CN115873596B - 发光碳纳米材料及其在骨源性碱性磷酸酶检测中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种发光碳纳米材料，采用如下方法制备得到：制备氮掺杂碳点；将制备好的氮掺杂碳点与锆氧簇进行配位聚集，得到锆配位的碳点树枝状大分子（Zr‑CD DRs）即为所述发光碳纳米材料。该发光碳纳米材料的电化学发光效率高于氮掺杂碳点的电化学发光效率。本发明还公开了一种电化学发光免疫传感器，包括含Zr‑CD DRs的免疫传感器和含镍酚配位纳米球（Ni‑PCS）的探针；所述Zr‑CD DRs为电化学发光信号标签和电极修饰材料，所述Ni‑PCS为信号猝灭材料。该电化学发光免疫传感器在骨源性碱性磷酸酶检测时具有优异的灵敏度、特异性、稳定性和临床实用性。
Description
技术领域
本发明涉及一种发光碳纳米材料及其在骨源性碱性磷酸酶检测中的应用，属于电化学发光传感器领域。
背景技术
骨源性碱性磷酸酶(BALP)由成骨细胞分泌，主要反映成骨细胞的活性和功能，是骨形成的重要指标。目前，BALP检测的主要方法依赖于酶联免疫吸附试验(ELISA)和比色法。然而，传统的免疫识别检测BALP的方法存在灵敏度差、操作复杂、反应条件苛刻等问题。因此，非常需要开发简单、无酶和灵敏的BALP检测技术。
电化学发光(ECL)免疫分析法由于其灵敏度高、背景低、特异性好而被广泛使用。碳点(CDs)作为一类新兴的发光碳纳米材料，具有低廉的成本、良好的生物相容性和易于制备等突出优势。研究发现CDs的发光性能很大程度上取决于其超小的尺寸和表面官能团。因此，CDs尺寸的增加会显著降低发光效率。另外，传统的富集和固载策略如静电吸附和共价交联在CDs实际拓展应用中可能会使CDs的粒径因聚集而变大，从而导致聚集诱导的发光猝灭效应。鉴于该特性，在富集CDs并保持合适距离是保留CDs高发光效率的关键，因此可利用有机聚合物封装来富集CDs。然而，有机聚合物阻碍了CDs和共反应剂之间的相互作用，从而降低了ECL性能，这限制了其在ECL生物分析中的进一步应用。因此，上述方法无法在富集和固载CDs的同时保持甚至提高ECL效率。
发明内容
本发明提供了一种发光碳纳米材料，可在固载CDs的同时保持或提高ECL效率。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是一种发光碳纳米材料，采用如下方法制备得到：制备氮掺杂碳点；将制备好的氮掺杂碳点与锆氧簇进行配位聚集，得到锆配位的碳点树枝状大分子(Zr-CD DRs)即为所述发光碳纳米材料。
进一步地，所述氮掺杂碳点以柠檬酸和水合肼为原料，采用溶剂热法进行合成。
进一步地，所述溶剂热法合成氮掺杂碳点具体包括以下步骤：将柠檬酸溶于二甲基甲酰胺(DMF)中，然后在搅拌条件下逐滴将水合肼加入DMF溶液中形成混合物；将所述混合物转移到内衬为聚四氟乙烯的高压反应釜中进行溶剂热反应，反应完成后冷却至室温并离心取上层溶液获得。
进一步地，所述氮掺杂碳点与锆氧簇配位聚集具体包括以下步骤：将ZrOCl2·8H2O溶解在含有氮掺杂碳点的DMF中，加热冷却至室温后分离获得。
本发明还提供了一种电化学发光免疫传感器，包括含Zr-CD DRs的免疫传感器和含镍酚配位纳米球(Ni-PCS)的探针；所述Zr-CD DRs为电化学发光信号标签和电极修饰材料，所述Ni-PCS为信号猝灭材料。
进一步地，所述含Zr-CD DRs的免疫传感器为BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器，由如下步骤制备得到：S1.将Zr-CD DRs分散在壳聚糖溶液后，滴加到预处理过的玻碳电极表面，得到Zr-CD DRs/CS修饰的电极；S2.将银纳米颗粒(AgNPs)溶液滴在所述Zr-CDDRs/CS修饰电极表面，得到AgNPs/Zr-CD DRs/CS修饰的电极；S3.将BALP抗体(Ab1)滴加至步骤S2中获得的AgNPs/Zr-CD DRs/CS修饰的电极表面，得到Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS修饰的电极；S4.将封闭剂BSA溶液滴加到步骤S3中获得的Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS修饰的电极表面，得到所述BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器。
进一步地，所述含镍酚配位纳米球(Ni-PCS)的探针为Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针，所述Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针由如下步骤制备得到：通过甲醛辅助金属配体交联法合成Ni-PCS；将所述Ni-PCS溶液分散在含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的去离子水中混合后，加入H2PtCl6，轻微搅拌后再加入还原剂NaBH4反应，分离后得到铂纳米颗粒功能化的镍酚配位纳米球(Pt@Ni-PCS)；将所述Pt@Ni-PCS重新分散在PBS中，先后加入BALP抗体(Ab2)和BSA溶液，获得Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针。
本发明提供了一种骨源性碱性磷酸酶的检测方法，包括以下步骤：将上述电化学发光免疫传感器作为工作电极与电化学发光检测仪连接；以磷酸盐缓冲溶液(PBS)作为检测底液，在所述PBS中加入共反应剂三乙胺(TEA)进行检测；在电化学发光检测仪的预设条件下，通过电化学发光法检测不同浓度的BALP产生的电化学发光信号强度。
进一步地，所述电化学发光检测仪为超微弱电致化学发光仪。
进一步地，所述预设条件包括光电倍增管高压为800V，电化学工作站循环伏安扫描电位范围为0.2～0.8V，扫描速率为0.2V/s。
本发明所制备的发光碳纳米材料与传统的发光材料相比，Zr-CD DRs具有较小的生物毒性和优异的发光性能；锆氧簇配位富集CDs合成方法使得CDs之间更加稳定，ECL量子效率得到明显提升，CDs的ECL信号得以进一步提高。
本发明所制备的电化学发光免疫传感器在合成过程中采用了镍酚配位纳米球(Ni-PCS)，由于Ni-PCS具有较大的比表面积，为原位合成铂纳米颗粒提供大量的活性位点，进一步固载抗体(Ab2)；且Ni-PCS对Zr-CD DRs/TEA体系具有显著的猝灭效果，从而提高传感器的检测灵敏度。
进一步地，将Zr-CD DRs作为发光材料，Pt@Ni-PCS作为猝灭材料制得的电化学发光免疫传感器，在检测骨源性碱性磷酸酶时具有优异的灵敏度、特异性、稳定性和临床实用性，线性范围1pg/mL～50ng/mL，检测限为24.9fg/mL。
附图说明
图1为本发明实施例中检测BALP的原理图，其中图1A为Zr-CD DRs的制备，图1B为Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针的制备；
图2为本发明实施例1中Zr-CD DRs的形貌图像，其中图2A为Zr-CD DRs的扫描电子显微镜图像，且包含局部放大的Zr-CD DRs扫描电子显微镜图像(标尺为500nm)；图2B为Zr-CD DRs的透射电子显微镜图像；
图3为本发明实施例2中Ni-PCS和Pt@Ni-PCS的形貌图像，其中图3A为Ni-PCS的透射电子显微镜图像，图3B为Pt@Ni-PCS的透射电子显微镜图像，图3C为局部放大的Pt@Ni-PCS透射电子显微镜图像；
图4为实施例2中BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器构建过程表征图，其中，图4A为ECL强度-时间曲线，图4B为电化学阻抗曲线；
图5为MDA-MB-468细胞与不同浓度的CDs和Zr-CD DRs孵育48小时后的存活率；
图6为实施例1中材料ECL强度与电流关系的校准曲线，其中图6A为CDs的ECL强度与电流关系的校准曲线；图6B为Zr-CD DRs的ECL强度与电流关系的校准曲线；
图7为实施例2中用于检测BALP的电化学发光免疫传感器的ECL强度与BALP浓度的关系。其中，图7A为采用电化学发光免疫传感器检测不同浓度BALP的电化学发光强度-时间曲线；图7B为电化学发光免疫传感器的ECL强度与BALP浓度对数的关系，BALP浓度：a＝1pg/mL，b＝10pg/mL，c＝100pg/mL，d＝1ng/mL，e＝10ng/mL，f＝50ng/mL；
图8为实施例2中用于检测BALP的电化学发光免疫传感器对不同非靶标蛋白的ECL强度；
图9为实施例2中用于检测BALP的电化学发光免疫传感器在检测10pg/mL和10ng/mL BALP时，连续扫描10个周期的电化学发光信号曲线图。
具体实施方式
为了更好的理解本发明的实质，下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步的阐述。
本发明提供的一种发光碳纳米材料，采用如下方法制备得到：制备氮掺杂碳点；将制备好的氮掺杂碳点与锆氧簇进行配位聚集，得到锆配位的碳点树枝状大分子(Zr-CDDRs)，即为所述发光碳纳米材料。所述Zr-CD DRs的形貌结构如图2所示。
在本发明中，配位诱导碳点聚集是通过锆离子和碳点表面丰富的羧基之间的配位作用来实现的。通过锆氧簇与碳点的羧基之间的配位作用聚集形成锆配位的碳点树枝状大分子(Zr-CD DRs)，可实现碳点的高效、稳定富集。与分散的碳点相比，Zr-CD DRs中的锆氧簇作为隔离带使得单独的碳点之间保持合理距离以抑制其聚集猝灭效应，从而产生强而稳定的ECL信号，使得ECL效率显著提高。
其中，氮掺杂碳点以柠檬酸和水合肼为原料，采取溶剂热法进行合成。
本发明提供了一种电化学发光免疫传感器，包括含Zr-CD DRs的免疫传感器和镍酚配位纳米球(Ni-PCS)；所述Zr-CD DRs为ECL信号标签和电极修饰材料，所述Ni-PCS为信号猝灭材料，从而形成一种高灵敏度电化学发光免疫传感器，如图1所示。
具体而言，免疫传感器的制备是以Zr-CD DRs为基底材料，将Zr-CD DRs和银纳米颗粒(AgNPs)依次组装到电极表面，然后先后采用BALP抗体(Ab1)和BSA进行修饰构建BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器。在本发明的部分实施例中，采用了壳聚糖(CS)作为成膜剂将Zr-CD DRs固定于电极表面并吸附导电性良好的AgNPs，以此来固载抗体。
如图3所示，本发明采用了具有较大比表面积的镍酚配位纳米球(Ni-PCS)，并将其作为铂纳米颗粒的载体，以铂纳米颗粒作为活性位点固载抗体，同时Ni-PCS对Zr-CD DRs/TEA体系有高效的猝灭作用，从而实现免疫传感器的高灵敏度检测。
本发明在采用电化学发光免疫传感器对BALP进行检测时，在三乙胺(TEA)作为共反应剂的辅助下，Zr-CD DRs修饰的电化学发光免疫传感器可获得较强的ECL信号。在BALP存在时，利用夹心免疫反应将Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针引入到修饰电极界面。由于Pt@Ni-PCS对Zr-CD DRs/TEA体系的猝灭作用，从而获得低的ECL信号。随着BALP浓度的增加，ECL信号逐渐降低，从而实现了对BALP的高灵敏检测。
实施例1
1、一种发光碳纳米材料，其制备步骤如下：
(1)制备氮掺杂碳点。
将2.1g柠檬酸溶于10mL的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，然后在搅拌条件下逐滴将1.0mL水合肼加入到上述溶液中，然后将上述混合物转移到内衬为聚四氟乙烯的不锈钢高压反应釜中进行溶剂热反应。在180℃烘箱中加热处理反应12小时后冷却至室温，随后将获得的棕黑色溶液进行离心(12000rpm，10分钟)以去除大颗粒残留物。离心后的上层溶液在去离子水中透析48小时后，在60℃下干燥，将得到的氮掺杂碳点(CDs)粉末储存在密闭棕色容器中并放入4℃以供进一步使用。
(2)制备锆配位的碳点树枝状大分子材料(Zr-CD DRs)。
将ZrOCl2·8H2O(30mg)溶解在含有上述合成的氮掺杂碳点(CDs)的10mL DMF中(1mg/mL)。将混合物在90℃油浴中加热搅拌5小时后自然冷却至室温。随后将产物离心洗涤，得到Zr-CD DRs。最后将Zr-CD DRs沉淀置于60℃干燥后储存于4℃以供进一步使用。
为了证实Zr-CD DRs的成功合成，用扫描电子显微镜对其形貌进行了表征。如图2A所示，Zr-CD DRs的形貌为不规则的多层珊瑚状结构。此外，还用透射电子显微镜对制备的Zr-CD DRs的形貌结构进行表征(图2B)。透射电子显微镜图像显示其结构为多层珊瑚状，与扫描电子显微镜图像结果相同。
2、对上述制备的Zr-CD DRs进行生物毒性试验。
生物相容性是评价生物材料在生物医学应用中是否适用的一个重要参数。为评价CDs以及Zr-CD DRs作为良好生物医用材料的可行性，本发明采用CCK-8实验检测步骤(2)中制备的CDs和Zr-CD DRs对体外培养的人乳腺癌细胞(MDA-MB-468)的细胞毒性作用，其结果如图5所示。由图5的结果可知，在不同浓度组(10、50、100和500μg/mL)的细胞样品中，Zr-CDDRs的细胞存活率均显著高于分散的CDs。另外，经Zr-CD DRs孵育48小时后，细胞存活率约为75％，高于1.0μg/mL金纳米颗粒组的细胞存活率，显示了其较低的细胞毒性。
3、对上述制备的Zr-CD DRs的ECL量子效率进行验证。
电化学发光量子效率是量化ECL性能的重要参数，在电化学发光体系中ECL强度与法拉第电流成正比。通过计算获得Zr-CD DRs与CDs的相对ECL量子效率。
CDs和Zr-CD DRs体系分别的ECL强度与电流的定量关系由公式(1)和公式(2)得到：
ICDs＝kCDsiF＝2060.12i+3865.78 (1)
其中，ICDs为CDs的ECL强度，kCDs为CDs的线性响应曲线的斜率，iF为法拉第电流。
IZr-CD DRs＝kZr-CD DRsiF＝4241.51i+2983.87 (2)
其中，IZr-CD DRs为Zr-CD DRs的ECL强度，kZr-CD DRs为Zr-CDDRs的线性响应曲线的斜率。
Zr-CD DRs与CDs的相对ECL量子效率比值(Q)可由公式(3)得到：
其中，为Zr-CD DRs的ECL量子效率，/>为CDs的ECL量子效率。
由公式(1)至公式(3)可得，
结果表明，Zr-CD DRs的ECL量子效率相比CDs提高了2.1倍，说明锆氧团簇通过配位相互作用聚集CDs是提高ECL量子效率的有效途径。
实施例2
1、二抗-铂纳米功能化的镍酚纳米球(Ab2-Pt@Ni-PCS)猝灭探针的制备，其制备步骤如下：
(1)制备Ni-PCS
通过甲醛辅助金属配体交联法合成镍酚配位纳米球(Ni-PCS)。具体步骤如下：(i)将0.1g Pluronic F127溶解在4mL乙醇和23mL去离子水的混合溶液中。(ii)将0.25mL氨水溶液(25wt％)滴加到混合溶液中，搅拌1小时后加入0.1g单宁酸。(iii)待单宁酸完全溶解后，加入0.19mL甲醛溶液(37wt％)，继续搅拌24小时。(iv)将NiCl2溶液(0.05g NiCl2溶解于1mL去离子水中)加入到上述混合物溶液中，并继续搅拌24小时。(v)将混合溶液转移到高压反应釜中，在100℃烘箱中进行24小时的水热处理。(vi)将获得的产物(Ni-PCS)离心和洗涤(12000rpm，10分钟)，然后再分散在去离子水中并放入4℃以供进一步使用。Ni-PCS呈均匀的球形，直径约500nm，表面粗糙，如图3A所示。
(2)制备Pt@Ni-PCS
在获得Ni-PCS后，继续合成铂纳米颗粒功能化的镍酚类配位球(Pt@Ni-PCS)。具体步骤如下：(i)将0.5mL制备的Ni-PCS溶液分散在1.5mL含有25mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的去离子水中。(ii)搅拌30分钟后，加入2.4mL H2PtCl6(0.3mM)，并继续搅拌10分钟。(iii)再将0.125mL NaBH4(3mM)滴入上述溶液中，并反应30分钟。(iv)混合溶液离心(12000rpm，10分钟)并用乙醇洗涤3次。(v)将得到的最终产物Pt@Ni-PCS重新分散在去离子水中并放入4℃储存以供进一步使用。
如图3B和图3C，直径约为5nm的铂纳米颗粒均匀分布在球体表面，表明成功合成了Pt@Ni-PCS。
(3)制备Ab2-Pt@Ni-PCS
将100μL BALP抗体(Ab2，10μg/mL)滴入1mL上述制备的Pt@Ni-PCS溶液中，然后在4℃下搅拌12小时，接着用BSA溶液(0.5wt％)封闭非特异性吸附位点，最后将制备的Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针放入4℃储存以供进一步使用。
2、制备BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器
(1)将3.4mg AgNO3溶于20mL冷却至约10℃的去离子水中。随后，将4.53mg NaBH4和24mg柠檬酸钠的混合物加入上述AgNO3溶液中，并在冰浴中连续搅拌30分钟。最后，将制备的AgNPs溶液储存在棕色密闭容器中并放入4℃储存以供进一步使用。
(2)将直径为4mm的玻碳电极(GCE)用0.05μm氧化铝粉打磨抛光至镜面，再用去离子水洗涤干净；将Zr-CD DRs分散在0.1wt％壳聚糖(CS)溶液中，在完全分散后滴加到预处理过的GCE表面上。待自然晾干后，得到稳定的Zr-CD DRs/CS薄膜。随后将10μL AgNPs溶液滴在Zr-CD DRs/CS修饰的GCE表面，在室温孵育4小时。接着将10μL 10μg/mL BALP抗体(Ab1)滴加至修饰电极表面并在4℃下反应8小时。最后将10μL BSA(0.25wt％)溶液滴加到修饰电极上，在4℃下孵育40分钟封闭非特异性吸附位点，制得BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器。
(3)步骤(2)中所制备的免疫传感器的电化学发光和电化学阻抗表征。
为了验证电极的修饰过程，在含有共反应物TEA的PBS中对不同修饰程度的电极进行ECL表征，如图4A所示，其中a为裸GCE，b为Zr-CD DRs/CS/GCE，c为AgNPs/Zr-CD DRs/CS/GCE,d为Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS/GCE，e为BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS/GCE，f为BALP/BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS/GCE，g为Ab2-Pt@Ni-PCS/BALP/BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS/GCE。
裸GCE电极表现出几乎可以忽略的ECL信号(曲线a)。将Zr-CD DRs/CS膜修饰在电极表面，获得了较强的ECL信号(曲线b)。接着在上述修饰电极上孵育AgNPs后，由于AgNPs具有良好的导电性，ECL信号进一步增强(曲线c)。随着Ab1、BSA和靶标BALP在修饰电极表面的连续孵育，ECL信号依次减弱(d-f曲线)。这种连续的ECL信号减弱是由于以上物质均是阻碍电子转移的非电活性物质。在通过夹心免疫反应引入Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针后，ECL信号显著降低(曲线g)，这是由于Ni-PCS能有效地猝灭Zr-CD DRs/TEA体系的ECL信号。上述的ECL信号变化表明免疫传感器的成功构建。
为了进一步评价电化学发光免疫传感器的制备是否成功，本发明在含0.1M KCl的5mM[Fe(CN)6]3-/4-体系中进行了电化学阻抗表征。如图4B所示，半圆的直径表示电子转移电阻(Ret)。由于自由电子转移，裸露GCE呈现出一个较小的半圆形区域(曲线a)。将Zr-CDDRs/CS修饰在GCE上后，观察到一个较大的半圆形区域(曲线b)，这表明导电性较差的壳聚糖阻碍了电子的转移。由于AgNPs具有良好的导电性，将AgNPs吸附在壳聚糖表面后，半圆形区域(曲线c)相较于曲线b减小。在用Ab1、BSA、BALP和Pt@Ni-PCS-Ab2猝灭探针连续修饰电极后，由于蛋白质作为惰性电子层的抑制作用，电阻依次增加(曲线d-g)。
综上电化学发光和电化学阻抗的表征，均显示免疫传感器的成功制备。
3、用于检测BALP的电化学发光免疫传感器的制备包括以下步骤：
(1)将一系列不同浓度的BALP标准溶液(10μL)滴涂在BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器的表面，并反应1小时，然后用PBS(pH 7.4)冲洗电极界面；
(2)将10μL上述所制备的Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针滴涂到电极表面，并置于4℃下反应1小时，然后用PBS(pH 7.4)冲洗，即制得用于检测BALP的电化学发光免疫传感器。
4、对上述制备的电化学发光免疫传感器的检测性能进行分析，结果如图7所示。其中，图7A显示了靶标BALP浓度在1pg/mL～50ng/mL范围内，本发明所制备的电化学发光免疫传感器随着靶标BALP浓度的增加，响应的ECL信号逐渐降低。同时相应的校准曲线(图7B)表明ECL信号与BALP的浓度呈对数相关，其线性方程为I＝-1122.75lg c+7385.0，其中I是ECL强度，c是靶标BALP浓度，相关系数(R2)为0.9979。由此通过计算可得本发明所制备的电化学发光免疫传感器检测限(LOD)为24.9fg/mL。综上所述，本发明制得的电化学发光免疫传感器在检测骨源性碱性磷酸酶时具有优异的灵敏度。
5、对上述制备的电化学发光免疫传感器的特异性以及稳定性进行评估。
本发明选择了甲胎蛋白(AFP)、层粘连蛋白(LN)、***特异性抗原(PSA)和人血清白蛋白(HSA)作为干扰蛋白进行检测。检测结果如图8所示，所述AFP、LN、PSA和HAS的浓度均为10ng/mL。
从图8可以看出，尽管干扰蛋白的浓度高达10ng/mL，但干扰蛋白的ECL强度仍保持在较高水平，与空白组无明显差异。而BALP的浓度在1ng/mL的情况下，ECL强度则显著降低。此外，含有1ng/mL BALP和10ng/mL干扰蛋白(AFP、LN、PSA和HSA)的混合物的ECL强度与单独1ng/mL BALP的ECL强度相近。上述结果均表明本发明所制备的电化学发光免疫传感器具有优异的特异性。
图9展示了本发明所制备的免疫传感器在检测10pg/mL和10ng/mL BALP时，连续扫描10个周期的ECL信号，图中ECL强度相对稳定，RSD分别为2.52％和0.92％，表明本发明所制备的电化学发光免疫传感器具有良好的稳定性。
实施例3
采用实施例2中制备的电化学发光免疫传感器对BALP进行检测，其步骤如下：
(1)参数设置：超微弱电致化学发光仪的光电倍增管高压设置为800V，电化学工作站循环伏安扫描电位范围设置为0.2～0.8V，扫描速率设置为0.2V/s；
(2)将Ag/AgCl电极作为参比电极、铂丝电极作为对电极、所制得的电化学发光传感器作为工作电极，连接在电化学发光检测仪的暗盒中，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起；
(3)在含有35mmol/L的共反应剂TEA的2mL 0.1mol/L PBS(pH 8.0)中进行检测，通过电化学发光法检测不同浓度的BALP产生的电化学发光信号强度；
(4)根据所得的电化学发光强度值与BALP浓度对数的线性关系，绘制工作曲线。
实施例4
采用实施例2中制备的电化学发光免疫传感器采用标准加入法检测血清中的骨源性碱性磷酸酶(BALP)，向稀释的血清中加入不同浓度的骨源性碱性磷酸酶，测定样品中骨源性碱性磷酸酶的平均回收率，结果见表1。
表1.标准加入法检测血清样品中的骨源性碱性磷酸酶。
表1检测结果可以看出，样品中骨源性碱性磷酸酶检测结果的回收率为95.7％～101.3％，表明本发明的电化学发光免疫传感器可以应用于实际生物样品的检测，且结果准确可靠。
以上仅为本发明的实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均包含在申请待批的本发明的权利要求范围之内。
Claims (10)
1.一种发光碳纳米材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将制备氮掺杂碳点的原料与二甲基甲酰胺(DMF)混合，形成含有氮掺杂碳点的DMF；将所述含有氮掺杂碳点的DMF与锆氧簇进行配位聚集，得到锆配位的碳点树枝状大分子(Zr-CD DRs)即为所述发光碳纳米材料。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述氮掺杂碳点以柠檬酸和水合肼为原料，采用溶剂热法进行合成；所述溶剂热法合成氮掺杂碳点具体包括以下步骤：
将柠檬酸溶于二甲基甲酰胺(DMF)中，然后在搅拌条件下逐滴将水合肼加入DMF溶液中形成混合物；
将所述混合物转移到内衬为聚四氟乙烯的高压反应釜中进行溶剂热反应，反应完成后冷却至室温并离心取上层溶液获得。
3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述氮掺杂碳点与锆氧簇配位聚集具体包括以下步骤：
将ZrOCl2·8H2O溶解在含有氮掺杂碳点的DMF中，加热冷却至室温后分离获得。
4.一种发光碳纳米材料，其特征在于，采用权利要求2所述方法制备得到。
5.一种电化学发光免疫传感器，其特征在于：包括含Zr-CD DRs的免疫传感器和含镍酚配位纳米球(Ni-PCS)的探针；所述Zr-CD DRs为电化学发光信号标签和电极修饰材料，所述Ni-PCS为信号猝灭材料；所述Zr-CD DRs为权利要求4所述的发光碳纳米材料；所述含Zr-CDDRs的免疫传感器为BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器；所述含镍酚配位纳米球(Ni-PCS)的探针为Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针。
6.根据权利要求5所述电化学发光免疫传感器，其特征在于：所述BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器，由如下步骤制备得到：
S1.将Zr-CD DRs分散在壳聚糖溶液后，滴加到预处理过的玻碳电极表面，得到Zr-CDDRs/CS修饰的电极；
S2.将银纳米颗粒(AgNPs)溶液滴在所述Zr-CD DRs/CS修饰电极表面，得到AgNPs/Zr-CD DRs/CS修饰的电极；
S3.将BALP抗体(Ab1)滴加至步骤S2中获得的AgNPs/Zr-CDDRs/CS修饰的电极表面，得到Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS修饰的电极；
S4.将封闭剂BSA溶液滴加到步骤S3中获得的Ab1/AgNPs/Zr-CDDRs/CS修饰的电极表面，得到所述BSA/Ab1/AgNPs/Zr-CD DRs/CS免疫传感器。
7.根据权利要求5所述电化学发光免疫传感器，其特征在于，所述Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针由如下步骤制备得到：
通过甲醛辅助金属配体交联法合成Ni-PCS；
将所述Ni-PCS溶液分散在含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的去离子水中混合后，加入H2PtCl6溶液，轻微搅拌后再加入还原剂NaBH4反应，分离后得到铂纳米颗粒功能化的镍酚配位纳米球(Pt@Ni-PCS)；将所述Pt@Ni-PCS重新分散在PBS中，先后加入BALP抗体(Ab2)和BSA溶液，获得Ab2-Pt@Ni-PCS猝灭探针。
8.一种骨源性碱性磷酸酶的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求5至7任意一项所述电化学发光免疫传感器作为工作电极与电化学发光检测仪连接；
以磷酸盐缓冲溶液(PBS)作为检测底液，在所述PBS中加入共反应剂三乙胺(TEA)进行检测；
在电化学发光检测仪的预设条件下，通过电化学发光法检测不同浓度的BALP产生的电化学发光信号强度。
9.根据权利要求8所述骨源性碱性磷酸酶的检测方法，其特征在于：所述电化学发光检测仪为超微弱电致化学发光仪。
10.根据权利要求8所述骨源性碱性磷酸酶的检测方法，其特征在于：所述预设条件包括光电倍增管高压为800V，电化学工作站循环伏安扫描电位范围为0.2～0.8V，扫描速率为0.2V/s。
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| CN107001031A (zh) * | 2014-10-14 | 2017-08-01 | 芝加哥大学 | 用于光动力疗法、x射线诱导的光动力疗法、放射疗法、化学疗法、免疫疗法及其任意组合的纳米颗粒 |
| CN110987843A (zh) * | 2019-11-19 | 2020-04-10 | 江苏大学 | 基于双金属mof纳米类氧化酶的磷酸根比色检测法 |
| CN112210365A (zh) * | 2019-07-11 | 2021-01-12 | 天津大学 | 一锅法制备纳米二氧化锆碳量子点复合材料的方法 |
| CN113429960A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-09-24 | 四川师范大学 | 一种可用于痕量Cu2+离子检测的碳量子点复合的UiO-66衍生物 |
| CN113441113A (zh) * | 2021-07-14 | 2021-09-28 | 武汉市第三医院 | 碳纳米点功能化锆基金属有机框架化合物复合材料及其制备方法 |
| CN114106825A (zh) * | 2021-12-17 | 2022-03-01 | 陕西工业职业技术学院 | 一种基于芝麻秸秆的硫磷共掺杂碳点@Zr-MOFs及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012129150A2 (en) * | 2011-03-18 | 2012-09-27 | University Of Maryland, Baltimore County | Metal-enhanced photoluminescence from carbon nanodots |
| US10806694B2 (en) * | 2014-10-14 | 2020-10-20 | The University Of Chicago | Nanoparticles for photodynamic therapy, X-ray induced photodynamic therapy, radiotherapy, radiodynamic therapy, chemotherapy, immunotherapy, and any combination thereof |
| EP3922976A4 (en) * | 2019-02-08 | 2022-04-06 | Asahi Kasei Kabushiki Kaisha | SENSOR |
-
2022
- 2022-11-10 CN CN202211406375.9A patent/CN115873596B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107001031A (zh) * | 2014-10-14 | 2017-08-01 | 芝加哥大学 | 用于光动力疗法、x射线诱导的光动力疗法、放射疗法、化学疗法、免疫疗法及其任意组合的纳米颗粒 |
| CN112210365A (zh) * | 2019-07-11 | 2021-01-12 | 天津大学 | 一锅法制备纳米二氧化锆碳量子点复合材料的方法 |
| CN110987843A (zh) * | 2019-11-19 | 2020-04-10 | 江苏大学 | 基于双金属mof纳米类氧化酶的磷酸根比色检测法 |
| CN113429960A (zh) * | 2021-07-05 | 2021-09-24 | 四川师范大学 | 一种可用于痕量Cu2+离子检测的碳量子点复合的UiO-66衍生物 |
| CN113441113A (zh) * | 2021-07-14 | 2021-09-28 | 武汉市第三医院 | 碳纳米点功能化锆基金属有机框架化合物复合材料及其制备方法 |
| CN114106825A (zh) * | 2021-12-17 | 2022-03-01 | 陕西工业职业技术学院 | 一种基于芝麻秸秆的硫磷共掺杂碳点@Zr-MOFs及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Quick and hassle‑free smartphone’s RGB‑based color to photocatalytic degradation rate assessment of malachite green dye in water by fluorescent Zr–N–S co‑doped carbon dots;Harshita Laddha等;《Environmental Science and Pollution Research》;第29卷;第56684–56695页 * |
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| Publication number | Publication date |
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