CN115219486A - 一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒及其非疾病诊断检测方法 - Google Patents

Abstract

本申请涉及生物因子活性检测的技术领域，具体公开了一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒及其非疾病诊断检测方法。检测试剂盒包括样本稀释液，发色底物液和活化因子混合液；所述活化因子混合液包括以下组分：活化因子X 5‑10 nkat/mL，右旋糖苷硫酸酯50‑200μg/mL，活化因子用防腐剂0.06‑0.1wt%，缓冲试剂1.8‑2.4wt%；使用方法包括以下步骤：将样本稀释液和待检测样本混合，再加入发色底物液后在35‑37℃培育；随后加入活化因子混合液后混匀，检测发色底物的信号强度即可。该检测试剂盒具有检测准确且抗干扰能力强的优点。

Description

一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒及其非疾病诊 断检测方法

技术领域

本申请涉及生物因子活性检测的技术领域，更具体地说，它涉及一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒及其非疾病诊断检测方法。

背景技术

肝素首先从肝脏发现而得名，随后发现：在多种动物的脏器和组织中均广泛含有肝素。目前，常用的肝素是从牛肺或猪小肠粘膜处提取得到的。肝素的生理作用包括抗凝血和降低血脂等。无论在体内还是体外，肝素作为一种抗凝血药物，均具有很强的抗凝作用，因此在临床上被广泛地应用为抗凝剂。

肝素本身虽无抗凝作用，但它与血浆中AT III有强大的亲和性，二者接触后能够很快形成肝素-AT III(1:1复合物)，这种结合使得AT III发生明显的构型变化，并暴露出其中心肽段(reactivecenterloop，RCL)，从而极大程度地提高AT III结合Xa和IIa的能力，结合肝素后的AT III的活力能提高大约1000倍，从而产生凝血作用。

发色底物法测定肝素活性的原理是：基于AT III和肝素所形成的肝素-AT III复合物中和Xa因子的能力来测定肝素活性。血浆中AT III和血浆中的肝素能够形成肝素-ATIII复合物；在检测时，先在血浆中加入发色底物，然后加入过量的Xa因子，当Xa因子加入到血浆-发色底物混合液中时有两个反应同时发生，分别是：发色底物在Xa因子的作用下水解释放对硝基苯胺(即pNA)，而肝素-AT III复合物又对Xa因子的活性有抑制作用，当二者竞争反应达到平衡后，pNA的量和反应体系中肝素浓度呈反比。

其中，抗Xa活性监测的临床意义在于：便于药物剂量调整，使患者更快地进入治疗范围，更准确的实现抗凝治疗目标；防止用药不足，降低静脉血栓的发生概率；防止用药过量，降低出血风险；围手术期准备，降低围手术期出血及血栓并发症；理论上，肝素每次给药都应该监测效能至达到治疗剂量。其他抗Xa药物，在特殊人群中威胁生命的情况下，也需要监测。

由于目前能够实现肝素和低分子肝素抗Xa活性检测的产品中，多数为国外的试剂盒产品，其试剂盒内含有的具体试剂是未知的，因此该项目的检测更多的是依靠进口产品。此外，目前相关检测试剂盒在使用时，检测样本往往是血浆样本，血浆样本中含有血红蛋白、胆红素和乳糜等，这些物质均会对检测结果带来干扰；当血浆样本中肝素或者低分子量肝素的含量过低时，其干扰效果更加明显，从而使得该类检测产品的检测准确度受到影响。因此，提供一种抗干扰能力高、检测结果准确的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒是十分必要的。

发明内容

为了提高相关检测试剂盒的抗干扰能力和检测准确度，本申请提供一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒及其非疾病诊断检测方法。

第一方面，本申请提供一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒，采用如下的技术方案：

一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒，包括样本稀释液，发色底物液和活化因子混合液；所述活化因子混合液包括以下组分：活化因子X 5-10nkat/mL，右旋糖苷硫酸酯 50-200μg/mL，活化因子用防腐剂0.06-0.1wt％，缓冲试剂1.8-2.4wt％。

通过采用上述技术方案，本申请通过设计合理的活化因子混合液，尤其是其中的右旋糖酐硫酸酯(右旋糖酐硫酸酯即DS)的添加可以减少血小板因子4(即PF4)等肝素拮抗剂对检测结果的影响(PF4可抑制肝素活性)，从而实现提高检测准确度的效果。而采用上述组分的活化因子混合液，并结合发色底物液和样本稀释液的相互配合作用，使得最终制备得到的检测试剂盒，其具有优异的检测准确度以及抗干扰能力。具体为：该试剂盒在使用后，针对肝素和低分子量肝素检测时，其在0～2IU/mL线性范围内的相关性较好；重复性优异：水平1CV不大于10％，水平2CV不大于8％；准确度较高且抗胆红素F、抗血红蛋白、抗胆红素C以及抗乳糜效果较佳：抗胆红素F<26.9mg/dL，抗血红蛋白<407.2mg/dL，抗胆红素C<20.9mg/dL，抗乳糜<4592FTU。

可选的，所述活化因子用防腐剂选自Proclin 300、苯甲酸钠、山梨酸钾和叠氮化钠中的至少一种。

可选的，以所述发色底物液的重量为基准，所述发色底物液包括以下组分：发色底物0.7-1.2mg/mL，发色底物用防腐剂0.06-0.1wt％。

可选的，所述发色底物用防腐剂选自Proclin 300、苯甲酸钠、山梨酸钾和叠氮化钠中的至少一种。

可选的，所述发色底物液中含有的发色底物为Suc-Ile-Glu(γ-Pip)-Gly-Arg-pNA。

通过采用上述技术方案，相对于其他的发色底物，例如发色底物S-5288、S-2765、PA2705或CBS 02.44，本申请选用的发色底物Suc-Ile-Glu(γ-Pip)-Gly-Arg-pNA(即S-2732) 和本申请的其他试剂的反应速率较慢。肝素含量不同，反应速率不同，在检测时肝素浓度能够和OD/min具有良好的线性关系，从而能够实现本申请的检测目的。但是上述列举的其他发色底物，添加后其反应速率较快，检测时肝素浓度和OD/min在较大的肝素浓度范围内难以具有良好的线性关系，因此难以实现准确检测，其检测灵敏度较低。

可选的，以所述活化因子混合液的重量为基准，所述缓冲试剂包括：三羟甲基氨基甲烷0.512-0.703wt％，乙二胺四醋酸二钠0.22-0.32wt％，氯化钠0.996-1.216wt％，聚乙二醇 0.08-0.12wt％。

可选的，以所述活化因子混合液的重量为基准，所述活化因子混合液还包括蛋白保护剂18-25wt％。

通过采用上述技术方案，蛋白保护剂的选择，进一步保护活化因子X，使得该蛋白稳定性提高，保证本申请的检测试剂盒在规定效期内稳定，进而保证测试准确度。

可选的，以所述活化因子混合液的重量为基准，所述蛋白保护剂包括：牛血清白蛋白0.8-1.2wt％，甘油18-23wt％。

通过采用上述技术方案，和其他蛋白保护剂相比，其他蛋白保护剂例如可以是单独的PEG6000、或单独的甘露醇、或单独的蔗糖、或单独的DMSO或单独的甘油等，本申请以牛血清蛋白和甘油作为一种复合蛋白保护剂，具有更加长久有效保护活化因子X的效果，从而有效缓解因活化因子X的活性丧失导致的检测结果差的问题。

可选的，所述活化因子混合液采用包括以下步骤的方法制得：将右旋糖苷硫酸酯、活化因子用防腐剂和缓冲试剂加入水中，得到初始混合液，使得所述初始混合液的pH为8.3-8.5；加入活化因子X于所述初始混合液中，混匀后得到所述活化因子混合液。

可选的，所述聚乙二醇选自聚乙二醇6000、聚乙二醇4000和聚乙二醇8000中的至少一种。

可选的，所述聚乙二醇为聚乙二醇6000。

可选的，所述活化因子X来源于牛、猪或人。

可选的，所述活化因子X来源于牛。

第二方面，本申请提供一种上述试剂盒的非疾病诊断检测方法，采用如下的技术方案：

上述试剂盒的非疾病诊断检测方法，包括以下步骤：

将样本稀释液和待检测样本混合，再加入发色底物液后在35-37℃培育；随后加入活化因子混合液后混匀，检测发色底物的信号强度即可。

通过采用上述技术方案，本申请选择的使用方法中需要注意的是：在将样本稀释液和待检测样本混合后，要先加入发色底物孵育一定时间，再加入活化因子混合液；而并非是要先加活化因子混合液孵育一定时间，再加入发色底物。后者对孵育时间要求较高，需要严格把控孵育时间，而临床一般为多项目同时测试，易发生孵育超时，从而引起测试结果偏差。本申请的技术方案主要考虑的是发色底物和活化因子X的添加顺序，孵育时间延长对结果无明显影响；采用本申请的技术方案能够进一步提高检测结果的准确度。

可选的，加入发色底物液后的培育时间为30-240s。

综上所述，本申请具有以下有益效果：

1、本申请通过设计合理的活化因子混合液，尤其是其中添加的右旋糖酐硫酸酯，并结合特定的发色底物以及试剂添加顺序，从而实现提高检测准确度、提高检测试剂抗干扰能力的效果。

2、本申请中选用特殊的蛋白保护剂：牛血清白蛋白0.8-1.2wt％，甘油18-23wt％，以进一步提高对活化因子X的保护效果，以提高检测准确度。

附图说明

图1是本申请肝素和低分子肝素的标准曲线；其中，图1(A)是肝素的标准曲线，图1(B)是低分子肝素的标准曲线。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。

实施例

本申请的活化因子X，也称为Xa因子或FXa；本申请的检测试剂盒的检测原理：抗Xa活性的检测试剂盒是采用发色底物法进行检测的，其原理是基于AT III和肝素所形成的复合物中和活化的Xa因子的能力来测定肝素活性。血浆的AT III和肝素形成复合物(肝素-ATIII复合物)，先向血浆中加入发色底物，然后加入过量的Xa因子，当Xa因子加入到血浆-底物混合液中时有两个反应同时发生，一是底物在Xa作用下水解释放对硝基苯胺 (pNA)，二是肝素-AT III复合物对Xa因子的抑制，当竞争反应达到平衡后，pNA的量和反应体系中肝素浓度呈反比，从而通过建立标准曲线计算得到肝素或低分子肝素的含量。

实施例1

一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒，该试剂盒内含有样本稀释液，发色底物液和活化因子混合液。

其中，样本稀释液中含有的组分为：氯化钠和防腐剂；样本稀释液的制备方法为：取氯化钠溶于纯化水中，再加防腐剂，使得样本稀释液中，氯化钠的质量分数为0.9％，防腐剂的质量分数为0.08％。

发色底物液中含有的组分为：发色底物和防腐剂；发色底物液的制备方法为：将发色底物S-2732粉末(即Suc-Ile-Glu(γ-Pip)-Gly-Arg-pNA HCl)用纯化水溶解，再配制成终浓度0.85mg/mL的发色底物初始液，再加防腐剂0.08wt％(即发色底物液中防腐剂的质量分数为0.08％)。

活化因子混合液的制备方法为：取三羟甲基氨基甲烷(Tris)0.606wt％、乙二胺四醋酸二钠(EDTA)0.28wt％、氯化钠1.023wt％、PEG6000 0.1wt％、牛血清白蛋白1wt％、甘油20wt％、右旋糖苷硫酸酯100μg/mL、防腐剂0.08wt％溶于纯化水中，磁力搅拌混匀，得到初始混合液；随后再加入盐酸调pH至8.40，再加入FXa 7.5nkat/mL，即制备得到活化因子混合液。

上述肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的非疾病诊断检测方法，包括以下步骤：

将样本稀释液40μL和待检测样本10μL混合，这里的待检测样本为血浆样本；再加入发色底物液100μL后在37℃培育60s，清洗样本针一次；随后加入活化因子混合液100μL后混匀，检测发色底物的信号强度即可，检测时间30-60s。

一、检测试剂盒使用时标准曲线的制定方法

该方法包括以下步骤：

1、肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的制备方法：肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒包括样本稀释液，发色底物液和活化因子混合液。

样本稀释液的具体制备方法为：取氯化钠溶于纯化水中，使得氯化钠的含量为0.9wt％，再加防腐剂0.08wt％。

发色底物液中的发色底物为S-2732，其具体制备方法：将发色底物S-2732粉末用纯化水溶解，再配制成发色底物S-2732的终浓度为0.85mg/mL、防腐剂含量为0.08wt％的发色底物液。

活化因子混合液中的活化因子为活化因子X(即FXa)，其具体制备方法：取三羟甲基氨基甲烷(Tris)0.606wt％、乙二胺四醋酸二钠(EDTA)0.28wt％、氯化钠1.023wt％、PEG6000 0.1wt％、牛血清白蛋白1wt％、右旋糖苷硫酸酯100μg/mL、防腐剂0.08wt％、甘油20wt％溶于纯化水中，磁力搅拌混匀，再加入盐酸调pH至8.40，再加入FXa 7.5nkat/mL。

2、肝素或低分子肝素标准品的具体制备方法：

肝素标准品冻干：向血浆样本中加入0.05wt％苯甲酸钠、1.5wt％蔗糖，再分别加入不同浓度的肝素国际标准品(07/328)，使得肝素国际标准品的理论终浓度分别为0IU/mL、1IU/mL 和2IU/mL，混匀后以1.1mL/瓶分装冻干。

低分子肝素标准品冻干：向血浆样本中加入0.05wt％苯甲酸钠、1.5wt％蔗糖，再分别加入不同浓度的低分子肝素国际标准品(11/176)，使得低分子肝素理论终浓度分别为0 IU/mL、1IU/mL和2IU/mL，混匀后以1.1mL/瓶分装冻干。

标准品复溶：以1mL/瓶的肝素标准品或1mL/瓶的低分子肝素标准品精确加入纯化水复溶，轻轻混匀，放置10min平衡至室温后备用。

3、试验仪器：SF-8200全自动凝血测试仪。

4、抗Xa活性检测标准曲线的制定：

具体步骤如下：

将肝素标准品0IU/mL、1IU/mL和2IU/mL用本申请的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒进行定标，首先取样本稀释液40μL，再取血浆样本10μL一起加入测试杯中，然后加入发色底物液100μL混匀，在37℃孵育60s；随后清洗样本针后，再加入活化因子混合液100μL，随后于405nm处测定吸光度，测试时间30～60s。

将低分子肝素标准品0IU/mL、1IU/mL和2IU/mL用本申请的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒进行定标，首先取样本稀释液40μL，再取血浆样本10μL一起加入测试杯中，然后加入发色底物液100μL混匀，在37℃孵育60s；随后清洗样本针后，再加入活化因子混合液100μL，随后于405nm处测定吸光度，测试时间30～60s。

根据肝素浓度和所对应测试OD，以OD/min对数值为横坐标，肝素含量为纵坐标，制作标准曲线。低分子肝素标准曲线的制定同理。见图1，肝素标准曲线公式为：y＝-0.3541x-0.589，R²＝1.0，低分子肝素标准曲线公式为：y＝-7.291x-1.233，R²＝1.0。

5、样本测试：按表1步骤进行自动分析测试，并换算得到肝素或低分子肝素含量。

表1反应体系

二、本申请试剂盒的组分确定

(1)、发色底物液中发色底物的确定

在开发本试剂盒时共选取测试了五种不同的发色底物，各发色底物的信息见表2，四种底物纯度均为≥95％，其中S-2732的Km(Michaelis constant，米氏常数)最大，表明其与底物之间亲和力最小。

为了确定最适发色底物，最适反应体系，将五种发色底物分别在SF-8200全自动凝血仪上进行测试，选用相同活化因子Xa，4种不同反应体系，测定结果见表3。

表2发色底物信息汇总表

表3测试结果汇总

注：

反应体系1：孵育时间60s，加样顺序：先加活化因子X，再加发色底物；

反应体系2：孵育时间240s，加样顺序：先加活化因子X，再加发色底物；

反应体系3：孵育时间60s，加样顺序：先加发色底物，再加活化因子X；

反应体系4：孵育时间240s，加样顺序：先加发色底物，再加活化因子X。

对于反应体系的选择：其中，反应体系1和反应体系2采用先加活化因子X，再加发色底物的加样顺序，其孵育时间分别为60s和240s；结果显示随着孵育时间延长，测定OD/min明显降低，且不同时间的检测结果有显著性差异。该加样顺序对孵育时间要求较高，需要严格把控孵育时间，而临床检测时一般为多项目同时测试，因此容易发生孵育超时的情况，从而引起测试结果有偏差，检测结果不准确。反应体系3和反应体系4采用先加发色底物，再加活化因子X的加样顺序，孵育时间分别为60s和240s，结果显示孵育时间对结果无明显影响，因此本申请的试剂盒选用的是反应体系3。

发色底物的选择：反应体系3结果显示，0IU/mL时，各发色底物与活化因子X均有反应，其中发色底物S-2732的反应速率较慢，且当肝素含量不同时反应速率不同；其余发色底物反应速率过快，从而使得试剂盒和检测方法的灵敏度降低，因此这类发色底物不适用于先加发色底物后加活化因子X的加样顺序，即试剂与方法适配度较低；因此本申请试剂盒选用的是发色底物S-2732。

(2)、用于活化因子X的蛋白保护剂的确定

通过添加不同蛋白保护剂以增强FXa的稳定性，表4的结果显示：单独以1.5wt％PEG6000、 2g/L甘露醇、2g/L蔗糖、1.5wt％DMSO或1.5wt％甘油等作为蛋白保护剂时，其对FXa无明显保护作用，所测肝素浓度随着时间逐渐升高，绝对偏差及相对偏差均不符合要求。而以 1wt％BSA、20wt％甘油和1wt％BSA+20wt％甘油作为复合蛋白保护剂时，均对FXa具有明显保护作用，其中1wt％BSA+20wt％甘油更优，所测肝素浓度0IU/mL时的绝对偏差不超过±0.1，(0，2]的相对偏差不超过±15％，符合要求。因此本试剂采用1wt％BSA+20wt％甘油作为FXa保护剂。

表4不同肝素浓度下不同蛋白保护剂对活化因子X的保护效果

要求：0IU/mL绝对偏差不超过±0.1，(0，2]相对偏差不超过±15％；表中的绝对偏差是在对应肝素浓度下的绝对偏差的相对偏差。

(3)、右旋糖苷硫酸酯的确定

血小板因子4(PF4)易结合并中和肝素，并与肝素结合形成PF4/肝素结合蛋白，因PF4妨碍肝素和AT复合物的形成，进而影响准确度，而右旋糖酐硫酸酯(DS)的添加可以减少PF4等肝素拮抗剂的影响，提高准确度。本申请在0-200μg/mL范围内分别设置不同的DS 浓度，结果显示DS浓度0.01μg/mL和1μg/mL与未添加DS时所测肝素浓度0IU/mL绝对偏差小于0.05，(0，2]相对偏差小于15％；其因为DS添加量不足，无法减少血小板因子4 (PF4)等肝素拮抗剂的影响，因此该浓度不可用。而100μg/mL和200μg/mL与未添加 DS所测肝素浓度0IU/mL绝对偏差不小于0.05，(0，2]相对偏差大于15％，其DS可发挥减少血小板因子4(PF4)等肝素拮抗剂影响的作用，且100μg/mL与200μg/mL结果差异较小，因此本申请中DS添加量采用100μg/mL。

表5不同DS浓度的添加情况

要求：0IU/mL绝对偏差不小于0.05，(0，2]相对偏差大于15％。

三、本申请试剂盒的分析性能评估

(1)、线性范围

用正常的血浆将接近测试区间上限的高浓度样本(即2IU/mL的浓度)分别按4/5、2/5、1/5、 1/10、0的比例稀释为6个浓度，每个稀释浓度测试3次，分别求出测定结果的均值。以稀释浓度为自变量，以测定结果均值为因变量求出线性回归方程，计算线性回归的相关系数：最终计算得到肝素r＝0.9993，低分子肝素r＝0.9987，具体结果见表6。该结果表明本申请提供的试剂盒在0～2IU/mL线性范围内相关性较好。

表6肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒线性范围

(2)空白限

用试剂测试样本稀释液，按实施例1，重复测试20次，计算20次测试结果的平均值(x) 和标准差(SD)，以x+2SD计算空白限，结果见表7，x+2SD＝-0.03，小于0.01。

表7肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒空白限

(3)重复性

在重复性条件下，取一瓶试剂，按实施例，用质控品水平1和水平2分别重复测试10次，并计算不同水平质控品测量值的平均值(x)，标准差(SD)和变异系数(CV)。结果见表8，结果显示，本申请提供的试剂盒重复性较好，水平1CV不大于10％，水平2CV不大于8％。

表8肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒重复性

(4)准确度

按实施例的方法用稀释到一定浓度的肝素/低分子肝素国际标准品对试剂进行测试，重复检测3次，计算相对偏差。如果3次结果相对偏差不超过±15％，即判为合格。结果见表9，结果显示，本申请试剂盒的重复性较好，对肝素/低分子肝素国际标准品(1IU/mL)进行3 次重复测试，CV均不超过±15％。

表9肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒准确度

(5)抗干扰能力

将胆红素F、血红蛋白、胆红素C、乳糜分别配制不同浓度比例干扰物样本(肝素0、1IU/mL)，按实施例的方法用试剂测试干扰物样本。结果见表10；结果显示，本申请试剂盒特异性良好，抗胆红素F<26.9mg/dL，抗血红蛋白<407.2mg/dL，抗胆红素C<20.9mg/dL，抗乳糜<4592FTU。

表10肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒抗干扰物测试

三、本申请试剂盒的与已有试剂盒产品的性能比较

本申请通过对比不同厂家的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的性能，并将采用各厂家的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒进行样本制备后在SF-8200自动凝血仪进行测试，不同厂家的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的反应体系见表11；不同厂家的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的比较结果见表12。

不同厂家肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的反应体系如下。

表11不同厂家的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的反应体系

试剂	自研试剂	B公司	C公司	D公司
					样本(μL)	10	25	10	25
样本稀释液(μL)	40	75	/	75
					发色底物液(μL)	100	100	100	100(FXa)
孵育时间(s)	60	240	180	240
					活化因子混合液	100	100	75	100(底
测试时间(s)	30～60	30～60	20～80	30～60
					总体积(μL)	250	300	185	300

注：A、B、C试剂均采用先加底物再加FXa的加样顺序，而D试剂采用先加FXa再加底物的加样顺序。

不同厂家的肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒的对比如下。

表12不同试剂盒对比

从表8的数据结果中看出，采用本申请试剂盒进行肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测时，其检测对肝素和低分子肝素检查的线性范围均较大(0-2.0IU/mL)，且本申请试剂盒表现出优异的抗血红蛋白、胆红素F、胆红素C和乳糜干扰的能力，对血红蛋白的抗干扰浓度最高为407.2mg/dL。

本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种肝素和低分子肝素抗Xa活性的检测试剂盒，其特征在于，包括样本稀释液，发色底物液和活化因子混合液；所述活化因子混合液包括以下组分：活化因子X 5-10 nkat/mL，右旋糖苷硫酸酯50-200μg/mL，活化因子用防腐剂0.06-0.1wt%，缓冲试剂1.8-2.4wt%。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，以所述发色底物液的重量为基准，所述发色底物液包括以下组分：发色底物0.7-1.2 mg/mL，发色底物用防腐剂0.06-0.1wt%。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述发色底物液中含有的发色底物为Suc-Ile-Glu(γ-Pip)-Gly-Arg-pNA。

4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，以所述活化因子混合液的重量为基准，所述缓冲试剂包括：三羟甲基氨基甲烷0.512-0.703wt%，乙二胺四醋酸二钠0.22-0.32wt%，氯化钠0.996-1.216wt%，聚乙二醇0.08-0.12wt%。

5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，以所述活化因子混合液的重量为基准，所述活化因子混合液还包括蛋白保护剂18-25wt%。

6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，以所述活化因子混合液的重量为基准，所述蛋白保护剂包括：牛血清白蛋白0.8-1.2wt%，甘油18-23wt%。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的检测试剂盒，其特征在于，所述活化因子混合液采用包括以下步骤的方法制得：将右旋糖苷硫酸酯、活化因子用防腐剂和缓冲试剂加入水中，得到初始混合液，使得所述初始混合液的pH为8.3-8.5；加入活化因子X于所述初始混合液中，混匀后得到所述活化因子混合液。

8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚乙二醇选自聚乙二醇6000、聚乙二醇4000和聚乙二醇8000中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述活化因子X来源于牛、猪或人。

10.权利要求1-9任意一项所述检测试剂盒的非疾病诊断检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

将样本稀释液和待检测样本混合，再加入发色底物液后在35-37℃培育；随后加入活化因子混合液后混匀，检测发色底物的信号强度即可。

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