CN115557857B - 一种苦柯胺b中间体及其制备方法与甲磺酸苦柯胺b的制备方法 - Google Patents

一种苦柯胺b中间体及其制备方法与甲磺酸苦柯胺b的制备方法 Download PDF

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CN115557857B CN202211225588.1A CN202211225588A CN115557857B CN 115557857 B CN115557857 B CN 115557857B CN 202211225588 A CN202211225588 A CN 202211225588A CN 115557857 B CN115557857 B CN 115557857B
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Abstract

本发明提供了一种苦柯胺B中间体及其制备方法与甲磺酸苦柯胺B的制备方法，属于医药技术领域。本发明提供的苦柯胺B中间体(记为KB‑A)为KB‑II的盐，即通过采用酸对KB‑II进行成盐得到，一方面可以提高KB‑A的纯度和收率，省却了氰基还原后的柱层析纯化步骤，节省了大量的人力和物力，提高了生产效率，且降低了对环境的污染；另一方面可以改变产品的物理性质(所述KB‑A为固态或油状物，而现有技术CN201510037201.3中KB‑III为液态)，便于纯化，这样更加有利于后续处理及工业生产。

Description

一种苦柯胺B中间体及其制备方法与甲磺酸苦柯胺B的制备 方法
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及一种苦柯胺B中间体及其制备方法与甲磺酸苦柯胺B的制备方法。
背景技术
天然产物苦柯胺B(Kukoamine B，化学结构如式I所示)是Shinji Funayama等首次从地骨皮中分离提取的生物碱类化合物。苦柯胺B能有效拮抗导致脓毒症的细菌病原体相关分子——内毒素/脂多糖(endotoxin/lipopolysaccharide，LPS)和细菌DNA(CpG DNA)，对治疗脓毒症表现出良好活性，且作用明显优于阳性对照药物，因而具有良好的成药前景。
中国专利CN 201510037201.3公开了一种苦柯胺B中间体的制备方法，具体是在雷尼镍催化作用下将KB-I还原得到KB-II，所述KB-II属于脂肪伯胺类化合物，存在不稳定的情况，之后该专利中在三乙胺作用下将KB-II与氨基保护剂反应，得到KB-III，为黄色的油状物，所述KB-III是合成苦柯胺B的关键中间体，脱掉保护基即得苦柯胺B；所述KB-I、KB-II和KB-III(以氨基保护剂为氯甲酸苄酯为例)的结构式依次如下所示：
采用上述专利中方法，将KB-I中氰基还原后所得含KB-II产物体系中存在杂质(TLC检测)，需要采用柱层析法对其进行纯化，方可用到下一步的反应中。但是采用柱层析法纯化一方面产品收率较低，另一方面工作量巨大，不适合工业化生产。因此，如何避免采用柱层析法纯化，以更有利于实现工业化生产，是目前急需解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种苦柯胺B中间体及其制备方法与甲磺酸苦柯胺B的制备方法，本发明提供的苦柯胺B中间体为KB-II的盐，可以避免现有技术中利用KB-I制备苦柯胺B时氰基还原后的柱层析纯化步骤，有利于提高产品收率以及纯度，便于实现工业化生产。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种苦柯胺B中间体，具有式A1或式A2所示结构：
所述式A2中R为HCl、CH3SO3H、H2SO4、CH3COOH、
本发明提供了上述技术方案所述苦柯胺B中间体的制备方法，包括以下步骤：
将KB-I、甲醇、甲醇氨溶液与雷尼镍混合，在氢气存在条件下进行还原反应，得到含KB-II产物体系；
将所述含KB-II产物体系依次进行第一浓缩、快速硅胶柱净化和第二浓缩，得到KB-II；
将所述KB-II、溶解试剂与酸混合，进行成盐反应，得到具有式A1或式A2所示结构的苦柯胺B中间体；
其中，所述酸为草酸、盐酸、甲磺酸、硫酸、冰醋酸、马来酸或柠檬酸；
所述KB-I的结构式如下所示：
所述KB-II的结构式如下所示：
优选地，所述KB-II与酸的摩尔比为1：(1.2～2.2)。
优选地，所述溶解试剂包括乙酸乙酯、乙腈、甲苯或丁酮。
优选地，所述成盐反应的温度为20～50℃，时间为15min～24h。
优选地，所述成盐反应后还包括纯化处理，所述纯化处理的方式包括重结晶或打浆，所述重结晶和打浆采用的试剂独立地包括乙酸乙酯、乙腈、甲苯或丁酮。
优选地，所述还原反应的温度为30～50℃，时间为12～24h；所述还原反应在压力为0.3～0.8MPa条件下进行。
本发明提供了一种甲磺酸苦柯胺B的制备方法，包括以下步骤：
将上述技术方案所述苦柯胺B中间体、甲烷磺酸、甲醇以及催化剂混合，在氢气氛围中进行脱保护基反应，得到甲磺酸苦柯胺B。
优选地，所述苦柯胺B中间体与甲烷磺酸的摩尔比为1：(2.0～2.5)。
优选地，所述脱保护基反应在压力为0.3～0.8MPa条件下进行，所述脱保护基反应的温度为10～30℃，时间为12～24h。
本发明提供了一种具有式A1或式A2所示结构的苦柯胺B中间体(记为KB-A)，所述KB-A为KB-II的盐，即通过采用酸对KB-II进行成盐得到，一方面可以提高KB-A的纯度和收率，省却了氰基还原后的柱层析纯化步骤，节省了大量的人力和物力，提高了生产效率，且降低了对环境的污染；另一方面可以改变产品的物理性质(所述KB-A为固态或油状物，而现有技术CN 201510037201.3中KB-III为液态)，便于纯化，这样更加有利于后续处理及工业生产，例如与现有技术CN 201510037201.3中KB-III相比，利用本发明所述KB-A制备苦柯胺B，更有利于满足工业生产要求。
本发明提供了所述KB-A的制备方法，本发明通过采用酸对KB-II进行成盐制备得到KB-A，产品收率和纯度高，且操作简单，重现性极好。
本发明提供了基于所述KB-A制备甲磺酸苦柯胺B的方法，所述KB-A为固态或油状物，有利于建立中间体质量标准并且进行中间体控制，同时有利于储存，使用时便于投料；本发明采用所述KB-A制备甲磺酸苦柯胺B，有利于提高甲磺酸苦柯胺B纯度，且避免了中间体的柱层析纯化操作，减少了工业三废的排放。
附图说明
图1为实施例1制备的KB-A(即KB-II的草酸盐)的核磁谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种苦柯胺B中间体，具有式A1或式A2所示结构：
所述式A2中R为HCl、CH3SO3H、H2SO4、CH3COOH、
在本发明中，所述苦柯胺B中间体具体为以下化合物中的任一种：
本发明提供了上述技术方案所述苦柯胺B中间体的制备方法，包括以下步骤：
将KB-I、甲醇、甲醇氨溶液与雷尼镍混合，在氢气存在条件下进行还原反应，得到含KB-II产物体系；
将所述含KB-II产物体系依次进行第一浓缩、快速硅胶柱净化和第二浓缩，得到KB-II；
将所述KB-II、溶解试剂与酸混合，进行成盐反应，得到具有式A1或式A2所示结构的苦柯胺B中间体；
其中，所述酸为草酸、盐酸、甲磺酸、硫酸、冰醋酸、马来酸或柠檬酸；
所述KB-I的结构式如下所示：
所述KB-II的结构式如下所示：
本发明将KB-I、甲醇、甲醇氨溶液与雷尼镍混合，在氢气存在条件下进行还原反应，得到含KB-II产物体系。在本发明中，所述还原反应优选在四氢呋喃存在条件下进行，以便于物料更好溶解。在本发明中，所述KB-I、甲醇、甲醇氨溶液、四氢呋喃与雷尼镍的用量比优选为0.196mol：(0.8～1.6)L：(0.2～0.6)L：(0～0.8)L：(20～60)g，更优选为0.196mol：1.2L：0.4L：0.4L：(30～40)g。在本发明中，所述甲醇氨溶液中氨气的浓度优选为11～13wt％。本发明对各物料混合时的加料顺序没有特殊限定，保证各物料充分混合即可。在本发明中，所述还原反应的温度优选为30～50℃，更优选为30～35℃；所述还原反应的时间优选为12～24h，更优选为15h；所述还原反应优选在压力为0.3～0.8MPa条件下进行，更优选为0.5MPa。本发明优选通过TLC监测还原反应进程。
得到含KB-II产物体系后，本发明将所述含KB-II产物体系依次进行第一浓缩、快速硅胶柱净化和第二浓缩，得到KB-II。在本发明中，所述第一浓缩和第二浓缩优选为减压浓缩。本发明优选将所述含KB-II产物体系过滤，将所得滤液进行第一浓缩，然后将所得浓缩物溶解于四氢呋喃中，将所得溶液倒入快速硅胶柱中加压过滤以实现净化，并采用四氢呋喃冲洗所述快速硅胶柱，收集的滤液即为净化液，最后将所得净化液进行第二浓缩，得到KB-II。在本发明中，在所述快速硅胶柱中进行加压过滤的压力优选为0.1～0.2MPa。
得到KB-II后，本发明将所述KB-II、溶解试剂与酸混合，进行成盐反应，得到具有式A1或式A2所示结构的苦柯胺B中间体。在本发明中，所述KB-II与酸的摩尔比优选为1：(1.2～2.2)，更优选为1：(2.0～2.2)。在本发明中，所述溶解试剂优选包括乙酸乙酯、乙腈、甲苯或丁酮，更优选为乙酸乙酯。在本发明中，所述成盐反应的温度优选为20～50℃，具体可以在室温条件下进行，在本发明的实施例中，所述室温具体为25℃；所述成盐反应的时间优选为15min～24h，更优选为20min～15h。在本发明中，所述成盐反应后还优选包括纯化处理，所述纯化处理的方式优选包括重结晶或打浆，所述重结晶和打浆采用的试剂优选独立地包括乙酸乙酯、乙腈、甲苯或丁酮，更优选独立地为乙酸乙酯或乙腈。
本发明优选根据酸的具体种类以及苦柯胺B中间体的性质选择合适方式进行成盐反应以及纯化处理，下面进行具体说明。
当所述酸为草酸时，本发明优选将第二浓缩后所得物料进行萃取和第三浓缩，将所得KB-II、溶解试剂以及草酸混合，在搅拌条件下进行成盐反应，有固体析出，过滤，所得滤饼为粗产物；将所述粗产物与四氢呋喃以及除镍硅胶混合进行除镍处理，之后过滤，将所得滤液进行第四浓缩，所得浓缩物与重结晶试剂混合，在搅拌条件下进行重结晶，之后过滤，所得滤饼干燥后得到具有式A1所示结构的苦柯胺B中间体。在本发明中，所述萃取所用萃取剂优选为乙酸乙酯，所述萃取优选在草酸存在条件下进行；本发明优选增加萃取步骤，有利于固体的析出，在萃取的过程中加入草酸，能够改善物质溶解性，有利于萃取顺利进行，减少乳化现象。本发明优选将第二浓缩后所得物料、乙酸乙酯、草酸、水以及饱和食盐水混合进行萃取，所述萃取的次数优选为1～4次，更优选为2～3次；收集萃取所得有机相用饱和食盐水洗涤，然后加入无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液进行第三浓缩；在本发明中，所述第三浓缩优选为减压浓缩。在本发明中，所述溶解试剂优选为乙酸乙酯。在本发明中，所述除镍处理的时间优选为10～24h，更优选为12～15h。在本发明中，所述第四浓缩优选为减压浓缩。在本发明中，所述重结晶试剂优选为乙腈；所述重结晶的次数优选为1～3次，更优选为2次；每次重结晶过程中所需搅拌的时间优选为10～24h，更优选为12～15h。在本发明中，每次重结晶后，优选过滤，将所得滤饼溶解于四氢呋喃中，过滤，将滤液减压浓缩，将所得浓缩物与重结晶试剂混合进行下一次重结晶。
当所述酸为盐酸、甲磺酸、硫酸、冰醋酸、马来酸或柠檬酸时，本发明优选将第二浓缩后所得KB-II溶于溶解试剂中得到KB-II溶液，然后将所述KB-II溶液与酸混合，在搅拌条件下进行成盐反应，有油状物析出，静置分层，除去上层溶解试剂相，收集下层油状物；之后将所述油状物与打浆试剂混合，在搅拌条件下进行打浆，之后静置分层，去除上打浆试剂相，收集下层油状物，之后经第五浓缩，得到具有式A2所示结构的苦柯胺B中间体。在本发明中，所述KB-II溶液的浓度优选为0.1～0.2mol/L，更优选为0.14mol/L。在本发明中，所述酸可以直接使用，也可以溶于溶解试剂中得到酸溶液再使用；具体的，当所述酸为盐酸时，优选将所述氯化氢气体与溶解试剂混合得到酸溶液，所述酸溶液的浓度优选为3～5mol/L，更优选为4mol/L；当所述酸为甲磺酸、硫酸、冰醋酸、马来酸或柠檬酸时，优选直接使用。在本发明中，所述溶解试剂优选为乙酸乙酯；所述打浆试剂优选为乙酸乙酯。在本发明中，所述打浆的次数优选为1～3次，更优选为2次；每次打浆过程中所需搅拌的时间优选为1～3h，更优选为2h。在本发明中每次打浆后，优选静置分层，去除上打浆试剂相，将所得下层油状物与打浆试剂混合进行下一次打浆。在本发明中，所述第五浓缩优选为减压浓缩。
本发明提供了一种甲磺酸苦柯胺B的制备方法，包括以下步骤：
将上述技术方案所述苦柯胺B中间体、甲烷磺酸、甲醇以及催化剂混合，在氢气氛围中进行脱保护基反应，得到甲磺酸苦柯胺B。
在本发明中，所述苦柯胺B中间体与甲烷磺酸的摩尔比优选为1：(2.0～2.5)，更优选为1：(2.1～2.3)。在本发明中，所述甲醇作为反应溶剂，其用量保证脱保护基反应顺利进行即可。在本发明中，所述催化剂优选为Pd/C或氧化铂，更优选为Pd/C；所述Pd/C优选为湿Pd/C；所述催化剂的用量保证脱保护基反应顺利进行即可。在本发明中，所述脱保护基反应优选在压力为0.3～0.8MPa条件下进行，更优选为0.5～0.7MPa；所述脱保护基反应的温度优选为10～30℃，具体可以在室温条件下进行所述脱保护基反应；所述脱保护基反应的时间优选为12～24h，更优选为15～18h。
所述脱保护基反应后，本发明优选将所得产物体系过滤，向滤液中加入除钯硅胶，进行除钯处理，之后过滤，向滤液中加入活性炭进行脱色处理，过滤，将滤液进行减压浓缩，将所得浓缩物溶解于乙醇中，将所得乙醇溶液加入到***中进行析晶，之后减压密闭过滤，所得滤饼进行真空干燥，得到的白色固体即为甲磺酸苦柯胺B。在本发明中，所述除钯处理、脱色处理以及析晶优选均在搅拌条件下进行，所述搅拌的时间优选独立为30min以上。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃(THF)和30g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L乙酸乙酯(EtOAc)和24.8g H2C2O4·2H2O搅拌溶解，然后加入1.4L H2O以及0.2L饱和食盐水，搅拌分液，收集有机相，按照上述方式将水相继续用EtOAc萃取两次(每次萃取时EtOAc用量为0.2L)，合并有机相，将合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，然后加入无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液进行减压浓缩，得到油状浓缩物；向所述油状浓缩物中加入2.8L EtOAc搅拌溶解，然后加入H2C2O4·2H2O(54.3g，0.43mol，2.2eq)，搅拌析晶15h，过滤，滤饼在室温条件下减压干燥，得到KB-A粗品；将所述KB-A粗品加入到反应釜中，向反应釜中加入4LTHF搅拌溶解，再向反应釜中加入20g除镍硅胶，搅拌15h，过滤，滤液倒入反应釜中进行减压浓缩，待几乎无液体流出后，向反应釜中加入2L乙腈，搅拌析晶15h，过滤，将滤饼倒入反应釜中，向反应釜中加入4LTHF搅拌溶解，过滤，滤液倒入反应釜中进行减压浓缩，待几乎无液体流出后，向反应釜中加入2L乙腈，搅拌析晶15h，过滤，滤饼在室温条件下减压干燥，得到KB-A(145g，0.12mol)，即KB-II的草酸盐，为白色固体。
实施例2
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和40g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc和24.8g H2C2O4·2H2O搅拌溶解，然后加入1.4LH2O以及0.2L饱和食盐水，搅拌分液，收集有机相，按照上述方式将水相继续用EtOAc萃取两次(每次萃取时EtOAc用量为0.2L)，合并有机相，将合并后的有机相用饱和食盐水洗涤，然后加入无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液进行减压浓缩，得到油状浓缩物；向所述油状浓缩物中加入2.8LEtOAc搅拌溶解，然后加入H2C2O4·2H2O(54.3g，0.43mol，2.2eq)，搅拌析晶15h，过滤，滤饼在室温条件下减压干燥，得到KB-A粗品；将所述KB-A粗品加入到反应釜中，向反应釜中加入4LTHF搅拌溶解，再向反应釜中加入20g除镍硅胶，搅拌15h，过滤，滤液倒入反应釜中进行减压浓缩，待几乎无液体流出后，向反应釜中加入2L乙腈，搅拌析晶15h，过滤，将滤饼倒入反应釜中，向反应釜中加入4LTHF搅拌溶解，过滤，滤液倒入反应釜中进行减压浓缩，待几乎无液体流出后，向反应釜中加入2L乙腈，搅拌析晶15h，过滤，滤饼在室温条件下减压干燥，得到KB-A(135g，0.11mol)，即KB-II的草酸盐，为白色固体。
实施例3
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和30g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入107.5mL盐酸乙酸乙酯溶液(EtOAc/HCl，由氯化氢气体通入乙酸乙酯中制备得到，HCl浓度为4mol/L)溶液搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(104g，0.098mol)，即KB-II的盐酸盐，为黄色油状物。
实施例4
称取KB-I 200g(0.196mol)、加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和40g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入107.5mL盐酸乙酸乙酯溶液(EtOAc/HCl，由氯化氢气体通入乙酸乙酯中制备得到，HCl浓度为4mol/L)溶液搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(108g，0.102mol)，即KB-II的盐酸盐，为黄色油状物。
实施例5
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和30g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入甲磺酸(41g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(114g，0.102mol)，即KB-II的甲磺酸盐，为黄色油状物。
实施例6
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和40g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入甲磺酸(41g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(103g，0.09mol)，即KB-II的甲磺酸盐，为黄色油状物。
实施例7
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和30g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入马来酸(50g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(100g，0.088mol)，即KB-II的马来酸盐，为黄色油状物。
实施例8
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和40g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入马来酸(50g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(93.5g，0.082mol)，即KB-II的马来酸盐，为黄色油状物。
实施例9
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和30g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入硫酸(42.2g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(110g，0.098mol)，即KB-II的硫酸盐，为黄色油状物。
实施例10
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和40g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入硫酸(42.2g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc(用量为)搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(104g，0.093mol)，即KB-II的硫酸盐，为黄色油状物。
实施例11
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和30g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入冰醋酸(25.8g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(97.8g，0.090mol)，即KB-II的醋酸盐，为黄色油状物。
实施例12
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和40g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入冰醋酸(25.8g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(99.8g，0.092mol)，即KB-II的醋酸盐，为黄色油状物。
实施例13
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和30g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入柠檬酸(82.6g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(124g，0.102mol)，即KB-II的柠檬酸盐，为黄色油状物。
实施例14
称取KB-I 200g(0.196mol)，加入1.2L甲醇、400mL甲醇氨溶液(氨气浓度为11～13wt％)、400mL四氢呋喃和40g雷尼镍，所有物料加入高压釜后，进行氢气置换，并保持压力为0.5MPa，同时升温，在30～35℃条件下保压反应15h，进行TLC检测，反应完毕，得到含KB-II料液；将所述含KB-II料液进行过滤，将滤液进行减压浓缩，采用THF溶解所得浓缩物后过快速硅胶柱，得到净化液；将所述净化液加入到反应釜中进行减压浓缩，得到KB-II；
向盛放有所述KB-II的反应釜中加入1.4L EtOAc搅拌溶解，然后加入柠檬酸(82.6g，0.43mol)搅拌20min，有油状物析出，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4L EtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物；向反应釜中继续加入1.4LEtOAc搅拌2h，停止搅拌，静置分层，除去上层EtOAc相，收集下层油状物，减压浓缩，得到KB-A(134g，0.11mol)，为黄色油状物。
采用液相色谱-质谱(LC-MS)法测定实施例1～14制备的KB-A的纯度，具体条件如表1所示。
表1 LC-MS方法条件
LC-MS:1025.54(M+H)+。
实施例1～14制备的KB-A产品质量如表2所示。
表2实施例1～14制备的KB-A的产量以及纯度
实施例1制备的KB-A(即KB-II的草酸盐)的核磁谱图如图1所示，相关数据如下所示：
1H-NMR(400MHz,DMSO)＝8.034(m,3H),7.952(m,1H),7.598-7.293(m,25H),6.946-6.930(m,4H),6.728(m,2H),5.103-5.064(m,10H),3.309-3.037(m,10H),2.786-2.726(m,6H),2.553(m,2H),2.360-2.322(m,2H),1.798(m,2H),1.655-1.621(m,2H),1.443(m,4H)ppm。
实施例1制备的KB-A(即KB-II的草酸盐)的元素分析如表3所示(重复测定两次，且将根据chemdraw编辑式A1时C、H和N元素占比的标准值列于表3中)。由表3中元素分析结果可知，所述KB-II的草酸盐中KB-II与草酸的摩尔比为1：2。
表3实施例1制备的KB-A的元素分析结果
Weight[mg] NArea CArea HArea N[％] C[％] H[％]
1.8900 3659 31536 8961 4.67 67.68 6.54
1.9320 3721 32292 9128 4.66 67.79 6.51
式A1 / / / 4.65 67.76 6.36
实施例15
将实施例1制备的KB-A(100g)用MeOH(600mL)溶解，得到KB-A的甲醇溶液；将CH3SO3H(18.35g)加入到MeOH(100mL)中，得到甲烷磺酸的甲醇溶液；将所述甲烷磺酸的甲醇溶液加入到KB-A的甲醇溶液中混合均匀，然后将所得混合溶液加入到氢化釜中，向氢化釜中加入湿Pd/C(5.0g)催化剂，用H2置换三次，在0.5MPa压力下室温反应18h；反应完成后，将所得产物体系过滤，向滤液中加入除钯硅胶，搅拌30min，之后过滤，向滤液中加入活性炭继续搅拌30min，过滤，将滤液进行减压浓缩，向浓缩后所得泡沫状物中加入无水乙醇，加热溶解，将所得乙醇溶液加入到***中，搅拌析晶30min，之后减压密闭过滤，所得滤饼进行真空干燥，得到白色固体52.5g，即为甲磺酸苦柯胺B，收率87％，纯度99.6％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种苦柯胺B中间体，具有式A1所示结构：
2.权利要求1所述苦柯胺B中间体的制备方法，包括以下步骤：
将KB-I、甲醇、甲醇氨溶液与雷尼镍混合，在氢气存在条件下进行还原反应，得到含KB-II产物体系；
将所述含KB-II产物体系依次进行第一浓缩、快速硅胶柱净化和第二浓缩，得到KB-II；
将所述KB-II、溶解试剂与酸混合，进行成盐反应，得到具有式A1所示结构的苦柯胺B中间体；
其中，所述酸为草酸；
所述KB-I的结构式如下所示：
所述KB-II的结构式如下所示：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述KB-II与酸的摩尔比为1：(1.2～2.2)。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述溶解试剂包括乙酸乙酯、乙腈、甲苯或丁酮。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述成盐反应的温度为20～50℃，时间为15min～24h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述成盐反应后还包括纯化处理，所述纯化处理的方式包括重结晶或打浆，所述重结晶和打浆采用的试剂独立地包括乙酸乙酯、乙腈、甲苯或丁酮。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述还原反应的温度为30～50℃，时间为12～24h；所述还原反应在压力为0.3～0.8MPa条件下进行。
8.一种甲磺酸苦柯胺B的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1所述苦柯胺B中间体、甲烷磺酸、甲醇以及催化剂混合，在氢气氛围中进行脱保护基反应，将所得产物体系过滤，向滤液中加入除钯硅胶，进行除钯处理，之后过滤，向滤液中加入活性炭进行脱色处理，过滤，将滤液进行减压浓缩，将所得浓缩物溶解于乙醇中，将所得乙醇溶液加入到***中进行析晶，之后减压密闭过滤，所得滤饼进行真空干燥，得到甲磺酸苦柯胺B。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述苦柯胺B中间体与甲烷磺酸的摩尔比为1：(2.0～2.5)。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述脱保护基反应在压力为0.3～0.8MPa条件下进行，所述脱保护基反应的温度为10～30℃，时间为12～24h。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102464591A (zh) * 2010-11-10 2012-05-23 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 苦柯胺b盐及制备方法和用途
CN104725278A (zh) * 2015-01-23 2015-06-24 天津红日药业股份有限公司 一种苦柯胺b中间体的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102464591A (zh) * 2010-11-10 2012-05-23 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 苦柯胺b盐及制备方法和用途
CN104725278A (zh) * 2015-01-23 2015-06-24 天津红日药业股份有限公司 一种苦柯胺b中间体的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
The Total Synthesis of Spermine Alkaloid Kukoamine Bimesylate;Kai Dong;Synlett;第29卷(第20期);2669-2672页 *

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