CN115184496A - 测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，属于药物检测技术领域。该方法包括以下步骤：制备释放介质A和释放介质B，向透析袋中加入释放介质A和药物，向溶出瓶中加入释放介质B，将透析袋置于溶出瓶中，将溶出瓶置于37℃～40℃的恒温水浴摇床中，于不同时间点从溶出瓶中取样，进行HPLC检测，以药物的累积释放量与药物总量的比值计算药物的释放度。本发明的有益之处在于：更能模拟药物在体内的过程，能很好的反映药物在体内的释放行为，具有良好的体内外相关性，也更适合难溶性制剂的测定；大大减少了药物的使用量；操作简单，材料易得，具有良好的专属性、灵敏度、线性、重复性、准确度、稳定性和释放重现性。

Description

测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法

技术领域

本发明涉及测定药物的释放度的方法，具体涉及测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，属于药物检测技术领域。

背景技术

阿立哌唑是一种二氢喹啉酮类抗精神病药物，其对多巴胺-2(D2)受体与5-羟色胺1A(5-HT1A)受体部分激动，同时对5-羟色胺2A(5-HT2A)受体完全拮抗，这一独特的药理学特性使得阿立哌唑能在多巴胺能神经传递水平降低时增强神经传递功能，在多巴胺能神经传递水平亢进时降低神经传递功能，因此阿立哌唑也被称为首个“多巴胺***稳定剂”。阿立哌唑不仅能改善抑郁患者的负性认知、阴性症状，还可以改善阳性精神症状，且有较好的安全性和耐受性，临床上广泛用于精神***症、双相障碍、重度抑郁症、自闭症和儿童孤独症等的治疗。

阿立哌唑的一种临床常用的长效制剂——阿立哌唑长效干混悬注射剂(商品名：Abilify Maintena)是一月一次的肌肉注射制剂，该制剂不仅明显延长了药物的作用时间，可维持体内长时间的药物暴露量、提高药物的生物利用度，而且明显减少了患者的用药频率，显著提高依从性。

与普通剂型一样，阿立哌唑长效干混悬注射剂需要在体内达到一定的血药浓度后才能发挥药效，因此药物释放和吸收是影响体内药效的关键因素。目前，测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法主要是进口药品注册标准中的溶出方法——溶出仪桨法，取本品，照溶出度与释放度测定法测定(中国药典2015版四部通则0931第二法)。测定过程具体操作如下：

将冻干粉末与灭菌注射用水混合，用力振摇20s后，将注射针头(22G，1.5英寸)安装在注射器上，排出6mL(400mg规格)置溶出杯中，以0.25％十二烷基硫酸钠(Sigma-Aldrich，规格为L6026，纯度≥99.0％)溶液894mL(400mg规格)为溶出介质，转速为50rpm，依法操作，经15min、2h、8h取溶液10mL，并即时补充相同温度、相同体积的溶出介质，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；另精密称取阿立哌唑对照品约50mg，置1000mL量瓶中，加100mL乙醇使溶解，用1％十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻度，作为对照品溶液。取上述两种溶液，照紫外-可见分光光度法(中国药典2015版四部通则0401)，在252nm与325nm波长处测定两者的吸光度，以差值计算每支注射剂的释放度。本品在15min、2h、8h的释放度分别为标示量的32％～52％、55～75％和85％以上，均应符合规定。

由于阿立哌唑长效干混悬注射剂通过肌肉注射的方式给药后，会在注射部位形成药物贮库，而后通过缓慢的溶解、释放和吸收，产生长效缓释的作用，加之阿立哌唑是BCSⅡ类化合物，难溶性药物，所以采用传统的释放方法测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度会存在以下一些问题：

(1)由于传统的释放方法采用大体积的释放介质，所以可能会导致阿立哌唑长效干混悬注射剂注射后的溶解体积被高估；

(2)由于传统的释放方法中阿立哌唑长效干混悬注射剂(冻干粉末)混悬于溶出杯的释放介质中，在取样的操作过程中悬浮的药物微粒也可能被取出，造成损失，所以可能会导致溶出度的测定出现较大的误差。

此外，由于阿立哌唑长效干混悬注射剂制剂要求高，所以生产成本高，但是溶出仪桨法的释放度测定方法需要的加样量大，因此释放检测需要的成本较高。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可靠的、能长期释放、更能模拟体内过程的释放方法，亦可以通过加速释放的方式得到快速释放曲线，经济实用且可以满足检验和质量控制的需求的检测阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1：向浓度为0.1mol/L、pH＝7.4的PBS缓冲液中加入吐温80，吐温80的浓度为0.2ml/L，调节混合溶液的pH值至6.4，超声脱气，制备得到释放介质A；

Step2：称取SDS和叠氮化钠，分别用少量超纯水溶解后混合并定容，SDS的浓度为2.5g/L，叠氮化钠的浓度为1.0g/L，超声脱气，制备得到释放介质B；

Step3：向透析袋中加入1mL释放介质A和3.5mg阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末，扎紧透析袋，向溶出瓶中加入45mL释放介质B，将透析袋置于溶出瓶中，将溶出瓶置于已经维持在37℃～40℃的恒温水浴摇床中，做三个平行，于不同时间点从溶出瓶中取样，并向溶出瓶中补等量新鲜释放介质B；

Step4：将在不同取样时间点得到的样品过0.22μm滤膜，得到供试品溶液，使用高效液相色谱***测定供试品溶液的峰面积；

Step5：每个时间点的释放量通过外标法以峰面积计算，以药物的累积释放量与药物总量的比值计算阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度。

优选的，还包括对透析袋进行前处理的步骤，具体的：将透析袋剪下合适的长度，先置于超纯水中浸泡1h，然后置于乙醇-水溶液中浸泡20min，乙醇和水的体积比为2:8，最后置于2℃～8℃保存备用。

优选的，在Step3中，所述透析袋选用的是8kD～14kD的再生纤维素透析袋。

优选的，在Step3中，每次取样2mL，过0.22μm滤头。

优选的，在Step4中，所述滤膜选用的是聚醚砜滤膜，弃去0.5mL以上续滤液得到供试品溶液。

优选的，在Step4中，所述高效液相色谱***的色谱条件具体如下：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18，4.6×150mm，5μm；

柱温：35℃；

流速：1.0mL/min；

检测波长：257nm；

进样体积：20μL；

流动相：150mL浓度为20mmol/L的磷酸二氢钾溶液与350mL乙腈混合，用磷酸调节pH值至7.4，超声脱气20min。

本发明的有益之处在于：

(1)本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，具体使用溶出瓶法结合透析袋，相对于传统的释放方法更能模拟药物在体内的过程，能很好的反映药物在体内的释放行为，具有良好的体内外相关性，也更适合难溶性制剂的测定；

(2)本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，与传统的释放方法相比，使用透析袋装载阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末，可以避免造成取样操作中的样品损失，且大大减少了药物的使用量；

(3)本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，操作简单，材料易得，具有良好的专属性、灵敏度、线性、重复性、准确度、稳定性和释放重现性，为测定阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末的释放度提供了可靠的方法；

(4)本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，在温度加速的条件下，可以实现阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末快速的完全释放，可以依据具体的实验需求选择合适的温度条件，为测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度提供了可靠且多元化的选择。

附图说明

图1是供试品溶液和空白释放介质的HPLC图，其中，(a)是供试品溶液的HPLC图，(b)是空白释放介质的HPLC图；

图2是阿立哌唑释放度测定的-线性范围标准曲线图；

图3是在不同的释放介质A条件下，供试品的时间-释放度曲线图；

图4是在37℃、38.5℃和40℃条件下，供试品的时间-释放度曲线图；

图5是37℃和加速条件下(38.5℃和40℃)释放度的相关关系图，其中，(a)是37℃和38.5℃释放度的相关关系图，(b)是37℃和40℃释放度的相关关系图；

图6是采用本发明给出的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法得到的供试品释放曲线和体内释药的相关性图，其中，(a)是体外实验(37℃)时药物累积释放曲线与兔肌注给药后体内药物累积释放度(吸收度)拟合的线性相关性图，(b)是以体外实验(37℃)药物累积释放度和兔肌注给药体内药物累积释放度(吸收度)拟合的线性相关性图。

具体实施方式

本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，具体使用溶出瓶法结合透析袋，并在透析袋内和溶出瓶内分别装载不同的释放介质，其中，装载在透析袋内的释放介质记为释放介质A(模拟注射部位贮库周围的组织液)，装载在溶出瓶内的释放介质记为释放介质B(模拟全身血液)。在释放的过程中，阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末首先在透析袋内被释放介质A溶解，溶解后的药物穿过透析袋进入到溶出瓶中，然后在释放介质B中被取样测定。

为了更好的理解和阐明本发明，下面结合具体实施例对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

一、测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度

实施例1

1、透析袋前处理

选用8kD～14kD的再生纤维素透析袋。再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60℃，可以满足根据不同的实验需求选择的加速实验。

将透析袋剪下合适的长度(约8cm)，先置于超纯水中浸泡1h，然后置于乙醇-水(V:V＝2:8)溶液中浸泡20min，最后置于2℃～8℃保存备用。

使用前，先将透析袋置于超纯水中漂洗两次，然后再置于超纯水中浸泡20min，之后把透析袋的一端扎紧，最后接一些清水轻轻挤压观察透析袋是否漏液，确定透析袋不漏液后方可使用。

在本发明中，透析袋是用来模拟阿立哌唑长效干混悬注射剂在注射部位形成贮库的体内过程。透析袋经过上述前处理后，可以减少吸附药物粉末的可能性。

2、制备释放介质A和释放介质B

(1)制备释放介质A

释放介质A为0.1mol/L的PBS缓冲液中加入吐温80(表面活性剂)，吐温80的浓度为0.2ml/L(体积分数为0.02％)。

制备释放介质A的方法具体如下：

先制备得到1L浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液(pH＝7.4)，然后向PBS缓冲液中加入0.2ml吐温80，吐温80的浓度为0.2ml/L(体积分数为0.02％)，之后用磷酸溶液调节混合溶液的pH值至6.4，最后超声脱气20min，制备得到释放介质A。

(2)制备释放介质B

释放介质B为2.5g/L的十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液中加入叠氮化钠(防腐剂)，叠氮化钠的浓度为1.0g/L。

制备释放介质B的方法具体如下：

先称取2.5g SDS和1.0g叠氮化钠，然后用少量超纯水溶解，之后混合并定容到1L，最后超声脱气20min，制备得到释放介质B。

3、模拟释放过程

向透析袋中加入1mL释放介质A和3.5mg阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末，扎紧透析袋的另一端。

向溶出瓶中加入45mL释放介质B。

将透析袋置于溶出瓶中，将溶出瓶置于已经维持在37℃±0.5℃(该温度是人体正常温度，在该温度下可以更好的模拟药物在体内的释放行为)的恒温水浴摇床中，做三个平行，转速75rpm，自放样时刻起，第6h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d、9d、11d、13d、15d、17d、19d、21d、23d、25d、28d、30d、33d、35d、37d从溶出瓶中取样(释放液)，每次取样2mL，过0.22μm滤头，同时每次向溶出瓶中补新鲜释放介质B 2mL。

4、进行HPLC检测

(1)色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18，4.6×150mm，5μm。

柱温：35℃。

流速：1.0mL/min。

检测波长：257nm。

进样体积：20μL。

流动相：150mL浓度为20mmol/L的磷酸二氢钾溶液(取1.3609g磷酸二氢钾固体，用纯净水定容到10ml，配制得到浓度为1mol/L的母液，过滤后取3mL母液，加入到147mL娃哈哈纯净水中)与350mL乙腈混合，用磷酸调节pH值至7.4，超声脱气20min。

(2)准备供试品溶液

将在不同取样时间点得到的样品(释放液)过0.22μm聚醚砜滤膜，弃去0.5mL以上续滤液(聚醚砜滤膜对阿立哌唑才没有吸附)，以剩余续滤液作为供试品溶液。

(3)检测

使用高效液相色谱***测定供试品溶液的峰面积。测定结果见下表：

表1在37℃释放条件下供试品溶液的峰面积

5、计算释放度

每个时间点的释放量通过外标法以峰面积计算，以药物的累积释放量与药物总量的比值计算阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度，其中，药物的累积释放量为第n次取样的药物释放量m_n与此前每次取样时取出的药物释放量的总和，释放度具体根据下列公式进行计算：

经计算，阿立哌唑长效干混悬注射剂在37℃释放条件下的释放度具体如下：

表2阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度(37℃)

实施例2

与实施例1基本相同，差别仅在于恒温水浴摇床的温度，具体的：在模拟体外释放时，将溶出瓶置于已经维持在38.5℃±0.5℃的恒温水浴摇床中。

经高效液相色谱***测定，供试品溶液的峰面积见下表：

表3在38.5℃释放条件下供试品溶液的峰面积

经计算，阿立哌唑长效干混悬注射剂在38.5℃释放条件下的释放度具体如下：

表4阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度(38.5℃)

实施例3

与实施例1基本相同，差别仅在于恒温水浴摇床的温度，具体的：在模拟体外释放时，将溶出瓶置于已经维持在40℃±0.5℃的恒温水浴摇床中。

经高效液相色谱***测定，供试品溶液溶液的峰面积见下表：

表5在40℃释放条件下供试品溶液的峰面积

经计算，阿立哌唑长效干混悬注射剂在40℃释放条件下的释放度具体如下：

表6阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度(40℃)

取样时间	释放度(％)	取样时间	释放度(％)	取样时间	释放度(％)
						6h	1.89	5d	78.48	11d	101.20
1d	14.35	6d	86.08	13d	103.14
						2d	35.68	7d	90.72	15d	104.56
3d	53.59	8d	94.70	17d	104.46
						4d	67.52	9d	98.31	19d	104.96

以取样时间为横坐标、释放度为纵坐标作图，得到供试品分别在37℃、38.5℃和40℃释放条件下的时间-释放度曲线，见图4。

由图4可知：在37℃、38.5℃和40℃释放条件下阿立哌唑长效干混悬注射剂均能完全释放，且释放速度不同，在加速条件(38.5℃和40℃)下释放的速度更快。

二、优化检测条件

在确定本发明的前述测定方法前，我们对释放介质B的浓度、释放介质A的pH值、吐温80的体积分数以及释放液的预处理方法都进行了研究。

1、释放介质B的浓度

为了确定溶出瓶中的释放介质，分别采用浓度为1.0g/L、2.5g/L、10.0g/L的SDS水溶液测定阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末的平衡溶解度。

(1)配制释放介质

1.0g/L的SDS水溶液：精密称取0.1g SDS固体粉末，用超纯水定容到100mL，超声混匀。

2.5g/L的SDS水溶液：精密称取0.25g SDS固体粉末，用超纯水定容到100mL，超声混匀。

10.0g/L的SDS水溶液：精密称取1.0g SDS固体粉末，用超纯水定容到100mL，超声混匀。

(2)释放并取样

分别取5mL浓度为1.0g/L、2.5g/L、10.0g/L的SDS水溶液，加入到10mL玻璃管中，然后再向玻璃管中加入过量的阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末，各三个平行，将玻璃管放置在已经维持在37℃±0.5℃的恒温水浴摇床中，间隔24h取样(释放液)，过0.22μm滤膜，直至两次间隔的溶解量差值小于5％，认为达到平衡溶解度。

(3)进行HPLC测定

采用实施例1中记载的色谱条件测定释放液中阿立哌唑的峰面积。

经计算，不同时间的阿立哌唑长效干混悬注射剂在37℃条件下的溶解度具体如下：

表7阿立哌唑长效干混悬注射剂的溶解度(37℃)

由表7可知：

(i)阿立哌唑在1.0g/L SDS水溶液中的溶解度过小，1.0g/L SDS水溶液不适合用作释放介质；

(ii)阿立哌唑在10.0g/L SDS水溶液中的溶解度过大，若以10.0g/L SDS水溶液做释放介质，则释放装置(溶出瓶)中所需的释放介质的体积较小，因此10.0g/L SDS水溶液也不适合用作释放介质；

(iii)阿立哌唑在2.5g/L SDS水溶液中的溶解度为182.43μg/mL，满足漏槽条件，并且体积适合释放装置，因此优选2.5g/L SDS水溶液作为溶出瓶中的释放介质。

此外，2.5g/L SDS水溶液其浓度已经超过SDS的临界胶束浓度，不能透过透析袋，并且此时的释放介质B具有增溶作用。

2、释放介质A的pH值以及吐温80的体积分数

分别采用六种含有不同体积分数的吐温80、不同pH值的PBS缓冲液作为透析袋内的释放介质，以2.5g/L SDS+1.0g/L叠氮化钠作为溶出瓶中的释放介质，测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度。

(1)配制透析袋内的释放介质

条件1：向20mL pH＝6.4的0.1mol/L PBS缓冲液中加入4μL吐温80(浓度为0.2ml/L，体积分数为0.02％)，超声混匀，用磷酸调节pH值至6.4。

条件2：向20mL pH＝6.4的0.1mol/L PBS缓冲液中加入10μL吐温80(浓度为0.5ml/L，体积分数为0.05％)，超声混匀，用磷酸调节pH值至6.4。

条件3：向20mL pH＝6.4的0.1mol/L PBS缓冲液中加入20μL吐温80(浓度为1.0ml/L，体积分数为0.1％)，超声混匀，用磷酸调节pH值为6.4。

条件4：向20mL pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液中加入4μL吐温80(浓度为0.2ml/L，体积分数为0.02％)，超声混匀。

条件5：向20mL pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液中加入10μL吐温80(浓度为0.5ml/L，体积分数为0.05％)，超声混匀。

条件6:向20mL pH＝7.4的0.1mol/L PBS缓冲液中加入20μL吐温80(浓度为1.0ml/L，体积分数为0.10％)，超声混匀。

(2)配制溶出瓶内的释放介质

先称取2.5g SDS和1.0g叠氮化钠，然后用少量超纯水溶解，之后混合并定容到1L，SDS的浓度为2.5g/L，叠氮化钠的浓度为1.0g/L，最后超声脱气20min。

(3)释放并取样

取阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末3.5mg，精密称定并置于分别装有1mL上述六种条件释放介质的透析袋中，透析袋扎紧置于45mL 2.5g/L SDS+1.0g/L叠氮化钠的溶出瓶中，将溶出瓶置于37℃恒温水浴摇床中，转速75rpm，在不同时间取样2mL，用0.22μm滤膜过滤，即得供试品溶液。

(4)进行HPLC测定

采用实施例1中记载的色谱条件测定释放液中阿立哌唑的峰面积。

经计算，不同时间的阿立哌唑长效干混悬注射剂在37℃释放条件下的释放度具体如下：

表8 6种不同条件下阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度(37℃)

以取样时间为横坐标、释放度为纵坐标作图，得到在不同的释放介质A条件下，供试品的时间-释放度曲线，见图3。

由图3可知：

(i)透析袋内的释放介质的pH值为7.4时，释放均太慢，其中，加入吐温80的体积分数为0.02％时，第17d时的释放度为38.10％，加入吐温80的体积分数为0.05％时，第17d时的释放度为43.51％，加入吐温80的体积分数为0.10％时，第17d时的释放度为48.03％；

(ii)透析袋内的释放介质的pH值为6.4时，加入吐温80的体积分数为0.05％和0.10％时，释放均太快，分别于第7d和第11d释放度达到90％以上，对于分阶段的体内预测，可能会导致方法区分力不足，加入吐温80的体积分数为0.02％时，释放速度适中，与体内释放结果最相似，故优选条件1中的释放介质作为透析袋内的释放介质。

3、释放液的预处理方法

对照组：将释放液于13000rpm高速离心10min，留上清液。

试验组：将释放液分别用0.22μm的聚醚砜(PES)膜过滤，弃去不同体积的滤液，考察弃去滤液的体积对样品测定结果是否有影响。

采用实施例1中记载的色谱条件测定预处理后的释放液中的阿立哌唑的浓度，检测结果见下表：

表9不同预处理方法对测定阿立哌唑浓度的影响

由上表可知：与高速离心相比，用0.22μm的聚醚砜膜过滤释放液时，必须弃去0.5mL以上滤液，聚醚砜膜对阿立哌唑才没有吸附。

因此，在样品过滤取续滤液时，弃去的滤液体积必须大于0.5mL。

三、释放度方法学验证

1、测定方法的专属性

供试品溶液和空白释放介质的HPLC图见图1，由图1可知：空白的释放介质不会对供试品的测定产生影响。

2、浓度与峰面积的线性关系

对照品储备液：精密称取一定量的对照品，加入乙腈：水(7:3)溶解，配制得到200μg/mL对照品储备液。

系列线性溶液：将对照品储备液用释放介质B进行稀释，配制成1μg/mL～60μg/mL浓度水平的系列线性溶液。

HPLC检测：采用实施例1中记载的色谱条件测定系列线性溶液中阿立哌唑对应的峰面积，检测结果见下表：

表10系列线性溶液中阿立哌唑对应的峰面积

编号	浓度(μg/mL)	峰面积	平均值
				1	1	33.6、33.9、33.6	33.7
2	5	168.8、170.7、169.6	169.7
				3	10	334.4、341.0、335.3	336.9
4	30	1000.8、1011.4、1004.7	1005.6
				5	60	1981.8、2006.0、2003.7	1997.2

将浓度与峰面积进行线性拟合，得到阿立哌唑的释放度的方法学验证线性图，见图2。

由图2可知：阿立哌唑浓度在1μg/mL～60μg/mL范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，线性方程y＝33.268x+3.3521，R²＝1.0000(≥0.999)。

3、精密度、重复性和稳定性

采用实施例1中记载的色谱条件测定溶液中阿立哌唑对应的峰面积。

精密度与重复性：分别稀释阿立哌唑储备液得到10μg/mL、30μg/mL的阿立哌唑标准液样品，重复进样6次。

稳定性：平行稀释阿立哌唑储备液得到浓度为10μg/mL的阿立哌唑标准液样品12份，配制完成后，取其中6个样品立即进样，剩余6个样品在室温放置48h后再进行测定。

各稀释液中阿立哌唑对应的峰面积具体如下：

表11各稀释液中阿立哌唑对应的峰面积

由上表可知：本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其精密度和重复性的RSD分别为0.78％、0.68％，稳定性的RSD为0.92％，该方法可以满足测定要求。

三、比较37℃条件与加速条件下的释放度

将阿立哌唑长效干混悬注射剂在38.5℃条件下的释放结果(实施例2，表4)以及在40℃条件下的释放结果(实施例3，表6)分别与在37℃条件下的释放结果(实施例1，表2)进行线性相关性拟合。拟合结果见图5。

由图5可知：本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，在不改变释放机制的前提下不仅提供了可以模拟如时间相关的更多更复杂的体内释放情况的体外释放度测定方法，而且提供了缩短周期的加速实验，可以根据不同的实验需求选择实验条件，提供了可靠且多元化的选择。

四、体外释放和体内释放的相关性

对健康雄性新西兰白兔进行阿立哌唑长效干混悬注射剂单次给药，给药剂量18mg/kg，给药体积0.2mL/kg。

在给药的第2h、6h、1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d、8d、10d、12d、14d、16d、18d、21d、24d、31d、35d、38d、49d采集血样，通过LC-MS/MS法测定血药浓度，得到血药浓度-时间曲线。

对得到的血药浓度-时间曲线用药时曲线下面积占比法(％AUC法)进行处理，得到阿立哌唑长效干混悬注射剂在新西兰白兔体内的累积释放度，结果如下表所示：

表12血药浓度及累积释放度

将实施例1中的体外释放度曲线与体内累积释放度曲线进行拟合。拟合结果见图6。

由图6可知：采用本发明提供的测定方法得到的阿立哌唑长效干混悬注射剂的体外释放度与体内累积释放度有良好的相关性(R²＝0.99728)。

这说明：本发明提供的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法是一个成熟的、能满足质量控制需求的方法。

Claims (6)

1.一种测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1：向浓度为0.1mol/L、pH＝7.4的PBS缓冲液中加入吐温80，吐温80的浓度为0.2ml/L，调节混合溶液的pH值至6.4，超声脱气，制备得到释放介质A；

Step2：称取SDS和叠氮化钠，分别用少量超纯水溶解后混合并定容，SDS的浓度为2.5g/L，叠氮化钠的浓度为1.0g/L，超声脱气，制备得到释放介质B；

Step3：向透析袋中加入1mL释放介质A和3.5mg阿立哌唑长效干混悬注射剂冻干粉末，扎紧透析袋，向溶出瓶中加入45mL释放介质B，将透析袋置于溶出瓶中，将溶出瓶置于已经维持在37℃～40℃的恒温水浴摇床中，做三个平行，于不同时间点从溶出瓶中取样，并向溶出瓶中补等量新鲜释放介质B；

Step4：将在不同取样时间点得到的样品过0.22μm滤膜，得到供试品溶液，使用高效液相色谱***测定供试品溶液的峰面积；

Step5：每个时间点的释放量通过外标法以峰面积计算，以药物的累积释放量与药物总量的比值计算阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度。

2.根据权利要求1所述的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其特征在于，还包括对透析袋进行前处理的步骤，具体的：

将透析袋剪下合适的长度，先置于超纯水中浸泡1h，然后置于乙醇-水溶液中浸泡20min，乙醇和水的体积比为2:8，最后置于2℃～8℃保存备用。

3.根据权利要求1所述的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其特征在于，在Step3中，所述透析袋选用的是8kD～14kD的再生纤维素透析袋。

4.根据权利要求1所述的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其特征在于，在Step3中，每次取样2mL，过0.22μm滤头。

5.根据权利要求1所述的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其特征在于，在Step4中，所述滤膜选用的是聚醚砜滤膜，弃去0.5mL以上续滤液得到供试品溶液。

6.根据权利要求1所述的测定阿立哌唑长效干混悬注射剂的释放度的方法，其特征在于，在Step4中，所述高效液相色谱***的色谱条件具体如下：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18，4.6×150mm，5μm；

柱温：35℃；

流速：1.0mL/min；

检测波长：257nm；

进样体积：20μL；

流动相：150mL浓度为20mmol/L的磷酸二氢钾溶液与350mL乙腈混合，用磷酸调节pH值至7.4，超声脱气20min。

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