CN115896191A - 一种磷脂型dha的制取方法及微胶囊包埋方法 - Google Patents

Abstract

一种磷脂型DHA的制取方法，包括下述步骤：（1）磷脂水解，得到水解磷脂；（2）制取DHA乙酯：将NaOH已完全溶解的NaOH‑无水乙醇混合液缓慢加入DHA油脂中反应，除去反应产物中的乙醇和水，得到脂肪酸乙酯；脂肪酸乙酯分子蒸馏得到DHA乙酯；（3）固定化脂肪酶酯交换反应：将DHA乙酯与水解磷脂混合，然后加入到填充有固定化脂肪酶的固定化酶柱中反应；（4）将步骤（3）获得的反应产物加入到冬化罐中冬化，过滤得到结晶状态的磷脂型DHA；（5）对步骤（4）获得结晶状态磷脂型DHA回温后进行分子蒸馏，重相即为磷脂型DHA。本发明的磷脂型DHA的制取方法有利于提高磷脂型DHA产品中DHA的含量，通过微胶囊包埋能够增加磷脂型DHA的氧化稳定性，延长其货架期。

Description

一种磷脂型DHA的制取方法及微胶囊包埋方法

技术领域

本发明涉及油脂改性技术领域，具体涉及一种磷脂型DHA的制取方法，以及磷脂型DHA的微胶囊包埋方法。

背景技术

当磷脂成分中的R1或R2脂酰基含有DHA时被称为磷脂型DHA。研究表明,磷脂型DHA在拥有磷脂和DHA各自功能特性的基础上具有多种生物学活性。磷脂型DHA具有增强DHA的抗氧化性，易于DHA储存；有利于DHA吸收；细胞膜透性增强；增强生物体抗逆性；抗炎作用等优势和功能。DHA和磷脂都是大脑和神经***的重要组成成分和营养成分，都能促进大脑和神经***的正常发育，保障神经***的正常功能。在对冠心病、炎症、自身免疫病、糖尿病和阿尔茨海默氏综合症等疾病的预防和治疗，以及促进婴幼儿大脑和视觉发育等生理功能方面，都具有明显优势，在食品、营养、医药和保健品等领域具有重要的营养价值和广阔的应用前景。

目前获得磷脂型DHA的方法主要有天然提取法、化学合成法、微生物发酵法及酶法。

天然的磷脂型DHA主要来自于海洋磷虾、深海鱼籽等海洋资源，通过有机萃取、柱层析、复合盐沉淀、超临界萃取、膜分离等方法进行分离生产。天然来源的磷脂型DHA面临着原材料枯竭、不利于可持续发展的问题，原料来源易波动且易受重金属污染，磷脂型DHA含量低，纯化成本高。

通过化学催化剂催化制备磷脂型DHA，反应剧烈，副产物多，产物存在安全隐患，仍需进一步开发出条件温和、毒性低且催化效果好的化学催化剂体系。

酶催化法具有位置特异性、可以选择特定位点进行反应、反应副产物少、反应条件温和、环境友好的优点，是人工合成磷脂型DHA的首选方法。但现有的酶催化法直接采用磷脂与DHA油脂进行酯交换反应，存在DHA的***率低的问题，获得的磷脂型DHA产品中DHA含量较低。

磷脂型DHA分子结构中DHA含不饱和双键，对光、热敏感，容易被氧化，在加工、储藏和运输过程中容易受到外界因素影响而氧化变质，产生不良气味，导致产品品质下降，货架期缩短。因此，如何保护磷脂型DHA，使其不易变质，延长货架期，也是磷脂型DHA生产中需要解决的关键问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种磷脂型DHA的制取方法以及微胶囊包埋方法，该制取方法有利于提高磷脂型DHA产品中DHA的含量，通过微胶囊包埋能够增加磷脂型DHA的氧化稳定性，延长其货架期。采用的技术方案如下：

一种磷脂型DHA的制取方法，其特征在于包括下述步骤：

（1）磷脂水解

磷脂进行水解反应，得到水解磷脂；

（2）制取DHA乙酯

按照DHA油脂与乙醇1:5-1:8的质量比例，先将DHA油脂加入到反应罐中，预热到50-70℃，然后将NaOH已完全溶解的NaOH-无水乙醇混合液缓慢加入DHA油脂中，在密闭条件下、在70-80℃下反应1-2小时；

在65-75℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉反应产物中的乙醇和水，得到脂肪酸乙酯；

将得到的脂肪酸乙酯在真空度小于10Pa、温度120-150℃的条件下分子蒸馏，并将分离出的重相再分子蒸馏2-3遍，得到DHA乙酯；

（3）固定化脂肪酶酯交换反应

将步骤（2）得到的DHA乙酯与步骤（1）得到的水解磷脂以3-6:1的摩尔比混合，然后加入到填充有固定化脂肪酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为DHA乙酯与水解磷脂质量总和的5-20%，反应8-16小时；

（4）冬化

将步骤（3）获得的反应产物加入到冬化罐中，搅拌速度为30-50rpm，每小时降低温度1-3℃，温度降低到4-8℃后保温12-24小时，过滤得到结晶状态的磷脂型DHA；

（5）分子蒸馏

对步骤（4）获得结晶状态磷脂型DHA回温熔化后进行分子蒸馏，重相即为磷脂型DHA。

步骤（1）中，磷脂水解的作用是去掉磷脂1位和2位中的部分或全部脂肪酸酰基。

优选步骤（1）中，磷脂进行水解反应，得到水解磷脂的方法是：向磷脂中加入质量为磷脂20-40%的纯化水，混合均匀，得到磷脂纯化水混合物；然后将磷脂纯化水混合物加入到填充有固定化酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为磷脂纯化水混合物的5-20%，在50-55℃下反应6-12小时；反应结束后用2-5倍体积的正己烷提取2-4次，水相在65-75℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉水，得到水解磷脂。步骤（1）中，用正己烷提取，主要是提取酶解生成的脂肪酸。

更优选步骤（1）中所用的固定化酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶中的一种或几种的组合。

优选步骤（2）中，整个反应过程中反应罐内部充氮气（将DHA油脂加入到反应罐中后，对反应罐内部抽真空后再充氮气），能够有效避免DHA的氧化。

优选步骤（2）中，NaOH-无水乙醇混合液中，无水乙醇与氢氧化钠的质量比例为40-60:1，其中NaOH溶解在无水乙醇中。

优选步骤（2）中，NaOH-无水乙醇混合液在60-120分钟内加完。通常匀速添加NaOH-无水乙醇混合液。

步骤（2）中，DHA油脂与乙醇1:5-1:8的质量比例，这里的乙醇是指NaOH-无水乙醇混合液中所含的乙醇。

步骤（2）中，脂肪酸乙酯分子蒸馏获得的重相为DHA乙酯；轻相主要有甘油、棕榈酸乙酯、油酸乙酯等。

优选步骤（3）中，整个酶解过程中固定化酶柱内部充氮气（对固定化酶柱内部抽真空后再充氮气），能够有效避免DHA的氧化。

优选步骤（3）中所用的固定化脂肪酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶中的一种或几种的组合。

优选步骤（4）中，过滤方式采用板框过滤。

经大量实验得出结论，固定化脂肪酶酯交换反应的产物在4-8℃温度下，未反应的DHA乙酯和产生的脂肪酸乙酯为液体，磷脂型DHA成结晶状态，因此通过过滤可将磷脂型DHA分离出来。过滤的透过液可采用步骤（2）的分子蒸馏方法，得到DHA乙酯，重新加以利用。

步骤（5）中，分子蒸馏的主要作用是去除剩余的脂肪酸乙酯，并具有去除异味的作用。

优选步骤（5）中，分子蒸馏的工作条件为：真空度为小于10Pa，进油量为10-20L/h，导热油温度为220-260℃；蒸馏2-3次。

本发明还提供上述方法制得的磷脂型DHA的微胶囊包埋方法，其特征在于包括下述步骤：

（1’）混合料液配制

按重量计配备以下物料：葡萄糖浆15-30%、变性淀粉20-50%、β-环糊精3-6%、卡拉胶2-4%、单双硬脂酸甘油酯1-3%、抗坏血酸钠1-3%，余量为上述磷脂型DHA的制取方法制得的磷脂型DHA；

然后将所配备的葡萄糖浆、变性淀粉、β-环糊精、卡拉胶、单双硬脂酸甘油酯、抗坏血酸钠和磷脂型DHA搅拌均匀，得到混合料液；

（2’）喷雾干燥

对步骤（1’）获得的混合料液进行均质处理后喷雾干燥，得到所需的磷脂型DHA微胶囊粉。

变性淀粉是由淀粉改性获得的，具有成膜性能好、低粘度、易雾化、易脱水干燥、粘壁少等优点，能够有效保护芯材磷脂型DHA。

β-环糊精（简称 β-CD）是由环糊精葡萄糖转移酶作用于淀粉所产生的一组环状糊精，由葡萄糖以 1，4-糖苷键形成互为椅式构象的环状低聚物。在结构中，葡萄糖单体形成一个不带还原基的闭合环型分子，形成中心部位疏水、外表面亲水的空穴，并且可与有机物分子相互作用形成包接络合物达到有效的包埋。β-CD对芯材可形成更为有效的保护，能够很好的阻止空气进入，非常适合应用于功能性油脂的包埋。油脂与β-CD紧密结合于空腔内，能大大减缓其在光、热和氧作用下发生反应的进程，从而提高油脂稳定性。

卡拉胶稳定性强，在热水中溶解度高，流动性好，干粉长期放置不易降解，凝固性好，具有极佳的隔氧能力。

优选步骤（2’）中，混合料液在20-40MPa的压力下进行均质处理，均质1-3次，每次均质20-30min。

优选步骤（2’）中，均质处理后在85-90℃下对混合料液灭菌20-30min，再进行喷雾干燥。

优选步骤（2’）中，采用压力喷雾干燥机进行喷雾干燥，喷雾压力为10-20MPa，进料温度 45-65℃，进料泵转速10-30rpm，进风温度为150-180℃，出风温度为70-85℃。

本发明具有如下的技术优点和效果：

1.本发明先对磷脂水解获得水解磷脂，去掉磷脂1位和2位中的部分或全部脂肪酸酰基，从而改善了磷脂酯化反应中DHA的***率低的问题，即提高步骤（2）制取DHA乙酯反应中DHA的***率。

2.本发明酯化反应中采用固定化酶柱，固定化脂肪酶易于与反应产物分离，能够提高酶的稳定性，有效地降低固定化脂肪酶的损失、可重复利用，实现了固定化脂肪酶的损失及酶活降低最小化、重复利用最大化，可大大提高反应效率，固定化脂肪酶的使用次数可达到30次以上，大大降低了用酶成本，同时脂肪酸利用率可达到90%以上。固定化酶还能有效提高其催化活性和立体选择性，从而可以增加产物的得率，提高产品质量。同时磷脂流动性差，通过固定化酶柱可以加压，可增大流速，有利于提高反应效率。

3.本发明采用分子蒸馏进行分离，真空度高，减少了DHA在高温下的氧化。本发明采用分子蒸馏技术制备磷脂型DHA，分子蒸馏蒸馏温度低、工作真空度高、物料受热时间短，不但分离效率高，分离成本较低，还有利于保护磷脂型DHA。

4.冬化和分子蒸馏均为纯物理方法分提，无化学试剂，特别是有机溶剂污染，绿色环保。

5.磷脂型DHA为油状，限制了其在固体饮料、液体饮料等方面的应用，对磷脂型DHA进行微胶囊粉进行微胶囊化，不仅增加了磷脂型DHA的氧化稳定性，还拓展了其应用范围。

微胶囊包埋技术能够延长和控制微囊内活性物质的释放，提高产品的稳定性和延长产品货架期，使其免受环境的影响，将不可溶的油脂隔离使其从液体油变成粉末状，同时也改变产品的外观形态使其便于携带和运输等特点。采用本发明的微胶囊包埋方法将磷脂型DHA包被起来，这不仅改善了DHA易被氧化特性，提高磷脂型DHA的稳定性，延长其货架期，而且微胶囊化后能在一定程度掩盖其特有的鱼油腥味，增强磷脂型DHA的可接受度，扩展其市场应用领域。

具体实施方式

实施例1

本实施例中，磷脂型DHA的制取方法包括下述步骤：

（1）磷脂水解

向磷脂中加入质量为磷脂30%的纯化水，混合均匀，得到磷脂纯化水混合物；然后将磷脂纯化水混合物加入到填充有固定化酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为磷脂纯化水混合物的15%，在55℃下反应8小时；反应结束后用2倍体积的正己烷提取4次，水相在75℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉水，得到水解磷脂；

本步骤（1）中所用的固定化酶为磷脂酶A1和脂肪酶435的组合（磷脂酶A1与脂肪酶435质量比例1:1）；

（2）制取DHA乙酯

按照DHA油脂与乙醇1:7的质量比例，先将DHA油脂加入到反应罐中，预热到70℃，然后将NaOH已完全溶解的NaOH-无水乙醇混合液缓慢加入DHA油脂中（NaOH-无水乙醇混合液中，无水乙醇与氢氧化钠的质量比例为50:1，其中NaOH溶解在无水乙醇中；NaOH-无水乙醇混合液在80分钟内匀速加完），在密闭条件下、在75℃下反应2小时；整个反应过程中反应罐内部充氮气（将DHA油脂加入到反应罐中后，对反应罐内部抽真空后再充氮气）；

在65℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉反应产物中的乙醇和水，得到脂肪酸乙酯；

将得到的脂肪酸乙酯在真空度1Pa、温度125℃的条件下分子蒸馏，并将分离出的重相再分子蒸馏3遍，得到DHA乙酯（经检测DHA含量为81.5%）；

（3）固定化脂肪酶酯交换反应

将步骤（2）得到的DHA乙酯与步骤（1）得到的水解磷脂以5:1的摩尔比混合，然后加入到填充有固定化脂肪酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为DHA乙酯与水解磷脂质量总和的10%，反应16小时；整个酶解过程中固定化酶柱内部充氮气（对固定化酶柱内部抽真空后再充氮气）；

本步骤（3）中所用的固定化脂肪酶为磷脂酶A1和脂肪酶435的组合（磷脂酶A1与脂肪酶435质量比例1:1）；

（4）冬化

将步骤（3）获得的反应产物加入到冬化罐中，搅拌速度为30rpm，每小时降低温度2℃，温度降低到6℃后保温12小时，过滤（采用板框过滤）得到结晶状态的磷脂型DHA；

（5）分子蒸馏

对步骤（4）获得结晶状态磷脂型DHA回温熔化后进行分子蒸馏，重相即为磷脂型DHA（经检测DHA含量为38.5%,磷脂含量96.3%）。

步骤（5）中，分子蒸馏的工作条件为：真空度为小于0.1Pa，进油量为20L/h，导热油温度为250℃；蒸馏3次。

本实施例中，上述方法制得的磷脂型DHA的微胶囊包埋方法包括下述步骤：

（1’）混合料液配制

按重量计配备以下物料：葡萄糖浆18%、变性淀粉26%、β-环糊精4%、卡拉胶2%、单双硬脂酸甘油酯1%、抗坏血酸钠1%，余量为上述磷脂型DHA的制取方法制得的磷脂型DHA；

然后将所配备的葡萄糖浆、变性淀粉、β-环糊精、卡拉胶、单双硬脂酸甘油酯、抗坏血酸钠和磷脂型DHA搅拌均匀，得到混合料液；

（2’）喷雾干燥

对步骤（1’）获得的混合料液进行均质处理后喷雾干燥，得到所需的磷脂型DHA微胶囊粉。

上述步骤（2’）中，混合料液在40MPa的压力下进行均质处理，均质2次，每次均质25min；均质处理后在85℃下对混合料液灭菌30min，再进行喷雾干燥（采用压力喷雾干燥机进行喷雾干燥，喷雾压力为20MPa，进料温度 60℃，进料泵转速30rpm，进风温度为170℃，出风温度为75℃）。

实施例2

本实施例中，磷脂型DHA的制取方法包括下述步骤：

（1）磷脂水解

向磷脂中加入质量为磷脂35%的纯化水，混合均匀，得到磷脂纯化水混合物；然后将磷脂纯化水混合物加入到填充有固定化酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为磷脂纯化水混合物的10%，在55℃下反应8小时；反应结束后用3倍体积的正己烷提取2次，水相在70℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉水，得到水解磷脂；

本步骤（1）中所用的固定化酶为磷脂酶A1和脂肪酶435的组合（磷脂酶A1与脂肪酶435质量比例1:2）；

（2）制取DHA乙酯

按照DHA油脂与乙醇1:6的质量比例，先将DHA油脂加入到反应罐中，预热到70℃，然后将NaOH已完全溶解的NaOH-无水乙醇混合液缓慢加入DHA油脂中（NaOH-无水乙醇混合液中，无水乙醇与氢氧化钠的质量比例为60:1，其中NaOH溶解在无水乙醇中；NaOH-无水乙醇混合液在100分钟内匀速加完），在密闭条件下、在75℃下反应2小时；整个反应过程中反应罐内部充氮气（将DHA油脂加入到反应罐中后，对反应罐内部抽真空后再充氮气）；

在65℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉反应产物中的乙醇和水，得到脂肪酸乙酯；

将得到的脂肪酸乙酯在真空度1Pa、温度120℃的条件下分子蒸馏，并将分离出的重相再分子蒸馏3遍，得到DHA乙酯（经检测DHA含量为80.5%）；

（3）固定化脂肪酶酯交换反应

将步骤（2）得到的DHA乙酯与步骤（1）得到的水解磷脂以4:1的摩尔比混合，然后加入到填充有固定化脂肪酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为DHA乙酯与水解磷脂质量总和的10%，反应16小时；整个酶解过程中固定化酶柱内部充氮气（对固定化酶柱内部抽真空后再充氮气）；

本步骤（3）中所用的固定化脂肪酶为磷脂酶A1和脂肪酶435的组合（磷脂酶A1与脂肪酶435质量比例1:2）；

（4）冬化

将步骤（3）获得的反应产物加入到冬化罐中，搅拌速度为30rpm，每小时降低温度2℃，温度降低到4℃后保温12小时，过滤（采用板框过滤）得到结晶状态的磷脂型DHA；

（5）分子蒸馏

对步骤（4）获得结晶状态磷脂型DHA回温熔化后进行分子蒸馏，重相即为磷脂型DHA（经检测DHA含量为37.6%，磷脂含量96.6%）。

步骤（5）中，分子蒸馏的工作条件为：真空度为0.1Pa，进油量为10L/h，导热油温度为260℃；蒸馏2次。

本实施例中，上述方法制得的磷脂型DHA的微胶囊包埋方法包括下述步骤：

（1’）混合料液配制

按重量计配备以下物料：葡萄糖浆16%、变性淀粉28%、β-环糊精3%、卡拉胶2%、单双硬脂酸甘油酯2%、抗坏血酸钠1%，余量为上述磷脂型DHA的制取方法制得的磷脂型DHA；

然后将所配备的葡萄糖浆、变性淀粉、β-环糊精、卡拉胶、单双硬脂酸甘油酯、抗坏血酸钠和磷脂型DHA搅拌均匀，得到混合料液；

（2’）喷雾干燥

对步骤（1’）获得的混合料液进行均质处理后喷雾干燥，得到所需的磷脂型DHA微胶囊粉。

上述步骤（2’）中，混合料液在40MPa的压力下进行均质处理，均质3次，每次均质20min；均质处理后在85℃下对混合料液灭菌30min，再进行喷雾干燥（采用压力喷雾干燥机进行喷雾干燥，喷雾压力为20MPa，进料温度65℃，进料泵转速30rpm，进风温度为160℃，出风温度为75℃）。

磷脂含量检测：GB/T 5537-2008 粮油检验 磷脂含量的测定。

DHA含量检测：DHA含量按GB 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 中规定的方法测定。

试验例

一、综述

DHA（二十二碳六烯酸）属多不饱和脂肪酸，易氧化变质，一旦氧化变质时会产生酸败的气味，影响产品品质及风味。DHA微胶囊粉是通过微胶囊技术将DHA油脂进行包埋，使DHA油脂隔绝空气而延长DHA油脂的氧化时间，但包埋中的DHA油脂一旦氧化变质也会产生酸败气味，因此DHA微胶囊粉的抗氧化性能可反映微胶囊粉的包埋指标及稳定性。

在油脂工业中通常采用Schaat烘箱法抗氧化性能实验，对油脂进行加速破坏性试验，研究油脂在应用中的稳定性问题，从而反映出油脂的货架寿命。参照中国油脂2000年第25卷第三期《抗坏血酸棕榈酸酯在不同油品中的抗氧化性能研究》（经验公式）。

温度与货架寿命系数关系

温度℃	62	52	42	32	22	12
							货架寿命系数	1	2	4	8	16	32

用Schaat烘箱法抗氧化性实验，在62℃恒温箱内实验一天相当于15℃时贮藏1个月。参照油脂工业的食用油脂抗氧化性能实验方法，对DHA微胶囊粉剂进行加速破坏性抗氧化稳定性测试，达到对产品质量及保质货架期的评价。

滋气味历来是食品最为直观的品性鉴定方式，是食品质量指标体系中的一个重要方面，而过氧化值能够直接反映微胶囊粉的包埋效果，是微胶囊粉稳定性的重要指标。

二、样品

实施例1的磷脂型DHA微胶囊粉；实施例2的磷脂型DHA微胶囊粉。

三、试验方法

取实施例1、2制得的磷脂型DHA微胶囊粉，用生产用铝箔袋分别进行分装（实施例1、2制得的磷脂型DHA微胶囊粉分别装6袋），真空封口，每袋约100g，置于62℃的烘箱中，每隔一定时间（如4天），取出一个样品，置于洁净无异味的器皿中，先闻其气味，再用温水漱口，品尝其味道，与未放入烘箱的对照样做比较，检验其味道变化情况，鉴定是否有酸败气味产生，并检测其含量、过氧化值。

检测方法：

DHA含量：按GB 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定 中规定的方法测定。

过氧化值：按GB 5009.227-2016 食品安全国家标准 食品中过氧化值的测定 中规定的方法测定。

四、试验结果

1、滋气味判断标准：无明显腥异味，0；有轻微腥异味，1；有明显腥异味，2；有较重腥异味，3。取5位评审人员的综合评定分数取整作为该样品的滋气味判断标准。

2、结果：见下表

五、结果分析

实施例1、2的磷脂型DHA微胶囊粉在62℃下储存第24天，滋气味基本没有发生明显的变化，测试其DHA含量和过氧化值，磷脂型DHA微胶囊粉的DHA含量没有出现明显变化，虽然过氧化值在储存过程有升高的趋势，但在第24天，过氧化值仍控制在5meq/kg以内。

六、结论

实施例1、2的磷脂型DHA微胶囊粉在62℃下储存24天，滋气味及DHA含量未发生明显变化，过氧化值仍控制在标准要求范围内。根据经验公式计算，62℃下储存一天相当于15℃储存一个月，可以推断，根据本发明工艺获得的DHA微胶囊粉至少有24个月的保质货架期。

Claims (10)

1.一种磷脂型DHA的制取方法，其特征在于包括下述步骤：

（1）磷脂水解

磷脂进行水解反应，得到水解磷脂；

（2）制取DHA乙酯

按照DHA油脂与乙醇1:5-1:8的质量比例，先将DHA油脂加入到反应罐中，预热到50-70℃，然后将NaOH已完全溶解的NaOH-无水乙醇混合液缓慢加入DHA油脂中，在密闭条件下、在70-80℃下反应1-2小时；

在65-75℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉反应产物中的乙醇和水，得到脂肪酸乙酯；

将得到的脂肪酸乙酯在真空度小于10Pa、温度120-150℃的条件下分子蒸馏，并将分离出的重相再分子蒸馏2-3遍，得到DHA乙酯；

（3）固定化脂肪酶酯交换反应

将步骤（2）得到的DHA乙酯与步骤（1）得到的水解磷脂以3-6:1的摩尔比混合，然后加入到填充有固定化脂肪酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为DHA乙酯与水解磷脂质量总和的5-20%，反应8-16小时；

（4）冬化

将步骤（3）获得的反应产物加入到冬化罐中，搅拌速度为30-50rpm，每小时降低温度1-3℃，温度降低到4-8℃后保温12-24小时，过滤得到结晶状态的磷脂型DHA；

（5）分子蒸馏

对步骤（4）获得结晶状态磷脂型DHA回温熔化后进行分子蒸馏，重相即为磷脂型DHA。

2.根据权利要求1所述的磷脂型DHA的制取方法，其特征是：步骤（1）中，磷脂进行水解反应，得到水解磷脂的方法是：向磷脂中加入质量为磷脂20-40%的纯化水，混合均匀，得到磷脂纯化水混合物；然后将磷脂纯化水混合物加入到填充有固定化酶的固定化酶柱中，固定化酶柱加酶量为磷脂纯化水混合物的5-20%，在50-55℃下反应6-12小时；反应结束后用2-5倍体积的正己烷提取2-4次，水相在65-75℃下采用薄膜蒸发器蒸发掉水，得到水解磷脂。

3.根据权利要求2所述的磷脂型DHA的制取方法，其特征是：

步骤（1）中所用的固定化酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶中的一种或几种的组合。

4.根据权利要求1-3任一项所述的磷脂型DHA的制取方法，其特征是：

步骤（2）中，整个反应过程中反应罐内部充氮气；

步骤（2）中，NaOH-无水乙醇混合液中，无水乙醇与氢氧化钠的质量比例为40-60:1，其中NaOH溶解在无水乙醇中；

步骤（2）中，NaOH-无水乙醇混合液在60-120分钟内加完。

5.根据权利要求1-3任一项所述的磷脂型DHA的制取方法，其特征是：步骤（3）中所用的固定化脂肪酶为磷脂酶A1、磷脂酶A2和脂肪酶中的一种或几种的组合。

6.根据权利要求1-3任一项所述的磷脂型DHA的制取方法，其特征是：

步骤（3）中，整个酶解过程中固定化酶柱内部充氮气。

7.根据权利要求1-3任一项所述的磷脂型DHA的制取方法，其特征是：步骤（4）中，过滤方式采用板框过滤。

8.根据权利要求1-3任一项所述的磷脂型DHA的制取方法，其特征是：步骤（5）中，分子蒸馏的工作条件为：真空度为小于10Pa，进油量为10-20L/h，导热油温度为220-260℃；蒸馏2-3次。

9.权利要求1-8任一项所述的方法制得的磷脂型DHA的微胶囊包埋方法，其特征在于包括下述步骤：

（1’）混合料液配制

按重量计配备以下物料：葡萄糖浆15-30%、变性淀粉20-50%、β-环糊精3-6%、卡拉胶2-4%、单双硬脂酸甘油酯1-3%、抗坏血酸钠1-3%，余量为权利要求1的制取方法制得的磷脂型DHA；

然后将所配备的葡萄糖浆、变性淀粉、β-环糊精、卡拉胶、单双硬脂酸甘油酯、抗坏血酸钠和磷脂型DHA搅拌均匀，得到混合料液；

（2’）喷雾干燥

对步骤（1’）获得的混合料液进行均质处理后喷雾干燥，得到所需的磷脂型DHA微胶囊粉。

10.根据权利要求9所述的方法制得的磷脂型DHA的微胶囊包埋方法，其特征在于：

步骤（2’）中，混合料液在20-40MPa的压力下进行均质处理，均质1-3次，每次均质20-30min；

步骤（2’）中，均质处理后在85-90℃下对混合料液灭菌20-30min，再进行喷雾干燥；

步骤（2’）中，采用压力喷雾干燥机进行喷雾干燥，喷雾压力为10-20MPa，进料温度 45-65℃，进料泵转速10-30rpm，进风温度为150-180℃，出风温度为70-85℃。