CN115161227A - 一种益生菌培养基的制备方法及其应用 - Google Patents

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丁文平
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Abstract

本发明公开一种益生菌培养基的制备方法及其应用，所述益生菌培养基的制备方法包括以下步骤：对米酒渣进行匀浆处理，得到匀浆液；对所述匀浆液进行破壁处理后浸提，得预处理好的米酒渣；向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，灭菌后离心，收集上清液，得米酒渣提取液，即为益生菌培养基。本发明，以米酒渣为原材料，经过匀浆、破壁、浸提、灭菌、离心处理后制成米酒渣提取液，将其作为益生菌发酵培养的培养基使用，可为益生菌生长提供必需的碳源、氮源以及丰富的营养成分，能够适合多种益生菌生长，培养效果好，且具有原料成本低、来源广的优势，还能提高米酒渣的利用率，实现米酒渣的资源再利用。

Description

一种益生菌培养基的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及益生菌制剂技术领域，具体涉及一种益生菌培养基的制备方法及其应用。
背景技术
目前常用的发酵益生菌的方式是采用MRS培养基，MRS培养基通常由十几种原料组成：蛋白胨、牛肉粉、酵母粉、葡萄糖、吐温-80、磷酸氢二钾、乙酸钠、柠檬酸三铵、硫酸镁、硫酸锰、琼脂粉、蒸馏水，配制相对较麻烦，而直接购买瓶装MRS培养基价格昂贵，在250元左右一瓶，导致发酵益生菌存在工艺繁复或者成本较高的问题。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种益生菌培养基的制备方法及其应用，旨在提供一种制备工艺简单、成本低廉的适合益生菌发酵培养的培养基。
为实现上述目的，本发明提出一种益生菌培养基的制备方法，包括以下步骤：
对米酒渣进行匀浆处理，得到匀浆液；
对所述匀浆液进行破壁处理后浸提，得预处理好的米酒渣；
向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，灭菌后离心，收集上清液，得米酒渣提取液，即为益生菌培养基。
可选地，对米酒渣进行匀浆处理，得到匀浆液的步骤，包括：
将米酒渣置于匀浆机中，以10000～14000r/min的转速匀浆处理3～8min，得匀浆液。
可选地，对所述匀浆液进行破壁处理后浸提，得预处理好的米酒渣的步骤，包括：
将所述匀浆液在100～300W的超声波功率下破壁处理15～20min，然后于70～80℃下水浴加热浸提30～35min。
可选地，向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，灭菌后离心，收集上清液，得米酒渣提取液，即为益生菌培养基的步骤，包括：
向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，于120～125℃下灭菌20～25min，然后以4000～6000r/min的转速离心10～15min；其中，每100mL所述超纯水中对应加入所述预处理好的米酒渣的质量为30～40g。
进一步地，本发明还提出一种益生菌的发酵培养方法，包括以下步骤：
将益生菌进行复苏后使用MRS固体培养基培养，然后制成益生菌种子液；
将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养；
其中，所述益生菌培养基由如上所述的益生菌培养基的制备方法制得。
可选地，将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养的步骤中：
所述益生菌在所述益生菌培养基中的接种量为2～4％；和/或，
所述发酵培养的培养温度为31～36℃、摇床培养转速为100～200r/min、培养时间为22～28h。
可选地，所述益生菌包括植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、乳双歧杆菌、副干酪乳杆菌中的至少一种。
可选地，所述益生菌包括植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌，所述植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的质量比为0.5:1。
更进一步地，本发明还提出一种益生菌冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
将益生菌进行复苏后使用MRS固体培养基培养，然后制成益生菌种子液；
将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养，得发酵液；
向所述发酵液中添加提取米酒渣提取液之后的米酒渣，搅拌均匀，然后进行真空冷冻干燥，得益生菌冻干粉；
其中，所述益生菌培养基由如上所述的益生菌培养基的制备方法制得。
可选地，向所述发酵液中添加提取米酒渣提取液之后的米酒渣，搅拌均匀，然后进行真空冷冻干燥，得益生菌冻干粉的步骤中：
所述提取米酒渣提取液之后的米酒渣的质量为所述发酵液质量的20～40％；和/或，
所述冻干厚度为0.6～2.2cm；和/或，
所述真空冷冻干燥的温度为-45～-35℃、真空度为20～80pa、冻干时间为12～24h。
此外，本发明还提出一种益生菌发酵固体饮料，包括益生菌冻干粉，所述益生菌冻干粉由如上所述的益生菌冻干粉的制备方法制得。
本发明提供的技术方案中，以米酒渣为原材料，经过匀浆、破壁、浸提、灭菌、离心处理后制成米酒渣提取液，将其作为益生菌发酵培养的培养基使用，可为益生菌生长提供必需的碳源、氮源以及丰富的营养成分，能够适合多种益生菌生长，培养效果好，且具有原料成本低、来源广的优势，还能提高米酒渣的利用率，实现米酒渣的资源再利用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明提供的益生菌培养基的制备方法的一实施例的流程示意图；
图2为本发明提供的益生菌的发酵培养方法的一实施例的流程示意图；
图3为本发明提供的益生菌冻干粉的制备方法的一实施例的流程示意图。
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为降低益生菌发酵培养的成本，本发明提出一种益生菌培养基的制备方法，以米酒渣为原料制成可适用于益生菌发酵培养的培养基，图1所示为本发明提供的益生菌培养基的制备方法的一实施例。参阅图1所示，在本实施例中，所示益生菌培养基的制备方法包括以下步骤：
步骤S10、对米酒渣进行匀浆处理，得到匀浆液；
步骤S20、对所述匀浆液进行破壁处理后浸提，得预处理好的米酒渣；
步骤S30、向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，灭菌后离心，收集上清液，得米酒渣提取液，即为益生菌培养基。
首先，对米酒渣进行匀浆处理，得到匀浆液，所述米酒渣可以是直接获得的米酒酿造后剩余的酒渣(也即酒糟，通常为米酒生产过程中的废弃物)也可以以糯米为原材经过酿造而得到，具体酿造流程可参考现有技术，例如可以为：糯米→浸泡→滤水→水洗→蒸饭→摊凉→拌曲、加水→装缸→发酵→压榨→澄清→米酒，最后将酿造好的米酒进行过滤，即得米酒渣。进一步地，在本发明的具体实施例中，所述匀浆处理的方式为：将米酒渣置于匀浆机中，以10000～14000r/min的转速匀浆处理3～8min，得匀浆液。
然后，对所述匀浆液进行破壁处理，而后浸提，得预处理好的米酒渣。在本发明的具体实施例中，所述破壁处理的方式为将所述匀浆液在100～300W的超声波功率下破壁处理15～20min，所述浸提为于70～80℃下水浴加热浸提30～35min。
接着，向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，混合均匀后灭菌、离心，收集上清液，得米酒渣提取液，即制得益生菌培养基。在本发明的具体实施例中，向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水时，添加比例为每100mL所述超纯水中对应加入所述预处理好的米酒渣的质量为30～40g；所述灭菌为高温灭菌，具体为于120～125℃下灭菌20～25min；所述离心的转速为4000～6000r/min，离心时间为10～15min。
米酒渣是糯米经过发酵后所剩下的酒渣，仍然保留了大米的颗粒状，其营养丰富，含有多种糖类、B族维生素、矿物质、多种氨基酸，还具有健脾胃、舒筋络消痛化瘀的功能等等，其中也包括微生物生长所需要的碳源、氮源、无机盐和生长因子，是一种良好的微生物栽培原料。但是，米酒渣中残留部分酒精，会抑制微生物的生长繁殖，不适合直接用来培养益生菌，所以目前仅在功能性食品中有一些利用价值，而米酒年产量约为31亿升，酒糟产量约为100万吨，在加工过程中米酒渣的利用率低、浪费性大，其价值没有得到有效挖掘，且通常被认为是高污染的，因为米酒渣的排放可能对生态***产生负面影响。
发明人经过研究发现，米酒渣经过前期的米酒发酵工序，糯米或大米中含有的淀粉和蛋白得到不同程度的降解，形成了大量微生物可以直接利用的营养成分，用米酒渣提取液培养益生菌，只要能够调整适合益生菌生长的营养、增殖环境，就能适合多种益生菌生长。在本发明提供的技术方案中，以米酒渣为原材料，经过匀浆、破壁、浸提、灭菌、离心处理后制成米酒渣提取液，将其作为益生菌发酵培养的培养基使用，可为益生菌生长提供必需的碳源、氮源以及丰富的营养成分，能够适合多种益生菌生长，培养效果好，且具有原料成本低、来源广的优势，适合大量生产，还能提高米酒渣的利用率，实现米酒渣的资源再利用，解决弃置米酒渣造成的环境污染问题，提高米酒厂的生产利润。
基于本发明上述提供的益生菌培养基的制备方法，本发明还提出一种益生菌的发酵培养方法，使用所述益生菌培养基来进行益生菌发酵培养，图2所示为本发明提供的益生菌的发酵培养的一实施例。参阅图2所示，在本实施例中，所述益生菌的发酵培养方法包括以下步骤：
步骤S100a、将益生菌进行复苏后使用MRS固体培养基培养，然后制成益生菌种子液；
步骤S200a、将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养。
首先，在超净工作台内取益生菌胶囊，将胶囊内的活菌药粉倒入500mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀10min，得益生菌菌悬液。然后称取MRS琼脂46.4g，在1000mL蒸馏水里加热煮沸至完全溶解，再分装于500mL锥形瓶中，于121℃灭菌15min，制成MRS固体培养基备用。接着，使用接种环挑取种子液在MRS固体培养基上划线，培养2～3代后，挑取单菌落于10mL生理盐水中，涡旋摇匀制成益生菌种子液。最后，将所述益生菌种子液接种到本发明上述提供的方法制得的益生菌培养基(也即米酒渣提取液)中，即可进行发酵培养。
本发明提供的益生菌的发酵培养方法，使用米酒渣提取液作为益生菌的培养基，可以为益生菌的增殖提供必须的碳源、氮源以及丰富的营养物质和适宜的生长环境，培养效果好，成本低。
使用米酒渣提取液作为益生菌培养基对益生菌进行发酵培养时，所述米酒渣提取液的接种量大小会导致发酵培养过程中的碳氮源含量不同，对菌株的生长情况有一定影响。经过试验验证，作为本发明的优选实施例，所述益生菌在所述益生菌培养基中的接种量为2～4％，进一步优选为3％。
另外，所述发酵培养时的培养条件例如发酵温度等，也对菌株的生长情况有一定的影响，经过试验验证，作为本发明的优选实施例，所述发酵培养的培养条件为：培养温度为31～36℃、摇床培养转速为100～200r/min、培养时间为22～28h。进一步地，培养温度优选为33℃，摇床培养转速优选为150r/min，培养时间优选为24h。
本发明提供的益生菌的发酵培养方法适合于培养多种益生菌，包括植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、乳双歧杆菌、副干酪乳杆菌中的至少一种，既可以是上述益生菌中的任意一种，也可以是其中两种或两种以上的混合菌，均具有较好的培养效果。
作为本发明提供的益生菌的发酵培养方法的一优选实施例，所述益生菌包括植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌，且所述植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的质量比为0.5:1。
基于本发明上述提供的益生菌培养基的制备方法，本发明还提出一种益生菌冻干粉的制备方法，使用本发明上述提供的方法制得的所述益生菌培养基对益生菌进行发酵培养，而后使用提取出米酒渣提取液之后的米酒渣作为益生菌的冻干保护剂，图3所示为本发明提供的益生菌冻干粉的制备方法。参阅图3所示，所述益生菌冻干粉的制备方法包括以下步骤：
步骤S100b、将益生菌进行复苏后使用MRS固体培养基培养，然后制成益生菌种子液；
步骤S200b、将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养，得发酵液；
步骤S300b、向所述发酵液中添加提取米酒渣提取液之后的米酒渣，搅拌均匀，然后进行真空冷冻干燥，得益生菌冻干粉。
首先，在超净工作台内取益生菌胶囊，所述益生菌包括植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、乳双歧杆菌、副干酪乳杆菌中的至少一种，将胶囊内的活菌药粉倒入500mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀10min，得益生菌菌悬液。称取MRS琼脂46.4g，在1000mL蒸馏水里加热煮沸至完全溶解，再分装于500mL锥形瓶中，于121℃灭菌15min，制成MRS固体培养基备用。接着，使用接种环挑取种子液在MRS固体培养基上划线，培养2～3代后，挑取单菌落于10mL生理盐水中，涡旋摇匀制成益生菌种子液。然后，将所述益生菌种子液接种到本发明上述提供的方法制得的益生菌培养基(也即米酒渣提取液)中，进行发酵培养，得发酵液。最后，向所述发酵液中添加一定量的提取米酒渣提取液之后的米酒渣(也即本发明上述步骤S30中离心收集上清液之后的米酒渣剩余物)，然后进行真空冷冻干燥，即制得益生菌冻干粉。
益生菌冻干时常用脱脂乳粉、甘油、海藻糖、抗坏血酸等保护剂，脱脂乳粉是冻干时最常用的冻干保护剂，但其价格昂贵，100g脱脂乳粉的价格在150元左右，不利于降低益生菌冻干粉的生产成本。另外，在冻干时，微生物种类繁多，所含蛋白也不尽相同，因此不同的微生物需要不同的保护剂，在选择的冻干保护剂配方时，需要进行大量实验，而本发明经研究发现，米酒渣中含有丰富的蛋白质、糖类、氨基酸等，在添加量配比合适时，可直接用作益生菌冻干时的保护剂，成分安全并且冻干后菌株存活率高。
本发明提供的益生菌冻干粉的制备方法，使用米酒渣提取液作为培养基对益生菌进行发酵培养后，使用提取完米酒渣提取液之后的米酒渣剩余物作为冻干保护剂来制备益生菌冻干粉，一方面，使用米酒渣提取液作为益生菌培养基具有培养效果好、成本低的优点；另一方面，米酒渣剩余物用作冻干保护剂，米酒渣中丰富的蛋白质在冻干时可以在菌体外形成一层蛋白膜，对细胞及大分子有保护作用，同时，米酒渣的添加还会在冻干时起到均质作用，提高冷冻干燥时的存活率，因此使用米酒渣作为益生菌冻干保护剂具有保菌效果好、菌株存活率高的优点。此外，相较于常用的脱脂乳粉、甘油、海藻糖、抗坏血酸等保护剂而言，使用米酒渣用作益生菌冻干保护剂还可以降低益生菌冻干粉的制作成本，并且更进一步地提高米酒渣的利用率，改善米酒渣排放引起的环境问题。
使用米酒渣提取液作为益生菌培养基对益生菌进行发酵培养时，所述米酒渣提取液的接种量大小会导致发酵培养过程中的碳氮源含量不同，对菌株的生长情况有一定影响。经过试验验证，作为本发明的优选实施例，所述益生菌在所述益生菌培养基中的接种量为2～4％，进一步优选为3％。另外，所述发酵培养时的培养条件例如发酵温度等，也对菌株的生长情况有一定的影响，经过试验验证，作为本发明的优选实施例，所述发酵培养的培养条件为：培养温度为31～36℃，进一步优选为33℃；培养转速为100～200r/min，进一步优选为150r/min；培养时间为22～28h，进一步优选为24h。
进一步地，使用米酒渣作为冻干保护剂时，添加量的高低对冻干粉中菌株的存活率影响较大，经过试验验证，作为本发明的优选实施例，所述米酒渣的添加量为：所述提取米酒渣提取液之后的米酒渣的质量为所述发酵液质量的20～40％，进一步优选为30％。
另外，对所述发酵液进行冷冻干燥时，冻干厚度也是一个比较重要的因素，容易影响冻干后菌株的存活率，经过试验验证，作为本发明的优选实施例，所述冻干厚度为0.6～2.2cm。
此外，在本发明的具体实施例中，所述真空冷冻干燥的工艺参数设置为：所述真空冷冻干燥的温度为-45～-35℃，优选为-40℃；真空度为20～80pa，冻干时间为12～24h。
通过本发明提供的方法制得的益生菌冻干粉，其中包含植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、乳双歧杆菌、副干酪乳杆菌中的至少一种益生菌，人体摄入后可调理人体肠道菌群，使肠道菌群平衡，预防肠道疾病，且活菌含量高，速溶效果好，更有利于其中的营养物质被人体吸收。
本发明上述提供的方法制得的益生菌冻干粉，可以用于制备含有益生菌的功能性食品，例如益生菌发酵固体饮料等。故而，本发明还进一步提出一种益生菌发酵固体饮料，所述益生菌发酵固体饮料包括由上述方法制得的所述益生菌冻干粉。通过本发明上述提供的方法制得的益生菌冻干粉用作益生菌发酵固体饮料时，具有活菌含量高、速溶效果好，可调理人体肠道菌群、维持肠道菌群平衡的优点，且成分低、风味佳。另外，在本发明提供的益生菌发酵饮料的一些实施例中，所述益生菌发酵固体饮料中除包含所述益生菌冻干粉之外，还可以包括例如甜味剂、水果风味添加剂等，以丰富益生菌发酵固体饮料的风味，适应不同的市场需求。
以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明，应当理解，以下实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
(1)酿造老米酒：糯米→浸泡→滤水→水洗→蒸饭→摊凉→拌曲、加水→装缸→发酵→压榨→澄清→米酒→过滤→米酒渣。
(2)米酒渣提取液的制备：将米酒渣放入组织捣碎匀浆机中，以12000r/min的转速匀浆处理5min，得匀浆液；然后将得到的匀浆液转移到烧杯中，在200W的超声波功率下破壁处理15min，接着于75℃下水浴加热浸提30min，得预处理好的米酒渣；接着，取30g预处理好的米酒渣，加入100mL的超纯水，混合均匀后置于121℃下灭菌20min，灭菌后，于5000r/min的转速下离心10min，收集上清液，得米酒渣提取液。
实施例2
(1)酿造老米酒：糯米→浸泡→滤水→水洗→蒸饭→摊凉→拌曲、加水→装缸→发酵→压榨→澄清→米酒→过滤→米酒渣。
(2)米酒渣提取液的制备：将米酒渣放入组织捣碎匀浆机中，以10000r/min的转速匀浆处理8min，得匀浆液；然后将得到的匀浆液转移到烧杯中，在100W的超声波功率下破壁处理18min，接着于70℃下水浴加热浸提35min，得预处理好的米酒渣；接着，取35g预处理好的米酒渣，加入100mL的超纯水，混合均匀后置于120℃下灭菌22min，灭菌后，于4000r/min的转速下离心12min，收集上清液，得米酒渣提取液。
实施例3
(1)酿造老米酒：糯米→浸泡→滤水→水洗→蒸饭→摊凉→拌曲、加水→装缸→发酵→压榨→澄清→米酒→过滤→米酒渣。
(2)米酒渣提取液的制备：将米酒渣放入组织捣碎匀浆机中，以14000r/min的转速匀浆处理3min，得匀浆液；然后将得到的匀浆液转移到烧杯中，在300W的超声波功率下破壁处理20min，接着于80℃下水浴加热浸提33min，得预处理好的米酒渣；接着，取40g预处理好的米酒渣，加入100mL的超纯水，混合均匀后置于125℃下灭菌25min，灭菌后，于6000r/min的转速下离心15min，收集上清液，得米酒渣提取液。
实施例4
(1)菌株种子液的制备：在超净工作台内取植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌胶囊，将胶囊内的活菌药粉倒入500mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀10min，得益生菌菌悬液；然后称取MRS琼脂46.4g，在1000mL蒸馏水里加热煮沸至完全溶解，再分装于500mL锥形瓶中，于121℃灭菌15min，制成MRS固体培养基备用；接着，使用接种环挑取种子液在MRS固体培养基上划线，培养2～3代后，挑取单菌落于10mL生理盐水中，涡旋摇匀，分别制成植物乳杆菌种子液和罗伊氏乳杆菌种子液。
(2)制得的植物乳杆菌种子液和罗伊氏乳杆菌种子液接种到实施例1制得的米酒渣提取液中，控制植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的质量比为0.5:1，益生菌总接种量为3％，于33℃、150r/min的条件下进行摇床发酵培养，培养时间为24h。
实施例5
(1)菌株种子液的制备：在超净工作台内取罗伊氏乳杆菌胶囊，将胶囊内的活菌药粉倒入500mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀10min，得益生菌菌悬液；然后称取MRS琼脂46.4g，在1000mL蒸馏水里加热煮沸至完全溶解，再分装于500mL锥形瓶中，于121℃灭菌15min，制成MRS固体培养基备用；接着，使用接种环挑取种子液在MRS固体培养基上划线，培养2～3代后，挑取单菌落于10mL生理盐水中，涡旋摇匀，制成罗伊氏乳杆菌种子液。
(2)将步骤(1)制得的罗伊氏乳杆菌种子液接种到实施例2制得的米酒渣提取液中，接种量为3％，于36℃、150r/min的条件下进行摇床发酵培养，培养时间为24h。
实施例6
(1)菌株种子液的制备：在超净工作台内取植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌胶囊，将胶囊内的活菌药粉倒入500mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀10min，得益生菌菌悬液；然后称取MRS琼脂46.4g，在1000mL蒸馏水里加热煮沸至完全溶解，再分装于500mL锥形瓶中，于121℃灭菌15min，制成MRS固体培养基备用；接着，使用接种环挑取种子液在MRS固体培养基上划线，培养2～3代后，挑取单菌落于10mL生理盐水中，涡旋摇匀，分别制成植物乳杆菌种子液和罗伊氏乳杆菌种子液。
(2)将步骤(1)制得的植物乳杆菌种子液和罗伊氏乳杆菌种子液接种到实施例3制得的米酒渣提取液中，控制植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的质量比为0.5:1，益生菌总接种量为3％，于31℃、150r/min的条件下进行摇床发酵培养，培养时间为24h。
实施例7
(1)菌株种子液的制备：在超净工作台内取植物乳杆菌胶囊，将胶囊内的活菌药粉倒入500mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀10min，得益生菌菌悬液；然后称取MRS琼脂46.4g，在1000mL蒸馏水里加热煮沸至完全溶解，再分装于500mL锥形瓶中，于121℃灭菌15min，制成MRS固体培养基备用；接着，使用接种环挑取种子液在MRS固体培养基上划线，培养2～3代后，挑取单菌落于10mL生理盐水中，涡旋摇匀，分别制成植物乳杆菌种子液。
(2)将步骤(1)制得的植物乳杆菌种子液接种到实施例1制得的米酒渣提取液中，益生菌总接种量为2％，于33℃、100r/min的条件下进行摇床发酵培养，培养时间为28h。
实施例8
(1)菌株种子液的制备：在超净工作台内取植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌胶囊，将胶囊内的活菌药粉倒入500mL灭菌生理盐水中，振荡摇匀10min，得益生菌菌悬液；然后称取MRS琼脂46.4g，在1000mL蒸馏水里加热煮沸至完全溶解，再分装于500mL锥形瓶中，于121℃灭菌15min，制成MRS固体培养基备用；接着，使用接种环挑取种子液在MRS固体培养基上划线，培养2～3代后，挑取单菌落于10mL生理盐水中，涡旋摇匀，分别制成植物乳杆菌种子液和罗伊氏乳杆菌种子液。
(2)将步骤(1)制得的植物乳杆菌种子液和罗伊氏乳杆菌种子液接种到实施例1制得的米酒渣提取液中，控制植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的质量比为0.5:1，益生菌总接种量为4％，于33℃、200r/min的条件下进行摇床发酵培养，培养时间为22h。
实施例9
将实施例4中发酵培养得到的发酵液取出，向其中加入占发酵液质量30％的米酒渣(为实施例1中离心收集米酒渣提取液之后的米酒渣剩余物)，调整冻干厚度为1.4cm，然后置于真空冷冻干燥机中，设置参数条件为冷肼温度-40℃、真空度20～80pa、冻干时间为12h，冻干结束后得到益生菌冻干粉。
实施例10
将实施例5中发酵培养得到的发酵液取出，向其中加入占发酵液质量20％的米酒渣(为实施例2中离心收集米酒渣提取液之后的米酒渣剩余物)，调整冻干厚度为0.6cm，然后置于真空冷冻干燥机中，设置参数条件为冷肼温度-40℃、真空度20～80pa、冻干时间为12h，冻干结束后得到益生菌冻干粉。
实施例11
将实施例6中发酵培养得到的发酵液取出，向其中加入占发酵液质量40％的米酒渣(为实施例3中离心收集米酒渣提取液之后的米酒渣剩余物)，调整冻干厚度为2.2cm，然后置于真空冷冻干燥机中，设置参数条件为冷肼温度-40℃、真空度20～80pa、冻干时间为12h，冻干结束后得到益生菌冻干粉。
实施例12
将实施例7中发酵培养得到的发酵液取出，向其中加入占发酵液质量25％的米酒渣(为实施例1中离心收集米酒渣提取液之后的米酒渣剩余物)，调整冻干厚度为1.0cm，然后置于真空冷冻干燥机中，设置参数条件为冷肼温度-45℃、真空度20～80pa、冻干时间为18h，冻干结束后得到益生菌冻干粉。
实施例13
将实施例8中发酵培养得到的发酵液取出，向其中加入占发酵液质量35％的米酒渣(为实施例1中离心收集米酒渣提取液之后的米酒渣剩余物)，调整冻干厚度为1.8cm，然后置于真空冷冻干燥机中，设置参数条件为冷肼温度-35℃、真空度20～80pa、冻干时间为24h，冻干结束后得到益生菌冻干粉。
对比例1
步骤与实施例4相同，不同之处在于，将益生菌发酵培养的培养基由米酒渣提取液替换成为MRS培养基。
对比例2
步骤与实施例9相同，不同之处在于，将益生菌发酵培养的培养基由米酒渣提取液替换成为MRS培养基，将冻干保护剂由米酒渣替换成为脱脂乳粉。
分别测定实施例4-8和对比例1中经发酵培养所得发酵液的OD值和pH值，测定结果如下表1所示。分别测试实施例9-13和对比例2中制得的益生菌冻干粉的菌株存活率，测定结果如表下表2所示。
表1实施例4-8和对比例1中发酵液的OD值和pH值
对比例1 实施例4 实施例5 实施例6 实施例7 实施例8
OD值 1.541 1.145 0.597 1.114 0.752 0.878
pH 3.99 3.43 3.79 3.45 3.71 3.68
表2实施例9-13和对比例2中益生菌冻干粉的菌株存活率
Figure BDA0003681979100000141
由表1和表2中的数据可以得出，本发明实施例制得的米酒渣提取液作为益生菌发酵培养的培养基，有一定培养菌株和保存菌株的能力，在不同浓度米酒渣提取液和不同培养条件(不同培养温度)下，所培养出的菌体密度不同，pH值也不同，菌体密度越大，产生的酸越多，pH值越低，实施例4可较好的培养菌株，但相对MRS培养基的增殖速度还有些许差距。同时，米酒渣的添加量不同，冻干效果也不同，在添加30％米酒渣时，冻干效果最好，存活率最高，调整冻干厚度为1.4cm时，存活率又有一定的升高，而在冻干效果和菌株存活率上，在菌液中添加米酒渣相比脱脂乳粉得出的结果差别不大，米酒渣用于益生菌的冻干效果十分明显。
以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种益生菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
对米酒渣进行匀浆处理，得到匀浆液；
对所述匀浆液进行破壁处理后浸提，得预处理好的米酒渣；
向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，灭菌后离心，收集上清液，得米酒渣提取液，即为益生菌培养基。
2.如权利要求1所述的益生菌培养基的制备方法，其特征在于，对所述匀浆液进行破壁处理后浸提，得预处理好的米酒渣的步骤，包括：
将所述匀浆液在100～300W的超声波功率下破壁处理15～20min，然后于70～80℃下水浴加热浸提30～35min。
3.如权利要求1所述的益生菌培养基的制备方法，其特征在于，向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，灭菌后离心，收集上清液，得米酒渣提取液，即为益生菌培养基的步骤，包括：
向所述预处理好的米酒渣中加入超纯水，于120～125℃下灭菌20～25min，然后以4000～6000r/min的转速离心10～15min；其中，每100mL所述超纯水中对应加入所述预处理好的米酒渣的质量为30～40g。
4.一种益生菌的发酵培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
将益生菌进行复苏后使用MRS固体培养基培养，然后制成益生菌种子液；
将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养；
其中，所述益生菌培养基由如权利要求1至3任意一项所述的益生菌培养基的制备方法制得。
5.如权利要求4所述的益生菌的发酵培养方法，其特征在于，将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养的步骤中：
所述益生菌在所述益生菌培养基中的接种量为2～4％；和/或，
所述发酵培养的培养温度为31～36℃、摇床培养转速为100～200r/min、培养时间为22～28h。
6.如权利要求4所述的益生菌的发酵培养方法，其特征在于，所述益生菌包括植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、乳双歧杆菌、副干酪乳杆菌中的至少一种。
7.如权利要求4所述的益生菌的发酵培养方法，其特征在于，所述益生菌包括植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌，所述植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌的质量比为0.5:1。
8.一种益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将益生菌进行复苏后使用MRS固体培养基培养，然后制成益生菌种子液；
将所述益生菌种子液加入到益生菌培养基中进行发酵培养，得发酵液；
向所述发酵液中添加提取米酒渣提取液之后的米酒渣，搅拌均匀，然后进行真空冷冻干燥，得益生菌冻干粉；
其中，所述益生菌培养基由如权利要求1至3任意一项所述的益生菌培养基的制备方法制得。
9.如权利要求8所述的益生菌冻干粉的制备方法，其特征在于，向所述发酵液中添加提取米酒渣提取液之后的米酒渣，搅拌均匀，然后进行真空冷冻干燥，得益生菌冻干粉的步骤中：
所述提取米酒渣提取液之后的米酒渣的质量为所述发酵液质量的20～40％；和/或，
所述冻干厚度为0.6～2.2cm；和/或，
所述真空冷冻干燥的温度为-45～-35℃、真空度为20～80pa、冻干时间为12～24h。
10.一种益生菌发酵固体饮料，其特征在于，包括益生菌冻干粉，所述益生菌冻干粉由如权利要求8至9任意一项所述的益生菌冻干粉的制备方法制得。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006094713A (ja) * 2004-09-28 2006-04-13 Yaegaki Hakko Giken Kk 機能性食品とその製造法
CN101965902A (zh) * 2010-11-05 2011-02-09 辽宁邦成曙光生物科技有限公司 一种饲料用枯草芽孢杆菌活菌制剂的生产方法
CN104046583A (zh) * 2014-06-19 2014-09-17 泸州品创科技有限公司 一种苏云金芽胞杆菌液态培养基及其制备方法
CN109845899A (zh) * 2019-03-06 2019-06-07 广西壮族自治区农业科学院 一种甘蔗尾梢白酒渣蛋白饲料及其制备方法
CN110384178A (zh) * 2019-08-23 2019-10-29 华中农业大学 基于酒糟制备的乳酸菌培养物及其在动物饲料中的应用
CN111838405A (zh) * 2020-07-01 2020-10-30 卢卫红 一种利用乳酸菌发酵米酒糟制备饲料原料的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006094713A (ja) * 2004-09-28 2006-04-13 Yaegaki Hakko Giken Kk 機能性食品とその製造法
CN101965902A (zh) * 2010-11-05 2011-02-09 辽宁邦成曙光生物科技有限公司 一种饲料用枯草芽孢杆菌活菌制剂的生产方法
CN104046583A (zh) * 2014-06-19 2014-09-17 泸州品创科技有限公司 一种苏云金芽胞杆菌液态培养基及其制备方法
CN109845899A (zh) * 2019-03-06 2019-06-07 广西壮族自治区农业科学院 一种甘蔗尾梢白酒渣蛋白饲料及其制备方法
CN110384178A (zh) * 2019-08-23 2019-10-29 华中农业大学 基于酒糟制备的乳酸菌培养物及其在动物饲料中的应用
CN111838405A (zh) * 2020-07-01 2020-10-30 卢卫红 一种利用乳酸菌发酵米酒糟制备饲料原料的方法

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