CN115974844B - 3,4,5-三甲氧基苯基衍生物及其应用 - Google Patents

3,4,5-三甲氧基苯基衍生物及其应用 Download PDF

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CN115974844B CN202211292532.8A CN202211292532A CN115974844B CN 115974844 B CN115974844 B CN 115974844B CN 202211292532 A CN202211292532 A CN 202211292532A CN 115974844 B CN115974844 B CN 115974844B
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Abstract

本发明公开了3,4,5‑三甲氧基苯基衍生物及其应用。3,4,5‑三甲氧基苯基衍生物化学结构如下式(a)(b)所示。本发明所述的3,4,5‑三甲氧基苯基衍生物可以有效抑制肿瘤细胞的增殖，并且有很强的抑制微管蛋白的聚集能力，这为抑制肿瘤细胞增值提供一种新型微管蛋白抑制剂。

Description

3,4,5-三甲氧基苯基衍生物及其应用
技术领域：
本发明属于有机化合物领域，具体涉及3,4,5-三甲氧基苯基衍生物的合成和该化合物能够抑制癌细胞生长，可用于***。
背景技术：
恶性肿瘤是危害人类健康最严重的一类疾病，它的发病率仅次于心脑血管疾病，是人类健康的第二大“杀手”，而其死亡率甚至超过心脑血管疾病，居于所有疾病的首位。因此，寻找和开发***的新药是当前面临的重大课题。由于微管在肿瘤细胞的增殖和***中起到非常关键的作用，使得微管蛋白成为抗肿瘤药物比较理想的靶标。
微管在各种细胞过程中起重要作用，包括纺锤体形成，细胞形状维持和细胞内运输。微管在细胞有丝***中的功能使它们成为抗癌药物有吸引力的靶标，微管靶向剂破坏微管形成从而抑制癌细胞进入G2/M期，最终导致癌细胞凋亡。因此，微管蛋白抑制剂已广泛用于治疗癌症。
目前所有已经上市的微管蛋白抑制剂均与微管蛋白中的紫杉醇或长春碱结合位点结合,这些化合物的优点是抗肿瘤活性高，对多种癌症有效。而存在的主要问题是：①毒副作用大；②易产生耐药性(多药耐药/MDR)；秋水仙碱结合位点的微管蛋白抑制剂可以克服上述缺点并且具有优于紫杉烷和长春花生物碱结合位点的治疗优势，例如，它们由于有较好的水溶性并且可以口服给药；此外，它们不易发生多药耐药。迄今为止，已发现许多基于秋水仙碱结合位点的微管蛋白抑制剂作为有效的抗癌剂。其中一些已经达到临床试验，这说明基于秋水仙碱结合位点的抗肿瘤药物类似物有很大的发展前景。
基于秋水仙碱为靶点的微管蛋白抑制剂中，已经被专利保护并进入临床试验的药物被列举在附图1中。考不他汀(Combretastatin)CA-4是非洲树南非矮生柳树分离的考不他汀家族中最活跃的成员。CA-4通过结合至秋水仙碱位点展示出很强的抗微管蛋白活性并且已经经历II期和III期临床研究。利用羰基替换了CA-4的烯桥，产生phenstatin，其具有与CA-4类似的效力和作用机制。ABI-231是CA-4的类似物，显示出对微管蛋白聚合很强的抑制活性。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题是提供一种3,4,5-三甲氧基苯基衍生物以及在制备治疗癌症药物药物中的应用。
本发明的3,4,5-三甲氧基苯基衍生物，其化学结构如下式(a)，(b)所示，
(a)式中，R1是5-(1-甲基吲哚)基、4-甲基苯基、苯基、4-甲氧基苯基、3-氟-4-甲氧基苯基、4-巯甲基苯基、4-硝基苯基、3-硝基-4-甲氧基苯基、4-(嘧啶-2-胺)基、3,4-二甲基苯基、3-甲基苯基、3-氨基-4-甲氧基苯基、4-氨基苯基、3-(1-苯磺酰基吲哚)基、3-(1H-吲哚)基、2-甲基苯基、2,3-二氢苯并[b][1,4]二恶英-6-基、5-(1-甲基吲唑基)、3,4,5-三甲氧基苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、3-甲酰基-4-甲氧基苯基、4-甲磺酰基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧羰基苯基、N-乙基咔唑-3-基、吲哚-6-基、3-氯-4-甲氧基苯基、3-乙氧基-4-氯苯基、苯并噻吩-2-基、4-乙氧基苯基、3-甲氧基-4-羟基苯基、4-羟甲基苯基、3-氨基-4-甲氧基苯基等。
(b)式中，R2是3,4-二甲基苯基、4-氟苯基、3-硝基苯基、噻唑-2-基、4-碘苯基、4-羧基苯基、4-甲基苯基、吡啶-3-基、4-苄氧基苯基、4-硝基苯基、2-硝基苯基、4-甲氧羰基苯基、4-氯苯基、2-甲氧基吡啶-2-基、萘基、4-溴苯基、4-甲基磺酰基、4-甲氧基苄基、4-羟甲基苯基、4-氰基苯基、4-磺酰胺苯基、4-(N-甲基甲磺酰胺)苯基、3-氨基苯基、4-羟基苯基、4-氨基苯基、3-硝基-4-甲氧基苯基、3-氨基-4-甲氧基苯基、3-硝基-4-羟基苯基、2-氨基苯基。
优选，所述的3,4,5-三甲氧基苯基衍生物为下述化合物之一：
优选，所述的3,4,5-三甲氧基苯基衍生物为化合物G26、G27、G30或B25。
本发明的第二个目的是提供上述3,4,5-三甲氧基苯基衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选地，所述的抗肿瘤药物优选为抗***、乳腺癌、肺癌或黑色素瘤的药物。
优选地，所述的抗肿瘤药物包括3,4,5-三甲氧基苯基衍生物和医学上可接受的辅料。
本发明的第三个目的是提供一种抗肿瘤药物，含有上述3,4,5-三甲氧基苯基衍生物作为活性成分。
本发明的第四个目的是提供上述3,4,5-三甲氧基苯基衍生物的合成方法，包括以下步骤：
将原料1和N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛反应生成化合物2；再将化合物2和盐酸胍在乙醇钠的乙醇溶液中反应生成化合物3；然后将化合物3与NBS反应生成化合物4，最后与硼酸试剂进行Suzuki反应，生成化合物G1-34。
反应式如下：
或将原料1和N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛反应生成化合物2；再将化合物2和肼类试剂在乙醇溶液中生成化合物B1-29。
反应式如下：
本发明的3,4,5-三甲氧基苯基衍生物可以有效抑制肿瘤细胞的增殖，并且有很强的抑制微管蛋白的聚集能力，这为抑制肿瘤细胞增殖提供一种新型微管蛋白抑制剂。
附图说明
图1：列举了几类秋水仙碱结合位点的微管蛋白抑制剂。
图2：化合物G27、G28和B25体外抑制微管蛋白的聚集。
图3是化合物B25对肿瘤的抑制和小鼠体重影响。
图4是HE染色结果。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1本发明关键中间体4的合成
(1)化合物2的合成：
将5.0g的化合物1溶解于15mL DMF溶剂中，再将15.0mL的N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛加入上述溶液，加热回流，薄层色谱监测。反应结束后，用乙酸乙酯-水萃取，无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层，浓缩溶液，石油醚-乙酸乙酯3：1柱层析得到6.1g化合物2，收率96.7％。
将所得到的化合物2采用核磁共振谱、质谱技术进行鉴定，鉴定结果为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.80(d,J＝12.3Hz,1H),7.16(s,2H),5.63(d,J＝12.3Hz,1H),3.92(s,6H),3.89(s,3H),3.05(ss,6H).ESI-MS m/z:265.1[M+H]+266.1.
(2)化合物3的合成：
将5.0g的化合物2溶解于15mL乙醇溶液中，然后加入3.25g的盐酸胍和50mL的乙醇钠乙醇溶液，加热回流，薄层色谱监测。反应结束后，用乙酸乙酯-水萃取，无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层，浓缩溶液，得到4.7g化合物3。收率95.5％。
将所得到的化合物3采用核磁共振谱、质谱技术进行鉴定，鉴定结果为：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝5.3Hz,1H),7.27(s,2H),7.01(d,J＝5.3Hz,1H),5.21(s,2H),3.97(s,6H),3.92(s,3H).
(3)化合物4的合成：
将4.0g的化合物3溶解于100mL四氢呋喃溶液中，然后需要分批加入2.72g的NBS，保持0℃温度下反应，薄层色谱监测。反应结束后，用乙酸乙酯-水萃取，无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层，浓缩溶液，石油醚-乙酸乙酯1：1柱层析得到4.90g化合物4。收率94.1％。
将所得到的化合物4采用核磁共振谱、质谱技术进行鉴定，鉴定结果为：1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ8.43(s,1H),6.98(s,2H),5.44(s,1H),3.91(ss,9H).
(4)化合物G1-34的合成：
将0.41g的化合物4溶解于5mL DMF与0.5mL水的混合溶剂中，再将1.2eq.的硼酸试剂，0.05eq.的[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和2.5eq.的碳酸钠加入上述溶液，加热至95℃反应10h，薄层色谱监测。反应结束后，用乙酸乙酯-水萃取，无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层，浓缩溶液，经过柱层析得到化合物G1-34。
所述的化合物G1-34顺序排列如下：
(5)化合物B1-29的合成：
将1eq.的化合物2和2eq.的肼类试剂溶解于10mL乙醇溶剂中，加热至75℃反应8h，薄层色谱监测。反应结束后，用乙酸乙酯-水萃取，无水硫酸钠干燥乙酸乙酯层，浓缩溶液，经过柱层析得到化合物B1-29。
所述的化合物B1-29顺序排列如下：
实施例2化合物G1的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择5-甲基吲哚苯硼酸，经过4步得到化合物G1。Yield:51.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),7.44(s,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.03(d,J＝2.9Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.64(s,2H),6.41(d,J＝2.6Hz,1H),6.22(s,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.49(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ176.0,165.0,161.4,158.3,152.5,138.9,135.9,132.5,129.6,128.8,127.7,124.8,123.4,121.4,109.3,107.3,101.1,60.8,55.8,32.9.HRMS m/z:calcd for:C22H23N4O3[M+H]+391.1770,found 391.1778.
实施例3化合物G2的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-甲基苯硼酸，经过4步得到化合物G2。Yield:62.1％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.08(d,J＝7.7Hz,2H),6.98(d,J＝7.8Hz,2H),6.59(s,2H),6.19(s,2H),3.81(s,3H),3.57(s,6H),2.29(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.7,164.9,161.7,158.2,152.5,139.0,136.9,133.9,132.2,129.3,123.5,107.2,60.8,55.7,21.2.HRMS m/z:calcd for:C20H22N3O3[M+H]+352.1661,found352.1659.
实施例4化合物G3的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择苯硼酸，经过4步得到化合物G3。Yield:72.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.32(s,1H),7.33-7.26(m,3H),7.16(d,J＝7.2Hz,2H),6.65(s,2H),5.56(s,2H),3.83(s,3H),3.61(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.1,162.3,159.6,152.6,138.8,137.4,132.7,129.5,128.6,127.1,123.8,107.1,60.9,55.8.HRMS m/z:calcd for:C19H20N3O3[M+H]+338.1505,found 338.1502.
实施例5化合物G4的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-甲氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G4。Yield:48.1％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),7.09(d,J＝7.8Hz,2H),7.01(d,J＝7.9Hz,2H),6.62(s,2H),5.59(s,2H),3.80(s,3H),3.59(s,6H),2.30(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.2,162.0,159.5,152.6,138.8,136.8,134.3,132.9,129.3,129.2,123.9,107.1,60.9,55.8,21.1.MS m/z:calcd for:C20H22N3O4[M+H]+368.2,found 368.2.
实施例6化合物G5的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3-氟-4-甲氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G5。Yield:62.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),7.07(t,J＝7.2Hz,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,2H),6.61(s,2H),5.69(s,2H),3.80(s,3H),3.61(s,6H),2.22(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.3,162.3,159.5,152.7,139.0,136.8,132.6,131.4,124.9,123.5,122.6,115.8,107.0,60.9,55.8.MS m/z:calcd for:C20H21FN3O4[M+H]+386.2,found386.2.
实施例7化合物G6的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-巯甲基苯硼酸，经过4步得到化合物G6。Yield:55.2％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.20(d,J＝7.9Hz,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,2H),6.63(s,2H),5.24(s,2H),3.83(s,3H),3.63(s,6H),2.46(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.2,162.0,159.5,152.7,138.9,137.7,134.0,132.7,129.8,126.6,123.4,107.0,60.9,55.9,15.8.HRMS m/z:calcd for:C20H22N3O3S[M+H]+384.1382,found384.1364.
实施例8化合物G7的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-硝基苯硼酸，经过4步得到化合物G7。Yield:38.6％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),8.13(d,J＝8.7Hz,2H),7.29(d,J＝8.7Hz,2H),7.21(s,1H),6.54(s,2H),5.77(s,2H),3.81(s,3H),3.60(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.9,162.6,159.5,153.0,146.6,139.4,132.2,130.0,123.7,121.6,106.9,104.3,60.9,55.9.HRMS m/z:calcd for:C19H19N4O5[M+H]+383.1355,found383.1337.
实施例9化合物G8的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3-硝基-4-甲氧基吲哚苯硼酸，经过4步得到化合物G8。Yield:43.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.72(s,1H),7.22(d,J＝10.8Hz,1H),6.99(d,J＝8.7Hz,1H),6.59(s,2H),5.41(s,2H),3.94(s,3H),3.83(s,3H),3.67(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.8,162.3,159.4,153.0,151.9,139.6,139.2,135.2,132.4,129.8,125.9,121.3,113.6,106.9,60.9,56.7,56.0.HRMS m/z:calcd for:C20H21N4O6[M+H]+413.1461,found 413.1440.
实施例10化合物G9的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择2-胺基嘧啶-5-硼酸频哪醇酯啶，经过4步得到化合物G9。Yield:81.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),8.08(s,2H),6.62(s,2H),5.29(s,2H),5.16(s,2H),3.85(s,3H),3.72(s,6H).13C NMR(150MHz,CDCl3)δ165.0,162.4,161.7,159.3,158.0,153.1,139.2,132.4,121.2,117.6,106.8,61.0,56.0.HRMS m/z:calcd for:C17H19N6O3[M+H]+355.1519,found 355.1508.
实施例11化合物G10的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3,4-二甲基吲哚苯硼酸，经过4步得到化合物G10。Yield:75.6％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(s,1H),7.07(d,J＝7.6Hz,1H),6.95(s,1H),6.87(d,J＝7.6Hz,1H),6.68(s,2H),5.51(s,2H),3.83(s,3H),3.62(s,6H),2.25(s,3H),2.21(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.9,162.1,159.6,152.5,138.8,136.7,135.4,134.8,133.0,130.5,129.8,127.0,123.9,107.1,60.9,55.8,19.7,19.4.HRMS m/z:calcd for:C21H24N3O3[M+H]+366.1818,found 366.1815.
实施例12化合物G11的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3-甲基吲哚苯硼酸，经过4步得到化合物G11。Yield:64.2％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),7.05(d,J＝7.4Hz,1H),6.96(s,1H),6.91(d,J＝7.5Hz,1H),6.65(s,2H),5.76(s,2H),3.80(d,J＝2.2Hz,3H),3.58(s,6H),2.26(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.9,162.3,159.5,152.5,138.8,138.2,137.4,132.8,130.0,128.4,127.7,126.6,123.7,107.2,60.8,55.8,21.3.HRMS m/z:calcd for:C20H22N3O3[M+H]+352.1661,found 352.1680.
实施例13化合物G12的合成：
通过钯碳还原G8，得到化合物G12。Yield:64.1％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(s,1H),6.73(d,J＝9.9Hz,3H),6.50(d,J＝13.5Hz,2H),5.37(s,2H),3.84(s,6H),3.66(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.8,161.9,159.7,152.6,146.6,138.8,136.4,133.1,130.1,124.1,119.6,115.8,110.5,107.0,60.9,55.9,55.6.HRMS m/z:calcd for:C20H23N4O4[M+H]+383.1719,found 383.1737.
实施例14化合物G13的合成：
通过钯碳还原G7，得到化合物G13。Yield:62.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),6.94(d,J＝8.2Hz,2H),6.71(s,2H),6.64(d,J＝8.2Hz,2H),5.22(s,2H),3.85(s,3H),3.68(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.9,161.8,159.7,152.6,145.6,138.7,133.2,130.4,127.1,124.1,115.1,107.0,60.9,55.9.HRMS m/z:calcd for:C19H21N4O3[M+H]+353.1614,found353.1609.
实施例15化合物G14的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择(N-苯磺酰基)-3-吲哚硼酸，经过4步得到化合物G14。Yield:72.8％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(s,1H),8.00(d,J＝8.3Hz,1H),7.83(d,J＝7.7Hz,2H),7.59(t,J＝7.4Hz,1H),7.47(s,3H),7.32–7.28(m,1H),7.11(s,2H),6.67(s,2H),5.53(s,2H),3.78(s,3H),3.27(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ165.2,162.7,160.5,152.7,139.1,137.9,134.6,134.1,132.8,130.3,129.6,126.7,125.1,124.2,123.6,120.4,119.6,114.1,113.5,106.2,60.8,55.5.MS m/z:calcd for:C27H25N4O5S[M+H]+517.2,found 517.2.
实施例16化合物G15的合成：
通过氢氧化钠水解化合物G14，得到化合物G15。Yield:64.1％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,2H),7.39(d,J＝8.1Hz,1H),7.30(d,J＝8.1Hz,1H),7.19(t,J＝7.5Hz,1H),7.05(t,J＝7.4Hz,1H),7.00(s,1H),6.81(s,2H),5.27(s,2H),3.79(s,3H),3.48(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.9,162.0,160.8,152.6,138.8,136.0,133.4,127.1,123.1,122.5,120.3,119.5,116.7,112.8,111.1,106.5,60.8,55.7.HRMS m/z:calcd for:C21H21N4O3[M+H]+377.1614,found377.1609.
实施例17化合物G16的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择2-甲基苯硼酸，经过4步得到化合物G16。Yield:56.9％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.25-7.21(m,2H),7.20-7.14(m,2H),6.69(s,2H),5.31(s,2H),3.81(s,3H),3.57(s,6H),1.89(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.5,162.3,160.0,152.6,139.0,137.2,136.9,133.0,130.5,130.4,127.9,126.3,123.2,106.4,60.9,55.7,20.0.HRMS m/z:calcd for:C20H22N3O3[M+H]+352.1661,found352.1668.
实施例18化合物G17的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择苯并-1,4-二氧六环-6-硼酸，经过4步得到化合物G17。Yield:81.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(s,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),6.64(s,2H),6.63(d,J＝2.0Hz,1H),6.56(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),5.65(s,2H),4.17(q,J＝4.9Hz,4H),3.79(s,3H),3.62(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.9,162.2,159.5,152.6,143.4,142.8,138.8,132.9,130.6,123.1,122.6,118.1,117.3,107.0,64.3,64.3,60.8,55.8.HRMS m/z:calcd for:C21H22N3O5[M+H]+396.1559,found 396.1557.
实施例19化合物G18的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择1-甲基引唑-5-硼酸，经过4步得到化合物G18。Yield:67.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),7.94(s,1H),7.59(s,1H),7.25(d,J＝8.7Hz,1H),7.02(d,J＝10.1Hz,1H),6.62(s,2H),5.50(s,2H),4.04(s,3H),3.78(s,3H),3.50(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.3,162.2,159.9,152.6,138.9,138.8,133.0,132.8,129.9,128.6,124.2,123.8,121.0,108.9,107.1,60.8,55.8,35.6.HRMS m/z:calcd for:C21H22N5O3[M+H]+392.1723,found 392.1716.
实施例20化合物G19的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3,4,5-三甲氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G19。Yield:72.6％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),6.62(s,2H),6.28(s,2H),5.72(s,2H),3.74(d,J＝3.2Hz,6H),3.62(s,6H),3.58(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.1,162.2,159.2,153.2,152.7,138.9,137.3,132.8,132.,8 123.6,106.9,106.8,60.9,56.2,55.9.HRMS m/z:calcd for:C22H26N3O6[M+H]+428.1822,found 428.1837.
实施例21化合物G20的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-氟苯硼酸，经过4步得到化合物G20。Yield:84.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(s,1H),7.06(dd,J＝8.7,5.3Hz,2H),6.95(t,J＝8.7Hz,2H),6.57(s,2H),5.81(s,2H),3.78(s,3H),3.58(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.3,162.3,159.5,152.7,138.9,133.4,132.6,131.0,122.7,115.6,115.4,107.0,60.9,55.8.HRMS m/z:calcd for:C19H19FN3O3[M+H]+356.1410,found 356.1425.
实施例22化合物G21的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-氯苯硼酸，经过4步得到化合物G21。Yield:82.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),7.27–7.24(m,2H),7.07–7.03(m,2H),6.58(s,2H),5.68(s,2H),3.81(s,3H),3.61(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.3,162.4,159.4,152.7,139.0,135.9,133.1,132.5,130.7,128.7,122.4,107.0,60.9,55.8.HRMS m/z:calcd for:C19H19ClN3O3[M+H]+372.1115,found 372.1107.
实施例23化合物G22的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3-甲酰基-4-甲氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G22。Yield:40.2％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.42(s,1H),8.26(s,1H),7.73(s,1H),7.16(d,J＝11.1Hz,1H),6.86(d,J＝8.7Hz,1H),6.57(s,2H),5.56(s,2H),3.88(s,3H),3.79(s,3H),3.61(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ189.3,164.4,162.3,161.0,159.5,152.8,138.9,137.3,132.8,129.9,128.5,124.7,122.2,111.9,106.9,60.9,55.9,55.9.HRMS m/z:calcd for:C21H22N3O5[M+H]+396.1559,found 396.1552.
实施例24化合物G23的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-甲磺酰基苯硼酸，经过4步得到化合物G23。Yield:64.1％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),7.87(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.4Hz,2H),6.55(s,2H),5.50(s,2H),3.82(s,3H),3.61(s,6H),3.04(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.8,162.5,159.5,152.9,143.5,139.4,139.4,132.1,130.2,127.6,122.0,107.0,60.9,55.9,44.4.HRMS m/z:calcd for:C20H22N3O5S[M+H]+416.1280,found416.1277.
实施例25化合物G24的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3-甲氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G24。Yield:71.9％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),7.17(t,J＝7.9Hz,1H),6.76(dd,J＝8.3,2.0Hz,1H),6.71(d,J＝7.7Hz,1H),6.63(s,3H),5.74(s,2H),3.78(s,3H),3.64(s,3H),3.58(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.1,162.3,159.7,159.5,152.6,138.9,138.8,132.7,129.6,123.6,121.9,115.0,112.7,107.0,60.8,55.8,55.2.HRMS m/z:calcdfor:C20H22N3O4[M+H]+368.1610,found 368.1629.
实施例26化合物G25的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-甲氧碳基苯硼酸，经过4步得到化合物G26。Yield:99.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(s,1H),7.87(d,J＝8.3Hz,2H),7.13(d,J＝8.3Hz,2H),6.52(s,2H),6.04(s,2H),3.81(s,3H),3.73(s,3H),3.50(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ166.6,164.3,162.6,159.4,152.6,142.4,139.0,132.3,129.7,129.3,128.4,122.3,107.0,60.7,55.8,52.1.HRMS m/z:calcd for:C21H22N3O5[M+H]+396.1559,found 396.1551.
实施例27化合物G26的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择N-乙基咔唑-3-硼酸，经过4步得到化合物G26。Yield:48.0％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),8.04(d,J＝7.7Hz,1H),7.98(s,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.41(d,J＝8.2Hz,1H),7.29(d,J＝8.4Hz,1H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),7.14(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),6.73(s,2H),5.56(s,2H),4.34(q,J＝7.2Hz,2H),3.79(s,3H),3.49(s,6H),1.39(t,J＝7.2Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.0,162.1,160.1,152.6,140.2,138.9,138.8,133.2,127.9,127.7,125.9,124.6,123.3,122.7,120.9,120.5,119.0,108.7,108.5,107.2,60.8,55.8,37.6,13.7.HRMS m/z:calcd for:C27H27N4O3[M+H]+455.2083,found455.2078.
实施例28化合物G27的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择6-吲哚硼酸，经过4步得到化合物G27。Yield:74.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(s,1H),8.17(s,1H),7.57(d,J＝8.1Hz,1H),7.19(t,J＝2.7Hz,1H),7.16(s,1H),6.92(d,J＝8.9Hz,1H),6.68(s,2H),6.52(s,1H),5.15(s,2H),3.79(s,3H),3.49(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.0,161.8,160.0,152.6,138.7,135.9,133.1,131.0,127.0,125.1,124.8,121.7,120.8,111.9,107.1,102.5,60.9,55.7.HRMS m/z:calcd for:C21H21N4O3[M+H]+377.1614,found 377.1601.
实施例29化合物G28的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3-氯-4-甲氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G28。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ8.22(s,1H),7.18(d,J＝2.2Hz,1H),6.90(d,J＝10.6Hz,1H),6.80(d,J＝8.5Hz,1H),6.60(s,2H),5.68(s,2H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.61(s,6H).
实施例30化合物G29的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-氯-3-乙氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G29。Yield:60.4％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(s,1H),7.28(d,J＝8.1Hz,1H),6.71(d,J＝9.8Hz,1H),6.61(s,2H),6.59(d,J＝1.4Hz,1H),5.66(s,2H),3.85(q,J＝6.8Hz,3H),3.79(s,3H),3.62(s,6H),1.29(t,J＝7.0Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.3,162.4,159.3,154.1,152.7,139.0,137.1,132.6,130.2,122.7,121.9,121.8,114.8,106.9,64.7,60.8,55.9,14.4.HRMS m/z:calcd for:C21H23ClN3O4[M+H]+416.1377,found 416.1365.
实施例31化合物G30的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择苯并噻吩-2-硼酸，经过4步得到化合物G30。Yield:14.4％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(s,1H),7.75(d,J＝7.8Hz,1H),7.68(d,J＝8.2Hz,1H),7.34-7.27(m,2H),7.08(s,1H),6.81(s,2H),5.38(s,2H),3.83(s,3H),3.60(s,6H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ165.0,162.4,160.1,152.9,140.3,139.8,139.3,139.2,132.4,124.5,124.4,123.5,123.4,122.0,117.1,106.6,60.9,55.9.HRMS m/z:calcd for:C21H20N3O3S[M+H]+394.1225,found 394.1206.
实施例32化合物G31的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择4-乙氧基苯硼酸，经过4步得到化合物G31。Yield:59.2％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(s,1H),7.01(d,J＝8.6Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),6.64(s,2H),5.80(s,2H),3.97(q,J＝7.0Hz,2H),3.80(s,3H),3.60(s,6H),1.36(t,J＝7.0Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ168.0,167.6,164.5,164.3,162.7,157.2,143.3,138.3,135.4,134.8,127.1,119.4,112.2,68.2,65.2,60.5,19.7.HRMS m/z:calcdfor:C21H24N3O4[M+H]+382.1767,found 382.1752.
实施例33化合物G32的合成：
合成步骤参考实施例1，硼酸试剂选择3-甲氧基4-羟基苯硼酸，经过4步得到化合物G32。Yield:71.6％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.31(s,1H),6.89(d,J＝8.1Hz,1H),6.74(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H),6.67(s,2H),6.52(d,J＝1.9Hz,1H),5.20(s,2H),3.82(s,3H),3.66(s,3H),3.65(s,6H),2.04(s,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ168.2,167.2,164.3,164.1,157.2,152.3,150.7,143.2,138.3,133.4,127.9,126.7,120.4,118.3,111.9,65.4,60.7,60.6.MS m/z:calcd for:C20H22N3O5[M+H]+384.2,found 384.2.
实施例34化合物G33的合成：
利用四氢锂铝还原化合物G25，得到化合物G33。Yield:65.2％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.04(s,1H),7.32(d,J＝7.6Hz,2H),7.12(d,J＝7.6Hz,2H),6.63(s,2H),5.38(s,2H),4.69(s,2H),3.83(s,3H),3.61(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ168.6,167.2,164.4,164.2,157.2,145.8,143.3,140.9,137.9,134.0,131.6,128.0,111.9,68.5,65.5,60.5.HRMS m/z:calcd for:C20H22N3O4[M+H]+368.1610,found 368.1600.
实施例35化合物G34的合成：
通过将化合物G12乙酰化，进一步利用铁还原后得到化合物G34。Yield:52.3％；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.50(s,1H),8.33(s,1H),6.81(s,2H),6.77(d,J＝8.7Hz,1H),6.59-6.51(m,2H),3.85(d,J＝2.1Hz,6H),3.65(s,6H),2.57(s,3H).MS m/z:calcd for:C22H25N4O5[M+H]+425.2,found 425.2.
实施例36化合物B1的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择3,4-二甲基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B1。Yield:62.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(s,1H),7.18(s,1H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),6.95(d,J＝8.0Hz,1H),6.47(s,1H),6.42(s,2H),3.84(s,3H),3.65(s,6H),2.25(s,3H),2.23(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.0,142.8,139.8,138.0,137.4,136.1,129.8,126.4,126.0,122.8,106.9,106.1,60.9,56.0,19.7,19.4.HRMS m/z:calcd for:C20H23N2O3[M+H]+339.1709,found 339.1764.
实施例37化合物B2的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-氟苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B2。Yield:65.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(s,1H),7.42–7.24(m,2H),7.06(t,J＝8.2Hz,2H),6.50(s,1H),6.41(s,2H),3.85(s,3H),3.68(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ162.9,160.4,153.1,143.0,140.3,138.1,136.3,127.1,125.6,115.9,115.7,107.4,106.0,61.0,56.0.HRMS m/z:calcd for:C18H18FN2O3[M+H]+329.1301,found 329.1333.
实施例38化合物B3的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择3-硝基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B3。Yield:54.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(s,1H),8.15(d,J＝8.1Hz,1H),7.77(s,1H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.51(t,J＝8.1Hz,1H),6.54(s,1H),6.44(s,2H),3.88(s,3H),3.71(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.5,148.4,143.4,141.3,141.0,138.7,130.2,129.5,100.2,121.7,119.7,108.8,106.4,61.0,56.2.HRMS m/z:calcd for:C18H18N3O5[M+H]+356.1246,found 356.1263.
实施例39化合物B4的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择2-肼噻唑盐酸盐，经过2步得到化合物B4。Yield:66.9％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(s,1H),7.48(d,J＝3.2Hz,1H),7.18(d,J＝3.3Hz,1H),6.67(s,2H),6.48(s,1H),3.89(s,3H),3.79(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ161.1,152.8,144.4,141.9,140.1,138.6,124.8,118.0,109.7,106.8,60.9,56.1.HRMS m/z:calcd for:C15H16N3O3S[M+H]+318.0912,found 318.0962.
实施例40化合物B5的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-碘苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B5。Yield:68.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74-7.62(m,3H),7.08(d,J＝8.2Hz,2H),6.49(s,1H),6.40(s,2H),3.86(s,3H),3.68(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.2,142.9,140.6,139.8,138.2,137.9,126.8,100.5,107.9,106.1,92.2,60.9,56.1.HRMS m/z:calcd for:C18H18IN2O3[M+H]+437.0362,found 437.0352.
实施例41化合物B6的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-羧基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B6。Yield:69.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.67(s,1H),8.11(d,J＝8.1Hz,2H),7.80(s,1H),7.47(d,J＝8.1Hz,2H),6.55(s,1H),6.45(s,2H),3.89(s,3H),3.71(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.6,153.3,144.1,143.4,141.1,138.4,131.0,128.0,100.5,124.6,108.6,106.2,61.0,56.1.HRMS m/z:calcd for:C19H19N2O5[M+Na]+377.1113,found377.1089.
实施例42化合物B7的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-甲基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B7。Yield:68.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.68(s,1H),7.20(d,J＝8.1Hz,2H),7.15(d,J＝8.1Hz,2H),6.48(s,1H),6.41(s,2H),3.84(s,3H),3.65(s,6H),2.34(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.0,142.8,139.9,137.9,137.8,137.4,129.4,100.9,100.3,107.0,106.1,60.9,55.9,21.0.HRMS m/z:calcd for:C19H21N2O3[M+H]+325.1552,found325.1575.
实施例43化合物B8的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择3-肼基吡啶盐酸盐，经过2步得到化合物B8。Yield:70.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.65(s,1H),8.57(s,1H),7.79(s,1H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.37-7.32(m,1H),6.55(s,1H),6.43(s,2H),3.88(s,3H),3.71(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.4,148.2,146.1,143.4,141.3,138.4,136.7,132.1,125.2,123.4,108.3,106.2,61.0,56.1.HRMS m/z:calcd for:C17H18N3O3[M+H]+312.1348,found312.1375.
实施例44化合物B9的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-苄氧基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B9。Yield:73.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(s,1H),7.47-7.32(m,5H),7.27(d,J＝8.4Hz,2H),6.98(d,J＝8.4Hz,2H),6.51(s,1H),6.44(s,2H),5.11(s,2H),3.87(s,3H),3.68(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ158.0,153.0,142.8,139.9,137.9,136.5,133.6,128.6,128.1,127.4,126.8,100.8,115.1,106.8,106.0,70.2,60.9,56.0.HRMS m/z:calcdfor:C25H25N2O4[M+H]+417.1814,found 417.1814.
实施例45化合物B10的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-硝基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B10。Yield:66.8％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(d,J＝8.5Hz,2H),7.75(s,1H),7.52(d,J＝8.5Hz,2H),6.53(s,1H),6.44(s,2H),3.87(s,3H),3.71(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.5,145.8,144.9,143.5,141.6,138.7,100.3,124.5,124.3,109.5,106.2,61.0,56.2.HRMS m/z:calcd for:C18H18N3O5[M+H]+356.1246,found 356.1247.
实施例46化合物B11的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择2-硝基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B11。Yield:99.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝7.9Hz,1H),7.72(s,1H),7.59(t,J＝7.5Hz,1H),7.52(t,J＝7.7Hz,1H),7.34(d,J＝7.7Hz,1H),6.53(s,1H),6.43(s,2H),3.83(s,3H),3.64(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.2,146.1,144.3,141.6,138.4,133.6,133.1,129.6,129.2,124.8,124.6,107.2,105.9,60.9,56.0.HRMS m/z:calcd for:C18H18N3O5[M+H]+356.1246,found 356.1248.
实施例47化合物B12的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-肼基苯甲酸甲酯盐酸盐，经过2步得到化合物B12。Yield:99.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.00(d,J＝8.4Hz,2H),7.70(s,1H),7.39(d,J＝8.4Hz,2H),6.48(s,1H),6.40(s,2H),3.88(s,3H),3.83(s,3H),3.65(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ166.2,153.2,143.6,143.2,140.9,138.3,130.2,128.6,100.5,124.5,108.4,106.2,60.9,56.0,52.2.HRMS m/z:calcd for:C20H21N2O5[M+H]+369.1450,found369.1449
实施例48化合物B13的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-氯苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B13。Yield:61.7％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(s,1H),7.32(d,J＝8.5Hz,2H),7.27(d,J＝8.4Hz,2H),6.49(s,1H),6.41(s,2H),3.86(s,3H),3.68(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.2,143.0,140.5,138.6,138.2,133.1,129.0,126.4,100.5,107.8,106.1,60.9,56.0.HRMS m/z:calcd for:C18H18ClN2O3[M+H]+345.1006,found 345.1042.
实施例49化合物B14的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择5-肼基-2-甲氧基吡啶盐酸盐，经过2步得到化合物B14。Yield:85.0％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.13(s,1H),7.73(s,1H),7.59(d,J＝8.7Hz,1H),6.77(d,J＝8.8Hz,1H),6.51(s,1H),6.43(s,2H),3.95(s,3H),3.87(s,3H),3.71(s,6H).HRMS m/z:calcd for:C18H20N3O4[M+H]+342.1454,found 342.1459.
实施例50化合物B15的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择1-萘肼盐酸盐，经过2步得到化合物B15。Yield:99.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(t,J＝9.1Hz,2H),7.86(s,1H),7.54–7.45(m,4H),7.41(d,J＝7.0Hz,1H),6.68(s,1H),6.33(s,2H),3.75(s,3H),3.41(s,6H).HRMS m/z:calcd for:C22H21N2O3[M+H]+361.1552,found 361.1571.
实施例51化合物B16的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-溴苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B16。Yield:99.1％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(s,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,2H),7.22(d,J＝8.6Hz,2H),6.49(s,1H),6.41(s,2H),3.87(s,3H),3.70(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.2,143.0,140.5,139.1,138.2,131.9,126.6,100.5,121.0,107.9,106.1,60.9,56.0.HRMS m/z:calcd for:C18H18BrN2O3[M+H]+389.0501,found 389.0529.
实施例52化合物B17的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-加磺酰基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B17。Yield:51.9％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.78(s,1H),7.58(d,J＝8.4Hz,2H),6.54(s,1H),6.44(s,2H),3.90(s,3H),3.72(s,6H),3.07(s,3H).HRMS m/z:calcd for:C19H21N2O5S[M+H]+389.1171,found 389.1163.
实施例53化合物B18的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-甲氧基苄肼盐酸盐，经过2步得到化合物B18。Yield:72.4％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.59(s,1H),7.03(d,J＝8.3Hz,2H),6.83(d,J＝8.4Hz,2H),6.49(s,2H),6.33(s,1H),5.30(s,2H),3.88(s,3H),3.76(s,3H),3.73(s,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ159.0,153.2,143.7,139.1,138.2,130.0,128.0,126.1,114.0,106.2,60.9,56.0,55.3,52.8.HRMS m/z:calcd for:C20H23N2O4[M+H]+355.1658,found 355.1688.
实施例54化合物B19的合成：
通过四氢锂铝还原化合物B12得到化合物B19。Yield:82.6％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.72(s,1H),7.32(q,J＝8.1Hz,4H),6.52(s,1H),6.43(s,2H),4.71(s,2H),3.87(s,3H),3.68(s,6H).152313C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.1,143.0,140.7,140.2,139.2,138.1,127.1,100.7,100.4,107.3,106.1,64.3,60.9,56.0.HRMS m/z:calcd for:C19H21N2O4[M+H]+341.1501,found 341.1523.
实施例55化合物B20的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-氰基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B20。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.63(d,J＝8.5Hz,2H),7.47(d,J＝8.5Hz,2H),6.52(s,1H),6.42(s,2H),3.87(s,3H),3.70(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.4,143.3,141.4,138.6,132.8,129.9,128.3,100.3,124.9,118.2,110.5,109.1,106.2,61.0,56.1.HRMS m/z:calcd for:C19H18N3O3[M+H]+336.1348,found 336.1374.
实施例56化合物B21的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-磺酰氨基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B21。Yield:86.4％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.90(d,J＝8.3Hz,2H),7.75(s,1H),7.50(d,J＝8.5Hz,2H),6.52(s,1H),6.42(s,2H),4.88(s,2H),3.88(s,3H),3.70(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.4,143.4,141.3,140.2,138.5,127.3,125.4,124.9,108.9,106.2,61.0,56.2.HRMS m/z:calcd for:C18H20N3O5S[M+H]+390.1124,found 390.1106.
实施例57化合物B22的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择4-苯肼-N-甲基甲烷磺酰胺盐酸盐，经过2步得到化合物B22。Yield:85.6％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.69(s,1H),7.36(q,J＝8.1Hz,4H),6.49(s,1H),6.40(s,2H),3.84(s,3H),3.66(s,6H),2.67(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.2,143.1,140.5,140.4,138.3,131.2,128.7,100.6,100.5,107.8,106.3,61.0,56.1,29.8.HRMS m/z:calcd for:C20H24N3O5S[M+H]+418.1437,found 418.1415.
实施例58化合物B23的合成：
通过氢气/钯碳的条件还原得到化合物B23。Yield:22.9％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(s,1H),7.08(t,J＝7.9Hz,1H),6.72(s,1H),6.61(d,J＝7.5Hz,2H),6.46(s,3H),3.85(s,3H),3.68(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.0,147.2,142.8,141.1,139.9,137.9,129.5,100.8,115.6,114.2,112.0,107.0,106.0,60.9,56.0.HRMS m/z:calcd for:C18H20N3O3[M+H]+326.1505,found 326.1531.
实施例59化合物B24的合成：
通过氢气/钯碳的条件脱苄基得到化合物B24。Yield:81.7％；1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.64(d,J＝2.0Hz,1H),7.13–7.11(m,2H),6.83(d,J＝8.8Hz,2H),6.58(d,J＝2.0Hz,1H),6.48(s,2H),3.75(s,3H),3.65(s,6H).13C NMR(100MHz,Methanol-d4)δ158.6,154.0,144.5,140.2,138.8,132.9,128.4,126.6,116.3,107.2,107.0,61.0,56.2.HRMS m/z:calcd for:C18H19N2O4[M+H]+327.1345,found 327.1362.
实施例60化合物B25的合成：
通过氢气/钯碳还原化合物B10得到化合物B25。Yield:90.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(d,J＝1.9Hz,1H),7.08(d,J＝8.7Hz,2H),6.63(d,J＝8.7Hz,2H),6.46(d,J＝1.9Hz,1H),6.43(s,2H),3.84(s,3H),3.68(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.0,146.1,142.7,139.6,137.7,131.5,126.8,126.0,114.9,106.5,106.0,60.9,56.0.HRMS m/z:calcd for:C18H20N3O3[M+H]+326.1505,found 326.1532.
实施例61化合物B26的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择3-硝基-4-甲氧基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B26。Yield:75.3％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝2.8Hz,1H),7.95(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.91(d,J＝2.5Hz,1H),7.18(d,J＝9.1Hz,1H),7.11(s,2H),6.75(d,J＝2.5Hz,1H),4.00(s,3H),3.96(s,6H),3.89(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.6,153.4,151.1,139.6,138.5,133.2,128.3,128.0,124.3,116.4,114.5,105.7,103.2,61.0,56.9,56.3.HRMS m/z:calcd for:C19H20N3O6[M+H]+386.1352,found 386.1343.
实施例62化合物B27的合成：
通过四氢锂铝还原化合物B26得到化合物B27。Yield:94.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝2.8Hz,1H),7.95(dd,J＝9.1,2.8Hz,1H),7.91(d,J＝2.5Hz,1H),7.18(d,J＝9.1Hz,1H),7.11(s,2H),6.75(d,J＝2.5Hz,1H),4.00(s,3H),3.96(s,6H),3.89(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.5,152.2,146.2,138.0,136.5,134.3,129.1,128.3,110.6,109.2,107.0,104.3,103.1,61,0,56.2,55.8.HRMS m/z:calcd for:C19H22N3O4[M+H]+356.1610,found 356.1639.
实施例63化合物B28的合成：
合成步骤参考实施例1，肼类试剂选择3-硝基-4-羟基苯肼盐酸盐，经过2步得到化合物B28。Yield:75.0％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.53(s,1H),8.46(d,J＝2.7Hz,1H),8.08(dd,J＝9.1,2.7Hz,1H),7.94(d,J＝2.5Hz,1H),7.30(d,J＝9.1Hz,1H),7.12(s,2H),6.77(d,J＝2.5Hz,1H),3.97(s,6H),3.90(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.6,153.5,153.3,138.6,133.4,133.2,128.7,128.2,128.1,121.2,114.4,105.8,103.2,61.0,56.3.HRMS m/z:calcd for:C18H18N3O6[M+H]+372.1196,found 372.1165.
实施例64化合物B29的合成：
通过氢气/钯碳还原化合物B11得到化合物B29。Yield:82.0％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.74(s,1H),7.14(t,J＝7.7Hz,1H),6.88(d,J＝7.8Hz,1H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),6.65(t,J＝7.6Hz,1H),6.55(s,1H),6.47(s,2H),3.81(s,3H),3.64(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ153.0,143.9,143.1,140.7,137.9,129.7,128.3,126.2,125.2,118.5,116.6,105.9,105.4,60.9,55.9.MS m/z:calcd for:C18H20N3O3[M+H]+326.2,found 326.2.
实施例65 3,4,5-三甲氧基苯基衍生物对肿瘤细胞抑制效果研究
本发明化合物的对肿瘤抑制效果采用如下方法测试所证明。
这些效果表明本发明化合物对肿瘤细胞抑制效果明显，其可用于治疗癌症。具体测试方法如下：
一、实验目的及原理
实验目的：采用CCK-8法检测3,4,5-三甲氧基苯基衍生物对肿瘤细胞增殖的抑制效果。
实验原理：CCK-8法是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的方法。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。采用酶联免疫检测仪检测450nM下的吸光度值(OD值)，可以根据吸光度值反应活细胞的数量，在一定范围内，OD值越小，则表明细胞活性越弱，药物的抑制增殖效果越好。
二、试剂基本信息
三、试剂配制
1、RPMI-1640完全培养基
使用时加入500mL RPMI-1640培养基加入50mL的胎牛血清，使其成完全培养基，即可用于细胞培养。
2、化合物配置
取高压灭菌后的EP管用于称取化合物，向EP管中加入对应量的DMSO，使液体成100mM的母液，并分别按比例稀释到64mM，16mM，4mM，1mM，0.25mM，0.0625mM，0.016mM，0.0039mM。使用时用相应量的培养基稀释1000倍，即可配成浓度为64μM，16μM，4μM，1μM，0.25μM，0.0625μM，0.016μM，0.0039μM的工作液。
四、实验过程
(1)取对数生长期的***细胞(Hela)、结肠癌细胞(HCT-116)、结肠癌细胞(SW-480)、肝癌细胞(HepG2)、MDA-MB-231(乳腺癌细胞)，消化，调整细胞数浓度为0.8-1×105个/mL，按100μL/孔接种到96孔板中。在37℃，5％ CO2细胞培养箱中培养过夜，待细胞贴壁。
(2)吸出原有培养基，每组加入不同浓度的化合物，每个化合物梯度浓度分别为64μM，16μM，4μM，1μM，0.25μM，0.0625μM，0.016μM，0.0039μM，每个处理3个重复。以0.1％的DMSO设为阴性对照组，以康普瑞汀A4(CA-4)作为阳性对照，以不加细胞和化合物作为空白对照，在细胞培养箱中继续培养48h。
(3)每孔加入10μL CCK-8溶液液，在37℃培养箱中孵育1-2h。
(4)用酶联免疫检测仪测定450nm下的吸光度值。
(5)按以下公式计算细胞生长抑制率：
抑制率＝[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100％
As：实验孔的吸光度(含细胞、CCK-8、化合物)
Ac：对照孔的吸光度(含细胞、CCK-8、无化合物)
Ab：空白孔的吸光度(不含细胞和化合物，含CCK-8)
结果见下表1和表2。
表1化合物对人结肠癌细胞生长的半数抑制浓度(μM)
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从表1可以看出，3,4,5-三甲氧基苯基衍生物中G26、G27和B25三个化合物均可以有效抑制HCT-116结肠癌细胞的生长，IC50分别为3.04、3.87和2.65μM，与阳性对照药CA-4相当(IC50为2.32μM)。
表2化合物对4种癌细胞生长的半数抑制浓度(μM)
/>
从表2可以看出，3,4,5-三甲氧基苯基衍生物中G26、G30和B25可以有效抑制肝癌细胞的生长，IC50分别为0.57、0.25和1.54μM，比阳性对照药CA-4强(IC50为1.36μM)。
实施例66体外抑制微管蛋白聚集实验
使用基于荧光的微管蛋白聚合测定试剂盒(Cat.#BK011P，Cytoskeleton，Inc.，USA)，根据制造商的方案测试了化合物对微管蛋白聚合的影响。将微管蛋白悬浮于冰冷的G-PEM缓冲液中(80mM PIPES，2mM MgCl2，0.5mM EGTA，1mM GTP，20％(v/v)甘油)，并加入到含有指定浓度的药物或空白的96孔板中。用酶标仪(FASCalibur，BD Biosciences，USA)在37℃以1分钟为间隔监测(发射波长：450nm，激发波长：360nm)90min的微管蛋白的聚合情况，将吸光度值转化为对微管聚合的抑制率，用SPSS软件计算IC50值。结果如图2所示，从图中可以看出，化合物G27的IC50值为2.2μM，化合物G28的IC50值为13.8μM，B25的IC50值为8.4uM，因此，化合物G27、G28和B25能在体外能够抑制微管蛋白的聚集。
实施例67体外肝微粒体代谢稳定性实验
将0.5μM化合物与肝微粒体(1mg/mL)保持在37℃下孵育。分别在第0,5,15,30,45分钟和60分钟每个时间点取100μL反应溶液。将200μL含有内标的乙腈加入100μL反应液中提取待测化合物。将得到的混合物离心，用LC-MS/MS对上层清液进行分析。结果如表格3所示，从表3中可以看出，B25在人肝微粒体的半衰期为106.2分钟，在大鼠肝微粒体的半衰期为6.9分钟，因此，与CA-4相比，化合物B25大大增加了代谢稳定性。
实施例68小鼠抑瘤实验
4-6周雄性裸鼠购买于北京生物科技有限公司。待测化合物用5％DMSO,40％PEG-300和55％生理盐水混合溶剂配制成浑浊液。将结肠癌细胞B16-F10打入6-8周的裸鼠腋下(100微升，含有2.5×106个细胞)，待肿瘤的体积达到100mm3时，开始用化合物通过口服灌胃给药，每天给药并称量小鼠体重，2周后，将小鼠杀掉，摘出肿瘤，记录肿瘤的体积，并取出肝脏和肾脏用于HE染色。
基于体外细胞活性实验以及肝微粒体稳定性实验，我们选择活性的最优化合物1b，研究其小鼠体内抑制肿瘤生长实验。基于实验室前期研究基础，我们选择建立了结肠癌细胞(HCT116)的C57/BL模型。24只小鼠分为4组，分别为空白组，阳性对照组(CA4)，给药组(50mg/Kg,100mg/Kg)。每只小鼠种植20万个HCT16癌细胞，待肿瘤长至100mm3时，对照组和给药组开始每天给药，并且隔天需要称量体重和测量肿瘤体积大小。给药20天后，杀掉小鼠，取出肿瘤组织，肝脏和肾脏组织。从图3中可以看出，化合物B25显著抑制了肿瘤的生长，浓度为50mg/Kg的化合物B25抑制率达到44.1％，而CA4对肿瘤的抑制率为31.4％。从图3可以看出，小鼠的体重基本没有变化，说明药物的毒性很小。从图4中的HE染色结果可以看出，化合物B25对肝脏和肾脏没有毒性。
Table 3.Half-Lives of B25 in liver microsomes of different species
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Claims (5)

1.3,4,5-三甲氧基苯基衍生物，其化学结构如下任一所示，
2.权利要求1所述的3,4,5-三甲氧基苯基衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗***、乳腺癌、肺癌或黑色素瘤的药物。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物包括3,4,5-三甲氧基苯基衍生物和医学上可接受的辅料。
5.一种抗肿瘤药物，其特征在于，含有权利要求1所述的3,4,5-三甲氧基苯基衍生物作为活性成分。
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Synthesis and biological evaluation of pyrimidine bridged combretastatin derivatives as potential anticancer agents and mechanistic studies;Bhupinder Kumar等;《Bioorganic Chemistry》;第78卷;130-140，尤其是第131页左列第1段至右列倒数第1段、第134页左列倒数第1段-右列第2段、第138页左列倒数第3段以及table1、scheme1、图7-8 *

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