CN115093986B - 强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents
强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115093986B CN115093986B CN202210511220.5A CN202210511220A CN115093986B CN 115093986 B CN115093986 B CN 115093986B CN 202210511220 A CN202210511220 A CN 202210511220A CN 115093986 B CN115093986 B CN 115093986B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- composite microbial
- paracoccus
- denitrification
- dephosphorization
- sewage
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 50
- 239000010865 sewage Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 38
- 241001478304 Paracoccus versutus Species 0.000 claims abstract description 33
- 241001633977 Paracoccus pantotrophus Species 0.000 claims abstract description 32
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 45
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 11
- 241001057811 Paracoccus <mealybug> Species 0.000 claims description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 7
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 3
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 94
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 48
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 abstract description 48
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 abstract description 48
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 47
- 241000589614 Pseudomonas stutzeri Species 0.000 abstract description 31
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 abstract description 11
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 3
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N ammonia nh3 Chemical compound N.N XKMRRTOUMJRJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000012851 eutrophication Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000010842 industrial wastewater Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010841 municipal wastewater Substances 0.000 description 1
- 239000008239 natural water Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003911 water pollution Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2101/00—Nature of the contaminant
- C02F2101/10—Inorganic compounds
- C02F2101/105—Phosphorus compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2101/00—Nature of the contaminant
- C02F2101/10—Inorganic compounds
- C02F2101/16—Nitrogen compounds, e.g. ammonia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2101/00—Nature of the contaminant
- C02F2101/10—Inorganic compounds
- C02F2101/16—Nitrogen compounds, e.g. ammonia
- C02F2101/163—Nitrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
- Y02W10/00—Technologies for wastewater treatment
- Y02W10/10—Biological treatment of water, waste water, or sewage
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
本发明公开了强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用,所述复合菌剂包Pseudomonas stutzeri JUST‑1,Paracoccus pantotrophus JUST‑2,Paracoccus versutus JUST‑3三株菌种。本发明提供的用于强化脱氮除磷的复合微生物菌剂相对于单个菌种适应能力更强,能够增强整个复合微生物菌剂的稳定性,可以同时脱氮和除磷,大大提高了去除氮磷的效率。该复合微生物菌剂对高浓度氮磷合成废水中总氮和总磷的去除率可达93.58%和91.32%;对实际生活污水中总氮、总磷和COD去除率分别为96.56%、93.03%和94.47%。
Description
技术领域
本发明属于环境微生物技术领域,涉及一种市政污水处理的生物方法,具体为强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
氮和磷是生物的重要营养源,但过量的氮磷会引起水体富营养化,造成一系列水体的污染问题。目前氮和磷的去除已经成为城市污水处理工艺的重要部分,氨氮指标已经成为我国总量控制指标和污染物削减指标之一。目前,物化法和生物法是去除污水中的氮磷元素最为常用的方法。物化法具有占地面积较小、对水质适应性强、效果比较稳定以及出水水质好等优点,但其仍有运行成本高、容易造成二次污染以及工艺比较复杂等缺点。相较于物化法脱氮除磷,生物法处理成本低、二次污染风险小,微生物来源范围广、繁殖速度快以及环境适应能力强,因此生物法更显优势。但是,随着现代合成工业的发展,使得污水水质变得更加复杂,用单一菌种很难将其彻底降解。
生物强化技术,是为了提高生物处理***的处理能力,而向该***中投加从自然界中筛选出的优势菌种或通过基因组合技术产生的高效菌种,以去除某一种或某一类污染物的方法。复合菌剂是基于微生态学理论,利用微生物菌群的联合作用,由两种或两种以上有益的且互不拮抗的微生物菌种制备的活菌制剂,是一种应用广泛的生物强化技术。较单菌种微生物制剂相比,复合菌剂不仅集合了单菌株的功能,而且增加了协同共生作用,更加适合复杂多变的生态环境。复合菌剂的构建原理是将来自特定环境中具有特定功能的微生物菌群针对不同的处理体系进行科学组合,构建出高效的或具有特定功能的菌群。其构建过程首先是对微生物进行优选、驯化,将具有不同功能的菌群提取出来,然后针对各类工业废水、天然水体、市政污水、生活垃圾和养殖场等不同处理对象、环境,经多次组合搭配,构建出最优组合的复合菌剂。处理对象和应用场合的不同使目前复合菌剂的开发呈多样化的发展趋势。
因此,有针对性地选择具有高效去污能力的微生物,研制出可以高效净化水体污染的复合菌剂,利用复合微生物菌群的生理生化特性,迅速降低水体中COD、总氮、氨氮和总磷等污染物的含量,活化活性污泥***,增加水体含氧量,实现污染水体净化修复,是一项有着重大经济效益和社会效益的工作。
发明内容
解决的技术问题:为了克服现有技术的不足,获得一种具有良好稳定性、对污水中氮和磷的去除效果较好,可以起到良好的水体脱氮除磷作用的复合菌体,本发明提供了强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用。
技术方案:强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂,所述复合菌剂包括Pseudomonasstutzeri JUST-1,Paracoccus pantotrophus JUST-2,Paracoccus versutus JUST-3三株菌种;所述Pseudomonas stutzeri JUST-1的保藏编号为CCTCC NO:M 2022234;Paracoccuspantotrophus JUST-2的保藏编号为CCTCC NO:M 2022235;Paracoccus versutus JUST-3的保藏编号为CCTCC NO:M 2022233。保藏于中国典型培养物保藏中心,地址为中国,武汉,武汉大学,430072;保藏日期:2022年3月9日。其中,Pseudomonas stutzeri JUST-1菌株为革兰氏阴性菌,短杆状,长度为1~1.2μm。细菌菌落呈乳黄色,半透明,边缘不规则,扁平,表面光滑粘稠,不易挑取。Paracoccus pantotrophus JUST-2菌株为革兰氏染色为阴性,近球状,直径约为0.8μm。细菌菌落呈乳白色,圆形,***,表面光滑,边缘整齐,湿润,粘稠易挑取。Paracoccus versutus JUST-3菌株为革兰氏染色呈阴性,近球形,直径约0.5~0.8μm。细菌菌落呈圆形,乳白色,边缘整齐,表面光滑***,湿润,粘稠易挑取。
优选的,所述复合菌剂中Pseudomonas stutzeri JUST-1,Paracoccuspantotrophus JUST-2,Paracoccus versutus JUST-3三株菌种的活菌数比例为2:1:1。
优选的,所述Pseudomonas stutzeri JUST-1的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示:AGAGTTTGATCATGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGGATGAGTGGAGCTTGCTCCATGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGTGGGGGATCTTCGGACCTCACGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGTTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCAACAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTATGGCAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTCTGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGGACGGTTACCACGGAGTGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCT。
Paracoccus pantotrophus JUST-2的16S rDNA序列如SEQ ID NO.2所示:AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGCACCCTTCGGGGTGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATATGCCCTTTGGTACGGAATAGTCCTGGGAAACTGGGGGTAATACCGTATGCGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGCCAAAGGATTAGCCCGCGTTGGATTAGGTAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGCCGACGATCCATAGCTGGTTTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTAGACAATGGGGGCAACCCTGATCTAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCAGCTGGGAAGATAATGACGGTACCAGCAGAAGAAGCCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGACCGGAAAGTTGGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTCAAAACTATCGGTCTGGAGTTCGAGAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGATACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCCAGTCGTCGGGCAGCATGCTGTTCGGTGACACACCTAACGGATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAACCCTTGACATCCCAGGACCGGCCCGGAGACGGGTCTTTCACTTCGGTGACCTGGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGGTTAAGTCCGGCAACGAGCGCAACCCACACTCTTAGTTGCCAGCATTTGGTTGGGCACTCTAAGAGAACTGCCGATGATAAGTCGGAGGAAGGTGTGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGTTAATCCCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGAACAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGGTCTACCCGACGGCCGTGCGCTAACCAGCAATGGGGGCAGCGGACCACGGTAGGCTCAGCGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCT。
Paracoccus versutus JUST-3的16S rDNA序列如SEQ ID NO.3所示:AGAGTTTGATCCTGGCTCAGAACGAACGCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAGTCGAGCGCACCTTCGGGTGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATATGCCCTTTGGTACGGAATAGTCCTGGGAAACTGGGGGTAATACCGTATGCGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGCCAAAGGATTAGCCCGCGTTGGATTAGGTAGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGCCGACGATCCATAGCTGGTTTGAGAGGATGATCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATCTTAGACAATGGGGGCAACCCTGATCTAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCAGCTGGGAAGATAATGACGGTACCAGCAGAAGAAGCCCCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGACCGGAAAGTTGGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTCAAAACTATCGGTCTGGAGTTCGAGAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGATACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCCAGTCGTCGGGCAGCATGCTGTTCGGTGACACACCTAACGGATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAACCCTTGACATCCCAGGACCGGCCCGGAGACGGGTCTTTCACTTCGGTGACCTGGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGGTTAAGTCCGGCAACGAGCGCAACCCACACTTCCAGTTGCCATCATTTGGTTGGGCACTCTGGAAGAACTGCCGATGATAAGTCGGAGGAAGGTGTGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGTTAATCCCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGAACAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGGTCTACCCGACGGCCGTGCGCTAACCAGCAATGGGGGCAGCGGACCACGGTAGGCTCAGCGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGGGAACCTGCGGCTGGATCACCT。
以上序列已提交NCBI,Pseudomonas stutzeri JUST-1登录号为SRR18120113,Paracoccus pantotrophus JUST-2登录号为SRR18214212,Paracoccus versutus JUST-3登录号为SRR18191317。
采用BLAST分析法将16S rDNA序列与GenBank数据库进行比对分析,发现所述菌株Pseudomonas stutzeri JUST-1与Pseudomonas stutzeri的亲缘关系最接近,同源性高达99.99%;菌株Paracoccus pantotrophus JUST-2与Paracoccus pantotrophus的亲缘关系最接近,同源性高达99%;菌株Paracoccus versutus JUST-3与Paracoccus versutus的亲缘关系最接近,同源性高达99%。
以上任一所述强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂的制备方法,所述方法包括以下步骤:
(1)将活化的Pseudomonas stutzeri JUST-1菌液加入无菌离心管中进行离心,弃去上清液,接着向离心管中滴入0.01M PBS缓冲溶液,冲洗三次后重悬制成Pseudomonasstutzeri JUST-1菌悬液;
(2)按步骤(1)的方法分别得到Paracoccus pantotrophus JUST-2菌悬液和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液;
(3)将Pseudomonas stutzeri JUST-1菌悬液、Paracoccus pantotrophus JUST-2菌悬液和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液按体积比2:1:1混合得到复合菌剂。
以上任一所述强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂在污水处理过程中的应用。
优选的,复合菌剂的菌悬液OD600值为0.5A,菌悬液以体积分数1%~5%接种于反硝化除磷培养基中,菌悬液与污水的体积比为1:100~1:20。
优选的,菌悬液以2%体积比投加到总氮和总磷初始浓度为100mg/L和90mg/L的高浓度氮磷合成废水中,经24h反应后,总氮和总磷的去除率分别为93.58%和91.32%。而Pseudomonas stutzeri JUST-1对初始总氮和总磷浓度为100mg/L和90mg/L的高浓度氮磷合成废水的总氮和总磷的去除率可达76.17%和71.96%。Paracoccus pantotrophusJUST-2对初始总氮和总磷浓度为100mg/L和90mg/L的高浓度氮磷合成废水的总氮和总磷的去除率可达81.34%和65.71%。Paracoccus versutus JUST-3对初始总氮和总磷浓度为100mg/L和90mg/L的高浓度氮磷合成废水的总氮和总磷的去除率可达68.98%和75.32%。复合菌剂较采用单一菌种对总氮和总磷的去除率分别提高了大约13~25%和20~26%。
优选的,菌悬液以2.5%体积比投加到总氮、总磷和COD初始浓度为45.26mg/L、4.08mg/L和189mg/L的实际生活污水中,经24h反应后,总氮、总磷和COD的去除率分别为96.56%、93.03%和94.47%。
本发明所述复合菌剂发挥协同作用的原理在于:两种或两种以上有益的且互不拮抗的微生物菌种经多次组合搭配,构建出最优组合的复合菌剂,制备的复合菌剂不仅集合了单菌株的功能,而且增加了协同共生作用,复合菌剂中多种菌株相互促进、相互补充,脱氮除磷效果远远大于单一菌种。
有益效果:本发明提供的用于强化脱氮除磷的复合微生物菌剂,按脱氮除磷特性相同将Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccusversutus JUST-3结合在一起,复合菌剂相对于单个菌种适应能力强,且复合菌剂的每个菌种联合发挥作用,能够增强整个复合微生物菌剂的稳定性,且可以同时脱氮和除磷,大大提高了去除氮磷的效率。
附图说明
图1为本发明使用Pseudomonas stutzeri JUST-1的16S rRNA序列所作的***发育树;
图2为本发明使用Paracoccus pantotrophus JUST-2的16S rRNA序列所作的***发育树;
图3为本发明使用Paracoccus versutus JUST-3的16S rRNA序列所作的***发育树;
图4为本发明复合微生物菌剂对高浓度氮磷合成废水的氮磷去除效果图;
图5为本发明复合微生物菌剂对实际生活污水的氮磷去除效果图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容,但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下,对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换,均属于本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1:Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccus versutus JUST-3的分离和鉴定
(一)材料准备
1、从镇江市征润州污水处理厂好氧池中取得活性污泥,投入实验室稳定运行的SBR反应器中进行驯化培养,在反应器好氧阶段末期采集新鲜活性污泥作为筛选功能菌株的来源。
2、培养基
反硝化除磷培养基1:1.0g/L NaCl,0.5g/L MgCl2,0.2g/L KH2PO4,0.3g/L KCl,0.015g/L CaCl2,80mg-N/L KNO3,600mg-C/L乳酸和50mL维氏盐溶液,pH值为7.2~7.4。
反硝化除磷培养基2:1.0g/L NaCl,0.5g/L MgCl2,0.2g/L KH2PO4,0.3g/L KCl,0.015g/L CaCl2,80mg-N/L KNO3,600mg-C/L乙酸钠和50mL维氏盐溶液,pH值为7.2~7.4。
维氏盐溶液:6.55g/L K2HPO4·3H2O,2.5g/L MgSO4·7H2O,2.5g/L NaCl,0.038g/LMnSO4·H2O,0.05g/L FeSO4·7H2O。
3、实验仪器和设备
高压蒸汽灭菌锅,恒温培养箱,摇床,紫外可见分光光度计,离心机,超净工作台,移液枪。
(二)菌株的分离筛选与纯化
(1)将10mL新鲜活性污泥转移到含有90mL无菌反硝化除磷培养基中,搅拌得到均匀的悬浮液。经32℃,120rpm摇床培养1~2天后,将10mL悬浮液转移到90mL的新鲜培养基中,每2天重复转移一次,直到培养基均匀且无沉积物。取完成选择性富集过程的菌悬液1mL,用无菌水做梯度稀释,稀释10,100,1000,10000倍,四个梯度各取200μL稀释液涂布于反硝化除磷琼脂培养基平板上,置于32℃恒温培养箱中倒置培养2天。采用平板划线法对筛选出的单一菌落进行纯化,反复划线纯化5~7代,直至形成均匀单菌落,且无异常菌落出现。用接种环从平板中刮取一个茁壮单菌落到已灭菌的反硝化除磷培养基中,放入32℃,120rpm摇床进行培养,24h后取菌悬液于离心管中,在8000r/min条件下离心5min,倾倒上清液,用PBS缓冲液冲洗三次后重悬制成菌悬液,作为后续实验的接种液,固定菌悬液OD600值约为0.5A。将接种液以2%(v/v)接种量接种于装有100mL反硝化除磷液体培养基的250mL锥形瓶中,置于30℃,160rpm条件下连续培养24h,并于培养的第12h、24h取样测定菌株的生长量(OD600)以及上清液中总氮和总磷浓度,并计算其总氮和总磷去除率。
(2)分离获得稳定的Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophusJUST-2和Paracoccus versutus JUST-3后,取单菌落在反硝化除磷培养基中扩增,用PBS缓冲液冲洗三次后重悬制成OD600为0.5A的菌悬液,保存在4℃,备用。
(三)菌株特性及鉴定
1、菌落形态特征以及生理生化特性
将Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccus versutus JUST-3分别平板划线,观察其单菌落。Pseudomonas stutzeriJUST-1菌落呈乳黄色,半透明,边缘不规则,扁平,表面光滑粘稠,不易挑取;Paracoccuspantotrophus JUST-2菌落呈乳白色,圆形,***,表面光滑,边缘整齐,湿润,粘稠易挑取;Paracoccus versutus JUST-3菌落呈圆形,乳白色,边缘整齐,表面光滑***,湿润,粘稠易挑取。Pseudomonas stutzeri JUST-1革兰氏染色呈阴性,短杆状,长度为1~1.2μm;Paracoccus pantotrophus JUST-2革兰氏染色呈阴性,近球状,直径约为0.8μm;Paracoccus versutus JUST-3革兰氏染色呈阴性,近球形,直径为0.5~0.8μm。
2、细菌的16S rRNA分子鉴定
取菌体加入400μL Buffer SCL裂解菌体,65℃水浴1h左右,中间每隔10min混匀1次,直至混合液变澄清。然后离心取上清液进行DNA提取。采用Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒(上海生工)提取基因组DNA。将提取的DNA作为模板,采用针对细菌16S rRNA基因的通用引物对27F/1492R进行PCR扩增,所述引物的序列如下:27F(SEQ ID NO.4),AGAGTTTGATCCTGGCTCAG;1492R(SEQ ID NO.5),TACGGYTACCTTGTTACGACTT。将PCR产物送交上海生工进行测序,采用BLAST分析法将16S rDNA序列与GenBank数据库进行比对分析,发现Pseudomonas stutzeri JUST-1与Pseudomonas stutzeri的亲缘关系最接近,同源性高达99.99%;Paracoccus pantotrophus JUST-2与Paracoccus pantotrophus的亲缘关系最接近,同源性高达99%;Paracoccus versutu JUST-3与Paracoccus versutus的亲缘关系最接近,同源性高达99%。在GenBank下载同源性较高的序列,利用MEGA中的Neighbor-joining算法构建***发育树,见图1、图2和图3。
本发明所提供的Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophusJUST-2和Paracoccus versutus JUST-3均是新发现的菌株,上述三种菌株于2022年3月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),地址为:中国,武汉,武汉大学。
其中Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccus versutus JUST-3分别具有脱氮除磷特性,可以有效去除污水中的氮磷元素。本发明将Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccus versutus JUST-3复配形成复合微生物菌剂,避免了单一菌种的环境适应性难以保证且脱氮除磷效率低的不足,每个菌种联合发挥作用,增强整个复合微生物菌剂的稳定性,达到良好的脱氮除磷效率。
实施例2:复合微生物菌剂的制备
取出实施例1中的Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophusJUST-2和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液(OD600值为0.5A),用无菌的移液枪取Pseudomonas stutzeri JUST-1菌悬液2mL,Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液各1mL至新的灭菌离心管中,使之混合均匀,得到复合微生物菌剂。即将Pseudomonas stutzeri JUST-1、Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液按2:1:1的体积比例混合得到复合微生物菌剂。
实施例3:复合微生物菌剂在高浓度氮磷合成废水处理中的应用
考察复合微生物菌剂对高浓度氮磷合成废水的处理能力,研究了在合成废水中,复合微生物菌剂对总氮和总磷的降解能力。合成废水的各组分为:0.2g/L KH2PO4,6.5g/LK2HPO4·3H2O,0.36g/L KNO3,0.24g/L(NH4)2SO4,0.6g/L乳酸,pH为7.2,121℃高温高压灭菌20min。取100mL高浓度氮磷合成废水分别加入到四个250mL的锥形瓶中,分别加入2mL的复合微生物菌剂,Pseudomonas stutzeri JUST-1菌悬液,Paracoccus pantotrophusJUST-2菌悬液和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液,经30℃、120转/分钟摇床培养24h,每隔6h取一次样,测定溶液中总氮和总磷的含量,计算各指标的去除率,如图4所示。结果表明:复合菌剂在12h对总氮和总磷的去除率分别为51.86%和48.74%,在24h对总氮和总磷的去除率达到最大,分别为93.58%和91.32%。比投加单一的Pseudomonas stutzeriJUST-1、Paracoccus pantotrophus JUST-2和Paracoccus versutus JUST-3对照组对总氮和总磷的去除率分别提高了大约13%~25%和20%~26%。
实施例4:复合微生物菌剂在实际生活污水处理中的应用
考察复合微生物菌剂处理实际生活污水的能力,研究了将该复合菌剂投加到实际生活污水中,总氮、总磷和COD的去除效果。在实验室稳定运行有效容积为3L的活性污泥***SBR反应器中,该反应器厌氧(8h)、缺氧(6h)、好氧(10h)交替运行,反应初始时加入50mL复合微生物菌剂。上述SBR反应器中生活污水含量为2L,取自征润州污水处理厂,COD为189mg/L,总氮为45.26mg/L,总磷为4.08mg/L,每4h取样一次,检测反应器中总氮、总磷和COD的去除率,设置未投加复合微生物反应器作为对照组对比。结果如图5所示,经过24h反应器运行,添加了复合微生物菌剂对总氮、总磷和COD的去除率达到96.56%、93.03%和94.47%,比未添加复合菌剂的对照组对总氮和总磷的去除率分别提高了25.74%,28.38%和20.16%。
序列表
<110> 江苏科技大学
镇江中微环境科技有限公司
<120> 强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1525
<212> DNA
<213> 假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)
<400> 1
agagtttgat catggctcag attgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc 60
ggatgagtgg agcttgctcc atgattcagc ggcggacggg tgagtaatgc ctaggaatct 120
gcctggtagt gggggacaac gtttcgaaag gaacgctaat accgcatacg tcctacggga 180
gaaagtgggg gatcttcgga cctcacgcta tcagatgagc ctaggtcgga ttagctagtt 240
ggtgaggtaa aggctcacca aggcgacgat ccgtaactgg tctgagagga tgatcagtca 300
cactggaact gagacacggt ccagactcct acgggaggca gcagtgggga atattggaca 360
atgggcgaaa gcctgatcca gccatgccgc gtgtgtgaag aaggtcttcg gattgtaaag 420
cactttaagt tgggaggaag ggcagtaagt taataccttg ctgttttgac gttaccaaca 480
gaataagcac cggctaactt cgtgccagca gccgcggtaa tacgaagggt gcaagcgtta 540
atcggaatta ctgggcgtaa agcgcgcgta ggtggttcgt taagttggat gtgaaagccc 600
cgggctcaac ctgggaactg catccaaaac tggcgagcta gagtatggca gagggtggtg 660
gaatttcctg tgtagcggtg aaatgcgtag atataggaag gaacaccagt ggcgaaggcg 720
accacctggg ctaatactga cactgaggtg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat 780
accctggtag tccacgccgt aaacgatgtc gactagccgt tgggatcctt gagatcttag 840
tggcgcagct aacgcattaa gtcgaccgcc tggggagtac ggccgcaagg ttaaaactca 900
aatgaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg aagcaacgcg 960
aagaacctta ccaggccttg acatgcagag aactttccag agatggattg gtgccttcgg 1020
gaactctgac acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa 1080
gtcccgtaac gagcgcaacc cttgtcctta gttaccagca cgttaaggtg ggcactctaa 1140
ggagactgcc ggtgacaaac cggaggaagg tggggatgac gtcaagtcat catggccctt 1200
acggcctggg ctacacacgt gctacaatgg tcggtacaaa gggttgccaa gccgcgaggt 1260
ggagctaatc ccataaaacc gatcgtagtc cggatcgcag tctgcaactc gactgcgtga 1320
agtcggaatc gctagtaatc gtgaatcaga atgtcacggt gaatacgttc ccgggccttg 1380
tacacaccgc ccgtcacacc atgggagtgg gttgctccag aagtagctag tctaaccttc 1440
ggggggacgg ttaccacgga gtgattcatg actggggtga agtcgtaaca aggtagccgt 1500
aggggaacct gcggctggat cacct 1525
<210> 2
<211> 1451
<212> DNA
<213> 泛养副球菌(paracoccus pantotrophus)
<400> 2
agagtttgat cctggctcag aacgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc 60
gcacccttcg gggtgagcgg cggacgggtg agtaacgcgt gggaatatgc cctttggtac 120
ggaatagtcc tgggaaactg ggggtaatac cgtatgcgcc cttcggggga aagatttatc 180
gccaaaggat tagcccgcgt tggattaggt agttggtggg gtaatggcct accaagccga 240
cgatccatag ctggtttgag aggatgatca gccacactgg gactgagaca cggcccagac 300
tcctacggga ggcagcagtg gggaatctta gacaatgggg gcaaccctga tctagccatg 360
ccgcgtgagt gatgaaggcc ctagggttgt aaagctcttt cagctgggaa gataatgacg 420
gtaccagcag aagaagcccc ggctaactcc gtgccagcag ccgcggtaat acggaggggg 480
ctagcgttgt tcggaattac tgggcgtaaa gcgcacgtag gcggaccgga aagttggggg 540
tgaaatcccg gggctcaacc ccggaactgc cttcaaaact atcggtctgg agttcgagag 600
aggtgagtgg aattccgagt gtagaggtga aattcgtaga tattcggagg aacaccagtg 660
gcgaaggcgg ctcactggct cgatactgac gctgaggtgc gaaagcgtgg ggagcaaaca 720
ggattagata ccctggtagt ccacgccgta aacgatgaat gccagtcgtc gggcagcatg 780
ctgttcggtg acacacctaa cggattaagc attccgcctg gggagtacgg tcgcaagatt 840
aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa 900
gcaacgcgca gaaccttacc aacccttgac atcccaggac cggcccggag acgggtcttt 960
cacttcggtg acctggagac aggtgctgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt 1020
tcggttaagt ccggcaacga gcgcaaccca cactcttagt tgccagcatt tggttgggca 1080
ctctaagaga actgccgatg ataagtcgga ggaaggtgtg gatgacgtca agtcctcatg 1140
gcccttacgg gttgggctac acacgtgcta caatggtggt gacagtgggt taatccccaa 1200
aagccatctc agttcggatt ggggtctgca actcgacccc atgaagttgg aatcgctagt 1260
aatcgcggaa cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1320
caccatggga gttgggtcta cccgacggcc gtgcgctaac cagcaatggg ggcagcggac 1380
cacggtaggc tcagcgactg gggtgaagtc gtaacaaggt agccgtaggg gaacctgcgg 1440
ctggatcacc t 1451
<210> 3
<211> 1449
<212> DNA
<213> 善变副球菌(Paracoccus versutus)
<400> 3
agagtttgat cctggctcag aacgaacgct ggcggcaggc ctaacacatg caagtcgagc 60
gcaccttcgg gtgagcggcg gacgggtgag taacgcgtgg gaatatgccc tttggtacgg 120
aatagtcctg ggaaactggg ggtaataccg tatgcgccct tcgggggaaa gatttatcgc 180
caaaggatta gcccgcgttg gattaggtag ttggtggggt aatggcctac caagccgacg 240
atccatagct ggtttgagag gatgatcagc cacactggga ctgagacacg gcccagactc 300
ctacgggagg cagcagtggg gaatcttaga caatgggggc aaccctgatc tagccatgcc 360
gcgtgagtga tgaaggccct agggttgtaa agctctttca gctgggaaga taatgacggt 420
accagcagaa gaagccccgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggagggggct 480
agcgttgttc ggaattactg ggcgtaaagc gcacgtaggc ggaccggaaa gttgggggtg 540
aaatcccggg gctcaacccc ggaactgcct tcaaaactat cggtctggag ttcgagagag 600
gtgagtggaa ttccgagtgt agaggtgaaa ttcgtagata ttcggaggaa caccagtggc 660
gaaggcggct cactggctcg atactgacgc tgaggtgcga aagcgtgggg agcaaacagg 720
attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa cgatgaatgc cagtcgtcgg gcagcatgct 780
gttcggtgac acacctaacg gattaagcat tccgcctggg gagtacggtc gcaagattaa 840
aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag catgtggttt aattcgaagc 900
aacgcgcaga accttaccaa cccttgacat cccaggaccg gcccggagac gggtctttca 960
cttcggtgac ctggagacag gtgctgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttc 1020
ggttaagtcc ggcaacgagc gcaacccaca cttccagttg ccatcatttg gttgggcact 1080
ctggaagaac tgccgatgat aagtcggagg aaggtgtgga tgacgtcaag tcctcatggc 1140
ccttacgggt tgggctacac acgtgctaca atggtggtga cagtgggtta atccccaaaa 1200
gccatctcag ttcggattgg ggtctgcaac tcgaccccat gaagttggaa tcgctagtaa 1260
tcgcggaaca gcatgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca 1320
ccatgggagt tgggtctacc cgacggccgt gcgctaacca gcaatggggg cagcggacca 1380
cggtaggctc agcgactggg gtgaagtcgt aacaaggtag ccgtagggga acctgcggct 1440
ggatcacct 1449
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 5
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tacggytacc ttgttacgac tt 22
Claims (6)
1.强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂,其特征在于,所述复合菌剂为Pseudomonas stutzeri JUST-1,Paracoccus pantotrophus JUST-2,Paracoccus versutus JUST-3三株菌种的混合物;所述Pseudomonas stutzeri JUST-1的保藏编号为CCTCC NO:M 2022234;Paracoccus pantotrophus JUST-2的保藏编号为CCTCC NO:M 2022235;Paracoccus versutus JUST-3的保藏编号为CCTCC NO:M 2022233。
2.根据权利要求1所述的强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂,其特征在于,所述复合菌剂中Pseudomonas stutzeri JUST-1,Paracoccus pantotrophus JUST-2,Paracoccus versutus JUST-3三株菌种的活菌数比例为2:1:1。
3.根据权利要求1所述的强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂,其特征在于,所述Pseudomonas stutzeri JUST-1的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示,Paracoccus pantotrophus JUST-2的16S rDNA序列如SEQ ID NO.2所示,Paracoccus versutus JUST-3的16S rDNA序列如SEQ ID NO.3所示。
4.权利要求1-3任一所述强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)将活化的Pseudomonas stutzeri JUST-1菌液加入无菌离心管中进行离心,弃去上清液,接着向离心管中滴入0.01M PBS缓冲溶液,冲洗三次后重悬制成Pseudomonas stutzeri JUST-1菌悬液;
(2)按步骤(1)的方法分别得到Paracoccus pantotrophus JUST-2菌悬液和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液;
(3)将Pseudomonas stutzeri JUST-1菌悬液、Paracoccus pantotrophus JUST-2菌悬液和Paracoccus versutus JUST-3菌悬液按体积比2:1:1混合得到复合菌剂。
5.权利要求1-3任一所述强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂在污水处理过程中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,复合菌剂的菌悬液OD600值为0.5 A,菌悬液以体积分数1%~5%接种于反硝化除磷培养基中,菌悬液与污水的体积比为1:100~1:20;
所述反硝化除磷培养基的配方为:
反硝化除磷培养基1:1.0 g/L NaCl,0.5 g/L MgCl2,0.2 g/L KH2PO4,0.3 g/L KCl,0.015 g/L CaCl2,80 mg-N/L KNO3,600 mg-C/L乳酸和50 mL维氏盐溶液,pH值为7.2~7.4;或
反硝化除磷培养基2:1.0 g/L NaCl,0.5 g/L MgCl2,0.2 g/L KH2PO4,0.3 g/L KCl,0.015 g/L CaCl2,80 mg-N/L KNO3,600 mg-C/L乙酸钠和50 mL维氏盐溶液,pH值为7.2~7.4;
其中,维氏盐溶液:6.55 g/L K2HPO4·3H2O,2.5 g/L MgSO4·7H2O,2.5 g/L NaCl,0.038 g/L MnSO4·H2O,0.05 g/L FeSO4·7H2O。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210511220.5A CN115093986B (zh) | 2022-05-11 | 2022-05-11 | 强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210511220.5A CN115093986B (zh) | 2022-05-11 | 2022-05-11 | 强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115093986A CN115093986A (zh) | 2022-09-23 |
CN115093986B true CN115093986B (zh) | 2023-12-05 |
Family
ID=83287765
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210511220.5A Active CN115093986B (zh) | 2022-05-11 | 2022-05-11 | 强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115093986B (zh) |
Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101985376A (zh) * | 2010-06-28 | 2011-03-16 | 北京大学 | 一步去除废水中碳氮污染物的方法 |
CN103114062A (zh) * | 2013-01-29 | 2013-05-22 | 山东大学 | 一株具有脱氮除磷双重能力的反硝化聚磷菌及其应用 |
CN104619652A (zh) * | 2012-06-15 | 2015-05-13 | 微视生物技术有限公司 | 新型生物催化剂组合物和使用的方法 |
CN105132306A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-12-09 | 中国地质大学(武汉) | 一株反硝化聚磷菌及其在生活污水处理中的应用 |
CN106754570A (zh) * | 2017-02-28 | 2017-05-31 | 重庆大学 | 一株施氏假单胞菌及其应用 |
CN109749958A (zh) * | 2019-01-28 | 2019-05-14 | 西南交通大学 | 一株用于高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌及其应用 |
CN110655198A (zh) * | 2018-06-29 | 2020-01-07 | 龙岩学院 | 利用异养硝化-好氧反硝化的副球菌菌株处理含氮废水的方法 |
CN110846254A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-28 | 深圳大学 | 用于脱氮的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 |
EP3712115A1 (en) * | 2019-03-21 | 2020-09-23 | Aquatic Science SA | Method for optimizing the biological treatment of swimming pools |
EP3712116A1 (en) * | 2019-03-21 | 2020-09-23 | Aquatic Science SA | Composition for optimizing the biological treatment of swimming pools |
-
2022
- 2022-05-11 CN CN202210511220.5A patent/CN115093986B/zh active Active
Patent Citations (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101985376A (zh) * | 2010-06-28 | 2011-03-16 | 北京大学 | 一步去除废水中碳氮污染物的方法 |
CN104619652A (zh) * | 2012-06-15 | 2015-05-13 | 微视生物技术有限公司 | 新型生物催化剂组合物和使用的方法 |
CN103114062A (zh) * | 2013-01-29 | 2013-05-22 | 山东大学 | 一株具有脱氮除磷双重能力的反硝化聚磷菌及其应用 |
CN105132306A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-12-09 | 中国地质大学(武汉) | 一株反硝化聚磷菌及其在生活污水处理中的应用 |
CN106754570A (zh) * | 2017-02-28 | 2017-05-31 | 重庆大学 | 一株施氏假单胞菌及其应用 |
CN110655198A (zh) * | 2018-06-29 | 2020-01-07 | 龙岩学院 | 利用异养硝化-好氧反硝化的副球菌菌株处理含氮废水的方法 |
CN109749958A (zh) * | 2019-01-28 | 2019-05-14 | 西南交通大学 | 一株用于高碱性环境脱氮除磷的好氧反硝化聚磷菌及其应用 |
EP3712115A1 (en) * | 2019-03-21 | 2020-09-23 | Aquatic Science SA | Method for optimizing the biological treatment of swimming pools |
EP3712116A1 (en) * | 2019-03-21 | 2020-09-23 | Aquatic Science SA | Composition for optimizing the biological treatment of swimming pools |
CN110846254A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-28 | 深圳大学 | 用于脱氮的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
异养硝化–好氧反硝化菌Paracoccus pantotrophus ATCC 35512的研究进展;杨航 等;应用与环境生物学报;585-592 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115093986A (zh) | 2022-09-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107201325B (zh) | 假单胞菌菌株及其培养方法和应用 | |
CN105733998B (zh) | 一株兼具异养硝化和好氧反硝化能力的高效脱氮菌株 | |
CN111100824B (zh) | 一株芽孢杆菌及其在养殖水体中脱氮除硫的应用 | |
CN104371948B (zh) | 微杆菌菌株及其应用 | |
CN110791444A (zh) | 一种施氏假单胞菌、采用该施氏假单胞菌制得的复合菌剂及该复合菌剂的应用 | |
CN114703095A (zh) | 一株成都假单胞菌及其在污废水净化领域的应用 | |
CN110846254A (zh) | 用于脱氮的复合微生物菌剂及其制备方法和应用 | |
CN113462622B (zh) | 一株高效降解多种芳香类污染物的假单胞菌及其应用 | |
CN108300675B (zh) | 一株同步脱碳、氮、磷及表面活性剂的鹤羽田代尔夫特菌及其在污水处理中的应用 | |
CN111979138B (zh) | 一种异养硝化好氧反硝化菌y15及其应用 | |
CN112266885A (zh) | 一种异养硝化好氧反硝化菌y16及其应用 | |
CN113046267A (zh) | 一种赤红球菌及其应用 | |
CN115386520B (zh) | 一株嗜吡啶红球菌rl-gz01菌株及其应用 | |
CN109402026B (zh) | 一株高适应性亚硝化单胞菌及其在污水处理中的应用 | |
CN115093986B (zh) | 强化污水脱氮除磷性能的复合菌剂及其制备方法和应用 | |
CN115305218B (zh) | 高原芽孢杆菌sx-3及其在降解工业污水中的应用 | |
CN114292798B (zh) | 一种厌氧反硝化菌种及其在河道水体修复中的应用 | |
CN107189974B (zh) | 一株贫营养低温脱氮菌及其应用 | |
CN114350575B (zh) | 一种厌氧河道底泥降解菌种及其应用 | |
CN114196590B (zh) | 分泌脂肪酶的假单胞菌及其在餐厨废水处理中的应用 | |
CN113583897B (zh) | 一株阿氏芽孢杆菌fl05及其应用 | |
CN113293111B (zh) | 一种具有脱氮功能的居海杆状菌及其应用 | |
CN112048451B (zh) | 一种柠檬酸杆菌及其在处理含硫酸盐废水处理中的应用与柠檬酸杆菌的分离鉴定方法 | |
CN112029690B (zh) | 一株索诺拉沙漠芽孢杆菌及其筛分培养方法和应用 | |
Khan et al. | 06. Isolation and identification of heavy metal tolerant bacteria from volta battery effluent, Hattar, Haripur Pakistan |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |