CN115737897A - 一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法 - Google Patents

一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，具体包括：将含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液与氧化葡聚糖溶液混合后经冷冻反应，得到用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶。本发明利用烷基化壳聚糖与氧化葡聚糖交联，同时配合掺银生物活性玻璃和去铁胺，针对性解决深部和狭窄不可压迫性伤口出口愈合难题，具有生物活性良好、可抑制细菌生长、伤口愈合迅速的特点。

Description

一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法
技术领域
本发明属于生物医用材料技术领域，具体涉及一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法。
背景技术
凝血障碍是指由于多种原因造成的血液凝血功能障碍性疾病，比如体内凝血因子的缺乏、血管壁的异常、遗传、抗凝物质的增多、大量的出血以及纤溶***的过度激活等。一般表现为出血时止血困难，伤口愈合缓慢。同时由于在止血和伤口愈合期间的细菌感染，还可能引发一系列的菌血症反应，极大地威胁着人类的生命。
火器、自然灾害、交通事故等造成的盲管伤和贯穿伤往往是不规则和不可压迫的，普通的止血剂(比如纱布等)无法及时阻止这种伤口的严重出血。对于不可压迫型伤口出血，一般使用填塞止血，但是市售的XstatTM在从伤口处取出时会对伤口造成二次伤害。
提供一种针对有凝血障碍问题的出血特别是不可压迫型出血的生物材料，是解决临床上凝血障碍问题的主要途径之一。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法。本发明利用烷基化壳聚糖与氧化葡聚糖交联，同时配合掺银生物活性玻璃和去铁胺，针对性解决深部和狭窄不可压迫性伤口出口愈合难题，具有生物活性良好、可抑制细菌生长、伤口愈合迅速的特点。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，具体包括：将含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液与氧化葡聚糖溶液混合后经冷冻反应，得到用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述冷冻反应温度为-18℃，时间为18h。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述氧化葡聚糖溶液的体积为含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液体积的0.02倍。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液为烷基化壳聚糖、载药掺银介孔生物活性玻璃、去离子水和乙酸溶液的混合溶液，所述含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液中，烷基化壳聚糖质量为载药掺银介孔生物活性玻璃质量的2倍～6倍，去离子水体积为载药掺银介孔生物活性玻璃质量的0.17倍～0.5倍，所述去离子水体积单位为mL，载药掺银介孔生物活性玻璃质量的单位为mg，乙酸溶液体积为载药掺银介孔生物活性玻璃质量的1倍～3倍，所述乙酸溶液体积单位为μL，载药掺银介孔生物活性玻璃质量的单位为mg。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述烷基化壳聚糖的制备方法包括：
步骤一、将乙酸溶液置于壳聚糖溶液中，搅拌反应，得到体系A；
步骤二、向所述体系A中加入月桂醛，反应后调节pH为5～5.1，得到体系B；
步骤三、向所述体系B中加入氰基硼氢化钠，反应后调节pH至9～10，得到体系C；
步骤四、将所述体系C进行梯度离心，冷冻干燥，得到烷基化壳聚糖；
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述壳聚糖的分子量为70000，所述壳聚糖溶液为壳聚糖的去离子水溶液，所述去离子水的体积为壳聚糖质量的100倍，所述去离子水体积单位为mL，壳聚糖质量单位为g；步骤一中所述搅拌反应为室温条件下搅拌1.5h；步骤一中所述乙酸溶液体积为壳聚糖质量的1倍，所述乙酸溶液体积单位为mL，壳聚糖质量单位为g，所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，步骤二中，调节pH为用氢氧化钠溶液调节，所述氢氧化钠溶液的浓度为3mol/L～5mol/L，所述月桂醛体积为步骤一壳聚糖质量的0.6倍，所述月桂醛体积单位为mL，壳聚糖质量单位为g；步骤二所述反应为35℃反应5h；
步骤三中，所述氰基硼氢化钠质量为步骤一壳聚糖质量的1.2倍，所述反应为45℃反应18h，调节pH为用氢氧化钠溶液调节，所述氢氧化钠溶液的浓度为3mol/L～5mol/L；
步骤四中，所述梯度离心为用体积百分含量为70％、80％、90％和100％的乙醇溶液依次进行离心，所述梯度离心中，每次离心的速率为8000r/min～10000r/min，时间为5min～7min，所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述载药掺银介孔生物活性玻璃的制备方法包括：搅拌条件下，将掺银介孔生物活性玻璃加入去铁胺水溶液中搅拌反应，烘干，冷冻干燥，得到载药掺银介孔生物活性玻璃。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述掺银介孔生物活性玻璃的制备方法包括：
步骤一、将十六烷基三甲基溴化铵溶液与乙酸乙酯搅拌反应后加入氨水溶液继续搅拌反应，得到混合体系A；所述氨水溶液的浓度为5mol/L～7mol/L；
步骤二、300r/min～400r/min搅拌条件下，向所述混合体系A中加入原硅酸四乙酯，继续以300r/min～400r/min进行搅拌，加入磷酸三乙酯，继续以300r/min～400r/min进行搅拌，加入四水合硝酸钙，以550r/min～600r/min进行搅拌，加入硝酸银，以550r/min～600r/min进行搅拌，离心，得到沉淀物；
步骤三、将所述沉淀物用乙醇和水交替洗涤，干燥，煅烧，得到掺银介孔生物活性玻璃。
上述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述氧化葡聚糖的制备方法包括：550r/min～600r/min搅拌条件下，将葡聚糖和高碘酸钠的去离子水溶液避光反应，加入乙二醇终止反应，透析，冷冻干燥，得到氧化葡聚糖；透析所述透析袋截留分子量为8000～14000Da；所述葡聚糖的分子量为7000Da。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，利用烷基化壳聚糖与氧化葡聚糖交联，同时配合掺银生物活性玻璃和去铁胺，针对性解决深部和狭窄不可压迫性伤口出口愈合难题，具有生物活性良好、可抑制细菌生长、伤口愈合迅速的特点。
2、本发明的用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，包括以壳聚糖、乙酸溶液、月桂醛和氰基硼氢化钠等为原料制备得到烷基化壳聚糖，烷基化壳聚糖表面的烷烃链具有可***血细胞膜与血液形成凝块的特点，可以提高止血效率，避免对凝血级联的依赖。
3、本发明的用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，包括以十六烷基三甲基溴化铵、乙酸乙酯、原硅酸四乙酯、磷酸三乙酯、四水合硝酸钙、硝酸银、去铁胺等原料制备得到载药掺银介孔生物活性玻璃的方法，该方法成功实现掺银介孔生物活性玻璃载药，可有效促进药物在伤口处缓释，实现伤口抑菌和愈合。
4、本发明的用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，包括以葡聚糖和高碘酸钠为主要原料经避光反应制备得到氧化葡聚糖，可充分利用氧化葡聚糖表面多醛基，和烷基化壳聚糖原位形成水凝胶。
下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
说明书附图
图1为实施例1-1的烷基化壳聚糖的FTIR图。
图2为实施例4-1的氧化葡聚糖的傅立叶变换红外吸收光谱。
图3为实施例2-1掺银介孔生物活性玻璃的XRD图。
图4为实施例5～8所述晶胶的SEM图。
图5为实施例5～8所述晶胶的溶胀率。
图6为实施例5～8所述晶胶的液体吸收率。
图7为实施例5～8所述晶胶的溶血率。
图8为实施例5～8所述晶胶的抑菌效果示意图。
图9为实施例5～8所述晶胶的细胞毒性MTT分析结果示意图。
图10为实施例5～8所述晶胶冻干后的照片。
图11为实施例5～8所述晶胶的可注射性能示意图。
图12为实施例5～8所述晶胶的肝脏止血示意图。
具体实施方式
实施例1-1
本实施例提供一种烷基化壳聚糖的制备方法，具体包括：
步骤一、将4g壳聚糖溶于400mL去离子水中，得到壳聚糖溶液；所述壳聚糖的分子量为70000；
步骤二、向所述壳聚糖溶液中加入4mL乙酸溶液，于室温条件下搅拌1.5h，得到体系A；所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％；
步骤三、向步骤二所述体系A中加入2.4mL月桂醛，于35℃反应5h，用氢氧化钠溶液调节pH为5～5.1，得到体系B；所述氢氧化钠溶液的浓度为4mol/L；
步骤四、向所述体系B中加入4.8g氰基硼氢化钠，于45℃反应18h，用氢氧化钠溶液调节PH至9～10，得到体系C；所述氢氧化钠溶液的浓度为4mol/L；
步骤五、将所述体系C进行梯度离心，冷冻干燥，得到烷基化壳聚糖，标记为NACS；所述梯度离心为用体积百分含量为70％、80％、90％和100％的乙醇溶液依次进行离心；所述梯度离心中，每次离心的速率为8000r/min，时间为7min；所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
图1为实施例1-1的烷基化壳聚糖的FTIR图。根据图1可知，在2800-2900cm-1、2900-3000cm-1、1560cm-1以及720cm-1处峰位归属于烷基峰，表明烷基与壳聚糖中的氨基相连，壳聚糖的烷基化改性成功。
实施例1-2
本实施例提供一种烷基化壳聚糖的制备方法，具体包括：
步骤一、将4g壳聚糖溶于400mL去离子水中，得到壳聚糖溶液；所述壳聚糖的分子量为70000；
步骤二、向所述壳聚糖溶液中加入4mL乙酸溶液，于室温条件下搅拌1.5h，得到体系A；所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％；
步骤三、向步骤二所述体系A中加入2.4mL月桂醛，于35℃反应5h，用氢氧化钠溶液调节pH为5～5.1，得到体系B；所述氢氧化钠溶液的浓度可以为3mol/L；
步骤四、向所述体系B中加入4.8g氰基硼氢化钠，于45℃反应18h，用氢氧化钠溶液调节PH至9～10，得到体系C；所述氢氧化钠溶液的浓度可以为3mol/L；
步骤五、将所述体系C进行梯度离心，冷冻干燥，得到烷基化壳聚糖，标记为NACS；所述梯度离心为用体积百分含量为70％、80％、90％和100％的乙醇溶液依次进行离心；所述梯度离心中，每次离心的速率为9000r/min，时间为6min；所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
本实施例的烷基化壳聚糖与实施例1-1一致。
实施例1-3
本实施例提供一种烷基化壳聚糖的制备方法，具体包括：
步骤一、将4g壳聚糖溶于400mL去离子水中，得到壳聚糖溶液；所述壳聚糖的分子量为70000；
步骤二、向所述壳聚糖溶液中加入4mL乙酸溶液，于室温条件下搅拌1.5h，得到体系A；所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％；
步骤三、向步骤二所述体系A中加入2.4mL月桂醛，于35℃反应5h，用氢氧化钠溶液调节pH为5～5.1，得到体系B；所述氢氧化钠溶液的浓度可以为5mol/L；
步骤四、向所述体系B中加入4.8g氰基硼氢化钠，于45℃反应18h，用氢氧化钠溶液调节PH至9～10，得到体系C；所述氢氧化钠溶液的浓度可以为5mol/L；
步骤五、将所述体系C进行梯度离心，冷冻干燥，得到烷基化壳聚糖，标记为NACS；所述梯度离心为用体积百分含量为70％、80％、90％和100％的乙醇溶液依次进行离心；所述梯度离心中，每次离心的速率为10000r/min，时间为5min；所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
本实施例的烷基化壳聚糖与实施例1-1一致。
实施例2-1
本实施例提供一种掺银介孔生物活性玻璃的制备方法，具体包括：
步骤一、将1.4g十六烷基三甲基溴化铵置于66mL去离子水中，室温下搅拌1h，得到十六烷基三甲基溴化铵溶液；
步骤二、向步骤一所述十六烷基三甲基溴化铵溶液中加入20mL乙酸乙酯，搅拌30min，加入14mL氨水溶液，搅拌15h，得到混合体系A；所述氨水溶液的浓度为6mol/L；
步骤三、350r/min搅拌条件下，向所述混合体系A中加入7.2mL原硅酸四乙酯，继续以350r/min搅拌30min，加入0.72mL磷酸三乙酯，继续以350r/min搅拌30min，加入4.54g四水合硝酸钙，以580r/min搅拌30min，加入0.4g硝酸银，以580r/min搅拌4小时，离心，得到沉淀物；所述沉淀物的颜色为白色；
步骤四、将所述沉淀物用乙醇和水交替洗涤3次，于60℃干燥24h，置于650℃马弗炉中煅烧4小时以除去有机物及其他杂质，得到掺银介孔生物活性玻璃。
实施例2-2
本实施例提供一种掺银介孔生物活性玻璃的制备方法，具体包括：
步骤一、将1.4g十六烷基三甲基溴化铵置于66mL去离子水中，室温下搅拌1h，得到十六烷基三甲基溴化铵溶液；
步骤二、向步骤一所述十六烷基三甲基溴化铵溶液中加入20mL乙酸乙酯，搅拌30min，加入14mL氨水溶液，搅拌15h，得到混合体系A；所述氨水溶液的浓度为5mol/L；
步骤三、300r/min搅拌条件下，向所述混合体系A中加入7.2mL原硅酸四乙酯，继续以300r/min搅拌30min，加入0.72mL磷酸三乙酯，继续以300r/min搅拌30min，加入4.54g四水合硝酸钙，以550r/min搅拌30min，加入0.4g硝酸银，以550r/min搅拌4小时，离心，得到沉淀物；所述沉淀物的颜色为白色；
步骤四、将所述沉淀物用乙醇和水交替洗涤3次，于60℃干燥24h，置于650℃马弗炉中煅烧4小时以除去有机物及其他杂质，得到掺银介孔生物活性玻璃。
本实施例的掺银介孔生物活性玻璃性能与实施例2-1基本一致。
实施例2-3
本实施例提供一种掺银介孔生物活性玻璃的制备方法，具体包括：
步骤一、将1.4g十六烷基三甲基溴化铵置于66mL去离子水中，室温下搅拌1h，得到十六烷基三甲基溴化铵溶液；
步骤二、向步骤一所述十六烷基三甲基溴化铵溶液中加入20mL乙酸乙酯，搅拌30min，加入14mL氨水溶液，搅拌15h，得到混合体系A；所述氨水溶液的浓度为7mol/L；
步骤三、400r/min搅拌条件下，向所述混合体系A中加入7.2mL原硅酸四乙酯，继续以400r/min搅拌30min，加入0.72mL磷酸三乙酯，继续以400r/min搅拌30min，加入4.54g四水合硝酸钙，以600r/min搅拌30min，加入0.4g硝酸银，以600r/min搅拌4小时，离心，得到沉淀物；所述沉淀物的颜色为白色；
步骤四、将所述沉淀物用乙醇和水交替洗涤3次，于60℃干燥24h，置于650℃马弗炉中煅烧4小时以除去有机物及其他杂质，得到掺银介孔生物活性玻璃。
本实施例的掺银介孔生物活性玻璃性能与实施例2-1基本一致。
实施例3
本实施例提供一种载药掺银介孔生物活性玻璃的制备方法，包括：
步骤一、将120μm去铁胺溶于100mL去离子水中，室温条件下搅拌30h，加入0.1g实施例2-1所述掺银介孔生物活性玻璃，室温条件下搅拌反应24h；
步骤二、将步骤一反应后体系烘干，冷冻干燥72h，得到载药掺银介孔生物活性玻璃；所述烘干的温度为50℃，时间为24h。
实施例4-1
本实施例提供一种氧化葡聚糖的制备方法，包括：
步骤一、磁力搅拌下，将4g葡聚糖和3.4g高碘酸钠溶于50mL去离子水中，得到葡聚糖溶液；所述葡聚糖的分子量为7000Da；
步骤二、580r/min搅拌条件下，将步骤一所述葡聚糖溶液于室温避光条件下反应24h，加入1g乙二醇，继续搅拌2h以终止葡聚糖的进一步氧化，得到终止反应后体系；避光反应后体系为浅黄色溶液；所述室温为20℃～25℃；
步骤三、将终止反应后体系用去离子水连续透析3天，每天更换2次透析水，将透析后体系冷冻干燥，得到氧化葡聚糖；透析所述透析袋截留分子量为8000～14000Da；所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
图2为本实施例的氧化葡聚糖的傅立叶变换红外吸收光谱。根据谱图可见，1730cm-1处出现归属于羰基伸缩峰的峰位，表明葡聚糖成功氧化改性。
实施例4-2
本实施例提供一种氧化葡聚糖的制备方法，包括：
步骤一、磁力搅拌下，将4g葡聚糖和3.4g高碘酸钠溶于50mL去离子水中，得到葡聚糖溶液；所述葡聚糖的分子量为7000Da；
步骤二、600r/min搅拌条件下，将步骤一所述葡聚糖溶液于室温避光条件下反应24h，加入1g乙二醇，继续搅拌2h以终止葡聚糖的进一步氧化，得到终止反应后体系；避光反应后体系为浅黄色溶液；所述室温为20℃～25℃；
步骤三、将终止反应后体系用去离子水连续透析3天，每天更换2次透析水，将透析后体系冷冻干燥，得到氧化葡聚糖；透析所述透析袋截留分子量为8000～14000Da；所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
本实施例的氧化葡聚糖性能与实施例4-1基本一致。
实施例4-3
本实施例提供一种氧化葡聚糖的制备方法，包括：
步骤一、磁力搅拌下，将4g葡聚糖和3.4g高碘酸钠溶于50mL去离子水中，得到葡聚糖溶液；所述葡聚糖的分子量为7000Da；
步骤二、550r/min搅拌条件下，将步骤一所述葡聚糖溶液于室温避光条件下反应24h，加入1g乙二醇，继续搅拌2h以终止葡聚糖的进一步氧化，得到终止反应后体系；避光反应后体系为浅黄色溶液；所述室温为20℃～25℃；
步骤三、将终止反应后体系用去离子水连续透析3天，每天更换2次透析水，将透析后体系冷冻干燥，得到氧化葡聚糖；透析所述透析袋截留分子量为8000～14000Da；所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
本实施例的氧化葡聚糖性能与实施例4-1基本一致。
实施例5
本实施例提供一种晶胶的制备方法，具体包括：
步骤一、将0.12g实施例1-1所述烷基化壳聚糖置于10mL去离子水中，加入60μL乙酸溶液，搅拌至烷基化壳聚糖全部溶解，得到混合溶液；所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％；
步骤二、将0.5g实施例4-1所述氧化葡聚糖溶于10mL去离子水，得到氧化葡聚糖溶液；
步骤三、剧烈搅拌条件下，将200μL所述氧化葡聚糖溶液加入10mL步骤一所述混合溶液中，在-18℃反应18h，常温解冻，得到晶胶；标记为AC/ODEX。
实施例6
本实施例提供一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，具体包括：
步骤一、将0.12g实施例1-1所述烷基化壳聚糖置于10mL去离子水中，加入60μL乙酸溶液，搅拌至烷基化壳聚糖全部溶解，得到混合溶液；所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％；
步骤二、将20mg实施例3所述载药掺银介孔生物活性玻璃加入步骤一的混合溶液中，搅拌均匀，得到载药混合溶液；
步骤三、将0.5g实施例4-1所述氧化葡聚糖溶于10mL去离子水，得到氧化葡聚糖溶液；
步骤四、剧烈搅拌条件下，将200μL氧化葡聚糖溶液加入10mL步骤二所述载药混合溶液中，在-18℃反应18h，常温解冻，得到用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶；标记为AC/ODEX/Ag-MBG2。
实施例7
本实施例提供一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，具体包括：
步骤一、将0.12g实施例1-1所述烷基化壳聚糖置于10mL去离子水中，加入60μL乙酸溶液，搅拌至烷基化壳聚糖全部溶解，得到混合溶液；所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％；
步骤二、将40mg实施例3所述载药掺银介孔生物活性玻璃加入步骤一的混合溶液中，搅拌均匀，得到载药混合溶液；
步骤三、将0.5g实施例4-1所述氧化葡聚糖溶于10mL去离子水，得到氧化葡聚糖溶液；
步骤四、剧烈搅拌条件下，将200μL氧化葡聚糖溶液加入10mL步骤二所述载药混合溶液中，在-18℃反应18小时，常温解冻，得到用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶；标记为AC/ODEX/Ag-MBG4。
实施例8
本实施例提供一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，具体包括：
步骤一、将0.12g实施例1-1所述烷基化壳聚糖置于10mL去离子水中，加入60μL乙酸溶液，搅拌至烷基化壳聚糖全部溶解，得到混合溶液；所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％；
步骤二、将60mg实施例3所述载药掺银介孔生物活性玻璃加入步骤一的混合溶液中，搅拌均匀，得到载药混合溶液；
步骤三、将0.5g实施例4-1所述氧化葡聚糖溶于10mL去离子水，得到氧化葡聚糖溶液；
步骤四、剧烈搅拌条件下，将200μL所述氧化葡聚糖溶液加入10mL步骤二所述载药混合溶液中，在-18℃反应18小时，常温解冻，得到用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶；标记为AC/ODEX/Ag-MBG6。
性能评价：
图3为实施例2-1掺银介孔生物活性玻璃的XRD图，如图所示，44°可以观察到归属于Ag的峰，表明银离子掺杂成功。
图4为实施例5～8所述晶胶的SEM图。根据图4可知，本发明的晶胶孔径为50μm～200μm，具有相互联通的大孔结构。
图5为实施例5～8所述晶胶的溶胀率。其测试方法包括：在37℃下将冷冻干燥的晶胶浸泡在超纯水中，24h之后用滤纸除去表面的液体后，称重并记录，用下面的等式计算晶胶的溶胀比：
溶胀率(％)＝(M1-M0)/M0×100％
M0为冷冻干燥的晶胶质量，M1为溶胀后晶胶质量。
根据图5可见，实施例6～8各晶胶的溶胀率分别为3818.15％、3305.01％、2924.55％，表明本发明的晶胶可实现更快的吸收血液，可而有效促进堵塞住出血伤口，形成物理屏障，达到初步止血的效果。
图6为实施例5～8所述晶胶的液体吸收率，其测试方法包括：将冷冻后晶胶浸入PBS或血液中，2小时后取出并称重，液体吸收率通过以下公式计算:
液体吸收率(％)＝(M1-M0)/M0×100％
所述W0为冷冻后的晶胶质量，W1为从PBS或血液中取出的晶胶质量。
四组晶胶对PBS的吸收率分别是3866.15％、3782.56％、3380.76％和2972.55％，晶胶吸收血液的能力略低于吸收PBS的能力，这可能由于血液粘度较高。表明本发明的晶胶具有高的液体吸收性，有助于快速吸收血液、聚集血细胞、凝血因子和纤维蛋白原，实现加速止血。
图7为实施例5～8所述晶胶的溶血率。其测试方法包括：将晶胶在37℃生理盐水中浸泡72小时，得到浓度为0.1g/mL的浸提液，从大鼠腹腔采集新鲜血液(5mL),以2000rpm分离红细胞5min，随后使用生理盐水将分离的红细胞洗涤至上清呈无色透明，再将其稀释为2％(v/v)的最终浓度，在1mL离心管中，将0.5mL所述浸提液和等量的2％(v/v)RBC悬浮液在生理盐水中混合，并在37℃下培养1h，离心后，在545nm处测量上清液的吸光度，其中生理盐水和去离子水分别用作阴性和阳性对照，随后利用体外溶血实验进行评估，结果如图7所示。根据图7可见，晶胶的溶血率均低于5％，视为无溶血现象。表明本发明的晶胶没有引起红细胞破裂，具有良好的血液相容性。
图8为实施例5～8所述晶胶的抑菌效果示意图，测试方法为利用金黄色葡萄球菌(金黄色葡萄球菌，ATCC 25923)和大肠杆菌(E.coli，ATCC25922)作为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌来测试晶胶的抗菌活性，具体包括：首先将直径为10mm，厚度约1mm的晶胶在75％的酒精中灭菌，然后在灭菌的PBS中纯化一天，以去除残留的酒精，得到纯化后晶胶，将纯化后晶胶、培养基与细菌一起孵育12小时，得到悬浮液，将所述悬浮液(105CFU/mL)添加到96孔培养板中在600nm处测量细菌重悬的光密度，将所述悬浮液稀释后涂在固体培养基平板上，在37℃放置12h，进行菌落计数。根据图8可见，随着共培养时间延长，抑菌效果越来越明显，24h对应的实施例7晶胶的抑菌率达到92.8％，表明本发明的晶胶具有很好的抑菌效果。
图9为实施例5～8所述晶胶的细胞毒性MTT分析结果示意图。测试方法包括：将晶胶在RPM1-1640培养基中于37℃浸泡72h，得到浓度为0.1g/mL提取液，将在RPMI-1640培养基正常培养24小时后的小鼠成纤维细胞(L929细胞)的培养基更换为所述提取液，分别培养24小时、48小时和72小时，用MTT法测量吸光度，计算L929细胞的存活率，每个测试重复6个平行组，结果如图9所示。根据图9所示，24小时、48小时和72小时细胞存活率均在90％以上，表明本发明的晶胶具有良好的生物相容性，安全无毒。
图10为实施例5～8所述晶胶冻干后的照片。AC/ODEX晶胶(实施例5)为白色，随着掺银载药介孔生物活性玻璃的浓度从0.2％升至0.6％，晶胶的颜色从浅棕色变为棕色。
图11为实施例5～8所述晶胶的可注射性能示意图。根据图11可见，该晶胶可以放入注射器中，通过注射的方式介入伤口。
图12为实施例5～8所述晶胶的肝脏止血示意图，通过打孔器在肝脏部位造成一个直接5mm的圆形伤口，通过注射器将晶胶注射进伤口部位，在肝脏下方放置滤纸，观察肝脏的出血情况，直至停止出血，观察可见，在肝脏下方的滤纸表面有小面积的血迹，表明晶胶有比较好的止血效果。
表1为实施例5～8所述晶胶在水中恢复时间，测试方法包括：将晶胶压缩到初始高度的80％，然后浸入PBS或血液中，记录恢复形状所需的时间和恢复后的长度。
形状恢复率(％)＝H1/H0×100％
其中H0表示冷冻凝胶的初始高度，H1表示形状恢复后冷冻凝胶的高度。
根据表1可知，本发明所制得的晶胶具有良好的压缩回弹性。
表1实施例5～8所述晶胶在水中恢复时间
Figure BDA0003850540150000161
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何限制，凡是根据发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变化，均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

Claims (10)

1.一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，具体包括：将含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液与氧化葡聚糖溶液混合后经冷冻反应，得到用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶。
2.根据权利要求1所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述冷冻反应温度为-18℃，时间为18h。
3.根据权利要求1所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述氧化葡聚糖溶液的体积为含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液体积的0.02倍。
4.根据权利要求1所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液为烷基化壳聚糖、载药掺银介孔生物活性玻璃、去离子水和乙酸溶液的混合溶液，所述含有载药掺银介孔生物活性玻璃和烷基化壳聚糖的乙酸溶液中，烷基化壳聚糖质量为载药掺银介孔生物活性玻璃质量的2倍～6倍，去离子水体积为载药掺银介孔生物活性玻璃质量的0.17倍～0.5倍，所述去离子水体积单位为mL，载药掺银介孔生物活性玻璃质量的单位为mg，乙酸溶液体积为载药掺银介孔生物活性玻璃质量的1倍～3倍，所述乙酸溶液体积单位为μL，载药掺银介孔生物活性玻璃质量的单位为mg。
5.根据权利要求1所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述烷基化壳聚糖的制备方法包括：
步骤一、将乙酸溶液置于壳聚糖溶液中，搅拌反应，得到体系A；
步骤二、向所述体系A中加入月桂醛，反应后调节pH为5～5.1，得到体系B；
步骤三、向所述体系B中加入氰基硼氢化钠，反应后调节pH至9～10，得到体系C；
步骤四、将所述体系C进行梯度离心，冷冻干燥，得到烷基化壳聚糖。
6.根据权利要求5所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述壳聚糖的分子量为70000，所述壳聚糖溶液为壳聚糖的去离子水溶液，所述去离子水的体积为壳聚糖质量的100倍，所述去离子水体积单位为mL，壳聚糖质量单位为g；步骤一中所述搅拌反应为室温条件下搅拌1.5h；步骤一中所述乙酸溶液体积为壳聚糖质量的1倍，所述乙酸溶液体积单位为mL，壳聚糖质量单位为g，所述乙酸溶液的质量百分含量为99.5％。
7.根据权利要求5所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，步骤二中，调节pH为用氢氧化钠溶液调节，所述氢氧化钠溶液的浓度为3mol/L～5mol/L，所述月桂醛体积为步骤一壳聚糖质量的0.6倍，所述月桂醛体积单位为mL，壳聚糖质量单位为g；步骤二所述反应为35℃反应5h；
步骤三中，所述氰基硼氢化钠质量为步骤一壳聚糖质量的1.2倍，所述反应为45℃反应18h，调节pH为用氢氧化钠溶液调节，所述氢氧化钠溶液的浓度为3mol/L～5mol/L；
步骤四中，所述梯度离心为用体积百分含量为70％、80％、90％和100％的乙醇溶液依次进行离心，所述梯度离心中，每次离心的速率为8000r/min～10000r/min，时间为5min～7min，所述冷冻干燥的温度为-50℃，时间为3天。
8.根据权利要求1所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述载药掺银介孔生物活性玻璃的制备方法包括：搅拌条件下，将掺银介孔生物活性玻璃加入去铁胺水溶液中搅拌反应，烘干，冷冻干燥，得到载药掺银介孔生物活性玻璃。
9.根据权利要求1所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述掺银介孔生物活性玻璃的制备方法包括：
步骤一、将十六烷基三甲基溴化铵溶液与乙酸乙酯搅拌反应后加入氨水溶液继续搅拌反应，得到混合体系A；所述氨水溶液的浓度为5mol/L～7mol/L；
步骤二、300r/min～400r/min搅拌条件下，向所述混合体系A中加入原硅酸四乙酯，继续以300r/min～400r/min进行搅拌，加入磷酸三乙酯，继续以300r/min～400r/min进行搅拌，加入四水合硝酸钙，以550r/min～600r/min进行搅拌，加入硝酸银，以550r/min～600r/min进行搅拌，离心，得到沉淀物；
步骤三、将所述沉淀物用乙醇和水交替洗涤，干燥，煅烧，得到掺银介孔生物活性玻璃。
10.根据权利要求1所述的一种用于凝血障碍伤口的可注射止血晶胶的制备方法，其特征在于，所述氧化葡聚糖的制备方法包括：550r/min～600r/min搅拌条件下，将葡聚糖和高碘酸钠的去离子水溶液避光反应，加入乙二醇终止反应，透析，冷冻干燥，得到氧化葡聚糖；透析所述透析袋截留分子量为8000～14000Da；所述葡聚糖的分子量为7000Da。
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