CN115813452A - 一种浓缩骨髓液提取方式 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种浓缩骨髓液提取方式，所述提取方法具体如下无菌条件下，在局部麻醉下进行骨髓穿刺术，于髂后上棘处骨穿针穿刺；预肝素化处理的注射器采集管抽出骨髓液注入预先准备好的肝素血袋中，直接经2um滤网初步过滤提取浓缩骨髓原液；浓缩骨髓原液采用密度梯度离心处理，弃上清和脂肪层，得到骨髓细胞；根据骨缺损或假体周围植骨具体情况移植骨髓浓缩物。该浓缩骨髓液提取方式，集合了收集、过滤、制备浓缩骨髓液产物等三个步骤，在骨髓提取过程中即完成了初步过滤，利用离心管道离心后即可得到浓缩骨髓液，可根据临床需求制备移植使用，极大简化了操作流程，避免了制备过程中的细菌污染，减轻了患者负担，缩短了患者住院时间。
Description
技术领域
本发明涉及细胞提取医疗相关技术领域，具体为一种浓缩骨髓液提取方式。
背景技术
骨髓液中含有大量的间充质干细胞、细胞生长因子，而应用富集骨髓干细胞技术可有助于骨缺损治疗，在骨不连、脊柱与关节融合、骨囊肿、假体周围植骨等方面也具有良好的治疗效果，临床治疗中的骨髓液通常是自体提取，现有的骨髓提取，主要是通过骨髓穿刺抽取完成。
现有如中国专利申请公布号为CN107012119A的一种在体外从骨髓中提取免疫细胞的方法，就是通过抽取骨髓液进行体外处理后在进行后续处理应用，还有如中国专利申请号为201810283166.7的一种提取骨髓间充质干细胞的方法及应用，主要用于实验室中的提取骨髓处理。
但是该类骨髓提取方式在应用于临床患者治疗时，存在一定问题，如传统的注射器一次能抽取的骨髓液的量是有限的，且收集的骨髓液需单独经过二次处理后才可进行下一步操作，由于过程较繁琐，时间较长，可能会造成污染，增加患者负担和治疗周期，同时一些实验室中提取骨髓通常需暴露髓腔，这会造成大量的骨髓丢失，且操作复杂，传统的实验室提取方式，由于时间较长，可造成骨髓细胞的活性下降甚至死亡，鉴于此，针对上述问题，深入研究，遂有本案产生。
针对上述问题，在原有浓缩骨髓液提取方式的基础上进行创新设计。
发明内容
本发明的目的在于提供一种浓缩骨髓液提取方式，以解决上述背景技术中提出临床浓缩骨髓液提取治疗周期长，步骤多容易造成污染，增加患者负担和治疗周期的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种浓缩骨髓液提取方式，所述提取方法具体如下：
S1、骨髓穿刺
无菌条件下，在局部麻醉下进行骨髓穿刺术，于髂后上棘处骨穿针穿刺；
S2、骨髓液的提取和直接过滤处理
预肝素化处理的注射器采集管抽出骨髓液注入预先准备好的肝素血袋中，无需送往实验室，直接经2um滤网初步过滤提取浓缩骨髓原液；
S3、骨髓液的浓缩分离
浓缩骨髓原液采用密度梯度离心处理，弃上清和脂肪层，得到骨髓细胞，留取部分细菌学检测，其余骨髓浓缩物进行临床移植；
S4、浓缩骨髓液临床移植
根据骨缺损或假体周围植骨具体情况移植骨髓浓缩物。
优选的，所述S1步骤中的骨髓穿刺取患者的髂后上棘为穿刺术点，基本消毒杀菌皮肤，戴无菌手套，铺消毒杀菌洞巾，随后用5ml注射器提取2％的利多卡因2ml，从皮肤至骨膜逐级浸润，进行局麻。
优选的，所述S1步骤中的骨髓穿刺用直径1.5mm的内含肝素骨髓穿刺套管针和采集管抽取骨髓血，持穿刺针通皮肤至骨膜，逐级穿进，抵达骨膜之后要上下转动，使骨髓穿刺针慢慢进到骨髓腔内，套管针从髂嵴穿入骨皮质，有突破感表明针尖已进入松质骨髓腔。
优选的，所述S2步骤中的骨髓液提取采集时在同一平面每旋转90°抽吸1次，每次2～5ml，然后沿髂翼内外板间向深层进针，每次加深约2cm，分次沿扇形不同方向刺入髂骨采集，在一个皮肤进针点合计采集50～60ml后，于间隔4～5cm处重新穿刺，继续采集。
优选的，所述S2步骤中的骨髓液提取过滤采用20毫升干燥无菌采集管两侧共抽取骨髓130毫升注入预先准备好的肝素血袋中，直接临床进行初步过滤处理。
优选的，所述S2步骤中的骨髓液提取采集过程中为避免过量采集造成损伤，提取骨髓液之后，要拔掉穿刺针，随后消毒杀菌穿刺术位置，遮盖纱布，让患者稍事休息。
优选的，所述S3步骤中的密度梯度离心处理过程转速3000r/min，时间5-10min，所得产物由内向外依次为：血浆层、骨髓有核细胞层和骨髓成熟红细胞层，BMSCs在离心中富集在骨髓有核细胞层，留取回植血3-5ml细菌学检测，其余作为移植骨髓浓缩物。
优选的，所述S3步骤中的骨髓液的浓缩分离进一步加入枸橼酸钠抗凝，加入至经过滤无菌的干细胞提取专用试剂中，经过密度梯度离心处理的干细胞分离提取技术进行浓缩提取分离。
优选的，所述S4步骤中提取的浓缩骨髓液可单独或联合新型生物材料如透明质酸或羟基磷灰石用以治疗骨缺损、骨不连、脊柱与关节融合、骨囊肿、假体周围植骨。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该浓缩骨髓液提取方式，
1、在临床上简化骨髓提取流程，由于过程较传统提取方式步骤耗时较长的问题有所改进，在简化步骤的同时减少了骨髓液受到污染的概率，提取的浓缩骨髓液可单独或联合新型生物材料如透明质酸或羟基磷灰石用以治疗骨缺损、骨不连、脊柱与关节融合、骨囊肿、假体周围植骨等，且该过程可在术中实现，可在术中进行骨髓液提取与植入，缩短了患者治疗周期，该方法同样可应用于小范围骨缺损或骨不连，患者无需住院即可进行操作，使得治疗过程更加便捷、高效；
2、该提取方式集合了收集、过滤、制备浓缩骨髓液产物等三个步骤，在骨髓提取过程中即完成了初步过滤，利用离心管道离心后即可得到浓缩骨髓液，下一步可根据临床需求制备不同的浓缩骨髓液产物，本方法极大简化了操作流程，避免了制备过程中的细菌污染，一期即可完成骨髓液提取与治疗，减轻了患者负担，缩短了患者住院时间。
附图说明
图1为本发明浓缩骨髓液提取流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明提供以下技术方案：
实施例1
一种浓缩骨髓液提取方式，提取方法具体如下：
S1、骨髓穿刺
无菌条件下，在局部麻醉下进行骨髓穿刺术，于髂后上棘处骨穿针穿刺；
骨髓穿刺取患者的髂后上棘为穿刺术点，基本消毒杀菌皮肤，戴无菌手套，铺消毒杀菌洞巾，随后用5ml注射器提取2％的利多卡因2ml，从皮肤至骨膜逐级浸润，进行局麻；
局麻后使用直径1.5mm的内含肝素骨髓穿刺套管针和采集管抽取骨髓血，持穿刺针通皮肤至骨膜，逐级穿进，抵达骨膜之后要上下转动，使骨髓穿刺针慢慢进到骨髓腔内，套管针从髂嵴穿入骨皮质，有突破感表明针尖已进入松质骨髓腔。
S2、骨髓液的提取和直接过滤处理
预肝素化处理的注射器采集管抽出骨髓液注入预先准备好的肝素血袋中，无需送往实验室，直接经2um滤网初步过滤提取浓缩骨髓原液；
骨髓液提取采集时在同一平面每旋转90°抽吸1次，每次4ml，然后沿髂翼内外板间向深层进针，每次加深约2cm，分次沿扇形不同方向刺入髂骨采集，在一个皮肤进针点合计采集55ml后，于间隔4cm处重新穿刺，继续采集；
采用20毫升干燥无菌采集管两侧共抽取骨髓130毫升注入预先准备好的肝素血袋中，直接临床进行初步过滤处理；
骨髓液提取采集过程中为避免过量采集造成损伤，提取骨髓液之后，要拔掉穿刺针，随后消毒杀菌穿刺术位置，遮盖纱布，让患者稍事休息。
S3、骨髓液的浓缩分离
浓缩骨髓原液采用密度梯度离心处理，弃上清和脂肪层，得到骨髓细胞，留取部分细菌学检测，其余骨髓浓缩物进行临床移植；
将骨髓抽吸液置于离心机(长沙骏逸实验仪器有限公司，长沙，中国)中进行密度梯度离心，设置转速3000r/min，时间5min，所得产物由内向外依次为：血浆层、骨髓有核细胞层和骨髓成熟红细胞层，BMSCs在离心中富集在骨髓有核细胞层，留取回植血4ml细菌学检测，其余作为移植骨髓浓缩物。
S4、浓缩骨髓液临床移
根据骨缺损情况联合新型生物材料羟基磷灰石配合移植骨髓浓缩物。
实施例2
一种浓缩骨髓液提取方式，提取方法具体如下：
S1、骨髓穿刺
无菌条件下，在局部麻醉下进行骨髓穿刺术，于髂后上棘处骨穿针穿刺；
骨髓穿刺取患者的髂后上棘为穿刺术点，基本消毒杀菌皮肤，戴无菌手套，铺消毒杀菌洞巾，随后用5ml注射器提取2％的利多卡因2ml，从皮肤至骨膜逐级浸润，进行局麻。
局麻后使用直径1.5mm的内含肝素骨髓穿刺套管针和采集管抽取骨髓血，持穿刺针通皮肤至骨膜，逐级穿进，抵达骨膜之后要上下转动，使骨髓穿刺针慢慢进到骨髓腔内，套管针从髂嵴穿入骨皮质，有突破感表明针尖已进入松质骨髓腔。
S2、骨髓液的提取和直接过滤处理
预肝素化处理的注射器采集管抽出骨髓液注入预先准备好的肝素血袋中，无需送往实验室，直接经2um滤网初步过滤提取浓缩骨髓原液；
骨髓液提取采集时在同一平面每旋转90°抽吸1次，每次245ml，然后沿髂翼内外板间向深层进针，每次加深约2cm，分次沿扇形不同方向刺入髂骨采集，在一个皮肤进针点合计采集55ml后，于间隔5cm处重新穿刺，继续采集。
采用20毫升干燥无菌采集管两侧共抽取骨髓130毫升注入预先准备好的肝素血袋中，直接临床进行初步过滤处理。
骨髓液提取采集过程中为避免过量采集造成损伤，提取骨髓液之后，要拔掉穿刺针，随后消毒杀菌穿刺术位置，遮盖纱布，让患者稍事休息。
S3、骨髓液的浓缩分离
浓缩骨髓原液采用密度梯度离心处理，弃上清和脂肪层，得到骨髓细胞，留取部分细菌学检测，其余骨髓浓缩物进行临床移植；
将骨髓抽吸液置于离心机(长沙骏逸实验仪器有限公司，长沙，中国)中进行密度梯度离心，设置转速3000r/min，时间7min，所得产物由内向外依次为：血浆层、骨髓有核细胞层和骨髓成熟红细胞层，BMSCs在离心中富集在骨髓有核细胞层，留取回植血4ml细菌学检测，其余作为移植骨髓浓缩物。
在浓缩移植时间较长时进一步加入枸橼酸钠抗凝，加入至经过滤无菌的干细胞提取专用分离液中，经过密度梯度离心处理的干细胞分离提取技术进行浓缩提取分离，分离液由符合药用标准的右旋糖酐、海藻糖、超低粘度海藻酸钠、泛影葡胺和聚二烯丙基二甲基氯化铵充分溶解于灭菌注射用水配制成生理溶液获得。
S4、浓缩骨髓液临床移植
根据假体周围植骨具体情况移植骨髓浓缩物。
实施例3
一种浓缩骨髓液提取方式，提取方法具体如下：
S1、骨髓穿刺
无菌条件下，在局部麻醉下进行骨髓穿刺术，于髂后上棘处骨穿针穿刺；
骨髓穿刺取患者的髂后上棘为穿刺术点，基本消毒杀菌皮肤，戴无菌手套，铺消毒杀菌洞巾，随后用5ml注射器提取2％的利多卡因2ml，从皮肤至骨膜逐级浸润，进行局麻。
局麻后使用直径1.5mm的内含肝素骨髓穿刺套管针和采集管抽取骨髓血，持穿刺针通皮肤至骨膜，逐级穿进，抵达骨膜之后要上下转动，使骨髓穿刺针慢慢进到骨髓腔内，套管针从髂嵴穿入骨皮质，有突破感表明针尖已进入松质骨髓腔。
S2、骨髓液的提取和直接过滤处理
预肝素化处理的注射器采集管抽出骨髓液注入预先准备好的肝素血袋中，无需送往实验室，直接经2um滤网初步过滤提取浓缩骨髓原液；
骨髓液提取采集时在同一平面每旋转90°抽吸1次，每次5ml，然后沿髂翼内外板间向深层进针，每次加深约2cm，分次沿扇形不同方向刺入髂骨采集，在一个皮肤进针点合计采集60ml后，于间隔5cm处重新穿刺，继续采集。
采用20毫升干燥无菌采集管两侧共抽取骨髓130毫升注入预先准备好的肝素血袋中，直接临床进行初步过滤处理。
骨髓液提取采集过程中为避免过量采集造成损伤，提取骨髓液之后，要拔掉穿刺针，随后消毒杀菌穿刺术位置，遮盖纱布，让患者稍事休息。
S3、骨髓液的浓缩分离
浓缩骨髓原液采用密度梯度离心处理，弃上清和脂肪层，得到骨髓细胞，留取部分细菌学检测，其余骨髓浓缩物进行临床移植；
将骨髓抽吸液置于离心机(长沙骏逸实验仪器有限公司，长沙，中国)中进行密度梯度离心，设置转速3000r/min，时间10min，所得产物由内向外依次为：血浆层、骨髓有核细胞层和骨髓成熟红细胞层，BMSCs在离心中富集在骨髓有核细胞层，留取回植血5ml细菌学检测，其余作为移植骨髓浓缩物。
S4、浓缩骨髓液临床移植
根据骨缺损情况联合新型生物材料透明质酸移植骨髓浓缩物。
施行本方案临床移植手术情况和传统暴露髓腔的开放式移植手术作为对比治疗情况对比如下：
| 组别 | 手术时间(min) | 卧床时间(d) | 住院时间(d) |
| 临床移植组 | 100±10 | 3±1 | 7±2 |
| 传统对比组 | 120±10 | 30±5 | 21±7 |
该过程在术中进行骨髓液提取与植入，缩短了患者治疗周期，同时同样可应用于小范围骨缺损或骨不连患者，患者甚至无需住院即可进行操作，根据骨缺损、骨不连、脊柱与关节融合、骨囊肿和假体周围植骨等不同病状，可根据临床需求制备不同的浓缩骨髓液产物，使得治疗过程更加便捷、高效。
本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (9)
1.一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述提取方法具体如下：
S1、骨髓穿刺
无菌条件下，在局部麻醉下进行骨髓穿刺术，于髂后上棘处骨穿针穿刺；
S2、骨髓液的提取和直接过滤处理
预肝素化处理的注射器采集管抽出骨髓液注入预先准备好的肝素血袋中，无需送往实验室，直接经2um滤网初步过滤提取浓缩骨髓原液；
S3、骨髓液的浓缩分离
浓缩骨髓原液采用密度梯度离心处理，弃上清和脂肪层，得到骨髓细胞，留取部分细菌学检测，其余骨髓浓缩物进行临床移植；
S4、浓缩骨髓液临床移植
根据骨缺损或假体周围植骨具体情况移植骨髓浓缩物。
2.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S1步骤中的骨髓穿刺取患者的髂后上棘为穿刺术点，基本消毒杀菌皮肤，戴无菌手套，铺消毒杀菌洞巾，随后用5ml注射器提取2％的利多卡因2ml，从皮肤至骨膜逐级浸润，进行局麻。
3.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S1步骤中的骨髓穿刺用直径1.5mm的内含肝素骨髓穿刺套管针和采集管抽取骨髓血，持穿刺针通皮肤至骨膜，逐级穿进，抵达骨膜之后要上下转动，使骨髓穿刺针慢慢进到骨髓腔内，套管针从髂嵴穿入骨皮质，有突破感表明针尖已进入松质骨髓腔。
4.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S2步骤中的骨髓液提取采集时在同一平面每旋转90°抽吸1次，每次2～5ml，然后沿髂翼内外板间向深层进针，每次加深约2cm，分次沿扇形不同方向刺入髂骨采集，在一个皮肤进针点合计采集50～60ml后，于间隔4～5cm处重新穿刺，继续采集。
5.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S2步骤中的骨髓液提取过滤采用20毫升干燥无菌采集管两侧共抽取骨髓130毫升注入预先准备好的肝素血袋中，直接临床进行初步过滤处理。
6.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S2步骤中的骨髓液提取采集过程中为避免过量采集造成损伤，提取骨髓液之后，要拔掉穿刺针，随后消毒杀菌穿刺术位置，遮盖纱布，让患者稍事休息。
7.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S3步骤中的密度梯度离心处理过程转速3000r/min，时间5-10min，所得产物由内向外依次为：血浆层、骨髓有核细胞层和骨髓成熟红细胞层，BMSCs在离心中富集在骨髓有核细胞层，留取回植血3-5ml细菌学检测，其余作为移植骨髓浓缩物。
8.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S3步骤中的骨髓液的浓缩分离进一步加入枸橼酸钠抗凝，加入至经过滤无菌的干细胞提取专用试剂中，经过密度梯度离心处理的干细胞分离提取技术进行浓缩提取分离。
9.根据权利要求1所述的一种浓缩骨髓液提取方式，其特征在于：所述S4步骤中提取的浓缩骨髓液可单独或联合新型生物材料如透明质酸或羟基磷灰石用以治疗骨缺损、骨不连、脊柱与关节融合、骨囊肿、假体周围植骨。
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