CN115340970A - 一种促进菌株生长的培养基添加剂及含有该添加剂的培养基及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于微生物培养技术领域,具体涉及一种促进菌株生长的培养基添加剂及含有该添加剂的培养基及其应用,所述培养基添加剂包括以下成分:刃天青、生物素、钴胺素、对氨基苯甲酸、叶酸、吡哆胺、硫胺素和核黄素。通过添加本发明所述的添加剂,使得改良后的GAM、MRS、PYG、BHI等培养基具有配制简单、营养丰富、促进微生物的生长速率、增加微生物的数量、增强冻存菌株的复活成功率等优点。针对未知样本能富集更多的物种,从而增加了分离的微生物丰度;针对已知样本的微生物可显著提高生长速度。
Description
技术领域
本发明属于微生物培养技术领域,具体涉及一种促进菌株生长的培养基添加剂及含有该添加剂的培养基及其应用。
背景技术
在过去十年里,流行病学研究和多组学研究表明,微生物组成对宿主的健康有着重要的影响。例如发现肠道微生物群影响胃肠道的发育、食物的消化和转化、宿主的免疫反应、宿主的能量平衡,并在炎症性肠病中发挥作用。人类肠道微生物群是一个多样的微生物环境,主要由厌氧细菌组成,每克粪便中含有多达1012个细胞。
目前,肠道微生物筛选培养基中,有研究报道的GAM、MRS、PYG、BHI等培养基效果较好,能够一定程度上培养出一定数量的微生物。有文献报道,GAM培养基可以较多的复活冻存菌株,并能较丰富的培养出一定数量的微生物。用于食品中乳酸菌分离培养的MRS培养基,可以富集较多的乳酸菌。PYG培养基常被作为双歧杆菌的增菌培养基,而BHI培养基被用于培养各种苛养型(难养)致病微生物。尽管这些培养基能够培养出一定数量的菌株,但是仍然存在一定的缺陷。例如GAM培养基虽然相比较于其他培养基组分丰富,且能较多的培养一些活菌,但是仍然缺少许多微生物生长所必须的微量元素。许多菌株在MRS培养基、PYG培养基、BHI培养基上生长较为缓慢等。
发明内容
本发明的目的是解决上述现有技术的不足,提供一种促进菌株生长的培养基添加剂及含有该添加剂的培养基及其应用。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种促进菌株生长的培养基添加剂(简称为m,microelements),包括以下成分:刃天青(resazurin)、生物素(biotin)、钴胺素(cobalamin)、对氨基苯甲酸(p-aminobenzoicacid)、叶酸(folic acid)、吡哆胺(pyridoxamine)、硫胺素(thiamine)和核黄素(riboflavin)。
优选地,所述的培养基添加剂包括以下成分:0.05-0.5mg/L刃天青,0.5-5µg/L生物素,0.5-5μg/L钴胺素,1.5-15µg/L对氨基苯甲酸,2.5-25µg/L叶酸,7.5-75µg/L吡哆胺,25-250µg/L硫胺素,25-250µg/L核黄素。
更进一步地,所述的培养基添加剂包括以下成分:0.1 mg/L刃天青, 1 µg/L生物素,1 µg/L钴胺素,3 µg/L对氨基苯甲酸,5 µg/L叶酸,15 µg/L吡哆胺,50 µg/L硫胺素,50µg/L核黄素。
本发明还保护上述培养基添加剂在促进未知和/或已知微生物生长中的应用。
一种微生物培养基,包括基础培养基和上述的培养基添加剂。
优选地,所述基础培养基为行业内公开的培养基。
进一步地,所述行业内公开的培养基来源于商品化市售或者根据公开配方自行配制,包括固体培养基、液体培养基或半固体培养基。
更进一步地,所述行业内公开的培养基为PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)培养基、LB(溶菌肉汤)培养基、LBS(乳杆菌选择性)培养基、TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)培养基、TSB(胰蛋白胨大豆肉汤)培养基、RCM(强化梭菌)培养基、NB(营养肉汤)培养基、GAM(Glfu厌氧)培养基、MRS(莫匹罗星锂盐改良)培养基、PYG(蛋白胨酵母葡萄糖)培养基、BHI(脑心浸液)培养基中的任一种。
优选地,所述微生物培养基还包括其他有利于微生物生长和/或观察的物质。
本发明还保护上述微生物培养基在促进未知和/或已知微生物生长中的应用。
本发明的有益效果在于:
通过添加本发明所述的添加剂,使得改良后的GAM、MRS、PYG、BHI等培养基具有配制简单、营养丰富、促进微生物的生长速率、增加微生物的数量、增强冻存菌株的复活成功率等优点。针对未知样本能富集更多的物种,从而增加了分离的微生物丰度;针对已知样本的微生物可显著提高生长速度。
附图说明
图1为MRS(a)、GAM(b)、mGAM(c)培养基对35号粪便样本中微生物生长数量的影响;
图2为MRS(a)、GAM(b)、mGAM(c)培养基对37号粪便样本中微生物生长数量的影响;
图3为YCFA(a)、mGAM(b)培养基对37号粪便样本中微生物生长数量的影响;
图4为GAM、mGAM培养基培养长双歧杆菌婴儿亚种的细菌生长趋势图;
图5为GAM、mGAM培养基培养假白链双歧杆菌的细菌生长趋势图;
图6为GAM、mGAM培养基培养中村芽孢杆菌的细菌生长趋势图;
图7为GAM、mGAM培养基培养费格森埃希菌的细菌生长趋势图;
图8为GAM、mGAM培养基培养乳酸片球菌的细菌生长趋势图;
图9为BHI、mBHI培养基培养白假丝酵母的细菌生长趋势图;
图10为BHI、mBHI培养基培养唾液链球菌的细菌生长趋势图;
图11为BHI、mBHI培养基培养鼠李糖乳杆菌的细菌生长趋势图;
图12为BHI、mBHI培养基培养德氏乳杆菌的细菌生长趋势图;
图13为PYG、mPYG培养基培养类肠膜魏斯氏菌的细菌生长趋势图;
图14为PYG、mPYG培养基培养鼠李糖乳杆菌的细菌生长趋势图;
图15为PYG、mPYG培养基培养德氏乳杆菌的细菌生长趋势图。
具体实施方式
为更好理解本发明,下面结合实施例及附图对本发明作进一步描述,以下实施例仅是对本发明进行说明而非对其加以限定。
实施例1:
分别称量0.1 g刃天青、1 mg生物素、1 mg钴胺素、3 mg对氨基苯甲酸、5 mg叶酸、15 mg吡哆胺、50 mg硫胺素、50 mg核黄素,将其充分溶解后混合,定容至1L,再取1mL加入到1L的商品化GAM培养基(索莱宝,LA4450)中,配制成mGAM培养基。
取35号粪便样本,进行梯度稀释后,取10-7的浓度进行涂板,分别涂布于商品化MRS培养基(索莱宝,M8540)、商品化GAM培养基(索莱宝,LA4450)、mGAM培养基中,在37℃厌氧条件下培养 14~16 h,待菌落长出后进行计数,如图1所示。
由图1可看出,生长微生物的数量在三种培养基中培养后菌落数分别为40、108、149,可见添加了本发明添加剂的mGAM培养基效果优于商品化MRS和GAM培养基。
实施例2:
分别称量0.1 g刃天青、1 mg生物素、1 mg钴胺素、3 mg对氨基苯甲酸、5 mg叶酸、15 mg吡哆胺、50 mg硫胺素、50 mg核黄素,将其充分溶解后混合,定容至1L,再取1mL加入到1L的商品化GAM培养基(索莱宝,LA4450)中,配制成mGAM培养基。
取37号粪便样本,进行梯度稀释后,取10-7的浓度进行涂板,分别涂布于商品化MRS培养基(索莱宝,M8540)、商品化GAM培养基(索莱宝,LA4450)、mGAM培养基中,在37℃厌氧条件下培养 14~16 h,待菌落长出后进行计数,如图2所示。
由图2可看出,生长微生物的数量在三种培养基中培养后菌落数分别为37、44、93,可见添加了本发明添加剂的mGAM培养基效果优于商品化MRS和GAM培养基。
实施例3:
分别称量1 g 酪胨,0.25 g酵母提取物,0.4 g NaHCO3,0.1 g半胱氨酸,0.045 gK2HPO4,0.045 g KH2PO4,0.09 g NaCl,0.009 g MgSO47H2O,0.009 g CaCl2,0.1 mg刃天青,1 mg 氯化血红素,1 µg生物素,1 µg钴胺素,3 µg对氨基苯甲酸,5 µg叶酸,15 µg吡哆胺,将其充分溶解后混合,定容至100 mL,高温灭菌后再添加硫胺素和核黄素,使其终浓度均为0.05 µg/mL,配制成YCFA培养基。
分别称量0.1 g刃天青、1 mg生物素、1 mg钴胺素、3 mg对氨基苯甲酸、5 mg叶酸、15 mg吡哆胺、50 mg硫胺素、50 mg核黄素,将其充分溶解后混合,定容至1L,再取1mL加入到1L的商品化GAM培养基(索莱宝,LA4450)中,配制成mGAM培养基。
取37号粪便样本,进行梯度稀释后,取10-7的浓度进行涂板,分别涂布于YCFA培养基、mGAM培养基中,在37℃厌氧条件下培养 14~16 h,待菌落长出后进行计数,如图3所示。
由图3可看出,生长微生物的数量在两种培养基中培养后菌落数分别为0、49,可见添加了本发明添加剂的mGAM培养基效果优于YCFA培养基。
实施例4:
分别称量0.1 g刃天青、1 mg生物素、1 mg钴胺素、3 mg对氨基苯甲酸、5 mg叶酸、15 mg吡哆胺、50 mg硫胺素、50 mg核黄素,将其充分溶解后混合,定容至1L,再取1mL加入到1L的商品化GAM培养基(索莱宝,LA4450)中,配制成mGAM培养基。
取长双歧杆菌婴儿亚种、假白链双歧杆菌、中村芽孢杆菌、费格森埃希菌、乳酸片球菌,分别置于商品化GAM培养基(索莱宝,LA4450)和添加了本发明添加剂的商品化GAM培养基中,定时记录菌液的OD600值,如图4-8所示。
由图4-8可看出,长双歧杆菌婴儿亚种、假白链双歧杆菌、中村芽孢杆菌、费格森埃希菌、乳酸片球菌在添加了本发明添加剂的商品化mGAM培养基中的生长速度均优于商品化GAM培养基。
实施例5:
分别称量0.05 g刃天青、0.5 mg生物素、0.5 mg钴胺素、1.5 mg对氨基苯甲酸、2.5mg叶酸、7.5 mg吡哆胺、25 mg硫胺素、25 mg核黄素,将其充分溶解后混合,定容至1L,再取1mL加入到1L的商品化BHI培养基(索莱宝,LA0360)中,配制成mBHI培养基。
取白假丝酵母、唾液链球菌、鼠李糖乳杆菌、德氏乳杆菌,分别置于商品化BHI培养基(索莱宝,LA0360)和添加了本发明添加剂的mBHI培养基中,定时记录菌液的OD600值,如图9-12所示。
由图9-12可看出,白假丝酵母、唾液链球菌、鼠李糖乳杆菌、德氏乳杆菌在添加了本发明添加剂的商品化mBHI培养基中的生长速度均优于商品化BHI培养基。
实施例6:
分别称量0.5 g刃天青、5 mg生物素、5 mg钴胺素、15 mg对氨基苯甲酸、25 mg叶酸、75 mg吡哆胺、250 mg硫胺素、250 mg核黄素,将其充分溶解后混合,定容至1L,再取1mL加入到1L的商品化PYG培养基(青岛海博,HB0398)中,配制成mPYG培养基。
取类肠膜魏斯氏菌、鼠李糖乳杆菌、德氏乳杆菌,分别置于商品化PYG培养基(青岛海博,HB0398)和添加了本发明添加剂的mPYG培养基中,定时记录菌液的OD600值,如图13-15所示。
由图13-15可看出,类肠膜魏斯氏菌、鼠李糖乳杆菌、德氏乳杆菌在添加了本发明添加剂的mPYG培养基中的生长速度均优于商品化PYG培养基。
以上所述实施方式仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进,均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
Claims (10)
1.一种促进菌株生长的培养基添加剂,其特征在于,包括以下成分:刃天青、生物素、钴胺素、对氨基苯甲酸、叶酸、吡哆胺、硫胺素和核黄素。
2.根据权利要求1所述的培养基添加剂,其特征在于,包括以下成分:0.05-0.5mg/L刃天青,0.5-5µg/L生物素,0.5-5μg/L钴胺素,1.5-15µg/L对氨基苯甲酸,2.5-25µg/L叶酸,7.5-75µg/L吡哆胺,25-250µg/L硫胺素,25-250µg/L核黄素。
3.根据权利要求1所述的培养基添加剂,其特征在于,包括以下成分:0.1 mg/L刃天青,1 µg/L生物素,1 µg/L钴胺素,3 µg/L对氨基苯甲酸,5 µg/L叶酸,15 µg/L吡哆胺,50 µg/L硫胺素,50 µg/L核黄素。
4.权利要求1-3任一项所述的培养基添加剂在促进未知和/或已知微生物生长中的应用。
5.一种微生物培养基,其特征在于:包括基础培养基和权利要求1-3任一项所述的培养基添加剂。
6.根据权利要求5所述的微生物培养基,其特征在于:所述基础培养基为行业内公开的培养基。
7.根据权利要求6所述的微生物培养基,其特征在于:所述行业内公开的培养基来源于商品化市售或者根据公开配方自行配制,包括固体培养基、液体培养基或半固体培养基。
8.根据权利要求6所述的微生物培养基,其特征在于:所述行业内公开的培养基为PDA培养基、LB培养基、LBS培养基、TSA培养基、TSB培养基、RCM培养基、NB培养基、GAM培养基、MRS培养基、PYG培养基、BHI培养基中的任一种。
9.根据权利要求5-8任一项所述的微生物培养基,其特征在于:所述微生物培养基还包括其他有利于微生物生长和/或观察的物质。
10.权利要求5-9任一项所述的微生物培养基在促进未知和/或已知微生物生长中的应用。
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