CN115160193A - 一种萘磺酰胺类小分子化合物及其应用 - Google Patents

一种萘磺酰胺类小分子化合物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐，结构通式如下所示：
Figure DDA0003676451340000011
本发明提供的萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐可以作为Keap1‑Nrf2蛋白相互作用抑抑制剂，还可以用作治疗炎症所引起的疾病的药物使用。

Description

一种萘磺酰胺类小分子化合物及其应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体地说，涉及一种萘磺酰胺类小分子化合物及其应用。
背景技术
氧化应激是指由机体产生的活性氧(Reactive oxygen species，ROS)所介导的氧化与抗氧化物质失衡，从而引起机体组织细胞产生氧化损伤。氧化应激不仅可以直接导致机体细胞坏死，也可以通过激活机体内的氧化还原信号途径导致细胞衰老、凋亡，甚至坏死。机体产生氧化损伤是导致许多疾病发病的基础，也是机体多种疾病发病所共有的机制之一。大量研究表明，在炎症等相关疾病的发病过程有明显的ROS反应增强，因此，使用高活性、多功能抗氧化剂，清除ROS、减轻炎症反应成为治疗多种疾病的新思路。
核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2)是一个富含亮氨酸拉链结构的转录因子，属于Cap-n-collar(CNC)转录因子家族成员，是细胞和机体对抗氧化应激损伤的中枢调控者，普遍表达于各种组织和细胞中。生理条件下，Nrf2在细胞质中与Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1)结合，处于非活性、易降解的状态，在内外界自由基和化学物质刺激时，Nrf2与Keap1解离，进入细胞核与抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)结合，启动ARE下游的Ⅱ相解毒酶、抗氧化蛋白、蛋白酶体/分子伴侣等基因转录和表达以抵抗内外界的有害刺激。Nrf2及其信号通路与肿瘤、糖尿病、神经***疾病、慢性肾功能衰竭、哮喘、慢性阻塞性肺病、自身免疫性疾病等多种疾病病理生理和发病过程密切相关，已成为广受关注的药物靶点。基于Keap1-Nrf2***的结构和机理知识，许多Nrf2激活剂已被开发成为潜在的治疗药物。根据它们的作用机制可以大致分为两类，共价结合：亲电试剂与Keap1结合，使泛素结合酶从Keap1解离，从而导致Nrf2从构象改变的Keap1蛋白中释放出来；非共价结合是，在发生氧化应激时，Keap1-Nrf2与泛素结合酶紧密结合，释放出Nrf2。而共价结合中除了共价修饰Keap1外，还可能与其他蛋白发生相互作用，可能导致不可预测的副作用。研究发现，选择在其一侧进行结构优化是改善化合物性质的重要策略，所以，急需在其一侧引入关键药效团与Keap1-Nrf2 PPI小分子抑制剂结合起来开发一种新型的小分子抑制剂。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种萘磺酰胺类小分子化合物。
本发明的第二个目的是提供一种所述萘磺酰胺类小分子化合物在制备预防或治疗炎症所引起的疾病的药物中的应用。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一方面提供了一种萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐，结构通式如下所示：
Figure BDA0003676451320000011
其中，R1选自C1～C10烷基(如甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、叔戊基、正己基)、
Figure BDA0003676451320000021
R2、R3、R4、R5、R6各自独立的选自C1～C10烷基(如甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、叔戊基、正己基)；
n选自1至5的正整数(如1、2、3、4、5)。
较优选的，所述萘磺酰胺类小分子化合物中，R1选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、叔戊基、
Figure BDA0003676451320000022
Figure BDA0003676451320000031
最优选的，所述萘磺酰胺类小分子化合物选自以下结构的一种：
Figure BDA0003676451320000032
Figure BDA0003676451320000041
Figure BDA0003676451320000051
本发明的第二个方面提供了一种所述萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐在制备预防或治疗炎症所引起的疾病的药物中的应用，具体是作为Keap1-Nrf2蛋白相互作用抑制剂对LPS诱导的巨噬细胞的保护作用以及对LPS诱导的C57/BL6小鼠急性肺损伤的预防和治疗。
所述巨噬细胞为C57/BL6小鼠的巨噬细胞。
所述炎症因子选自TNF-α、IL-1β、IL-6。
本发明的第三个方面提供了一种所述萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐在制备Keap1-Nrf2蛋白相互作用抑制剂中的应用。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明提供的萘磺酰胺类小分子化合物在体外keap1蛋白靶点测试中均表现良好的亲和力，同时细胞毒性测试显示出较高的安全性，可以作为Keap1-Nrf2蛋白相互作用抑制剂。通过体外活性筛选，化合物11i、11k、8a在LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中显示出良好的抗炎活性。化合物11k体内研究显示，对于LPS诱导的小鼠急性肺损伤有优异的保护作用，而且11k口服生物利用度达到了20％，表现出良好的药代动力学性质，是目前现已报道该结构类型衍生物中生物利用度最高的化合物。这一系列的研究表明本发明提供的萘磺酰胺类小分子化合物可以用于治疗或预防炎症相关疾病的后续研究。
附图说明
图1是本发明制备的部分化合物抑制ROS的表达示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图2是本发明制备的部分化合物抑制NO的表达示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图3是本发明制备的部分化合物抑制炎症因子TNF-α的表达示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图4是本发明制备的部分化合物ELISA测定BALF中炎性细胞因子m-TNF-α水平，评估化合物11k对LPS诱导炎症反应的保护作用示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图5是本发明制备的部分化合物ELISA测定BALF中炎性细胞因子IL-1β水平，评估化合物11k对LPS诱导炎症反应的保护作用示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图6是本发明制备的部分化合物ELISA测定BALF中炎性细胞因子IL-6水平，评估化合物11k对LPS诱导炎症反应的保护作用示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图7是RT-qPCR检测LPS-ALI和化合物11k+LPS-ALI小鼠肺组织中TNF-α的mRNA水平示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图8是RT-qPCR检测LPS-ALI和化合物11k+LPS-ALI小鼠肺组织中IL-1β的mRNA水平示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图9是RT-qPCR检测LPS-ALI和化合物11k+LPS-ALI小鼠肺组织中IL-6的mRNA水平示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
图10是通过western blotting分析不同剂量的11k腹腔注射小鼠作用6h肺组织中胞浆和胞核Nrf2水平示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
本发明所用试剂和原料均市售可得或可按文献方法制备。
合成实验所用试剂由阿拉丁、百灵威、Adamas、TCI、毕得化学等公司购得，所有试剂均为分析纯或化学纯，二氯甲烷、DMF等溶剂用分子筛干燥后使用，四氢呋喃用钠丝作无水处理后使用。核磁共振仪为Bruker Advance 300MHz或600MHz(德国布鲁克公司生产)，用四甲基硅烷(TMS)作为内标，溶剂为CDCl3、DMSO-d6、Acetone-d6和MeOD-d4，化学位移(δ)和耦合常数(J)分别用ppm和Hz为单位。柱层析硅胶用200-300目硅胶(中国青岛海洋化学生产)，薄层色谱(TLC)分析使用GF254硅胶板(中国青岛海洋化学生产)。ESI质谱使用API-3000LC-MS型质谱仪。
实施例1
Figure BDA0003676451320000071
第一步，叔丁基(4-硝基萘-1-基)氨基甲酸酯(2)
将4-硝基-1-萘胺(5g，26.57mmol)溶于300mL二氯甲烷中，加入三乙胺(11mL，79.71mmol)、4-二甲胺基吡啶(325mg，2.66mmol)，冰浴条件下缓慢加入Boc-酸酐(6.72mL，29.23mmol)，加毕，45℃回流5h，TLC(PE/EA＝4:1，Rf＝0.6)检测反应完全。将反应液减压浓缩，然后分别用水(2x 200mL)、饱和食盐水(2x 200mL)洗涤有机层，无水Na2SO4干燥，柱层析分离(0～15％EA in PE)获得目标化合物，黄色固体(6.7g，23.24mmol，收率87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.59(s,9H),7.63-7.67(m,1H),7.72-7.76(m,1H),7.92(d,J＝8.56Hz,1H),8.23(d,J＝8.68Hz,1H),8.33(d,J＝8.68Hz,1H),8.76(d,J＝8.56Hz,1H)。
第二步，叔丁基(4-氨基萘-1-基)氨基甲酸酯(3)
将化合物2(6.7g，23.24mmol)溶于80mL冰醋酸中，加入还原铁粉(5.2g，92.96mmol)，50℃加热搅拌2小时，TLC(PE/EA＝2:1,Rf＝0.4)点板显示反应完全。加入饱和NaHCO3调节pH至8～9，乙酸乙酯萃取(200mL x 4)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，柱层析分离(0～30％EA in PE)获得目标化合物，浅灰色固体(4.35g，16.84mmol，收率72％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ1.55(s,9H),6.46(s,1H),6.77(d,J＝7.8Hz,1H),7.56-7.46(m,3H),7.92-7.83(m,2H).
第三步，(4-((4-甲氧基苯基)磺胺基)萘-1-基)氨基甲酸叔丁酯(4)
将化合物3(4.35g，16.84mmol)溶于40mL吡啶中，0℃加入4-甲氧基苯磺酰氯(3.83g，18.52mmol)，加毕，继续保持0℃反应3小时，TLC(PE/EA＝2:1，Rf＝0.4)点板显示反应完全。向反应液中加入适量的水淬灭，静置，倒出上层液体，残余固体中加入乙酸乙酯(30mL)和石油醚(90mL)，搅拌10分钟，过滤，固体用石油醚洗涤，干燥，获得目标化合物，白色固体(7g，16.34mmol，收率97％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.47(s,9H),3.78(s,3H),6.99-7.06(m,3H),7.41-7.51(m,3H),7.60(d,J＝8.1Hz,1H),7.96-8.03(m,2H),9.24(s,1H),10.00(s,1H).
第四步，4-甲氧基-N-(4-((4-硝基苯基)磺酰胺基)萘-1-基)苯磺酰胺(5)
将化合物4(1g，2.334mmol)溶于10mL二氯甲烷中，再加入三氟乙酸(2mL，26.8mmol)，室温搅拌2小时，TLC(PE/EA＝1:1，Rf＝0.5)点板显示反应完全。反应液加入饱和碳酸钠淬灭，加入二氯甲烷(100mL x 2)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩获得目标化合物，白色固体(0.7g，2.132mmol，收率91％)。未经处理直接将所得化合物(4.97g，15.13mmol)溶于50mL吡啶中，0℃加入4-硝基苯磺酰氯(3.52g，15.89mmol)，加毕，继续保持0℃反应3小时，TLC(PE/EA＝1:1,Rf＝0.8)点板显示反应完全。向反应液中加入适量的水，静置，倒出上层液体，残余固体中加入乙酸乙酯(30mL)和石油醚(90mL)，匀浆搅拌10分钟，过滤，固体用石油醚洗涤，干燥，获得目标化合物，白色固体(7.53g，14.66mmol，收率97％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ,3.77(s,3H),6.98-7.06(m,4H),7.40-7.42(m,2H),7.57(d,J＝8.80Hz,2H),7.91-8.00(m,1H),8.31(d,J＝8.92Hz,1H),10.11(s,1H),10.56(s,1H).
第五步，4-氨基-N-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰胺基)萘-1-基)苯磺酰胺(6)
将化合物5(7.53g，14.66mmol)溶于50ml甲醇中，加入10％钯碳(753mg，7mmol)，混合物在氢气保护下室温反应15小时，TLC(PE/EA＝1:1，Rf＝0.3)点板显示反应完全。反应液直接用硅藻土过滤、浓缩滤液，获得目标化合物，淡黄色固体(5.39g，11.14mmol，收率76％)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ,3.77(s,3H),5.96(s,2H)6.47(d,J＝8.68Hz,2H),6.96-7.04(m,4H),7.25(d,J＝8.38Hz,2H),7.35–7.41(m,2H),7.52(d,J＝8.92Hz,2H),7.93(d,J＝7.44Hz,2H),8.03(d,J＝9.76Hz,1H)9.73(s,1H),10.00(s,1H).
第六步，2-((N-(4-((4-乙酰氨基-N-(2-氨基-2-氧乙基)苯基)磺酰胺)萘-1-基)-4-甲氧基-苯基)磺酰胺)乙酰胺(8a)
将化合物6(250mg，0.52mmol)、K2CO3(138.21mg，1.04mmol)溶于5mL超干THF中，冰浴下搅拌5-10分钟，再加入乙酰氯(37μL，0.52mmol)，加毕，冰浴条件下继续反应1小时，TLC(DCM/MeOH＝30:1，Rf＝0.2)显示反应完全。反应液直接用乙酸乙酯稀释并用水(30mL×2)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤，减压除去溶剂，干燥，得到粗品7a(300mg，0.44mmol，收率85.38％)直接用于下一步。将化合物7a(160mg，0.3mmol)溶于4mL超干DMF中，加入K2CO3(165.85mg，0.25mmol)、KI(25mg，0.15mmol)、2-溴乙酰胺(144.86mg，1.05mmol)，50℃搅拌过夜，TLC(DCM/MeOH＝10:1，Rf＝0.2)点板显示反应完全。向反应液中加入适量水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水(30mL×2)洗涤有机层。无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，粗品通过柱层析(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到目标化合物，白色固体8a(115mg，0.18mmol，收率79％)。mp:190-191℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.12(d,J＝15.24Hz,3H),3.86(d,J＝22.72Hz,3H),4.11-4.33(m,4H),6.78(dd,J＝9.72Hz,J＝8.04Hz,1H),6.95-7.14(m,5H),7.36-7.39(m,2H),7.53-7.60(m,6H),7.78(d,J＝8.92Hz,1H),7.88(d,J＝8.92Hz,1H),8.18-8.22(m,1H),8.30-8.35(m,1H),10.77(d,J＝37.88Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.3,169.2,168.7,162.9,143.8,137.1,136.9,133.2,133.1,132.9,131.2,130.6,130.2,130.0,129.5,129.2,128.9,126.5,125.9,125.7,124.8,124.6,118.3,118.1,114.2,114.2,55.8,55.7,54.0,24.2.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C29H29N5O8S2[M+H]+:640.1538；found 640.1538,HPLC analysis:retention time＝6.6min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例2
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)丙酰胺(8b)
Figure BDA0003676451320000091
将实施例1中第六步乙酰氯替换为丙酰氯，其他同实施例1，获得目标化合物白色固体(100mg，0.15mmol，收率76％)。mp:169-171℃.1H NMR(400MHz,DMSO)δ1.07-1.14(m,3H),2.34-2.44(m,2H),3.86(d,J＝21.28Hz,3H),4.11-4.33(m,4H),6.81(dd,J＝11.72Hz,J＝8.08Hz,1H),6.95-7.14(m,5H),7.24-7.34(m,2H),7.54-7.61(m,6H),7.75(d,J＝8.92Hz,1H),7.84(d,J＝8.92Hz,1H),8.15-8.40(m,2H),10.35(d,J＝36.20Hz,1H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ172.8,168.7,168.6,162.9,143.6,137.0,136.9,133.0,132.9,131.4,130.7,130.2,130.0,129.5,129.2,129.0,126.5,126.0,125.7,124.7,124.5,118.3,118.1,114.2,114.1,55.8,55.7,54.0,29.7,9.3.HRMS(ESI,positive)m/z calcd forC30H31N5O8S2[M+H]+:654.1694；found654.1694,HPLC analysis:retention time＝6.6min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例3
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)丁酰胺(8c)
Figure BDA0003676451320000092
将实施例1中第六步乙酰氯替换为丁酰氯，其他同实施例1，获得目标产物白色固体(70mg，0.10mmol，收率65％)。mp:204-206℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.90-0.97(m,3H),1.57-1.70(m,2H),2.32-2.39(m,2H),3.86(d,J＝20.56Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.81(dd,J＝14.76Hz,J＝8.04Hz,1H),6.95-7.14(m,5H),7.32(d,J＝17.48Hz,2H),7.54-7.61(m,6H),7.75(d,J＝8.92Hz,1H),7.84(d,J＝8.92Hz,1H),8.18-8.22(m,1H),8.30-8.36(m,1H),10.35(d,J＝34.48Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ172.1,168.7,168.7,162.9,143.7,137.1,136.9,133.1,133.0,131.4,130.7,130.3,130.0,129.5,129.1,129.0,126.6,125.9,125.7,124.9,124.7,118.4,118.2,114.3,114.2,55.8,55.8,54.0,38.5,18.4,13.7.HRMS(ESI,positive)m/zcalcd for C31H33N5O8S2[M+H]+:668.1851；found668.1858,HPLC analysis:retention time＝6.7min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例4
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)戊酰胺(8d)
Figure BDA0003676451320000101
将实施例1中第六步乙酰氯替换为戊酰氯，其他同实施例1，获得目标产物白色固体(85mg，0.12mmol，收率75％)。mp:199-201℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.88-0.94(m,3H),1.28-1.41(m,2H),1.54-1.65(m,2H),2.33-2.41(m,2H),3.86(d,J＝20.56Hz,3H),4.11-4.32(m,4H),6.81(dd,J＝14.48Hz,J＝8.48Hz,1H),6.95-7.14(m,5H),7.32(d,J＝17.36Hz,2H),7.54-7.60(m,6H),7.75(d,J＝8.00Hz,1H),7.84(d,J＝8.92Hz,1H),8.18-8.22(m,1H),8.30-8.36(m,1H),10.35(d,J＝34.60Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ172.2,168.8,168.7,162.9,143.7,137.1,136.9,133.1,133.0,131.4,130.7,130.3,130.0,129.5,129.3,129.0,126.5,125.9,125.7,124.8,124.6,118.4,118.2,114.2,114.2,55.8,55.7,54.0,36.3,27.1,22.4,13.8.HRMS(ESI,positive)m/z calcd forC32H35N5O8S2[M+H]+:682.2007；found 682.2006,HPLC analysis:retention time＝6.8min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例5
Figure BDA0003676451320000102
第一步，2-溴-N-(4-(N-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰胺基)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)乙酰胺(9a)
将化合物6(300mg，0.62mmol)、K2CO3(171.49mg，1.24mmol)溶于4mL超干THF，冰浴下搅拌5-10分钟，缓慢滴加溴乙酰溴(54μL，0.62mmol)，加毕，冰浴条件下继续反应1小时，TLC(DCM/MeOH＝30:1，Rf＝0.2)显示反应完全。反应液直接用乙酸乙酯稀释并用水(30mL×2)洗涤。有机相用Na2SO4干燥，过滤，减压除去溶剂，柱层析分离(0～50％EA in PE)获得目标化合物，白色固体9a(320mg，0.53mmol，收率85.38％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.77(s,3H),4.05(s,2H),6.95-7.02(m,4H),7.39-7.41(m,2H),7.54(d,J＝8.92Hz,2H),7.60(d,J＝8.80Hz,2H),7.67(d,J＝8.96Hz,2H),7.94-7.98(m,2H),10.05(s,1H),10.13(s,1H),10.73(s,1H).
第二步，N-(4-(N-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰胺基)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-3-吗啉代丙酰胺(10a)
将化合物9a(300mg，0.48mmol)溶于5mL超干THF，室温下加入吗啉(85μL，0.97mmol)，加毕，加热回流反应3小时，TLC(DCM/MeOH＝15:1，Rf＝0.3)显示反应完全。反应液直接加水淬灭，乙酸乙酯萃取(30mL×2)。有机相用无水Na2SO4干燥，过滤，减压除去溶剂，柱层析分离(DCM/MeOH＝30:1)获得目标化合物，白色固体10a(150mg，0.21mmol，收率49.48％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ2.54-2.63(m,6H),2.72(t,J＝5.36Hz,2H),3.75-3.78(m,7H),6.81(dt,J＝8.92Hz,J＝3.04Hz,2H),7.13(s,2H),7.34-7.40(m,2H),7.51(dt,J＝8.80Hz,J＝2.44Hz,2H),7.62(t,J＝8.80Hz,4H),7.84-7.88(m,1H),7.92-7.96(m,1H),11.23(s,1H).
第三步，N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-2-吗啉代乙酰胺(11a)
将化合物10a(50mg，0.082mmol)溶于2mL超干DMF，加入K2CO3(45.61mg，0.33mmol)、KI(7mg，0.041mmol)、2-溴乙酰胺(39.44mg，0.29mmol)，60℃搅拌3h，TLC(DCM/MeOH＝10:1，Rf＝0.2)点板显示反应完全。向反应液中加入适量水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机层。无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，粗品通过柱层析(DCM/MeOH＝20:1)纯化，得到目标化合物，白色固体11a(30mg，0.04mmol，收率50.61％)。mp:179-181℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.65-2.72(m,4H),2.77-2.89(m,4H),3.26(d,J＝16.84Hz,2H),3.85(d,J＝24.96Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.82(dd,J＝16.40Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.33(d,J＝18.44Hz,2H),7.53-7.59(m,6H),7.85(d,J＝8.92Hz,1H),7.95(d,J＝8.92Hz,1H),8.19-8.22(m,1H),8.31-8.35(m,1H),10.43(d,J＝32.16Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.9,169.7,169.2,169.1,163.3,163.2,143.5,137.5,137.3,133.6,133.5,133.4,132.1,131.6,130.7,130.5,129.9,129.6,129.5,129.3,126.9,126.3,126.2,125.3,119.3,119.1,114.6,62.3,56.3,56.2,54.8,54.4,27.5.HRMS(ESI,positive)m/zcalcd for C33H36N6O8S3[M+H]+:741.1837；found 741.1836,HPLC analysis:retentiontime＝6.7min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例6
Figure BDA0003676451320000111
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-2-(4-甲基哌啶-1-基)乙酰胺(11b)
将实施例5中第二步的吗啉替换为4-甲基哌啶，其他同实施例5，获得目标化合物，白色固体11b(50mg，0.068mmol，收率54.66％)。mp:168-170℃.1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ0.98(t,J＝4.28Hz,3H),1.29-1.45(m,3H),1.67-1.72(m,2H),2.24(dd,J＝23.12Hz,J＝11.64Hz,2H),2.86-2.99(m,2H),3.20(d,J＝13.56Hz,2H),3.87(d,J＝21.24Hz,3H),4.31-4.51(m,4H),6.96-7.14(m,4H),7.48-7.52(m,2H),7.56-7.66(m,4H),7.71(d,J＝6.40Hz,1H),7.82(d,J＝8.92Hz,1H),8.11-8.14(m,1H),8.18-8.21(m,1H).13C NMR(101MHz,MeOD-d4)δ172.7,172.6,171.5,165.1,165.0,144.1,143.9,138.8,138.7,138.6,138.5,134.6,134.1,133.7,131.6,131.5,130.7,130.5,128.4,128.3,128.1,125.7,120.4,120.2,115.2,115.3,63.3,63.3,56.4,56.2,55.5,55.3,35.2,31.5,22.2.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C35H40N6O8S2[M+H]+:737.2429；found 737.2428,HPLC analysis:retentiontime＝7.1min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例7
Figure BDA0003676451320000121
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-2-硫代吗啉代乙酰胺(11c)
将实施例5中第二步的吗啉替换为硫代吗啉，其他同实施例5，获得目标化合物，白色固体11c(35mg，0.047mmol，收率45.21％).mp:179-181℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.65-2.72(m,4H),2.77-2.89(m,4H),3.26(d,J＝16.84Hz,2H),3.85(d,J＝24.96Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.82(dd,J＝16.40Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.33(d,J＝18.44Hz,2H),7.53-7.59(m,6H),7.85(d,J＝8.92Hz,1H),7.95(d,J＝8.92Hz,1H),8.19-8.22(m,1H),8.31-8.35(m,1H),10.43(d,J＝32.16Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.9,169.7,169.2,169.1,163.3,163.2,143.5,137.5,137.3,133.6,133.5,133.4,132.1,131.6,130.7,130.5,129.9,129.6,129.5,129.3,126.9,126.3,126.2,125.3,119.3,119.1,114.6,62.3,56.3,56.2,54.8,54.4,27.5.HRMS(ESI,positive)m/z calcdfor C33H36N6O8S3[M+H]+:741.1837；found 741.1836,HPLC analysis:retention time＝6.7min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例8
Figure BDA0003676451320000122
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酰胺(11d)
将实施例5中第二步的吗啉替换为哌啶，其他同实施例5，获得目标化合物，白色固体11d(30mg，0.04mmol，收率50.45％)。mp:192-194℃.1H NMR(600MHz,MeOD-d4)δ1.60(s,1H),1.83-1.93(m,5H),3.06-3.12(m,2H),3.60-3.65(m,2H),3.85(d,J＝30.96Hz,3H),4.11(d,J＝16.68Hz,2H),4.30-4.55(m,4H),6.96(d,J＝9.00Hz,1H),7.03(d,J＝8.94Hz,1H),7.10-7.19(m,2H),7.44-7.47(m,2H),7.55(d,J＝8.88Hz,1H),7.59-7.70(m,4H),7.76(d,J＝8.82Hz,1H),8.06-8.13(m,2H).13C NMR(151MHz,MeOD-d4)δ172.6,165.1,164.4,160.8,160.3,159.1,158.8,143.6,138.8,138.4,135.0,134.5,134.3,131.5,131.4,130.8,130.7,130.5,128.6,128.5,128.1,125.7,125.5,120.5,120.4,117.8,117.0,115.9,115.3,115.1,58.8,56.4,56.3,55.4,23.9,22.4.HRMS(ESI,positive)m/z calcdfor C34H38N6O8S2[M+H]+:723.2273；found 723.2269,HPLC analysis:retention time＝7.0min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例9
Figure BDA0003676451320000131
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酰胺(11e)
将实施例5中第二步的吗啉替换为N-乙基哌嗪，其他同实施例5，获得目标化合物，白色固体11e(45mg，0.06mmol，收率44％)。mp:214-215℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.98-1.02(m,3H),2.32-2.55(m,10H),3.18(d,J＝16.84Hz,2H),3.85(d,J＝24.96Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.82(dd,J＝16.40Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.33(d,J＝18.44Hz,2H),7.53-7.61(m,6H),7.81(d,J＝8.92Hz,1H),7.89(d,J＝8.92Hz,1H),8.19-8.22(m,1H),8.31-8.35(m,1H),10.18(d,J＝33.00Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.2,169.0,168.9,168.7,162.9,162.8,143.1,142.9,137.1,136.9,133.2,133.1,133.0,131.8,131.2,130.3,130.0,129.5,129.3,129.1,129.0,126.6,125.9,125.8,124.8,124.4,118.9,118.7,114.2,61.2,55.9,55.8,54.0,51.5,51.3.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C35H41N7O8S2[M+H]+:752.2538；found 752.2530,HPLC analysis:retention time＝7.1min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例10
Figure BDA0003676451320000132
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙酰胺(11f)
将实施例5中第二步的吗啉替换为N-异丙基哌嗪，其他同实施例5，获得目标化合物，白色固体11f(40mg，0.05mmol，收率45.28％)。mp:165-167℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.94-0.99(m,6H),2.59-2.66(m,1H),2.73(s,1H),2.89(s,1H),3.16(d,J＝16.84Hz,2H),3.86(d,J＝21.24Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.82(dd,J＝17.48Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.33(d,J＝16.64Hz,2H),7.54-7.61(m,6H),7.81(d,J＝8.80Hz,1H),7.90(d,J＝8.80Hz,1H),8.19-8.22(m,1H),8.31-8.35(m,1H),10.16(d,J＝33.36Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.3,169.2,168.8,168.7,162.9,162.8,142.9,142.8,137.1,136.9,133.2,133.0,131.9,131.2,130.2,130.0,129.5,129.2,129.1,129.0,126.5,125.9,124.8,118.8,118.7,114.2,61.9,55.8,55.7,53.9,53.6,53.3,47.8,35.8,29.9,18.3.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C36H43N7O8S2[M+H]+:766.2695；found 766.2685,HPLC analysis:retention time＝8.5min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例11
Figure BDA0003676451320000141
第一步，3-溴-N-(4-(N-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰胺基)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)丙酰胺(9b)
将实施例5中第一步的溴乙酰溴替换为3-溴丙酰氯，其他同实施例5，获得目标化合物，白色固体9b(140mg，0.23mmol，收率56％)。1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ2.97(t,J＝6.48Hz,2H),3.69(t,J＝6.48Hz,2H),3.78(s,3H),6.88(dt,J＝8.92Hz,J＝3.08Hz,2H),7.12(t,J＝7.96Hz 2H),7.30-7.35(m,2H),7.51-7.58(m,4H),7.64(dt,J＝8.92Hz,J＝2.32Hz,2H),7.85-7.92(m,2H).
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-3-(哌啶-1-基)丙酰胺(11g)
将实施例5第二步中的化合物9a替换为化合物9b，吗啉替换为哌啶，其他同实施例5的第二步和第三步，获得目标化合物，白色固体11g(40mg，0.05mmol，收率41.59％)。mp:143-145℃.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.43(s,2H),1.60(s,4H),2.34-2.77(m,6H),3.86(d,J＝33.24Hz,3H),4.15-4.32(m,4H),6.85(dd,J＝21.60Hz,J＝8.04Hz,1H),6.93-7.06(m,4H),7.12(d,J＝9.00Hz,1H),7.30(d,J＝26.94Hz,2H),7.54-7.61(m,6H),7.75(d,J＝8.16Hz,1H),7.84(d,J＝8.88Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.67(d,J＝44.94Hz,1H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ168.8,168.7,162.9,162.8,143.5,143.3,137.1,136.9,133.1,133.0,132.9,131.6,131.0,130.0,129.5,129.3,129.0,126.5,125.9,125.8,124.8,124.5,118.4,118.3,114.2,114.1,55.9,55.7,54.0,54.0,53.1.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C35H40N6O8S2[M+H]+:737.2429；found 737.2421,HPLC analysis:retention time＝7.4min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例12
Figure BDA0003676451320000151
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-3-(甲基哌啶-1-基)丙酰胺(11h)
将实施例5第二步中的化合物9a替换为化合物9b，吗啉替换为4-甲基哌啶，其他同实施例5的第二步和第三步，获得目标化合物，白色固体11h(36mg，0.03mmol，收率46.28％)。mp:159-161℃.1H NMR(400MHz,MeOD-d4)δ0.97(d,J＝6.60Hz,3H),1.26-1.34(m,3H),1.73(d,J＝13.44Hz,2H),2.63-2.70(m,2H),2.86(dd,J＝14.32Hz,J＝6.96Hz2H),3.05-3.08(m,2H),3.86(d,J＝19.68Hz,3H),4.31-4.51(m,4H),6.98(d,J＝8.92Hz,1H),7.05(dd,J＝15.40Hz,J＝7.92Hz,2H),7.13(dd,J＝15.40Hz,J＝7.96Hz,1H),7.46-7.51(m,2H),7.55-7.70(m,5H),7.78(d,J＝8.92Hz,1H),8.09-8.13(m,1H),8.16-8.20(m,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ168.8,168.7,168.7,162.9,162.8,143.5,143.3,137.1,136.9,133.1,133.0,133.0,132.9,131.7,130.9,130.2,130.0,129.5,129.3,129.1,126.5,126.4,126.0,125.8,124.8,124.5,118.4,118.2,114.2,114.1,55.8,55.7,54.1,53.9,53.0,21.7.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C36H42N6O8S2[M+H]+:751.2586；found751.2579,HPLC analysis:retention time＝8.2min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例13
Figure BDA0003676451320000152
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-3-吗啉代丙酰胺(11i)
将实施例5第二步中的化合物9a替换为化合物9b，其他同实施例5的第二步和第三步，获得目标化合物，白色固体11i(70mg，0.095mmol，收率61.26％)。mp:165-167℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.37-2.43(m,4H),2.53-2.58(m,2H),2.61-2.68(m,2H),3.58(s,4H),3.86(d,J＝21.76Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.82(dd,J＝14.80Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.34(d,J＝19.80Hz,2H),7.54-7.65(m,6H),7.75(d,J＝8.52Hz,1H),7.84(d,J＝8.56Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.50(d,J＝32.88Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ171.0,170.9,168.7,162.9,162.8,143.5,143.4,137.1,136.9,133.2,133.1,131.6,130.9,130.3,130.0,129.4,129.1,129.0,126.6,126.4,125.9,125.7,124.8,118.5,118.3,114.3,114.2,66.2,55.8,55.7,55.0,54.0,53.1,34.1.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C34H38N6O9S2[M+H]+:739.2222；found 739.2222,HPLC analysis:retention time＝6.7min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例14
Figure BDA0003676451320000161
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-3-硫代吗啉代丙酰胺(11j)
将实施例5第二步中的化合物9a替换为化合物9b，吗啉替换为硫代吗啉，其他同实施例5的第二步和第三步，获得目标化合物，白色固体11j(30mg，0.04mmol，收率46％)。mp:163-165℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ2.55-2.73(m,10H),3.86(d,J＝21.76Hz,3H),4.12-4.31(m,4H),6.82(dd,J＝14.40Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.32(d,J＝17.60Hz,2H),7.54-7.60(m,6H),7.73(d,J＝8.80Hz,1H),7.82(d,J＝8.80Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.46(d,J＝32.88Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ171.1,170.1,168.8,168.7,162.9,162.8,143.5,143.4,137.1,136.9,133.2,133.1,131.6,130.9,130.3,130.0,129.4,129.1,129.0,126.6,126.4,125.9,125.7,124.8,124.5,118.4,118.2,114.2,55.8,55.7,54.3,53.7,33.9,27.2.HRMS(ESI,positive)m/zcalcd for C34H38N6O8S3[M+H]+:755.1993；found 755.1986,HPLC analysis:retentiontime＝6.9min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例15
Figure BDA0003676451320000162
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-3-(4-乙基哌嗪-1-基)丙酰胺(11k)
将实施例5第二步中的化合物9a替换为化合物9b，吗啉替换为N-乙基哌嗪，其他同实施例5的第二步和第三步，获得目标化合物，白色固体11k(40mg，0.05mmol，收率46％)。mp:139-141℃.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ1.04(t,J＝5.12Hz,3H),2.54-2.73(m,8H),3.86(d,J＝22.00Hz,3H),4.13-4.30(m,4H),6.83(dd,J＝13.52Hz,J＝5.32Hz,1H),6.94-7.06(m,4H),7.12(d,J＝6.00Hz,1H),7.32(d,J＝20.96Hz,2H),7.54-7.60(m,6H),7.73(d,J＝5.88Hz,1H),7.83(d,J＝5.84Hz,1H),8.18-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.57(d,J＝32.76Hz,1H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ172.0,168.8,168.7,162.9,162.7,143.5 143.3,137.0,136.9,133.1,133.0,132.9,131.6,130.1,130.2,130.0,129.5,129.3,129.1,129.0,126.5,126.0,126.8,124.7,118.4,118.2,114.2,114.1,55.8,55.7,54.0,53.9,53.3,51.8,51.3,34.1.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C36H43N7O8S2[M+H]+:766.2695；found 766.2691,HPLC analysis:retention time＝7.4min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例16
Figure BDA0003676451320000171
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-3-(4-异丙基哌嗪-1-基)丙酰胺(11l)
将实施例5第二步中的化合物9a替换为化合物9b，吗啉替换为N-异丙基哌嗪，其他同实施例5的第二步和第三步，获得目标化合物，白色固体11l(60mg，0.08mmol，收率58.23％)。mp:157-159℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ0.83-1.23(m,8H),2.58-2.76(m,11H),3.86(d,J＝23.20Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.82(dd,J＝14.80Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.34(d,J＝19.80Hz,2H),7.54-7.65(m,6H),7.75(d,J＝8.52Hz,1H),7.84(d,J＝8.56Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.62(d,J＝32.64Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.9,168.8,168.7,162.9,162.8,143.5,143.4,137.1,136.9,133.2,133.1,132.0,132.9,131.6,130.9,130.2,130.0,129.5,129.3,129.0,126.5,126.0,125.8,124.8,124.5,118.4,118.2,114.2,55.8,55.7,53.9,53.2,47.7,34.1,17.6.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C37H45N7O8S2[M+H]+:780.2851；found 780.2847,HPLCanalysis:retention time＝8.5min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例17
Figure BDA0003676451320000172
第一步参照实施例5的第一步进行，将实施例5中第一步中的试剂溴乙酰溴替换为4-溴丁酰氯，其他方法步骤同实施例5的第一步，获得化合物9c。
第二步参照实施例5的第二步进行，将实施例5中第二步中的试剂吗啉替换为硫代吗啉，其他方法步骤同实施例5的第二步，获得化合物10m。
第三步参照实施例5的第三步进行，原料化合物10a替换为化合物10m，其他方法步骤同实施例5的第三步，获得化合物N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-4-硫代吗啉代丁酰胺(11m)，白色固体11m(80mg，0.1mmol，收率61.59％)。mp:145-147℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.69-1.79(m,2H),2.31-2.41(m,4H),2.53-2.60(m,8H),3.86(d,J＝24.20Hz,3H),4.11-4.33(m,4H),6.79(s,1H),6.96-7.14(m,5H),7.34(d,J＝19.80Hz,2H),7.54-7.65(m,6H),7.75(d,J＝8.52Hz,1H),7.84(d,J＝8.56Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.34(d,J＝34.84Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ172.2,168.8,168.7,162.9,162.8,143.8,143.6,137.1,136.9,133.2,133.1,132.9,130.5,130.3,130.0,129.3,129.0,126.5,125.8,125.7,124.9,124.8,118.3,118.1,114.2,58.0,55.8,55.7,54.9,54.6,54.1,54.0,34.7,27.2,21.7.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C35H40N6O8S3[M+H]+:769.2150；found769.2151,HPLC analysis:retention time＝7.0min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例18
Figure BDA0003676451320000181
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-4-吗啉代丁酰胺(11n)
第二步参照实施例17的第二步进行，将实施例17中第二步中的试剂硫代吗啉替换为吗啉，其他方法步骤同实施例17的第二步，获得化合物10n。
第三步按照实施例17的第三步进行，将实施例17中第三步原料替换为10n，其他同实施例17的第三步，获得目标化合物，白色固体11n(60mg，0.08mmol，收率59.78％)。mp:157-159℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1.72-1.81(m,2H),2.29-2.44(m,8H),3.51(s,4H),3.86(d,J＝23.84Hz,3H),4.12-4.32(m,4H),6.79(s,1H),6.96-7.14(m,5H),7.34(d,J＝19.80Hz,2H),7.54-7.65(m,6H),7.75(d,J＝8.52Hz,1H),7.84(d,J＝8.56Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.34(d,J＝33.36Hz,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ172.1,168.8,168.7,162.9,162.8,143.8,143.6,137.1,136.9,133.2,132.9,131.3,130.5,130.2,130.0,129.5,129.3,129.0,126.5,125.9,125.6,124.8,118.3,118.1,114.2,114.1,66.2,57.7,55.8,55.7,54.1,54.0,53.2,34.6,20.9.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C35H40N6O9S2[M+H]+:753.2378；found 753.2384,HPLC analysis:retentiontime＝6.6min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例19
Figure BDA0003676451320000191
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-4-(4-乙基哌嗪-1-基)丁酰胺(11o)
第二步参照实施例17的第二步进行，将实施例17中第二步中的试剂硫代吗啉替换为N-乙基哌嗪，其他方法步骤同实施例17的第二步，获得化合物10o。
第三步按照实施例17的第三步进行，将实施例17中第三步原料替换为10o，其他同实施例17的第三步，获得目标化合物，白色固体11o(50mg，0.06mmol，收率59％)。mp:152-154℃.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ0.99(t,J＝7.14Hz,3H),1.23-1.35(m,3H),1.74-1.78(m,2H),2.31-2.46(m,11H),3.86(d,J＝33.30Hz,3H),4.13-4.31(m,4H),6.81(dd,J＝7.38Hz,J＝6.66Hz,1H),6.94-7.14(m,5H),7.32(d,J＝23.76Hz,2H),7.54-7.59(m,6H),7.76(d,J＝8.88Hz,1H),7.84(d,J＝9.06Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.29-8.33(m,1H),10.43(d,J＝48.96Hz,1H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ172.1,168.8,168.7,162.8,143.7,137.0,136.9,133.1,133.0,132.9,131.3,130.6,130.2,130.0,129.5,129.2,129.1,128.9,126.5,125.9,125.7,124.8,124.7,124.5,118.3,118.1,114.2,114.1,57.1,55.8,55.7,53.9,52.1,51.5,34.5,29.0,21.9.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C37H45N7O8S2[M+H]+:780.2851；found 780.2864,HPLC analysis:retention time＝7.2min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例20
Figure BDA0003676451320000192
N-(4-(N-(2-氨基-2-氧代乙基)-N-(4-((N-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-甲氧基苯基)磺胺)萘-1-基)氨磺酰基)苯基)-4-(4-异丙基哌嗪-1-基)丁酰胺(11p)
第二步参照实施例17的第二步进行，将实施例17中第二步中的试剂硫代吗啉替换为N-异丙基哌嗪，其他方法步骤同实施例17的第二步，获得化合物10p。
第三步按照实施例17的第三步进行，将实施例17中第三步原料替换为10p，其他同实施例17的第三步，获得目标化合物，白色固体11p(35mg，0.04mmol，收率45.92％)。mp:160-161℃.1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ0.79-1.02(m,6H),1.24(s,3H),1.72-1.81(m,2H),2.34-2.44(m,8H),3.86(d,J＝21.76Hz,3H),4.13-4.33(m,4H),6.82(dd,J＝14.80Hz,J＝8.08Hz,1H),6.96-7.14(m,5H),7.34(d,J＝19.80Hz,2H),7.54-7.65(m,6H),7.75(d,J＝8.52Hz,1H),7.84(d,J＝8.56Hz,1H),8.17-8.21(m,1H),8.30-8.33(m,1H),10.40(d,J＝33.84Hz,1H).13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ172.1,168.8,168.7,162.8,162.7,143.7,137.0,136.9,133.1,133.0,132.9,131.4,130.7,130.2,130.0,129.5,129.2,129.1,129.0,126.5,125.9,125.8,124.8,124.7,124.5,118.3,118.1,114.2,114.1,57.0,55.8,55.7,54.1,54.0,47.8,34.5,21.9,17.8.HRMS(ESI,positive)m/z calcd for C38H47N7O8S2[M+H]+:794.3008；found 794.3006,HPLC analysis:retention time＝8.1min；peak area,>95％(210,254nm).
实施例21
荧光偏振法测定Keap1-Nrf2蛋白结合抑制活性
荧光探针(FITC–βAla–DEETGEF–OH)溶解于缓冲液(10mM HEPES，pH＝7.4，3.4mMEDTA，150mM NaCl，0.005％Tween-20)稀释至10nM，加入到梯度稀释的Keap1蛋白中，室温避光孵育60分钟，荧光各向异性值用SpectraMax M5e酶标仪读取(ex:485nm，em:535nm)。蛋白结合常数根据荧光各向异性值Mathematica7(Wolfram Research Inc.)拟合得到KD1。将实施例1～20制备的化合物溶解于DMSO用缓冲液(10mM HEPES,pH 7.4，3.4mM EDTA,150mMNaCl，0.005％Tween–20)稀释至需要浓度(1％DMSO)，20μL化合物加入到60μL含有10nM荧光探针(FITC–βAla–DEETGEF–OH)、400nM的Keap1蛋白的溶液中，室温避光孵育1小时。荧光各向异性值用SpectraMax M5酶标仪(Molecular Devices，California)(ex:485nm,em:535nm)测定。蛋白结合常数根据荧光各向异性值用Mathematica 7(Wolfram ResearchInc.)拟合得到KD2，如表1所示，该系列所有衍生物均能与Keap1蛋白结合并表现出较高的亲和力，说明可作为Keap1-Nrf2蛋白相互作用抑制剂进行后续研究。
实施例22
细胞毒性测试
将巨噬细胞按每孔100μL，5x104个细胞接种于96孔板(Corning，#3599)，置于37℃，5％CO2培养24小时，使其完全贴壁去除上清液。每孔加入新培养基100μL，实施例1～20制备的化合物(100μM)处理24h，控制DMSO含量应小于5‰，培养箱中孵育24小时，空白组用完全培养基。取出96孔板，避光条件下每孔加入含有Cell Titer BlueTM试剂的培养基100μL(将Cell Titer Blue用完全培养基稀释至10％，v/v)，37℃，5％CO2培养箱中孵育1-4小时。在SpectraMax M5上测量荧光强度(ex:560nm,em:590nm)，使用软件Graphpad Prism分析荧光强度数据计算CC50值。计算公式：存活率(％)＝[(As-Ac)/(Ab-Ac)]×100％；As：实验孔(含细胞、培养基、Cell Titer Blue试剂和化合物)，Ab：对照孔(含细胞、培养基和CellTiter Blue试剂，不含化合物)，Ac：空白孔(含培养基和Cell Titer Blue试剂，不含细胞和化合物)，结果如表1所示，该系列所有化合物除8a，8b，11b，11j在100μM的浓度下对小鼠的腹腔巨噬细胞具有一定的细胞毒性，其余化合物在100μM下均未表现出细胞毒性，证明该类衍生物具有较高的安全性。
实施例23
DCFH-DA法检测ROS
将巨噬细胞按每孔100μL，5×104个细胞接种于96孔板(Corning，#3599)，置于37℃，5％CO2培养24小时，使其完全贴壁去除上清液。每孔加入100μL含LPS(2μg/mL)和实施例1～20制备的化合物(10μM)的DMEM培养基进行处理6小时。采用碧云天活性氧检测试剂盒(DCFH-DA法)对细胞中活性氧的含量进行测定和计算，利用无血清培养基稀释DCFH-DA探针(1：2000)，移除培养基，每孔加入50μL(覆盖细胞为宜)稀释后的探针，37℃，5％CO2培养箱孵育30分钟。弃掉上清，PBS快速洗涤3次，SpectraMax M5酶标仪(ex:488nm,em:525nm)测量荧光强度，结果如图1所示。图1是本发明制备的部分化合物抑制ROS的表达示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。从图中可以看出，化合物11k、11i和8a表现对于LPS诱导小鼠腹腔巨噬中ROS的产生较好的抑制活性，并且优于化合物NXPZ-2，其中11k表现出最佳的抑制活性，具备后续抗炎活性研究的基础。
实施例24
NO检测
将巨噬细胞按每孔100μL，5×104个细胞接种于96孔板(Corning，#3599)，置于37℃，5％CO2培养24小时，使其完全贴壁去除上清液。每孔加入100μL含LPS(200ng/mL)和不同化合物(10μM)的DMEM培养基进行处理24小时。利用总一氧化氮试剂盒进行检测，吸取50μL上清液至新的96孔板中，每孔先加入50μL Griess Reagent I后拍打20～30s，再加入50μLGriess Reagent II，37℃，5％CO2培养箱孵育20分钟，利用SpectraMax M5酶标仪540nM测定吸光度，结果如图2所示。图2是本发明制备的部分化合物抑制NO的表达示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。从图中可以看出，化合物11k、11i和8a表现对于LPS诱导小鼠腹腔巨噬中NO的产生较好的抑制活性，并且优于NXPZ-2，其中11k表现出最佳的抑制活性，具备后续抗炎活性研究的基础。
实施例25
ELISA测TNF–α
将巨噬细胞按每孔100μL，5×105个细胞接种于96孔板(Corning，#3599)，置于37℃，5％CO2培养24小时，使其完全贴壁去除上清液。每孔加入100μL含LPS(100ng/mL)和不同化合物(10μM)的DMEM培养基进行处理4小时。吸取细胞上清液10μL转移到新的96孔板中，每孔加入190μL PBS(稀释20倍)，通过小鼠TNF-αELISA试剂盒(Invitrogen，BMS607-3TEN)测量TNF-α的含量。使用SpectraMax M5酶标仪测定450nm波长下的吸光度，如图3所示。图3是本发明制备的部分化合物抑制炎症因子TNF-α的表达示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。从图中可以看出，化合物11k、11i和8a表现对于LPS诱导小鼠腹腔巨噬中TNF-α的产生较好的抑制活性，并且优于NXPZ-2，为后续抗炎活性研究的奠定理论基础。
实施例26
体内支气管肺泡灌洗液(BALF)的提取
处死小鼠后通过气道缓慢输注1mL预冷PBS，轻微揉搓肺部回抽收集BALF样品，每只小鼠收集约600μL BALF用于后续研究。使用鼠源TNF-αELISA、IL-1βELISA和IL-6ELISA试剂盒来估算BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量。结果如图4～图6所示。图4是本发明制备的部分化合物ELISA测定BALF中炎性细胞因子m-TNF-α水平，评估化合物11k对LPS诱导炎症反应的保护作用示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。图5是本发明制备的部分化合物ELISA测定BALF中炎性细胞因子IL-1β水平，评估化合物11k对LPS诱导炎症反应的保护作用示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。图6是本发明制备的部分化合物ELISA测定BALF中炎性细胞因子IL-6水平，评估化合物11k对LPS诱导炎症反应的保护作用示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。结果显示，与模型小鼠相比，化合物11k治疗的小鼠肺泡灌洗液(BALF)中呈剂量依赖性表现出较低水平的TNF-α、IL-1β和IL-6水平。
实施例27
体内RNA提取和逆转录定量PCR(RT-qPCR)
首先按照RNA使用说明书的要求提取肺组织中的RNA，于-80℃暂时储存。待测定RNA浓度后，再按照RT-PCR的PrimeScriptTM RT试剂盒(Takara Bio，Inc.)对1μg RNA进行逆转录为cDNA。最后利用PCR***对cDNA进行qPCR分析。使用2-ΔΔcq循环阈值法将内部mRNA相对表达水平标准化。结果显示，在mRNA水平上，11k呈剂量依赖性地抑制小鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子的表达。图7是RT-qPCR检测LPS-ALI和化合物11k+LPS-ALI小鼠肺组织中TNF-α的mRNA水平示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。图8是RT-qPCR检测LPS-ALI和化合物11k+LPS-ALI小鼠肺组织中IL-1β的mRNA水平示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。图9是RT-qPCR检测LPS-ALI和化合物11k+LPS-ALI小鼠肺组织中IL-6的mRNA水平示意图(##p<0.01，###p<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)。
实施例28
Western Blotting分析
(1)胞质胞核蛋白提取：称量不同组别的肺组织样品约40mg，放入预冷的1.5mL离心管中，用预冷的PBS清洗组织样品一次，3000rpm离心3分钟，弃去上清，尽可能使样品干燥。加入胞浆提取缓冲液(Invent Biotechnologies，China)100μL，手动研磨仪匀浆，冰上裂解30分钟。14800rpm离心10分钟，将上清液转移至新的预冷EP管中，胞浆蛋白于-80℃保存。将沉淀用0.5mL预冷的PBS重悬，10000rpm离心3-5分钟清洗沉淀洗去胞浆蛋白。加入胞核提取缓冲液，涡旋大力震荡15秒，冰上裂解5分钟，如此往复3-4次，迅速将核提取物转移至预冷的离心管套管中，14800rpm离心3分钟，弃掉离心管柱，胞核蛋白于-80℃储存。
(2)Western Blotting：首先利用BCA定量，确定蛋白浓度。将组织胞浆蛋白上样量60μg，胞核蛋白上样量35μg，电压80V电泳2h，电泳结束后转移到NC膜上。用5％脱脂牛奶将膜封闭2小时(Nrf2条带可适当延长封闭时间)，将相应一抗以1:1000稀释并在4℃下孵育过夜，然后在室温下与二抗(1:10000)避光孵育1小时。使用Odyssey扫膜仪扫描显示，图10是本发明通过western blotting分析腹腔注射化合物11k后，其肺组织中胞浆和胞核Nrf2水平示意图(##p<0.01，###p小鼠<0.001与空白组相比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001与模型组相比较)，结果显示，腹腔注射化合物11k后，成功诱导了Nrf2的核移位。
实施例29
化合物11k的药代动力学研究
雄性Sprague-Dawley大鼠(250-300g)随机分为3组(n＝3)，静脉注射剂量水平(5mg/kg)和灌胃剂量(20mg/kg)。首先将样品溶解于DMSO、聚乙二醇(PEG)400和生理盐水(5/35/60，V/V)。给药后1小时、2小时、4小时、6小时、12小时和24小时，分别在0分钟、5分钟、15分钟和30分钟从眼眶腔采集血样，并将其放入肝素化离心管。然后对样品进行离心分离血浆，并将其储存在-80℃，直到分析。LCMS分析用于测定血浆中化合物的浓度。在1.5mL离心管中，将25μL血浆添加到50μL内标物(格列齐特)和125μL乙腈中，在12000rpm下离心10分钟。收集上清液层，注入25μL进行LCMS分析。将不同浓度的化合物与内标物一起添加到空白血浆中，生成血液中的标准曲线。所有样品均用安捷伦1200进行定量。流动相为乙腈/5mM甲酸铵(含0.1％甲酸)，流速为0.4mL/min。药代动力学参数如表2所示。
表1
Figure BDA0003676451320000221
Figure BDA0003676451320000231
a使用荧光各向异性测定法测定每种化合物的靶点亲和力KD2值，数值越小表示化合物活性越高。
b在100μM或50μM下测定50％的细胞毒性浓度(CC50)，数值越大表示化合物毒性越小，安全性越高。
首先，将非极性链烷烃(8a-d)与对称萘磺酰胺NXPZ-2的氨基相连。通过体外Keap1-Nrf2荧光各向异性实验显示，随着碳链的延长，活性逐渐降低，化合物8c和8d抑制活性降低到10μM以下。接下来，尝试引入溶解度更好的极性基团。引入哌啶(11d)和甲基哌啶(11b)显示出中等的抑制活性。引入吗啉的衍生物(11a)显示出更好的活性，但仍低于NXPZ-2。与11a相比，引入硫代吗啉衍生物(11c)的活性又有所降低。而当引入N-乙基哌嗪的化合物11e将活性提高到纳摩尔范围(KD2＝480nM)，含有N-异丙基哌嗪11f具有KD2＝1450nM的活性。用相似的取代基在链中扩展了一个碳。与相应的衍生物11a和11b相比，化合物11g和11h的活性提高了3～4倍。同样，11i吗啉和11j与硫代吗啉的活性仍然得到改善。化合物11k表现出最好的抑制活性(KD2＝210nM)，高于NXPZ-2(KD2＝230nM)和SCN-6(KD2＝455nM)。化合物11l也将活性提高了2倍。最后，尝试了三个碳的链，与两个碳相比，活性略有下降。化合物11m和11n显示出2.92和1.08μM的抑制活性。化合物11o和11p的活性比两个碳链的11k和11l降低了2倍，与单碳链的11e和11f的活性相当。通过CellTiterTMBlue试剂盒检测，这些化合物在100或50μM的剂量下对正常小鼠腹腔巨噬细胞没有任何细胞毒性。
表2.化合物11k药代动力学参数
Figure BDA0003676451320000232
Figure BDA0003676451320000241
通过体外活性筛选，化合物11i、11k、8a在LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞中显示出良好的抗炎活性。它们可以显著抑制ROS和NO的产生以及促炎因子TNF-α的表达，均高于NXPZ-2。通过ELISA试剂盒检测肺部炎症细胞因子水平结果显示，与模型小鼠相比，化合物11k治疗的小鼠肺泡灌洗液(BALF)中呈剂量依赖性表现出较低水平的TNF-α、IL-1β和IL-6水平。在mRNA水平上，11k呈剂量依赖性地抑制小鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子的表达。Western blotting分析表明，11k同样呈剂量依赖性(5、10和20mg/kg)增加核内Nrf2蛋白并减少胞浆蛋白水平，表明11k可以诱导肺组织细胞中的Nrf2核移位。通过体内药代动力学研究显示，化合物11k口服生物利用度达到了20％，表现出良好的药代动力学性质，是目前现已报道该结构类型衍生物中生物利用度最高的化合物。
本发明提供一类活性好、结构新颖并更具成药性潜力的取代萘磺酰胺类Keap1-Nrf2 PPI小分子抑制剂，可以干扰Keap1-Nrf2相互作用，激活Nrf2，降低细胞炎症因子和增强细胞抗氧化能力，从而减轻炎性损伤，具有潜在的抗炎活性，可用于制备成抗炎药物用于众多炎症相关疾病的炎性损伤。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims (5)

1.一种萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐，其特征在于，结构通式如下所示：
Figure FDA0003676451310000011
其中，R1选自C1～C10烷基、
Figure FDA0003676451310000012
R2、R3、R4、R5、R6各自独立的选自C1～C10烷基；
n选自1至5的正整数。
2.根据权利要求1所述的萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐，其特征在于，所述萘磺酰胺类小分子化合物中，R1选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基、叔戊基、
Figure FDA0003676451310000013
Figure FDA0003676451310000021
3.根据权利要求2所述的萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐，其特征在于，所述萘磺酰胺类小分子化合物选自以下结构的一种：
Figure FDA0003676451310000022
Figure FDA0003676451310000031
Figure FDA0003676451310000041
4.一种权利要求1至3任一项所述的萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐在制备预防或治疗炎症所引起的疾病的药物中的应用。
5.一种权利要求1至3任一项所述的萘磺酰胺类小分子化合物或其药用盐在制备Keap1-Nrf2蛋白相互作用抑制剂中的应用。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108752245A (zh) * 2018-07-16 2018-11-06 宁夏医科大学 萘磺酰胺乙酰胺类化合物及其应用和药物组合物
CN113264859A (zh) * 2021-05-28 2021-08-17 宁夏医科大学 萘磺胺异硫氰酸酯类双功能小分子及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108752245A (zh) * 2018-07-16 2018-11-06 宁夏医科大学 萘磺酰胺乙酰胺类化合物及其应用和药物组合物
CN113264859A (zh) * 2021-05-28 2021-08-17 宁夏医科大学 萘磺胺异硫氰酸酯类双功能小分子及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Y. SUN, ET AL.: "Direct inhibition of Keap1-Nrf2 Protein-Protein interaction as a potential therapeutic strategy for Alzheimer\'s disease", 《BIOORGANIC CHEMISTRY》, vol. 103, pages 1 - 16 *

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