CN116019738B - 一种用于护肤品的视黄醇包裹体及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种视黄醇包裹体，该视黄醇包裹体包括如下组分：植物油、蜡类、视黄醇、磷脂、胆固醇、表面活性剂、有机溶剂、去离子水。本发明的制备方法为先制备视黄醇O/W型乳液，再通过高压均质对视黄醇进行包裹。本发明通过在脂质体壳层添加神经酰胺，使脂质体壳体更加稳定，增强了磷脂‑胆固醇体系对视黄醇的包裹力，从而制得了包裹效果好，粒径小，稳定性佳的视黄醇包裹体，其刺激性相对未包裹的视黄醇明显下降；通过神经酰胺和视黄醇的复配，能够产生协同效应，提高皮肤角质层含水量，减少皱纹，减轻皮肤粗糙度，提升皮肤弹性，提高了视黄醇的抗衰效果；制备方法无需高温，能够减少视黄醇的降解，并提高安全系数；操作简单，有利于工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及日化领域，特别涉及一种视黄醇包裹体及其制备方法和其在护肤品中的应用。
背景技术
随着生活水平的提高，人们对“美”的追求也逐步提升，针对面部去皱抗衰的产品层出不穷，视黄酸(维A酸)及其衍生物便是其中重要的一类。
视黄酸及其衍生物包括视黄酸、视黄酯及视黄醇，这类物质能够通过加强皮肤代谢、促进角质层脱落而改善皮肤粗糙，使皮肤光滑，还可以除皱抗衰。但视黄酸直接使用会刺激皮肤，因此在护肤品中多以视黄醇、视黄酯的形式出现，皮肤吸收视黄醇、视黄酯后，能够缓慢降解为视黄酸，达到护肤的效果。但是，视黄醇、视黄酯对皮肤仍有一定的刺激性，且视黄酸及其衍生物容易因光照、氧化而变质，因此需要加以保护。用于护肤时，通过脂质体包裹效果最佳。
中国专利CN108451787B公开了一种包埋维生素A醇的纳米脂质载体及其制备方法，其采用高压均质法，以夏威夷豆油-棕榈蜡作为油相，磷脂作为壁材对维生素A醇进行包埋，但其制备过程温度可达90℃，能耗高，针对操作人员有烫伤风险，且维生素A易在高温下被氧化破坏。
因此，开发一种简便、安全、包埋效果好的视黄醇包裹体是本领域亟待解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种视黄醇包裹体及其制备方法。
本发明技术方案如下：
一种视黄醇包裹体，包括如下重量份的组分：植物油3～8份、蜡类3～8份、视黄醇1～4份、磷脂10份、胆固醇1～3份、神经酰胺1～3份、表面活性剂3～8份、有机溶剂15份、去离子水50～80份。
进一步的，上述的视黄醇包裹体，包括如下重量份的组分：植物油5份、蜡类5份、视黄醇3份、磷脂10份、胆固醇2份、神经酰胺2份、表面活性剂5份、有机溶剂15份、去离子水70份。
进一步的，上述的视黄醇包裹体，其中，植物油选自玉米油、大豆油、乳木果油、霍霍巴油、杏仁油、山茶油、橄榄油中的一种或多种；
蜡类选自小烛树蜡、木蜡、蜂蜡、鲸蜡硬脂醇、单硬脂酸甘油酯中的一种或多种；
磷脂选自卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种；
神经酰胺选自神经酰胺AP、神经酰胺AP、神经酰胺EOP中的一种或多种；
表面活性剂选自Tween-60、Tween-80、SSE-20、Solulan 16中的一种或多种；
有机溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油中的一种或多种。
进一步的，上述的视黄醇包裹体，其中，植物油为乳木果油；
蜡类为小烛树蜡；
磷脂为二棕榈酰磷脂酰胆碱；
神经酰胺为神经酰胺AP；
表面活性剂为Solulan 16；
有机溶剂为丙二醇。
本发明还提供一种前述的视黄醇包裹体的制备方法，包括如下步骤：
S1.配置A相：将植物油、蜡类、视黄醇投入反应釜，加热搅拌至各组分混合均匀；
S2.配置B相：将磷脂、胆固醇、神经酰胺、表面活性剂、有机溶剂投入反应釜，加热搅拌至各组分混合均匀；
S3.配置混合相：将S1制得的A相和S2制得的B相同时缓慢滴加入去离子水中，搅拌形成混合相；
S4.前乳化：将S3制得的混合相低温搅拌，形成前乳液；
S5.高压均质：将S4制得的前乳液加入高压均质机，高压均质后制得所述视黄醇包裹体。
进一步的，前述的制备方法，其中，步骤S1中，搅拌温度为50℃，搅拌转速500rpm/分钟，搅拌时长5分钟。
进一步的，前述的制备方法，其中，步骤S2中，搅拌温度50℃，搅拌转速500rpm/分钟，搅拌时长5分钟。
进一步的，前述的制备方法，其中，步骤S3中，搅拌温度50℃，搅拌转速3000rpm/分钟，搅拌时长10分钟。
进一步的，前述的制备方法，其中，步骤S4中，搅拌温度0-10℃，搅拌转速3000rpm/分钟，搅拌时长30分钟。
进一步的，前述的制备方法，其中，步骤S5中，高压均质机压力700bar，循环5次。
本发明还提供一种前述的视黄醇包裹体在护肤品中的应用。
本发明的有益效果如下：
(1)本发明通过在脂质体壳层添加神经酰胺，尤其是与磷脂-胆固醇成一定比例的神经酰胺AP，使磷脂-胆固醇体系的脂质体壳体更加稳定，增强了磷脂-胆固醇体系对视黄醇的包裹力，从而制得了包裹效果好，粒径小，稳定性佳的视黄醇包裹体，经动物实验证明其刺激性相对未包裹的视黄醇明显下降；
(2)通过神经酰胺，尤其是一定比例的神经酰胺AP和视黄醇的复配，能够产生协同效应，提高皮肤角质层含水量，减少皱纹，减轻皮肤粗糙度，提升皮肤弹性，提高了视黄醇的抗衰效果；
(3)本发明的脂质体制备方法无需高温，能够减少视黄醇的降解，并提高安全系数；操作简单，有利于工业生产。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、材料等，如无特殊说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold SpringHarbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1植物油种类对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取植物油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：
(1)包封率：通过紫外分光光度计检测各组样品紫外吸光度，与标准品对照，计算未包封的视黄醇浓度后，计算包封率。包封率计算公式：包封率(％)＝(C总-C游离)/C总×100％。
(2)多分散性指数(PDI)：通过动态光散射法检测各组样品多分散性指数。
(3)粒径和Zeta电位：通过纳米粒度及Zeta电位测定粒径和Zeta电位。
(4)稳定性：取制得样品于阴凉处放置40天，每10天测定一次包封率。分组配方如下表1。
表1不同实验组视黄醇包裹体配方
性能测试结果如下表2。
表2不同实验组脂质体性能测试结果
包封率即脂质外壳对视黄醇的包裹程度。如上表所示，在刚制得的脂质体中，采用玉米油、大豆油和橄榄油制备的脂质体包封率相对较低，而采用乳木果油、霍霍巴油、杏仁油和山茶油制得的脂质体包封率均高于96％。经过放置，各组样品包封率均有所下降，采用乳木果油和山茶油制得的脂质体包封率高于75％，稳定性相较其他组好。
多分散性指数(PDI)反应体系粒子粒径的集中程度，其值越小，体系粒子粒径越集中，体系越不容易发生凝结或凝聚。如上表所示，采用乳木果油制得的脂质体PDI小于0.1，其余各组均大于0.1，即采用乳木果油制得的脂质体粒子粒径相对其他植物油制得的脂质体粒子更集中，体系更加稳定。
Zeta电位也与脂质体体系的稳定性有关，Zeta电位的绝对值越高，体系越稳定。如上表所示，各组样品中，采用玉米油、大豆油制得的脂质体Zeta电位绝对值小于40，而其余各组均大于40，具有较好的稳定性。在Zeta电位大于40的各组样品中，乳木果油、山茶油制备的脂质体稳定性较佳。
综合上述结果，采用乳木果油制备视黄醇脂质体能够得到最佳效果。
实施例2蜡类材料种类对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、蜡类5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表3。
表3不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 蜡类材料 |
| 2.1 | 单硬脂酸甘油酯 |
| 2.2 | 木蜡 |
| 2.3 | 蜂蜡 |
| 2.4 | 鲸蜡硬脂醇 |
| 2.5 | 小烛树蜡 |
性能测试结果如下表4。
表4不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，在刚制得的脂质体中，采用单硬脂酸甘油酯和鲸蜡硬脂醇制备的脂质体包封率相对较低，而采用木蜡、蜂蜡和小烛树蜡制得的脂质体包封率均高于96％。经过放置，各组样品包封率均有所下降，采用小烛树蜡制得的脂质体包封率高于80％，稳定性相较其他组好。
如上表所示，采用小烛树蜡制得的脂质体PDI小于0.1，其余各组均大于0.1，即采用小烛树蜡制得的脂质体粒子粒径相对其他蜡类材料制得的脂质体粒子更集中，体系更加稳定。
如上表所示，各组样品Zeta电位绝对值均大于40，具有较好的稳定性。单小烛树蜡制得的脂质体Zeta电位绝对值大于45，稳定性更佳。
综合上述结果，采用小烛树蜡制备视黄醇脂质体能够得到最佳效果。
实施例3植物油/蜡类材料/视黄醇比例对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油、小烛树蜡、视黄醇投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表5。
表5不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 植物油(重量份) | 蜡类(重量份) | 视黄醇(重量份) |
| 3.1 | 10 | 0 | 3 |
| 3.2 | 0 | 10 | 3 |
| 3.3 | 3 | 8 | 3 |
| 3.4 | 8 | 3 | 3 |
| 3.5 | 5 | 5 | 3 |
| 3.6 | 5 | 5 | 1 |
| 3.7 | 5 | 5 | 4 |
| 3.8 | 5 | 5 | 6 |
性能测试结果如下表6。
表6不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，在各组样品中，仅采用植物油和仅采用蜡质材料溶解视黄醇时，制得的脂质体包封率显著低于其他各组；当视黄醇多于4重量份后，脂质壁材不能完全包裹视黄醇，因此包封率也有所下降；当视黄醇少于3重量份时，包封效果不变，但此时不能完全利用油相和脂质壁材。当植物油/蜡类/视黄醇的重量比为5:5:3时，能够在取得最好包封效果时最大程度地利用油相和壁材。
如上表所示，仅采用植物油和仅采用蜡质材料溶解视黄醇时，制得的脂质体PDI显著高于其他各组；当视黄醇多于4重量份后，制得的脂质体由于体系中游离视黄醇的干扰，PDI同样显著升高。视黄醇在1～4重量份时，PDI在0.08～0.25的范围内，此时体系稳定性较好。
如上表所示，在各组样品中，仅采用植物油和仅采用蜡质材料溶解视黄醇时，制得的脂质体包封率Zeta电位绝对值小于30；当视黄醇多于4重量份后，制得的脂质体由于体系中游离视黄醇的干扰，Zeta电位绝对值同样小于30。视黄醇在1～4重量份时，Zeta电位绝对值在35～47的范围内，此时体系稳定性较好；当植物油/蜡类/视黄醇的重量比为5:5:3时，Zeta电位绝对值大于45，稳定性最佳。
综合上述结果，当植物油/蜡类/视黄醇的重量比为5:5:3时，制得的视黄醇脂质体性能最佳。
实施例4磷脂种类对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取磷脂10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表7。
表7不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 磷脂品种 |
| 4.1 | 卵磷脂 |
| 4.2 | 二棕榈酰磷脂酰胆碱 |
| 4.3 | 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺 |
| 4.4 | 二硬脂酰磷脂酰胆碱 |
性能测试结果如下表8。
表8不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，各组样品刚制得时的包封率相差不大，均高于95％，采用二棕榈酰磷脂酰胆碱制得的样品包封率最高，超过99％。经过放置，各组样品包封率均有所下降，采用二棕榈酰磷脂酰胆碱制得的脂质体包封率稳定性相较其他组好。
如上表所示，采用二棕榈酰磷脂酰胆碱制得的脂质体PDI小于0.1，其余各组均大于0.1，即采用二棕榈酰磷脂酰胆碱制得的脂质体粒子粒径相对其他磷脂制得的脂质体粒子更集中，体系更加稳定。
如上表所示，各组样品Zeta电位绝对值均大于40，具有较好的稳定性。二棕榈酰磷脂酰胆碱制得的脂质体Zeta电位绝对值大于45，稳定性更佳。
综合上述结果，采用二棕榈酰磷脂酰胆碱制备视黄醇脂质体能够得到最佳效果。
实施例5胆固醇对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表9。
表9不同实验组视黄醇包裹体配方
性能测试结果如下表10。
表10不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，在各组样品中，不添加胆固醇，仅使用磷脂作为脂质壁材时，制得的脂质体包封率显著低于其他各组；当胆固醇与磷脂的比例超过3:10时，包封率也有所下降。当胆固醇与磷脂的重量比为1:5时，能够取得最好包封效果。
如上表所示，在各组样品中，不添加胆固醇，仅使用磷脂作为脂质壁材时，制得的脂质体PDI显著高于其他各组；当胆固醇与脂质的比例超过3:10时，制得的脂质体PDI同样显著升高。胆固醇和磷脂的重量比在1～3:10时，PDI在0.09～0.22的范围内，此时体系稳定性较好。
如上表所示，在各组样品中，不添加胆固醇，仅使用磷脂作为脂质壁材时，制得的脂质体包封率Zeta电位绝对值小于30；当胆固醇与磷脂的比例超过3:10时，制得的脂质体Zeta电位绝对值同样小于30。胆固醇和磷脂的质量比在1～3:10时，Zeta电位绝对值大于40，此时体系稳定性较好；当胆固醇和磷脂的重量比为1:5时，Zeta电位绝对值大于45，稳定性最佳。
综合上述结果，当胆固醇和磷脂的重量比为1:5时，制得的视黄醇脂质体性能最佳。
实施例6神经酰胺种类对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺2重量份、Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表11。
表11不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 表面活性剂品种 |
| 6.1 | 神经酰胺AP |
| 6.2 | 神经酰胺AP |
| 6.3 | 神经酰胺EOP |
性能测试结果如下表12。
表12不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，各组样品刚制得时的包封率相差不大，均高于90％，采用神经酰胺AP制得的样品包封率最高，超过95％。经过放置，各组样品包封率均有所下降，采用神经酰胺AP制得的脂质体包封率稳定性相较其他组好。
如上表所示，采用神经酰胺AP制得的脂质体PDI小于0.1，其余各组均大于0.1，即采用神经酰胺AP制得的脂质体粒子粒径相对其他神经酰胺制得的脂质体粒子更集中，体系更加稳定。
如上表所示，各组样品Zeta电位绝对值均大于40，具有较好的稳定性。神经酰胺AP制得的脂质体Zeta电位绝对值大于45，稳定性更佳。
综合上述结果，采用神经酰胺AP制备视黄醇脂质体能够得到最佳效果。实施例7神经酰胺比例对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP、表面活性剂Solulan 16、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表13。
表13不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 神经酰胺AP(重量份) |
| 7.1 | 0 |
| 7.2 | 1 |
| 7.3 | 2 |
| 7.4 | 3 |
| 7.5 | 5 |
性能测试结果如下表14。
表14不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，在各组样品中，不添加神经酰胺时，制得的脂质体包封率显著低于其他各组；当神经酰胺超过3重量份时，包封率也有所下降。当神经酰胺用量为2重量份时，能够取得最好包封效果。
如上表所示，在各组样品中，不添加神经酰胺时，制得的脂质体PDI显著高于其他各组；当神经酰胺超过3重量份时，制得的脂质体PDI同样显著升高。神经酰胺用量在1～3重量份时，PDI在0.08～0.21的范围内，此时体系稳定性较好。
如上表所示，在各组样品中，不添加神经酰胺时，制得的脂质体包封率Zeta电位绝对值小于30；当神经酰胺超过3重量份时，制得的脂质体Zeta电位绝对值同样小于30。神经酰胺用量在1～3重量份时，Zeta电位绝对值大于40，此时体系稳定性较好；当神经酰胺用量为2重量份时，Zeta电位绝对值大于45，稳定性最佳。
综合上述结果，当神经酰胺用量为2重量份时，制得的视黄醇脂质体性能最佳。
实施例8表面活性剂种类对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表15。
表15不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 表面活性剂品种 |
| 8.1 | Tween-60 |
| 8.2 | Tween-80 |
| 8.3 | SSE-20 |
| 8.4 | Solulan 16 |
性能测试结果如下表16。
表16不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，各组样品刚制得时的包封率相差不大，均高于90％，采用Solulan 16制得的样品包封率最高，超过99％。经过放置，各组样品包封率均有所下降，采用Solulan16制得的脂质体包封率稳定性相较其他组好。
如上表所示，采用Solulan 16制得的脂质体PDI小于0.1，其余各组均大于0.1，即采用Solulan 16制得的脂质体粒子粒径相对其他表面活性剂制得的脂质体粒子更集中，体系更加稳定。
如上表所示，各组样品Zeta电位绝对值均大于40，具有较好的稳定性。Solulan 16制得的脂质体Zeta电位绝对值大于45，稳定性更佳。
综合上述结果，采用Solulan 16制备视黄醇脂质体能够得到最佳效果。实施例9表面活性剂比例对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表17。
表17不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 表面活性剂(重量份) |
| 9.1 | 1 |
| 9.2 | 3 |
| 9.3 | 5 |
| 9.4 | 8 |
| 9.5 | 10 |
性能测试结果如下表18。
表18不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，在各组样品中，仅添加1重量份表面活性剂时，制得的脂质体包封率显著低于其他各组；当表面活性剂超过8重量份时，包封率也有所下降。当表面活性剂用量为5重量份时，能够取得最好包封效果。
如上表所示，在各组样品中，仅添加1重量份表面活性剂时，制得的脂质体PDI显著高于其他各组；当表面活性剂超过8重量份时，制得的脂质体PDI同样显著升高。表面活性剂用量在3～8重量份时，PDI在0.09～0.22的范围内，此时体系稳定性较好。
如上表所示，在各组样品中，仅添加1重量份表面活性剂时，制得的脂质体包封率Zeta电位绝对值小于30；当表面活性剂超过8重量份时，制得的脂质体Zeta电位绝对值同样小于30。表面活性剂用量在3～8重量份时，Zeta电位绝对值大于40，此时体系稳定性较好；当表面活性剂用量为5重量份时，Zeta电位绝对值大于45，稳定性最佳。
综合上述结果，当表面活性剂用量为5重量份时，制得的视黄醇脂质体性能最佳。
实施例10有机溶剂种类对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、有机溶剂15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表19。
表19不同实验组视黄醇包裹体配方
| 组别 | 有机溶剂 |
| 10.1 | 乙醇 |
| 10.2 | 丙二醇 |
| 10.3 | 甘油 |
性能测试结果如下表20。
表20不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，各组样品刚制得时的包封率相差不大，均高于90％，采用丙二醇制得的样品包封率最高，超过99％。经过放置，各组样品包封率均有所下降，采用丙二醇制得的脂质体包封率稳定性相较其他组好。
如上表所示，采用丙二醇制得的脂质体PDI小于0.1，其余各组均大于0.1，即采用丙二醇制得的脂质体粒子粒径相对其他有机溶剂制得的脂质体粒子更集中，体系更加稳定。
如上表所示，各组样品Zeta电位绝对值均大于40，具有较好的稳定性。丙二醇制得的脂质体Zeta电位绝对值大于45，稳定性更佳。此外，丙二醇相对乙醇和甘油，刺激性更小，更耐冻，更适用于护肤产品的制备。
综合上述结果，采用丙二醇制备视黄醇脂质体能够得到最佳效果。
实施例11有机溶剂比例对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组配方如下表21。
表21不同实验组视黄醇包裹体配方
性能测试结果如下表22。
表22不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，在各组样品中，当有机溶剂与水的质量比为1:2时，制得的脂质体包封率显著低于其他各组；当有机溶剂与水的质量比为3:20时，包封率也有所下降。当有机溶剂与水的质量比为3:14时，能够取得最好包封效果。
如上表所示，在各组样品中，当有机溶剂与水的质量比为1:2时，制得的脂质体PDI显著高于其他各组；当有机溶剂与水的质量比为3:20时，制得的脂质体PDI同样显著升高。有机溶剂与水的质量比在3:10～16时，PDI在0.08～0.22的范围内，此时体系稳定性较好。
如上表所示，在各组样品中，当有机溶剂与水的质量比为1:2时，制得的脂质体包封率Zeta电位绝对值小于30；当有机溶剂与水的质量比为3:20时，制得的脂质体Zeta电位绝对值同样小于30。有机溶剂与水的质量比在3:10～16时，Zeta电位绝对值大于40，此时体系稳定性较好；当有机溶剂与水的质量比为3:14时，Zeta电位绝对值大于45，稳定性最佳。
综合上述结果，当有机溶剂与水的质量比为3:14时，制得的视黄醇脂质体性能最佳。
实施例12乳液制备方法对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置油相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置水相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份、去离子水70重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：将制得的油相缓慢滴入水相，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1，将本法制得的样品与实施例1.3制得的样品进行对比。
表23样品分组
性能测试结果如下表24。
表24不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，采用“将壁材、有机溶剂直接与水混溶，而后将油相滴入水相”这一方法制得的脂质体，包封率和Zeta电位绝对值显著低于“分别用油相溶解视黄醇、有机溶剂溶解壁材，而后同时缓慢滴加入水中”所制得的脂质体，而PDI、粒径显著高于“分别用油相溶解视黄醇、有机溶剂溶解壁材，而后同时缓慢滴加入水中”制得的脂质体。即“分别用油相溶解视黄醇、有机溶剂溶解壁材，而后同时缓慢滴加入水中”所制得的脂质体稳定性更好。
实施例13乳化温度对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，加热，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，加热，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，加热，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相调整温度，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，700bar下，循环5次，得到样品。
性能检测：同实施例1。
分组温度方案如下表25。
表25不同实验组视黄醇包裹体温度方案
性能测试结果如下表26。
表26不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，90℃下制得的脂质体，包封率和Zeta电位绝对值显著低于50-5℃下制得的脂质体，而PDI、粒径显著高于50-5℃下制得的脂质体，即高温下制备的视黄醇脂质体性能全面劣于低温下制备的视黄醇脂质体。这是由于视黄醇对温度敏感，在高温下易被分解。
实施例14高压均质条件对制备视黄醇包裹体的影响
实验操作：
(1)配置A相：称取乳木果油5重量份、小烛树蜡5重量份、视黄醇3重量份投入反应釜1，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(2)配置B相：称取二棕榈酰磷脂酰胆碱10重量份、胆固醇2重量份、神经酰胺AP 2重量份、表面活性剂Solulan 16 5重量份、丙二醇15重量份投入反应釜2，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
(3)配置混合相：称取去离子水70重量份，将制得的A相和B相同时缓慢滴入去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
(4)前乳化：将制得的混合相在5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟成前乳液；
(5)高压均质：将制得的前乳液加入高压均质机，高压均质，得到样品。性能检测：同实施例1。
分组高压均质方案如下表27。
表27不同实验组视黄醇包裹体高压均质方案
性能测试结果如下表28。
表28不同实验组脂质体性能测试结果
如上表所示，在各组样品中，当均质压力低于700bar时，制得的脂质体包封率显著低于其他各组；当循环次数少于5次时，包封率也有所下降。当均质压力为700bar，循环5次时，能够取得最好包封效果。
如上表所示，在各组样品中，当均质压力低于700bar时，制得的脂质体PDI显著高于其他各组；当循环次数少于5次时，制得的脂质体PDI同样显著升高。当均质压力为700bar，循环5次时，PDI小于0.1的范围内，此时体系稳定性较好。
如上表所示，在各组样品中，当均质压力低于700bar时，制得的脂质体包封率Zeta电位绝对值小于30；当循环次数少于5次时，制得的脂质体Zeta电位绝对值同样小于30。当均质压力为700bar，循环5次时，Zeta电位绝对值大于45，稳定性最佳。
在实际实验中，当压力高于700bar和/或循环次数大于5次，制得的视黄醇脂质体与700bar、循环5次下制得的视黄醇脂质体性能相近。
综合上述结果，当均质压力为700bar，循环5次时，制得的视黄醇脂质体性能最佳。
实施例15视黄醇脂质体的刺激性评估
实验原理：
按照OECD TG442(B)的标准方法进行，通过小鼠耳厚差和耳重两个指标评估受试物的刺激性。
实验动物：
SPF级Balb/c小鼠，雌性，8～12周龄，18～22g，随机分为三组，每组5只。饲养于SPF级动物房，温度22±2℃，相对湿度70±10％，12/12h黑白交替照明。实验动物分组如下表。
表29实验动物分组
实验操作：
实验动物适应一周后随机分组，称重并测量耳缘厚度(d1)。于实验第1、2、3d在各组小鼠双耳背部分别涂抹对应试样25μL，第6天测量耳厚并记录；小鼠安乐死后，用打孔器取下耳廓直径9mm的组织称重并记录。
用SPSS 17.0对实验结果进行分析，耳厚差和耳重两个指标中，只要有一个指标受试组与空白组相比差异具有统计学意义(p＜0.05)，则认为该受试物具有刺激性。
实验结果：如下表。
表30视黄醇脂质体刺激性实验结果
其中：a表示与空白组相比，p＜0.05；b表示与实验组相比，p＜0.05。
如上表所示，与空白组相比，实验组体重差、耳厚差、耳重均有所上升，但不具有统计学差异(p＞0.05)。与空白组相比，对照组体重差、耳厚差、耳重均显著上升(p＜0.05)，且对照组相对实验组，上述指标也显著上升(p＜0.05)。可见本法制备的视黄醇脂质体刺激性明显下降。
实施例14视黄醇脂质体的抗皱效果评估
实验原理：
按照2015版《化妆品安全技术规范》、《赫尔辛基宣言》筛选受试者，使用VISIA面部影响分析***分析受试者眼部皱纹分值和纹理分值；使用Visio Scan VC20plus分析受试者眼角纹理粗糙度；使用Corneometer CM825分析受试者左右眼尾部位角质层含水量；使用Cutometer MPA58分析受试者左右眼尾部位的皮肤弹性。
实验对象：
健康女性受试者30名，年龄30～50岁，随机分为三组。受试者遴选标准符合《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》纳入、排除标准。
受试者分组如下表。
表27受试者分组
*由于视黄醇具有刺激性，因此不设置使用未包封视黄醇的对照组。
**引文1：罗丹,陈家铃,吴雨桐,何益飞,鲁旺旺,张桃,王梦萍,刘卫.复合神经酰胺纳米载体对皮肤屏障的修复功效[J].香料香精化妆品,2022,(05):24-29.
实验操作：
从d1开始，受试者每天早晚各使用一次试样，取0.5mL试样，以指腹轻柔涂抹肌肤，轻轻按压眼部肌肤直至试样完全吸收，连续使用28d。
受试者在d1、d14、d28各随访一次，共3次。要求受试者每次随访为日间同一时间。每次测试前，测试者需用清水清洗面部，使用不含荧光剂的纸巾擦干面部水分，在恒温恒湿环境(21±1℃，50±10％RH)静坐30min后，又技术人员使用专业仪器进行皮肤指标的测定：
使用VISIA面部影像分析***拍摄受试者左侧面、正面、右侧面图像，记录眼部皱纹分值和纹理分值；
使用Visio Scan VC20plus测量眼角纹理粗糙度，测量3次取平均值；
使用Corneometer CM825测量受试者左右眼尾部位角质层含水量，记录角质层水分含量值，测量3次取平均值；
使用Cutometer MPA580测量受试者左右眼尾部位的皮肤弹性，记录皮肤总弹性R2值、回弹与拉伸的弹塑性总面积之比Q1值。
用SPSS 17.0对实验结果进行分析，p＜0.05视为具有显著性差异。
实验结果：如下表。
表28人体功效评价实验结果
其中：a表示与空白组相比，p＜0.05；b表示与对照组相比，p＜0.05。
皮肤纹理是皮肤表面微小的、呈多角形的皮丘皮沟，它使皮肤富有弹性并使皮脂腺、汗腺中的分泌物能沿其纹路扩展到整个皮肤表面，随年龄增加而逐渐加深。皱纹是衰老或过度暴露于阳光等外界因素作用下，后天形成的皮肤老化重要标志之一。皱纹和纹理度是反映肌肤年轻的重要指标，其数值的变化趋势能反映一款延缓衰老产品的实际功效和性能，皱纹分值和纹理分值越小，皱纹和纹理改善效果越好。如上表所示，与空白组相比，使用对照组样品(神经酰胺脂质体)对眼部皱纹和皮肤纹理没有明显的改善作用，而实验组的眼部皱纹和皮肤纹理分值均有所下降，其中实验组1具有显著性差异(p＜0.05)，且与对照组相比，实验组的眼部皱纹和皮肤纹理分值也有所下降，其中实验组1具有显著性差异(p＜0.05)，可见添加神经酰胺制得的视黄醇脂质体能够有效减少眼部肌肤细纹和皱纹，这种效果显著优于单独使用视黄醇脂质体和单独使用神经酰胺脂质体。
眼部皮肤粗糙度指标是评价延缓皮肤衰老产品功效的一个重要参数，测量值越小则皮肤越平滑。如上表所示，与空白组相比，使用对照组样品和实验组样品的眼部皮肤粗糙度有所下降，下降幅度实验组1＞对照组＞实验组2，其中实验组1具有显著性差异(p＜0.05)，且与对照组相比，实验,1的眼部皮肤粗糙度也有所下降，这种改变具有显著性差异(p＜0.05)，可见添加神经酰胺制得的视黄醇脂质体能够有效改善熟龄肌肤粗糙的情况，这种效果显著优于单独使用视黄醇脂质体和单独使用神经酰胺脂质体。
皮肤角质层水分含量可以间接反映皮肤衰老程度以及抗衰老化妆品的功效，测量值越大，表明角质层水分含量越高，皮肤屏障功能越强。如上表所示，与空白组相比，使用实验组2样品对角质层含水量没有明显改变，而对照组样品和实验组1的角质层含水量有所上升，其中实验组1具有显著性差异(p＜0.05)，且与对照组相比，实验组1的角质层含水量也显著上升(p＜0.05)，可见添加神经酰胺制得的视黄醇脂质体能够有效提升熟龄肌肤角质层含水量，提高皮肤屏障功能，这种效果显著优于单独使用视黄醇脂质体和单独使用神经酰胺脂质体。
随着年龄的增加，皮肤中可溶性胶原纤维减少，不溶性胶原纤维增加，皮肤的伸展度随之减少，弹性呈现下降趋势，导致皮肤松弛和皱纹的产生。如上表所示，与空白组相比，使用对照组样品对皮肤弹性没有明显的提升作用，而实验组的皮肤弹性有所上升，其中实验组1具有显著性差异(p＜0.05)，且与对照组相比，实验组的皮肤弹性也有所上升，其中实验组1具有显著性差异(p＜0.05)，可见添加神经酰胺制得的视黄醇脂质体能够有效提升皮肤弹性，这种效果显著优于单独使用视黄醇脂质体和单独使用神经酰胺脂质体。
尽管上面已经示出和描述了本申请的实施例，理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本申请的限制，本领域的普通技术人员在本申请的范围内对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (2)
1.一种用于护肤品的视黄醇包裹体，由如下重量份的组分组成：植物油5份、蜡类5份、视黄醇3份、磷脂10份、胆固醇2份、神经酰胺2份、表面活性剂5份、有机溶剂15份、去离子水70份；
所述植物油选自玉米油、大豆油、乳木果油、霍霍巴油、杏仁油、山茶油、橄榄油中的一种或多种；
所述蜡类选自小烛树蜡、木蜡、蜂蜡、鲸蜡硬脂醇、单硬脂酸甘油酯中的一种或多种；
所述磷脂选自卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰胆碱中的一种或多种；
所述神经酰胺选自神经酰胺AP、神经酰胺EOP中的一种或多种；
所述表面活性剂选自Tween-60、Tween-80、SSE-20、Solulan 16中的一种或多种；
所述有机溶剂选自乙醇、丙二醇、甘油中的一种或多种；
所述的视黄醇包裹体的制备方法，包括如下步骤：
S1.配置A相：将植物油、蜡类、视黄醇投入反应釜，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
S2.配置B相：将磷脂、胆固醇、神经酰胺、表面活性剂、有机溶剂投入反应釜，50℃，500rpm/分钟，搅拌5分钟至各组分混合均匀；
S3.配置混合相：将S1制得的A相和S2制得的B相同时缓慢滴加进去离子水中，50℃，3000rpm/分钟，搅拌10分钟形成混合相；
S4.前乳化：将S3制得的混合相5℃，3000rpm/分钟，搅拌30分钟，形成前乳液；
S5.高压均质：将S4制得的前乳液加入高压均质机，高压均质机压力700bar，循环5次后制得所述视黄醇包裹体。
2.根据权利要求1所述的视黄醇包裹体，其特征在于，所述植物油为乳木果油；
所述蜡类为小烛树蜡；
所述磷脂为二棕榈酰磷脂酰胆碱；
所述神经酰胺为神经酰胺AP；
所述表面活性剂为Solulan 16；
所述有机溶剂为丙二醇。
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| GR01 | Patent grant | ||
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