CN115551533A - 涉及治疗疾病的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于预防或治疗瘙痒症(pruritus)、痒疹(prurigo)、嗜中性皮肤病(neutrophilic dermatoses)和皮肤癌(skin cancer)的组合物和方法。本发明延伸到用于预防或治疗过度的Th2反应在其中起有害作用的病况的组合物。本发明进一步延伸到用于人和兽医疗法的用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病和皮肤癌的组合物和本发明组合物的用途。

Description

涉及治疗疾病的组合物和方法

技术领域

本发明涉及用于预防或治疗瘙痒症(pruritus)、痒疹(prurigo)、嗜中性皮肤病(neutrophilic dermatoses)和皮肤癌(skin cancer)的组合物和方法。本发明延伸到用于预防或治疗过度的Th2反应在其中起有害作用的病况的组合物。本发明进一步延伸到用于人和兽医疗法的用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病和皮肤癌的组合物和本发明组合物的用途。

背景技术

过度反应的Th2反应可能是炎症性病况，特别是瘙痒性炎症性皮肤病的基础。目前认为Th2细胞在宿主对病原体的防御中起着主要作用，过度的Th2反应可能导致疾病，如瘙痒症、痒疹和皮肤癌，特别是皮肤T细胞淋巴瘤。

定义瘙痒症为令人不快的感觉，这会激起抓挠的欲望。它是许多皮肤病的特征，也是一些全身性疾病的不寻常的迹象。人们早已知道某些全身性疾病会引起瘙痒症，瘙痒症的强度从轻微的烦扰到棘手的致残病况。根据潜在的致病疾病，可将全身性瘙痒症分为以下几类：肾脏性瘙痒症、胆汁淤积性瘙痒症、血液病性瘙痒症、内分泌性瘙痒症、与恶性肿瘤有关的瘙痒症和特发性全身性瘙痒症。瘙痒症，或瘙痒(itch)，最常见的是与原发性皮肤病,如干燥病(xerosis)、荨麻疹(urticaria)、节肢动物攻击(arthropod assault)、肥大细胞增多症(mastocytosis)、疱疹样皮炎(dermatitis herpetiformis)或类天疱疮(pemphigoid)有关。

痒疹是用于表示一组皮肤病症的术语，其特征是剧烈瘙痒和难以治疗的丘疹或结节。这些病况中最著名的是结节性痒疹(prurigo nodularis)，通常表现为影响四肢的痒性结节，在组织学上由角化过度(hyperkeratosis)和棘皮症(acanthosis)组成，并伴有表皮向下突出。类似的病况，丘疹性瘙痒症(丘疹性皮炎；成人慢性瘙痒症)，由较小的损伤组成，主要表现在中年妇女身上。

有瘙痒症状的炎症性和自身免疫性皮肤病可以包括病况，如自身免疫性大疱病(autoimmune bullous diseases)和***疾病。自身免疫性大疱病(AIBD)是一组异质性的严重皮肤病，其特点是存在针对皮肤粘附分子的自身抗体，该组皮肤病包括大疱性类天疱疮(Bullous Pemphigoid)、类天疱疮组和疱疹样皮炎。***疾病包括全身性硬化症、硬斑病(Morphea)、全身性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus)、皮肌炎(Dermatomyositis)、Sjogren综合征和白癜风(Vitiligo)。

皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)是影响皮肤的罕见类型的非霍奇金淋巴瘤。它是在T细胞(也称为T淋巴细胞)变得不正常时发展的。有不同类型的CTCL，最常见的称为蕈样肉芽肿(mycosis fungoides)和塞扎里综合征(Sézary syndrome)。

众所周知，不同的病原体在体外诱导不同的干扰素-α(IFN-α)亚型，IFN-α亚型具有不同的抗病毒、抗增殖和免疫调节的活性。已证明经由各种途径的感染可以诱发不同的亚型谱。IFN-α亚型与相同的受体结合，激活共同的信号传导途径，已经预期其具有类似的免疫功能。根据定义，所有IFN-α亚型都具有抗病毒活性，尽管它们在这种上下文中的绝对效力可能有很大的不同。此外，已经描述了许多其他生物特性，但效力各异，该生物特性包括免疫调节和抗增殖活性。多效性作用似乎是由于与受体链不同的相互作用和通过不同的细胞内途径向一系列效应分子传导的信号传导所致。I型IFN受体由两条链，IFNR1和IFNR2组成。12种IFN-α亚型中的每一种与不同受体链的结合亲和力都有一定的范围。IFNα-14对两个干扰素受体都有最高的亲和力，这就是为什么它与其他11种亚型相比如此活跃。

IFN-α可能在调节Th2反应中具有关键作用。已经证明，IFN-α治疗通过抑制IL4和IL13基因的表达来抑制Th2细胞的发展。因此，IFN-α能够在促进Th2细胞失衡的疾病和感染中重新建立Th2群体的平衡。近年来，人们发现除了抗病毒作用外，IFN-α还发挥了几种免疫调节功能。IFN-α可以影响树突状细胞的分化，控制各种促炎症细胞因子，如IL8或IL18的表达，并诱导几种抗炎介质，如IL1受体拮抗剂(IL1Ra)、可溶性TNF受体p55、IL10和IL18结合蛋白。然而，IFN-α的作用机制，特别是个体IFN-α亚型，仍然只了解部分。

对于有效的、安全的、可用于治疗瘙痒症、痒疹和皮肤癌的局部治疗方法有很大的需求没有得到满足。

发明概述

本发明人提出发展改进的免疫治疗方法来治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病和皮肤癌是可取的。由于瘙痒症是由Th2细胞的过度反应和某些细胞因子的相应过度产生造成的，因此能够改变和平衡误导的Th2反应和相关细胞因子的过度产生的药物将有利于治疗瘙痒症。此类药物将进一步适用于治疗过度的Th2反应在其中起作用的疾病和病况，如瘙痒症、痒疹和皮肤癌。嗜中性皮肤病是一组异质的炎症性皮肤病症，其特点是组织病理学上无菌的、主要是中性粒细胞的浸润。可以认为它是包罗万象的术语，主要是指有原发性或继发性血管病变的不同证据的表皮或真皮过程。它们包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠相关性皮肤病-关节炎综合征(bowel-associated dermatosis-arthritis syndrome)、类风湿嗜中性皮炎(rheumatoid neutrophilic dermatitis)、成人斯蒂尔病(adult Still disease)、原发性大疱(primarily bullous)、表皮性和血管性ND。本发明人认为本文所述的IFN-α14，例如SEQ ID NO:1或其变体或其片段、HYBRID 1，例如SEQ ID NO:2或其变体或其片段或HYBRID2，例如SEQ ID NO:3或其变体或其片段在治疗嗜中性皮肤病方面具有实用性，因为它们表现出抗髓细胞(中性粒细胞)的活性。

本发明人提出有必要提供局部治疗，其可以关闭角质细胞层中对中性粒细胞和嗜碱粒细胞/肥大细胞有趋化作用的细胞因子/趋化因子，其中中性粒细胞和嗜碱粒细胞/肥大细胞会引起皮肤中的瘙痒和炎症性疾病。

本发明涉及用于预防或治疗过度的Th2反应在其中起有害作用的病况，如瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病和皮肤癌的组合物和方法。本发明进一步延伸到本发明的组合物在治疗和/或防治瘙痒症、痒疹和皮肤癌中的用途。本发明的皮肤炎症性病症可以与感染性和肿瘤性过程相关的炎症区分开来。

经过广泛的实验，本发明的发明人出人意料地确定施用IFN-α14，例如SEQ ID NO:1或其变体或其片段、HYBRID 1，例如SEQ ID NO:2或其变体或其片段或HYBRID 2，例如SEQID NO:3或其变体或其片段，如本文所述，导致抑制或抑止与瘙痒症的免疫反应有关的各种细胞因子。本发明人意外地确定IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2可以直接相互作用以关闭角质细胞层中对中性粒细胞和嗜碱粒细胞/肥大细胞有趋化作用的细胞因子，其中中性粒细胞和嗜碱粒细胞/肥大细胞会引起皮肤中的瘙痒和其他炎症性疾病。发明人表明，即使在TNF-α的影响下，IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2也能抑制这些趋化因子。令人惊讶的是，当IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2局部施用时，证明了这种作用。IFN-α14是17,000道尔顿的大分子，这种分子能通过皮肤是出乎意料的。更令人惊讶的是，发明人意外地发现局部提供IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2对角质细胞中趋化因子的影响。本发明人认为，与向全血提供IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2时更多的无差别作用相比，IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2的局部作用对皮肤瘙痒症和炎症性病症更具有选择性和实用性--既体现在多效性影响，又体现在更多的组织与IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2接触的事实。

本发明人还确定本文称为HYBRID 1(SEQ ID：2)和HYBRID 2(SEQ ID NO:3)的重组IFN-混合分子对干扰素受体也有很高的结合亲和力，并将表明对涉及皮肤瘙痒症和炎症性病症，包括嗜中性皮肤病，的趋化因子，特别是关闭或抑止角质细胞层中对引起皮肤瘙痒症的嗜中性细胞和嗜碱粒细胞/肥大细胞有趋化作用的趋化因子的作用。

本发明人研究了合成α-干扰素，干扰素-α-14(SEQ ID NO:1)、HYBRID1(SEQ IDNO:2)和HYBRID 2(SEQ ID NO:3)抑制白细胞介素-31(IL31)产生的能力。IL31是细胞因子，其在诱导瘙痒症方面起着重要作用，在不希望被理论束缚的情况下，认为其在皮肤炎症性病症，如嗜中性皮肤病中具有重要作用。本发明人非常惊讶地确定IFN-a14(SEQ ID NO:1)、HYBRID 1(SEQ ID NO:2)和HYBRID 2(SEQ ID NO:3)能抑止IL31。本发明人将IL31的抑止作用与干扰素-α-2b(Roferon)进行了比较研究。令人惊讶的是干扰素-α14(SEQ ID NO:1)、HYBRID 1(SEQ ID NO:2)和HYBRID 2(SEQ ID NO:3)对IL31的产生有活性，并能抑制或抑止IL31的产生，而干扰素-α2b(Roferon)没有显示出抑制活性。

PCT公开号WO2014/037717和PCT公开号WO2015/136287中讨论了干扰素亚型IFN-a10和IFN-a14及其混合体(hybrid)。特别是公开了IFN-a10-IFN-α14混合体，其含有基于所有12种α-干扰素的共识骨架序列的IFN-α10和IFN-α14亚型结合位点的特征序列。PCT公开号WO2017/046583中也讨论了干扰素亚型IFN-α10和IFN-α14及其混合体。特别是公开了IFN-α10-IFN-α14混合体，该混合体具有源自IFN-α10和IFN-α14亚型的高亲和力结合位点，而不是基于所有12种IFN-α亚型的共识序列。该混合体衍生出IFN-α10和IFN-α14亚型的序列特征，而没有其他10种干扰素-α亚型的序列特征。

虽然不想受理论约束，但本发明人认为，包含IFN-α10氨基酸序列的蛋白质对干扰素受体2(IFNR2)有更大的亲和力，而包含IFN-α14氨基酸序列的蛋白质对干扰素受体1(IFNR1)有更大的亲和力。因此，用允许与干扰素受体1结合的IFN-α14的氨基酸替换包含IFN-α10氨基酸序列的蛋白质，或用允许与干扰素受体2结合的IFN-α10的氨基酸替换包含IFN-α14氨基酸序列的蛋白质被认为提供了IFN-α10IFN-α14混合体蛋白，与单独的IFN-α10或IFN-α14相比其对干扰素受体1和2的结合亲和力都更强。包括IFN-α10和IFN-α14的主要干扰素受体结合位点是指该混合体包含选自IFN-α10的氨基酸和替换成IFN-α14的氨基酸序列以提高IFN-α14亚型与干扰素受体2结合的能力和/或该混合体包含选自IFN-α14的氨基酸和替换成IFN-α10的氨基酸序列以提高IFN-α10亚型与干扰素受体1结合的能力。

适当地，包含IFN-α10氨基酸序列的蛋白质与确定参与与干扰素受体1结合的IFN-α14的氨基酸的几个氨基酸替换可增强该蛋白质与干扰素受体1的结合。适当地，包含IFN-α14氨基酸序列的蛋白质与确定参与与干扰素受体2结合的IFN-α10的氨基酸的氨基酸替换可增强蛋白质与干扰素受体2的结合。

在实施方案中，IFN-α10-IFN-α14混合体可以基本上具有IFN-α10的氨基酸序列，但在氨基酸残基80至150之间的区域，或适当地在氨基酸残基84至144之间，或适当地在氨基酸残基92至115之间，或适当地在氨基酸残基90至110之间，(利用IFN-α10序列的编号)进行修改以提供由IFN-α14序列提供的氨基酸。认为这些区域或这些区域的一部分的氨基酸残基提供了IFN-α14与干扰素受体1的结合。特别是，混合体序列可以包括IFN-α10序列的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个或至少11个修饰以提供IFN-α14序列的相应残基或其保守的突变。在实施方案中，提供11个修饰，如用黑体字指出的氨基酸所示。

(混合体2:SEQ ID NO:3).

在实施方案中，IFN-a10-IFN-a14混合体序列可包括至少一个选自94、101、102、109或144位的氨基酸的突变，优选至少两个选自94、101、102、109或144位的氨基酸的突变，更优选至少三个选自94、101、102、109或144位的氨基酸的突变，更优选至少四个选自94、101、102、109或144位的氨基酸的突变或更优选至少五个选自94、101、102、109或144位的氨基酸的突变。在另一个实施方案中，可利用IFN-α14作为混合体的骨架结构，在IFN-α10和IFN-α14序列的N端和C端区域不同的残基可以在混合体序列中提供如IFN-α10序列中存在的残基。适当地，可对IFN-α14的N端序列进行至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10或至少11个替换，以提供混合体序列，以在IFN-α10和IFN-α14之间不共享/共有氨基酸的那些氨基酸位置提供来自IFN-α10的残基。适当地，在IFN-α14的C端序列提供至少1、至少2或3个替换，以在IFN-α10和IFN-α14之间不共享/共有的那些氨基酸位置上向混合体序列提供来自IFN-α10的残基。在实施方案中，从IFN-α14的N端序列进行至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10或至少11个替换，并从IFN-α14的C端序列进行至少1、至少2或3个替换，以在IFN-α10和IFN-α14之间不共享/共有氨基酸的那些氨基酸位置上向混合体提供来自IFN-α10的残基。

在实施方案中，IFN-α14包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体组成。

在实施方案中，该混合物包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。

在实施中，该混合物包含氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体组成。

所谓功能活性是指IFN-α10-IFN-α14混合体多肽包含IFN-α10和IFN-α14的主要干扰素结合位点，其中向受试者施用多肽或在受试者中表达多肽促进抑制Th2介导的免疫反应。进一步，功能活性可以通过混合肽抑制Th2介导的反应的能力来表示。

片段可以包含来自SEQ ID NO：1、2或3的至少50个、优选100个、更优选150个或更多的连续氨基酸，并且该片段具有功能活性。适当地，片段可以用例如cDNA的C端连续缺失来确定。然后可将所述缺失构建体克隆到合适的质粒中。然后，可按本文所述测试这些缺失突变体的活性的生物活性。

所谓变体是指与SEQ ID NO:1、2或3至少有70％的同源性，更优选与SEQ ID NO:1、2或3至少有80％的同源性，更优选与SEQ ID NO:1、2或3至少有90％的同源性，甚至更优选与SEQ ID NO:1、2或3至少有95％的同源性，甚至更优选与SEQ ID NO:1、2或3至少有96％的同源性，甚至更优选与SEQ ID NO:1、2或3至少有97％的同源性，最优选与SEQ ID NO:1、2或3至少有98％的同源性的氨基酸序列。变体涵盖SEQ ID NO：1、2或3的多肽序列，其中包括氨基酸的替换，特别是已知的不导致蛋白质的生物活性或结构或折叠的任何重大修饰的高概率的替换。这些替换，通常被称为保守替换，在本领域是已知的。例如，精氨酸、赖氨酸和组氨酸组是已知的可互换的碱性氨基酸。适当地，在实施方案中，具有相同电荷、大小或疏水性的氨基酸可以相互替换。适当地，可以基于对干扰素α亚型的氨基酸序列对齐的分析来选择任何替换，以向氨基酸提供氨基酸的替换，这些氨基酸在序列对齐时存在于其他α亚型的类似或相同的位置。杂交体以及其变体和片段可使用本领域已知的合适的分子生物学方法生成。

本发明人还认为，将IFN-α14(SEQ ID NO:1)、HYBRID 1(SEQ ID NO:2)或HYBRID 2(SEQ ID NO:3)作为与皮肤表皮下层有关的局部治疗的用途有一定的相关性。在不希望受到理论约束的情况下，认为IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2的一部分可以通过皮肤到达真皮下层，那里有许多白细胞，特别是释放IL31的Th2。IL31经由其表面受体在瘙痒症中诱导趋化因子和其他细胞因子。IL31是强效的引起瘙痒症的细胞因子，其全身和局部施用可诱导啮齿动物、狗和猴子的抓挠行为。

本发明人出人意料地确定，与以前的局部药物相比，将IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2特别是SEQ ID NO:1、2或3或其变体或片段作为局部药物施用，导致角质细胞中的IL31减少或抑止更多。此外，本发明人已经确定可以使用非常低剂量的IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2，例如高达5x10^3IU/ml或5x10^4IU/ml的局部霜。

本发明人还指出，由于IFN-α14特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段向下扩散到较低的真皮层，它也可以关闭或抑止TNF-α，这也导致抑止趋化因子，如IL17，例如IL17A、IL17B、IL17F和/或IL22。

这导致发明人识别了改进的治疗组合物，这些组合物在治疗和/或防治瘙痒症、痒疹和皮肤癌以及过度Th2反应发挥作用的疾病和病况中具有实用性。

因此，本发明的第一方面提供了治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)向需要的受试者施用治疗有效量的干扰素α亚型，其中干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14和HYBRID 1或HYBRID 2的组合。

在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体组成。

在实施方案中，干扰素α亚型HYBRID 1包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。

在实施方案中，干扰素α亚型HYBRID 2包含氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体组成。

在实施方案中，施用方法是局部施用。在实施方案中，施用方法是舌下的。在这两种施用方法中，不希望受到理论的约束，认为提供IFN-α14、HYBRID 1和HYBIRD 2的浓度使得不诱导干扰素的全身作用。因此，可以实现趋化因子和白细胞介素的作用，而不引起(或只引起很少的)抗病毒或抗增殖作用。

我们认为这种施用方式有别于本领域中提供药理学剂量的干扰素的全身性递送。此类药理学剂量将激活此类干扰素的抗病毒/细菌特性(例如，在本技术领域施用IFNα2c后观察到的)导致副作用并废除本发明人在局部施用后观察到的低浓度相关免疫调节作用。通常，局部剂量可能比全身剂量少100-1000x，且只允许控制皮肤区的免疫反应。

在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2的治疗有效量是低剂量(高达5x10^4IU单位或5x10^3IU单位/ml)。在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2的治疗有效量低于目前对瘙痒症或其他瘙痒症或炎症性病症，例如嗜中性皮肤病的全身性治疗。

在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x10²IU/ml、1x10³IU/ml、1x10⁴IU/ml、1x10⁵IU/ml、1x10⁶IU/ml、1x10⁷IU/ml或1x10⁸IU/ml的剂量施用。

本发明人已经阐明，干扰素α亚型引起不同的反应，既相互影响，又取决于剂量(高剂量导致全身性的抗病毒和抗增殖作用)，低剂量的趋化因子和白细胞介素在非全身性层面的作用，并且反应可以随着组织变化。

在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用。例如，在人的局部应用中，可以使用5x10⁴IU/ml或更少的霜。在动物，例如狗，中舌下使用可以是10⁴IU/Kg，例如在1ml PBS中。

在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2以一天一次、一天两次、一天三次或一天四次局部施用。通常，对于舌下施用，剂量会每天提供一次。

在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2直接相互作用，关闭或抑止角质细胞层中的细胞因子/趋化因子。在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2直接相互作用，关闭角质细胞层中对中性粒细胞和嗜碱性细胞/肥大细胞有趋化作用的细胞因子，导致皮肤瘙痒症。在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID2通过皮肤到达真皮下层，在那里影响趋化因子的产生。

在某些实施方案中，受试者可以患有需要抑制Th2介导的免疫反应的病况。在某些实施方案中，受试者可能患有瘙痒症。在某些实施方案中，受试者可能患有瘙痒症。在某些实施方案中，受试者可能患有嗜中性皮肤病。在某些实施方案中，受试者可能患有皮肤癌。在某些实施方案中，受试者可能患有皮肤T细胞淋巴瘤。

在实施方案中，瘙痒症是肾脏瘙痒症、胆汁淤积性瘙痒症、血液学瘙痒症、内分泌瘙痒症、与恶性肿瘤有关的瘙痒症和特发性全身瘙痒症。在实施方案中，瘙痒症最常见的是与原发性皮肤病有关，如干燥病、荨麻疹、节肢动物攻击、肥大细胞增多症、疱疹样皮炎或类天疱疮有关。

在实施方案中，瘙痒症是结节性痒疹。在实施方案中，瘙痒症是丘疹性瘙痒症(丘疹性皮炎；成人慢性瘙痒症)。

在实施方案中，嗜中性皮肤病可选自包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠相关性皮肤病-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎、成人斯蒂尔病、原发性大疱、表皮性和血管性ND。

在实施方案中，该皮肤癌是皮肤T细胞淋巴瘤。

在某些实施方案中，瘙痒症是炎症性或自身免疫性皮肤病的症状。在实施方案中，有瘙痒症状的炎症性或自身免疫性皮肤病是自身免疫性大疱病(AIBD)或***疾病。在实施方案中，自身免疫性大疱病是大疱性类天疱疮、类天疱疮组和疱疹样皮炎。在实施方案中，***疾病是全身性硬化症、硬斑病、全身性红斑狼疮、皮肌炎、Sjogren综合征和白癜风。

通常，受试者是哺乳动物，特别是人。在实施方案中，受试者可以是动物，例如，但不限于伴侣动物，如狗。

根据本发明的第二个方面，提供了干扰素α亚型，其中干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2或IFN-α14和HYBRID 1或HYBRID 2的组合，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病、皮肤癌或需要抑制Th2介导的免疫反应的疾况。

在实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体组成。

在实施方案中，干扰素α亚型HYBRID 1包含SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。

在实施方案中，干扰素α亚型HYBRID 2包含氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体或由氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体组成。

在某些实施方案中，将局部施用干扰素α亚型。在某些实施方案中，干扰素α亚型可在舌下施用。这可能对兽医治疗特别有利。

在实施方案中，干扰素α亚型以本文讨论的低剂量施用。在实施方案中，干扰素α亚型是以非常低的剂量施用。在实施方案中，干扰素α亚型的治疗有效量低于目前瘙痒症的全身性治疗的。

在实施方案中，干扰素α亚型以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x10²IU/ml、1x10³IU/ml、1x10⁴IU/ml、1x10⁵IU/ml、1x10⁶IU/ml、1x10⁷IU/ml或1x10⁸IU/ml的剂量施用。

在实施方案中，干扰素α亚型以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用。

在实施方案中，干扰素α亚型以一天一次、一天两次、一天三次或一天四次施用。适当地，对于舌下施用，单个剂量会每天提供。

在实施方案中，瘙痒症是肾脏瘙痒症、胆汁淤积性瘙痒症、血液学瘙痒症、内分泌瘙痒症、与恶性肿瘤有关的瘙痒症和特发性全身瘙痒症。在实施方案中，瘙痒症最常见的是与原发性皮肤病，如干燥病、荨麻疹、节肢动物攻击、肥大细胞增多症、疱疹样皮炎或类天疱疮有关。

在实施方案中，该瘙痒症是结节性痒疹。在实施方案中，瘙痒症是丘疹性瘙痒症(丘疹性皮炎；成人慢性瘙痒症)。

在实施方案中，嗜中性皮肤病可包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠道相关皮炎-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎、成人斯蒂尔病、原发性大疱、表皮和血管性ND。在实施方案中，嗜中性皮肤病可包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠道相关皮炎-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎和成人斯蒂尔病。

在实施方案中，该皮肤癌是皮肤T细胞淋巴瘤。

在某些实施方案中，瘙痒症是炎症性或自身免疫性皮肤病的症状。在实施方案中，有瘙痒症状的炎症性或自身免疫性皮肤病是自身免疫性大疱病(AIBD)或***疾病。在实施方案中，自身免疫性大疱病是大疱性类天疱疮、类天疱疮组和疱疹样皮炎。在实施方案中，***疾病是全身性硬化症、硬斑病、全身性红斑狼疮、皮肌炎、Sjogren综合征和白癜风。

根据本发明的第三方面，提供了干扰素α亚型的用途，其中干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBIRD 2或IFN-14和HYBRID 1或HYBIRD 2的组合，其用于制备治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病、皮肤癌或需要抑制Th2介导的免疫反应的病况的药物。

根据本发明的进一步方面，提供了包含干扰素α亚型的组合物，其中干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14和HYBRID 1或HYBRID 2的组合，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病、皮肤癌或需要抑制Th2介导的免疫反应的病况。

根据本发明的进一步方面，提供了包含干扰素α亚型的药物组合物，其中干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14和HYBRID1或HYBRID 2的组合，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病、皮肤癌或需要抑制Th2介导的免疫反应的病况。

根据本发明的进一步方面，提供了干扰素α亚型，其中干扰素亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14和HYBRID 1或HYBRID 2的组合，其用于调节免疫反应，适当地调节受试者皮肤中但不是全身的免疫反应。

在本发明上述方面的实施方案中，干扰素α亚型IFN-α14包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其功能活性片段或变体或由SEQ ID NO:1的氨基酸序列或其功能活性片段或变体组成。

在本发明上述方面的实施方案中，干扰素α亚型HYBRID 1包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其功能活性片段或变体或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列或其功能活性片段或变体组成。

在本发明上述方面的实施方案中，干扰素α亚型HYBRID 2包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其功能活性片段或变体或由SEQ ID NO:3的氨基酸序列或其功能活性片段或变体组成。

在本发明上述方面的实施方案中，组合物或药物组合物是局部施用的。在某些实施方案中，干扰素α亚型可舌下施用。这可能对兽医治疗特别有利。

在本发明上述方面的实施方案中，干扰素α亚型是以低剂量施用。在实施方案中，干扰素α亚型是以非常低的剂量施用。在实施方案中，干扰素α亚型的治疗有效量低于目前瘙痒症的全身性治疗的。

在本发明上述方面的实施方案中，干扰素α亚型以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x10²IU/ml、1x10³IU/ml、1x10⁴IU/ml、1x10⁵IU/ml、1x10⁶IU/ml、1x10⁷IU/ml或1x10⁸IU/ml的剂量施用。

在本发明上述方面的实施方案中，干扰素α亚型以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用。

在本发明上述方面的实施方案中，干扰素α亚型以一天一次、一天两次、一天三次或一天四次施用。适当地，对于舌下施用，单个剂量会每天提供一次。

在实施方案中，瘙痒症是肾脏瘙痒症、胆汁淤积性瘙痒症、血液学瘙痒症、内分泌瘙痒症、与恶性肿瘤有关的瘙痒症和特发性全身瘙痒症。在实施方案中，瘙痒症最常见的是与原发性皮肤病有关，如干燥病、荨麻疹、节肢动物攻击、肥大细胞增多症、疱疹样皮炎或类天疱疮有关。

在实施方案中，瘙痒症是结节性痒疹。在实施方案中，瘙痒症是丘疹性瘙痒症(丘疹性皮炎；成人慢性瘙痒症)。

在实施方案中，嗜中性皮肤病可包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠道相关皮炎-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎、成人斯蒂尔病、原发性大疱、表皮和血管性ND。在实施方案中，嗜中性皮肤病可包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠道相关皮炎-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎和成人斯蒂尔病。

在实施方案中，皮肤癌是皮肤T细胞淋巴瘤。

在某些实施方案中，瘙痒症是炎症性或自身免疫性皮肤病的症状。在实施方案中，有瘙痒症状的炎症性或自身免疫性皮肤病是自身免疫性大疱病(AIBD)或***疾病。在实施方案中，自身免疫性大疱病是大疱性类天疱疮、类天疱疮组和疱疹样皮炎。在实施方案中，***疾病是全身性硬化症、硬斑病、全身性红斑狼疮、皮肌炎、Sjogren综合征和白癜风

在本发明上述方面的某些实施方案中，IFN-α亚型包含以下、由以下组成或是以下：IFN-α14，如融合蛋白、或重组蛋白或类似物，特别是其中包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其变体或片段或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其变体或片段组成。在实施方案中，IFN-α14可以是糖基化的。

在本发明上述方面的某些实施方案中，IFN-α亚型包含以下、由以下组成或是以下：HYBRID 1，如融合蛋白、或重组蛋白或类似物，特别是其中包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或其变体或片段或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其变体或片段组成。

在本发明上述方面的某些实施方案中，IFN-α亚型包含以下、由以下组成或是以下：HYBRID 2，如融合蛋白，或重组蛋白或类似物，特别是其中包含氨基酸序列SEQ ID NO:3或其变体或片段或由氨基酸序列SEQ ID NO:3或其变体或片段组成。

在本发明的进一步方面，提供了包含SEQ ID NO:1或其片段或变体或由SEQ IDNO:1或其片段或变体组成的重组多肽。本发明延伸到源自氨基酸序列SEQ ID NO:1的核酸序列。

在本发明的进一步方面，提供了包含SEQ ID NO:2或其片段或变体或由SEQ IDNO:2或其片段或变体组成的重组多肽。本发明延伸到源自氨基酸序列SEQ ID NO:2的核酸序列。

在本发明的进一步方面，提供了包含SEQ ID NO:3或其片段或变体或由SEQ IDNO:3或其片段或变体组成的重组多肽。本发明延伸到源自氨基酸序列SEQ ID NO:3的核酸序列。

发明详述

本发明的发明人令人惊讶地确定，如本文所述，施用IFN-α14，例如SEQ ID NO:1或其变体或片段、IFN-α14/IFN-α10混合体，如HYBRID 1，例如SEQ ID NO:2或其变体或片段，或HYBRID 2，例如SEQ ID NO:3或其变体或片段，导致抑制或抑止与瘙痒症的免疫反应相关的各种细胞因子。令人惊讶的是，当局部施用IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2时，这种作用得到加强。

SEQ ID NO:1是IFNα-14，可以定义如下：

SEQ ID NO:2是HYBRID 1，可以定义如下：

SEQ ID NO:3是HYBRID 2，可以定义如下：

特别是，本发明人已经确定IFN-a14，特别是SEQ ID NO:1、HYBRID1(SEQ ID NO:2)或HYBRID 2(SEQ ID NO:3)或其变体或片段，靶向与瘙痒症有关的角质细胞中的特定细胞因子，例如IL31。IL31是炎症性细胞因子，有助于引发细胞介导的免疫力对抗病原体。IL31由多种细胞，即2型辅助(Th2)T细胞产生。在Th2主导的炎症和某些Th2涉及的肿瘤(CTCL)，以及瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病和皮肤癌中，IL31从激活的皮肤归巢Th2细胞中释放。IL31与皮肤感觉神经末梢上的IL31RA受体(IL31RA/OSMRβ受体复合物)结合。作为放大机制，IL31A与离子通道，如TRPV1沟通，导致增强的Ca信号传导、STAT3激活，和可能感觉神经元的其他信号转导途径。图10展示了瘙痒症的途径。

本发明人已经证明，天然分子IFNα-14特别是SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO：3或其变体或片段，在非常低的剂量下消除或关闭了角质细胞中的IL31。这些发现可应用于提供用于治疗和/或预防瘙痒症、痒疹和皮肤癌，特别是皮肤T细胞淋巴瘤的改进的方法和改进的组合物。

在人角质细胞中，IL31能诱导几个与特应性皮肤炎症有关的趋化因子基因，如CCL1、CCL17和CCL22。因此，瘙痒性皮损中IL31的水平升高可能通过诱导趋化因子来增强皮肤炎症，随后导致T细胞的招募。反过来，激活的皮肤浸润性T细胞可能成为IL31的新来源，从而扩大特应性皮肤炎症和瘙痒症。

瘙痒症或皮肤瘙痒被定义为令人不快的感觉，这会激起抓挠的欲望。根据潜在的致病疾病，可将全身性瘙痒症分为以下几类：肾脏性瘙痒症、胆汁淤积性瘙痒症、血液病性瘙痒症、内分泌性瘙痒症、与恶性肿瘤有关的瘙痒症和特发性全身性瘙痒症。瘙痒症或瘙痒，最常见的是与原发性皮肤病,如干燥病、荨麻疹、节肢动物攻击、肥大细胞增多症、疱疹样皮炎或类天疱疮有关。在临床和实验性皮炎中，瘙痒引起的抓挠似乎会加重皮损。瘙痒和搔抓会导致睡眠不足，并严重干扰受影响个体的生活质量。因此，为了缓解症状，专门治疗瘙痒或瘙痒症而不是简单地治疗原发性皮肤病是至关重要的。

瘙痒是由无髓的C型纤维和薄髓的Ad型纤维介导的，这些纤维起源于背根神经节的细胞体。各种内源性和外源性的瘙痒原，如组胺、5-羟色胺、蛋白酶、P物质和氯喹都能诱发痒感。每种瘙痒原经由特定受体介导瘙痒。瘙痒特异性外周神经元对Mas相关的G蛋白偶联受体A3(MargprA3)是阳性的--这是因为MargprA3阳性神经元的遗传消融削弱了对氯喹和组胺的搔痒反应而不影响疼痛行为而知晓的。瘙痒感的神经元机制并不完全清楚；然而，组胺能瘙痒途径使用瞬时受体电位阳离子通道vanilloid亚型1(Trpv1)作为直接下游靶。在非组胺能瘙痒中，一些瘙痒原(如氯喹)使用瞬时受体电位阳离子通道锚蛋白(ankyrin)亚型1(Trpa1)。

瘙痒症是用于表示一组皮肤病症的术语，其特征是剧烈瘙痒和难以治疗的丘疹或结节。这些病况中最著名的是结节性痒疹，通常表现为影响四肢的痒性结节，在组织学上由角化过度和棘皮症组成，并伴有表皮向下突出。类似的病况，丘疹性瘙痒症(丘疹性皮炎；成人慢性瘙痒症)，由较小的损伤组成，主要表现在中年妇女身上。

皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)是影响皮肤的罕见类型的非霍奇金淋巴瘤。它是在T细胞(也称为T淋巴细胞)变得不正常时发展的。有不同类型的CTCL，最常见的称为蕈样肉芽肿和塞扎里综合征。

有瘙痒症状的炎症性和自身免疫性皮肤病可以包括病况，如自身免疫性大疱病和***疾病。自身免疫性大疱病(AIBD)是一组异质性的严重皮肤病，其特点是存在针对皮肤粘附分子的自身抗体，该组皮肤病包括大疱性类天疱疮、类天疱疮组和疱疹样皮炎。***疾病包括全身性硬化症、硬斑病、全身性红斑狼疮、皮肌炎、Sjogren综合征和白癜风。

除了化学介质，自从2004年在小鼠中发现白细胞介素-31(IL31)的瘙痒原作用以来，人们对IL31和其受体作为瘙痒介质的研究越来越重视。事实上，IL31的全身和局部施用会诱发啮齿动物、狗和食蟹猴的抓挠行为。用IL31溶液进行点刺试验会引发人的瘙痒感。

白细胞介素-4(IL4)可诱导IL31的基因表达和释放，但涉及IL31产生的所有细胞类型的细节仍不清楚。人树突状细胞能够产生IL31，但其程度远远低于Th2细胞。人的嗜碱粒细胞和肥大细胞也分泌IL31，并可能引起慢性荨麻疹。人的嗜酸细胞也能释放IL31。

IL31及其受体，IL31RA，在各种人和小鼠癌症细胞系以及癌症患者的肿瘤标本中都有高度表达。已证明IL31/IL31R轴涉及皮肤癌，特别是皮肤T细胞淋巴瘤。证明肿瘤细胞能产生IL31，其血清水平与瘙痒症强度相关。表皮IL31水平与皮肤T细胞淋巴瘤的瘙痒严重程度相关。

本发明人认为，IFN-a14、HYBRID 1和HYBRID 2作用于CXCL8(IL8)。IL8是来自角质细胞的趋化因子，是中性粒细胞、嗜碱粒细胞和肥大细胞的吸引剂，引起许多组织破坏性物质的释放。CXCL8(IL8)是涉及招募中性粒细胞到损伤或感染部位的主要细胞因子；这一过程称为趋化作用。一些变量对中性粒细胞的成功趋化至关重要，包括增加高亲和力粘附分子的表达，以将中性粒细胞固定在受影响位点附近的内皮上(因此，不会被冲到循环***中)，并且中性粒细胞可以通过基底膜和细胞外基质(ECM)消化，到达受影响部位。CXCL8在诱导实现这些变化所需的细胞信号传导方面起着关键作用。IL8负责肥大细胞和嗜碱粒细胞的组胺释放。在感染部位，组胺释放导致受伤部位附近的毛细血管扩张，使该区域的血流减慢，并鼓励白细胞，如中性粒细胞，靠近内皮，并远离血流速率最高的管腔中心。一旦发生这种情况，在中性粒细胞和内皮细胞上表达的选择素之间就会产生微弱的相互作用(通过CXCL8和其他细胞因子的作用，其表达也会增加)。

本发明人认为，IFN-a14、HYBRID 1和HYBRID 2作用于IL6。IL6是来自角质细胞的生长因子，通常与压力和发烧有关。IL6是急性期反应物，既能促进炎症，也能抗炎。IL6可以在IL17产生之前通过抑制Th17细胞的生成而发挥作用，在IL17产生之后通过抑制增加角质细胞增殖的IL6的产生而发挥作用。

本发明人已经确定，与以前的局部药物相比，施用IFN-α14特别是SEQ ID NO:1、HYBRID 1(SEQ ID NO:2)或HYBRID 2(SEQ ID NO:3)或其变体或片段，导致IL31减少10％、优选20％、优选30％、优选40％、优选50％、优选60％、优选70％、优选80％、更优选90％以上。

本发明人出人意料地确定，施用IFN-α14特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段，导致角质细胞中的IL31、CXCL8(IL8)或IL6抑制50％、优选60％，优选70％，优选80％，优选90％、优选91％、优选93％、优选94％、优选95％、优选96％、优选97％、且更优选98％。

本发明人出人意料地确定，施用IFN-α14特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段，如本文所讨论的在低剂量下会导致IL31、CXCL8(IL8)或IL6角质细胞的抑制。HYBRID 1和HYBRID 2显示出类似的功能作用。

本发明的治疗可以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x10²IU/ml、1x10³IU/ml、1x10⁴IU/ml、1x10⁵IU/ml、1x10⁶IU/ml、1x10⁷IU/ml或1x10⁸IU/ml的剂量施用。

本发明的治疗可以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用。

本发明的治疗可以以一天一次、一天两次、一天三次或一天四次局部施用。

此外，本发明人已确定施用或使用IFN-α14，特别是SEQ ID NO:1、HYBRID 1(SEQID NO:2)或HYBRID 2(SEQ ID NO:3)或其变体或片段，导致角质细胞中IL31的全部或部分抑止和/或CXCL8(IL8)的全部或部分抑止和/或IL6的全部或部分抑止。

此外，本发明人出人意料地确定，IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2，特别是SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或其片段或变体的局部施用，可导致本文讨论的相关细胞因子在角质细胞层的靶向。本发明提供了优越的局部治疗，对轻度、中度和重度瘙痒症安全有效。这种治疗表现出低副作用谱。需要低剂量的药物，天然产品IFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2在体外即使是最高浓度(1x10⁸IU/ml)也不显示细胞毒性。

本发明人在用TNF-α激活诱导趋化因子(IL8)分泌的正常人皮肤培养物的角质细胞上证明，IFNα-14特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段，直接抑制IL8的分泌>80％。此外，发明人证明，加入HYBRID 1特别是SEQ ID NO:2或HYBRID 2，特别是SEQ ID NO:3或其变体或片段，导致强烈抑制IL31的分泌。这些结果清楚地表明IFNα-14特别是SEQ ID NO:1、HYBRID 1特别是SEQ ID NO:2或HYBRID 2，特别是SEQ ID NO:3或其变体或片段，比现有的全身性生物制剂有潜在的优越性。

本发明人虽然不希望被理论所束缚，但已经确定IFN-α14，特别是SEQ ID NO:1、HYBRID 1，特别是SEQ ID NO:2或HYBRID 2，特别是SEQ ID NO:3或其变体或片段的局部施用可用于治疗瘙痒症、痒疹和皮肤癌。本发明人已经证明，尽管IFNα-14HYBRID 1或HYBRID2，特别是SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或其变体或片段的分子量相对较高，但在皮肤中显示出良好的渗透潜力，因此，开发临床上可行的制剂，使这种肽的治疗剂量穿过皮肤递送，为治疗或预防这些瘙痒症病况提供了意想不到的方法。

定义

片段

片段可以包含来自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的至少50个、优选100个、更优选150个或更多的连续氨基酸，并且该片段具有功能活性。适当地，可使用例如cDNA的C端连续缺失来确定片段。然后可将所述缺失构建体克隆到合适的质粒中。然后，这些缺失突变体的活性可按本文所述测试其生物活性。片段可使用本领域已知的合适的分子生物学方法产生。

变体

所谓变体是指与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3至少有70％的同源性、更优选与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3至少有80％的同源性、更优选与SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3至少有90％的同源性、甚至更优选与SEQ ID NO:1、SEQID NO:2或SEQ ID NO:3至少有95％的同源性、甚至更优选与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3至少有96％的同源性、甚至更优选与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3至少有97％的同源性以及最优选与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID No:3至少有98％的同源性的氨基酸序列。变体涵盖SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3的多肽序列，其中包括氨基酸的替换，特别是已知的不会导致蛋白质的生物活性或结构或折叠发生任何重大修饰的高概率替换。这些替换，通常称为保守替换，在本领域是已知的。例如，精氨酸、赖氨酸和组氨酸组是已知的可互换的碱性氨基酸。适当地，在实施方案中，具有相同电荷、大小或疏水性的氨基酸可以相互替换。适当地，可以根据对干扰素α亚型的氨基酸序列对齐的分析来选择任何替换，以向氨基酸提供氨基酸的替换，这些氨基酸在序列对齐时存在于其他α亚型的类似或相同的位置。变体可使用本领域已知的合适的分子生物学方法产生。

受试者

如本文所定义，"受试者"包括并涵盖哺乳动物，如人、灵长类动物和家畜(例如，绵羊、猪、牛、马、驴)；实验室测试动物，如小鼠、兔子、大鼠和豚鼠；以及伴侣动物，如狗和猫。

治疗/疗法

术语"治疗"在这里指的是可以使人或非人动物受益的任何治疗方法。治疗可以是关于瘙痒症、痒疹或皮肤癌的，治疗可以是防治性的(预防治疗)。治疗可以包括治疗性或缓解性作用。这里提到的"治疗性"和"防治性"治疗应在其最广泛的上下文中考虑。术语"治疗"不一定意味着治疗受试者到完全康复。相似地，"防治性"也不一定意味着受试者最终不会感染疾病病况。因此，治疗性和/或防治性治疗包括改善特定瘙痒症的症状，或防止或除此之外降低发展特定瘙痒症病况的风险。术语"防治"可认为是减少特定病况的严重程度或发作。"治疗性"也可以减少现有病况的严重程度。

施用

本发明中使用的活性成分，如本文所述，特别是干扰素亚型IFN-α14，例如SEQ IDNO:1、HYBRID 1(SEQ ID NO:2)或HYBRID 2(SEQ ID NO:3)，可单独施用于同一受试者，可选择按顺序施用，或可同时作为药物或免疫组合物共同施用。该药物组合物一般包含根据预期施用途径选择的合适的药物赋形剂、稀释剂或载体。

活性成分可以经由任何合适的途径给需要治疗的患者施用。精确的剂量将取决于许多因素，下面将详细讨论。

一个合适的施用途径是局部施用，例如直接应用在皮肤上。

一个合适的途径是舌下含服的。

药物组合物

如上所述，本发明延伸到用于治疗瘙痒症、痒疹或皮肤癌的药物组合物。根据本发明的药物组合物，以及根据本发明的用途，除了活性成分外，还可以包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲稳定剂或本领域技术人员熟知的其他材料。此类材料应该是无毒的，并且不应该干扰活性成分的效力。载体或其他材料的精准性质将取决于施用途径，例如，可以是口服、静脉注射、鼻内注射或经由口服或鼻腔吸入。制剂可以是液体，例如，含有pH值为6.8-7.6的非磷酸盐缓冲液的生理盐溶液，或冻干或冷冻干燥的粉末。

剂量

该组合物优选以"治疗有效量"或"所需量"施用于个体，这足以显示出对个体的益处。正如本文所定义的，"有效量"是指至少部分地获得所需的反应，或推迟发作或抑止进展或停止所治疗的特定病况的发病或进展所需的量。该量随着治疗受试者的健康和身体状况、治疗受试者的分类群、所需的保护程度、组合物的配方、医疗状况的评估和其他相关因素而变化。预计该量将落在相对宽泛的范围内，可通过常规试验确定。治疗的处方，例如关于剂量等的决定，最终属于全科医生、内科医生或其他医生的责任并由他们决定，通常要考虑到要治疗的疾病、个体患者的情况、递送位点、施用方法和其他医生已知的因素。最佳剂量可由医生根据一些参数确定，例如包括年龄、性别、体重、所治疗病况的严重程度、所施用的活性成分和施用途径。广泛的剂量范围可能是适用的。考虑到向人患者的口服施用，例如，每个人的剂量可以施用从约10μg至约1000μg的药剂，可选择3到4个剂量。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗反应并减少副作用。例如，可以每天、每周、每月或其他合适的时间间隔施用几个分次的剂量，或者根据情况的紧急程度按比例减少剂量。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语都具有本发明领域技术人员普遍理解的含义。

自身免疫性疾病

理解本文所使用的术语"自身免疫性疾病"为由身体组织被其自身的免疫***攻击而引起的任何疾病或病况。

在整个说明书中，除非上下文另有要求，术语"包含(comprise)"或"包括(include)"，或变化，如"包含(comprises或comprsing)"、"包括(includes或including)"，将被理解为意味着包括规定的整数或一组整数，但不排除任何其他整数或一组整数。

现在将参照以下非限制性的图和例子来示例性地阐述本发明，这些图和例子是为了阐释的目的而提供的，不打算解释为对本发明的限制。根据本描述，本发明的其他实施方案对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。

附图描述

图1显示了IFNα-14对来自人角质细胞的CXCL8(IL8)生产的作用图。

图2显示了IFNα-14对来自人角质细胞的IL6的生产的作用图。

图3显示了IFNα-14对来自人白细胞的IL31的生产的作用图。

图4显示了HYBRID 1对来自人白细胞的IL31的生产的作用图。

图5显示了HYBRID 2对来自人白细胞的IL31的生产的作用图。

图6显示了人α-干扰素-2a(Roferon)对来自人白细胞的IL31的生产的作用图。

图7显示了IFN-α14的氨基酸序列。

图8显示了HYBRID 1的氨基酸序列。

图9显示了HYBRID 2的氨基酸序列。

图10表明了瘙痒症的途径。

实验数据

实验1：IFNα-14对正常人皮肤的角质细胞中IL-6和CXCL8(IL8)生产的作用

发明人测试了IFNα-14对正常人皮肤的角质细胞的作用，这些角质细胞由TNF-α激活以诱导趋化因子的分泌。

图1表明IFNα-14直接抑制CXCl8(IL8)的分泌>80％。图1表明在IFNα-14的存在下，特别是在低浓度的IFNα-14下，CXCL8(IL8)受到强烈抑止。CXCL8是炎症的主要贡献者。它吸引中性粒细胞和嗜碱粒细胞/肥大细胞到炎症位点--后者释放组胺和许多其他有毒物质，例如***素、白三烯。

图2表明在IFNα-14的存在下，特别是在低浓度的IFNα-14下，IL6的产生受到了抑止。IL-6是在创伤中上升的急性期反应物，其广泛用作辅助生长因子/刺激剂。IL6是通常与压力有关的生长因子。

实验2：IFNα-14、HYBRID1和HYBRID2对人白细胞中IL31产生的作用

全血刺激试验

新鲜的全人血(50IU/ml防腐剂肝素)用有青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺和钙的RPMI1640介质以1/10稀释。其在加湿培养箱中，在空气中5％的CO₂的气氛中，在一系列浓度的rIFN-α14、HYBRID 1或HYBRID 2的存在下，在37℃中用或不用PHA-P(100μg/ml)温育24小时。使用的IFN浓度为0、1、5、10、50、100、1,000、10,000、100,000和1,000,000IU/ml。每个IFN浓度(1ml)在12孔板中一式三份进行培养。

温育24小时后，将上清液收获到个体标记的微离心管中，在微离心机中以11,000RPMI离心5分钟。然后收集样品并在-20℃中储存在贴有标签的微离心管中，以便通过ELISA进行测定。

典型的ELISA程序

在测定开始前一天，按照制造商的说明，在96孔平底ELISA板上涂上100μl相应的捕获抗体。

第二天，允许将ELISA试剂和上清液加热至室温，用洗涤缓冲液(1x磷酸盐缓冲盐水+0.05％(v/v)Tween 20洗涤包被的ELISA板四次，每孔加入200μl测定稀释液以防止非特异性抗体结合，并在室温摇动(500rpm)温育1小时。

洗板4次，将100μl稀释的标准品和样品加入相应的孔中。然后密封板，摇动温育2小时。

进一步洗4个循环后，在每个孔中加入100ul检测抗体，然后在室温下进一步摇动温育1小时。进一步洗4次板，向每个孔中加入稀释的抗生物素蛋白-HRP溶液，然后在室温下摇动温育30分钟。然后洗板共5次，洗板之间允许30秒至1分钟的浸泡，然后加入100μl底物溶液，在黑暗中15分钟。

15-45分钟后，或当标准孔达到所需的颜色时，加入100μl终止液(1M H₂SO₄)，经由分光光度法读取板，通常在波长450和570nm。

结果

得到的结果显示在图3至5。图3表明IFNα-14抑止了人白细胞中IL31的产生。图3表明在IFNα-14的存在下，特别是在低浓度的IFNα-14下，IL31受到强烈的抑止。

图4表明，HYBRID 1抑止了人白细胞中IL31的产生。图4表明在HYBRID 1的存在下，特别是在HYBRID 1的低浓度下，IL31受到强烈抑止。

图5表明，HYBRID 2抑止了人白细胞中IL31的产生。图5表明在HYBRID 2的存在下，特别是在HYBRID 2的低浓度下，IL31受到强烈抑止。

作为比较，本发明人使用人α-干扰素-2a(Roferon)来表明α-干扰素亚型对IL31的抑止是预料不到的。图6表明了人α-干扰素-2a(Roferon)对人白细胞中IL-31的产生缺乏抑制。

这些结果令人惊讶地表明，与以前的药物相比，施用IFN-α14、HYBRID1或HYBRID 2会更多地减少或抑制角质细胞中的IL31。

在不脱离本发明范围的情况下，对所描述的本发明的实施方案的各种修饰和变化对于本领域的技术人员来说是显而易见的。尽管本发明已经结合具体的优选实施方案进行了描述，但应该理解的是，本发明的所要求保护的不应该被不适当地限制在此类具体实施方案中。事实上，对本领域技术人员来说显而易见的实施本发明的所述模式的各种修饰都是本发明所要覆盖的。

序列表

<110> ILC医疗有限公司（ILC Therapeutics LTD）

<120> 涉及治疗疾病的组合物和方法

<130> P220861.WO.01

<150> GB2003595.2

<151> 2020-3-12

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 166

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Cys Asn Leu Ser Gln Thr His Ser Leu Asn Asn Arg Arg Thr Leu Met

1 5 10 15

Leu Met Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp

20 25 30

Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe

35 40 45

Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr

50 55 60

Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr

65 70 75 80

Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu

85 90 95

Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met

100 105 110

Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr

115 120 125

Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val

130 135 140

Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys

145 150 155 160

Arg Leu Arg Arg Lys Asp

165

<210> 2

<211> 166

<212> PRT

<213> 智人

<400> 2

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile

1 5 10 15

Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp

20 25 30

Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe

35 40 45

Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr

50 55 60

Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asn Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Thr

65 70 75 80

Leu Leu Glu Lys Phe Ser Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu

85 90 95

Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met

100 105 110

Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr

115 120 125

Leu Tyr Leu Ile Glu Arg Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val

130 135 140

Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys

145 150 155 160

Arg Leu Arg Arg Lys Asp

165

<210> 3

<211> 166

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile

1 5 10 15

Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp

20 25 30

Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe

35 40 45

Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr

50 55 60

Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr

65 70 75 80

Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu

85 90 95

Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met

100 105 110

Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr

115 120 125

Leu Tyr Leu Ile Glu Arg Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val

130 135 140

Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys

145 150 155 160

Arg Leu Arg Arg Lys Asp

165

Claims (25)

1.治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)向有需要的受试者施用治疗有效量的干扰素α亚型，其中所述干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2中的至少两种的组合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述干扰素α亚型IFN-α14包含或由氨基酸序列SEQID NO:1或其功能活性片段或变体组成。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述干扰素α亚型HYBRID 1包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述干扰素α亚型HYBRID 2包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体组成。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述施用方法选自局部施用和舌下施用。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述干扰素α亚型的治疗有效量是低剂量。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述皮肤癌是皮肤T细胞淋巴瘤。

8.前述权利要求中任一项所述的方法，其用于治疗选自瘙痒症或痒疹的病况。

9.前述权利要求中任一项所述的的方法，其用于治疗嗜中性皮肤病。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述嗜中性皮肤病是选自包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠相关性皮肤病-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎、成人斯蒂尔病、原发性大疱、表皮性和血管性ND的列表中的至少一种。

11.根据权利要求9所述的方法，其中所述嗜中性皮肤病是选自包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠相关性皮肤病-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎和成人斯蒂尔病的列表中的至少一种。

12.干扰素α亚型，其中所述干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14、HYBRID 1和HYBRID 2中的至少两种的组合，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌。

13.根据权利要求12所述的干扰素α亚型，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌，其中所述IFN-α14包含或由氨基酸序列SEQ ID NO：1或其功能活性片段或变体组成。

14.根据权利要求12所述的干扰素α亚型，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌，其中所述干扰素α亚型HYBRID 1包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。

15.根据权利要求12所述的干扰素α亚型，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌，其中所述干扰素α亚型HYBRID 2包含或由氨基酸序列SEQ ID NO:3或其功能活性片段或变体。

16.根据权利要求12至15所述的干扰素α亚型，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌，其中所述干扰素α亚型是局部施用的或通过舌下施用。

17.根据权利要求16所述的干扰素亚型，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌，其中所述干扰素α亚型以低剂量施用。

18.根据权利要求12至17中任一项所述的干扰素亚型，其用于治疗皮肤癌，其中所述皮肤癌为皮肤T细胞淋巴瘤。

19.根据权利要求12至17中任一项所述的干扰素α亚型，其用于治疗选自瘙痒症或痒疹的病况。

20.根据权利要求12至17中任一项所述的干扰素α亚型，其用于治疗嗜中性皮肤病。

21.根据权利要求20所述的的干扰素α亚型，其用于治疗嗜中性皮肤病，其中所述嗜中性皮肤病选自包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠相关性皮肤病-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎、成人斯蒂尔病、原发性大疱、表皮性和血管性ND的列表。

22.根据权利要求20所述的干扰素α亚型，其用于治疗嗜中性皮肤病，其中所述嗜中性皮肤病选自包含Sweet综合征(SS)、中性粒细胞外分泌汗腺炎(NEH)、***(BD)、坏疽性脓皮病(PG)、肠相关性皮肤病-关节炎综合征、类风湿嗜中性皮炎和成人斯蒂尔病的列表。

23.干扰素α亚型，其中所述干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14和HYBRID 1或HYBRID 2的组合，其用于制备用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌的药物。

24.包含干扰素α亚型的组合物，其中所述干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-a14和HYBRID 1或HYBRID 2的组合，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌。

25.包含干扰素α亚型的药物组合物，其中所述干扰素α亚型是IFN-α14、HYBRID 1、HYBRID 2或IFN-α14和HYBRID 1或HYBRID 2的组合物，其用于治疗和/或防治瘙痒症、痒疹、嗜中性皮肤病或皮肤癌。

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