CN115192732A - 一种dna毒性二聚体化合物及其偶联物 - Google Patents

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Abstract

一种DNA毒性二聚体化合物及其偶联物或其药学上可接受的盐，包括其制备方法和在预防或治疗癌症中的作用。所述偶联物能够特异性地结合肿瘤细胞中高表达的受体。具有良好的水溶性，稳定性及均一性，可用于预防或***等疾病。

Description

一种DNA毒性二聚体化合物及其偶联物
发明领域
本发明涉及新型细胞毒性化合物和包含这些细胞毒性化合物和细胞结合剂的药物。更具体地说，本发明涉及新型苯并二氮杂卓二聚体化合物、其衍生物、其中间体其药学上可接受的盐及其偶联物，它们可用作药物，尤其是用作抗肿瘤药物。
发明背景
配体-药物偶联物(ADC)作为新型的靶向药物，一般由三部分组成：抗体或抗体类配体，小分子药物以及将配体和药物偶联起来的连接子。抗体药物偶联物利用抗体对抗原的特异性识别，将药物分子运输至靶细胞附近并有效释放药物分子，达到治疗目的。2011年8月，美国食品药品监督管理局(FDA)批准西雅图基因公司研制的用于治疗霍奇金淋巴瘤以及复发性变性大细胞淋巴瘤(ALCL)的ADC新药AdecteisTM上市，临床应用已经证明了此类药物的安全性和有效性。随着ADC药物的发展，需要更加有效、更新作用机制的小分子药物。
苯并二氮杂卓类衍生物，具有识别并结合特定DNA序列的能力，是一种高度有效的链间交联剂，能与DNA小沟中的鸟嘌呤反应，形成DNA加合物，干扰DNA的加工，因此将它们作为抗肿瘤药物使用。(Rahman et al.(2009)Jour.Amer.Chem.Soc.131(38):13756-13766；Thurston et al.(1994)Chem.Rev.,94:433-465；Bose et al.(1992)J.Am.Chem.Soc.114:4939-4941；Gregson et al.(2004)Jour.Med.Chem.47(5):1161-1174)。
1-(氯甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚(CBI)类的DNA小沟烷化剂是有力的细胞毒素(Atwell et al.(1999)J.Med.Chem.,42:3400)，而且已经作为效应器单元用于为癌症疗法设计的多类前体药物。已经通过烷基链将CBI和苯并二氮杂卓类衍生物连接到一起(CN105636612 A)。
咪唑并[1,2-a]吡啶类衍生物是一种强有力的DNA粘合单元，已经用于抗肿瘤抗生素倍癌霉素(duocarmycins)衍生物的合成，并表现出非常有效的细胞毒性(RonaldC.Elgersma et al.(2015)Mol.Pharmaceutics.12:1813-1835)。
现有技术公开的苯并二氮杂卓类衍生物毒性极大，在极低剂量时是有毒的，因此，改进的较低毒性且仍有治疗活性的，高治疗窗的苯并二氮杂卓类衍生物显得非常必要。
发明内容
本发明旨在提供一种具有良好治疗窗的细胞毒性的苯并二氮杂卓二聚体衍生物及其抗体偶联物。全新设计的细胞毒性的苯并二氮杂卓二聚体衍生物的偶联物中小分子药物具有氯甲基(CBI)和亚胺(PBD)两个官能团。氯甲基是一个前体药物结构，进入体内可形成三元环结构，进一步可以发生DNA烷基化。这两个官能团的存在可增强DNA的交联。发明人意外发现，此类苯并二氮杂卓类ADC药物，具有良好的安全性和高效的抗肿瘤活性。
本发明公开了一种如式I所示的配体-药物偶联物，或其药学上可接受的盐、氘代物及溶剂化物：
Ab-L-D
(I)
其中：
Ab为配体单元，选自抗体、抗体片段、靶向蛋白或Fc-融合蛋白；
L为D与Ab的连接单元；
D为药物单元，选自以下结构：
Figure BDA0003564748370000021
其中：
波浪线表示药物与L连接的位点，且只存在三个位点中的一个位点与L相连；
R1为H、氘、OH或由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
在N和C之间的双线
Figure BDA0003564748370000031
表示单键或双键，条件是当其为双键时，N处不与L相连且R1是H；当其为单键时，N处与L相连，R1选自OH或由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
R2为H或烷基取代基；
T选自于C2-C12烃基、Z、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烯基)-Z-(C1-C6亚烯基)或(C1-C6亚炔基)-Z-(C1-C6亚炔基)；
其中：
Z独立选自O、S、NR4、芳基或杂芳基；其中R4选自于H、P(O)3H2或C(O)NR5R6；其中R5和R6选自H、C1-C6烷基、一个或多个F取代的C1-C6烷基，或者R5和R6形成五元或六元杂环基基团；
亚烷基，亚烯基，芳基和杂芳基是独立且任选用F、OH、O(C1-C6烷基)、NH2、NHCH3、N(CH3)2或C1-C6烷基取代的，其中烷基任选是用一个或多个F取代的；
Y选自于一个或多个H或C1-C4的烷基；
X独立选自于-O-、-N-、-S-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-等；
其中：
R7、R8分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、氘代烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；或者，R7、R8及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；
R9、R10相同或者不同，且分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基、羟基、氨基、氰基、硝基、羟烷基、环烷基或杂环基；或者，R9、R10及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；
m选自0-4的整数；
X1选自于卤素或OSO2R11，其中R11可独立的选自于H、C1-C4的烃基、苯基或者取代苯基。
作为优选方式，Ab为抗体，可通过其杂原子与连接单元形成连接键，所述抗体选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体、抗体片段、双特异性抗体或多特异性抗体。
进一步优选，抗体或其抗原结合片段，非限制性地选自：抗EGFR VIII抗体、抗DLL-3抗体、抗PSMA抗体、抗CD70抗体、抗MUC16抗体、抗ENPP3抗体、抗TDGF1抗体、抗ETBR抗体、抗MSLN抗体、抗TIM-1抗体、抗LRRC15抗体、抗LIV-1抗体、抗CanAg/AFP抗体、抗cladin 18.2抗体、抗Mesothelin抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗c-MET抗体、抗SLITRK6抗体、抗KIT/CD117抗体、抗STEAP1抗体、抗SLAMF7/CS1抗体、抗NaPi2B/SLC34A2抗体、抗GPNMB抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗MUC1/CD227抗体、抗AXL抗体、抗CD166抗体、抗B7-H3(CD276)抗体、抗PTK7/CCK4抗体、抗PRLR抗体、抗EFNA4抗体、抗5T4抗体、抗NOTCH3抗体、抗Nectin4抗体、抗TROP-2抗体、抗CD142抗体、抗CA6抗体、抗GPR20抗体、抗CD174抗体、抗CD71抗体、抗EphA2抗体、抗LYPD3抗体、抗FGFR2抗体、抗FGFR3抗体、抗FRα抗体、抗CEACAMs抗体、抗GCC抗体、抗Integrin Av抗体、抗CAIX抗体、抗P-cadherin抗体、抗GD3抗体、抗Cadherin 6抗体、抗LAMP1抗体、抗FLT3抗体、抗BCMA抗体、抗CD79b抗体、抗CD19抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD74抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD37抗体、抗CD47抗体、抗CD138抗体、抗CD352抗体、抗CD25抗体或抗CD123抗体。
一种DNA毒性二聚体化合物及其偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物及溶剂化物，作为优选：L为可裂解型或不可裂解型。
一种DNA毒性二聚体化合物及其偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物及溶剂化物，所述药学上可接受的盐包括与结构式中酸性官能团形成的钠盐、钾盐、钙盐或镁盐；或与结构中碱性官能团形成的醋酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、硝酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乳酸盐、油酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
一种DNA毒性二聚体化合物及其偶联物或其药学上可接受的盐，其制备用于治疗或预防肿瘤药物的用途。
作为优选，肿瘤为乳腺癌、卵巢癌、***、子宫癌、***癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、多形性胶质细胞瘤、肉瘤、淋巴瘤和白血病等实体瘤或血液瘤。
本发明还公开了与Ab连接的通式为II或III的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
Figure BDA0003564748370000051
其中：
R1为H、OH或由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
在N和C之间的双线
Figure BDA0003564748370000052
表示单键或双键，条件是当其为双键时，R12不存在且R1是H；当其为单键时，R12为-C(O)O-L3，其中L3为连接单元；R1选自OH、由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
R2为H或烷基取代基；
T选自于C2-C12烃基、Z、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烯基)-Z-(C1-C6亚烯基)或(C1-C6亚炔基)-Z-(C1-C6亚炔基)；
其中：
Z独立选自O，S，NR4，芳基和杂芳基；其中R4选自于H，P(O)3H2，C(O)NR5R6，其中R5和R6选自H，C1-C6烷基，一个或多个F取代的C1-C6烷基，或者R5和R6形成五元或六元杂环基基团；
亚烷基，亚烯基，芳基和杂芳基是独立且任选用F，OH，O(C1-C6烷基)，NH2，NHCH3，N(CH3)2和C1-C6烷基取代的，其中烷基任选是用一个或多个F取代的；
Y选自于一个或多个H或C1-C4的烷基；
X独立选自于-O-、-N-、-S-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-；
其中：
R7、R8分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、氘代烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；或者，R7、R8及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；
R9、R10相同或者不同，且分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基、羟基、氨基、氰基、硝基、羟烷基、环烷基或杂环基；或者，R9、R10及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；
m选自0-4的整数；
X1选自于卤素或OSO2R11，其中R11可独立的选自于H，C1-C4的烃基，苯基或者取代苯基；
L1，L2为连接单元或取代基。
作为优选方式，T选自C2-C12的亚烷基。
进一步优选，T为
Figure BDA0003564748370000061
作为优选方式，X为-O-、-N-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-。
作为优选方式，L3为：
Figure BDA0003564748370000071
其中：波浪线处与-C(O)O-相连；L4为连接单元，与配体单元相连。
作为优选方式，L4非限制性地选自：
Figure BDA0003564748370000072
其中：波浪线处，左侧(碳端)与配体单元相连，右侧(氮端或酯羰基端)与X2相连。
作为优选方式，Q为：
Figure BDA0003564748370000073
其中Qx为氨基酸残基或由氨基酸构成的肽残基。
作为优选方式，X2为：
Figure BDA0003564748370000074
其中a选自0-5的整数，b选自0-16的整数，c选自0-1的整数，d选自0-5的整数。
进一步优选，L3非限制性地选自：
Figure BDA0003564748370000075
其中：波浪线处，左侧(丁二酰亚胺端)与配体单元相连，右侧与-C(O)O-相连。
作为优选方式，通式为II或III的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，L1和L2分别独立选自：
结构A：氢原子，C(O)NR′R″，其中R′和R″选自H、C1-C6烷基一个或多个F取代的C1-C6烷基，或者R′和R″形成五元或六元杂环基基团；
结构B：L4-L5-，L4-L6-或L4-L7-L8-L9-，其中L4、L5、L6、L7、L8和L9均为连接单元，L4与配体单元连接，L5、L6、L9与X相连。
进一步优选，
当N和C之间为单键即R12存在时，L1、L2分别独立选自于结构A；
当N和C之间为双键即R12不存在时，L1为结构A或B，则L2为结构B或A。
进一步优选，L5为-((CH2)sO)r(CH2)sX3L10-或-((CH2)sO)r(CH2)sX4L10-；
L6为-((CH2)sO)r(CH2)s-；
L10为-(CH2)s-或-((CH2)sNHC(＝O)X5X6C(＝O)(CH2)s-；
其中：
X3非限制性地选自：
Figure BDA0003564748370000081
其中R13独立选自氢原子、C1-C6烃基、卤素原子或羟基；
X4非限制性地选自：
Figure BDA0003564748370000082
其中R13独立选自氢原子，C1-C6烃基、卤素原子或羟基；
X5非限制性地选自：
Figure BDA0003564748370000091
X6选自由氨基酸组成的肽残基，非限制性地选自:
Figure BDA0003564748370000092
s选自1-10的整数，r选自1-14的整数。
进一步优选，L7为-NC(R14R15)C(O)、-NR16(CH2)oC(O)-、-NR16(CH2CH2O)oCH2C(O)-、-S(CH2)pC(O)-或者化学键，其中o选自0-20的整数；p选自0-20的整数；R14与R15相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、烷基、取代烷基、氘代烷基、杂烷基、羧基、氨基、取代氨基；R16选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、芳基、取代芳基或杂芳；
L8选自由氨基酸构成的肽残基，优选由一个、两个或者多个选自苯丙氨酸(F)、甘氨酸(G)、缬氨酸(V)、赖氨酸(K)、瓜氨酸、丝氨酸(S)、谷氨酸(E)或者天冬氨酸(D)中的氨基酸形成的肽残基；
L9为-NR17(CR18R19)q-、-C(O)NR17-、-C(O)NR17(CH2)q-或者化学键，其中q选自0-6的整数；R17、R18和R19相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基。
进一步优选，L1、L2独立从结构B中非限制性地选自以下结构：
Figure BDA0003564748370000093
Figure BDA0003564748370000101
更进一步优选，通式为II或III的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，非限制性地选自以下结构：
Figure BDA0003564748370000111
Figure BDA0003564748370000121
Figure BDA0003564748370000131
Figure BDA0003564748370000141
作为优选，抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物及溶剂化物，非限制性地选自以下结构：
Figure BDA0003564748370000142
Figure BDA0003564748370000151
Figure BDA0003564748370000161
Figure BDA0003564748370000171
Figure BDA0003564748370000181
Figure BDA0003564748370000191
Figure BDA0003564748370000201
Figure BDA0003564748370000211
其中u选自1-10的整数。
具体实施方式
缩写和定义
除非另有说明，否则如本文所用的以下术语和短语旨在具有以下含义。当本文中使用商标名称时，除非上下文中另有指明，否则商标名称包括所述商标名称产品的产品配方、通用药物和活性成分。
除非有相反陈述，本文权利要求书和说明书中使用的术语具有下述含义。
术语“配体”是能识别和结合目标细胞相关的抗原或受体的大分子化合物。配体的作用是将药物呈递给与配体结合的目标细胞群，这些配体包括但不限于蛋白类激素、凝集素、生长因子、抗体或其他能与细胞结合的分子。在本发明实施方式中，配体表示为Ab，配体可通过配体上的杂原子与连接单元形成连接键，优选为抗体或其抗原结合片段，所述抗体选自嵌合抗体、人源化抗体、全人抗体或鼠源抗体；优选为单克隆抗体。
配体单元是与靶标部分特异性结合的靶向剂。所述配体能够特异性结合至细胞组分或结合至细胞组分或结合至其他感兴趣的靶标分子。靶标部分或靶标通常在细胞表面上。在一些方面中，配体单元的作用是将药物单元递送至配体单元与之相互作用的特定靶细胞群。配体包括但不限于蛋白质、多肽和肽，以及非蛋白质如糖。合适的配体单元包括，例如，抗体，例如全长(完整)抗体及其抗原结合片段。在配体单元是非抗体靶向试剂的实施方式中，其可以是肽或多肽，或非蛋白质分子。这类靶向试剂的示例包括干扰素、淋巴因子、激素、生长因子和集落刺激因子、维生素、营养转运分子、或任何其他细胞结合分子或物质。在一些实施方式中，连接子共价连接至配体的硫原子。在一些方面中，硫原子是半胱氨酸残基的硫原子，其形成抗体的链间二硫键。在另一方面中，硫原子是已经导入配体单元的半胱氨酸残基的硫原子，其形成抗体的链间二硫键。在另一方面中，硫原子是已经导入配体单元的半胱氨酸残基的硫原子(例如，通过定点诱变或化学反应)。在其他方面中，连接子结合的硫原子选自形成抗体的链间二硫键的半胱氨酸残基或已经引入配体单元的额半胱氨酸残基(例如，通过定点诱变或化学反应)。在一些实施方式中，按照Kabat{[Kabat E.A等，(1991)]《免疫学感兴趣的蛋白质序列》(Sequences of proteins of Immunological Interest)，第五版，NIH出版物91-3242}中的EU索引编号***。
如本文所用，“抗体”或“抗体单元”在其所属的范围内，包括抗体结构的任何部分。这一单元可以结合，反应性关联，或者络合一个受体，抗原或者靶向细胞群体具有的其它受体单元。抗体可以是任何蛋白或蛋白类分子，它可以结合、络合或者与待治疗或生物改造的细胞群体的一部分发生反应。本发明中组成抗体药物偶联物的抗体保持其原有野生状态时的抗原结合能力。因此，本发明中的抗体能够专一性地与抗原结合。涉及的抗原包括，例如，肿瘤相关抗原(TAA)，细胞表面受体蛋白和其他细胞表面分子，细胞存活调节因子，细胞增殖调节因子，与组织生长与分化相关的分子(如已知或预知的具有功能性的)，淋巴因子，细胞因子，参与细胞循环调节的分子，参与血管生成的分子，以及与血管生成有关的分子(如已知或预知的具有功能性的)。肿瘤相关因子可以是簇分化因子(如CD蛋白)。
应用在抗体药物偶联物中的抗体包括，但不局限于，针对细胞表面受体和肿瘤相关抗原的抗体。这样的肿瘤相关抗原是业内所熟知的，可以通过业内熟知的抗体制备方法和信息来制备。为了开发可用于癌症诊断与治疗的有效的细胞水平目标物，研究人员力图找寻跨膜或其他肿瘤相关多肽。这些目标物能够特异性的表达在一种或多种癌细胞表面，而在一种或多种非癌细胞表面表达很少或不表达。通常，相对于非癌细胞表面而言，这样的肿瘤相关多肽在癌细胞表面更加过度表达。确认这样的肿瘤相关因子，可大大提高基于抗体治疗癌症的专一靶向特性。为方便起见，为业内所熟知的抗原相关信息标示如下，包括名称、其他名称、基因库登录号。与肿瘤相关抗原对应的核酸和蛋白序列可参见公开数据库，例如Genbank。抗体靶向对应的肿瘤相关抗原包括所有的氨基酸序列变种和同种，与参考文献中确认的序列具有至少70％,80％,85％,90％或者95％的同源性，或者具备与引用文献中的肿瘤相关抗原序列具有完全一致的生物性质和特征。
术语“抑制”或“的抑制”指，减少了可检测的量，或完全阻止。
术语“癌症”指的是以失调的细胞生长为特征的生理病症或疾病。“肿瘤”包括癌细胞。
术语“自身免疫疾病”是源自针对个体自身的组织或蛋白质的疾病或紊乱。
术语“药物”是指细胞毒性药物，药物表示d，能在肿瘤细胞内具有较强破坏其正常生长的化学分子。细胞毒性药物原则上在足够高的浓度下都可以杀死肿瘤细胞，但是由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会导致正常细胞的凋亡，导致严重的副作用。该术语包括毒素，如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu176的放射性同位素)，毒性药物，化疗药物，抗生素和核溶酶，优选为毒性药物。
术语“连接子”或“连接片段”或“连接单元”是指一端与配体连接而另一端与药物相连的化学结构片段或键，也可以连接其他接头后再与药物相连。
接头，包括延伸物、间隔物和氨基酸单元，可以通过本领域己知方法合成，诸如US2005-0238649A1中所记载的。接头可以是便于在细胞中释放药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头、或含二硫化物接头(Chari等Cancer Research 52:127-131,1992)；美国专利No.5,208,020。
按照在细胞内药物释放的机制，如本文所用，“连接子”或“抗体药物偶联物的连接子”可被分为两类：不可断裂连接子和可断裂连接子。对于含有不可断裂连接子的抗体-药物偶联物，其药物释放机制为：偶联物与抗原结合并被细胞内吞后，抗体在溶酶体中被酶解，释放出由小分子药物，连接子，和抗体氨基酸残基共同组成的活性分子。由此带来的药物分子结构改变并不减弱其细胞毒性，但由于活性分子是带电荷的(氨基酸残基)，从而导致其不能渗入邻近细胞。因此，此类活性药物不能杀死邻近不表达靶向抗原(抗原阴性细胞)的肿瘤细胞(旁观者效应，bystander effect)(Ducry等，2010，Bioconjugate Chem.21:5-13)。
术语“抗体-药物偶联物”，指抗体通过稳定的连接单元与具有生物活性的药物相连。在本发明中“配体-药物偶联物”优选为抗体-药物偶联物(antibody drug conjugate,ADC)，指把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的连接单元与具有生物活性的毒性药物相连。
本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.boil.Chem.1968,243,3558.中所述。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至10个碳原子的烷基，最优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“取代烷基”指烷基中的氢被取代基团取代，除非文中另有说明，烷基的取代基可以是选自下组的多种基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2，取代基数量为0至(2m’+1)，其中m’为该基团中碳原子的总数。R’、R”和R”’各自独立的指代氢、未取代的C1-8烷基、未取代的芳基、由1-3个卤素取代的芳基、未取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基、或未取代的芳基-C1-4烷基。R’和R”连接于同一个氮原子时，它们可与该氮原子一起形成3-，4-，5-，6-或7-元环。例如，-NR’R”包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
术语“杂烷基”指含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子，更优选含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH2-、1,1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亚乙基(-CH2CH2)-、1,1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)和1,5-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(环烷基)，其中烷基或环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至8个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选环烷基环包含3至10个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“环烷基烷基”指烷基被一个或多个环烷基取代，优选被一个环烷基取代，其中烷基如上所定义，其中环烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。术语“硝基”指-NO2。
术语“酰胺基"指-C(O)N(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
术语“羧酸酯基"指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
本发明还包括各种氘化形式的式I。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式I。在制备氘代形式的式I时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂的非限制性实例包括:氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
术语“抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，故其抗原性也不同。据此，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。本发明所述的抗体优选为针对靶细胞上细胞表面抗原的特异性抗体，非限制性实施例为以下抗体：抗EGFRvIII抗体、抗DLL-3抗体、抗PSMA抗体、抗CD70抗体、抗MUC16抗体、抗ENPP3抗体、抗TDGF1抗体、抗ETBR抗体、抗MSLN抗体、抗TIM-1抗体、抗LRRC15抗体、抗LIV-1抗体、抗CanAg/AFP抗体、抗cladin 18.2抗体、抗Mesothelin抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗c-MET抗体、抗SLITRK6抗体、抗KIT/CD117抗体、抗STEAP1抗体、抗SLAMF7/CS1抗体、抗NaPi2B/SLC34A2抗体、抗GPNMB抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗MUC1/CD227抗体、抗AXL抗体、抗CD166抗体、抗B7-H3(CD276)抗体、抗PTK7/CCK4抗体、抗PRLR抗体、抗EFNA4抗体、抗5T4抗体、抗NOTCH3抗体、抗Nectin 4抗体、抗TROP-2抗体、抗CD142抗体、抗CA6抗体、抗GPR20抗体、抗CD174抗体、抗CD71抗体、抗EphA2抗体、抗LYPD3抗体、抗FGFR2抗体、抗FGFR3抗体、抗FRα抗体、抗CEACAMs抗体、抗GCC抗体、抗Integrin Av抗体、抗CAIX抗体、抗P-cadherin抗体、抗GD3抗体、抗Cadherin 6抗体、抗LAMP1抗体、抗FLT3抗体、抗BCMA抗体、抗CD79b抗体、抗CD19抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD74抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD37抗体、抗CD138抗体、抗CD352抗体、抗CD25抗体或抗CD123抗体中一个或多个。
术语“溶剂化物”或“溶剂化合物”指本发明的配体-药物偶联物与一种或多种溶剂分子形成可药用的溶剂化物，溶剂分子的非限制性实例包括水、乙醇、乙腈、异丙醇、DMSO、乙酸乙酯。
术语“载药量”是指式I中每个抗体上加载的细胞毒性药物平均数量，也可以表示为药物量和抗体量的比值，药物载量的范围可以是每个抗体(Ab)连接0-12个，优选1-10个细胞毒性药物(D)。在本发明的实施方式中，载药量表示为n,示例性的可以为1,2,3,4,5,6,7,8,9,10的均值。可用常规方法如UV/可见光光谱法，质谱，ELISA试验和HPLC特征鉴定偶联反应后每个ADC分子的药物品均数量。
本发明的一个实施方式中，细胞毒性药物通过连接单元偶联在抗体链间打开的半胱氨酸巯基-SH和/或定点突变的半胱氨酸残基的巯基-SH上，一般地，偶联反应中能与抗体偶联的药物分子数将小于或等于理论上的最大值。
可以用以下非限制性方法控制配体细胞毒性药物偶联物的载量，包括：
(1)控制连接试剂和单抗的摩尔比，
(2)控制反应时间和温度，
(3)选择不同的反应试剂。
常规的药物组合物的制备见中国药典。
术语“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指本发明配体-药物偶联物的盐，或本发明中所述的化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性，本发明配体-药物偶联化合物至少含有一个羧基，因此可以与碱形成盐，药学上可接受的盐的非限制性实例包括：钠盐、钾盐、钙盐或镁盐等。
术语“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指本发明抗体-药物偶联物的盐，或本发明中所述的化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性，本发明配体-药物偶联化合物至少含有一个氨基，因此可以与酸形成盐，药学上可接受的盐的非限制性实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、草酸盐、硝酸盐、梨酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
“酸性氨基酸”指氨基酸的等电点小于7，酸性氨基酸分子中往往带有一个或多个羧基等酸性基团，在结构中可有效电离为负离子形式而增加亲水性。酸性氨基酸可以为天然的，也可为非天然的氨基酸。
“天然氨基酸”指由生物合成的氨基酸。天然氨基酸一般情况下是L-型的，但也有少数例外，比如甘氨酸，包括天然的和生物体合成的。
“非天然氨基酸”指通过合成手段所获得的氨基酸。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，应理解，这些实施例只用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比例、比率、或份数按重量计。
实施例1：
化合物A的合成：
Figure BDA0003564748370000291
化合物A按照专利“CN109180681A”的实施例14化合物012的合成”提供的方法合成。
实施例2：
化合物B和化合物B1-9的合成：
1.化合物B的制备
Figure BDA0003564748370000292
化合物B按照专利“CN109180681A”的“通用步骤E：CBI-苯并二氮杂卓衍生物合成方法一”提供的方法合成。
2.化合物B1的制备
Figure BDA0003564748370000293
于25mL单口瓶中加入化合物B(50mg,0.072mmol)，羟基乙酸(11mg,0.14mmol)、EDCI(20mg,0.10mmol)、HOBt(13.5mg,0.10mmol)及3mLDMF，室温反应2h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，得到化合物B1(42mg)，收率78％，LC-MS：[M+H]+＝747.2。
3.化合物B2的制备
Figure BDA0003564748370000294
参照化合物B1的合成方法，于25mL单口瓶中加入化合物B(50mg,0.072mmol)，L-乳酸(12.6mg,0.14mmol)、EDCI(20mg,0.10mmol)、HOBt(13.5mg,0.10mmol)及3mLDMF，室温反应2h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，得到化合物B2(37mg)，收率68％，LC-MS：[M+H]+＝761.2。
4.化合物B3的制备
Figure BDA0003564748370000301
参照化合物B2的合成方法，将L-乳酸换成D-乳酸，即得化合物B3，LC-MS：[M+H]+＝761.2。
5.化合物B4及B5的制备
Figure BDA0003564748370000302
于25mL单口瓶中加入化合物B(60mg,0.087mmol)，3,3,3-三氟乳酸(25mg,0.17mmol)、EDCI(25mg,0.13mmol)、HOBt(17.6mg,0.13mmol)及3mLDMF，室温反应1.5h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，产品制备液冻干分别得到化合物B4(26mg),化合物B5(22mg),LC-MS：[M+H]+＝815.2。
6.化合物B6和B7的制备
Figure BDA0003564748370000303
参照化合物B4和B5的合成方法，利用高效液相纯化，即得化合物B6和B7，LC-MS：[M+H]+＝787.3。
7.化合物B8和B9的制备
Figure BDA0003564748370000311
参照化合物B4和B5的合成方法，利用高效液相纯化，即得化合物B8和B9，LC-MS：[M+H]+＝801.3。
实施例3：
化合物C和C1-9的合成：
1.化合物C的制备
Figure BDA0003564748370000312
化合物C按照专利“CN109180681A”的“通用步骤E：CBI-苯并二氮杂卓衍生物合成方法二”提供的方法合成。
2.化合物C1的制备
Figure BDA0003564748370000313
于25mL单口瓶中加入化合物C(50mg,0.075mmol)，羟基乙酸(11.4mg,0.15mmol)、EDCI(21.6mg,0.11mmol)、HOBt(15.2mg,0.11mmol)及3mLDMF，室温反应2h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，得到化合物C1(35mg)，收率65％，LC-MS：[M+H]+＝723.2。
3.化合物C2的制备
Figure BDA0003564748370000321
参照化合物C1的合成方法，于25mL单口瓶中加入化合物C(50mg,0.075mmol)，L-乳酸(13mg,0.15mmol)、EDCI(21.6mg,0.11mmol)、HOBt(15.2mg,0.11mmol)及3mLDMF，室温反应2h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，得到化合物C2(33.5mg)，收率63％，LC-MS：[M+H]+＝737.2。
4.化合物C3的制备：
Figure BDA0003564748370000322
参照化合物C2的合成方法，将L-乳酸换成D-乳酸，即得化合物C3，LC-MS：[M+H]+＝737.2。
5.化合物C4及C5的制备：
Figure BDA0003564748370000323
于25mL单口瓶中加入化合物C(60mg,0.09mmol)，3,3,3-三氟乳酸(26mg,0.18mmol)、EDCI(25mg,0.13mmol)、HOBt(17.6mg,0.13mmol)及3mLDMF，室温反应1.5h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，产品制备液冻干分别得到化合物C4(21mg),化合物C5(25mg),LC-MS：[M+H]+＝791.2。
6.化合物C6和C7的制备：
Figure BDA0003564748370000331
参照化合物C4和C5的合成方法，利用高效液相纯化，即得化合物C6和C7，LC-MS：[M+H]+＝763.3。
7.化合物C8和C9的制备：
Figure BDA0003564748370000332
参照化合物C4和C5的合成方法，利用高效液相纯化，即得化合物C8和C9，LC-MS：[M+H]+＝777.3。
实施例4：
化合物D1和D1-9的合成：
1.化合物D的制备
Figure BDA0003564748370000333
化合物D参照专利“CN109180681A”的“通用步骤A：苯并二氮杂卓类衍生物的合成一及通用步骤通用步骤E：CBI-苯并二氮杂卓衍生物合成方法二”提供的方法合成。
2.化合物D1的制备
Figure BDA0003564748370000341
于25mL单口瓶中加入化合物D(50mg,0.078mmol)，羟基乙酸(12mg,0.16mmol)、EDCI(22.4mg,0.12mmol)、HOBt(15.8mg,0.12mmol)及3mLDMF，室温反应2h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，得到化合物D1(34mg)，收率62.5％，LC-MS：[M+H]+＝697.2。
3.化合物D2的制备
Figure BDA0003564748370000342
于25mL单口瓶中加入化合物D(50mg,0.078mmol)，L-乳酸(14mg,0.16mmol)、EDCI(22.4mg,0.12mmol)、HOBt(15.8mg,0.12mmol)及3mLDMF，室温反应2h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，得到化合物D2(33.8mg)，收率71％，LC-MS：[M+H]+＝711.2。
4.化合物D3的制备
Figure BDA0003564748370000343
参照化合物D2的合成方法，D-乳酸替代L-乳酸，即得化合物D3，LC-MS：[M+H]+＝711.2。
4.化合物D4和D5的制备
Figure BDA0003564748370000344
于25mL单口瓶中加入化合物D(60mg,0.094mmol)，3,3,3-三氟乳酸(27mg,0.187mmol)、EDCI(27mg,0.14mmol)、HOBt(19mg,0.14mmol)及3mLDMF，室温反应1.5h，HPLC监测反应。反应结束后，反应液直接经过高效液相纯化，产品制备液冻干分别得到化合物D4(27mg),化合物D5(29mg),LC-MS：[M+H]+＝765.2。
6.化合物D6和D7的制备
Figure BDA0003564748370000351
参照化合物D4和D5的合成方法，利用高效液相纯化，即得化合物D6和D7，LC-MS：[M+H]+＝737.3。
7.化合物D8和D9的制备
Figure BDA0003564748370000352
参照化合物D4和D5的合成方法，利用高效液相纯化，即得化合物D8和D9，LC-MS：[M+H]+＝751.3。
实施例5：
化合物M1的合成：
Figure BDA0003564748370000353
于5L单口瓶中加入N-芴甲氧羰基-甘氨酸-甘氨酸(100g,28mmol,1.0eq)，四乙酸铅(175g,395mmol,1.4eq)，2L四氢呋喃和670mL甲苯，搅拌均匀，加热至85℃反应2.5h。TLC监控，原料反应完后，冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，残余物经柱色谱纯化(PE：EA＝5:1-2:1)，得化合物M1(87g)，收率84.4％，LC-MS：[M+NH4]+＝386.0。
实施例6：
化合物M3的合成：
Figure BDA0003564748370000361
于1000mL单口瓶中加入化合物SM-2(按照专利CN108452321A公布的方法合成)(40g,96mmol,1.0eq)，三乙胺(26.7mL,2.0eq)，甲苯(400mL)，升温至120℃下回流反应2h。TLC监测基本完全反应，降温至50℃下减压旋除溶剂。用乙酸乙酯(150mL)，水(40mL)溶解，冰浴搅拌下用1M HCl调pH至2-3，分液。水层用乙酸乙酯再萃取一次，合并有机层，加入无水硫酸钠干燥。过滤后，浓缩得到淡黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化(DCM:MeOH＝40:1)，得到26.6g化合物M2；LC-MS：[M+H]+＝399.3。
于1L单口瓶，加入化合物M2(26.5g,60.5mmol,1.0eq)、五氟苯酚(12.2g,66.5mmol,1.1eq)、DCC(13.7g,66.5mmol,1.1eq)及THF(300mL)，室温反应30min(采用TLC监测)，过滤滤去不溶物。反应液直接经制备纯化，制备液水泵减压水浴35℃浓缩除去乙腈，冻干得到31.5g化合物M3，收率64％；LC-MS：[M+H]+＝565.1。
实施例7：
化合物1的合成：
Figure BDA0003564748370000371
第一步：化合物1a的合成
于250mL单口瓶中，加入M1(6g,16.3mmol)，100mL THF，对甲苯磺酸一水合物(0.31g,1.63mmol)，搅拌冷却至0℃，滴加羟乙酸苄酯(5.4g,32.6mmol)，滴毕自然升温至室温反应(反应约2-4h)，TLC监控。反应结束，加入饱和NaHCO3溶液，用乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物经硅胶柱纯化(PE:EA＝10:1-5:1-1:1)得化合物1a(4g)，收率52％；LC-MS：[M+H]+＝475.2。
第二步：化合物1b的合成
于25mL单口瓶，加入化合物1a(2g,4.2mmol)，10mL DMF，0℃搅拌，加入DBU(766mg,5.04mmol)，反应1h，TLC监测Fmoc脱保护完成后，待用；
另取25mL单口瓶中加入化合物M4(参考专利CN111051330 A公布的方法制备)(1.73g,4.2mmol)，PyBOP(2.61g,5.04mmol)，HOBt(680mg,5.04mmol)及10mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(830uL,5.04mmol)，继续搅拌30min，将上述反应液加至反应瓶中，升至室温反应。HPLC监测反应结束后，反应液经制备液相纯化，得到产品制备液，制备液经二氯甲烷萃取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物1b(1.7g)，收率63％；LCMS：[M+H]+＝648.3。
第三步：化合物1c的合成
于25mL单口瓶中加入化合物1b(900mg,1.39mmol)，15mL DMF溶清后，加入900mg5％Pd/C，氢化反应2h，反应完毕，过滤，得滤液，未经纯化直接用于下一步反应。
第四步：化合物1的合成
将上步所得的化合物1c的DMF溶液置于冰水浴中，加入DIPEA(235uL,1.39mmol)，再加入化合物M3(784mg,1.39mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到化合物1(604mg)，收率54％；LC-MS：[M+H]+＝804.4。
实施例8：
化合物2的合成：
Figure BDA0003564748370000381
第一步：化合物1c的合成
于25mL单口瓶中加入化合物1b(900mg,1.39mmol)，15mL DMF溶清后，加入900mg5％Pd/C，氢化反应2h，反应完毕，过滤，得滤液，未经纯化直接用于下一步反应。
第二步：化合物2的合成
将上步所得的化合物1c的DMF溶液置于冰水浴中，加入DIPEA(235uL,1.39mmol)，再加入McOSu(428.5mg,1.39mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到化合物2(500mg)，收率58％；LC-MS：[M+H]+＝617.3。
实施例9：
化合物3A和3B的合成：
1.化合物3A的制备
Figure BDA0003564748370000391
第一步：化合物3a的合成
于25mL单口瓶中加入M1(1.5g，4.0mmol，1.0eq),对甲苯磺酸一水合物(77mg，0.4mmol，0.1eq)及15mL THF，搅拌均匀后，降至0℃，再缓慢加入L-乳酸苄酯(2.2g,12.0mmol,3eq)，加完后升至室温反应。TLC监控，反应结束后，加入饱和NaHCO3溶液，用乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残余物经反相柱纯化得化合物3a(1.03g)，收率52％，LC-MS：[M+NH4]+＝506.2。
第二步：化合物3b的合成
于25mL单口瓶中加入化合物3a(1g,2.04mmol)和8mL DMF，搅拌均匀后，降至0℃，再缓慢加入DBU(373mg,2.45mmol)，加完后升至室温反应。TLC监控，反应结束，记为反应液①；
另取25mL单口瓶中加入M4(846mg,2.04mmol)，PyBOP(1.27g,2.45mmol)和6mLDMF，室温搅拌5min，加入反应液①，室温反应，HPLC监测。反应完毕，反应液经高效液相纯化，冻干得化合物3b(913mg)，收率67.6％，LC-MS：[M+NH4]+＝679.2。
第三步：化合物3c的合成
于100mL单口瓶中加入化合物3b(800mg,1.21mmol,1.0eq)，DMF(15mL)溶解，再加入5％Pd/C(800mg)，室温氢化反应2h(采用HPLC监测反应进程)。过滤Pd/C，滤液未经浓缩，直接用于下一步。
第四步：化合物3A的合成
将上步所得化合物3c的DMF溶液置于冰水浴中，加入DIPEA(219uL,1.21mmol)，再加入化合物M3(683mg,1.21mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到化合物3A(524mg)，收率53％，LC-MS：[M-H]-＝816.3。
2.化合物3B的制备
Figure BDA0003564748370000401
参照上述化合物3A的合成方法，将第一步中L-乳酸苄酯改成D-乳酸苄酯，即得化合物3B，LC-MS：[M-H]-＝816.3。
实施例10：
化合物4A和4B的合成：
1.化合物4A的制备
Figure BDA0003564748370000402
第一步：化合物3c的合成
于100mL单口瓶中加入3b(800mg,1.21mmol,1.0eq)，DMF(15mL)溶解，再加入5％Pd/C(800mg)，室温氢化反应2h(采用HPLC监测反应进程)。过滤Pd/C，滤液未经浓缩，直接用于下一步。
第二步：化合物4A的合成
将上步所得的化合物3c的DMF溶液置于冰水浴中，加入DIPEA(219uL,1.21mmol)，再加入McOSu(373mg,1.21mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到化合物4A(450mg)，收率59％；LC-MS：[M+H]+＝631.3。
2.化合物4B的合成
Figure BDA0003564748370000411
参照化合物4A的合成方法，得到化合物4B，LC-MS：[M+H]+＝631.3。
实施例11：
化合物5的合成：
Figure BDA0003564748370000412
第一步：化合物5a的合成
于250mL单口瓶中加入M1(10g,27.1mmol),3,3,3-三氟乳酸苄酯(参照专利WO2020063673A1公布的方法制备)(12.7g,54.3mmol)，醋酸锌(9.96g,54.3mmol)及100mL甲苯，加热至100℃反应4h。反应完毕，降至室温，过滤除去不溶物，滤液浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1-5:1-2:1)得到化合物5a(5.15)g，收率35.1％；LC-MS：[M+H]+＝543.2。
第二步：化合物5b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物5a(5g,9.2mmol)及15mL DMF，溶清后，冰水浴下，加入DBU(1.68g,11mmol)，反应1h，记为反应液①；
另取50mL单口瓶，加入M4(3.8g,9.2mmol)，PyBOP(5.75g,11mmol)，HOBt(1.49g,11mmol)及10mL DMF，溶清后，冰水浴下，加入DIPEA(1.82mL,11mmol)，继续反应30min，加入反应液①，升至室温反应2h。HPLC监测反应进程，反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得制备液。制备液经二氯甲烷萃取、饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得到化合物5b(4.1)g，收率62.3％；LC-MS：[M+H]+＝716.3。
第三步：化合物5的合成
于25mL单口瓶中加入化合物5b(900mg,1.26mmol)，15mL DMF溶清后，加入900mg5％Pd/C，氢化反应2h，反应完毕，过滤，将滤液置于冰水浴中，加入DIPEA(228uL,1.38mmol)，再加入化合物M3(712mg,1.26mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到产品化合物5(525)mg，收率47.9％；LC-MS：[M-H]-＝870.3。
实施例12：
化合物6的合成：
Figure BDA0003564748370000421
于25mL单口瓶中加入化合物5b(900mg,1.26mmol)，15mL DMF溶清后，加入900mg5％Pd/C，氢化反应2h，反应完毕，过滤，将滤液置于冰水浴中，加入DIPEA(228uL,1.38mmol)，再加入McOSu(388mg,1.26mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到产品化合物6(450)mg，收率52％；LC-MS：[M-H]-＝683.3。
实施例13：
化合物7的合成：
Figure BDA0003564748370000431
第一步：化合物7a的合成
于250mL单口瓶中加入M1(10g,27.1mmol),2-环丙基-2-羟基乙酸苄酯(参照专利WO2020244657A1公布的方法制备)(11.2g,54.3mmol)，醋酸锌(9.96g,54.3mmol)及100mL甲苯，加热至100℃反应4h。反应完毕，降至室温，过滤除去不溶物，滤液浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1-5:1-2:1)得到化合物7a(4.97g)，收率36％；LC-MS：[M+H]+＝515.2。
第二步：化合物7b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物7a(4g,7.8mmol)及10mL DMF，溶清后，冰水浴下，加入DBU(1.42g,9.3mmol),反应1h，记为反应液①；
另取50mL单口瓶，加入M4(3.2g,7.8mmol)，PyBOP(4.5g,8.6mmol)，HOBt(1.16g,8.6mmol)及10mL DMF，溶清后，冰水浴下，加入DIPEA(1.65mL,10mmol)，继续反应30min，加入反应液①，升至室温反应2h。HPLC监测反应进程，反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得制备液。制备液经二氯甲烷萃取、饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得到化合物7b(4.2g)，收率78％；LC-MS：[M+H]+＝688.3。
第三步：化合物7的合成
于25mL单口瓶中加入化合物7b(1000mg,1.45mmol)，15mL DMF溶清后，加入1000mg5％Pd/C，氢化反应2h，反应完毕，过滤，将滤液置于冰水浴中，加入DIPEA(248uL,1.5mmol)，再加入化合物M3(720mg,1.45mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到产品化合物7(503mg)，收率41％；LC-MS：[M-H]-＝842.3。
实施例14：
化合物8的合成：
Figure BDA0003564748370000441
第一步：化合物8a的合成
于250mL单口瓶中加入M1(10g,27.1mmol),2-羟基-3-环丙基丙酸苄酯(参照专利WO2020063676A公布的方法合成)(12.0g,54.3mmol)，醋酸锌(9.96g,54.3mmol)及100mL甲苯，加热至100℃反应4h。反应完毕，降至室温，过滤除去不溶物，滤液浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1-5:1-2:1)得到目标物8a(5.09g)；LC-MS：[M+H]+＝529.2。
第二步：化合物8b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物8a(4g,7.6mmol)及10mL DMF，溶清后，冰水浴下，加入DBU(1.39g,9.1mmol)，反应1h，记为反应液①；
另取50mL单口瓶，加入M4(3.12g,7.6mmol)，PyBOP(4.5g,8.6mmol)，HOBt(1.16g,8.6mmol)及10mL DMF，溶清后，冰水浴下，加入DIPEA(1.65mL,10mmol)，继续反应30min，加入反应液①，升至室温反应2h。HPLC监测反应进程，反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得制备液。制备液经二氯甲烷萃取、饱和氯化钠溶液洗涤、无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得到化合物8b(4.5g)，收率84％；LC-MS：[M+H]+＝702.3。
第三步：化合物8的合成
于25mL单口瓶中加入8b(1000mg,1.42mmol)，15mL DMF溶清后，加入1000mg 5％Pd/C，氢化反应2h，反应完毕，过滤，将滤液置于冰水浴中，加入DIPEA(248uL,1.5mmol)，再加入化合物M3(708mg,1.42mmol)，加毕升至室温反应1h。HPLC监测反应完毕，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到产品化合物8(443mg)，收率36％；LC-MS：[M-H]-＝856.4。
实施例15：
化合物9的合成：
Figure BDA0003564748370000451
第一步：化合物9a的合成
于500mL单口瓶中加入氨基-八聚乙二醇-羧基(10g，22.7mmol)，20mLDMF溶清，加入McOSu(8.38g，27.2mmol)，DIEA(5.6mL,3.4mmol)，室温反应2h，TLC监测。反应结束后，将反应液倒入100mL水中，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥。过滤，45℃减压浓缩得粗品。粗品经过硅胶柱层析纯化(DCM：MeOH＝30:1-10:1)，收集产品洗脱液，浓缩得到化合物9a(12.1g)，收率84.5％，LCMS：[M-H]+＝633.3。
第二步：化合物9b的合成
于500mL单口瓶，加入化合物9a(12.0g,18.9mmol)、五氟苯酚(3.83g,20.8mmol)、DCC(4.28g,20.8mmol)及THF(50mL)，室温反应1h，TLC监测。反应结束后，过滤滤去不溶物。滤液水泵减压45℃浓缩除去溶剂得残余物。残余物经过硅胶柱层析纯化(PE：EA＝5:1-2:1)，收集产品洗脱液，浓缩得到化合物9b(13.8g)，收率91.5％，LCMS：[M+H]+＝801.3。
第三步：化合物9的合成
向化合物1c(220mg,0.5mmol)中加入10mL DMF，冰水浴加入化合物9b(500mg,0.6mmol)冷却至0℃，加入化合物DIPEA(124uL,0.75mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应。反应完毕后，反应液经制备级高效液相色谱法纯化得到产品制备液，制备液减压除去乙腈以后，冻干，得到化合物9(430mg)，收率83％，LCMS:[M-H]+＝1038.5。
实施例16：
化合物10的合成：
Figure BDA0003564748370000461
于25mL单口瓶中加入化合物2(50mg,0.081mmol)，化合物B(55.8mg,0.081mmol)，PyBOP(50.4mg,0.097mmol)，HOBt(13.1mg,0.097mmol)及5mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(15.5mg,0.12mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到化合物10(80mg)，收率76.7％，LC-MS：[M+H]+＝1287.5。
实施例17：
化合物11的合成：
Figure BDA0003564748370000462
于25mL单口瓶中加入化合物9(84.2mg,0.081mmol)，化合物B(55.8mg,0.081mmol)，PyBOP(50.4mg,0.097mmol)，HOBt(13.1mg,0.097mmol)及5mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(15.5mg,0.12mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得产品制备液，制备液冻干，得到化合物11(100mg)，收率70.9％，LC-MS：[M/2+H]+＝855.86。
实施例18：
化合物12A和12B的合成：
1.化合物12A的制备
Figure BDA0003564748370000471
于25mL单口瓶中加入化合物4A(51mg,0.081mmol)，化合物B(55.8mg,0.081mmol)，PyBOP(50.4mg,0.097mmol)，HOBt(13.1mg,0.097mmol)及5mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(15.5mg,0.12mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得制备液，制备液冻干得到化合物12A(80mg)，收率76.2％，LC-MS：[M+H]+＝1301.5。
2.化合物12B的制备
Figure BDA0003564748370000472
参照化合物12A的合成方法，即得化合物12B，LC-MS：[M+H]+＝1301.5。
实施例19：
化合物13A和13B的合成：
Figure BDA0003564748370000473
于50mL单口瓶中加入化合物6(99.3mg,0.145mmol)，化合物B(100mg,0.145mmol)，PyBOP(90.5mg,0.174mmol)，HOBt(23.5mg,0.174mmol)及10mL DMF，冰水浴下加入DIPEA(28.2mg,0.218mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物13A和化合物13B的制备液，制备液分别冻干，得到化合物13A(90mg)、化合物13B(80mg)，LC-MS：[M+H]+＝1355.5。
实施例20：
化合物14的合成：
Figure BDA0003564748370000481
第一步：化合物14a的合成
于50mL单口瓶中加入化合物1(500mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物14a的制备液，制备液冻干得到固体化合物14a(550mg)，收率60％，LC-MS：[M+H]+＝1474.6。
第二步：化合物14的合成
于25mL单口瓶中加入化合物14a(200mg,0.136mmol)，溴化锌(612mg,2.72mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物14(100mg)，收率56％，LC-MS：[M+H]+＝1318.5。
实施例21：
化合物15A和15B的合成：
1.化合物15A的制备
Figure BDA0003564748370000491
第一步：化合物15a的合成
于50mL单口瓶中加入化合物3A(507mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物15a的制备液，制备液冻干得到固体化合物15a(650mg)，收率70％，LC-MS：[M+H]+＝1488.6。
第二步：化合物15A的合成
于25mL单口瓶中加入化合物15a(200mg,0.134mmol)，溴化锌(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物15A(110mg)，收率62％，LC-MS：[M+H]+＝1332.5。
2.化合物15B的制备
Figure BDA0003564748370000501
参照化合物15A的合成方法，即得化合物15B，LC-MS：[M+H]+＝1332.5。
实施例22：
化合物16A和16B的合成：
Figure BDA0003564748370000502
第一步：化合物16a和16b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物5(540mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物16a和化合物16b的制备液，制备液分别冻干得到化合物16a(350mg)、化合物16b(300mg)，LC-MS：[M/2+H]+＝771.8。
第二步：化合物16A的合成
Figure BDA0003564748370000511
于25mL单口瓶中加入化合物16a(200mg,0.13mmol)，溴化锌(585.5mg,2.6mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物16A(120mg)，收率66％，LC-MS：[M+H]+＝1386.4。
第三步：化合物16B的合成
Figure BDA0003564748370000512
于25mL单口瓶中加入化合物16b(200mg,0.13mmol)，溴化锌(585.5mg,2.6mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物16B(115mg)，收率64％，LC-MS：[M+H]+＝1386.4。
实施例23：
化合物17A和17B的合成：
Figure BDA0003564748370000521
第一步：化合物17a和17b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物7(523mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物17a和化合物17b的制备液，制备液分别冻干得到化合物17a(320mg)、化合物17b(280mg)，LC-MS：[M/2+H]+＝757.8。
第二步：化合物17A的合成
Figure BDA0003564748370000522
于25mL单口瓶中加入化合物17a(200mg,0.132mmol)，溴化锌(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物17A(120mg)，收率67％，LC-MS：[M+H]+＝1358.5。
第三步：化合物17B的合成
Figure BDA0003564748370000531
于25mL单口瓶中加入化合物17b(200mg,0.132mmol)，溴化锌(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物17B(116mg)，收率65％，LC-MS：[M+H]+＝1358.5。
实施例24：
化合物18A和18B的合成：
Figure BDA0003564748370000532
第一步：化合物18a和18b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物8(532mg,0.62mmol)，化合物B(427.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物18a和化合物18b的制备液，制备液分别冻干得到化合物18a(300mg)、化合物18b(280mg)，LC-MS：[M/2+H]+＝764.8。
第二步：化合物18A的合成
Figure BDA0003564748370000541
于25mL单口瓶中加入化合物18a(200mg,0.131mmol)，溴化锌(590.0mg,2.62mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物18A(125mg)，收率70％，LC-MS：[M+H]+＝1372.5。
第三步：化合物18B的合成
Figure BDA0003564748370000542
于25mL单口瓶中加入化合物18b(200mg,0.131mmol)，溴化锌(590.0mg,2.62mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物18B(120mg)，收率67％，LC-MS：[M+H]+＝1372.5。
实施例25：
化合物19的合成：
Figure BDA0003564748370000551
第一步：化合物19a的合成
于50mL单口瓶中加入化合物1(500mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物19a的制备液，制备液冻干得到固体化合物19a(600mg)，收率66％，LC-MS：[M+H]+＝1450.6。
第二步：化合物19的合成
于25mL单口瓶中加入化合物19a(200mg,0.138mmol)，溴化锌(621mg,2.76mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物19(120mg)，收率67％，LC-MS：[M+H]+＝1294.5。
实施例26：
化合物20A和化合物20B的合成：
1.化合物20A的制备
Figure BDA0003564748370000561
第一步：化合物20a的合成
于50mL单口瓶中加入化合物3A(507mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物20a的制备液，制备液冻干得到固体化合物20a(560mg)，收率62％，LC-MS：[M+H]+＝1464.6。
第二步：化合物20A的合成
于25mL单口瓶中加入化合物20a(200mg,0.136mmol)，溴化锌(614.8mg,2.73mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物20A(120mg)，收率67％，LC-MS：[M+H]+＝1308.5。
2.化合物20B的制备
Figure BDA0003564748370000571
参照化合物20A的合成方法，即得化合物20B，LC-MS：[M+H]+＝1308.5。
实施例27：
化合物21A和21B的合成：
Figure BDA0003564748370000572
第一步：化合物21a和21b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物5(540mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物21a和化合物21b的制备液，制备液分别冻干得到化合物21a(330mg)、化合物21b(300mg)，LC-MS：[M/2+H]+＝759.8。
第二步：化合物21A的合成
Figure BDA0003564748370000581
于25mL单口瓶中加入化合物21a(200mg,0.132mmol)，溴化锌(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物21A(125mg)，收率69％，LC-MS：[M+H]+＝1362.4。
第三步：化合物21B的合成
Figure BDA0003564748370000582
于25mL单口瓶中加入化合物21b(200mg,0.132mmol)，溴化锌(594.5mg,2.64mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物21B(112mg)，收率62％，LC-MS：[M+H]+＝1362.4。
实施例28：
化合物22A和22B的合成：
Figure BDA0003564748370000591
第一步：化合物22a和22b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物7(523mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物22a和化合物22b的制备液，制备液分别冻干得到化合物22a(330mg)、化合物22b(300mg)，LC-MS：[M+H]+＝1490.6。
第二步：化合物22A的合成
Figure BDA0003564748370000592
于25mL单口瓶中加入化合物22a(200mg,0.134mmol)，溴化锌(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物22A(120mg)，收率67％，LC-MS：[M+H]+＝1334.5。
第三步：化合物22B的合成
Figure BDA0003564748370000601
于25mL单口瓶中加入化合物22b(200mg,0.134mmol)，溴化锌(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物22B(115mg)，收率65％，LC-MS：[M+H]+＝1334.5。
实施例29：
化合物23A和23B的合成：
Figure BDA0003564748370000602
第一步：化合物23a和23b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物8(532mg,0.62mmol)，化合物C(412.4mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物23a和化合物23b的制备液，制备液分别冻干得到化合物23a(320mg)、化合物23b(300mg)，LC-MS：[M/2+H]+＝752.8。
第二步：化合物23A的合成
Figure BDA0003564748370000611
于25mL单口瓶中加入化合物23a(200mg,0.133mmol)，溴化锌(598.5mg,2.66mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物23A(122mg)，收率68％，LC-MS：[M+H]+＝1348.5。
第三步：化合物23B的合成
Figure BDA0003564748370000612
于25mL单口瓶中加入化合物23b(200mg,0.133mmol)，溴化锌(598.5mg,2.66mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物23B(115mg)，收率64％，LC-MS：[M+H]+＝1348.5。
实施例30：
化合物24的合成：
Figure BDA0003564748370000621
第一步：化合物24a的合成
于50mL单口瓶中加入化合物1(500mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物24a的制备液，制备液冻干得到固体化合物24a(600mg)，收率68％，LC-MS：[M+H]+＝1424.6。
第二步：化合物24的合成
于25mL单口瓶中加入化合物24a(200mg,0.14mmol)，溴化锌(631mg,2.8mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物24(120mg)，收率68％，LC-MS：[M+H]+＝1268.4。
实施例31：
化合物25A和化合物25B的合成：
1.化合物25A的制备
Figure BDA0003564748370000631
第一步：化合物25a的合成
于50mL单口瓶中加入化合物3A(507mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物25a的制备液，制备液冻干得到固体化合物25a(560mg)，收率63％，LC-MS：[M+H]+＝1438.6。
第二步：化合物25A的合成
于25mL单口瓶中加入化合物25a(200mg,0.139mmol)，溴化锌(626mg,2.78mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物25A(115mg)，收率65％，LC-MS：[M+H]+＝1282.5。
2.化合物25B的制备
Figure BDA0003564748370000641
参照化合物25A的合成方法，即得化合物26B，LC-MS：[M+H]+＝1282.5。
实施例32：
化合物26A和26B的合成：
Figure BDA0003564748370000642
第一步：化合物26a和26b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物5(540mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物26a和化合物26b的制备液，制备液分别冻干得到化合物26a(330mg)、化合物26b(300mg)，LC-MS：[M+H]+＝1492.5。
第二步：化合物26A的合成
Figure BDA0003564748370000651
于25mL单口瓶中加入化合物26a(200mg,0.134mmol)，溴化锌(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物26A(125mg)，收率70％，LC-MS：[M+H]+＝1336.4。
第三步：化合物26B的合成
Figure BDA0003564748370000652
于25mL单口瓶中加入化合物26b(200mg,0.134mmol)，溴化锌(603.5mg,2.68mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物26B(112mg)，收率63％，LC-MS：[M+H]+＝1336.4。
实施例33：
化合物27A和27B的合成：
Figure BDA0003564748370000661
第一步：化合物27a和27b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物7(523mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物27a和化合物27b的制备液，制备液分别冻干得到化合物27a(330mg)、化合物27b(300mg)，LC-MS：[M+H]+＝1464.6。
第二步：化合物27A的合成
Figure BDA0003564748370000662
于25mL单口瓶中加入化合物27a(200mg,0.136mmol)，溴化锌(614.8mg,2.73mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物27A(125mg)，收率70％，LC-MS：[M+H]+＝1308.5。
第三步：化合物27B的合成
Figure BDA0003564748370000671
于25mL单口瓶中加入化合物27b(200mg,0.136mmol)，溴化锌(614.8mg,2.73mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物27B(115mg)，收率64％，LC-MS：[M+H]+＝1308.5。
实施例34：
化合物28A和28B的合成：
Figure BDA0003564748370000672
第一步：化合物28a和28b的合成
于50mL单口瓶中加入化合物8(532mg,0.62mmol)，化合物D(396.3mg,0.62mmol)，PyBOP(385mg,0.74mmol)，HOBt(100mg,0.74mmol)及15mL DMF,冰水浴下加入DIPEA(120mg,0.93mmol)，升至室温反应2h。HPLC监测反应完毕后，反应液经高效液相纯化，得化合物28a和化合物28b的制备液，制备液分别冻干得到化合物28a(320mg)、化合物28b(300mg)，LC-MS：[M+H]+＝1478.6。
第二步：化合物28A的合成
Figure BDA0003564748370000681
于25mL单口瓶中加入化合物28a(200mg,0.135mmol)，溴化锌(608mg,2.7mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物28A(121mg)，收率68％，LC-MS：[M+H]+＝1322.5。
第三步：化合物28B的合成
Figure BDA0003564748370000682
于25mL单口瓶中加入化合物28b(200mg,0.135mmol)，溴化锌(608mg,2.7mmol)及6mL硝基甲烷，室温反应1h。HPLC监测反应完毕后，减压浓缩除去溶剂，得粗品。粗品经高效液相纯化，得到产品制备液，制备液冻干得到固体化合物28B(115mg)，收率64％，LC-MS：[M+H]+＝1322.5。
实施例34：
化合物29合成：
Figure BDA0003564748370000691
第一步：化合物29a至化合物29d的合成
参照专利CN102933236A中“化合物26”的合成得到化合物29d。
第二步：化合物29e的合成
在250mL三口瓶中，加入化合物29d(3.0g,5.8mmol)，50mL无水THF，氮气保护下，冰水浴维持在0℃，加入硼氢化钠固体(329mg,8.7mmol)，在0℃下反应30min，升至室温反应2h，TLC监测反应终点。反应结束后，将反应液至于冰水中，缓慢加入50mL水淬灭反应，再加入1N稀HCl直至不冒气泡为止，加入乙酸乙酯萃取(60mL*3)，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得粗品。粗品经过柱层析纯化(DCM/MeOH＝20:1-5:1)，得到化合物29e(2.1g,黄色固体)，收率73.8％，LCMS：[M+H]+＝491.2。
第三步：化合物29f的合成
在100mL单口瓶中加入化合物29e(2.1g,4.3mmol)，TBSCl(1.3g,8.6mmol)，咪唑(580mg,8.6mmol)，15mL无水DMF溶解，室温下反应3h，TLC监测反应终点。反应结束后将反应倒入30mL水中，用DCM萃取(25mL*3)，合并有机相，用水和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥并且减压蒸发，得到粗品。粗品通过柱层析(PE/EA＝5:1-1:2)，得到化合物29f(2.4g,黄色固体)，收率89.3％，LCMS：[M+H]+＝605.3。
第四步：化合物29g的合成
在100mL单口瓶中加入化合物29f(2.4g,4.0mmol)，5％甲酸/甲醇溶液30mL，冰浴冷却至5℃以下，搅拌下缓慢加入锌粉(5.2g,80.0mmol)，再升至室温反应1h，TLC监测反应终点。反应结束后趁热过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，滤液以饱和碳酸氢钠溶液调pH至7，然后于45℃下减压浓缩，除去溶剂，得到棕黄色油状物，加入60mL DCM，分出有机层，用饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到粗品。粗品经过柱层析纯化(PE：EA＝1:1-1:3)，得到化合物29g(1.9g,淡黄色固体)，收率82.5％，LCMS：[M+H]+＝575.3。
第五步：化合物29h的合成
在50mL单口瓶中加入化合物29g(1.9g,3.3mmol)，Fmoc-VCPABO-PNP(2.5g,3.3mmol),15mL DMF溶清，再加入DIPEA(827uL,5.0mmol)，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，再冻干，得到化合物29h(3.3g，淡黄色固体)，收率83.1％，LCMS：[M+H]+＝1202.5。
第六步：化合物29i的合成
在50mL单口瓶中加入化合物29h(3.3g,2.7mmol)，8mLTHF和8mL水溶解，再加入20mL冰乙酸，室温反应，HPLC监测反应终点。反应结束后，将反应液缓慢地滴入400mL饱和碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取(100mL*3)，合并有机相，用水和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥并且减压蒸发，得到粗品。粗品通过柱层析(DCM/MeOH＝10:1-5:1)，得到化合物29i(2.1g,淡黄色固体)，收率71.1％，LCMS：[M+H]+＝1088.5。
第七步：化合物29j的合成
于100mL三口瓶中加入化合物29i(2.1g,1.9mmol)，40mL无水DCM溶解，氮气保护下，加入Dess-Martin高碘试剂(0.88g,2.1mmol)，室温反应4h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液经过饱和碳酸氢钠溶液、水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品经过高效液相纯化，产品制备液冻干得化合物29j(1.6g,白色固体)，收率77.6％，LCMS：[M+H]+＝1086.5。
第八步：化合物29k的合成
于50mL三口瓶中加入化合物29j(1.6g,1.5mmol)，5％钯硫酸钡(0.29g)，甲酸铵(1.9g,30mmol)，20mL甲醇溶解，氮气保护下，45℃反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液浓缩后，加入20mL DCM，20mL水搅拌均匀后分液，水层用DCM再萃取一次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗一次，分液，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物29k(1.3g,类白色固体)，收率93.3％，LCMS：[M+H]+＝996.4。
第九步：化合物29l的合成
于100mL单口瓶中加入3-((对甲苯磺酰氧基)甲基)二环[1.1.1]戊烷-1-甲酸苄酯(0.61g,1.2mmol)、化合物29k(1.3g,1.3mmol)和20mL DMF，搅拌溶解后加入碳酸铯(0.78g,2.4mmol)，加毕，氮气保护下升温至60℃反应4h，TLC监测反应终点。往反应液中加入水40mL，以30mL EA萃取2次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到粗品，粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物29l(1.2g,类白色固体)，收率84.0％，LCMS：[M+H]+＝1210.5。
第十步：化合物29m的合成
于50mL三口瓶中加入化合物29l(1.2g,1.0mmol)，5％钯硫酸钡(0.24g)，甲酸铵(1.3g,20mmol)，20mL甲醇溶解，氮气保护下，45℃反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液浓缩后，加入20mL DCM，20mL水搅拌均匀后分液，水层用DCM再萃取一次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗一次，分液，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物29m(0.92g,类白色固体)，收率82.5％，LCMS：[M+H]+＝1120.5。
第十一步：化合物29n的合成
于100mL单口瓶中加入化合物29m(920mg,0.82mmol)和15mL DMF，室温搅拌下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(496mg,2.6mmol)和DMAP(313mg,2.6mmol)，N2保护于室温下搅拌1h，然后加入化合物CBI(参照专利CN109180681A)(376mg,1.0mmol)，N2保护于室温下反应过夜，HPLC显示原料基本反应完全。往反应液中加入水40mL，以30mL DCM萃取2次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物29n(874mg,类白色固体)，收率74.5％，LCMS：[M+H]+＝1439.5。
第十二步：化合物29o的合成
于50mL三口瓶中加入化合物29n(874mg,0.60mmol)，5％钯硫酸钡(174mg)，甲酸铵(390mg,6mmol)，20mL甲醇溶解，氮气保护下，45℃反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液浓缩后，加入20mL DCM，20mL水搅拌均匀后分液，水层用DCM再萃取一次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗一次，分液，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物29o(667mg,类白色固体)，收率82.4％，LCMS：[M+H]+＝1349.5。
第十三步：化合物29p的合成
于50mL单口瓶中加入化合物29o(667mg,0.49mmol)，20％的六氢吡啶DMF溶液(15mL)，室温下反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物29p(428mg,类白色固体)，收率77.5％，LCMS：[M+H]+＝1127.5。
第十四步：化合物29的合成
于50mL单口瓶中加入化合物29p(428mg,0.38mmol)，DIPEA(156uL,0.95mmol)，McOSu(166mg,0.57mmol)，20mLDMF溶解，室温下反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物29(386mg,类白色固体)，收率77.0％，LCMS：[M+H]+＝1320.5。
实施例35：
化合物30合成：
Figure BDA0003564748370000731
第一步：化合物30a的合成
于50mL单口瓶中加入化合物29p(560mg,0.50mmol)，DIPEA(161mg,1.25mmol)，化合物M3(423mg,0.75mmol)，10mLDMF溶解，室温下反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物30a(622mg,类白色固体)，收率82.6％，LCMS：[M+H]+＝1507.6。
第二步：化合物30的合成
于50mL单口瓶中加入化合物30a(622mg,0.41mmol)，溴化锌(922mg,4.1mmol)，10mL硝基甲烷溶解，25℃下反应45min，HPLC监测反应终点，反应结束后，40℃减压旋除溶剂得浓缩物，经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物30(260mg,类白色固体)，收率48％，LCMS：[M+H]+＝1322.5。
实施例36：
化合物31合成：
Figure BDA0003564748370000732
Figure BDA0003564748370000741
第一步：化合物31a的合成
于100mL单口瓶中加入5-溴戊酸苄酯(488mg,1.8mmol)、化合物29k(1.8g,1.8mmol)和20mL DMF，搅拌溶解后加入碳酸钾(372mg,2.7mmol)，加毕，升温至60℃反应4h，HPLC监测反应终点。往反应液中加入水40mL，以30mL EA萃取2次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于45℃下减压浓缩，得到粗品，粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物31a(1.8g,类白色固体)，收率84.0％，LCMS：[M+H]+＝1186.5。
第二步：化合物31b的合成
于50mL三口瓶中加入化合物31a(1.8g,1.0mmol)，5％钯硫酸钡(0.36g)，甲酸铵(0.95g,15mmol)，20mL甲醇溶解，氮气保护下，45℃反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液浓缩后，加入20mL DCM，20mL水搅拌均匀后分液，水层用DCM再萃取一次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗一次，分液，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物31b(0.85g,类白色固体)，收率78％，LCMS：[M+H]+＝1096.5。
第四步：化合物31c的合成
于100mL单口瓶中加入化合物31b(850mg,0.85mmol)和15mL DMF，室温搅拌下依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(514mg,2.7mmol)和DMAP(324mg,2.7mmol)，N2保护于室温下搅拌1h，然后加入化合物CBI(参照专利CN109180681A)(376mg,1.0mmol)，N2保护于室温下反应过夜，HPLC显示原料基本反应完全。往反应液中加入水40mL，以30mL DCM萃取2次，合并有机层，依次用水、饱和食盐水各洗一次，分出有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，于40℃下减压浓缩，得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物31c(941mg,类白色固体)，收率78.2％，LCMS：[M+H]+＝1415.6。
第五步：化合物31d的合成
于50mL三口瓶中加入化合物31c(941mg,0.66mmol)，5％钯硫酸钡(188mg)，甲酸铵(415mg,6.6mmol)，20mL甲醇溶解，氮气保护下，45℃反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液浓缩后，加入20mL DCM，20mL水搅拌均匀后分液，水层用DCM再萃取一次，合并有机层，饱和氯化钠水溶液洗一次，分液，无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物31d(735mg,类白色固体)，收率84.0％，LCMS：[M+H]+＝1325.5。
第六步：化合物31e的合成
于50mL单口瓶中加入化合物31d(735mg,0.55mmol)，20％的六氢吡啶DMF溶液(15mL)，室温下反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，过滤，滤液经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物31e(428mg,类白色固体)，收率86.5％，LCMS：[M+H]+＝1103.5。
第七步：化合物31f的合成
于50mL单口瓶中加入化合物31e(524mg,0.48mmol)，DIPEA(168mg,1.30mmol)，化合物M3(441mg,0.78mmol)，10mLDMF溶解，室温下反应2h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物31f(549mg,类白色固体)，收率77.2％，LCMS：[M+H]+＝1483.6。
第八步：化合物31的合成
于50mL单口瓶中加入化合物31f(549mg,0.37mmol)，溴化锌(832mg,3.7mmol)，10mL硝基甲烷溶解，25℃下反应45min，HPLC监测反应终点，反应结束后，40℃减压旋除溶剂得浓缩物，经过高效液相纯化，得产品制备液，冻干得化合物31(213mg,类白色固体)，收率43.5％，LCMS：[M+H]+＝1326.5。
实施例37：
化合物32合成：
Figure BDA0003564748370000751
第一步：化合物32a的合成
于50mL单口瓶中，加入化合物N-炔丙基马来酰亚胺(500mg,3.7mmol)，N3-PEG4-OH(811mg,3.7mmol)，10mL DMF及5mL水溶解，再加入CuSO4·5H2O(1.01g,4.1mmol)，抗坏血酸钠(806mg,4.1mmol)，室温反应1h，HPLC监测反应终点。反应结束后，反应液经过高效液相制备纯化，得到产品制备液，制备液冻干，得到化合物32a(1.06g)，收率81％，LCMS：[M+H]+＝355.1。
第二步：化合物32的合成
于50mL三口瓶中加入化合物32a(20mg，0.056mmol)、化合物A(19.8mg，0.028mmol)、三苯基膦(29.6mg，0.11mmol)及8mL DMF，氮气保护，冰水浴滴加偶氮二甲酸二异丙酯(28uL，0.11mmol)，滴毕升至室温反应，HPLC监测。反应结束后制备纯化，冻干得化合物32(18mg)，收率63％，LC-MS：[M+H]+＝1040.4。
实施例38：
化合物33合成：
Figure BDA0003564748370000761
第一步：化合物33a的合成
按照专利CN111686259A中“化合物22”的合成方法制备。
第二步：化合物33c的合成
于50mL单口瓶中加入化合物33a(500mg，2.0mmol)，溶于8mLDMF中，加入300mg5％Pd/C，氢化反应2h，TLC监测反应终点。反应结束后，过滤，得化合物32b的DMF溶液，备用。
向上述DMF溶液中加入化合物Mc-三肽(992mg，2.0mmol)，PyBop(1.3g，2.5mmol)、HOBt(339mg，2.5mmol)及DIEA(415uL，2.5mmol)，室温反应2h，HPLC监测反应终点。反应液经过高效液相制备纯化，得产品制备液，冻干得化合物33c(580mg)，收率52％，LC-MS：[M+H]+＝559.2。
第三步：化合物33的合成
于50mL三口瓶中加入化合物33c(20mg，0.035mmol)、化合物A(12.6mg，0.018mmol)、三苯基膦(18.4mg，0.07mmol)及5mL DMF，氮气保护，冰水浴滴加偶氮二甲酸二异丙酯(14.2uL，0.07mmol)，滴毕升至室温反应，HPLC监测。反应结束后制备纯化，冻干得化合物33(15mg)，收率68％，LC-MS：[M+H]+＝1244.5。
实施例39(对照例)：
化合物34和35的合成：
Figure BDA0003564748370000771
化合物34按照专利CN105636612 A中“化合物56”的合成方法合成。
Figure BDA0003564748370000772
化合物35按照文献“ACS Med Chem Lett.2016；7:983–987”中“SG3249，tesirine”的合成方法合成。
实施例40：
以下为Trastuzumab的序列：
轻链
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC*
重链
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG。
配体-药物偶联物的制备：
1)通用偶联方法
将通过初步的纯化后单体率大于95％的抗体分子，使用超滤离心管换液至磷酸盐缓冲液中，浓度10mg/mL。加入20倍于抗体摩尔分子数的TCEP，室温下反应4h以打开抗体链间二硫键。加入20倍于抗体摩尔分子数的连接子-药物化合物(payload)，室温下反应2h。反应结束后，使用截留分子量为30KDa的超滤离心管换液至PBS中，并去除未偶联的payload。换液后的ADC样品使用0.22微米除菌过滤器过滤后备用。
2)配体-药物偶联物DAR值的测定
单体率检测条件：
样品14000rpm离心5分钟，取上清液进样分析；
仪器：Waters e2695(2489UV/Vis)；
色谱柱：TSKgel G3000SWXL(7.8×300mm，5μm)；
流动相：A：50mM PB，300mM NaCl，200mM Arg，5％IPA，pH为6.5；
流动相A等度洗脱30min，流速：0.714mL/min，柱温25℃，检测波长：280nm。
DAR检测条件：
样品14000rpm离心5分钟，取上清液进样分析；
仪器：Waters H-class(TUV)；
色谱柱：Proteomix HIC Butyl-NP5(4.6×35mm，5μm)；
流动相：A：1.5M硫酸铵，0.025M无水磷酸钠，pH为7.0，B：0.025M无水磷酸钠，25％IPA，pH为7.0；
流动相A平衡色谱柱，流动相A和B梯度洗脱，流速0.8mL/min；柱温25℃，检测波长：214nm。
实施例41：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-1：
Figure BDA0003564748370000791
实施例42：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-2：
Figure BDA0003564748370000801
实施例43：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-3：
Figure BDA0003564748370000802
实施例44：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-4：
Figure BDA0003564748370000803
实施例45：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-5：
Figure BDA0003564748370000811
实施例46：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-6：
Figure BDA0003564748370000812
实施例47：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-7：
Figure BDA0003564748370000813
实施例48：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-8：
Figure BDA0003564748370000814
实施例49：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-9：
Figure BDA0003564748370000821
实施例50：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-10：
Figure BDA0003564748370000822
实施例51：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-11：
Figure BDA0003564748370000823
实施例52：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-12：
Figure BDA0003564748370000824
实施例53：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-13：
Figure BDA0003564748370000825
实施例54：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-14：
Figure BDA0003564748370000831
实施例55：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-15：
Figure BDA0003564748370000832
实施例56：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-16：
Figure BDA0003564748370000833
实施例57：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-17：
Figure BDA0003564748370000834
实施例58：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-18：
Figure BDA0003564748370000841
实施例59：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-19：
Figure BDA0003564748370000842
实施例60：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-20：
Figure BDA0003564748370000843
实施例61：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-21：
Figure BDA0003564748370000844
实施例62：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-22：
Figure BDA0003564748370000851
实施例63：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-23：
Figure BDA0003564748370000852
实施例64：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-24：
Figure BDA0003564748370000853
实施例65：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-25：
Figure BDA0003564748370000854
实施例66：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-26：
Figure BDA0003564748370000861
实施例67：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-27：
Figure BDA0003564748370000862
实施例68：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-28：
Figure BDA0003564748370000863
实施例69：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-29：
Figure BDA0003564748370000864
实施例70：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-30：
Figure BDA0003564748370000871
实施例71：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-31：
Figure BDA0003564748370000872
实施例72：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-32：
Figure BDA0003564748370000873
实施例73：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-33：
Figure BDA0003564748370000874
实施例74：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-34：
Figure BDA0003564748370000881
实施例75：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-35：
Figure BDA0003564748370000882
实施例76：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-36：
Figure BDA0003564748370000883
实施例77：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-37：
Figure BDA0003564748370000884
实施例78：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-38：
Figure BDA0003564748370000891
实施例79(对照)：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-39：
Figure BDA0003564748370000892
实施例80(对照)：
按照实施例40的通用偶联方法制备得到ADC-40：
Figure BDA0003564748370000893
实施例81：血浆稳定性实验
1.操作
取一定量的ADC样品，加入到已去除人IgG的人血浆中，每种ADC重复三管，放置37℃水浴中孵，分别孵育72h、144h后，取出ADC样品，每管加入ProteinA resin(MabSelectSuReTM LX Lot:#10221479GE，用取PBS洗涤过的)100uL，垂直混合仪晃动吸附2h,经过洗涤洗脱步骤，获得孵育后的ADC。对孵育特定时间的ADC样品进行RP-HPLC检测。
2.结果
表1.本发明公开配体-药物偶联物(ADC)DAR值及单体率数据。
Figure BDA0003564748370000894
Figure BDA0003564748370000901
表2.本发明公开配体-药物偶联物(ADC)血浆稳定性数据。
Figure BDA0003564748370000902
3)结论
如表1所示，本发明公开的ADC具有DAR值(＞7.5)及单体率(＞97％)高的优异性质。
如表2所示，本发明公开的ADC血浆中孵育7天后DAR值仍可以保持较高水平，证明本发明的ADC在血浆中具有优异的稳定性。
实施例82：体外活性测试
1)实验材料
细胞：来源于中国科学院细胞库；
肿瘤细胞培养基：Gibco；
FBS：BIOWEST；
2)培养基的配制
生长培养基(with 10％FBS，Penicillin/streptomycin(100U/mL)；
检测培养基(with 1％FBS，Penicillin/streptomycin(100U/mL)；
3)操作
提前30min开启生物安全柜紫外灯照射，后通风3min。将生长培养基、检测培养基、D-PBS和胰酶放入37℃恒温水浴锅预热，之后用酒精对表面进行消毒，放入生物安全柜中。选择汇合度在～80％的细胞(对数生长期)，放于生物安全柜中，吸掉旧培养基，用D-PBS润洗，吸弃，用胰酶消化2～3min，后加入生长培养基终止胰酶，500×g离心5min。吸去离心上清液，用4mL检测培养基混匀，取100uL计数(其中取出50uL细胞液，加入50μL0.4％TrypanBlue Stain并混匀，混匀后计数)。按照之前设置好的细胞数铺板，80uL/孔铺于96孔板中，孔E11、F11、G11只加80uL检测培养基，边缘孔加入200uL的DPBS封边。待铺板细胞完全贴壁后(通常至少需要4小时)，进行受试样品配置与稀释：用检测培养基配置1.0mL,2.5μM(5×Top Dose)的受试样品，分装于V型96孔板第一列，每孔200μL；后面第2至8列分别加入180μL的检测培养基，从第一列中取30μL加入到第二列，用排枪上下混匀10次，弃枪头，剩余检测浓度点依次操作，进行7倍梯度浓度稀释。将梯度浓度的受试样品按照每孔20uL的量加入细胞中，同时第11列只加入20uL的检测培养基，每个浓度设置3个复孔，随后将96孔板放入5％CO2,37℃细胞培养箱，培养5天。
4)检测
受试样品作用5天后取出MTS试剂，常温避光解冻后，充分涡旋混匀后，在生物安全柜中，沿孔侧壁按每100μL细胞培养体积加入20μL Cell Titer One Solution Reagen MTS试剂，轻轻拍动板面，使MTS溶液混合均匀，放于细胞培养箱中5％CO2,37℃避光静置孵育2h。反应结束后，取出96孔板，于酶标仪中检测OD490 nm吸光值，并进行数据记录、整理、存储。
5)结果
表3：抗体药物偶联物及毒素对N87肿瘤细胞的体外增值抑制的IC50值。
Figure BDA0003564748370000911
Figure BDA0003564748370000921
表4：抗体药物偶联物及毒素对SK-BR-3肿瘤细胞的体外增值抑制的IC50值。
Sample IC50(nM)
化合物A 0.52
化合物B1 4.23
化合物C1 8.67
化合物D1 10.33
ADC-3 0.45
ADC-5 0.60
ADC-7 4.55
ADC-12 5.82
ADC-21 6.11
ADC-30 9.05
ADC-39(对照) 26.12
6)结论
如表3所示，本发明针对HER2靶标的配体-药物偶联物对HER2阳性细胞N87具有明显的体外增值抑制活性，明显优于裸抗(Trastuzumab)、对照组ADC-39。
如表4所示，与裸抗(Trastuzumab)及对照组ADC对比，本发明公开的ADC及单药对HER2阳性的细胞SK-BR-3也具有明显的体外增值抑制活性。
实施例83：体内安全性测试
1)实验材料
细胞：来源于中国科学院细胞库；
肿瘤细胞培养基：Gibco；
Balb/c-nu裸鼠：雌性，5-7周(肿瘤细胞接种时的小鼠周龄)，体重18.0-24.0g，180只(120只加60只富余小鼠)。购自北京维通利华实验动物技术有限公司；
供试品和对照品：
供试品：ADC-3、ADC-40由成都多特抗体药物有限责任公司提供。
Histidine缓冲液，由成都多特抗体药物有限责任公司提供。
0.9％氯化钠注射液：科伦药业有限责任公司。
2)细胞培养
NCI-H1975(人非小细胞肺癌腺癌细胞)培养在RPMI1640培养基中。收集指数生长期的NCI-H1975细胞，RPMI1640培养基重悬至适合浓度后用于小鼠皮下肿瘤接种。
3)动物造模和随机分组
120只雌性裸鼠右肩侧皮下接种5×107个NCI-H1975细胞。待肿瘤平均体积170mm3左右时，根据肿瘤大小随机分组。选取120只肿瘤体积合适的荷瘤小鼠，随机分组并开始给药(尾静脉注射，给药体积按0.1mL/10g)。分组当天定义为第0天。
4)供试品和对照品的配制
表5.在NCI-H1975(人非小细胞肺癌腺癌细胞)移植瘤模型中抗肿瘤作用研究的供试品和对照品溶液的配制。
Figure BDA0003564748370000931
Figure BDA0003564748370000941
注：使用前混匀，确保制剂是均一的。
5)实验观察和数据收集
本实验过程中，动物实验操作均根据抗肿瘤药物体内筛选试验标准操作规程的要求。肿瘤接种后，常规监测包括了肿瘤生长(肿瘤每周测量2次)及治疗对动物正常行为的影响，具体内容有实验动物的活动性，摄食和饮水情况，体重增加或降低(体重每周测量2次)情况，眼睛、被毛及其它异常情况。实验过程中观察到的临床症状均记录在原始数据中。肿瘤体积计算公式：肿瘤体积(mm3)＝1/2×(a×b2)(其中a表示长径，b表示短径)。实验中采用人工记录数据，包括肿瘤的长短径的测量和动物体重的称量。
6)结果
表6：给药抗体药物偶联物(11.25mg/kg)对NCI-H1975移植瘤小鼠体重影响情况。
Figure BDA0003564748370000942
Figure BDA0003564748370000951
注：*标识组观察到小鼠死亡
7)结论
如表6所示，本发明公开ADC-3在低剂量及高剂量对NCI-H1975荷瘤小鼠的体重影响明显相比于ADC-40的影响小，即便在该高剂量组下，也未出现如对照组所示的小鼠死亡，证明本发明所述的ADC药物在安全性方面具有显著的优势。

Claims (25)

1.一种如式I所示的配体-药物偶联物，或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物：
Ab-L-D
(I)
其中：
Ab为配体单元，选自抗体、抗体片段、靶向蛋白或Fc-融合蛋白；
L为D与Ab的连接单元；
D为药物单元，选自以下结构：
Figure FDA0003564748360000011
其中：
波浪线表示药物与L连接的位点，且只存在三个位点中的一个位点与L相连；
R1为H、氘、OH或由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
在N和C之间的双线
Figure FDA0003564748360000012
表示单键或双键，条件是，当其为双键时，N处不与L相连且R1是H；当其为单键时，N处与L相连，R1选自OH或由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
R2为H或烷基取代基；
T选自于C2-C12烃基、Z、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烯基)-Z-(C1-C6亚烯基)或(C1-C6亚炔基)-Z-(C1-C6亚炔基)；
其中：
Z选自O、S、NR4、芳基或杂芳基；其中R4选自于H、P(O)3H2或C(O)NR5R6；其中R5和R6选自H、C1-C6烷基、一个或多个F取代的C1-C6烷基、或者R5和R6形成五元或六元杂环基基团；
亚烷基，亚烯基，芳基和杂芳基选自F、OH、O(C1-C6烷基)、NH2、NHCH3、N(CH3)2或C1-C6烷基取代的，其中烷基是用一个或多个F取代的；
Y选自于一个或多个H或C1-C4的烷基；
X选自于-O-、-N-、-S-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-；
其中：
R7、R8分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、氘代烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；或者，R7、R8及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；
R9、R10相同或者不同，且分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基、羟基、氨基、氰基、硝基、羟烷基、环烷基或杂环基；或者，R9、R10及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；m选自0-4的整数；
X1选自于卤素或OSO2R11，其中R11选自于H、C1-C4的烃基、苯基或者取代苯基。
2.根据权利要求1所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物，其特征在于：Ab为抗体，可通过其杂原子与连接单元形成连接键，所述抗体选自鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体、抗体片段、双特异性抗体或多特异性抗体。
3.根据权利要求1或2所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物，其特征在于，所述的抗体或其抗原结合片段，非限制性地选自：抗EGFR VIII抗体、抗DLL-3抗体、抗PSMA抗体、抗CD70抗体、抗MUC16抗体、抗ENPP3抗体、抗TDGF1抗体、抗ETBR抗体、抗MSLN抗体、抗TIM-1抗体、抗LRRC15抗体、抗LIV-1抗体、抗CanAg/AFP抗体、抗cladin18.2抗体、抗Mesothelin抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗c-MET抗体、抗SLITRK6抗体、抗KIT/CD117抗体、抗STEAP1抗体、抗SLAMF7/CS1抗体、抗NaPi2B/SLC34A2抗体、抗GPNMB抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗MUC1/CD227抗体、抗AXL抗体、抗CD166抗体、抗B7-H3(CD276)抗体、抗PTK7/CCK4抗体、抗PRLR抗体、抗EFNA4抗体、抗5T4抗体、抗NOTCH3抗体、抗Nectin 4抗体、抗TROP-2抗体、抗CD142抗体、抗CA6抗体、抗GPR20抗体、抗CD174抗体、抗CD71抗体、抗EphA2抗体、抗LYPD3抗体、抗FGFR2抗体、抗FGFR3抗体、抗FRα抗体、抗CEACAMs抗体、抗GCC抗体、抗Integrin Av抗体、抗CAIX抗体、抗P-cadherin抗体、抗GD3抗体、抗Cadherin 6抗体、抗LAMP1抗体、抗FLT3抗体、抗BCMA抗体、抗CD79b抗体、抗CD19抗体、抗CD33抗体、抗CD56抗体、抗CD74抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD37抗体、抗CD47抗体、抗CD138抗体、抗CD352抗体、抗CD25抗体或抗CD123抗体。
4.根据权利要求1或2所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物，其特征在于：L为可裂解型或不可裂解型。
5.如权利要求1或2中所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物，其特征在于：所述药学上可接受的盐，包括与结构式中酸性官能团形成的钠盐、钾盐、钙盐或镁盐；或与结构中碱性官能团形成的醋酸盐、三氟乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、硝酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乳酸盐、油酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
6.一种如权利要求1-5任一所述的配体药物偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物，其制备用于治疗或预防肿瘤药物的用途。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为实体瘤或血液瘤。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为乳腺癌、卵巢癌、***、子宫癌、***癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、多形性胶质细胞瘤、肉瘤、淋巴瘤或白血病。
9.一种用于与权利要求1中所述Ab连接的通式为II或III的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
Figure FDA0003564748360000041
其中：
R1为H、OH或由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
在N和C之间的双线
Figure FDA0003564748360000042
表示单键或双键，条件是，当其为双键时，R12不存在且R1是H；当其为单键时，R12为-C(O)O-L3，其中L3为连接单元；R1选自OH、由OR3表示的醚、亚硫酸根SO3 -或OSO3 -，其中R3选自C1-C10的直链、支链或环状烷基、烯基或炔基；
R2为H或烷基取代基；
T选自于C2-C12烃基、Z、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)-Z-(C1-C6亚烷基)、(C1-C6亚烯基)-Z-(C1-C6亚烯基)或(C1-C6亚炔基)-Z-(C1-C6亚炔基)；
其中：
Z选自O，S，NR4，芳基和杂芳基；其中R4选自于H，P(O)3H2，C(O)NR5R6，其中R5和R6选自H，C1-C6烷基，一个或多个F取代的C1-C6烷基，或者R5和R6形成五元或六元杂环基基团；
亚烷基，亚烯基，芳基和杂芳基选自F，OH，O(C1-C6烷基)，NH2，NHCH3，N(CH3)2和C1-C6烷基取代的，其中烷基是用一个或多个F取代的；
Y选自于一个或多个H或C1-C4的烷基；
X选自于-O-、-N-、-S-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-、-OC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-、-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-NH-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-S-；
其中：
R7、R8分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、氘代烷基、卤代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基；或者，R7、R8及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；
R9、R10相同或者不同，且分别独立地为氢原子、氘原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基、羟基、氨基、氰基、硝基、羟烷基、环烷基或杂环基；或者，R9、R10及其所连接碳原子构成C3-C6环烷基、环烷基烷基或杂环基；
m选自0-4的整数；
X1选自于卤素或OSO2R11，其中R11选自于H，C1-C4的烃基，苯基或者取代苯基；
L1，L2为连接单元或取代基。
10.根据权利要求9所述化合物II、III或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：T选自C2-C12的亚烷基。
11.根据权利要求9或10所述的化合物II、III或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：T为
Figure FDA0003564748360000051
12.根据权利要求9或10所述化合物II、III或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：X为-O-、-N-或-NHC(O)-CR7R8-(CR9R10)m-O-。
13.根据权利要求9或10所述化合物II、III或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，L3为：
Figure FDA0003564748360000052
其中：波浪线处与-C(O)O-相连；L4为连接单元，与配体单元相连。
14.根据权利要求9或10所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，L4非限制性地选自：
Figure FDA0003564748360000061
其中：波浪线处，左侧碳端与配体单元相连，右侧氮端或酯羰基端与X2相连。
15.根据权利要求9或10所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，Q为：
Figure FDA0003564748360000062
其中Qx为氨基酸残基或由氨基酸构成的肽残基。
16.根据权利要求9或10所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂物，其特征在于X2为：
Figure FDA0003564748360000063
其中a选自0-5的整数，b选自0-16的整数，c选自0-1的整数，d选自0-5的整数。
17.根据权利要求9或10所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，L3非限制性地选自：
Figure FDA0003564748360000064
其中：波浪线处，左侧丁二酰亚胺端与配体单元相连，右侧与-C(O)O-相连。
18.根据权利要求9或10所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于L1和L2分别独立选自：
结构A：氢原子、C(O)NR′R″，其中R′和R″分别选自H、C1-C6烷基，一个或多个F取代的C1-C6烷基；或者R′和R″形成五元或六元杂环基基团；
结构B：L4-L5-，L4-L6-或L4-L7-L8-L9-，其中L4、L5、L6、L7、L8和L9均为连接单元，L4与配体单元连接，L5、L6、L9与X相连。
19.根据权利要求9或10所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：
当N和C之间为单键，即R12存在时，L1、L2分别独立选自于结构A；
当N和C之间为双键，即R12不存在时，L1为结构A或B，则L2为结构B或A。
20.根据权利要求18所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：
L5为-((CH2)sO)r(CH2)sX3L10-或-((CH2)sO)r(CH2)sX4L10-；
L6为-((CH2)sO)r(CH2)s-；
L10为-(CH2)s-或-((CH2)sNHC(＝O)X5X6C(＝O)(CH2)s-；
其中：
X3非限制性地选自：
Figure FDA0003564748360000071
其中R13独立选自氢原子、C1-C6烃基、卤素原子或羟基；
X4非限制性地选自：
Figure FDA0003564748360000072
其中R13独立选自氢原子，C1-C6烃基、卤素原子或羟基；
X5非限制性地选自：
Figure FDA0003564748360000081
X6选自由氨基酸组成的肽残基，非限制性地选自:
Figure FDA0003564748360000082
s选自1-10的整数，r选自1-14的整数。
21.根据权利要求18所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：
L7为-NC(R14R15)C(O)、-NR16(CH2)oC(O)-、-NR16(CH2CH2O)oCH2C(O)-、-S(CH2)pC(O)-或者化学键，其中o选自0-20的整数；p选自0-20的整数；R14与R15相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、烷基、取代烷基、氘代烷基、杂烷基、羧基、氨基、取代氨基；R16选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、芳基、取代芳基或杂芳；
L8选自由氨基酸构成的肽残基；
L9为-NR17(CR18R19)q-、-C(O)NR17-、-C(O)NR17(CH2)q-或者化学键，其中q选自0-6的整数；R17、R18和R19相同或者不同，且各自独立地选自氢原子、氘原子、卤素、烷基、取代烷基、氘代烷基、环烷基、环烷基烷基、烷氧基烷基、杂环基、芳基、取代芳基或杂芳基。
22.根据权利要求21所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于：所述L8为一个或多个选自苯丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸或者天冬氨酸中的氨基酸形成的肽残基。
23.根据权利要求19所述化合物II、III，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于L1、L2独立从结构B中非限制性地选自：
Figure FDA0003564748360000083
Figure FDA0003564748360000091
24.根据权利要求9所述化合物II、III或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其特征在于，非限制性地选自结构：
Figure FDA0003564748360000101
Figure FDA0003564748360000111
Figure FDA0003564748360000121
Figure FDA0003564748360000131
25.根据权利要求1中所述的抗体-药物偶联物或其药学上可接受的盐、氘代物、溶剂化物，其特征在于，非限制性地选自以下结构：
Figure FDA0003564748360000132
Figure FDA0003564748360000141
Figure FDA0003564748360000151
Figure FDA0003564748360000161
Figure FDA0003564748360000171
Figure FDA0003564748360000181
Figure FDA0003564748360000191
Figure FDA0003564748360000201
其中u选自1-10的整数。
CN202210299307.0A 2021-04-01 2022-03-25 一种dna毒性二聚体化合物及其偶联物 Pending CN115192732A (zh)

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