CN115161284B - 一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 - Google Patents
一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115161284B CN115161284B CN202210779401.6A CN202210779401A CN115161284B CN 115161284 B CN115161284 B CN 115161284B CN 202210779401 A CN202210779401 A CN 202210779401A CN 115161284 B CN115161284 B CN 115161284B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lmh
- cell
- resuscitating
- suspension
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims abstract description 37
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 7
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 238000010257 thawing Methods 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000010792 warming Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 78
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 6
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 1
- WBNQDOYYEUMPFS-UHFFFAOYSA-N N-nitrosodiethylamine Chemical compound CCN(CC)N=O WBNQDOYYEUMPFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005228 Pericardial Effusion Diseases 0.000 description 1
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 229940021704 adenovirus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 241000701792 avian adenovirus Species 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/067—Hepatocytes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种LMH悬浮细胞复苏培养方法及其应用，S1、将储存有LMH悬浮细胞的冻存管从液氮中取出放入35～39℃恒温水浴锅中震荡温热2‑3min；S2、将细胞液体与LMH细胞培养基混合加入到离心管中；S3、将S2中液体3min离心去上清；S4、将LMH细胞培养基预热5min，用5ml的LMH细胞培养基重悬并转移至摇瓶，添加15mlLMH细胞培养基；S5、取样计数，保证复苏后LMH悬浮细胞密度；S6、将摇瓶置于摇床培养两天，计数，细胞复苏完成。本发明发现了LMH悬浮细胞复苏需要的最低细胞培养密度，比较常规复苏的操作，更有效的提高了复苏成功率，细胞活率和细胞状态。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种LMH悬浮细胞复苏培养方法及其应用。
背景技术
禽I群腺病毒是家禽常见的感染病原体，呈世界性分布，目前发现所有年龄的家禽均易感，只是鉴于家禽的品种、年龄所形成的致病力不同。目前发现禽I群腺病毒对鸡具有强致病性，主要病变表现为包涵体肝炎及心包积液-肝炎综合征，该病可直接引发养鸡场20～40天龄鸡只出现30％以上的死亡率，此外其临床上也常常与传染性支气管炎病毒，呼肠孤病毒，H9亚型禽流感病毒等并发感染，导致种蛋鸡出现明显呼吸道病，关节炎，及严重的产蛋下降及畸形蛋等问题。因此目前该病已经成为严重影响养鸡场生产性能的重大疫病之一。
现有技术对禽I群腺病毒灭活疫苗的制备多采用鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸡胚肾细胞(CEK)、雏鸡肾细胞(CK)、鸡胚肝细胞(CEL)4种原代细胞分离和增殖病毒。但原代肝肾细胞制备繁琐、易污染、不易转染，且在制备细胞过程中易混入CEF，不利于实验操作。LMH细胞系是日本科学家Kitagawa等在1981年利用患肝细胞癌的白莱航鸡肝细胞经二乙基亚硝胺致突变培育而成，是一种可以持续传代的鸡肝癌细胞系。随着细胞培养技术的进步以及研发需要，LMH细胞已经逐渐成为使用频率十分频繁的细胞系之一。LMH细胞有已经从贴壁细胞到悬浮细胞培养的转换工艺。LMH呈典型上皮细胞特征，该细胞系保持了鸡肝细胞分化的大量表型特征，主要用于重组腺病毒的构建，在禽腺病毒疫苗的制备有广大的应用前景。
然而，LMH悬浮细胞系的复苏培养一直是个难题，常规的复苏方法很难获得稳定且细胞状态优异的LMH悬浮细胞，往往细胞勉强维持几天的状态就开始死亡。使得LMH悬浮细胞培养的放大的推广应用有所阻碍。
发明内容
本发明提供了一种LMH悬浮细胞复苏培养方法及其应用，以解决现有技术的上述问题。
本发明的方案是：
一种LMH悬浮细胞复苏培养方法，包括下列步骤：
S1、将储存有LMH悬浮细胞的冻存管从液氮中取出放入35～39℃恒温水浴锅中震荡温热2-3min；
S2、将细胞液体与LMH细胞培养基混合加入到离心管中；
S3、将S2中液体3min离心去上清；
S4、将LMH细胞培养基预热5min，用5ml的LMH细胞培养基重悬并转移至摇瓶，添加15mlLMH细胞培养基；
S5、取样计数，保证复苏后LMH悬浮细胞密度；
S6、将摇瓶置于摇床培养两天，计数，细胞复苏完成。
作为优选的技术方案，步骤S1中解冻融化的LMH悬浮细胞的冻存管为3支。
作为优选的技术方案，步骤S1中复苏温度为37℃。
作为优选的技术方案，步骤S2中所述细胞液体与LMH细胞培养基混合比例为1:3。
作为优选的技术方案，步骤S3中所述离心条件为1000rpm。
作为优选的技术方案，步骤S4中所述LMH细胞培养基预热条件是37摄氏度。
作为优选的技术方案，步骤S5中所述复苏后LMH悬浮细胞密度≥2E6。本发明发现LMH悬浮细胞的最低复苏密度为2E6，当细胞复苏密度低于2E6时无法完成复苏，LMH悬浮细胞复苏具有密度依赖性。
作为优选的技术方案，步骤S5中所述复苏后LMH悬浮细胞密度＞2E7。
作为优选的技术方案，步骤S6中摇瓶置于摇床的细胞培养条件为37℃，8％CO2，120rpm。
一种LMH悬浮细胞复苏培养方法的应用。
由于采用了上述技术方案一种LMH悬浮细胞复苏培养方法及其应用，S1、将储存有LMH悬浮细胞的冻存管从液氮中取出放入35～39℃恒温水浴锅中震荡温热2-3min；S2、将细胞液体与LMH细胞培养基混合加入到离心管中；S3、将S2中液体3min离心去上清；S4、将LMH细胞培养基预热5min，用5ml的LMH细胞培养基重悬并转移至摇瓶，添加15mlLMH细胞培养基；S5、取样计数，保证复苏后LMH悬浮细胞密度；S6、将摇瓶置于摇床培养两天，计数，细胞复苏完成。
本发明与现有技术相对，具有以下的优点和效果：
1、本发明发现了LMH悬浮细胞复苏需要的最低细胞培养密度，比较常规复苏的操作，更有效的提高了复苏成功率，细胞活率和细胞状态。
2、本发明发现了LMH悬浮细胞对DMSO十分敏感，去除DMSO，如何去除DMSO不影响细胞复苏，是操作的关键步骤。
所述离心条件为1000rpm,3min。目前最常见和稳定的细胞冻存保护剂为DMSO，常规认为当DMSO浓度小于0.1％，对细胞毒性可以忽略，不影响细胞复苏状态，但是在研究中发现，LMH悬浮细胞对DMSO十分敏感，DMSO的去除对LMH细胞复苏十分重要。同时在细胞刚复苏的细胞离心转速高低关系到是否对细胞形成损伤，离心时间长短也影响细胞状态。1000rpm，3min离心去除DMSO最适合LMH悬浮细胞的复苏。
附图说明
图1为采用传统复苏方法的复苏效果图；
图2为采用本发明复苏方法的复苏效果图；
图3为采用本发明与常规复苏方法的细胞密度对比图；
图4为采用本发明与常规复苏方法的细胞活率对比图。
具体实施方式
为了弥补以上不足，本发明提供了一种LMH悬浮细胞复苏培养方法及其应用以解决上述背景技术中的问题。
一种LMH悬浮细胞复苏培养方法，包括下列步骤：
S1、将储存有LMH悬浮细胞的冻存管从液氮中取出放入35～39℃恒温水浴锅中震荡温热2-3min；
S2、将细胞液体与LMH细胞培养基混合加入到离心管中；
S3、将S2中液体3min离心去上清；
S4、将LMH细胞培养基预热5min，用5ml的LMH细胞培养基重悬并转移至摇瓶，添加15mlLMH细胞培养基；
S5、取样计数，保证复苏后LMH悬浮细胞密度；
S6、将摇瓶置于摇床培养两天，计数，细胞复苏完成。
作为优选的技术方案，步骤S1中解冻融化的LMH悬浮细胞的冻存管为3支。
步骤S1中复苏温度为37℃。
步骤S2中所述细胞液体与LMH细胞培养基混合比例为1:3。
步骤S3中所述离心条件为1000rpm。
步骤S4中所述LMH细胞培养基预热条件是37摄氏度。
步骤S5中所述复苏后LMH悬浮细胞密度≥2E6。
步骤S5中所述复苏后LMH悬浮细胞密度＞2E7。
步骤S6中摇瓶置于摇床的细胞培养条件为37℃，8％CO2，120rpm。
一种LMH悬浮细胞复苏培养方法的应用。
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：
一种LMH悬浮细胞复苏培养工艺的方法，包括以下步骤：
S1、将储存有LMH悬浮细胞的冻存管从液氮中取出3支放入37℃恒温水浴锅中震荡温热2-3min；
S2、将细胞液体和LMH细胞培养基1:3比例加入到离心管中；
S3、将S2中液体1000rpm，3min离心去上清；
S4、将LMH细胞培养基放入37℃预热5min，用5mlLMH细胞培养基重悬并转移至摇瓶，添加15mlLMH细胞培养基；
S5、取样计数，保证复苏后LMH悬浮细胞密度不低于2E7；
S6、将摇瓶置于37℃，8％CO2，120rpm摇床培养两天，计数，细胞复苏完成。
实施例2：
传统的复苏方法：从液氮罐里取出一支LMH细胞的冻存管，在37℃水浴下迅速解冻融化，得到1ml细胞液体，加入2mlPBS混匀，用离心机800-1200rpm速度离心5min，弃去上清液，加入15ml培养基重悬并转移到摇瓶，取样计数，放置到细胞培养箱培养。
实施例3：
复苏细胞能力和活率的对比：
1、按照细胞计数仪计数方法将实施例1和实施例2复苏的细胞进行增殖能力对比，其结果如图3所示，从图中可以看出，按照本方法复苏的细胞在Day3天开始恢复，并快速恢复正常倍增，证明本方法复苏的细胞密度增长稳定。
2、按照细胞计数仪计数方法将实施例1和实施例2复苏的细胞进行活率对比，其结果如图4所示，从图中可以看出，按照本方法复苏的细胞在复苏后一直保持90％以上活率，并且快速恢复到95％以上的细胞活率，证明本方法复苏的细胞活率更好。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (6)
1.一种LMH悬浮细胞复苏培养方法，其特征在于，包括下列步骤：
S1、将储存有LMH悬浮细胞的冻存管从液氮中取出放入35～39℃恒温水浴锅中震荡温热2-3min；
S2、将细胞液体与LMH细胞培养基混合加入到离心管中；步骤S2中所述细胞液体与LMH细胞培养基混合比例为1:3；
S3、将S2中液体3min离心去上清；离心条件为1000rpm；
S4、将LMH细胞培养基预热5min，用5ml的LMH细胞培养基重悬并转移至摇瓶，添加15mlLMH细胞培养基；
S5、取样计数，保证复苏后LMH悬浮细胞密度，所述复苏后LMH悬浮细胞密度≥2E6；
S6、将摇瓶置于摇床培养两天，计数，细胞复苏完成。
2.如权利要去1所述的LMH悬浮细胞复苏培养方法，其特征在于：步骤S1中解冻融化的LMH悬浮细胞的冻存管为3支。
3.如权利要求1所述的LMH悬浮细胞复苏培养方法，其特征在于：步骤S1中复苏温度为37℃。
4.如权利要求1所述的LMH悬浮细胞复苏培养方法，其特征在于：步骤S4中所述LMH细胞培养基预热条件是37摄氏度。
5.如权利要求1所述的LMH悬浮细胞复苏培养方法，其特征在于：步骤S5中所述复苏后LMH悬浮细胞密度＞2E7。
6.如权利要求1所述LMH悬浮细胞复苏培养方法，其特征在于：步骤S6中摇瓶置于摇床的细胞培养条件为37℃，8％CO2，120rpm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210779401.6A CN115161284B (zh) | 2022-07-04 | 2022-07-04 | 一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210779401.6A CN115161284B (zh) | 2022-07-04 | 2022-07-04 | 一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115161284A CN115161284A (zh) | 2022-10-11 |
| CN115161284B true CN115161284B (zh) | 2024-07-09 |
Family
ID=83491765
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210779401.6A Active CN115161284B (zh) | 2022-07-04 | 2022-07-04 | 一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115161284B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113564127A (zh) * | 2021-09-01 | 2021-10-29 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种大规模悬浮培养禽腺病毒的方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6426208B1 (en) * | 1999-11-12 | 2002-07-30 | Harbor-Ucla Research And Education Institute | Recombinant α-L-iduronidase, methods for producing and purifying the same and methods for treating diseases caused by deficiencies thereof |
| WO2005063970A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Schering Corporation | Methods for producing a549 cell lines stable in serum-free medium suspension culture |
| CN113354685B (zh) * | 2017-07-19 | 2022-12-20 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 作为egfr激酶抑制剂的芳基磷氧化合物 |
| CN108330098A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-07-27 | 安徽古生物科技有限公司 | 一种冻存细胞复苏的方法 |
| CN110904027B (zh) * | 2019-11-28 | 2022-09-30 | 郑州伊美诺生物技术有限公司 | 适用于哺乳动物细胞悬浮培养复苏的方法 |
| CN112899235B (zh) * | 2019-12-03 | 2024-06-21 | 夏尔巴生物技术(苏州)有限公司 | 一种细胞培养液的收获方法 |
| CN111548996A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-08-18 | 山东诸子生物科技有限公司 | 一种家禽癌细胞无血清悬浮细胞系及其建立方法和应用 |
| CN111778211A (zh) * | 2020-07-24 | 2020-10-16 | 深圳市人和生物科技有限公司 | Dc-ctl中断培养后细胞冻存复苏再培养方法 |
| CN113293136B (zh) * | 2021-05-24 | 2023-06-13 | 成都新生命霍普医学检验实验室有限公司 | 一种复苏细胞的方法及应用 |
| CN114480286B (zh) * | 2022-02-16 | 2024-05-31 | 上海健士拜生物科技有限公司 | 无血清悬浮型lmh细胞系及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-07-04 CN CN202210779401.6A patent/CN115161284B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113564127A (zh) * | 2021-09-01 | 2021-10-29 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种大规模悬浮培养禽腺病毒的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115161284A (zh) | 2022-10-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108300704B (zh) | 一种用传代细胞系悬浮培养传染性支气管炎病毒的方法 | |
| CN106011083A (zh) | 一种在无血清全悬浮培养的mdck细胞生长的禽流感病毒的制备方法及获得的禽流感病毒 | |
| US11629338B2 (en) | Method for acclimating and suspending Vero and second order production process for virus | |
| CN107156059B (zh) | 一种利用干细胞构建人源化慢性乙型肝炎鼠模型的方法 | |
| CN115161284B (zh) | 一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 | |
| KR101831284B1 (ko) | 무혈청 배지에서 부유배양 되는 Vero 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 | |
| CN109913404B (zh) | 鸡传染性法氏囊病毒活疫苗的制备方法 | |
| CN108611351B (zh) | ID1基因的sgRNA、ID1基因的敲除方法、BHK-21细胞系及其用途 | |
| CN104894054B (zh) | 一种猴胚胎肾上皮细胞Marc‑145悬浮适应株及其在培养蓝耳病病毒、生产蓝耳病毒疫苗中的应用 | |
| Gong et al. | Establishment and characterization of a spinal cord tissue cell line from mandarin fish, Siniperca chuatsi and its susceptibility to several viruses | |
| CN118028250A (zh) | 一株番鸭查帕马病毒毒株、应用和疫苗 | |
| CN103923885B (zh) | 鸡传染性法氏囊病毒Vero细胞适应株及其应用 | |
| CN109593729A (zh) | 一种禽减蛋综合征病毒培养方法及其在疫苗中的应用 | |
| CN111671892A (zh) | 全悬浮鸭胚视网膜细胞在鸡产蛋下降综合症疫苗中的应用 | |
| CN110616182B (zh) | 浮萍细胞的快速悬浮培养和高效遗传转化方法 | |
| CN104725503A (zh) | 一种红鳍东方鲀神经坏死病毒衣壳蛋白卵黄抗体及其应用 | |
| CN114731988B (zh) | 一种hbv感染的树鼩模型构建方法及树鼩模型 | |
| CN108424881B (zh) | 一株肠道病毒68型及其在制备ev-d68型感染动物中的应用 | |
| Arunrut et al. | In vitro cultivation of shrimp Taura syndrome virus (TSV) in a C6/36 mosquito cell line. | |
| Yang et al. | Mammalian birnaviruses identified in pigs infected by classical swine fever virus | |
| WO2022213502A1 (zh) | 甲状腺素的新的应用、培养多能干细胞的方法和培养基 | |
| Hussain et al. | Adaptation of an indigenous very virulent infectious bursal disease virus on Vero cell line. | |
| CN110669739A (zh) | 一种新型甲型肝炎病毒抗原制备方法 | |
| CN102978166A (zh) | 使用连续传代的细胞系制备新城疫病毒与疫苗的方法及其制品 | |
| CN109609436A (zh) | 一种无co2环境的mdck细胞全悬浮无血清细胞系的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |