CN115429890A - 一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物 - Google Patents

一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物 Download PDF

Info

Publication number
CN115429890A
CN115429890A CN202210934549.2A CN202210934549A CN115429890A CN 115429890 A CN115429890 A CN 115429890A CN 202210934549 A CN202210934549 A CN 202210934549A CN 115429890 A CN115429890 A CN 115429890A
Authority
CN
China
Prior art keywords
conjugate
group
branched alkyl
straight chain
cycloalkyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210934549.2A
Other languages
English (en)
Inventor
郝婧
闫胜勇
王庆彬
冯丛然
杨宇
郭军
赵宣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Liaoning Kai Kai Technology Co ltd
Original Assignee
Liaoning Kai Kai Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Liaoning Kai Kai Technology Co ltd filed Critical Liaoning Kai Kai Technology Co ltd
Priority to CN202210934549.2A priority Critical patent/CN115429890A/zh
Publication of CN115429890A publication Critical patent/CN115429890A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/545—Heterocyclic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

本发明公开了一种新型的以DBCO为接头的，含有PEG的β‑葡萄糖醛酸酶可裂解连接子与细胞毒性药物的缀合物，能够通过简单的SPAAC反应实现与抗体上修饰的叠氮基团的定点偶联，得到均一性高的抗体偶联药物；同时在连接子中引入PEG基团，能够达到提高连接子亲水性的目的，增加连接子‑药物缀合物的水溶性，解决了连接子‑药物缀合物溶解性差的问题。

Description

一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及药物偶联物领域，特别涉及一种具有DBCO连接头的连接子-药物缀合物及其应用。
背景技术
抗体药物偶联物(Antibody drug conjugate，ADC)是一类新型的靶向治疗药物，由靶向特异性抗原的单克隆抗体和小分子细胞毒药物通过连接子偶联而成，其联合了抗体及细胞毒药物两者的优势，与传统的小分子抗肿瘤药物相比，具有靶向性强、细胞毒性高、降解半衰期长、毒副作用低等特点。随着
Figure BDA0003782964770000011
和
Figure BDA0003782964770000012
等12个药物由FDA批准上市，近年来ADC药物发展迅速，目前大约有110个ADC药物处于临床试验中。
ADC一般由抗体(antibody)、小分子细胞毒素(cytotoxin)和连接子(linker)三个部分组成。其中连接子的设计对ADC药物具有重要的意义，其本身必须使得药物在血液循环***中保持稳定，以及到达靶组织之后可以快速有效地释放活性毒素。开发ADC连接子，存在着多种重要的考量因素，包括抗体的偶联位点、每分子抗体平均偶联细胞毒素的数量(drug to antibody ratio，DAR)、连接子的可裂解性和亲水性等。连接子可分为可裂解连接子和不可裂解连接子两大类，可裂解连接子根据裂解机制的不同分为pH敏感型和酶敏感型。当前，酶敏感型连接子已经成为ADC的主流选择。研究比较成熟的酶敏感型连接子为依赖组织蛋白酶B裂解的二肽连接子，如缬氨酸-瓜氨酸(Valine-Citriline)。目前大多数ADC具有共同的结构特征，如通过马来酰亚胺接头连接。ADC药物已公开的连接子存在设计比较单一，水溶性不好等问题。
关于毒素与抗体的偶联方式，目前已上市ADC药物多采用赖氨酸或半胱氨酸随机偶联，由于偶联数目和位点的不确定性，导致生成的抗体药物偶联物的不均一性，进而导致产品各组分间药物动力学性质、效价以及毒性的不均一。为了解决ADC均一性问题，近年来定点偶联技术得到了更多的青睐，如基于天然糖基化位点的GlycoConnect技术，抗体的Fc区域N297糖基化位点在酶催化下，对糖链进行切割并连接上叠氮基团，然后叠氮基团与连接子上的环辛炔通过SPAAC(strain-promoted copper-free click)反应，形成均一的DAR值为2的偶联物。
专利文件CN108743968A公开了一种半胱氨酸改造的抗体-毒素偶联物，抗体为半胱氨酸定点***抗体，半胱氨酸***位点包含kappa/λ轻链恒定区轻链和IgG抗体重链恒定区重链两类。
但通过基因工程改造的抗体-毒素偶联物引进了药物的不确定性，需要使用还原剂还原抗体，解除抗体上改造的半胱氨酸残基上的屏蔽，并通过阳离子交换层析或超滤换液等方式去除DTT与屏蔽物，然后使用氧化剂氧化抗体，使抗体的链间二硫键重新连接，过程繁琐复杂限制了该发明的使用。
专利文件CN103083680B公开了一种具有聚乙二醇-氨基酸寡肽-依诺替康结构通式的药物结合物。在所述结合物中，每一个聚乙二醇端基通过氨基酸寡肽可以与多个依诺替康相连，药物的负载率大大提高。通过亲水性聚合物的改性可对依诺替康提供保护，改善药物吸收，延长作用时间，增强疗效，降低给药剂量及避免毒副作用。
但此抗体药物偶联物的均一性不高，进而导致产品各组分间药物动力学性质、效价以及毒性的不均一、产品批次可重复性较差、治疗指数较低。
针对上述现有技术中存在的抗体偶联药物均一性较差、连接子设计较单一、水溶性不好等缺陷，迫切需要开发新的连接子技术，在增加连接子亲水性的同时达到定点偶联的目的，提高抗体药物偶联物的均一性。
发明内容
本发明第一方面是提供一种缀合物，其具有式(Ⅰ)所示结构：
Q-X-L1-L2-D (I)
其中，所述Q选自：
Figure BDA0003782964770000021
Figure BDA0003782964770000022
中的一种，优选的，Q为
Figure BDA0003782964770000023
R5和R6各自独立地具有—X1—Q1的结构，Q1选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、-NO2、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基，X1选自由单键、-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000031
及
Figure BDA0003782964770000032
或其组合组成的组，优选的，R5和R6为H。
X是连接基团，X为
Figure BDA0003782964770000033
其中，m1、m2各自独立地选自0～12的整数(如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12)，Xa、Xb各自独立地选自：-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000034
Figure BDA0003782964770000035
Figure BDA0003782964770000036
中的一种，其中，R9选自：-H、C1-10直链/支链烷基。
优选地，m1、m2各自独立地选自0～6的整数，更优选地，m1、m2各自独立地选自0～3的整数。
在本发明的一个实施方式中，m1为0。
在本发明的一个实施方式中，m2为2。
优选地，Xa选自：
Figure BDA0003782964770000037
中的一种，更优选地，Xa为
Figure BDA0003782964770000038
优选地，Xb选自：
Figure BDA0003782964770000039
Figure BDA00037829647700000310
中的一种，更优选地，Xb为
Figure BDA00037829647700000311
优选地，R9为-H。
L1选自：直链、Y型和多分支的聚乙二醇残基中的一种；
当L1为Y型和多分支的聚乙二醇残基时，其可以有一个或多个分支与
Figure BDA00037829647700000312
相连；
L1包括但不限于直链双端PEG、Y型PEG、4臂支链PEG、6臂支链PEG或8臂支链PEG，优选地，L1为直链聚乙二醇残基，具有通式(Ⅲ)所示的结构：
Figure BDA0003782964770000041
其中，n1独立地选自1-30的整数，优选为1-25的整数，更优选为4-24的整数(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24)，特别优选为8。
L2是连接基团，为
Figure BDA0003782964770000042
其中A为葡糖苷酸或葡糖苷酸衍生物，所述的A选自：
Figure BDA0003782964770000043
其中，R12选自：C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、C3-12杂环烷基和C6-12杂芳基中的一种，其中，所述的C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、C3-12杂环烷基、C6-12杂芳基可以被至少一个C1-18直链/支链烷基、卤素、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、C1-10烷氧基、芳基取代。
优选地，所述的A为
Figure BDA0003782964770000044
在本发明的一个实施方式中，所述的A为
Figure BDA0003782964770000045
所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000046
Figure BDA0003782964770000051
其中，Y1、Y2各自独立地选自：-H、卤素、-OC1-10烷基、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、-OH、
Figure BDA0003782964770000052
优选地，Y1、Y2均为-H。
Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure BDA0003782964770000053
Figure BDA0003782964770000054
优选地，Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基；更优选地，Y3、Y4均为-CH3。
在本发明的一个实施方式中，所述的Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure BDA0003782964770000055
X2选自由-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000056
Figure BDA0003782964770000057
Figure BDA0003782964770000058
及
Figure BDA0003782964770000059
或其组合组成的组，其中R9选自：-H、C1-10直链/支链烷基，优选地，R9为-H；
优选地，X2选自由C1-12直链/支链烷基及
Figure BDA00037829647700000510
组成的组。
在本发明的一个实施方式中，所述的X2为
Figure BDA0003782964770000061
在本发明的一个实施方式中，所述的X2为：
Figure BDA0003782964770000062
R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、C1-12烷氧基、-NO2、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000063
Figure BDA0003782964770000064
Figure BDA0003782964770000065
优选地，R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、-NO2，更优选地，R10选自：-H、-CH3、-NO2，更进一步优选地，R10为-H。
R11选自：-H、C1-10直链/支链烷基、
Figure BDA0003782964770000066
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000067
Figure BDA0003782964770000068
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000069
Figure BDA00037829647700000610
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000071
Figure BDA0003782964770000072
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000073
Figure BDA0003782964770000074
在本发明一具体实施方式中，所述的B为
Figure BDA0003782964770000075
进一步地，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000076
Figure BDA0003782964770000077
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000081
Figure BDA0003782964770000082
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000083
Figure BDA0003782964770000084
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000085
Figure BDA0003782964770000086
在本发明一具体实施方式中，所述的L2为
Figure BDA0003782964770000091
进一步地，D为药物分子。
优选的，所述的缀合物具有式(ⅠI)所示结构：
Figure BDA0003782964770000092
其中，式(ⅠI)中的DBCO(二苯并环辛炔)接头用于与修饰抗体的叠氮基团的定点偶联；L1选自：直链、Y型和多分支的聚乙二醇残基中的一种，L1包括但不限于直链双端PEG、Y型PEG、4臂支链PEG、6臂支链PEG或8臂支链PEG，优选地，L1为直链聚乙二醇残基，具有通式(Ⅲ)所示的结构：
Figure BDA0003782964770000093
其中，n1独立地选自1-30的整数，优选为1-25的整数，更优选为4-24的整数(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24)，特别优选为8。
进一步地，所述的药物分子选自：氨基酸、蛋白质、酶、核苷、糖类、有机酸、甙类、黄酮类、醌类、萜类、苯丙素酚类、甾体及其甙类和生物碱中的一种。
在本发明一具体实施方式中，药物分子优选自：鹅膏菌素、奥瑞他汀、加利车霉素、喜树碱、喜树碱衍生物和代谢物(如：SN-38及其衍生物、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱)，隐藻霉素、道诺霉素、多拉司他丁、多柔比星、多卡霉素、埃坡霉素、埃斯帕霉素、格尔德霉素、美登素及其衍生物、甲氨蝶呤、单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)，单甲基auristatin F(“MMAF”)、吡咯并苯二氮卓、根瘤菌素、SG2285、微管溶素、长春地辛、类毒素、伊立替康、拓扑替康、贝洛替康、依沙替康、卢托替康、二氟替康、吉尼替康、卡尼替康、阿霉素、表柔比星、吗啉代阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯啉基阿霉素、Dxd、MMAD、PBD及其衍生物、TPL、紫杉烷、袢霉素、博霉素B及其衍生物、美登素及其衍生物、多拉司他汀、丝裂霉素、氨基蝶呤、放线菌素、博来霉素、N8-乙酰基亚精胺、1-(2-氯乙基)-1,2-二甲磺酰肼、他利霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、紫杉醇、拉霉素、鬼臼毒素、蛇形菌素(anguidine)、长春新碱、长春碱、吗啉-阿霉素、正-(5,5-二乙酰氧基-戊基)阿霉素及其衍生物中的一种或两种以上的组合。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：鹅膏菌素、奥瑞他汀、加利车霉素、喜树碱、喜树碱衍生物和代谢物(SN-38)，隐藻霉素、道诺霉素、多拉司他丁、多柔比星、多卡霉素、埃坡霉素、埃斯帕霉素、格尔德霉素、美登素、甲氨蝶呤、单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)，单甲基auristatin F(“MMAF”)、吡咯并苯二氮卓、根瘤菌素、SG2285、微管溶素、长春地辛、类毒素或上述任何一种的衍生物。
在本发明一具体实施方式中，所述药物分子选自：SN38及其衍生物、Dxd、MMAE、MMAF、MMAD、PBD及其衍生物、卡奇霉素和TPL中的一种。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：
Figure BDA0003782964770000101
Figure BDA0003782964770000102
Figure BDA0003782964770000111
Figure BDA0003782964770000112
中的一种。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：
Figure BDA0003782964770000113
Figure BDA0003782964770000114
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子为
Figure BDA0003782964770000115
所述的DBCO连接子-药物缀合物选自：
Figure BDA0003782964770000121
Figure BDA0003782964770000131
Figure BDA0003782964770000141
在本发明的一个实施方式中，所述的DBCO连接子-药物缀合物为
Figure BDA0003782964770000142
本发明第二方面是提供一种通式(Ⅱ)的缀合物在疾病预防和/或治疗药物中的应用。
具体地，所述疾病为癌症、病原性生物感染或自身免疫性疾病。
具体地，所述癌症是造血肿瘤、癌、肉瘤、黑素瘤或神经胶质肿瘤。
具体地，所述病原性生物选自由以下组成的组：人免疫缺陷病毒(HIV)、结核分枝杆菌、无乳链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、嗜肺性军团病菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、淋病柰瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎球菌属、B型流感嗜血杆菌、苍白密螺旋体、莱姆病螺旋体、西尼罗病毒、绿脓假单胞菌、麻风分枝杆菌、流产杆菌、狂犬病毒、流感病毒、巨细胞病毒、Ⅰ型单纯疱疹病毒、Ⅱ型单纯疱疹病毒、人血清细小样病毒、呼吸道合胞病毒、水痘-带状疱疹病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、人T细胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒、鼠白血病病毒、腮腺炎病毒、水泡性口膜炎病毒、辛德比斯病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、疣病毒、蓝舌病病毒、仙台病毒、猫白血病病毒、呼长孤病毒、脊髓灰质炎病毒、猿猴病毒40、鼠***肿瘤病毒、登革热病毒、风疹病毒、恶性疟原虫、间日疟原虫、鼠弓形体、让氏锥虫。
具体地，所述自身免疫性疾病选自由以下组成的组：免疫介导的血小板减少症、皮肌炎、舍格伦氏综合症、多发性硬化、西登哈姆氏舞蹈症、重症肌无力、***性红斑狼疮、狼疮性肾炎、风湿热、类风湿性关节炎、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森氏病、结节病、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾病、结节性多动脉炎、强制性脊柱炎、古德帕斯丘综合征、闭塞性血栓性脉管炎、原发性胆汁性感应变、桥本甲状腺炎、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急性肾小球肾炎、纤维化肺泡炎和青少年糖尿病。
本发明的第三方面是提供一种通式(Ⅳ)的抗体药物偶联物。
Figure BDA0003782964770000151
其中，Ab为抗体，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体，优选为单克隆抗体，更优选为内化单克隆抗体。
本发明中，抗体其形式可例如为：嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、可与抗原结合的抗体片段(Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab)2)、亚片段(单链构建体)或者抗体Fc融合蛋白等，优选的，所述单克隆抗体对癌症、恶性细胞、感染性生物或自身免疫性疾病相关的抗原或其表位是反应性的。
本发明一具体实施方式中，优选的，所述单克隆抗体选自：抗HER2抗体、抗EGFR抗体、抗PMSA抗体、抗VEGFR抗体、抗CD20抗体、抗CD30抗体、抗FRα抗体、抗CD22抗体、抗CD56抗体、抗CD29抗体、抗GPNMB抗体、抗CD138抗体、抗CD74抗体、抗ENPP3抗体、抗Nectin-4抗体、抗EGFRⅧ抗体、抗SLC44A4抗体、抗mesothelin抗体(抗间皮素抗体)、抗ET8R抗体、抗CD37抗体、抗CEACAM5抗体、抗CD70抗体、抗MUC16抗体、抗CD79b抗体、抗MUC16抗体和抗Muc1抗体中的一种。
本发明一具体实施方式中，优选的，所述抗原选自：HER-2/neu、EGFR、FRα、Nectin-4、碳酸酐酶Ⅸ、B7、CCCL19、CCCL21、CSAp、BrE3、CD1、CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、CEACAM5、CEACAM-6、甲胎蛋白(AFP)、VEGF、ED-B纤连蛋白、EGP-1、EGP-2、EGF受体(ErbB1)、ErbB2、ErbB3、因子H、FHL-1、Flt-3、叶酸受体、Ga733、GROB、HMGB-1、缺氧诱导因子(HIF)、HM1.24、***(ILGF)、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、IL-2R、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、IP-10、IGF-1R、Ia、HM1.24、神经节糖苷、HCG、HLA-DR、CD66a-d、MAGE、mCRP、MCP-1、MIP-1A、MIP-1B、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、胎盘生长因子(PIGF)、PSA、PSMA、PSMA二聚物、PAM4抗原、NCA-95、NCA-90、A3、A33、Ep-CAM、KS-1、Le(y)、间皮素、S100、腱生蛋白、TAC、Tn抗原、Thomas-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、肿瘤血管生成抗原、TNF-α、TRAIL受体(R1和R2)、VEGFR、RANTES、T101、癌干细胞抗原、补体因子C3、C3a、C3b、C5a、C5和致癌基因产物等。
l选自1-50的整数(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50)。
L3为
Figure BDA0003782964770000161
其中，Z1为1～10的整数(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)，优选地，Z1为1～5的整数。
在本发明的一个实施方式中，所述的Z1为1。
在本发明的一个实施方式中，所述的Z1为2。
L4选自
Figure BDA0003782964770000162
n2选自1-30的整数(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30)，优选为1-25的整数，更优选为4-24的整数。
Q’选自
Figure BDA0003782964770000171
Figure BDA0003782964770000172
Figure BDA0003782964770000173
中的一种；
优选地，Q’选自
Figure BDA0003782964770000174
中的一种；
更优选的，Q’选自
Figure BDA0003782964770000175
R5和R6各自独立地具有—X1—Q1的结构，Q1选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、-NO2、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基，X1选自由单键、-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000181
及
Figure BDA0003782964770000182
或其组合组成的组，优选的，R5和R6为H。
X是连接基团，X为
Figure BDA0003782964770000183
其中，m1、m2各自独立地选自0～12的整数(如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12)，Xa、Xb各自独立地选自：-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000184
Figure BDA0003782964770000185
Figure BDA0003782964770000186
中的一种，其中，R9选自：-H、C1-10直链/支链烷基。
优选地，m1、m2各自独立地选自0～6的整数，更优选地，m1、m2各自独立地选自0～3的整数。
在本发明的一个实施方式中，m1为0。
在本发明的一个实施方式中，m2为2。
优选地，Xa选自：
Figure BDA0003782964770000187
中的一种，更优选地，Xa为
Figure BDA0003782964770000188
优选地，Xb选自：
Figure BDA0003782964770000189
Figure BDA00037829647700001810
中的一种，更优选地，Xb为
Figure BDA00037829647700001811
优选地，R9为-H。
L1选自：直链、Y型和多分支的聚乙二醇残基中的一种；当L1为Y型和多分支的聚乙二醇残基时，其可以有一个或多个分支与
Figure BDA00037829647700001812
相连；
L1包括但不限于直链双端PEG、Y型PEG、4臂支链PEG、6臂支链PEG或8臂支链PEG，优选地，L1为直链聚乙二醇残基，具有通式(Ⅲ)所示的结构：
Figure BDA0003782964770000191
其中，n1独立地选自1-30的整数，优选为1-25的整数，更优选为4-24的整数(如4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24)，特别优选为8。
L2是连接基团，为
Figure BDA0003782964770000192
其中A为葡糖苷酸或葡糖苷酸衍生物，所述的A选自：
Figure BDA0003782964770000193
其中，R12选自：C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、C3-12杂环烷基和C6-12杂芳基中的一种，其中，所述的C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、C3-12杂环烷基、C6-12杂芳基可以被至少一个C1-18直链/支链烷基、卤素、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、C1-10烷氧基、芳基取代。
优选地，所述的A为
Figure BDA0003782964770000194
在本发明的一个实施方式中，所述的A为
Figure BDA0003782964770000195
所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000196
Figure BDA0003782964770000201
其中，Y1、Y2各自独立地选自：-H、卤素、-OC1-10烷基、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、-OH、
Figure BDA0003782964770000202
优选地，Y1、Y2均为-H。
Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure BDA0003782964770000203
Figure BDA0003782964770000204
优选地，Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基；更优选地，Y3、Y4均为-CH3。
在本发明的一个实施方式中，所述的Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure BDA0003782964770000205
X2选自由-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000206
Figure BDA0003782964770000207
Figure BDA0003782964770000208
及
Figure BDA0003782964770000209
或其组合组成的组，其中R9选自：-H、C1-10直链/支链烷基，优选地，R9为-H；
优选地，X2选自由C1-12直链/支链烷基及
Figure BDA00037829647700002010
组成的组。
在本发明的一个实施方式中，所述的X2为
Figure BDA0003782964770000211
在本发明的一个实施方式中，所述的X2为：
Figure BDA0003782964770000212
R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、C1-12烷氧基、-NO2、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000213
Figure BDA0003782964770000214
Figure BDA0003782964770000215
优选地，R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、-NO2，更优选地，R10选自：-H、-CH3、-NO2，更进一步优选地，R10为-H。
R11选自：-H、C1-10直链/支链烷基、
Figure BDA0003782964770000216
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000217
Figure BDA0003782964770000218
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000219
Figure BDA00037829647700002110
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000221
Figure BDA0003782964770000222
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000223
Figure BDA0003782964770000224
在本发明一具体实施方式中，所述的B为
Figure BDA0003782964770000225
进一步地，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000226
Figure BDA0003782964770000227
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000231
Figure BDA0003782964770000232
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000233
Figure BDA0003782964770000234
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000235
Figure BDA0003782964770000236
在本发明一具体实施方式中，所述的L2为
Figure BDA0003782964770000241
进一步地，D为药物分子。
进一步地，所述的药物分子选自：氨基酸、蛋白质、酶、核苷、糖类、有机酸、甙类、黄酮类、醌类、萜类、苯丙素酚类、甾体及其甙类和生物碱中的一种。
在本发明一具体实施方式中，药物分子优选自：鹅膏菌素、奥瑞他汀、加利车霉素、喜树碱、喜树碱衍生物和代谢物(如：SN-38及其衍生物、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱)，隐藻霉素、道诺霉素、多拉司他丁、多柔比星、多卡霉素、埃坡霉素、埃斯帕霉素、格尔德霉素、美登素及其衍生物、甲氨蝶呤、单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)，单甲基auristatin F(“MMAF”)、吡咯并苯二氮卓、根瘤菌素、SG2285、微管溶素、长春地辛、类毒素、伊立替康、拓扑替康、贝洛替康、依沙替康、卢托替康、二氟替康、吉尼替康、卡尼替康、阿霉素、表柔比星、吗啉代阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯啉基阿霉素、Dxd、MMAD、PBD及其衍生物、TPL、紫杉烷、袢霉素、博霉素B及其衍生物、美登素及其衍生物、多拉司他汀、丝裂霉素、氨基蝶呤、放线菌素、博来霉素、N8-乙酰基亚精胺、1-(2-氯乙基)-1,2-二甲磺酰肼、他利霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、紫杉醇、拉霉素、鬼臼毒素、蛇形菌素(anguidine)、长春新碱、长春碱、吗啉-阿霉素、正-(5,5-二乙酰氧基-戊基)阿霉素及其衍生物中的一种或两种以上的组合。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：鹅膏菌素、奥瑞他汀、加利车霉素、喜树碱、喜树碱衍生物和代谢物(SN-38)，隐藻霉素、道诺霉素、多拉司他丁、多柔比星、多卡霉素、埃坡霉素、埃斯帕霉素、格尔德霉素、美登素、甲氨蝶呤、单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)，单甲基auristatin F(“MMAF”)、吡咯并苯二氮卓、根瘤菌素、SG2285、微管溶素、长春地辛、类毒素或上述任何一种的衍生物。
在本发明一具体实施方式中，所述药物分子选自：SN38及其衍生物、Dxd、MMAE、MMAF、MMAD、PBD及其衍生物、卡奇霉素和TPL中的一种。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：
Figure BDA0003782964770000242
Figure BDA0003782964770000251
Figure BDA0003782964770000252
中的一种。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：
Figure BDA0003782964770000253
Figure BDA0003782964770000261
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子为
Figure BDA0003782964770000262
优选的，所述的抗体药物偶联物具有式(V)所示结构：
Figure BDA0003782964770000263
其中，i选自1～20的整数(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20)。
在本发明的一个实施方式中，所述的i为12。
优选地，所述的抗体药物偶联物具有式(Ⅵ)所示结构：
Figure BDA0003782964770000264
本发明还提供包含本发明的抗体药物偶联物以及其与药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
具体地，本发明的药物组合物还可包含少量的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、抗氧化剂等，例如：柠檬酸、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、丁基化羟基甲苯等。
具体地，所述的药物组合物为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、栓剂、注射剂、溶液剂、混悬剂、膏剂、贴剂、洗剂、滴剂、擦剂、喷雾剂等剂型。
具体地，本发明的结合物可以纯化合物形式或适宜的药物组合物形式进行给药，可采用任何可接受的给药方式或用于类似的用途的试剂进行。因此，采用的给药方式可选择通过口、鼻内、非肠道、局部、透皮或直肠方式，其形式为固体、半固体或液体药剂形式给药，例如，片剂、栓剂、丸剂、软和硬明胶胶囊剂、散剂、溶液剂、混悬剂和注射剂等，优选采用适用于精确剂量的简单给药的单元剂量形式。
具体地，可采用液体形式给药的药物组合物例如可通过溶解、分散等手段将本发明的结合物(约0.5至约20％)和选择性存在的药用辅剂溶解、分散于载体中，载体的实例为水、盐水、含水葡萄糖、甘油、乙醇等，从而形成溶液剂或混悬剂。
本发明的第四方面是提供一种通式(V)的抗体药物偶联物的制备方法。
首先抗体与含有N3官能团和NHS官能团的PEG衍生物反应，使抗体带有N3官能团标记。然后抗体上的N3官能团与连接子的DBCO官能团发生点击反应，得到所述的抗体偶联药物。
所述制备方法的合成路线示意如下：
Figure BDA0003782964770000271
进一步地，Ab为抗体；
其中，i选自1～20的整数(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20)。
在本发明的一个实施方式中，所述的i为12。
L1选自：直链、Y型和多分支的聚乙二醇残基中的一种，优选地，所述的L1为直链聚乙二醇残基，具有如下所示的结构：
Figure BDA0003782964770000281
其中，n1独立地选自1-30的整数，优选为1-25的整数，更优选为4-24的整数；
L2是连接基团，为
Figure BDA0003782964770000282
其中A为葡糖苷酸或葡糖苷酸衍生物，所述的A选自：
Figure BDA0003782964770000283
其中，R12选自：C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、C3-12杂环烷基和C6-12杂芳基中的一种，其中，所述的C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、C3-12杂环烷基、C6-12杂芳基可以被至少一个C1-18直链/支链烷基、卤素、C3-8环烷基、C3-8环烷氧基、C1-10烷氧基、芳基取代。
优选地，所述的A为
Figure BDA0003782964770000284
在本发明的一个实施方式中，所述的A为
Figure BDA0003782964770000285
所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000286
Figure BDA0003782964770000291
其中，Y1、Y2各自独立地选自：-H、卤素、-OC1-10烷基、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、-OH、
Figure BDA0003782964770000292
优选地，Y1、Y2均为-H。
Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure BDA0003782964770000293
Figure BDA0003782964770000294
优选地，Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基；更优选地，Y3、Y4均为-CH3。
在本发明的一个实施方式中，所述的Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure BDA0003782964770000295
X2选自由-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000296
Figure BDA0003782964770000297
Figure BDA0003782964770000298
及
Figure BDA0003782964770000299
或其组合组成的组，其中R9选自：-H、C1-10直链/支链烷基，优选地，R9为-H；
优选地，X2选自由C1-12直链/支链烷基及
Figure BDA00037829647700002910
组成的组。
在本发明的一个实施方式中，所述的X2为
Figure BDA0003782964770000301
在本发明的一个实施方式中，所述的X2为：
Figure BDA0003782964770000302
R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、C1-12烷氧基、-NO2、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure BDA0003782964770000303
Figure BDA0003782964770000304
Figure BDA0003782964770000305
优选地，R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、-NO2，更优选地，R10选自：-H、-CH3、-NO2，更进一步优选地，R10为-H。
R11选自：-H、C1-10直链/支链烷基、
Figure BDA0003782964770000306
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000307
Figure BDA0003782964770000308
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000309
Figure BDA00037829647700003010
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000311
Figure BDA0003782964770000312
在本发明一具体实施方式中，所述的B选自：
Figure BDA0003782964770000313
Figure BDA0003782964770000314
在本发明一具体实施方式中，所述的B为
Figure BDA0003782964770000315
进一步地，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000316
Figure BDA0003782964770000317
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000321
Figure BDA0003782964770000322
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000323
Figure BDA0003782964770000324
在本发明一具体实施方式中，所述的L2选自：
Figure BDA0003782964770000325
Figure BDA0003782964770000326
在本发明一具体实施方式中，所述的L2为
Figure BDA0003782964770000331
进一步地，D为药物分子。
进一步地，所述的药物分子选自：氨基酸、蛋白质、酶、核苷、糖类、有机酸、甙类、黄酮类、醌类、萜类、苯丙素酚类、甾体及其甙类和生物碱中的一种。
在本发明一具体实施方式中，药物分子优选自：鹅膏菌素、奥瑞他汀、加利车霉素、喜树碱、喜树碱衍生物和代谢物(如：SN-38及其衍生物、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱)，隐藻霉素、道诺霉素、多拉司他丁、多柔比星、多卡霉素、埃坡霉素、埃斯帕霉素、格尔德霉素、美登素及其衍生物、甲氨蝶呤、单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)，单甲基auristatin F(“MMAF”)、吡咯并苯二氮卓、根瘤菌素、SG2285、微管溶素、长春地辛、类毒素、伊立替康、拓扑替康、贝洛替康、依沙替康、卢托替康、二氟替康、吉尼替康、卡尼替康、阿霉素、表柔比星、吗啉代阿霉素、氰基吗啉代-阿霉素、2-吡咯啉基阿霉素、Dxd、MMAD、PBD及其衍生物、TPL、紫杉烷、袢霉素、博霉素B及其衍生物、美登素及其衍生物、多拉司他汀、丝裂霉素、氨基蝶呤、放线菌素、博来霉素、N8-乙酰基亚精胺、1-(2-氯乙基)-1,2-二甲磺酰肼、他利霉素、阿糖胞苷、依托泊苷、紫杉醇、拉霉素、鬼臼毒素、蛇形菌素(anguidine)、长春新碱、长春碱、吗啉-阿霉素、正-(5,5-二乙酰氧基-戊基)阿霉素及其衍生物中的一种或两种以上的组合。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：鹅膏菌素、奥瑞他汀、加利车霉素、喜树碱、喜树碱衍生物和代谢物(SN-38)，隐藻霉素、道诺霉素、多拉司他丁、多柔比星、多卡霉素、埃坡霉素、埃斯帕霉素、格尔德霉素、美登素、甲氨蝶呤、单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)，单甲基auristatin F(“MMAF”)、吡咯并苯二氮卓、根瘤菌素、SG2285、微管溶素、长春地辛、类毒素或上述任何一种的衍生物。
在本发明一具体实施方式中，所述药物分子选自：SN38及其衍生物、Dxd、MMAE、MMAF、MMAD、PBD及其衍生物、卡奇霉素和TPL中的一种。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：
Figure BDA0003782964770000332
Figure BDA0003782964770000341
Figure BDA0003782964770000342
中的一种。
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子选自：
Figure BDA0003782964770000343
Figure BDA0003782964770000351
在本发明一具体实施方式中，所述的药物分子为
Figure BDA0003782964770000352
本发明第五方面是提供一种通式(Ⅳ)的抗体药物偶联物或其盐以及药物组合物在疾病预防和/或治疗药物中的应用。
进一步地，所述疾病为癌症、病原性生物感染或自身免疫性疾病。
进一步地，所述癌症是造血肿瘤、癌、肉瘤、黑素瘤或神经胶质肿瘤。
进一步地，所述病原性生物选自由以下组成的组：人免疫缺陷病毒(HIV)、结核分枝杆菌、无乳链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、嗜肺性军团病菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、淋病柰瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎球菌属、B型流感嗜血杆菌、苍白密螺旋体、莱姆病螺旋体、西尼罗病毒、绿脓假单胞菌、麻风分枝杆菌、流产杆菌、狂犬病毒、流感病毒、巨细胞病毒、Ⅰ型单纯疱疹病毒、Ⅱ型单纯疱疹病毒、人血清细小样病毒、呼吸道合胞病毒、水痘-带状疱疹病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、人T细胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒、鼠白血病病毒、腮腺炎病毒、水泡性口膜炎病毒、辛德比斯病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、疣病毒、蓝舌病病毒、仙台病毒、猫白血病病毒、呼长孤病毒、脊髓灰质炎病毒、猿猴病毒40、鼠***肿瘤病毒、登革热病毒、风疹病毒、恶性疟原虫、间日疟原虫、鼠弓形体、让氏锥虫。
进一步地，所述自身免疫性疾病选自由以下组成的组：免疫介导的血小板减少症、皮肌炎、舍格伦氏综合症、多发性硬化、西登哈姆氏舞蹈症、重症肌无力、***性红斑狼疮、狼疮性肾炎、风湿热、类风湿性关节炎、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森氏病、结节病、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾病、结节性多动脉炎、强制性脊柱炎、古德帕斯丘综合征、闭塞性血栓性脉管炎、原发性胆汁性感应变、桥本甲状腺炎、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急性肾小球肾炎、纤维化肺泡炎和青少年糖尿病。
本发明第六方面是提供一种疾病治疗的方法，所述方法包括向受治疗者施用本发明所述抗体药物偶联物。
进一步地，所述抗体药物偶联物与选自以下一种或多种治疗方法联合施用：未共轭抗体、放射性标记抗体、药物-共轭抗体、毒素-共轭抗体、基因疗法、化疗、治疗肽、寡核苷酸、局部放疗、手术和干扰RNA疗法。
进一步地，所述疾病是癌症、病原性生物感染或自身免疫性疾病。
进一步地，所述癌症是造血肿瘤、癌、肉瘤、黑素瘤或神经胶质肿瘤。
进一步地，所述病原性生物选自由以下组成的组：人免疫缺陷病毒(HIV)、结核分枝杆菌、无乳链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、嗜肺性军团病菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、淋病柰瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎球菌属、B型流感嗜血杆菌、苍白密螺旋体、莱姆病螺旋体、西尼罗病毒、绿脓假单胞菌、麻风分枝杆菌、流产杆菌、狂犬病毒、流感病毒、巨细胞病毒、Ⅰ型单纯疱疹病毒、Ⅱ型单纯疱疹病毒、人血清细小样病毒、呼吸道合胞病毒、水痘-带状疱疹病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、人T细胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒、鼠白血病病毒、腮腺炎病毒、水泡性口膜炎病毒、辛德比斯病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、疣病毒、蓝舌病病毒、仙台病毒、猫白血病病毒、呼长孤病毒、脊髓灰质炎病毒、猿猴病毒40、鼠***肿瘤病毒、登革热病毒、风疹病毒、恶性疟原虫、间日疟原虫、鼠弓形体、让氏锥虫
进一步地，所述自身免疫性疾病选自由以下组成的组：免疫介导的血小板减少症、皮肌炎、舍格伦氏综合症、多发性硬化、西登哈姆氏舞蹈症、重症肌无力、***性红斑狼疮、狼疮性肾炎、风湿热、类风湿性关节炎、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森氏病、结节病、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾病、结节性多动脉炎、强制性脊柱炎、古德帕斯丘综合征、闭塞性血栓性脉管炎、原发性胆汁性感应变、桥本甲状腺炎、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急性肾小球肾炎、纤维化肺泡炎和青少年糖尿病。
本发明所述的以DBCO为接头的，含有PEG的β-葡萄糖醛酸酶可裂解连接子与细胞毒性药物的缀合物，能够通过简单的SPAAC反应实现与抗体上修饰的叠氮基团的定点偶联，得到均一性更高的抗体偶联药物；同时在连接子中引入PEG基团，能够达到提高连接子亲水性的目的，增加连接子-药物缀合物的水溶性，解决了连接子-药物缀合物溶解性差的问题。
本发明中所述的术语C1-8直链/支链烷基，包括，甲基、乙基、C3直链/支链烷基、C4直链/支链烷基、C5直链/支链烷基、C6直链/支链烷基、C7直链/支链烷基、C8直链/支链烷基。
本发明中所述的术语C1-10直链/支链烷基，包括，甲基、乙基、C3直链/支链烷基、C4直链/支链烷基、C5直链/支链烷基、C6直链/支链烷基、C7直链/支链烷基、C8直链/支链烷基、C9直链/支链烷基、C10直链/支链烷基。
本发明中所述的术语C1-5直链/支链烷基，包括，甲基、乙基、C3直链/支链烷基、C4直链/支链烷基、C5直链/支链烷基。本发明中所述的术语C3-12环烷基，包括C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基、C6环烷基、C7环烷基、C8环烷基、C9环烷基、C10环烷基、C11环烷基、C12环烷基。
本发明中所述的术语C1-12直链/支链烷基，包括，甲基、乙基、C3直链/支链烷基、C4直链/支链烷基、C5直链/支链烷基、C6直链/支链烷基、C7直链/支链烷基、C8直链/支链烷基、C9直链/支链烷基、C10直链/支链烷基、C11直链/支链烷基、C12直链/支链烷基。
本发明中所述的术语C3-12环烷基，包括，C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基、C6环烷基、C7环烷基、C8环烷基、C9环烷基、C10环烷基、C11环烷基、C12环烷基。
本发明中所述的术语C3-10环烷基，包括，C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基、C6环烷基、C7环烷基、C8环烷基、C9环烷基、C10环烷基。
本发明中所述的术语C6-12芳环基，包括C6芳环基(苯基)、C7芳环基、C8芳环基、C9芳环基、C10芳环基、C11芳环基、C12芳环基。
本发明中所述的术语C3-12杂环烷基，包括，C3杂环烷基、C4杂环烷基、C5杂环烷基、C6杂环烷基、C7杂环烷基、C8杂环烷基、C9杂环烷基、C10杂环烷基、C11杂环烷基、C12杂环烷基。
本发明中所述的术语C6-12杂芳基，包括，C6杂芳基、C7杂芳基、C8杂芳基、C9杂芳基、C10杂芳基、C11杂芳基、C12杂芳基。
本发明中所述的术语C3-8环烷基，包括，C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基、C6环烷基、C7环烷基、C8环烷基。
本发明中所述的术语C3-8环烷氧基，包括，C3环烷氧基、C4环烷氧基、C5环烷氧基、C6环烷氧基、C7环烷氧基、C8环烷氧基。
本发明中所述的术语C1-12烷氧基，包括，甲氧基、乙氧基、C3烷氧基、C4烷氧基、C5烷氧基、C6烷氧基、C7烷氧基、C8烷氧基、C9烷氧基、C10烷氧基、C11烷氧基、C12烷氧基。
本发明中所述的术语C1-10烷氧基，包括，甲氧基、乙氧基、C3烷氧基、C4烷氧基、C5烷氧基、C6烷氧基、C7烷氧基、C8烷氧基、C9烷氧基、C10烷氧基。
本发明中所述的术语MMAE是指一甲基澳瑞他汀E。
本发明中所述的术语SN38是指7-乙基-10-羟基喜树碱。
本发明中所述的术语MMAF是指一甲基澳瑞他汀F。
本发明中所述的术语MMAD是指单甲基澳瑞他汀D。
本发明中所述的术语PBD是指吡咯并苯并二氮杂卓。
本发明中所述的术语TPL是指雷公藤甲素。
本发明中所述的术语Dxd是指德鲁替康。
附图说明
图1为化合物1的MS图。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明的技术内容，特举以下实施例详细说明，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，其目的仅在于更好理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1化合物1的合成
Figure BDA0003782964770000391
1.1化合物1a的合成
将原料Glucose-NO2-OH(48.5g，0.10mol)加入到480mL DCM和100mL DMF中，然后在该溶液中依次加入DIEA(25.8g,0.20mol)和TBSCl(16.5g,0.11mol)，反应室温搅拌6H，TLC显示反应完全。该反应液用400mL*3饱和氯化钠溶液洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到粗品，再用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 20/1-8/1)得到化合物1a(50g，白色固体)，产率83％。
MS m/z(ESI):600.2[M+1]
1.2化合物1b的合成
将化合物1a(45.1g，0.08mol)溶于300mL甲醇和150mL乙酸乙酯中，加入10％Pd/C(4.5g)，置换氢气，该反应在氢气环境下搅拌4H，TLC显示反应完全，过滤除去滤饼，得到的滤液旋干得到粗品，该粗品用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 10/1-3/1)得到化合物1b(白色固体，38g)，产率88％。
MS m/z(ESI):570.2[M+1]
1.3化合物1c的合成
将化合物1b(6.32g，11.1mmol)，DBCO-PEG8-PA(7.7g，10.6mmol)，HATU(4.83g，12.7mmol)，TEA(2.1g，21.2mmol)溶于DMF(80mL)中，反应在室温下搅拌4h。TLC显示原料反应完全后，直接C-18中压flash(H2O/CH3OH 40％-90％)纯化得到化合物1c(8.1g，黄色油状产物)，产率60％。
MS m/z(ESI):1280.6[M+1]
1.4化合物1d的合成
将化合物1c(5.5g，4.3mmol)溶于THF(55mL)中，加入2N HCl水溶液(4.0mL)，该反应液室温搅拌2H，TLC和HPLC显示原料反应完全，加入NaHCO3饱和水溶液50mL淬灭反应，然后用二氯甲烷萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干得到粗品。用10mL DCM溶解粗品，得到的溶液不澄清，用滤膜过滤除去固体，滤液旋干得到化合物1d(3.1g，黄色油状产物)，产率62％。
MS m/z(ESI):1166.5[M+1]
1.5化合物1e的合成
将化合物1d(2.9g，2.5mmol)溶于40mL DCM中，冰水浴降温至0-5℃，在该反应体系中依次加入对硝基氯甲酸苯酯(0.75g，3.7mmol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)，反应慢慢升温至室温搅拌4h，TLC显示反应完全后，加入30mL 5％的NaHSO4洗涤一次，再用30mL饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，湿法上样，硅胶柱纯化(DCM/THF 10/1-2/1)得到化合物1e(2.4g，黄色油状物)，产率73％。
MS m/z(ESI):1331.5[M+1]
1.6化合物1f的合成
在100mL的单口烧瓶中，加入化合物1e(2.3g，1.7mmol)，MMAE(1.5g，2.1mmol)，HOBt(116mg，0.9mmol)吡啶(20mL)，DIEA(2mL)和THF(50mL)，反应室温搅拌48H，HPLC显示反应完全后，旋蒸除去溶剂，用C-18中压flash(H2O/CH3OH50％-90％)纯化得到化合物1f(2.0g，类白色固体)，产率61％。
MS m/z(ESI):1909.0[M+1]
1.7化合物1的合成
将化合物1f(1.0g,0.5mmol)溶于THF和MeOH的混合溶剂中，冰浴中冷却，缓慢添加氢氧化锂(144mg，12eq)的水溶液,温度逐渐增加至室温。待反应完全，用乙酸调节PH至7。用C-18中压flash(H2O/CH3OH 50％-90％)纯化得到化合物1(500mg，类白色固体)，产率55％。
MS m/z(ESI):885.9[M/2+1]
实施例2化合物2的合成
Figure BDA0003782964770000411
2.1化合物2a的合成
将原料Glucose-NO2-OH(48.5g，0.10mol)加入到480mL DCM和100mL DMF中，然后在该溶液中依次加入DIEA(25.8g,0.20mol)和TBSCl(16.5g,0.11mol)，反应室温搅拌6h，TLC显示反应完全。该反应液用400mL*3饱和氯化钠溶液洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到粗品，再用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 20/1-8/1)得到化合物2a(50g，白色固体)，产率83％。
MS m/z(ESI):600.2[M+1]
2.2化合物2b的合成
将化合物2a(45.1g，0.08mol)溶于300mL甲醇和150mL乙酸乙酯中，加入10％Pd/C(4.5g)，置换氢气，该反应在氢气环境下搅拌4h，TLC显示反应完全，过滤除去滤饼，得到的滤液旋干得到粗品，该粗品用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 10/1-3/1)得到化合物2b(白色固体，38g)，产率88％。
MS m/z(ESI):570.2[M+1]
2.3化合物2c的合成
将化合物2b(6.32g，11.1mmol)，DBCO-PEG8-PA(7.7g，10.6mmol)，HATU(4.83g，12.7mmol)，TEA(2.1g，21.2mmol)溶于DMF(80mL)中，反应在室温下搅拌4h。TLC显示原料反应完全后，直接C-18中压flash(H2O/CH3OH 40％-90％)纯化得到化合物2c(8.1g，黄色油状产物)，产率60％。
MS m/z(ESI):1280.6[M+1]
2.4化合物2d的合成
将化合物2c(5.5g，4.3mmol)溶于THF(55mL)中，加入2N HCl水溶液(4.0mL)，该反应液室温搅拌2H，TLC和HPLC显示原料反应完全，加入NaHCO3饱和水溶液50mL淬灭反应，然后用二氯甲烷萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干得到粗品。用10mL DCM溶解粗品，得到的溶液不澄清，用滤膜过滤除去固体，滤液旋干得到化合物2d(3.1g，黄色油状产物)，产率62％。
MS m/z(ESI):1166.5[M+1]
2.5化合物2e的合成
将化合物2d(2.9g，2.5mmol)溶于40mL DCM中，冰水浴降温至0-5℃，在该反应体系中依次加入对硝基氯甲酸苯酯(0.75g，3.7mmol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)，反应慢慢升温至室温搅拌4h，TLC显示反应完全后，加入30mL 5％的NaHSO4洗涤一次，再用30mL饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，湿法上样，硅胶柱纯化(DCM/THF 10/1-2/1)得到化合物2e(2.4g，黄色油状物)，产率73％。
MS m/z(ESI):1331.5[M+1]
2.6化合物2f的合成
在100mL的单口烧瓶中，加入化合物2e(2.3g，1.7mmol)，TBS-SN38(1.1g，2.1mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.4g,3.4mmol)，DIEA(2mL)和THF(50mL)，反应室温搅拌48h，HPLC显示反应完全后，旋蒸除去溶剂，用C-18中压flash(H2O/CH3OH 50％-90％)纯化得到化合物2f(1.4g，类白色固体)，产率50％。
MS m/z(ESI):1699.0[M+1]
2.7化合物2g的合成
将化合物2f(1.0g,0.6mmol)溶于50mL四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵(0.52g，2.0mmol)，室温下搅拌30min，TLC监控反应进程，反应完成后旋干溶剂，用C-18flash进行纯化制备(MeOH:H2O＝50％-90％)，得到化合物2g(590mg，黄色固体)，产率62％。
MS m/z(ESI):792.8[M/2+1]
2.8化合物2的合成
将化合物2g(500mg,0.3mmol)溶于THF和MeOH的混合溶剂中，冰浴中冷却，缓慢添加氢氧化锂(72mg，12eq)的水溶液,温度逐渐增加至室温。待反应完全，用乙酸调节PH至7。用C-18中压flash(H2O/CH3OH 50％-90％)纯化得到化合物2(198mg，类白色固体)，产率58％。
MS m/z(ESI):568.7[M/2+1]
实施例3化合物3的合成
Figure BDA0003782964770000441
3.1化合物3a的合成
将原料Glucose-NO2-OH(48.5g，0.10mol)加入到480mL DCM和100mL DMF中，然后在该溶液中依次加入DIEA(25.8g,0.20mol)和TBSCl(16.5g,0.11mol)，反应室温搅拌6H，TLC显示反应完全。该反应液用400mL*3饱和氯化钠溶液洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到粗品，再用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 20/1-8/1)得到化合物3a(50g，白色固体)，产率83％。
MS m/z(ESI):600.2[M+1]
3.2化合物3b的合成
将化合物3a(45.1g，0.08mol)溶于300mL甲醇和150mL乙酸乙酯中，加入10％Pd/C(4.5g)，置换氢气，该反应在氢气环境下搅拌4h，TLC显示反应完全，过滤除去滤饼，得到的滤液旋干得到粗品，该粗品用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 10/1-3/1)得到化合物3b(白色固体，38g)，产率88％。
MS m/z(ESI):570.2[M+1]
3.3化合物3c的合成
将化合物3b(6.32g，11.1mmol)，DBCO-PEG8-PA(7.7g，10.6mmol)，HATU(4.83g，12.7mmol)，TEA(2.1g，21.2mmol)溶于DMF(80mL)中，反应在室温下搅拌4h。TLC显示原料反应完全后，直接C-18中压flash(H2O/CH3OH 40％-90％)纯化得到化合物3c(8.1g，黄色油状产物)，产率60％。
MS m/z(ESI):1280.6[M+1]
3.4化合物3d的合成
将化合物3c(5.5g，4.3mmol)溶于THF(55mL)中，加入2N HCl水溶液(4.0mL)，该反应液室温搅拌2h，TLC和HPLC显示原料反应完全，加入NaHCO3饱和水溶液50mL淬灭反应，然后用二氯甲烷萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干得到粗品。用10mL DCM溶解粗品，得到的溶液不澄清，用滤膜过滤除去固体，滤液旋干得到化合物3d(3.1g，黄色油状产物)，产率62％。
MS m/z(ESI):1166.5[M+1]
3.5化合物3e的合成
将化合物3d(2.9g，2.5mmol)溶于40mL DCM中，冰水浴降温至0-5℃，在该反应体系中依次加入对硝基氯甲酸苯酯(0.75g，3.7mmol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)，反应慢慢升温至室温搅拌4h，TLC显示反应完全后，加入30mL 5％的NaHSO4洗涤一次，再用30mL饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，湿法上样，硅胶柱纯化(DCM/THF 10/1-2/1)得到化合物3e(2.4g，黄色油状物)，产率73％。
MS m/z(ESI):1331.5[M+1]
3.6化合物3f的合成
将SN38(1.96g，5.0mmol)和4-二甲氨基吡啶(915mg，7.5mmol)溶于15mL二氯甲烷中，氮气保护下加入三光气(670mg)，室温搅拌反应5分钟，向反应液中加入Boc-DMEA(1.14g,6.3mmol)的二氯甲烷溶液(4.0mL)，室温搅拌反应5分钟，LCMS显示原料反应完全。反应液用水洗涤2次，得到3f(2.3g,黄色固体)，产率76％。
MS m/z(ESI):607.2[M+1]
3.7化合物3g的合成
将化合物3f(2.3g,3.7mmol)溶于二氯甲烷(4mL)和三氟乙酸(1mL)的混合溶剂中，氮气保护下室温搅拌反应2小时，LCMS显示原料基本反应完全。反应液加入乙腈稀释，低温浓缩，中压制备液相纯化得到产物3g(1.6g,黄色固体)，产率82％。
MS m/z(ESI):507.2[M+1]
3.8化合物3h的合成
在100mL的单口烧瓶中，加入化合物3e(2.3g，1.7mmol)，3g(1.1g，2.1mmol)，HOBt(116mg，0.9mmol)吡啶(20mL)，DIEA(2mL)和THF(50mL)，反应室温搅拌48h，HPLC显示反应完全后，旋蒸除去溶剂，用C-18中压flash(H2O/CH3OH 50％-90％)纯化得到化合物3h(1.9g，类白色固体)，产率65％。
MS m/z(ESI):850.0[M/2+1]
3.9化合物3的合成
将化合物3h(1.9g,1.0mmol)溶于THF和MeOH的混合溶剂中，冰浴中冷却，缓慢添加氢氧化锂(288mg，12eq)的水溶液，温度逐渐增加至室温。待反应完全，用乙酸调节PH至7。用C-18中压flash(H2O/CH3OH 50％-90％)纯化得到化合物3(810mg，类白色固体)，产率52％。
MS m/z(ESI):780.5[M/2+1]
实施例4化合物4的合成
Figure BDA0003782964770000471
4.1化合物4a的合成
将原料Glucose-NO2-OH(49.9g，0.10mol)加入到480mL DCM和100mL DMF中，然后在该溶液中依次加入DIEA(25.8g,0.20mol)和TBSCl(16.5g,0.11mol)，反应室温搅拌6H，TLC显示反应完全。该反应液用400mL*3饱和氯化钠溶液洗涤三次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂得到粗品，再用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 20/1-8/1)得到化合物4a(49g，白色固体)，产率80％。
MS m/z(ESI):614.2[M+1]
4.2化合物4b的合成
将化合物4a(49.0g，0.08mol)溶于300mL甲醇和150mL乙酸乙酯中，加入10％Pd/C(4.5g)，置换氢气，该反应在氢气环境下搅拌4h，TLC显示反应完全，过滤除去滤饼，得到的滤液旋干得到粗品，该粗品用硅胶柱层析纯化(正己烷/EA 10/1-3/1)得到化合物4b(40g,白色固体)，产率87％。
MS m/z(ESI):584.2[M+1]
4.3化合物4c的合成
将化合物4b(6.42g，11.0mmol)，DBCO-PEG8-PA(7.7g，10.6mmol)，HATU(4.83g，12.7mmol)，TEA(2.1g，21.2mmol)溶于DMF(80mL)中，反应在室温下搅拌4h。TLC显示原料反应完全后，直接C-18中压flash(H2O/CH3OH 40％-90％)纯化得到化合物4c(8.8g，黄色油状产物)，产率62％。
MS m/z(ESI):1294.6[M+1]
4.4化合物4d的合成
将化合物4c(5.6g，4.3mmol)溶于THF(55mL)中，加入2N HCl水溶液(4.0mL)，该反应液室温搅拌2H，TLC和HPLC显示原料反应完全，加入NaHCO3饱和水溶液50mL淬灭反应，然后用二氯甲烷萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干得到粗品。用10mL DCM溶解粗品，得到的溶液不澄清，用滤膜过滤除去固体，滤液旋干得到化合物4d(3.3g，黄色油状产物)，产率66％。
MS m/z(ESI):1180.5[M+1]
4.5化合物4e的合成
将化合物4d(3.0g，2.5mmol)溶于40mL DCM中，冰水浴降温至0-5℃，在该反应体系中依次加入对硝基氯甲酸苯酯(0.75g，3.7mmol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)，反应慢慢升温至室温搅拌4h，TLC显示反应完全后，加入30mL 5％的NaHSO4洗涤一次，再用30mL饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，湿法上样，硅胶柱纯化(DCM/THF 10/1-2/1)得到化合物4e(2.3g，黄色油状物)，产率70％。
MS m/z(ESI):1345.5[M+1]
4.6化合物4f的合成
在100mL的单口烧瓶中，加入化合物4e(2.3g，1.7mmol)，MMAE(1.5g，2.1mmol)，HOBt(116mg，0.9mmol)吡啶(20mL)，DIEA(2mL)和THF(50mL)，反应室温搅拌48h，HPLC显示反应完全后，旋蒸除去溶剂，用C-18中压flash(H2O/CH3OH50％-90％)纯化得到化合物4f(2.0g，类白色固体)，产率61％。
MS m/z(ESI):962.5[M/2+1]
4.7化合物4的合成
将化合物4f(961mg,0.5mmol)溶于THF和MeOH的混合溶剂中，冰浴中冷却，缓慢添加氢氧化锂(144mg，12eq)的水溶液,温度逐渐增加至室温。待反应完全，用乙酸调节PH至7。用C-18中压flash(H2O/CH3OH 50％-90％)纯化得到化合物4(472mg，类白色固体)，产率53％。
MS m/z(ESI):892.5[M/2+1]
实施例5化合物5的合成
Figure BDA0003782964770000491
5.1化合物5b的合成
将化合物5a(6.76g，11.0mmol)，DBCO-PEG8-PA(7.7g，10.6mmol)，HATU(4.83g，12.7mmol)，TEA(2.1g，21.2mmol)溶于DMF(80mL)中，反应在室温下搅拌4h。TLC显示原料反应完全后，直接C-18中压flash(H2O/CH3OH 40％-90％)纯化得到化合物5b(8.4g，黄色油状产物)，产率60％。
MS m/z(ESI):1325.6[M+1]
5.2化合物5c的合成
将化合物5b(5.7g，4.3mmol)溶于THF(55mL)中，加入2N HCl水溶液(4.0mL)，该反应液室温搅拌2H，TLC和HPLC显示原料反应完全，加入NaHCO3饱和水溶液50mL淬灭反应，然后用二氯甲烷萃取两次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干得到粗品。用10mL DCM溶解粗品，得到的溶液不澄清，用滤膜过滤除去固体，滤液旋干得到化合物5c(3.2g，黄色油状产物)，产率61％。
MS m/z(ESI):1211.5[M+1]
5.3化合物5d的合成
将化合物5c(3.0g，2.5mmol)溶于40mL DCM中，冰水浴降温至0-5℃，在该反应体系中依次加入对硝基氯甲酸苯酯(0.75g，3.7mmol)和DMAP(0.61g，5.0mmol)，反应慢慢升温至室温搅拌4h，TLC显示反应完全后，加入30mL 5％的NaHSO4洗涤一次，再用30mL饱和食盐水洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，旋干，湿法上样，硅胶柱纯化(DCM/THF 10/1-2/1)得到化合物5d(2.1g，黄色油状物)，产率61％。
MS m/z(ESI):1376.5[M+1]
5.4化合物5e的合成
在100mL的单口烧瓶中，加入化合物5d(2.3g，1.7mmol)，MMAE(1.5g，2.1mmol)，HOBt(116mg，0.9mmol)吡啶(20mL)，DIEA(2mL)和THF(50mL)，反应室温搅拌48h，HPLC显示反应完全后，旋蒸除去溶剂，用C-18中压flash(H2O/CH3OH50％-90％)纯化得到化合物5e(2.1g，类白色固体)，产率65％。
MS m/z(ESI):978.5[M/2+1]
5.5化合物5的合成
将化合物5e(979mg,0.5mmol)溶于THF和MeOH的混合溶剂中，冰浴中冷却，缓慢添加氢氧化锂(144mg，12eq)的水溶液,温度逐渐增加至室温。待反应完全，用乙酸调节PH至7。用C-18中压flash(H2O/CH3OH 50％-90％)纯化得到化合物5(435mg，类白色固体)，产率48％。
MS m/z(ESI):908.0[M/2+1]
实施例6ADC的制备
6.1mAb与PEG12反应过程
按照mAb与PEG12-SPA的摩尔比为1:20的投料比进行反应。先量取208μL的mAb溶液(浓度：9.6mg/mL)置于1.5mL的离心管中，则量取的mAb为2mg。使用5mM pH3.0的PBS溶液配制10mg/mL的N3-PEG12-SPA溶液，量取20μL加入到离心管中，充分混合，震荡反应2h。反应完毕后用超滤的方式去除未反应的N3-PEG12-SPA。
6.2mAb-PEG12与linker-drug反应过程
取制备好的mAb-PEG12样品，测定蛋白浓度为2.05mg/mL，量取490μL样品溶液置于1.5mL的离心管中。称量10mglinker-drug，溶解在DMSO中，制备成1mg/mL的溶液。按照mAb与linker-drug投料比为1:4计算，量取41μLlinker-drug溶液加入到离心管中，再向离心管中加入510μL的PBS和59μL的DMSO，保持蛋白浓度为1mg/mL，水与DMSO的比例为10:1，充分混合，震荡反应2h。反应完毕后用超滤的方式去除未反应的小分子，得到ADC分子，如下表所示。
Linker-drug ADC分子
化合物2 ADC1
DBCO-VC-PAB-SN38 ADC2
实施例7DAR值的测量
用液相的方法检测ADC的DAR值。
液相色谱设置如下：
Figure BDA0003782964770000511
该液相色谱条件下SN38与ADC1、ADC2分离度大于1.5。制备不同浓度标准曲线，建立SN38峰面积与浓度之间的线性标准曲线，分别对ADC 1和ADC 2上的SN38进行定量。根据ADC的抗体浓度和SN38的浓度计算ADC上SN38的偶联个数。测定实施例6制备的ADC 1和ADC2，DAR值均为4；
实施例8ADC与EGFR的亲和力测定
ADC药物的亲和力用SPR的方法进行检测，试验仪器未GE的产品biacore。简单操作步骤为：将EGFR抗原偶联到CM芯片上。用不同浓度的ADC药物或单抗药物测试ADC药物的抗体或游离的抗体与抗原的亲和力。结果显示实施例6制备的ADC1和ADC2，其抗体的亲和力下降不是很明显，ADC1的亲和力高于ADC2。
实施例9体外细胞毒性实验
用BXPC-3(人胰腺癌细胞)细胞进行体外细胞毒性测试。试验操作如下：
1、96孔板每孔加入细胞100μL(留2个空白组不加细胞，加入同体积的培养基)。细胞置于37℃的5％CO2细胞培养箱中培养24h。细胞毒性实验每孔加入100μL约含10000个细胞。
2、每孔加入10μL不同浓度ADC或SN38的药物。
3、将96孔板在37℃，含5％CO2空气及100％湿度的细胞培养箱中孵育24小时。
4、每孔加入10μL的CCK-8溶液。37℃，5％CO2培养箱中孵育3h。
5、酶标仪测定450nm处的吸光度。
6、结果分析：
A.细胞存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(空白组)，各重复孔的OD值取平均数±SD。
细胞存活率％＝(加药细胞OD/对照细胞OD)×100％。
B.求出T/C＝50％时的药物浓度(IC50)及T/C＝10％时的药物浓度(IC90)。
结果显示实施例6制备的ADC 1的IC50值小于ADC 2的IC50值，与SN38的IC50值相当。
结果表明，该发明获得的ADC1不仅能够有效地发挥EGFR抗体部分的生物学功能，还兼有SN38对肿瘤细胞的高效杀伤活性。相较于传统的二肽linker制备得到的ADC2，本发明得到的ADC1具有更优的活性。

Claims (20)

1.一种缀合物，其具有式(Ⅰ)所示结构：
Q-X-L1-L2-D (I)
其中，所述Q选自：
Figure FDA0003782964760000011
Figure FDA0003782964760000012
中的一种；
R5和R6各自独立地具有—X1—Q1的结构，Q1选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、-NO2、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基，X1选自由单键、-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000013
及
Figure FDA0003782964760000014
或其组合组成的组；
X是连接基团，X为
Figure FDA0003782964760000015
其中，m1、m2各自独立地选自0～12的整数，Xa、Xb各自独立地选自：-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000016
Figure FDA0003782964760000017
Figure FDA0003782964760000018
中的一种，R9选自：-H、C1-10直链/支链烷基；
L1选自：直链、Y型和多分支的聚乙二醇残基中的一种；
L2是连接基团，为
Figure FDA0003782964760000019
其中A为葡糖苷酸或葡糖苷酸衍生物；
所述的B选自：
Figure FDA00037829647600000110
Figure FDA0003782964760000021
其中，Y1、Y2各自独立地选自：-H、卤素、-OC1-10烷基、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、-OH、
Figure FDA0003782964760000022
Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure FDA0003782964760000023
Figure FDA0003782964760000024
X2选自由-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000025
Figure FDA0003782964760000026
Figure FDA0003782964760000027
及
Figure FDA0003782964760000028
或其组合组成的组；
R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、C1-12烷氧基、-NO2、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000029
Figure FDA00037829647600000210
Figure FDA0003782964760000031
R11选自：-H、C1-10直链/支链烷基、
Figure FDA0003782964760000032
D为药物分子。
2.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的Q为
Figure FDA0003782964760000033
优选地，所述的R5和R6均为H；
优选地，所述的R9为-H；
优选地，所述的Y1、Y2均为-H。
3.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、-NO2，优选地，R10选自：-H、-CH3、-NO2，更优选地，R10为-H。
4.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基，优选地，Y3、Y4均为-CH3。
5.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的m1、m2各自独立地选自0～3的整数；
优选地，所述的m1为0；
优选地，所述的m2为2。
6.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的Xa选自：
Figure FDA0003782964760000034
Figure FDA0003782964760000035
中的一种，优选地，Xa为
Figure FDA0003782964760000036
7.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的Xb选自：
Figure FDA0003782964760000037
Figure FDA0003782964760000038
中的一种，优选地，Xb为
Figure FDA0003782964760000039
8.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，其具有式(ⅠI)所示结构：
Figure FDA0003782964760000041
9.权利要求1-8任意一项所述的缀合物，其特征在于，所述的L1为直链聚乙二醇残基，具有通式(Ⅲ)所示的结构：
Figure FDA0003782964760000042
其中，n1独立地选自1-30的整数，优选为1-25的整数，更优选为4-24的整数，特别优选为8。
10.权利要求1-8任意一项所述的缀合物，其特征在于，所述的A选自：
Figure FDA0003782964760000043
其中，R12选自：C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、C3-12杂环烷基和C6-12杂芳基中的一种。
11.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的A为
Figure FDA0003782964760000044
优选地，所述的A为
Figure FDA0003782964760000045
12.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的X2选自由C1-12直链/支链烷基及
Figure FDA0003782964760000051
组成的组，优选地，所述的X2为
Figure FDA0003782964760000052
更优选地，所述的X2为：
Figure FDA0003782964760000053
13.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的B选自：
Figure FDA0003782964760000054
优选地，所述的B选自：
Figure FDA0003782964760000055
Figure FDA0003782964760000056
优选地，所述的B选自：
Figure FDA0003782964760000057
Figure FDA0003782964760000058
优选地，所述的B为
Figure FDA0003782964760000059
14.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的L2选自：
Figure FDA0003782964760000061
Figure FDA0003782964760000062
优选地，所述的L2选自：
Figure FDA0003782964760000063
Figure FDA0003782964760000064
优选地，所述的L2选自：
Figure FDA0003782964760000065
Figure FDA0003782964760000071
优选地，所述的L2为
Figure FDA0003782964760000072
15.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的药物分子选自：鹅膏菌素、奥瑞他汀、加利车霉素、喜树碱、喜树碱衍生物和代谢物(SN-38)，隐藻霉素、道诺霉素、多拉司他丁、多柔比星、多卡霉素、埃坡霉素、埃斯帕霉素、格尔德霉素、美登素、甲氨蝶呤、单甲基奥瑞他汀E(“MMAE”)，单甲基auristatin F(“MMAF”)、吡咯并苯二氮卓、根瘤菌素、SG2285、微管溶素、长春地辛、类毒素或上述任何一种的衍生物；
优选地，所述药物分子选自：SN38及其衍生物、Dxd、MMAE、MMAF、MMAD、PBD及其衍生物、卡奇霉素和TPL中的一种。
16.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的药物分子选自：
Figure FDA0003782964760000073
优选地，所述的药物分子为
Figure FDA0003782964760000074
17.权利要求1所述的缀合物，其特征在于，所述的缀合物选自：
Figure FDA0003782964760000081
Figure FDA0003782964760000091
Figure FDA0003782964760000101
优选地，所述的缀合物为
Figure FDA0003782964760000102
18.一种抗体药物偶联物，其具有式(Ⅳ)所示结构：
Figure FDA0003782964760000103
其中，Ab为抗体，所述抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体，优选为单克隆抗体，更优选为内化单克隆抗体；
l选自1-50的整数；
L3为
Figure FDA0003782964760000111
其中，Z1为1～10的整数；
L4选自
Figure FDA0003782964760000112
其中，n2选自1-30的整数；
Q’选自
Figure FDA0003782964760000113
Figure FDA0003782964760000114
Figure FDA0003782964760000115
中的一种；
R5和R6各自独立地具有—X1—Q1的结构，Q1选自-H、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、-NO2、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基，X1选自由单键、-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000116
及
Figure FDA0003782964760000117
或其组合组成的组；
X是连接基团，X为
Figure FDA0003782964760000118
其中，m1、m2各自独立地选自0～12的整数，Xa、Xb各自独立地选自：-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000121
Figure FDA0003782964760000122
Figure FDA0003782964760000123
中的一种，R9选自：-H、C1-10直链/支链烷基；
L1选自：直链、Y型和多分支的聚乙二醇残基中的一种；
L2是连接基团，为
Figure FDA0003782964760000124
其中A为葡糖苷酸或葡糖苷酸衍生物；
所述的B选自：
Figure FDA0003782964760000125
Figure FDA0003782964760000126
其中，Y1、Y2各自独立地选自：-H、卤素、-OC1-10烷基、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、-OH、
Figure FDA0003782964760000127
Y3、Y4各自独立地选自：-H、C1-10直链/支链烷基、C3-10环烷基、
Figure FDA0003782964760000128
Figure FDA0003782964760000131
X2选自由-O-、-S-、C1-12直链/支链烷基、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000132
Figure FDA0003782964760000133
Figure FDA0003782964760000134
及
Figure FDA0003782964760000135
或其组合组成的组；
R10选自：-H、C1-12直链/支链烷基、C1-12烷氧基、-NO2、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-SO2、C3-12环烷基、C6-12芳环基、
Figure FDA0003782964760000136
Figure FDA0003782964760000137
R11选自：-H、C1-10直链/支链烷基、
Figure FDA0003782964760000138
D为药物分子；
优选地，所述的抗体药物偶联物具有式(V)所示结构：
Figure FDA0003782964760000139
其中，i选自1～20的整数；
优选地，所述的抗体药物偶联物具有式(Ⅵ)所示结构：
Figure FDA0003782964760000141
19.一种如权利要求18所述的抗体药物偶联物的制备方法，所述制备方法的合成路线如下：
Figure FDA0003782964760000142
其中，i选自1～20的整数。
20.一种如权利要求1所述的缀合物或权利要求18所述的抗体药物偶联物在疾病预防和/或治疗药物中的应用，所述的疾病为癌症、病原性生物感染或自身免疫性疾病。
CN202210934549.2A 2022-08-04 2022-08-04 一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物 Pending CN115429890A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210934549.2A CN115429890A (zh) 2022-08-04 2022-08-04 一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210934549.2A CN115429890A (zh) 2022-08-04 2022-08-04 一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115429890A true CN115429890A (zh) 2022-12-06

Family

ID=84241762

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210934549.2A Pending CN115429890A (zh) 2022-08-04 2022-08-04 一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115429890A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107847605A (zh) * 2015-11-25 2018-03-27 乐高化学生物科学股份有限公司 包含分支接头的抗体‑药物缀合物及其相关方法
CN107875398A (zh) * 2017-09-27 2018-04-06 浙江大学 一种抗体偶联药物的制备方法、抗体偶联药物及应用
CN109790171A (zh) * 2017-03-29 2019-05-21 乐高化学生物科学股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂二聚物前体及其配体-连接体缀合化合物
WO2022026915A2 (en) * 2020-07-31 2022-02-03 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107847605A (zh) * 2015-11-25 2018-03-27 乐高化学生物科学股份有限公司 包含分支接头的抗体‑药物缀合物及其相关方法
CN109790171A (zh) * 2017-03-29 2019-05-21 乐高化学生物科学股份有限公司 吡咯并苯并二氮杂二聚物前体及其配体-连接体缀合化合物
CN107875398A (zh) * 2017-09-27 2018-04-06 浙江大学 一种抗体偶联药物的制备方法、抗体偶联药物及应用
WO2022026915A2 (en) * 2020-07-31 2022-02-03 Angiex, Inc. Anti-tm4sf1 antibody-drug conjugates comprising cleavable linkers and methods of using same

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108853514B (zh) 具有两种不同药物的抗体药物偶联物
US11077201B2 (en) Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
US8834886B2 (en) Camptothecin-binding moiety conjugates
JP2024038168A (ja) 生物活性分子コンジュゲート、その調製法及び使用
CN107469089B (zh) 一种peg连接子及配基药物偶联物
IL257839A (en) Doses of antibody and sn-38 immunocouplers for improved efficacy and reduced toxicity
CN115429890A (zh) 一种缀合物及用其制备的抗体药物偶联物
WO2023124537A1 (zh) 一种缀合物及用其制备的抗体偶联药物
US11564990B2 (en) Multi-drug-loading-site, high drug-loading capacity ligand-drug conjugate
WO2023151679A1 (en) Pegylated antibody hydroxyl-bearing drug conjugate
CN117255790A (zh) 一类化学偶联连接子及其用途
CN118043080A (zh) 一种基于微管抑制剂的抗体偶联药物
TW202327570A (zh) 蒽環黴素衍生接合劑、抗體-藥物結合物及方法
KR20240040099A (ko) Sn38을 포함하는 항체-약물 접합체 중간체 및 그의 제조 방법
CN118001422A (zh) 功效改进且毒性降低的抗体与sn-38的免疫缀合物的剂量

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination