CN115998664B - 一种含番石榴发酵产物的组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含番石榴发酵产物的组合物及其应用，所述组合物以质量份数计包括番石榴发酵产物10‑30份、玫瑰花发酵产物1‑5份、山羊奶提取物1‑5份和忍冬花提取物1‑10份。本发明所涉及的组合物创造性地将番石榴发酵产物、玫瑰花发酵产物、山羊奶提取物和忍冬花提取物四种天然源活性组分按照特定的质量配比关系进行组合，四者相辅相成，具有潜在的协同配合作用，其在保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性等多功效上具有显著的协同促进作用。

Description

一种含番石榴发酵产物的组合物及其应用

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，涉及一种含番石榴发酵产物的组合物及其应用，具体涉及一种含番石榴发酵产物的组合物及其在制备化妆品中的应用。

背景技术

通过微生物发酵工艺制备天然产物提取物，可以在发酵过程中酶解植物细胞壁结构，更充分地释放天然产物的有效成分，提高其利用率。微生物在发酵过程中，亦会产生次生代谢产物，其中就包括多种生物酶，可以有效地把蛋白质、多糖等生物大分子分解为分子量较小的物质，以蛋白质为例，会被蛋白酶水解为具有与其功能性蛋白质相同序列的特异性小的不同分子量的生物活性肽，其特点是分子量低、结构简单且毒副作用低，故易于被人体吸收发挥更强的生物活性，但又具有更高的安全性。有研究表明，发酵后的提取液可以提高有效成分的物质含量，从而使各种生物活性得到显著提高。此外，微生物发酵还具有成本低、不易致敏等特点，是当今研究和开发的热点。

例如CN110420146A公开了一种具有抗衰老功效的葡萄藤发酵产物提取物及其制备方法。该葡萄藤发酵产物提取物是以葡萄藤干燥粉末为原料，与选取的特殊菌种的酿酒酵母菌属，经过一系列的发酵培养后，得到白黎芦醇低聚体和甲瓦龙酸含量较高的一种具有抗衰老功效的葡萄藤发酵产物提取物。高含量的白黎芦醇低聚体，是一种多酚类的抗氧化物质，具有优异的抗衰老功效；甲瓦龙酸是脱落酸的前体，高含量的甲瓦龙酸能得到高含量脱落酸，起到优异的抗衰老功效。

例如CN114617817A公开了一种植物发酵物及其制备得到的保湿面膜。包括以下步骤：将猕猴桃清洗表面污垢后去皮处理；将猕猴桃果肉打碎后加入去离子水进行搅拌，然后投放至植物发酵物发酵装置中，然后加入发酵剂得到发酵料；通过植物发酵物发酵装置对发酵料进行充分的发酵处理；发酵结束后，将猕猴桃发酵物取出进行过滤得到猕猴桃发酵液。该保湿面膜由以下份数重量的原料组成：猕猴桃发酵物0.6-2份、保湿剂4-20份、芦荟提取物0.1-0.8份、防腐剂0.2-0.4份、柠檬酸0.1-0.2份和去离子水35-80份。

番石榴，为桃金娘科番石榴属珍珠番石榴和草莓番石榴的成熟果实，是一种热带水果，番石榴味甘、涩、性平，具有止血、止泻、消炎、收敛、燥湿等功效。番石榴果实含有丰富的多糖类成分。临床用于治疗泄泻，久痢，脱肛，湿毒疥疮，创伤出血等症。现代药理研究表明番石榴具有降血糖、降血脂、抗氧化、防衰老、清肝、预防慢性病、润肠通便等作用。目前关于番石榴的生物发酵策略还比较少，且番石榴发酵产物大多应用于保健品领域，开发一种含有番石榴发酵产物的化妆品是非常有意义的。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种含番石榴发酵产物的组合物及其应用，具体提供一种含番石榴发酵产物的组合物及其在制备化妆品中的应用。该组合物兼具优异的保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性的功效。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种含番石榴发酵产物的组合物，所述组合物以质量份数计包括番石榴发酵产物10-30份、玫瑰花发酵产物1-5份、山羊奶提取物1-5份和忍冬花提取物1-10份。

所述番石榴发酵产物的质量份数可以选择为10份、12份、15份、18份、20份、22份、25份、28份、30份等。

所述玫瑰花发酵产物的质量份数可以选择为1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份等。

所述山羊奶提取物的质量份数可以选择为1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份等。

所述忍冬花提取物的质量份数可以选择为1份、1.5份、2份、2.5份、3份、3.5份、4份、4.5份、5份、6份、7份、8份、10份等。

上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

本发明所涉及的组合物创造性地将番石榴发酵产物、玫瑰花发酵产物、山羊奶提取物和忍冬花提取物四种天然源活性组分按照特定的质量配比关系进行组合，四者相辅相成，具有潜在的协同配合作用，其在保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性等多功效上具有显著的协同促进作用。

本发明所涉及的组合物中，与采用其他制备工艺制得的玫瑰花发酵产物相比，采用下述制备工艺制得的玫瑰花发酵产物与其他三种组分配合使用，具有更显著的保湿、抗氧化、抗皱、舒缓功效。

在本发明中，所述玫瑰花发酵产物更优选由包括如下步骤的制备方法制得：

(S1)将含有玫瑰花原料的培养基灭菌、冷却后，接种乳酸菌液进行发酵，得到发酵产物；

(S2)将发酵产物超声处理后与活性炭混合，过滤，灭菌处理，即得所述玫瑰花发酵产物；

所述含有玫瑰花原料的培养基以质量份数计包括玫瑰花原料1-20份、碳源2-8份、维生素0.5-1份、低聚果糖0.5-1份、纯化水50-85份；

所述玫瑰花原料包括玫瑰花或由玫瑰花干燥研磨后得到的玫瑰花粉。

所述玫瑰花原料的质量份数可以选择为1份、3份、5份、8份、10份、12份、15份、17份、18份、20份等。

所述碳源的质量份数可以选择为2份、4份、5份、6份、7份、8份等。

所述维生素的质量份数可以选择为0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份等。

所述低聚果糖的质量份数可以选择为0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份等。

所述纯化水的质量份数可以选择为50份、55份、60份、65份、70份、75份、80份、85份等。

上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述乳酸菌为植物乳杆菌、嗜热链球菌、青春双岐杆菌和长双岐杆菌的组合。

所述植物乳杆菌、嗜热链球菌、青春双岐杆菌与长双岐杆菌的活菌数之比为(2-6):(0.2-1):(2-4):(0.2-0.5)。

上述(2-6)中的具体点值可以选择2、3、4、5、6等；(0.2-1)中的具体点值可以选择0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、1等；(2-4)中的具体点值可以选择2、3、4等；(0.2-0.5)中的具体点值可以选择0.2、0.3、0.4、0.5等。

上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

本发明所涉及的玫瑰花发酵产物创造性地以植物乳杆菌、嗜热链球菌、青春双岐杆菌和长双岐杆菌四种乳酸菌同时对玫瑰花原料进行发酵处理，该制备工艺与其他方式的发酵工艺或其他玫瑰花提取工艺相比，其利用四种菌株的互补协同增效优势，不仅最大程度地保留了玫瑰花的功效成分及其活性，还提升了玫瑰花中营养成分的释放和小分子的转化。

优选地，所述发酵在温度28-35℃(例如28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃等)、自然pH下进行24-72h(例如24h、30h、36h、42h、60h、72h等)。

所述超声处理在60-75℃(例如60℃、62℃、65℃、68℃、70℃、72℃、75℃等)下进行5-15min(例如5min、8min、10min、12min、15min等)。

上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述碳源选自果糖、葡萄糖、海藻糖、乳糖或半乳糖中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述维生素选自核黄素、维生素B12、叶酸、生物素或维生素C中的任意一种或至少两种的组合。

本发明所涉及的组合物中，与采用其他制备工艺制得的番石榴发酵产物相比，采用下述制备工艺制得的番石榴发酵产物与其他三种组分配合使用，具有更显著的保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性功效。

在本发明中，所述番石榴发酵产物更优选由包括如下步骤的制备方法制得：

(M1)将含有番石榴原料的培养基灭菌、冷却后，接种酵母菌液进行一次发酵，得到一次发酵产物；

(M2)将一次发酵产物灭菌、冷却后，接种乳酸菌液进行二次发酵，得到二次发酵产物；

(M3)将二次发酵产物灭菌、冷却后，过滤，即得所述番石榴发酵产物；

本发明所涉及的番石榴发酵产物创造性地以番石榴原料为发酵底物，对其依次进行酵母菌发酵和乳酸菌发酵，该制备方法与单一菌株发酵工艺或其他番石榴提取工艺相比，其利用酵母菌和乳酸菌双菌株的互补协同增效优势，不仅最大程度地保留了番石榴的功效成分及其活性，还提升了番石榴中营养成分的释放和小分子的转化，得到更丰富的蛋白质、氨基酸、多糖、黄酮、多酚等物质，同时还与酵母菌和乳酸菌产生的次级代谢产物相互配合，使最终的发酵产物具有优异的保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性的功效。

所述含有番石榴原料的培养基以质量份数计包括番石榴原料5-15份、氮源1-4份、碳源1-5份、无机盐0.2-0.4份、纯化水65-85份；

所述番石榴原料包括番石榴果或由番石榴果干燥研磨后得到的番石榴果粉，还包括番石榴叶或由番石榴叶干燥研磨后得到的番石榴叶粉。

本发明所涉及的番石榴发酵产物所使用的番石榴原料优选同时使用番石榴果和番石榴叶，两者的配合使得组合物的功效更为全面。

所述番石榴原料的重量份数可以选择为5份、6份、7份、8份、9份、10份、12份、14份、15份等。

所述氮源的重量份数可以选择为1份、2份、3份、4份等。

所述碳源的重量份数可以选择为1份、2份、3份、4份、5份等。

所述无机盐的重量份数可以选择为0.2份、0.25份、0.3份、0.35份等。

所述纯化水的重量份数可以选择为65份、68份、70份、75份、80份、85份等。

上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

优选地，所述酵母菌包括酿酒酵母、拜耳接合酵母或酒香酵母中的任意一种或至少两种的组合；

所述乳酸菌包括植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸乳球菌、长双歧杆菌或鼠李糖乳杆菌中的任意一种或至少两种的组合。

进一步优选地，所述酵母菌为酿酒酵母。

所述乳酸菌为植物乳杆菌和乳酸乳球菌的组合，所述植物乳杆菌与乳酸乳球菌的活菌数之比为1:(2-4)，例如1:2、1:3、1:4等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

本发明所涉及的番石榴发酵产物的制备中，当酵母菌特定选择为酿酒酵母、乳酸菌特定选择为植物乳杆菌和乳酸乳球菌的组合时，两种菌株的互补协同增效优势更加明显，使最终的发酵产物配合其他三种组分具有更加优异的保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性的功效。

优选地，所述一次发酵在温度28-35℃(例如28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃等)、pH＝5.5-7.0(例如pH＝5.7、pH＝6.0、pH＝6.5、pH＝6.8等)下进行24-72h(例如24h、30h、36h、42h、60h、72h等)。

所述二次发酵在温度28-35℃(例如28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃等)、自然pH下进行24-72h(例如24h、30h、36h、42h、60h、72h等)。

步骤(M1)所述灭菌在115-121℃(例如115℃、117℃、118℃、119℃、120℃、121℃等)下进行20-30min(例如20min、22min、25min、30min等)。

步骤(M2)所述灭菌在80-105℃(例如80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、105℃等)下进行10-20min(例如10min、12min、15min、20min等)。

步骤(M3)所述灭菌在80-90℃(例如80℃、85℃、90℃等)下进行20-30min(例如20min、22min、25min、30min等)。

优选地，所述组合物以质量份数计还包括保湿性糖类组分1-10份，例如1份、2份、4份、5份、6份、8份、10份等。

所述保湿性糖类组分包括海藻糖、β-葡聚糖、银耳多糖、岩藻多糖、壳寡糖或透明质酸中的任意一种或至少两种的组合。

本发明所涉及的组合物中进一步添加有保湿性糖类组分，能够放大组合物的保湿和嫩肤功效。

所述组合物以质量份数计还包括多元醇5-20份，例如5份、8份、10份、12份、14份、15份、16份、18份、20份等。

所述多元醇包括丁二醇、1,2-己二醇、1,3-丙二醇、甘油或聚乙二醇中的任意一种或至少两种的组合。

本发明所涉及的组合物中进一步添加的多元醇组合，一方面作为溶剂使各功效组分更充分的混合，另一方面也起到一定的保湿作用，再一方面也起到一定的防腐作用。

第二方面，本发明提供第一方面所述的含番石榴发酵产物的组合物的制备方法，所述制备方法包括：将组合物中的各组分按配比混合均匀即可。

第三方面，本发明提供根据第一方面所述的含番石榴发酵产物的组合物在制备化妆品中的应用。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明所涉及的组合物创造性地将番石榴发酵产物、玫瑰花发酵产物、山羊奶提取物和忍冬花提取物四种天然源活性组分按照特定的质量配比关系进行组合，四者相辅相成，具有潜在的协同配合作用，其在保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性等多功效上具有显著的协同促进作用。

本发明所涉及的组合物中，与采用其他制备工艺制得的番石榴发酵产物或玫瑰花发酵产物相比，采用本申请涉及的制备工艺制得的番石榴发酵产物或玫瑰花发酵产物与其他三种组分配合使用，具有更显著的保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油、增加皮肤弹性功效。

附图说明

图1是志愿者使用应用例1精华水产品前(a)和28天后(b)的面部舒缓效果测试图；

图2是志愿者使用应用例1精华水产品前(a)和28天后(b)的眼角皱纹改善效果图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

下述涉及的部分原料来源信息如下表所示：

原料	购买源
		忍冬花提取物	广州优科生物科技有限公司
山羊奶提取物	百朗德生物化学(上海)有限公司
		低聚果糖	山东百龙创园生物科技有限公司
酿酒酵母	广州优科生物科技有限公司
		酒香酵母	广州优科生物科技有限公司
植物乳杆菌	广州优科生物科技有限公司
		乳酸乳球菌	广州优科生物科技有限公司
长双歧杆菌	广州优科生物科技有限公司
		青春双歧杆菌	广州优科生物科技有限公司
嗜热链球菌	广州优科生物科技有限公司
		U20卡波姆	路博润特种化工制造有限公司
乳化剂OLIVEM 1000	陕西信康生物科技有限公司

其他原料均通过正规市售途径购买获得。

制备例1

本制备例制备番石榴果粉：

取成熟新鲜的番石榴果采摘后，切1cm厚薄片后经60℃热风干燥至恒重，将干燥后的果片置于研磨机中打粉，粉碎后过60目筛，得到番石榴果粉。

制备例2

本制备例制备番石榴叶粉：

番石榴长叶30天后采摘新鲜叶，经60℃热风干燥至恒重，将干燥后的叶片置于研磨机中打粉，粉碎后过60目，得到番石榴叶粉。

制备例3

本制备例制备玫瑰花粉：

取新鲜的玫瑰花瓣经60℃热风干燥至恒重，将干燥后的玫瑰花瓣置于研磨机中打粉，粉碎后过60目筛，得到玫瑰花粉。

制备例4

本制备例制备酵母菌种子液：

将酿酒酵母、拜耳接合酵母或酒香酵母分别接种至YPD培养基中，培养传代3次，每代培养12h，得到酿酒酵母种子液、拜耳接合酵母种子液、酒香酵母种子液。

制备例5

本制备例制备乳酸菌种子液：

将植物乳杆菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌、青春双岐杆菌和长双歧杆菌分别接种至MRS培养基中，培养传代3次，每代培养10h，得到植物乳杆菌种子液、乳酸乳球菌种子液、嗜热链球菌种子液、青春双岐杆菌种子液和长双歧杆菌种子液。

制备例6-1

本制备例提供一种番石榴发酵产物，其制备方法如下：

(1)将番石榴果粉6份、番石榴叶粉4份、酵母粉2份、葡萄糖2份、NaCl0.2份、K₂HPO₄0.1份、纯化水80份混合，在120℃下灭菌25min，冷却至25℃，接种5％的酿酒酵母种子液(10⁸CFU/mL)，控制pH＝5.8-6.2，在35℃下发酵48h，得到一次发酵产物；

(2)将一次发酵产物在90℃下灭菌15min，冷却至25℃，接种1％的植物乳杆菌种子液(10⁸CFU/mL)和3％的乳酸乳球菌种子液(10⁸CFU/mL)，在35℃下发酵30h，得到二次发酵产物；

(3)将二次发酵产物在85℃下灭菌25min，冷却至45℃，10μm滤板过滤、取上清液，得到番石榴发酵产物。

制备例6-2

本制备例提供一种番石榴发酵产物，其制备方法与制备例6-1的区别仅在于步骤(1)中将5％的酿酒酵母种子液(10⁸CFU/mL)替换为5％的酒香酵母种子液(10⁸CFU/mL)，其他条件均保持不变。

制备例6-3

本制备例提供一种番石榴发酵产物，其制备方法与制备例6-1的区别仅在于步骤(2)中将1％的植物乳杆菌种子液(10⁸CFU/mL)和3％的乳酸乳球菌种子液(10⁸CFU/mL)替换为4％的植物乳杆菌种子液(10⁸CFU/mL)，其他条件均保持不变。

制备例6-4

本制备例提供一种番石榴发酵产物，其制备方法与制备例6-1的区别仅在于步骤(2)中将1％的植物乳杆菌种子液(10⁸CFU/mL)和3％的乳酸乳球菌种子液(10⁸CFU/mL)替换为4％的乳酸乳球菌种子液(10⁸CFU/mL)，其他条件均保持不变。

制备例6-5

本制备例提供一种番石榴发酵产物，其制备方法如下：

(1)将番石榴果粉6份、番石榴叶粉4份、酵母粉2份、葡萄糖2份、NaCl0.2份、K₂HPO₄0.1份、纯化水80份混合，在120℃下灭菌25min，冷却至25℃，接种5％的酿酒酵母种子液(10⁸CFU/mL)，控制pH＝5.8-6.2，在35℃下发酵48h，得到发酵产物；

(2)将发酵产物在85℃下灭菌25min，冷却至45℃，10μm滤板过滤、取上清液，得到番石榴发酵产物。

制备例6-6

本制备例提供一种番石榴发酵产物，其制备方法如下：

(1)将番石榴果粉6份、番石榴叶粉4份、酵母粉2份、葡萄糖2份、NaCl0.2份、K₂HPO₄0.1份、纯化水80份混合，在120℃下灭菌25min，冷却至25℃，接种1％的植物乳杆菌种子液(10⁸CFU/mL)和3％的乳酸乳球菌种子液(10⁸CFU/mL)，在35℃下发酵30h，得到发酵产物；

(2)将发酵产物在85℃下灭菌25min，冷却至45℃，10μm滤板过滤、取上清液，得到番石榴发酵产物。

制备例7-1

本制备例提供一种玫瑰花发酵产物，其制备方法如下：

(1)将玫瑰花粉5份、葡萄糖4份、维生素C 0.5份、低聚果糖0.5份、纯化水70份混合，在120℃下灭菌25min，冷却至25℃，接种1％的植物乳杆菌种子液(10⁸CFU/mL)、1％的嗜热链球菌种子液(10⁸CFU/mL)、1％的青春双岐杆菌种子液(10⁸CFU/mL)、1％的长双岐杆菌种子液(10⁸CFU/mL)，在35℃下发酵48h，得到发酵液；

(2)将发酵液在70℃下超声处理10min，加入质量分数0.5％的活性炭水溶液，400rpm搅拌1h，再10μm滤板过滤、取上清液，在85℃下灭菌25min，得到玫瑰花发酵产物。

制备例7-2

本制备例提供一种玫瑰花发酵产物，其制备方法与制备例7-1的区别仅在于接种菌株为2％的植物乳杆菌种子液(10⁸CFU/mL)、2％的嗜热链球菌种子液(10⁸CFU/mL)，其他条件均保持不变。

制备例7-3

本制备例提供一种玫瑰花发酵产物，其制备方法与制备例7-1的区别仅在于接种菌株为2％的青春双岐杆菌种子液(10⁸CFU/mL)、2％的长双岐杆菌种子液(10⁸CFU/mL)，其他条件均保持不变。

实施例1

本实施例提供一种护肤组合物，其以质量份数计包括：制备例6-1制得的番石榴发酵产物10份、制备例7-1制得的玫瑰花发酵产物3份、山羊奶提取物3份、忍冬花提取物4份、海藻糖5份、丁二醇5份、1,2-己二醇2份。将上述组分按比例混合均匀即可。

实施例2

本实施例提供一种护肤组合物，其以质量份数计包括：制备例6-1制得的番石榴发酵产物20份、制备例7-1制得的玫瑰花发酵产物4份、山羊奶提取物4份、忍冬花提取物5份、海藻糖8份、丁二醇10份、1,2-己二醇2份。将上述组分按比例混合均匀即可。

实施例3

本实施例提供一种护肤组合物，其以质量份数计包括：制备例6-1制得的番石榴发酵产物25份、制备例7-1制得的玫瑰花发酵产物5份、山羊奶提取物5份、忍冬花提取物5份、海藻糖10份、丁二醇15份、1,2-己二醇2份。将上述组分按比例混合均匀即可。

实施例4-8

本实施例提供五种护肤组合物，其配方与实施例1的区别仅在于将制备例6-1制得的番石榴发酵产物分别等量替换为制备例6-2、制备例6-3、制备例6-4、制备例6-5、制备例6-6制得的番石榴发酵产物。其他组分及含量均保持不变。

实施例9-10

本实施例提供两种护肤组合物，其配方与实施例1的区别仅在于制备例7-1制得的玫瑰花发酵产物分别等量替换为制备例7-2、制备例7-3制得的玫瑰花发酵产物。其他组分及含量均保持不变。

对比例1

本对比例提供一种护肤组合物，其配方与实施例1的区别仅在于不含有番石榴发酵产物，将其减少的质量份数按比例分配至制备例7-1制得的玫瑰花发酵产物、山羊奶提取物、忍冬花提取物的质量上。其他组分及含量均保持不变。

对比例2

本对比例提供一种护肤组合物，其配方与实施例1的区别仅在于不含有玫瑰花发酵产物，将其减少的质量份数按比例分配至制备例6-1制得的番石榴发酵产物、山羊奶提取物、忍冬花提取物的质量上。其他组分及含量均保持不变。

对比例3

本对比例提供一种护肤组合物，其配方与实施例1的区别仅在于不含有山羊奶提取物，将其减少的质量份数按比例分配至制备例6-1制得的番石榴发酵产物、制备例7-1制得的玫瑰花发酵产物、忍冬花提取物的质量上。其他组分及含量均保持不变。

对比例4

本对比例提供一种护肤组合物，其配方与实施例1的区别仅在于不含有忍冬花提取物，将其减少的质量份数按比例分配至制备例6-1制得的番石榴发酵产物、制备例7-1制得的玫瑰花发酵产物、山羊奶提取物的质量上。其他组分及含量均保持不变。

测试例1

本测试例对实施例1-3制得的护肤组合物进行外观、气味、固含量、多酚含量、多糖含量的测定。

(1)固含量检测：分别称取2g(m0)实施例1-3的护肤组合物置于95℃下干燥120min，取出放入干燥器中，冷却至25℃后，称重为m1；再按照固含量＝(m1/m0)×100％的公式计算固含量。检测结果如表1所示。

(2)多酚含量检测：分别量取1.5mL实施例1-3的护肤组合物，置于10mL带刻度具塞试管中，加1mL福林酚试剂，摇匀，加2mL碳酸钠溶液，摇匀，补足定容至10mL，摇匀，75℃水浴15min，取出冷却至室温，在760nm波长处测定吸光度，结果每组平均测定3次，取平均值，计算多酚含量。检测结果如表1所示。

(3)多糖含量检测

将实施例1-10、对比例1-4的产物采用分光光度法，检测波长490nm(参照“番石榴叶中多糖超声提取工艺优化，曾昭智等，广东药学院学报，29(2)，2013年4月”中公开的方法进行)。

检测结果如表1所示。

表1

由表1数据可知：本发明所涉及的护肤组合物具有较高的多酚和多糖水平，为其优异的保湿、抗氧化、抗皱、舒缓、控油等功效提供基础。

测试例2

本测试例对实施例1-10和对比例1-4制得的护肤组合物进行羟自由基清除率、DPPH清除率、透明质酸酶活性抑制率、5α-还原酶抑制率的测定。

(1)羟自由基清除实验

主要试剂：水杨酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、硫酸亚铁(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、无水乙醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)、双氧水。

主要设备：多功能酶标仪(Spectra Max M5 Molecular Device)。

实验方法：设有样品组(实施例1-10和对比例1-4的护肤组合物稀释至1/10)和阴性对照组，分别依次加入0.1份硫酸亚铁、0.1份乙醇、0.1份水杨酸、0.1份样品或阴性对照、1份等离子水、0.1份双氧水到1.5mL离心管中，盖紧管盖上下颠倒摇匀，在37℃水浴锅中保温15min，将溶液移到96孔板中，每组三个复孔。酶标仪测定510nm处吸光度。

羟自由基清除率由如下公式计算得到：

羟自由基清除率％＝{[A₀-(A_X-A_X0)]/A₀}×100％，其中，A₀为阴性对照组的吸光度，Ax为样品组的吸光度，Axo为样品背景的吸光度。测试结果如表2所示。

(2)DPPH清除实验

根据《化妆品-自由基(DPPH)清除实验方法(T/SHRH006-2018)》，分别检测上述实施例1-10和对比例1-4所制得的护肤组合物和空白对照组的DPPH自由基的清除率(％)。

实验方法：采用96孔板，每组设置三个复孔，体系为200μL。样品组：取适量各组产物，溶于100μL蒸馏水中，使待测样品在体系中的终浓度为10％，并向反应体系中加入100μL0.1mM的DPPH溶液；对照组：取100μL蒸馏水，再加入100μL 0.1mM的DPPH溶液。反应体系构建完成后，避光摇晃10min，使用酶标仪测试在520nm处的吸光度。

清除率的计算方法：清除率(％)＝[(A₀-A_x)/A₀]×100％，A₀为对照组吸光度，A_x为样品组吸光度。DPPH自由基清除测试结果如表2所示。

(3)透明质酸酶活性抑制实验

(3.1)溶液配制：

透明质酸酶溶液：准确称取0.01g透明质酸酶，加入4mL醋酸缓冲溶液，最终浓度为1250μg·mL^-1。

0.5mg·mL^-1透明质酸钠溶液：准确称取0.005g透明质酸钠，加入到10mL醋酸缓冲溶液中，充分溶解后备用。

醋酸缓冲溶液(pH＝5.6)：取1155μL冰乙酸于容量瓶中稀释至100mL，混匀后取4.8mL为A溶液；取2.72g乙酸钠结晶，溶解并定容至100mL，混匀后量取45.2mL为B溶液；混合A、B溶液，去离子水定容至100mL混匀。精密测定其pH值，用溶液A或B调pH值至5.6。

埃尔利希试剂：准确称取0.8g对-二甲氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中，备用。

乙酰丙酮溶液：准确取3.5mL乙酰丙酮溶于50mL的l.0mol·L^-1的碳酸钠溶液中。乙酰丙酮溶液需现用现配。

受试样品溶液：取样品实施例1-10和对比例1-4的护肤组合物1g，溶于10mL去离子水中，配置成10％溶液，备用。

(3.2)实验过程：

在试管中加入0.1mL的0.25mmol·L^-1CaCl₂溶液和0.5mL透明质酸酶液，37℃保温培养20min；加入0.5mL受试样品溶液，37℃保温培养20min；加入0.5mL透明质酸钠液，37℃保温30min；然后常温静置5min，加入0.4mol·L^-1的NaOH溶液0.1mL和乙酰丙酮溶液0.5mL，沸水浴中加热反应15min后立刻冰浴5min；再加入1.0mL埃尔利希试剂并用3.0mL无水乙醇进行稀释，放置20min后进行显色，测定其吸光度值，代入下式计算抑制率。

透明质酸酶抑制率(％)：{[(A-B)-(C-D)]/(A-B)}×100％，其中：A为对照溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液)；B为空白对照溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替样品溶液及酶液)；C为受试样溶液吸光度值；D为试样空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替酶液)。测试结果如表2所示。

(4)5α-还原酶抑制实验

试剂的配制：

睾酮(T)溶液：精密称取36mg睾酮，用无水乙醇定容至25mL，浓度为5mmol/L；NADPH溶液：精密称取NADPH四钠盐42.5mg，用水定容至25mL，浓度2mmol/L；提酶缓冲液：0.32mol/L蔗糖，0.1mmol/L DTT，20mmol/L磷酸钠，pH6.5。反应液：1mmol/L的DTT，20mmo/L磷酸钠。

5α-还原酶抑制剂活性的测定：

将反应成分依照先后顺序(反应液155μL，37℃恒温；睾酮10μL；NADPH10μL：分别取样品实施例1-10和对比例1-4的护肤组合物15μL；5α-还原酶20μL)，连续监测4min内340nm处反应体系吸光值的变化。根据NADPH标准曲线、抑制剂活力单位及抑制百分率的计算公式，可以计算出5α-还原酶抑制率。

抑制剂活力单位定义：在温度为37℃的反应体系中，使一个酶活力单位失活为一个抑制剂活力单位。抑制百分率＝(抑制剂活力/酶活力)×100％。测试结果如表2所示。

表2

由表2数据可知：本发明所涉及的护肤组合物中番石榴发酵产物、玫瑰花发酵产物、山羊奶提取物和忍冬花提取物四种天然源活性组分相辅相成，具有潜在的协同配合作用，其在抗氧化、抗皱、舒缓、控油功效上具有显著的协同促进作用。且番石榴发酵产物或玫瑰花发酵产物的制备工艺也显著影响上述功效的发挥。

应用例1

本应用例提供一种多功能精华水，其配方组分以质量百分含量计包括：实施例1制得的护肤组合物10％、pH调节剂(三乙醇胺、调节体系pH＝6.0)、增稠剂(U20卡波姆)0.1％、乳化剂(OLIVEM 1000)0.1％、螯合剂(EDTA 2Na)0.03％、余量为水。

应用例2-10

应用例2-10提供九种多功能精华水，其配方组分与应用例1的区别仅在于将实施例1制得的护肤组合物等量替换为实施例2-10制得的护肤组合物，其他组分及含量均保持不变。

对比应用例1-4

对比应用例1-4提供四种精华水，其配方组分与应用例1的区别仅在于将实施例1制得的护肤组合物等量替换为对比例1-4制得的护肤组合物，其他组分及含量均保持不变。

测试例3

人体评测试验：

(1)测试对象：挑选年龄分布为20-45周岁的女性志愿者共140人，随机分成14组，每组10名女性。

(2)使用方法：每晚睡前清洁面部后，分别使用等量的应用例1-10和对比应用例1-4的精华水按摩至吸收。每日1次，每周测试1次，测试前保证皮肤清洁，在室内静坐10分钟，进行仪器测试，使用VISIA全脸分析仪照出测试图片。测试4周。测试期间不得更换或合用其它同类产品。

(3)测试仪器：VISIA全脸分析仪，通过此仪器分析皮肤面部皱纹、纹理变化情况。MPA580皮肤测试仪测试皮肤水合度等指标。

(4)测试注意事项：每次测试，保证一个人操作仪器，保证探头与皮肤接触时，力量恒定；保持环境温度，湿度一致。

测试结果如表3所示(正值表是数量提升，负值表示数量下降)：

表3

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由表3数据可知：本发明所涉及的护肤组合物中番石榴发酵产物、玫瑰花发酵产物、山羊奶提取物和忍冬花提取物四种天然源活性组分相辅相成，具有潜在的协同配合作用，其在增加皮肤弹性、保湿、抗皱、控油功效上具有显著的协同促进作用。且番石榴发酵产物或玫瑰花发酵产物的制备工艺也显著影响上述功效的发挥。

同时，应用例1组产品对肌肤的舒缓效果如图1所示，a为产品使用前的测试图片、b为产品使用28天后的测试图片，由图可知：使用产品28天后面部红色区域得到明显减轻。

应用例1组产品对肌肤的皱纹改善效果如图2所示，a为产品使用前的测试图片、b为产品使用28天后的测试图片，由图可知：使用产品28天后志愿者眼部皱纹细纹明显减少，并且细纹深度更浅。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种含番石榴发酵产物的组合物及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (6)

1.一种含番石榴发酵产物的组合物，其特征在于，所述组合物以质量份数计包括番石榴发酵产物10-30份、玫瑰花发酵产物1-5份、山羊奶提取物1-5份和忍冬花提取物1-10份；

所述玫瑰花发酵产物由包括如下步骤的制备方法制得：

（S1）将含有玫瑰花原料的培养基灭菌、冷却后，接种乳酸菌液进行发酵，得到发酵产物；所述乳酸菌为活菌数之比为(2-6):(0.2-1):(2-4):(0.2-0.5）的植物乳杆菌、嗜热链球菌、青春双岐杆菌和长双岐杆菌的组合；

（S2）将发酵产物超声处理后与活性炭混合，过滤，灭菌处理，即得所述玫瑰花发酵产物；

所述含有玫瑰花原料的培养基以质量份数计包括玫瑰花原料1-20份、碳源2-8份、维生素0.5-1份、低聚果糖0.5-1份、纯化水50-85份；

所述玫瑰花原料包括玫瑰花或由玫瑰花干燥研磨后得到的玫瑰花粉；

所述番石榴发酵产物由包括如下步骤的制备方法制得：

（M1）将含有番石榴原料的培养基灭菌、冷却后，接种酵母菌液进行一次发酵，得到一次发酵产物；所述酵母菌包括酿酒酵母、拜耳接合酵母或酒香酵母中的任意一种或至少两种的组合；

（M2）将一次发酵产物灭菌、冷却后，接种乳酸菌液进行二次发酵，得到二次发酵产物；所述乳酸菌包括植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳酸乳球菌、长双歧杆菌或鼠李糖乳杆菌中的任意一种或至少两种的组合；

（M3）将二次发酵产物灭菌、冷却后，过滤，即得所述番石榴发酵产物；

所述含有番石榴原料的培养基以质量份数计包括番石榴原料5-15份、氮源1-4份、碳源1-5份、无机盐0.2-0.4份、纯化水65-85份；

所述番石榴原料包括番石榴果或由番石榴果干燥研磨后得到的番石榴果粉，还包括番石榴叶或由番石榴叶干燥研磨后得到的番石榴叶粉。

2.根据权利要求1所述的含番石榴发酵产物的组合物，其特征在于，所述发酵在温度28-35℃、自然pH下进行24-72 h；

所述超声处理在60-75℃下进行5-15 min。

3.根据权利要求1所述的含番石榴发酵产物的组合物，其特征在于，制备番石榴发酵产物的方法中，所述酵母菌为酿酒酵母；

所述乳酸菌为植物乳杆菌和乳酸乳球菌的组合，所述植物乳杆菌与乳酸乳球菌的活菌数之比为1:(2-4)。

4.根据权利要求1所述的含番石榴发酵产物的组合物，其特征在于，所述一次发酵在温度28-35℃、pH=5.5-7.0下进行24-72 h；

所述二次发酵在温度28-35℃、自然pH下进行24-72 h；

步骤（M1）所述灭菌在115-121℃下进行20-30 min；

步骤（M2）所述灭菌在80-105℃下进行10-20 min；

步骤（M3）所述灭菌在80-90℃下进行20-30 min。

5.根据权利要求1所述的含番石榴发酵产物的组合物，其特征在于，所述组合物以质量份数计还包括保湿性糖类组分1-10份；

所述保湿性糖类组分包括海藻糖、β-葡聚糖、银耳多糖、岩藻多糖、壳寡糖或透明质酸中的任意一种或至少两种的组合；

所述组合物以质量份数计还包括多元醇5-20份；

所述多元醇包括丁二醇、1,2-己二醇、1,3-丙二醇、甘油或聚乙二醇中的任意一种或至少两种的组合。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的含番石榴发酵产物的组合物在制备化妆品中的应用。