CN115626948A - 一种新的螺甾皂苷单体及其制备方法 - Google Patents
一种新的螺甾皂苷单体及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115626948A CN115626948A CN202211250304.4A CN202211250304A CN115626948A CN 115626948 A CN115626948 A CN 115626948A CN 202211250304 A CN202211250304 A CN 202211250304A CN 115626948 A CN115626948 A CN 115626948A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- beta
- glucopyranosyl
- column chromatography
- water
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
- C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种新的螺甾皂苷单体即螺甾‑5,25‑二烯‑3β,14α‑二醇‑3‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→2)‑β‑D‑吡喃葡萄糖基‑(1→4)‑β‑D‑吡喃半乳糖糖苷及其制备方法。将玉竹水提液过大孔吸附树脂吸附,乙醇洗脱,减压浓缩后得到的玉竹提取物进行硅胶柱层析及ODS柱层析,最后通过制备型高效液相色谱精制后得到所述新的螺甾皂苷单体。本发明获得的新螺甾皂苷单体可用于中药材玉竹或农产品鲜玉竹的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种从玉竹中提取分离得到的新的螺甾皂苷单体化合物及其制备方法,属于天然药物化学研究领域。
背景技术
玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)是百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum)多年生草本植物,别名尾参、地管子、铃铛菜、葳蕤。主要分布于东亚和欧洲,在我国湖南、江苏和吉林省广泛种植。
玉竹是典型的药食同源植物,根茎干燥切片处理后可用作中药材,具有养阴润燥,生津止渴等功能,用于治疗肺胃阴伤,燥热咳嗽,咽干口渴,内热消渴等疾病。
从玉竹中分离得到的化学成分主要有甾体皂苷类、高异黄酮类、多糖类、三萜类、蒽醌类、生物碱和挥发油等,其中甾体皂苷类化合物是玉竹药理活性的主要成分之一。研究表明,玉竹中分离出的化合物具有调节免疫力、抗肿瘤、降血糖和抗衰老,抗氧化,抗病毒和减肥等作用。
发明内容
本发明提供了一种从玉竹的根茎中分离得到的一种新的螺甾皂苷类单体化合物螺甾,即5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷(以下简称化合物A)及其制备方法。
本发明所述的新的螺甾皂苷单体螺甾-5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷其结构式为
本发明还提供了新的螺甾皂苷类化合物单体即螺甾-5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷的制备方法,具体如下:
(1)取玉竹的根茎加少量水利用破壁机均浆后加水搅拌提取或取干燥的玉竹根茎粉碎,加水煎煮提取,离心后得到玉竹水提液。
(2)将步骤(1)所得提取液过大孔吸附树脂吸附,用乙醇洗脱。
(3)将步骤(2)所得洗脱液减压浓缩,用7倍体积的乙醇醇沉,取上清液浓缩后得到玉竹总甾体皂苷。
(4)将步骤(3)所得玉竹总甾体皂苷以体积比为50:1:0.01~6:4.5:2的乙酸乙酯-乙醇-水的混合溶剂为洗脱液进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检验,合并含化合物A组分。
(5)将步骤(4)所得含化合物A组分减压回收溶剂,再次以体积比为9:2.7:0.1~15:10:2的二氯甲烷-甲醇-水的混合溶剂为洗脱液进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检验,合并含化合物A组分。
(6)将步骤(5)所得含化合物A组分减压回收溶剂,再次以体积比为2:1~5:1甲醇-水的混合溶剂为洗脱液进行ODS柱层析梯度洗脱,TLC检验,合并含化合物A组分。
(7)将步骤(6)所得含化合物A组分减压回收溶剂,利用制备型高效液相色谱(RID检测器)以乙腈-水(43:57)为流动相等度洗脱,减压回收溶剂,干燥,得到新的螺甾皂苷单体即螺甾-5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷(化合物A)。
本发明步骤(1)中鲜玉竹破壁匀浆时鲜玉竹和水的重量体积比为1:2,离心,称重,加残渣重量的10倍水(重量体积比)常温搅拌提取3次,搅拌时间均为5min,合并4次提取液备用,此时提取过的滤渣内几乎不含甾体皂苷类化合物。
本发明采用湿法装柱、干法上样,拌样所用样品与固定相的重量比为1:2;硅胶柱层析样品与硅胶的重量比为1:30~1:60;ODS柱层析样品与固定相的重量比为1:100。
本发明所用硅胶柱层析洗脱剂溶剂体系为乙酸乙酯-乙醇-水,优选体积比为50:1:0.01~6;4.5:2的乙酸乙酯-乙醇-水;另一种硅胶柱层析洗脱剂溶剂体系为二氯甲烷-甲醇-水,优选体积比为9:2.7:0.1~15:10:2的二氯甲烷-甲醇-水;ODS柱层析洗脱剂溶剂体系为甲醇-水,优选体积比为2:1~5:1的甲醇-水;制备型高效液相色谱洗脱剂溶剂体系为乙腈-水,优选体积比为43:57的乙腈-水。
本发明步骤(6)纯化过程所用色谱柱为AgilentEclipseXDB-C18(10×250mm,10μm),检测器为示差折光检测器,柱温为25℃,流速为2.0mL/min。
本发明利用NMR和MS等手段鉴定了分得的化合物A的化学结构,结构鉴定过程及数据如下:
化合物A为白色粉末,易溶于水、甲醇,难溶于乙酸乙酯、石油醚、氯仿等。薄层色谱检测,A试剂显黄色,E试剂不显色。HR-ESI-MS给出分子离子峰为m/z897.4399[M+H-H2O]+(calcd.897.4478forC45H69O18),由此可知其分子式为C45H70O19。13CNMR谱(C5D5N,150MHz)中,共给出45个碳信号,结合DEPT90°和DEPT135°谱可知,化合物A含有3个伯碳,14个仲碳,22个叔碳,6个季碳。由13CNMR和DEPT谱图可知高场区出现3个甲基信号分别为δC15.4(C-21),δC19.4(C-19),δC20.1(C-18),缺少一个母核特征甲基峰,而低场区除了140.6(C-5),122.4(C-6)一对特征双键外,又出现δC144.6季碳,108.8仲碳峰,提示可能还有一对双键存在且其中一个碳是端烯碳,推测可能是25位和27位形成双键。另外13CNMR谱中出现了δC107.1,δC105.4,δC102.73个糖的端基碳信号,同时可以观察到δC60.5(CH2),61.7(CH2),63.3(CH2),86.5(CH)。这些碳谱数据初步说明化合物A是螺甾母核14位连接羟基,含有两个双键,三个糖基的螺甾类化合物。
在1HNMR(C5D5N,600MHz)和HSQC中,低场区δC102.7与δH4.77(1H,d,J=7.8Hz),δC105.3与δH5.02(1H,d,J=7.8Hz),δC107.1与δH5.11(1H,d,J=7.2Hz)相关,归属为糖的端基碳、氢信号,进一步证明存在3个糖基且三个糖均为β-D构型,δc122.4(C-6)与δH5.27(1H,H-6)相关,δC108.82(C-27)与烯氢信号δH4.67(2H,H-27)相关。高场区δC19.4(C-19)与δH0.85(3H,s)相关,δC20.1(C-18)与δH(0.95,3H,s),δC15.4(C-21)与δH1.02(3H,d,J=7.2Hz)相关,归属为3个甲基的碳、氢信号。
通过HMBC可知,δH4.67(2H,H-27)与δC29.1(C-24),δC65.1(C-26),存在远程相关。δH0.85(3H,s,H-19)与C-5,C-9,C-10,C-1存在远程相关;δH0.95(3H,s,H-18)与C-12,C-13,C-14,C-17存在远程相关;δH1.02(3H,d,H-21)与C-17,C-20,C-22存在远程相关;半乳糖端基质子δH4.77(1H,d,J=7.2Hz)与母核C-3位δC78.20存在远程相关;葡萄糖端基质子δH5.02(1H,d,J=7.8Hz)与半乳糖δC81.2(C-4')远程相关;δH5.11(1H,d,J=7.8Hz)与葡萄糖δC86.3(C-2”)远程相关,由此确定糖基序列为葡萄糖-(1→2)-葡萄糖-(1→4)-半乳糖-。综上分析确定化合物A为螺甾-5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷,经文献检索此化合物为未见报道的新化合物。
化合物A的13CNMR(150MHz)和1HNMR数据(600MHz)pyridine-d5
检测化合物A纯度的HPLC-ELSD色谱条件如下:
色谱柱:AgilentSBC-18(4.6×250mm,5μm)
流动相:乙腈-水(34:66);流速:1L/min;柱温:30℃;进样量:15μL。
ELSD检测器,漂移管温度100℃;撞击状态:关闭。
载气压力:0.45Mpa;雾化器流速:2.7L/min;放大倍数:1.0倍。
附图说明
图1化合物A的质谱图
图2化合物A的13CNMR谱图
图3化合物A的DEPT90°和DEPT135°谱图
图4化合物A的1HNMR谱图
图5化合物A的HMBC谱图
图6化合物A的HSQC谱图
图7化合物A的1H-1HCOSY谱图
具体实施方式
实施例1
(1)取鲜玉竹根茎50Kg加入100L水用破壁机搅碎均浆5min,离心,滤渣称重,以滤渣和蒸馏水的重量体积比为1:10加水搅拌提取3次,时间均为10min,离心,合并4次滤液,得到玉竹水提液。此时滤渣中基本检测不到甾体皂苷成分
(2)将步骤(1)所得提取液过D101大孔吸附树脂吸附,用85%乙醇洗脱得到含玉竹甾体皂苷的提取液。
(3)将步骤(2)所得洗脱液减压浓缩,用7倍体积的乙醇醇沉,取上清液浓缩后得到玉竹总甾体皂苷210g。
(4)将步骤(3)所得玉竹总甾体皂苷210g以乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂50:1:0.01~6:4.5:2为洗脱剂进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A组分,减压回收溶剂,得到含化合物A的组分C120g。
(5)将步骤(4)所得含化合物A组分C120g,用70%乙醇溶解后再次以二氯-甲醇-水的体积比为9:2.7:0.1~15:10:2为洗脱剂进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A的组分,减压回收溶剂,得到含化合物A的组分C-a7g。
(6)将步骤(5)所得含化合物A的组分C-a7g,以甲醇-水体积比为2:1~5:1为洗脱剂进行ODS反相柱层析梯度洗脱,TLC检测,收集化合物A组分,减压回收溶剂,得到化合物A粗品60mg。
(7)将步骤(6)所得化合物A粗品利用制备型高效液相色谱(RID检测器)以乙腈-水(43:57)为流动相分离纯化,收集化合物A色谱峰,减压回收溶剂,得到化合物A39mg。
实施例2
(1)取鲜玉竹的根茎20kg切碎,加入10倍体积(重量体积比)的70%乙醇浸泡提取3次,浸泡时间均为12h,过滤,合并滤液,得到玉竹乙醇提取液。
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩至无乙醇味,加5倍体积的蒸馏水稀释,过AB-8大孔吸附树脂吸附,用80%乙醇洗脱,洗脱液减压浓缩,6倍体积的乙醇醇沉,取上清清液浓缩后得到玉竹总甾体皂苷75g。
(3)将上述步骤(2)所得玉竹总甾体皂苷用乙醇溶解,以体积比为50:1:0.01~6:4.5:2的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂为洗脱液进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A的组分,减压回收溶剂,得到含化合物A的组分C40g。
(4)步骤(3)所得组分C40g,再次经硅胶柱层析,以体积比为9:2.7:0.1~15:10:2的二氯-甲醇-水为洗脱液进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A组分,减压回收溶剂,得到含化合物A的组分C-a2g。
(5)步骤(4)所得C-a2g,以体积比为2:1~5:1的甲醇-水为洗脱液进行ODS反相柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A组分,减压回收溶剂,得到化合物A粗品55mg。
(6)步骤(5)所得化合物A粗品55mg利用半制备高效液相色谱以乙腈-水(43:57)为流动相等度洗脱,收集化合物A色谱峰,减压回收溶剂,得到化合物A19mg。
实施例3
(1)干燥的玉竹根茎15kg,粉碎,85%乙醇回流提取3次,乙醇用量分别为120升、90升和60升,回流时间分别为90、60和45分钟,滤过,合并滤液,得到玉竹提取液。此时残渣中基本检测不到甾体皂苷成分(TLC检测)。
(2)将步骤(1)所得提取液浓缩,加入4倍体积的蒸馏水稀释,过HP20大孔吸附树脂吸附,用95%乙醇洗脱得到含甾体皂苷类化合物洗脱液。
(3)将步骤(2)所得洗脱液减压浓缩,用8倍体积的乙醇醇沉,取上层清液浓缩,得到玉竹提取物180g。
(4)将步骤(3)所得提取物180g,以50:1:0.01~6:4.5:2的乙酸乙酯-乙醇-水混合溶剂为洗脱液进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A组分,减压回收溶剂,得到含化合物A的组分C102g。
(5)将步骤(4)所得含化合物A组分C102g,以体积比为9:2.7:0.1~15:10:2的二氯-甲醇-水为洗脱液进行硅胶柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A组分,减压回收溶剂,得到含化合物A组分C-a6g。
(6)将步骤(5)所得含化合物A组分C-a6g,以体积比为2:1~5:1的甲醇-水为洗脱液进行ODS反相柱层析梯度洗脱,TLC检测,合并含化合物A的组分,减压回收溶剂,得到化合物A粗品55mg。
(7)将步骤(6)所得化合物A粗品55mg利用半制备高效液相色谱以乙腈-水(43:57)为流动相等度洗脱,收集化合物A色谱峰,减压回收溶剂,得到化合物A21mg。
Claims (8)
1.一种新的螺甾皂苷单体,即螺甾-5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷。
2.一种新的螺甾皂苷单体的制备方法,其特征在于以玉竹为原料,用水提取,提取液经大孔吸附树脂吸附,有机溶剂的水溶液洗脱,减压回收溶剂,干燥,得到含有螺甾-5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷的总甾体皂苷,取总甾体皂苷进行硅胶柱层析,ODS柱层析,制备型高效液相色谱分离纯化,得到螺甾-5,25-二烯-3β,14α-二醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃半乳糖糖苷。
3.权利要求书2所述的制备方法,其特征在于所述的大孔吸附树脂选自AB-8、D101、D4042或HP-20中的一种或它们中的两种或两种以上的混合树脂。
4.权利要求书2所述的制备方法,其特征在于所述洗脱剂为体积比为20-100%的有机溶剂与水的混合溶液,所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮或它们中的两种或两种以上混合溶剂。
5.权利要求书2所述的制备方法,其特征在于硅胶柱层析流动相为体积比为50:1:0.01~6:4.5:2的乙酸乙酯-乙醇-水的混合溶液或体积比为9:2.7:0.1~15:10:2的二氯甲烷-甲醇-水的混合溶液。
6.权利要求书2所述的制备方法,其特征在于ODS柱层析流动相为体积比为2:1~5:1的甲醇-水的混合溶液。
7.权利要求书2所述的制备方法,其特征在于制备型高效液相色谱流动相体系为体积比为43:57的乙腈-水的混合溶液。
8.权利要求书2所述的制备方法,其特征在于所述的玉竹是新鲜的玉竹根茎。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211250304.4A CN115626948A (zh) | 2022-10-12 | 2022-10-12 | 一种新的螺甾皂苷单体及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211250304.4A CN115626948A (zh) | 2022-10-12 | 2022-10-12 | 一种新的螺甾皂苷单体及其制备方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115626948A true CN115626948A (zh) | 2023-01-20 |
Family
ID=84905668
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211250304.4A Pending CN115626948A (zh) | 2022-10-12 | 2022-10-12 | 一种新的螺甾皂苷单体及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115626948A (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1389469A (zh) * | 2002-07-04 | 2003-01-08 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种螺甾皂苷和呋甾皂苷的分离、检测方法 |
CN108047300A (zh) * | 2017-11-30 | 2018-05-18 | 浙江大学 | 甾体皂苷类化合物及其制备方法与应用 |
WO2021258059A1 (en) * | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Animal feed composition for reducing ammonia production |
WO2021258056A1 (en) * | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Saponin containing extracts prepared from hesperaloe useful in the treatment of non-human animals |
-
2022
- 2022-10-12 CN CN202211250304.4A patent/CN115626948A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1389469A (zh) * | 2002-07-04 | 2003-01-08 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种螺甾皂苷和呋甾皂苷的分离、检测方法 |
CN108047300A (zh) * | 2017-11-30 | 2018-05-18 | 浙江大学 | 甾体皂苷类化合物及其制备方法与应用 |
WO2021258059A1 (en) * | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Animal feed composition for reducing ammonia production |
WO2021258056A1 (en) * | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Saponin containing extracts prepared from hesperaloe useful in the treatment of non-human animals |
WO2021258055A1 (en) * | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Saponin containing extracts prepared from hesperaloe useful in the treatment of non-human animals |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
HONG ZHANG等: "Steroidal sapogenins and glycosides from the fibrous roots of Polygonatum odoratum with inhibitory effect on tissue factor (TF) procoagulant activity", 《STEROIDS》, vol. 89, pages 1 - 10 * |
TONG JIANG等: "Research on Processing-Induced Chemical Variations in Polygonatum Cyrtonema Rhizome by Integrating Metabolomics and Glycomics", 《MOLECULES》, vol. 27, pages 1 - 21 * |
郭焕杰: "玉竹甾体皂苷成分及其活性研究", 《全国硕士论文医药卫生科技辑》, pages 1 - 92 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN109776635B (zh) | 一种中药组合物中八种成分的分离方法 | |
Nie et al. | Saponins from chinese medicinal plants.(1). Isolation and structures of Hemslosides | |
CN112300242B (zh) | 一种呋甾皂苷类化合物单体的制备方法 | |
CN109912680B (zh) | 一种齐墩果烷型三萜皂苷及其提取分离方法和应用 | |
CN108395464B (zh) | 一种从积雪草出发制备积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷b的方法 | |
Ansari et al. | Structural studies on a saponin isolated from Nigella sativa | |
EP3680248A1 (en) | Method for separating eighteen components in traditional chinese medicine composition | |
CN110627861A (zh) | 一种知母甾体皂苷化合物及其制备方法和应用 | |
CN111018877B (zh) | 一种土木香中倍半萜类衍生物、其制备方法及应用 | |
Yan-Yun et al. | Triterpenoid saponins from the leaves of Ilex kudingcha | |
YAMAMOTO et al. | Scrophulasaponins II-IV, new saikosaponin homologs from Scrophularia kakudensis FRANCH. | |
CN115626948A (zh) | 一种新的螺甾皂苷单体及其制备方法 | |
CN111303238B (zh) | 甾体皂苷类化合物及其制备方法和医药用途 | |
CN113583080B (zh) | 一种化合物及其制备方法和应用 | |
CN102532243B (zh) | 一种同时制备野蔷薇苷和蔷薇苷化合物的方法 | |
Verma et al. | Spectral analysis of steroidal saponin isolated and purified from leaves extract of Asparagus racemosus (family–Asparagaceae) | |
Yu-Ze et al. | Steroidal constituents from Helleborus thibetanus and their cytotoxicities | |
CN115677816B (zh) | 一种新的呋甾皂苷单体及其制备方法 | |
CN105669787B (zh) | 一种从杜仲提取环橄榄树脂素9-糖苷的方法 | |
Deqiang et al. | Ocotillone-type ginsenoside from leaves of Panax ginseng | |
CN109369769B (zh) | 一种从蒺藜茎叶中提取分离海柯酮单体的方法 | |
CN111635450B (zh) | 鸡蛋花中具有抗糖尿病活性的化合物及其制备方法 | |
CN105294812B (zh) | 一种虎舌红三萜皂苷对照品的制备方法 | |
CN109336942A (zh) | 一种从人参中提取纯化竹节参皂苷ⅵ的方法 | |
CN114133424B (zh) | 三萜类化合物及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |