mCD19-CAR+TSLP细胞和mCD19-CAR+IL7+TSLP细胞均可有效表达TSLP。
实施例3.检测CAR-T细胞的IFN-γ分泌水平
在96孔圆底板中以2×105个细胞/100μl的浓度分别加入NT细胞、CD19-CAR细胞、mCD19-CAR+TSLP细胞和mCD19-CAR+IL7+TSLP细胞。然后在各孔中以1×104个细胞/100μl的浓度分别加入Panc02-mCD19靶细胞或Panc02非靶细胞。在37℃培养24h后，收集培养物上清液。根据制造商的建议，用Mouse IFN-gamma DuoSet ELISA试剂盒(R&D，货号DY485)检测培养物上清液中IFN-γ的表达水平。检测结果如图4所示。
可以看出，在非靶细胞Panc02中均没有检测到IFN-γ的释放，而仅在与靶细胞Panc02-CD19共培养后检测到显著升高的IFN-γ水平，且NT细胞不表达IFN-γ，这表明本实施例中的CAR-T细胞的杀伤都是特异性的。此外，mCD19-CAR+TSLP细胞的IFN-γ水平显著高于mCD19-CAR细胞，表明单独的TSLP基因能显著提高CAR-T细胞的杀伤活性。此外，发明人还出乎意料地发现，表达IL7+TSLP组合的CAR-T细胞的IFN-γ水平显著高于仅表达TSLP的CAR-T细胞，表明IL7和TSLP可以产生协同效应，进一步增强CAR-T细胞的杀伤活性。
实施例4.CAR-T细胞的肿瘤抑制效果验证
在健康C57BL/6小鼠的左前肢腋下部位，经皮下接种5×105个Panc02-mCD19胰腺癌细胞。将接种了胰腺癌细胞的小鼠随机分为5组，每组5只。待肿瘤体积生长至100mm3时，向各组小鼠经尾静脉注射1×106个NT细胞、mCD19-CAR细胞、mCD19-CAR+IL7细胞、mCD19-CAR+TSLP细胞或mCD19-CAR+IL7+TSLP细胞。监测小鼠的体重和肿瘤体积变化，直至实验结束。
小鼠的体重变化如图5所示。可以看出，施用CAR-T细胞后，各组小鼠的体重与对照组相比没有显著差异，表明施用CAR-T细胞不会对小鼠有明显的毒副反应。
小鼠的肿瘤体积变化如图6所示。可以看出，单独表达IL7可以增强CAR-T细胞的抑瘤效果。发明人还出乎意料地发现，mCD19-CAR+TSLP细胞的抗肿瘤效果显著优于表达IL7的CAR-T细胞，在实验期间始终保持极低的肿瘤负荷且没有复发。这表明TSLP对CAR-T细胞肿瘤抑制活性的促进效果优于IL7。表达TSLP+IL7组合的CAR-T细胞的体内抑瘤效果与仅表达TSLP的CAR-T细胞相当，也显著优于仅表达IL7的CAR-T细胞。
以上结果表明，表达外源性TSLP及其与IL7的组合能够有效增强表达CAR的工程化免疫细胞对肿瘤细胞的抑制效果。
实施例5.表达其他细胞因子的CAR-T细胞的体外活性和体内肿瘤抑制效果
根据实施例1的方法，制备共表达TSLP与其他细胞因子(选自CCL5(SEQ ID NO：71)、CCL7(SEQ ID NO：73)、CCL19(SEQ ID NO：85)、CCL21(SEQ ID NO：89)、XCL1(SEQ IDNO：47)、CX3CL1(SEQ ID NO：53)、CXCL12(SEQ ID NO：43)、CXCL9(SEQ ID NO：31)和CXCL10(SEQ ID NO：35))的组合的CAR-T细胞。
根据实施例3所示的方法检测这些CAR-T细胞在体外与Panc02-mCD19靶细胞或Panc02非靶细胞共培养后的IFN-γ释放水平，结果如图7A和图7B所示。可以看出，共表达TSLP与其他细胞因子组合的CAR-T细胞释放的IFN-γ水平均显著高于传统的CAR-T细胞，表明这些组合能够增强CAR-T细胞在体外对靶细胞的特异性杀伤活性。
根据实施例4所示的方法检测这些CAR-T细胞在体内对肿瘤的抑制效果。小鼠体重变化如图8A和图8B所示。可以看出，施用这些CAR-T细胞不会对小鼠有明显的毒副反应。小鼠的肿瘤生长曲线如图9A和图9B所示。可以看出，与仅表达TSLP的CAR-T细胞相比，表达TSLP与其他细胞因子例如CCL5、CCL7、CCL19、CCL21、XCL1、CX3CL1、CXCL12、CXCL9或CXCL10组合的CAR-T细胞对肿瘤的抑制效果显著更好。
需要说明的是，以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。本领域技术人员理解的是，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 南京北恒生物科技有限公司
<120> 工程化免疫细胞及其用途
<130> BHCN50
<160> 91
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 242
<212> PRT
<213> Artificial Sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD19 scFv
<400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65                  70                  75                  80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Gln Glu
        115                 120                 125
Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys
    130                 135                 140
Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser Trp Ile Arg
145                 150                 155                 160
Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile Trp Gly Ser
                165                 170                 175
Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ile
            180                 185                 190
Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln
        195                 200                 205
Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr Tyr Tyr Gly
    210                 215                 220
Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
225                 230                 235                 240
Ser Ser
<210> 2
<211> 238
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCD19 scFv
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            100                 105                 110
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Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr Ser Val Lys Leu Ser Cys
    130                 135                 140
Lys Val Ser Gly Asp Thr Ile Thr Phe Tyr Tyr Met His Phe Val Lys
145                 150                 155                 160
Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Glu
                165                 170                 175
Asp Glu Ser Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu
            180                 185                 190
Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Leu Lys Leu Ser Ser Leu
        195                 200                 205
Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ile Tyr Gly Gly Tyr Tyr
    210                 215                 220
Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser
225                 230                 235
<210> 3
<211> 27
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 3
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1               5                   10                  15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
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<210> 4
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<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD8α跨膜结构域
<400> 4
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys
            20                  25
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<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCD8α跨膜结构域
<400> 5
Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Ile Cys Val Ala Leu Leu Leu Ser Leu
1               5                   10                  15
Ile Ile Thr Leu Ile
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<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD28共刺激结构域
<400> 6
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1               5                   10                  15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
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Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
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<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> 4-1BB共刺激结构域
<400> 7
Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg
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Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
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Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
        35                  40
<210> 8
<211> 42
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> m4-1BB共刺激结构域
<400> 8
Arg Lys Lys Phe Pro His Ile Phe Lys Gln Pro Phe Lys Lys Thr Thr
1               5                   10                  15
Gly Ala Ala Gln Glu Glu Asp Ala Cys Ser Cys Arg Cys Pro Gln Glu
            20                  25                  30
Glu Glu Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Glu Leu
        35                  40
<210> 9
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD3ζ胞内区
<400> 9
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
1               5                   10                  15
Gly Gln Asn Gln Leu Phe Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
            20                  25                  30
Phe Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
        35                  40                  45
Lys Pro Gln Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu
    50                  55                  60
Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly
65                  70                  75                  80
Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Phe Gln Gly Leu Ser
                85                  90                  95
Thr Ala Thr Lys Asp Thr Phe Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro
            100                 105                 110
Pro Arg
<210> 10
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD3ζ胞内区
<400> 10
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
1               5                   10                  15
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
            20                  25                  30
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
        35                  40                  45
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
    50                  55                  60
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
65                  70                  75                  80
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
                85                  90                  95
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
            100                 105                 110
Arg
<210> 11
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCD3ζ胞内区
<400> 11
Ser Arg Ser Ala Glu Thr Ala Ala Asn Leu Gln Asp Pro Asn Gln Leu
1               5                   10                  15
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Glu
            20                  25                  30
Lys Lys Arg Ala Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Gln Gln Arg Arg
        35                  40                  45
Arg Asn Pro Gln Glu Gly Val Tyr Asn Ala Leu Gln Lys Asp Lys Met
    50                  55                  60
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Thr Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
65                  70                  75                  80
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
                85                  90                  95
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Thr Leu Ala Pro Arg
            100                 105
<210> 12
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> B2M信号肽
<400> 12
Met Ser Arg Ser Val Ala Leu Ala Val Leu Ala Leu Leu Ser Leu Ser
1               5                   10                  15
Gly Leu Glu Ala
            20
<210> 13
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD8α信号肽
<400> 13
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro
            20
<210> 14
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCD8α信号肽
<400> 14
Met Ala Ser Pro Leu Thr Arg Phe Leu Ser Leu Asn Leu Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
Gly Glu Ser Ile Ile Leu Gly Ser
            20
<210> 15
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD28铰链区
<400> 15
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1               5                   10                  15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
            20                  25                  30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
        35
<210> 16
<211> 45
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> CD8α铰链区
<400> 16
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
1               5                   10                  15
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
            20                  25                  30
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
        35                  40                  45
<210> 17
<211> 45
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCD8α铰链区
<400> 17
Thr Thr Thr Lys Pro Val Leu Arg Thr Pro Ser Pro Val His Pro Thr
1               5                   10                  15
Gly Thr Ser Gln Pro Gln Arg Pro Glu Asp Cys Arg Pro Arg Gly Ser
            20                  25                  30
Val Lys Gly Thr Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr
        35                  40                  45
<210> 18
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> IgG4铰链区
<400> 18
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1               5                   10
<210> 19
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> T2A
<400> 19
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1               5                   10                  15
Gly Pro
<210> 20
<211> 423
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mTSLP
<400> 20
atggttcttc tcaggagcct cttcatcctg caagtactag tacggatggg gctaacttac 60
aacttttcta actgcaactt cacgtcaatt acgaaaatat attgtaacat aatttttcat 120
gacctgactg gagatttgaa aggggctaag ttcgagcaaa tcgaggactg tgagagcaag 180
ccagcttgtc tcctgaaaat cgagtattat actctcaatc ctatccctgg ctgcccttca 240
ctccccgaca aaacatttgc ccggagaaca agagaagccc tcaatgacca ctgcccaggc 300
taccctgaaa ctgagagaaa tgacggtact caggaaatgg cacaagaagt ccaaaacatc 360
tgtctgaatc aaacctcaca aattctaaga ttgtggtatt ccttcatgca atctccagaa 420
taa 423
<210> 21
<211> 140
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mTSLP
<400> 21
Met Val Leu Leu Arg Ser Leu Phe Ile Leu Gln Val Leu Val Arg Met
1               5                   10                  15
Gly Leu Thr Tyr Asn Phe Ser Asn Cys Asn Phe Thr Ser Ile Thr Lys
            20                  25                  30
Ile Tyr Cys Asn Ile Ile Phe His Asp Leu Thr Gly Asp Leu Lys Gly
        35                  40                  45
Ala Lys Phe Glu Gln Ile Glu Asp Cys Glu Ser Lys Pro Ala Cys Leu
    50                  55                  60
Leu Lys Ile Glu Tyr Tyr Thr Leu Asn Pro Ile Pro Gly Cys Pro Ser
65                  70                  75                  80
Leu Pro Asp Lys Thr Phe Ala Arg Arg Thr Arg Glu Ala Leu Asn Asp
                85                  90                  95
His Cys Pro Gly Tyr Pro Glu Thr Glu Arg Asn Asp Gly Thr Gln Glu
            100                 105                 110
Met Ala Gln Glu Val Gln Asn Ile Cys Leu Asn Gln Thr Ser Gln Ile
        115                 120                 125
Leu Arg Leu Trp Tyr Ser Phe Met Gln Ser Pro Glu
    130                 135                 140
<210> 22
<211> 480
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTSLP
<400> 22
atgttccctt ttgccttact atatgttctg tcagtttctt tcaggaaaat cttcatctta 60
caacttgtag ggctggtgtt aacttacgac ttcaccaact gtgactttga gaagattaaa 120
gcagcctatc tcagtactat ttctaaagac ctgattacat atatgagtgg gaccaaaagt 180
accgagttca acaacaccgt ctcttgtagc aatcggccac attgccttac tgaaatccag 240
agcctaacct tcaatcccac cgccggctgc gcgtcgctcg ccaaagaaat gttcgccatg 300
aaaactaagg ctgccttagc tatctggtgc ccaggctatt cggaaactca gataaatgct 360
actcaggcaa tgaagaagag gagaaaaagg aaagtcacaa ccaataaatg tctggaacaa 420
gtgtcacaat tacaaggatt gtggcgtcgc ttcaatcgac ccttactgaa acaacagtaa 480
<210> 23
<211> 159
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTSLP
<400> 23
Met Phe Pro Phe Ala Leu Leu Tyr Val Leu Ser Val Ser Phe Arg Lys
1               5                   10                  15
Ile Phe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu Thr Tyr Asp Phe Thr
            20                  25                  30
Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr Leu Ser Thr Ile Ser
        35                  40                  45
Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys Ser Thr Glu Phe Asn
    50                  55                  60
Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys Leu Thr Glu Ile Gln
65                  70                  75                  80
Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala Ser Leu Ala Lys Glu
                85                  90                  95
Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro Gly
            100                 105                 110
Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg
        115                 120                 125
Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu
    130                 135                 140
Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln
145                 150                 155
<210> 24
<211> 189
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTSLP功能性片段
<400> 24
atgtttgcga tgaaaaccaa agcggcgctg gcgatttggt gcccgggcta tagcgaaacc 60
cagattaacg cgacccaggc gatgaaaaaa cgccgcaaac gcaaagtgac caccaacaaa 120
tgcctggaac aggtgagcca gctgcagggc ctgtggcgcc gctttaaccg cccgctgctg 180
aaacagcag 189
<210> 25
<211> 63
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hTSLP功能性片段
<400> 25
Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro Gly
1               5                   10                  15
Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg
            20                  25                  30
Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu
        35                  40                  45
Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln
    50                  55                  60
<210> 26
<211> 402
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hIL7
<400> 26
atgttccatg tttcttttag gtatatcttt ggacttcctc ccctgatcct tgttctgttg 60
ccagtagcat catctgattg tgatattgaa ggtaaagatg gcaaacaata tgagagtgtt 120
ctaatggtca gcatcgatca attattggac agcatgaaag aaattggtag caattgcctg 180
aataatgaat ttaacttttt taaaagacat atctgtgatg ctaataaggt taaaggaaga 240
aaaccagctg ccctgggtga agcccaacca acaaagagtt tggaagaaaa taaatcttta 300
aaggaacaga aaaaactgaa tgacttgtgt ttcctaaaga gactattaca agagataaaa 360
acttgttgga ataaaatttt gatgggcact aaagaacact ga 402
<210> 27
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hIL7
<400> 27
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile
1               5                   10                  15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys
            20                  25                  30
Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu
        35                  40                  45
Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe
    50                  55                  60
Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Val Lys Gly Arg
65                  70                  75                  80
Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu
                85                  90                  95
Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu
            100                 105                 110
Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met
        115                 120                 125
Gly Thr Lys Glu His
    130
<210> 28
<211> 465
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mIL7
<400> 28
atgttccatg tttcttttag atatatcttt ggaattcctc cactgatcct tgttctgctg 60
cctgtcacat catctgagtg ccacattaaa gacaaagaag gtaaagcata tgagagtgta 120
ctgatgatca gcatcgatga attggacaaa atgacaggaa ctgatagtaa ttgcccgaat 180
aatgaaccaa acttttttag aaaacatgta tgtgatgata caaaggaagc tgcttttcta 240
aatcgtgctg ctcgcaagtt gaagcaattt cttaaaatga atatcagtga agaattcaat 300
gtccacttac taacagtatc acaaggcaca caaacactgg tgaactgcac aagtaaggaa 360
gaaaaaaacg taaaggaaca gaaaaagaat gatgcatgtt tcctaaagag actactgaga 420
gaaataaaaa cttgttggaa taaaattttg aagggcagta tataa 465
<210> 29
<211> 154
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mIL7
<400> 29
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1               5                   10                  15
Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Glu Cys His Ile Lys Asp Lys
            20                  25                  30
Glu Gly Lys Ala Tyr Glu Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asp Glu Leu
        35                  40                  45
Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asn Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn
    50                  55                  60
Phe Phe Arg Lys His Val Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu
65                  70                  75                  80
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
                85                  90                  95
Glu Glu Phe Asn Val His Leu Leu Thr Val Ser Gln Gly Thr Gln Thr
            100                 105                 110
Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Asn Val Lys Glu Gln Lys
        115                 120                 125
Lys Asn Asp Ala Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr
    130                 135                 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile
145                 150
<210> 30
<211> 381
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL9
<400> 30
atgaagtccg ctgttctttt cctcttgggc atcatcttcc tggagcagtg tggagttcga 60
ggaaccctag tgataaggaa tgcacgatgc tcctgcatca gcaccagccg aggcacgatc 120
cactacaaat ccctcaaaga cctcaaacag tttgccccaa gccccaattg caacaaaact 180
gaaatcattg ctacactgaa gaacggagat caaacctgcc tagatccgga ctcggcaaat 240
gtgaagaagc tgatgaaaga atgggaaaag aagatcagcc aaaagaaaaa gcaaaagagg 300
gggaaaaaac atcaaaagaa catgaaaaac agaaaaccca aaacacccca aagtcgtcgt 360
cgttcaagga agactacata a 381
<210> 31
<211> 126
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL9
<400> 31
Met Lys Ser Ala Val Leu Phe Leu Leu Gly Ile Ile Phe Leu Glu Gln
1               5                   10                  15
Cys Gly Val Arg Gly Thr Leu Val Ile Arg Asn Ala Arg Cys Ser Cys
            20                  25                  30
Ile Ser Thr Ser Arg Gly Thr Ile His Tyr Lys Ser Leu Lys Asp Leu
        35                  40                  45
Lys Gln Phe Ala Pro Ser Pro Asn Cys Asn Lys Thr Glu Ile Ile Ala
    50                  55                  60
Thr Leu Lys Asn Gly Asp Gln Thr Cys Leu Asp Pro Asp Ser Ala Asn
65                  70                  75                  80
Val Lys Lys Leu Met Lys Glu Trp Glu Lys Lys Ile Ser Gln Lys Lys
                85                  90                  95
Lys Gln Lys Arg Gly Lys Lys His Gln Lys Asn Met Lys Asn Arg Lys
            100                 105                 110
Pro Lys Thr Pro Gln Ser Arg Arg Arg Ser Arg Lys Thr Thr
        115                 120                 125
<210> 32
<211> 378
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCXCL9
<400> 32
atgaagaaaa gtggtgttct tttcctcttg ggcatcatct tgctggttct gattggagtg 60
caaggaaccc cagtagtgag aaagggtcgc tgttcctgca tcagcaccaa ccaagggact 120
atccacctac aatccttgaa agaccttaaa caatttgccc caagcccttc ctgcgagaaa 180
attgaaatca ttgctacact gaagaatgga gttcaaacat gtctaaaccc agattcagca 240
gatgtgaagg aactgattaa aaagtgggag aaacaggtca gccaaaagaa aaagcaaaag 300
aatgggaaaa aacatcaaaa aaagaaagtt ctgaaagttc gaaaatctca acgttctcgt 360
caaaagaaga ctacataa 378
<210> 33
<211> 125
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL9
<400> 33
Met Lys Lys Ser Gly Val Leu Phe Leu Leu Gly Ile Ile Leu Leu Val
1               5                   10                  15
Leu Ile Gly Val Gln Gly Thr Pro Val Val Arg Lys Gly Arg Cys Ser
            20                  25                  30
Cys Ile Ser Thr Asn Gln Gly Thr Ile His Leu Gln Ser Leu Lys Asp
        35                  40                  45
Leu Lys Gln Phe Ala Pro Ser Pro Ser Cys Glu Lys Ile Glu Ile Ile
    50                  55                  60
Ala Thr Leu Lys Asn Gly Val Gln Thr Cys Leu Asn Pro Asp Ser Ala
65                  70                  75                  80
Asp Val Lys Glu Leu Ile Lys Lys Trp Glu Lys Gln Val Ser Gln Lys
                85                  90                  95
Lys Lys Gln Lys Asn Gly Lys Lys His Gln Lys Lys Lys Val Leu Lys
            100                 105                 110
Val Arg Lys Ser Gln Arg Ser Arg Gln Lys Lys Thr Thr
        115                 120                 125
<210> 34
<211> 297
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL10
<400> 34
atgaacccaa gtgctgccgt cattttctgc ctcatcctgc tgggtctgag tgggactcaa 60
gggatccctc tcgcaaggac ggtccgctgc aactgcatcc atatcgatga cgggccagtg 120
agaatgaggg ccatagggaa gcttgaaatc atccctgcga gcctatcctg cccacgtgtt 180
gagatcattg ccacgatgaa aaagaatgat gagcagagat gtctgaatcc ggaatctaag 240
accatcaaga atttaatgaa agcgtttagc caaaaaaggt ctaaaagggc tccttaa 297
<210> 35
<211> 98
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL10
<400> 35
Met Asn Pro Ser Ala Ala Val Ile Phe Cys Leu Ile Leu Leu Gly Leu
1               5                   10                  15
Ser Gly Thr Gln Gly Ile Pro Leu Ala Arg Thr Val Arg Cys Asn Cys
            20                  25                  30
Ile His Ile Asp Asp Gly Pro Val Arg Met Arg Ala Ile Gly Lys Leu
        35                  40                  45
Glu Ile Ile Pro Ala Ser Leu Ser Cys Pro Arg Val Glu Ile Ile Ala
    50                  55                  60
Thr Met Lys Lys Asn Asp Glu Gln Arg Cys Leu Asn Pro Glu Ser Lys
65                  70                  75                  80
Thr Ile Lys Asn Leu Met Lys Ala Phe Ser Gln Lys Arg Ser Lys Arg
                85                  90                  95
Ala Pro
<210> 36
<211> 297
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCXCL10
<400> 36
atgaatcaaa ctgccattct gatttgctgc cttatctttc tgactctaag tggcattcaa 60
ggagtacctc tctctagaac tgtacgctgt acctgcatca gcattagtaa tcaacctgtt 120
aatccaaggt ctttagaaaa acttgaaatt attcctgcaa gccaattttg tccacgtgtt 180
gagatcattg ctacaatgaa aaagaagggt gagaagagat gtctgaatcc agaatcgaag 240
gccatcaaga atttactgaa agcagttagc aaggaaaggt ctaaaagatc tccttaa 297
<210> 37
<211> 98
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCXCL10
<400> 37
Met Asn Gln Thr Ala Ile Leu Ile Cys Cys Leu Ile Phe Leu Thr Leu
1               5                   10                  15
Ser Gly Ile Gln Gly Val Pro Leu Ser Arg Thr Val Arg Cys Thr Cys
            20                  25                  30
Ile Ser Ile Ser Asn Gln Pro Val Asn Pro Arg Ser Leu Glu Lys Leu
        35                  40                  45
Glu Ile Ile Pro Ala Ser Gln Phe Cys Pro Arg Val Glu Ile Ile Ala
    50                  55                  60
Thr Met Lys Lys Lys Gly Glu Lys Arg Cys Leu Asn Pro Glu Ser Lys
65                  70                  75                  80
Ala Ile Lys Asn Leu Leu Lys Ala Val Ser Lys Glu Arg Ser Lys Arg
                85                  90                  95
Ser Pro
<210> 38
<211> 303
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL11
<400> 38
atgaacagga aggtcacagc catagccctg gctgcgatca tctgggccac agctgctcaa 60
ggcttcctta tgttcaaaca ggggcgctgt ctttgcatcg gccccgggat gaaagccgtc 120
aaaatggcag agatcgagaa agcttctgta atttacccga gtaacggctg cgacaaagtt 180
gaagtgattg ttactatgaa ggctcataaa cgacaaaggt gcctggaccc cagatccaag 240
caagctcgcc tcataatgca ggcaatagaa aaaaagaatt ttttaaggcg tcaaaacatg 300
tga 303
<210> 39
<211> 100
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL11
<400> 39
Met Asn Arg Lys Val Thr Ala Ile Ala Leu Ala Ala Ile Ile Trp Ala
1               5                   10                  15
Thr Ala Ala Gln Gly Phe Leu Met Phe Lys Gln Gly Arg Cys Leu Cys
            20                  25                  30
Ile Gly Pro Gly Met Lys Ala Val Lys Met Ala Glu Ile Glu Lys Ala
        35                  40                  45
Ser Val Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Cys Asp Lys Val Glu Val Ile Val
    50                  55                  60
Thr Met Lys Ala His Lys Arg Gln Arg Cys Leu Asp Pro Arg Ser Lys
65                  70                  75                  80
Gln Ala Arg Leu Ile Met Gln Ala Ile Glu Lys Lys Asn Phe Leu Arg
                85                  90                  95
Arg Gln Asn Met
            100
<210> 40
<211> 285
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCXCL11
<400> 40
atgagtgtga agggcatggc tatagccttg gctgtgatat tgtgtgctac agttgttcaa 60
ggcttcccca tgttcaaaag aggacgctgt ctttgcatag gccctggggt aaaagcagtg 120
aaagtggcag atattgagaa agcctccata atgtacccaa gtaacaactg tgacaaaata 180
gaagtgatta ttaccctgaa agaaaataaa ggacaacgat gcctaaatcc caaatcgaag 240
caagcaaggc ttataatcaa aaaagttgaa agaaagaatt tttaa 285
<210> 41
<211> 94
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCXCL11
<400> 41
Met Ser Val Lys Gly Met Ala Ile Ala Leu Ala Val Ile Leu Cys Ala
1               5                   10                  15
Thr Val Val Gln Gly Phe Pro Met Phe Lys Arg Gly Arg Cys Leu Cys
            20                  25                  30
Ile Gly Pro Gly Val Lys Ala Val Lys Val Ala Asp Ile Glu Lys Ala
        35                  40                  45
Ser Ile Met Tyr Pro Ser Asn Asn Cys Asp Lys Ile Glu Val Ile Ile
    50                  55                  60
Thr Leu Lys Glu Asn Lys Gly Gln Arg Cys Leu Asn Pro Lys Ser Lys
65                  70                  75                  80
Gln Ala Arg Leu Ile Ile Lys Lys Val Glu Arg Lys Asn Phe
                85                  90
<210> 42
<211> 270
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL12
<400> 42
atggacgcca aggtcgtcgc cgtgctggcc ctggtgctgg ccgcgctctg catcagtgac 60
ggtaaaccag tcagcctgag ctaccgatgc ccctgccggt tcttcgagag ccacatcgcc 120
agagccaacg tcaagcatct gaaaatcctc aacactccaa actgtgccct tcagattgtt 180
gcacggctga agaacaacaa cagacaagtg tgcattgacc cgaaattaaa gtggatccaa 240
gagtacctgg agaaagcttt aaacaagtaa 270
<210> 43
<211> 89
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL12
<400> 43
Met Asp Ala Lys Val Val Ala Val Leu Ala Leu Val Leu Ala Ala Leu
1               5                   10                  15
Cys Ile Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys
            20                  25                  30
Arg Phe Phe Glu Ser His Ile Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys
        35                  40                  45
Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Lys
    50                  55                  60
Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln
65                  70                  75                  80
Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys
                85
<210> 44
<211> 342
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCXCL12
<400> 44
atgagtgtga agggcatggc tatagccttg gctgtgatat tgtgtgctac agttgttcaa 60
atgaacgcca aggtcgtggt cgtgctggtc ctcgtgctga ccgcgctctg cctcagcgac 120
gggaagcccg tcagcctgag ctacagatgc ccatgccgat tcttcgaaag ccatgttgcc 180
agagccaacg tcaagcatct caaaattctc aacactccaa actgtgccct tcagattgta 240
gcccggctga agaacaacaa cagacaagtg tgcattgacc cgaagctaaa gtggattcag 300
gagtacctgg agaaagcttt aaacaagagg ttcaagatgt ga 342
<210> 45
<211> 93
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCXCL12
<400> 45
Met Asn Ala Lys Val Val Val Val Leu Val Leu Val Leu Thr Ala Leu
1               5                   10                  15
Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys
            20                  25                  30
Arg Phe Phe Glu Ser His Val Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys
        35                  40                  45
Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Lys
    50                  55                  60
Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln
65                  70                  75                  80
Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys Arg Phe Lys Met
                85                  90
<210> 46
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mXCL1
<400> 46
atgagacttc tcctcctgac tttcctggga gtctgctgcc tcaccccatg ggttgtggaa 60
ggtgtgggga ctgaagtcct agaagagagt agctgtgtga acttacaaac ccagcggctg 120
ccagttcaaa aaatcaagac ctatatcatc tgggaggggg ccatgagagc tgtaattttt 180
gtcaccaaac gaggactaaa aatttgtgct gatccagaag ccaaatgggt gaaagcagcg 240
atcaagactg tggatggcag ggccagtacc agaaagaaca tggctgaaac tgttcccaca 300
ggagcccaga ggtccaccag cacagcagta accctgactg ggtaa 345
<210> 47
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mXCL1
<400> 47
Met Arg Leu Leu Leu Leu Thr Phe Leu Gly Val Cys Cys Leu Thr Pro
1               5                   10                  15
Trp Val Val Glu Gly Val Gly Thr Glu Val Leu Glu Glu Ser Ser Cys
            20                  25                  30
Val Asn Leu Gln Thr Gln Arg Leu Pro Val Gln Lys Ile Lys Thr Tyr
        35                  40                  45
Ile Ile Trp Glu Gly Ala Met Arg Ala Val Ile Phe Val Thr Lys Arg
    50                  55                  60
Gly Leu Lys Ile Cys Ala Asp Pro Glu Ala Lys Trp Val Lys Ala Ala
65                  70                  75                  80
Ile Lys Thr Val Asp Gly Arg Ala Ser Thr Arg Lys Asn Met Ala Glu
                85                  90                  95
Thr Val Pro Thr Gly Ala Gln Arg Ser Thr Ser Thr Ala Val Thr Leu
            100                 105                 110
Thr Gly
<210> 48
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hXCL1
<400> 48
atgagacttc tcatcctggc cctccttggc atctgctctc tcactgcata cattgtggaa 60
ggtgtaggga gtgaagtctc agataagagg acctgtgtga gcctcactac ccagcgactg 120
ccggttagca gaatcaagac ctacaccatc acggaaggct ccttgagagc agtaattttt 180
attaccaaac gtggcctaaa agtctgtgct gatccacaag ccacgtgggt gagagacgtg 240
gtcaggagca tggacaggaa atccaacacc agaaataaca tgatccagac caagccaaca 300
ggaacccagc aatcgaccaa tacagctgtg accctgactg gctag 345
<210> 49
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hXCL1
<400> 49
Met Arg Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Gly Ile Cys Ser Leu Thr Ala
1               5                   10                  15
Tyr Ile Val Glu Gly Val Gly Ser Glu Val Ser Asp Lys Arg Thr Cys
            20                  25                  30
Val Ser Leu Thr Thr Gln Arg Leu Pro Val Ser Arg Ile Lys Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Ile Thr Glu Gly Ser Leu Arg Ala Val Ile Phe Ile Thr Lys Arg
    50                  55                  60
Gly Leu Lys Val Cys Ala Asp Pro Gln Ala Thr Trp Val Arg Asp Val
65                  70                  75                  80
Val Arg Ser Met Asp Arg Lys Ser Asn Thr Arg Asn Asn Met Ile Gln
                85                  90                  95
Thr Lys Pro Thr Gly Thr Gln Gln Ser Thr Asn Thr Ala Val Thr Leu
            100                 105                 110
Thr Gly
<210> 50
<211> 345
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hXCL2
<400> 50
atgagacttc tcatcctggc cctccttggc atctgctctc tcactgcata cattgtggaa 60
ggtgtaggga gtgaagtctc acataggagg acctgtgtga gcctcactac ccagcgactg 120
ccagttagca gaatcaagac ctacaccatc acggaaggct ccttgagagc agtaattttt 180
attaccaaac gtggcctaaa agtctgtgct gatccacaag ccacgtgggt gagagacgtg 240
gtcaggagca tggacaggaa atccaacacc agaaataaca tgatccagac caagccaaca 300
ggaacccagc aatcgaccaa tacagctgtg accctgactg gctag 345
<210> 51
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hXCL2
<400> 51
Met Arg Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Gly Ile Cys Ser Leu Thr Ala
1               5                   10                  15
Tyr Ile Val Glu Gly Val Gly Ser Glu Val Ser His Arg Arg Thr Cys
            20                  25                  30
Val Ser Leu Thr Thr Gln Arg Leu Pro Val Ser Arg Ile Lys Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Ile Thr Glu Gly Ser Leu Arg Ala Val Ile Phe Ile Thr Lys Arg
    50                  55                  60
Gly Leu Lys Val Cys Ala Asp Pro Gln Ala Thr Trp Val Arg Asp Val
65                  70                  75                  80
Val Arg Ser Met Asp Arg Lys Ser Asn Thr Arg Asn Asn Met Ile Gln
                85                  90                  95
Thr Lys Pro Thr Gly Thr Gln Gln Ser Thr Asn Thr Ala Val Thr Leu
            100                 105                 110
Thr Gly
<210> 52
<211> 1188
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCX3CL1
<400> 52
atggctccct cgccgctcgc gtggctgctg cgcctggccg cgttcttcca tttgtgtact 60
ctgctgccgg gtcagcacct cggcatgacg aaatgcgaaa tcatgtgcga caagatgacc 120
tcacgaatcc cagtggcttt gctcatccgc tatcagctaa accaggagtc ctgcggcaag 180
cgtgccattg tcctggagac gacacagcac agacgcttct gtgctgaccc gaaggagaaa 240
tgggtccaag acgccatgaa gcatctggat caccaggctg ctgccctcac taaaaatggt 300
ggcaagtttg agaagcgggt ggacaatgtg acacctggga tcaccttggc cactagggga 360
ctgtccccat ctgccctgac aaagcctgaa tccgccacat tggaagacct tgctttggaa 420
ctgactacta tttcccagga ggccaggggg accatgggga cttcccaaga gccaccggca 480
gcagtgaccg gatcatctct ctcaacttcc gaggcacagg atgcagggct tacggctaag 540
cctcagagca ttggaagttt tgaggcggct gacatctcca ccaccgtttg gccgagtcct 600
gctgtctacc aatctggatc tagctcctgg gctgaggaaa aagctactga gtccccctcc 660
actacagccc catctcctca ggtgtccact acttcacctt caaccccaga ggaaaatgtt 720
gggtccgaag gccaaccccc atgggtccag ggacaggacc tcagtccaga gaagtctcta 780
gggtctgagg agataaaccc agttcatact gataatttcc aggagagggg gcctggcaac 840
acagtccacc cctcagtggc tcccatctcc tctgaagaga cccccagccc agagctggtg 900
gcctcgggca gccaggctcc taagatagag gaacccatcc atgccactgc agatccccag 960
aaactgagtg tgcttatcac tcctgtcccc gacacccagg cagccacaag gaggcaggca 1020
gtggggctac tggctttcct tggtcttctt ttctgcctag gggtggccat gtttgcttac 1080
cagagccttc agggctgtcc ccgcaaaatg gcgggggaaa tggtagaagg cctccgctac 1140
gtcccccgta gctgtggcag taactcatac gtcctggtgc cagtgtga 1188
<210> 53
<211> 395
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCX3CL1
<400> 53
Met Ala Pro Ser Pro Leu Ala Trp Leu Leu Arg Leu Ala Ala Phe Phe
1               5                   10                  15
His Leu Cys Thr Leu Leu Pro Gly Gln His Leu Gly Met Thr Lys Cys
            20                  25                  30
Glu Ile Met Cys Asp Lys Met Thr Ser Arg Ile Pro Val Ala Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Arg Tyr Gln Leu Asn Gln Glu Ser Cys Gly Lys Arg Ala Ile Val
    50                  55                  60
Leu Glu Thr Thr Gln His Arg Arg Phe Cys Ala Asp Pro Lys Glu Lys
65                  70                  75                  80
Trp Val Gln Asp Ala Met Lys His Leu Asp His Gln Ala Ala Ala Leu
                85                  90                  95
Thr Lys Asn Gly Gly Lys Phe Glu Lys Arg Val Asp Asn Val Thr Pro
            100                 105                 110
Gly Ile Thr Leu Ala Thr Arg Gly Leu Ser Pro Ser Ala Leu Thr Lys
        115                 120                 125
Pro Glu Ser Ala Thr Leu Glu Asp Leu Ala Leu Glu Leu Thr Thr Ile
    130                 135                 140
Ser Gln Glu Ala Arg Gly Thr Met Gly Thr Ser Gln Glu Pro Pro Ala
145                 150                 155                 160
Ala Val Thr Gly Ser Ser Leu Ser Thr Ser Glu Ala Gln Asp Ala Gly
                165                 170                 175
Leu Thr Ala Lys Pro Gln Ser Ile Gly Ser Phe Glu Ala Ala Asp Ile
            180                 185                 190
Ser Thr Thr Val Trp Pro Ser Pro Ala Val Tyr Gln Ser Gly Ser Ser
        195                 200                 205
Ser Trp Ala Glu Glu Lys Ala Thr Glu Ser Pro Ser Thr Thr Ala Pro
    210                 215                 220
Ser Pro Gln Val Ser Thr Thr Ser Pro Ser Thr Pro Glu Glu Asn Val
225                 230                 235                 240
Gly Ser Glu Gly Gln Pro Pro Trp Val Gln Gly Gln Asp Leu Ser Pro
                245                 250                 255
Glu Lys Ser Leu Gly Ser Glu Glu Ile Asn Pro Val His Thr Asp Asn
            260                 265                 270
Phe Gln Glu Arg Gly Pro Gly Asn Thr Val His Pro Ser Val Ala Pro
        275                 280                 285
Ile Ser Ser Glu Glu Thr Pro Ser Pro Glu Leu Val Ala Ser Gly Ser
    290                 295                 300
Gln Ala Pro Lys Ile Glu Glu Pro Ile His Ala Thr Ala Asp Pro Gln
305                 310                 315                 320
Lys Leu Ser Val Leu Ile Thr Pro Val Pro Asp Thr Gln Ala Ala Thr
                325                 330                 335
Arg Arg Gln Ala Val Gly Leu Leu Ala Phe Leu Gly Leu Leu Phe Cys
            340                 345                 350
Leu Gly Val Ala Met Phe Ala Tyr Gln Ser Leu Gln Gly Cys Pro Arg
        355                 360                 365
Lys Met Ala Gly Glu Met Val Glu Gly Leu Arg Tyr Val Pro Arg Ser
    370                 375                 380
Cys Gly Ser Asn Ser Tyr Val Leu Val Pro Val
385                 390                 395
<210> 54
<211> 1194
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCX3CL1
<400> 54
atggctccga tatctctgtc gtggctgctc cgcttggcca ccttctgcca tctgactgtc 60
ctgctggctg gacagcacca cggtgtgacg aaatgcaaca tcacgtgcag caagatgaca 120
tcaaagatac ctgtagcttt gctcatccac tatcaacaga accaggcatc atgcggcaaa 180
cgcgcaatca tcttggagac gagacagcac aggctgttct gtgccgaccc gaaggagcaa 240
tgggtcaagg acgcgatgca gcatctggac cgccaggctg ctgccctaac tcgaaatggc 300
ggcaccttcg agaagcagat cggcgaggtg aagcccagga ccacccctgc cgccggggga 360
atggacgagt ctgtggtcct ggagcccgaa gccacaggcg aaagcagtag cctggagccg 420
actccttctt cccaggaagc acagagggcc ctggggacct ccccagagct gccgacgggc 480
gtgactggtt cctcagggac caggctcccc ccgacgccaa aggctcagga tggagggcct 540
gtgggcacgg agcttttccg agtgcctccc gtctccactg ccgccacgtg gcagagttct 600
gctccccacc aacctgggcc cagcctctgg gctgaggcaa agacctctga ggccccgtcc 660
acccaggacc cctccaccca ggcctccact gcgtcctccc cagccccaga ggagaatgct 720
ccgtctgaag gccagcgtgt gtggggtcag ggacagagcc ccaggccaga gaactctctg 780
gagcgggagg agatgggtcc cgtgccagcg cacacggatg ccttccagga ctgggggcct 840
ggcagcatgg cccacgtctc tgtggtccct gtctcctcag aagggacccc cagcagggag 900
ccagtggctt caggcagctg gacccctaag gctgaggaac ccatccatgc caccatggac 960
ccccagaggc tgggcgtcct tatcactcct gtccctgacg cccaggctgc cacccggagg 1020
caggcggtgg ggctgctggc cttccttggc ctcctcttct gcctgggggt ggccatgttc 1080
acctaccaga gcctccaggg ctgccctcga aagatggcag gagagatggc ggagggcctt 1140
cgctacatcc cccggagctg tggtagtaat tcatatgtcc tggtgcccgt gtga 1194
<210> 55
<211> 397
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCX3CL1
<400> 55
Met Ala Pro Ile Ser Leu Ser Trp Leu Leu Arg Leu Ala Thr Phe Cys
1               5                   10                  15
His Leu Thr Val Leu Leu Ala Gly Gln His His Gly Val Thr Lys Cys
            20                  25                  30
Asn Ile Thr Cys Ser Lys Met Thr Ser Lys Ile Pro Val Ala Leu Leu
        35                  40                  45
Ile His Tyr Gln Gln Asn Gln Ala Ser Cys Gly Lys Arg Ala Ile Ile
    50                  55                  60
Leu Glu Thr Arg Gln His Arg Leu Phe Cys Ala Asp Pro Lys Glu Gln
65                  70                  75                  80
Trp Val Lys Asp Ala Met Gln His Leu Asp Arg Gln Ala Ala Ala Leu
                85                  90                  95
Thr Arg Asn Gly Gly Thr Phe Glu Lys Gln Ile Gly Glu Val Lys Pro
            100                 105                 110
Arg Thr Thr Pro Ala Ala Gly Gly Met Asp Glu Ser Val Val Leu Glu
        115                 120                 125
Pro Glu Ala Thr Gly Glu Ser Ser Ser Leu Glu Pro Thr Pro Ser Ser
    130                 135                 140
Gln Glu Ala Gln Arg Ala Leu Gly Thr Ser Pro Glu Leu Pro Thr Gly
145                 150                 155                 160
Val Thr Gly Ser Ser Gly Thr Arg Leu Pro Pro Thr Pro Lys Ala Gln
                165                 170                 175
Asp Gly Gly Pro Val Gly Thr Glu Leu Phe Arg Val Pro Pro Val Ser
            180                 185                 190
Thr Ala Ala Thr Trp Gln Ser Ser Ala Pro His Gln Pro Gly Pro Ser
        195                 200                 205
Leu Trp Ala Glu Ala Lys Thr Ser Glu Ala Pro Ser Thr Gln Asp Pro
    210                 215                 220
Ser Thr Gln Ala Ser Thr Ala Ser Ser Pro Ala Pro Glu Glu Asn Ala
225                 230                 235                 240
Pro Ser Glu Gly Gln Arg Val Trp Gly Gln Gly Gln Ser Pro Arg Pro
                245                 250                 255
Glu Asn Ser Leu Glu Arg Glu Glu Met Gly Pro Val Pro Ala His Thr
            260                 265                 270
Asp Ala Phe Gln Asp Trp Gly Pro Gly Ser Met Ala His Val Ser Val
        275                 280                 285
Val Pro Val Ser Ser Glu Gly Thr Pro Ser Arg Glu Pro Val Ala Ser
    290                 295                 300
Gly Ser Trp Thr Pro Lys Ala Glu Glu Pro Ile His Ala Thr Met Asp
305                 310                 315                 320
Pro Gln Arg Leu Gly Val Leu Ile Thr Pro Val Pro Asp Ala Gln Ala
                325                 330                 335
Ala Thr Arg Arg Gln Ala Val Gly Leu Leu Ala Phe Leu Gly Leu Leu
            340                 345                 350
Phe Cys Leu Gly Val Ala Met Phe Thr Tyr Gln Ser Leu Gln Gly Cys
        355                 360                 365
Pro Arg Lys Met Ala Gly Glu Met Ala Glu Gly Leu Arg Tyr Ile Pro
    370                 375                 380
Arg Ser Cys Gly Ser Asn Ser Tyr Val Leu Val Pro Val
385                 390                 395
<210> 56
<211> 447
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL2
<400> 56
atgcaggtcc ctgtcatgct tctgggcctg ctgttcacag ttgccggctg gagcatccac 60
gtgttggctc agccagatgc agttaacgcc ccactcacct gctgctactc attcaccagc 120
aagatgatcc caatgagtag gctggagagc tacaagagga tcaccagcag caggtgtccc 180
aaagaagctg tagtttttgt caccaagctc aagagagagg tctgtgctga ccccaagaag 240
gaatgggtcc agacatacat taaaaacctg gatcggaacc aaatgagatc agaacctaca 300
actttattta aaactgcatc tgccctaagg tcttcagcac ctttgaatgt gaagttgacc 360
cgtaaatctg aagctaatgc atccactacc ttttccacaa ccacctcaag cacttctgta 420
ggagtgacca gtgtgacagt gaactag 447
<210> 57
<211> 148
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL2
<400> 57
Met Gln Val Pro Val Met Leu Leu Gly Leu Leu Phe Thr Val Ala Gly
1               5                   10                  15
Trp Ser Ile His Val Leu Ala Gln Pro Asp Ala Val Asn Ala Pro Leu
            20                  25                  30
Thr Cys Cys Tyr Ser Phe Thr Ser Lys Met Ile Pro Met Ser Arg Leu
        35                  40                  45
Glu Ser Tyr Lys Arg Ile Thr Ser Ser Arg Cys Pro Lys Glu Ala Val
    50                  55                  60
Val Phe Val Thr Lys Leu Lys Arg Glu Val Cys Ala Asp Pro Lys Lys
65                  70                  75                  80
Glu Trp Val Gln Thr Tyr Ile Lys Asn Leu Asp Arg Asn Gln Met Arg
                85                  90                  95
Ser Glu Pro Thr Thr Leu Phe Lys Thr Ala Ser Ala Leu Arg Ser Ser
            100                 105                 110
Ala Pro Leu Asn Val Lys Leu Thr Arg Lys Ser Glu Ala Asn Ala Ser
        115                 120                 125
Thr Thr Phe Ser Thr Thr Thr Ser Ser Thr Ser Val Gly Val Thr Ser
    130                 135                 140
Val Thr Val Asn
145
<210> 58
<211> 300
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL2
<400> 58
atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60
gggctcgctc agccagatgc aatcaatgcc ccagtcacct gctgctataa cttcaccaat 120
aggaagatct cagtgcagag gctcgcgagc tatagaagaa tcaccagcag caagtgtccc 180
aaagaagctg tgatcttcaa gaccattgtg gccaaggaga tctgtgctga ccccaagcag 240
aagtgggttc aggattccat ggaccacctg gacaagcaaa cccaaactcc gaagacttga 300
<210> 59
<211> 99
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL2
<400> 59
Met Lys Val Ser Ala Ala Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ile Ala Ala Thr
1               5                   10                  15
Phe Ile Pro Gln Gly Leu Ala Gln Pro Asp Ala Ile Asn Ala Pro Val
            20                  25                  30
Thr Cys Cys Tyr Asn Phe Thr Asn Arg Lys Ile Ser Val Gln Arg Leu
        35                  40                  45
Ala Ser Tyr Arg Arg Ile Thr Ser Ser Lys Cys Pro Lys Glu Ala Val
    50                  55                  60
Ile Phe Lys Thr Ile Val Ala Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Gln
65                  70                  75                  80
Lys Trp Val Gln Asp Ser Met Asp His Leu Asp Lys Gln Thr Gln Thr
                85                  90                  95
Pro Lys Thr
<210> 60
<211> 279
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL3
<400> 60
atgcaggtct ccactgctgc ccttgctgtc ctcctctgca ccatggctct ctgcaaccag 60
ttctctgcat cacttgctgc tgacacgccg accgcctgct gcttcagcta cacctcccgg 120
cagattccac agaatttcat agctgactac tttgagacga gcagccagtg ctccaagccc 180
ggtgtcatct tcctaaccaa gcgaagccgg caggtctgtg ctgaccccag tgaggagtgg 240
gtccagaaat atgtcagcga cctagagctg agtgcctga 279
<210> 61
<211> 92
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL3
<400> 61
Met Gln Val Ser Thr Ala Ala Leu Ala Val Leu Leu Cys Thr Met Ala
1               5                   10                  15
Leu Cys Asn Gln Phe Ser Ala Ser Leu Ala Ala Asp Thr Pro Thr Ala
            20                  25                  30
Cys Cys Phe Ser Tyr Thr Ser Arg Gln Ile Pro Gln Asn Phe Ile Ala
        35                  40                  45
Asp Tyr Phe Glu Thr Ser Ser Gln Cys Ser Lys Pro Gly Val Ile Phe
    50                  55                  60
Leu Thr Lys Arg Ser Arg Gln Val Cys Ala Asp Pro Ser Glu Glu Trp
65                  70                  75                  80
Val Gln Lys Tyr Val Ser Asp Leu Glu Leu Ser Ala
                85                  90
<210> 62
<211> 279
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL3
<400> 62
atgaaggtct ccaccactgc ccttgctgtt cttctctgta ccatgacact ctgcaaccaa 60
gtcttctcag cgccatatgg agctgacacc ccgactgcct gctgcttctc ctacagccgg 120
aagattccac gccaattcat cgttgactat tttgaaacca gcagcctttg ctcccagcca 180
ggtgtcattt tcctgactaa gagaaaccgg cagatctgcg ctgactccaa agagacctgg 240
gtccaagaat acatcactga cctggaactg aatgcctga 279
<210> 63
<211> 92
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL3
<400> 63
Met Lys Val Ser Thr Thr Ala Leu Ala Val Leu Leu Cys Thr Met Thr
1               5                   10                  15
Leu Cys Asn Gln Val Phe Ser Ala Pro Tyr Gly Ala Asp Thr Pro Thr
            20                  25                  30
Ala Cys Cys Phe Ser Tyr Ser Arg Lys Ile Pro Arg Gln Phe Ile Val
        35                  40                  45
Asp Tyr Phe Glu Thr Ser Ser Leu Cys Ser Gln Pro Gly Val Ile Phe
    50                  55                  60
Leu Thr Lys Arg Asn Arg Gln Ile Cys Ala Asp Ser Lys Glu Thr Trp
65                  70                  75                  80
Val Gln Glu Tyr Ile Thr Asp Leu Glu Leu Asn Ala
                85                  90
<210> 64
<211> 279
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL4
<400> 64
atgaagctct gcgtgactgt cctgtctctc ctcatgctag tagctgcctt ctgctctcca 60
gcgctctcag caccaatggg ctcagaccct cccaccgcct gctgcttttc ttacaccgcg 120
aggaagcttc ctcgcaactt tgtggtagat tactatgaga ccagcagcct ctgctcccag 180
ccagctgtgg tattccaaac caaaagaagc aagcaagtct gtgctgatcc cagtgaatcc 240
tgggtccagg agtacgtgta tgacctggaa ctgaactga 279
<210> 65
<211> 92
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL4
<400> 65
Met Lys Leu Cys Val Thr Val Leu Ser Leu Leu Met Leu Val Ala Ala
1               5                   10                  15
Phe Cys Ser Pro Ala Leu Ser Ala Pro Met Gly Ser Asp Pro Pro Thr
            20                  25                  30
Ala Cys Cys Phe Ser Tyr Thr Ala Arg Lys Leu Pro Arg Asn Phe Val
        35                  40                  45
Val Asp Tyr Tyr Glu Thr Ser Ser Leu Cys Ser Gln Pro Ala Val Val
    50                  55                  60
Phe Gln Thr Lys Arg Ser Lys Gln Val Cys Ala Asp Pro Ser Glu Ser
65                  70                  75                  80
Trp Val Gln Glu Tyr Val Tyr Asp Leu Glu Leu Asn
                85                  90
<210> 66
<211> 279
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL4
<400> 66
atgaagctct gcgtgtctgc cctctctctc ctcttgctcg tggctgcctt ctgtgctcca 60
gggttctcag caccaatggg ctctgaccct cccacttcct gctgtttctc ttacacctcc 120
cggcagcttc acagaagctt tgtgatggat tactatgaga ccagcagtct ttgctccaag 180
ccagctgtgg tattcctgac caaaagaggc agacagatct gtgctaaccc cagcgagccc 240
tgggtcactg agtacatgag tgacttggag ttgaactga 279
<210> 67
<211> 92
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL4
<400> 67
Met Lys Leu Cys Val Ser Ala Leu Ser Leu Leu Leu Leu Val Ala Ala
1               5                   10                  15
Phe Cys Ala Pro Gly Phe Ser Ala Pro Met Gly Ser Asp Pro Pro Thr
            20                  25                  30
Ser Cys Cys Phe Ser Tyr Thr Ser Arg Gln Leu His Arg Ser Phe Val
        35                  40                  45
Met Asp Tyr Tyr Glu Thr Ser Ser Leu Cys Ser Lys Pro Ala Val Val
    50                  55                  60
Phe Leu Thr Lys Arg Gly Arg Gln Ile Cys Ala Asn Pro Ser Glu Pro
65                  70                  75                  80
Trp Val Thr Glu Tyr Met Ser Asp Leu Glu Leu Asn
                85                  90
<210> 68
<211> 276
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL5
<400> 68
atgaaggtct ccgcggcagc cctcgctgtc atcctcattg ctactgccct ctgcgctcct 60
gcatctgcct tcccatattc ctcggacacc acaccctgct gctttgccta cattgcccgc 120
ccactgcccc gtgcccacat caaggagtat ttctacacca gtggcaagtg ctccaaccca 180
gcagtcgtct ttgtcacccg aaagaaccgc caagtgtgtg ccaacccaga gaagaaatgg 240
gttcgggagt acatcaactc tttggagatg agctag 276
<210> 69
<211> 91
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL5
<400> 69
Met Lys Val Ser Ala Ala Ala Leu Ala Val Ile Leu Ile Ala Thr Ala
1               5                   10                  15
Leu Cys Ala Pro Ala Ser Ala Ser Pro Tyr Ser Ser Asp Thr Thr Pro
            20                  25                  30
Cys Cys Phe Ala Tyr Ile Ala Arg Pro Leu Pro Arg Ala His Ile Lys
        35                  40                  45
Glu Tyr Phe Tyr Thr Ser Gly Lys Cys Ser Asn Pro Ala Val Val Phe
    50                  55                  60
Val Thr Arg Lys Asn Arg Gln Val Cys Ala Asn Pro Glu Lys Lys Trp
65                  70                  75                  80
Val Arg Glu Tyr Ile Asn Ser Leu Glu Met Ser
                85                  90
<210> 70
<211> 276
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL5
<400> 70
atgaagatct ctgcagctgc cctcaccatc atcctcactg cagccgccct ctgcaccccc 60
gcacctgcct caccatatgg ctcggacacc actccctgct gctttgccta cctctccctc 120
gcgctgcctc gtgcccacgt caaggagtat ttctacacca gcagcaagtg ctccaatctt 180
gcagtcgtgt ttgtcactcg aaggaaccgc caagtgtgtg ccaacccaga gaagaagtgg 240
gttcaagaat acatcaacta tttggagatg agctag 276
<210> 71
<211> 91
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL5
<400> 71
Met Lys Ile Ser Ala Ala Ala Leu Thr Ile Ile Leu Thr Ala Ala Ala
1               5                   10                  15
Leu Cys Thr Pro Ala Pro Ala Ser Pro Tyr Gly Ser Asp Thr Thr Pro
            20                  25                  30
Cys Cys Phe Ala Tyr Leu Ser Leu Ala Leu Pro Arg Ala His Val Lys
        35                  40                  45
Glu Tyr Phe Tyr Thr Ser Ser Lys Cys Ser Asn Leu Ala Val Val Phe
    50                  55                  60
Val Thr Arg Arg Asn Arg Gln Val Cys Ala Asn Pro Glu Lys Lys Trp
65                  70                  75                  80
Val Gln Glu Tyr Ile Asn Tyr Leu Glu Met Ser
                85                  90
<210> 72
<211> 294
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL7
<400> 72
atgaggatct ctgccacgct tctgtgcctg ctgctcatag ccgctgcttt cagcatccaa 60
gtgtgggccc aaccagatgg gcccaatgca tccacatgct gctatgtcaa gaaacaaaag 120
atccccaaga ggaatctcaa gagctacaga aggatcacca gtagtcggtg tccctgggaa 180
gctgttatct tcaagacaaa gaagggcatg gaagtctgcg ctgaagccca tcagaagtgg 240
gtcgaggagg ctatagcata cttagacatg aaaaccccaa ctccaaagcc ttga 294
<210> 73
<211> 97
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL7
<400> 73
Met Arg Ile Ser Ala Thr Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ile Ala Ala Ala
1               5                   10                  15
Phe Ser Ile Gln Val Trp Ala Gln Pro Asp Gly Pro Asn Ala Ser Thr
            20                  25                  30
Cys Cys Tyr Val Lys Lys Gln Lys Ile Pro Lys Arg Asn Leu Lys Ser
        35                  40                  45
Tyr Arg Arg Ile Thr Ser Ser Arg Cys Pro Trp Glu Ala Val Ile Phe
    50                  55                  60
Lys Thr Lys Lys Gly Met Glu Val Cys Ala Glu Ala His Gln Lys Trp
65                  70                  75                  80
Val Glu Glu Ala Ile Ala Tyr Leu Asp Met Lys Thr Pro Thr Pro Lys
                85                  90                  95
Pro
<210> 74
<211> 300
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL7
<400> 74
atgaaagcct ctgcagcact tctgtgtctg ctgctcacag cagctgcttt cagcccccag 60
gggcttgctc agccagttgg gattaatact tcaactacct gctgctacag atttatcaat 120
aagaaaatcc ctaagcagag gctggagagc tacagaagga ccaccagtag ccactgtccc 180
cgggaagctg taatcttcaa gaccaaactg gacaaggaga tctgtgctga ccccacacag 240
aagtgggtcc aggactttat gaagcacctg gacaagaaaa cccaaactcc aaagctttga 300
<210> 75
<211> 99
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL7
<400> 75
Met Lys Ala Ser Ala Ala Leu Leu Cys Leu Leu Leu Thr Ala Ala Ala
1               5                   10                  15
Phe Ser Pro Gln Gly Leu Ala Gln Pro Val Gly Ile Asn Thr Ser Thr
            20                  25                  30
Thr Cys Cys Tyr Arg Phe Ile Asn Lys Lys Ile Pro Lys Gln Arg Leu
        35                  40                  45
Glu Ser Tyr Arg Arg Thr Thr Ser Ser His Cys Pro Arg Glu Ala Val
    50                  55                  60
Ile Phe Lys Thr Lys Leu Asp Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Thr Gln
65                  70                  75                  80
Lys Trp Val Gln Asp Phe Met Lys His Leu Asp Lys Lys Thr Gln Thr
                85                  90                  95
Pro Lys Leu
<210> 76
<211> 294
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL8
<400> 76
atgaagatct acgcagtgct tctttgcctg ctgctcatag ctgtccctgt cagcccagag 60
aagctgactg ggccagataa ggctccagtc acctgctgct ttcatgtact aaagctgaag 120
atcccccttc gggtgctgaa aagctacgag agaatcaaca atatccagtg ccccatggaa 180
gctgtggttt tccagaccaa gcagggtatg tctctctgtg tagaccccac acagaagtgg 240
gtcagtgagt acatggagat ccttgaccag aagtctcaaa ttctgcagcc ttga 294
<210> 77
<211> 97
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL8
<400> 77
Met Lys Ile Tyr Ala Val Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ile Ala Val Pro
1               5                   10                  15
Val Ser Pro Glu Lys Leu Thr Gly Pro Asp Lys Ala Pro Val Thr Cys
            20                  25                  30
Cys Phe His Val Leu Lys Leu Lys Ile Pro Leu Arg Val Leu Lys Ser
        35                  40                  45
Tyr Glu Arg Ile Asn Asn Ile Gln Cys Pro Met Glu Ala Val Val Phe
    50                  55                  60
Gln Thr Lys Gln Gly Met Ser Leu Cys Val Asp Pro Thr Gln Lys Trp
65                  70                  75                  80
Val Ser Glu Tyr Met Glu Ile Leu Asp Gln Lys Ser Gln Ile Leu Gln
                85                  90                  95
Pro
<210> 78
<211> 300
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL8
<400> 78
atgaaggttt ctgcagcgct tctgtgcctg ctgctcatgg cagccacttt cagccctcag 60
ggacttgctc agccagattc agtttccatt ccaatcacct gctgctttaa cgtgatcaat 120
aggaaaattc ctatccagag gctggagagc tacacaagaa tcaccaacat ccaatgtccc 180
aaggaagctg tgatcttcaa gaccaaacgg ggcaaggagg tctgtgctga ccccaaggag 240
agatgggtca gggattccat gaagcatctg gaccaaatat ttcaaaatct gaagccatga 300
<210> 79
<211> 99
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL8
<400> 79
Met Lys Val Ser Ala Ala Leu Leu Cys Leu Leu Leu Met Ala Ala Thr
1               5                   10                  15
Phe Ser Pro Gln Gly Leu Ala Gln Pro Asp Ser Val Ser Ile Pro Ile
            20                  25                  30
Thr Cys Cys Phe Asn Val Ile Asn Arg Lys Ile Pro Ile Gln Arg Leu
        35                  40                  45
Glu Ser Tyr Thr Arg Ile Thr Asn Ile Gln Cys Pro Lys Glu Ala Val
    50                  55                  60
Ile Phe Lys Thr Lys Arg Gly Lys Glu Val Cys Ala Asp Pro Lys Glu
65                  70                  75                  80
Arg Trp Val Arg Asp Ser Met Lys His Leu Asp Gln Ile Phe Gln Asn
                85                  90                  95
Leu Lys Pro
<210> 80
<211> 315
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL12
<400> 80
atgaagattt ccacacttct atgcctcctg ctcatagcta ccaccatcag tcctcaggta 60
ttggctggac cagatgcggt gagcacccca gtcacgtgct gttataatgt tgttaagcag 120
aagattcacg tccggaagct gaagagctac aggagaatca caagcagcca gtgtccccgg 180
gaagctgtga tcttcaggac catactggat aaggagatct gtgctgaccc caaggagaag 240
tgggttaaga attccataaa ccacttggat aagacgtctc aaaccttcat ccttgaacct 300
tcatgtctag gctga 315
<210> 81
<211> 104
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL12
<400> 81
Met Lys Ile Ser Thr Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ile Ala Thr Thr Ile
1               5                   10                  15
Ser Pro Gln Val Leu Ala Gly Pro Asp Ala Val Ser Thr Pro Val Thr
            20                  25                  30
Cys Cys Tyr Asn Val Val Lys Gln Lys Ile His Val Arg Lys Leu Lys
        35                  40                  45
Ser Tyr Arg Arg Ile Thr Ser Ser Gln Cys Pro Arg Glu Ala Val Ile
    50                  55                  60
Phe Arg Thr Ile Leu Asp Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Glu Lys
65                  70                  75                  80
Trp Val Lys Asn Ser Ile Asn His Leu Asp Lys Thr Ser Gln Thr Phe
                85                  90                  95
Ile Leu Glu Pro Ser Cys Leu Gly
            100
<210> 82
<211> 297
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL13
<400> 82
atgaaagtct ctgcagtgct tctgtgcctg ctgctcatga cagcagcttt caacccccag 60
ggacttgctc agccagatgc actcaacgtc ccatctactt gctgcttcac atttagcagt 120
aagaagatct ccttgcagag gctgaagagc tatgtgatca ccaccagcag gtgtccccag 180
aaggctgtca tcttcagaac caaactgggc aaggagatct gtgctgaccc aaaggagaag 240
tgggtccaga attatatgaa acacctgggc cggaaagctc acaccctgaa gacttga 297
<210> 83
<211> 98
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL13
<400> 83
Met Lys Val Ser Ala Val Leu Leu Cys Leu Leu Leu Met Thr Ala Ala
1               5                   10                  15
Phe Asn Pro Gln Gly Leu Ala Gln Pro Asp Ala Leu Asn Val Pro Ser
            20                  25                  30
Thr Cys Cys Phe Thr Phe Ser Ser Lys Lys Ile Ser Leu Gln Arg Leu
        35                  40                  45
Lys Ser Tyr Val Ile Thr Thr Ser Arg Cys Pro Gln Lys Ala Val Ile
    50                  55                  60
Phe Arg Thr Lys Leu Gly Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Glu Lys
65                  70                  75                  80
Trp Val Gln Asn Tyr Met Lys His Leu Gly Arg Lys Ala His Thr Leu
                85                  90                  95
Lys Thr
<210> 84
<211> 327
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL19
<400> 84
atggcccccc gtgtgacccc actcctggcc ttcagcctgc tggttctctg gaccttccca 60
gccccaactc tggggggtgc taatgatgcg gaagactgct gcctgtctgt gacccagcgc 120
cccatccctg ggaacatcgt gaaagccttc cgctaccttc ttaatgaaga tggctgcagg 180
gtgcctgctg ttgtgttcac cacactaagg ggctatcagc tctgtgcacc tcctgaccag 240
ccctgggtgg atcgcatcat ccgaagactg aagaagtctt ctgccaagaa caaaggcaac 300
agcaccagaa ggagccctgt gtcttga 327
<210> 85
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL19
<400> 85
Met Ala Pro Arg Val Thr Pro Leu Leu Ala Phe Ser Leu Leu Val Leu
1               5                   10                  15
Trp Thr Phe Pro Ala Pro Thr Leu Gly Gly Ala Asn Asp Ala Glu Asp
            20                  25                  30
Cys Cys Leu Ser Val Thr Gln Arg Pro Ile Pro Gly Asn Ile Val Lys
        35                  40                  45
Ala Phe Arg Tyr Leu Leu Asn Glu Asp Gly Cys Arg Val Pro Ala Val
    50                  55                  60
Val Phe Thr Thr Leu Arg Gly Tyr Gln Leu Cys Ala Pro Pro Asp Gln
65                  70                  75                  80
Pro Trp Val Asp Arg Ile Ile Arg Arg Leu Lys Lys Ser Ser Ala Lys
                85                  90                  95
Asn Lys Gly Asn Ser Thr Arg Arg Ser Pro Val Ser
            100                 105
<210> 86
<211> 297
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL19
<400> 86
atggccctgc tactggccct cagcctgctg gttctctgga cttccccagc cccaactctg 60
agtggcacca atgatgctga agactgctgc ctgtctgtga cccagaaacc catccctggg 120
tacatcgtga ggaacttcca ctaccttctc atcaaggatg gctgcagggt gcctgctgta 180
gtgttcacca cactgagggg ccgccagctc tgtgcacccc cagaccagcc ctgggtagaa 240
cgcatcatcc agagactgca gaggacctca gccaagatga agcgccgcag cagttaa 297
<210> 87
<211> 98
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL19
<400> 87
Met Ala Leu Leu Leu Ala Leu Ser Leu Leu Val Leu Trp Thr Ser Pro
1               5                   10                  15
Ala Pro Thr Leu Ser Gly Thr Asn Asp Ala Glu Asp Cys Cys Leu Ser
            20                  25                  30
Val Thr Gln Lys Pro Ile Pro Gly Tyr Ile Val Arg Asn Phe His Tyr
        35                  40                  45
Leu Leu Ile Lys Asp Gly Cys Arg Val Pro Ala Val Val Phe Thr Thr
    50                  55                  60
Leu Arg Gly Arg Gln Leu Cys Ala Pro Pro Asp Gln Pro Trp Val Glu
65                  70                  75                  80
Arg Ile Ile Gln Arg Leu Gln Arg Thr Ser Ala Lys Met Lys Arg Arg
                85                  90                  95
Ser Ser
<210> 88
<211> 402
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL21
<400> 88
atggctcaga tgatgactct gagcctcctt agcctggtcc tggctctctg catcccctgg 60
acccaaggca gtgatggagg gggtcaggac tgctgcctta agtacagcca gaagaaaatt 120
ccctacagta ttgtccgagg ctataggaag caagaaccaa gtttaggctg tcccatcccg 180
gcaatcctgt tctcaccccg gaagcactct aagcctgagc tatgtgcaaa ccctgaggaa 240
ggctgggtgc agaacctgat gcgccgcctg gaccagcctc cagccccagg gaaacaaagc 300
cccggctgca ggaagaaccg gggaacctct aagtctggaa agaaaggaaa gggctccaag 360
ggctgcaaga gaactgaaca gacacagccc tcaagaggat ag 402
<210> 89
<211> 133
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> mCCL21
<400> 89
Met Ala Gln Met Met Thr Leu Ser Leu Leu Ser Leu Val Leu Ala Leu
1               5                   10                  15
Cys Ile Pro Trp Thr Gln Gly Ser Asp Gly Gly Gly Gln Asp Cys Cys
            20                  25                  30
Leu Lys Tyr Ser Gln Lys Lys Ile Pro Tyr Ser Ile Val Arg Gly Tyr
        35                  40                  45
Arg Lys Gln Glu Pro Ser Leu Gly Cys Pro Ile Pro Ala Ile Leu Phe
    50                  55                  60
Ser Pro Arg Lys His Ser Lys Pro Glu Leu Cys Ala Asn Pro Glu Glu
65                  70                  75                  80
Gly Trp Val Gln Asn Leu Met Arg Arg Leu Asp Gln Pro Pro Ala Pro
                85                  90                  95
Gly Lys Gln Ser Pro Gly Cys Arg Lys Asn Arg Gly Thr Ser Lys Ser
            100                 105                 110
Gly Lys Lys Gly Lys Gly Ser Lys Gly Cys Lys Arg Thr Glu Gln Thr
        115                 120                 125
Gln Pro Ser Arg Gly
    130
<210> 90
<211> 405
<212> DNA
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL21
<400> 90
atggctcagt cactggctct gagcctcctt atcctggttc tggcctttgg catccccagg 60
acccaaggca gtgatggagg ggctcaggac tgttgcctca agtacagcca aaggaagatt 120
cccgccaagg ttgtccgcag ctaccggaag caggaaccaa gcttaggctg ctccatccca 180
gctatcctgt tcttgccccg caagcgctct caggcagagc tatgtgcaga cccaaaggag 240
ctctgggtgc agcagctgat gcagcatctg gacaagacac catccccaca gaaaccagcc 300
cagggctgca ggaaggacag gggggcctcc aagactggca agaaaggaaa gggctccaaa 360
ggctgcaaga ggactgagcg gtcacagacc cctaaagggc catag 405
<210> 91
<211> 134
<212> PRT
<213> Artificial sequence(Artificial Sequence)
<220>
<223> hCCL21
<400> 91
Met Ala Gln Ser Leu Ala Leu Ser Leu Leu Ile Leu Val Leu Ala Phe
1               5                   10                  15
Gly Ile Pro Arg Thr Gln Gly Ser Asp Gly Gly Ala Gln Asp Cys Cys
            20                  25                  30
Leu Lys Tyr Ser Gln Arg Lys Ile Pro Ala Lys Val Val Arg Ser Tyr
        35                  40                  45
Arg Lys Gln Glu Pro Ser Leu Gly Cys Ser Ile Pro Ala Ile Leu Phe
    50                  55                  60
Leu Pro Arg Lys Arg Ser Gln Ala Glu Leu Cys Ala Asp Pro Lys Glu
65                  70                  75                  80
Leu Trp Val Gln Gln Leu Met Gln His Leu Asp Lys Thr Pro Ser Pro
                85                  90                  95
Gln Lys Pro Ala Gln Gly Cys Arg Lys Asp Arg Gly Ala Ser Lys Thr
            100                 105                 110
Gly Lys Lys Gly Lys Gly Ser Lys Gly Cys Lys Arg Thr Glu Arg Ser
        115                 120                 125
Gln Thr Pro Lys Gly Pro
    130

Claims (25)

1.一种工程化免疫细胞，其表达特异性识别抗原的细胞表面分子和外源性TSLP。
2.权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中所述工程化免疫细胞进一步表达一种或多种其他外源性细胞因子，所述其他外源性细胞因子选自IL7、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21、XCL1、XCL2、CX3CL1、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12。
3.权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中所述TSLP与SEQ ID NO：21、23或25所示的氨基酸序列具有至少90％同一性。
4.权利要求2所述的工程化免疫细胞，其中所述IL7与SEQ ID NO：27或29所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL2与SEQ ID NO：57或59所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL3与SEQ ID NO：61或63所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL4与SEQ ID NO：65或67所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL5与SEQ ID NO：69或71所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL7与SEQ ID NO：73或75所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL8与SEQ ID NO：77或79所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL12与SEQ ID NO：81所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL13与SEQ ID NO：83所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL19与SEQ ID NO：85或87所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CCL21与SEQ ID NO：89或91所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；XCL1与SEQ ID NO：47或49所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；XCL2与SEQ ID NO：51所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CX3CL1与SEQ ID NO：53或55所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CXCL9与SEQ ID NO：31或33所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CXCL10与SEQ ID NO：35或37所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CXCL11与SEQ ID NO：39或41所示的氨基酸序列具有至少90％同一性；CXCL12与SEQ ID NO：43或45所示的氨基酸序列具有至少90％同一性。
5.权利要求1-4任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述特异性识别抗原的细胞表面分子包含抗原结合区，并且是嵌合抗原受体、T细胞受体、T细胞融合蛋白或T细胞抗原耦合器。
6.权利要求5所述的工程化免疫细胞，其中所述嵌合抗原受体包含抗原结合区、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包含共刺激结构域和/或初级信号传导结构域。
7.权利要求5所述的工程化免疫细胞，其中所述抗原结合区选自IgG、Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fd′、Fv、scFv、sdFv、线性抗体、单结构域抗体、纳米抗体、双体、anticalin和DARPIN抗原。
8.权利要求5所述的工程化免疫细胞，其中所述抗原抗原结合区与选自以下的一个或多个靶标结合：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD46、CD47、CD52、CD54、CD56、CD70、CD73、CD80、CD97、CD123、CD126、CD138、CD171、CD 179a、DR4、DR5、TAC、TEM1/CD248、VEGF、GUCY2C、EGP40、EGP-2、EGP-4、CD133、IFNAR1、DLL3、kappa轻链、TIM3、TSHR、CD19、BAFF-R、CLL-1、EGFRvIII、tEGFR、GD2、GD3、BCMA、Tn抗原、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、IL-llRa、IL-22Ra、IL-2、间皮素、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、PDGFR-β、SSEA-4、AFP、Folate受体α、ErbB2(Her2/neu)、ErbB3、ErbB4、MUC1、MUC16、EGFR、CS1、NCAM、Claudin18.2、c-Met、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gpl00、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、Folate受体β、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、豆荚蛋白、HPV E6、E7、ETV6-AML、***蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、PSA、存活蛋白和端粒酶、PCTA-l/Galectin 8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、TMPRSS2 ETS融合基因、NA17、PAX3、雄激素受体、孕酮受体、Cyclin Bl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES 1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、muthsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、APRIL、NKG2D、NKG2D配体，和/或病原体特异性抗原、生物素化分子、由HIV、HCV、HBV和/或其他病原体表达的分子；和/或新表位或新抗原。
9.权利要求6所述的工程化免疫细胞，其中所述跨膜结构域选自以下蛋白质的跨膜结构域：TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
10.权利要求6-9任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述初级信号传导结构域选自以下蛋白的胞内区：FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。
11.权利要求6所述的工程化免疫细胞，其中所述共刺激结构域包含一个或多个选自以下蛋白质的胞内区：CD94、LTB、TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、CARD11、CD2、CD7、CD8、CD18、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54、CD83、CD134、CD137、CD270、CD272、CD276、CD278、CD357、DAP10、DAP12、LAT、NKG2C、SLP76、PD-1、LIGHT、TRIM或ZAP70。
12.权利要求1-11任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞选自T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞、NK细胞、或NKT细胞。
13.权利要求12所述的工程化免疫细胞，其中所述T细胞是CD4+CD8+T细胞、CD4+辅助T细胞、CD8+T细胞、CD4-CD8-T细胞、肿瘤浸润细胞、记忆T细胞、幼稚T细胞、γδ-T细胞或αβ-T细胞。
14.权利要求1-13任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述TSLP和/或外源性细胞因子的表达是条件型表达或组成型表达。
15.权利要求1-14任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述TSLP和/或外源性细胞因子与定位结构域可操作连接。
16.一种核酸分子，其包含编码特异性识别抗原的细胞表面分子的核酸序列和编码外源性TSLP的核酸序列。
17.权利要求16所述的核酸分子，其中所述核酸分子进一步包含编码外源性细胞因子的核酸序列。
18.权利要求16所述的核酸分子，其中所述特异性识别抗原的细胞表面分子是嵌合抗原受体、T细胞受体、T细胞融合蛋白或T细胞抗原耦合器。
19.一种载体，其包含权利要求16-18任一项所述的核酸分子。
20.权利要求19所述的载体，其中所述载体选自质粒、逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、牛痘病毒、劳氏肉瘤病毒(RSV)、多瘤病毒和腺相关病毒(AAV)。
21.一种药物组合物，其包含权利要求1-15任一项所述的工程化免疫细胞、权利要求16-18任一项所述的核酸分子或权利要求19-20任一项所述的载体，和一种或多种药学上可接受的赋型剂。
22.权利要求1-15任一项所述的工程化免疫细胞、权利要求16-18任一项所述的核酸分子、权利要求19-20任一项所述的载体或权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗患有癌症、感染或自身免疫性疾病的受试者的药物中的用途。
23.权利要求22所述的用途，其中所述癌症是血液肿瘤或实体瘤。
24.一种组合疗法，其包含表达特异性识别抗原的细胞表面分子的工程化免疫细胞和外源性TSLP。
25.一种组合疗法，其包含：(1)表达外源性TSLP的工程化免疫细胞和外源性细胞因子；(2)表达外源性细胞因子的工程化免疫细胞和外源性TSLP；或(3)工程化免疫细胞以及外源性的细胞因子和TSLP；其中所述工程化免疫细胞表达特异性识别抗原的细胞表面分子，所述细胞因子选自IL7、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCL7、CCL8、CCL12、CCL13、CCL19、CCL21、XCL1、XCL2、CX3CL1、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12。
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