CN115073439B - 一种嘧啶类化合物及其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种嘧啶类化合物及其医药用途，属于药物化学和药物治疗学技术领域。本发明提供的式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，具有良好的EGFR抑制活性，对H1975细胞和PC9细胞的抑制活性较好，可用于制备与肿瘤有关疾病的药物，特别是由于制备EGFR抑制剂药物。
Description
技术领域
本发明属于药物化学和药物治疗学技术领域，具体涉及一种嘧啶类类化合物。该类化合物在制备EGFR抑制剂药物方面的应用。本发明还涉及该类化合物的药物组合。
背景技术
EGFR是跨膜受体酪氨酸激酶ErbB家族的成员(包含EGFR/ErbB-1,HER2/ErbB-2,HER3/ErbB-3和HER4/ErbB-4)。它是由位于7p12-13染色体上的基因编码的170kDa糖蛋白。ErbB受体由细胞外配体结合结构域，跨膜结构域和细胞内酪氨酸激酶结构域组成。EGFR具有7种不同的已知配体，即使在同一细胞中也能诱导多种生物学效应。其中表皮生长因子(EGF)，转化生长因子α(TGF-α)，肝素结合性EGF样生长因子(HBEGF)和β-cellulin(BTC)是高亲和力的配体。在失活状态下，受体是单体，但结合配体后，构象发生变化，和其他ErbB成员同源或异源二聚化，介导特定酪氨酸残基分子间自磷酸化，从而触发下游信号传导。
由于EGFR的突变，导致治疗药物活性降低，EGFR-TKIs的出现，解决突变引起的问题。根据治疗NSCLC的机制，EGFR-TKIs分成四代。其中AZD9291(奥西替尼)是AstraZenecaPharmaceuticals开发的第三代EGFR-TKIs药物，属于苯胺基嘧啶化合物，其通过共价键不可逆地靶向EGFR激酶ATP结合位点的半胱氨酸797残基。这是目前唯一被批准用于转移性EGFR(T790M)阳性NSCLC患者的药物。
EGFR-TKIs的获得性耐药机制可以广泛分为EGFR依赖性或EGFR非依赖性机制。EGFR依赖性突变包括：C797中的突变，EGFR(C797S)是指位于797位密码子半胱氨酸的ATP结合位点被丝氨酸取代，导致AZD9291与突变型EGFR之间的共价作用削弱。G796中的突变，与C797相邻的G796残基G796R,G796S和G796D中的溶剂前沿突变可能会在空间上干扰AZD9291-EGFR相互作用。G724中的突变，EGFR激酶结构域P环中的G724S突变已被结构分析表明，G724S突变会诱导受体构象变化，从而损害AZD9291的结合。外显子20的突变，开始施行EGFR-TKIs治疗后，EGFR(S768I)构成第20外显子的罕见突变。EGFR基因扩增除了存在EGFR-ex19del等位基因外，野生型EGFR等位基因的扩增也构成一种新的耐药机制；EGFR非依赖性突变包括：MET扩增，对EGFR-TKIs获得性耐药，MET基因扩增作为旁路途径激活机制是最常见的原因。EGFR下游信号通路的持续激活，例如由MAPK介导的信号通路，信号转导和转录激活子(STAT)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-Akt的激活，与EGFR激活和信号传导无关。RAS-MAPK途径激活，Eberlain等人发现RAS-MAPK途径畸变会导致EGFR突变的NSCLC患者的耐药性。PI3K途径激活，PI3K途径的旁路激活可能同时通过PIK3CA突变/扩增和PTEN缺失发生。致癌融合，在3％至10％的后天感染病例中发现致癌融合物，可能具有致癌作用对二线奥西替尼有抗药性，它们可以与EGFR(C797S)，BRAF突变和MET扩增[64-66]。组织学和表型转化，从非小细胞肺癌向小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)的组织学转化发生在4-15％的病例中，是一种已知的对第一代EGFR-TKIs的耐药性原因，影响患者的预后。据报道，也是对奥西替尼耐药的重要原因。
癌症(恶性肿瘤)是导致全球人类死亡的主要疾病之一。自从科学家们首次发现癌症与酪氨酸激酶的过度表达有关联之后，这引起学术界和制药工业界对靶向酪氨酸激酶抗肿瘤药物的研究热潮，而且已经有许多靶向酪氨酸激酶的小分子抑制剂进入临床研究并上市，特别是EGFR-TKIs为肿瘤的治疗带来了很大的希望。但是随着EGFR-TKIs的应用，也随之出现一系列问题，如患者对EGFR-TKIs药物出现耐药性。如何克服EGFR突变带来的耐药性，已经成为药物工作者研究的热点。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，以EGFR不可逆抑制剂AZD9291为先导化合物，设计一种嘧啶类类化合物，该类化合物具有良好的EGFR抑制活性，对H1975细胞和PC9细胞的抑制活性较好。
本发明的另一目的是提供一种上述化合物在药物方面的用途，可用于制备与肿瘤有关疾病的药物，特别是由于制备EGFR抑制剂药物。
本发明的技术方案如下：
式I所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
X代表氢、氨基、-NH-R1、-NH-CH2-R1、-NH-CO-CH2-R1、-NH-CH2-CH2-R1、-NH-CO-CH2-CH2-R1、-NH-R2、-NH-CH2-R2、-NH-CO-CH2-R1、-NH-CH2-CH2-R2、-NH-CO-CH2-CH2-R2、-NH-Boc、C1-C4烷基或硝基；
Y代表氧、共价键、-CH2-、-CH2-CH2-、-NH-、-CO-NH-、-NH-CO-、-NH-CH2-、-NH-CH2-CH2-或-NH-CO-CH2-CH2-；
Z代表氢、C1-C4烷基、-NH-Boc、苯基、-S-CH3、-S-CH2-CH3、C1-C4烷氧基、R1或R2；
n代表1、2、3或4；
所述R1或R2的结构式如下：
在一种优选方案中，X代表氢、氨基、-NH-R1、-NH-Boc、-NH-CH2-R1、-NH-CO-CH2-R1、-NH-CH2-CH2-R1或-NH-CO-CH2-CH2-R1。
在一种更优选方案中，X代表氢、氨基、-NH-Boc或-NH-CO-CH2-CH2-R1。
在一种优选方案中，Y代表氧、共价键、-CH2-、-NH-、-NH-CH2-或-NH-CH2-CH2-。
在一种更优选方案中，Y代表氧、共价键、-CH2-或-NH-。
在一种优选方案中，Z代表氢、甲基、乙基、异丙基、仲丁基、异丁基、-NH-Boc、苯基、-S-CH3、R1或R2。
在一种更优选方案中，Z代表氢、异丙基、仲丁基、-NH-Boc、苯基、-S-CH3、R1或R2。
在一种优选方案中，n代表2、3或4。
在一种更优选方案中，n代表2或3。
进一步地，，X代表氢、氨基、-NH-Boc或-NH-CO-CH2-CH2-R1；Y代表氧、共价键、-CH2-或-NH-；Z代表氢、异丙基、仲丁基、-NH-Boc、苯基、-S-CH3、R1或R2；n代表2或3。
更进一步地，在通式I所述化合物或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
本发明提及的中间体或目标化合物均可按照常规分离技术加以纯化，并且根据需要将其转化为与可药用酸的加成盐。
除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义：
“药学上可接受的盐”表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：
(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸包括盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸包括乙酸、三氟乙酸、丙酸、丙烯酸、己酸、环戊烷丙酸、羟乙酸、丙酮酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、抗坏血酸、樟脑酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、天冬氨酸、硬脂酸、扁桃酸、琥珀酸、戊二酸或丙二酸等。
(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属例子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺、奎宁等。
“药物组合物”指将本发明中的化合物中的一个或多个或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或前药与别的化学成分，例如药学上可接受的载体，混合。药物组合物的目的是促进给药给动物的过程。
“药用载体”或“药学上可接受的载体”指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的药物组合物中的非活性成分，例如但不限于：碳酸钙、磷酸钙、各种糖(例如乳糖、甘露醇等)、淀粉、环糊精、硬脂酸镁、纤维素、碳酸镁、丙烯酸聚合物或甲基丙烯酸聚合物、凝胶、水、聚乙二醇、丙二醇、乙二醇、蓖麻油或氢化蓖麻油或多乙氧基氢化蓖麻油、芝麻油、玉米油、花生油等。
“烷基”表示1-20个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(本申请书中提到的数字范围，例如“1-20”，是指该基团，此时为烷基，可以含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括20个碳原子)。更优选的是，烷基是有1-10个碳原子的中等大小的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。最好是，烷基为有1-8或1-6个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的。当是取代的烷基时，该取代基优选是一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个取代基。
“烷氧基”表示-O-(未取代的烷基)和-O-(未取代的环烷基)。代表性实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
本发明提供了一种药物组合物，它以本发明的化合物或其药学上可接受的盐为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐具有良好的EGFR抑制活性，对H1975细胞和PC9细胞的抑制活性较好，可用于制备与肿瘤有关疾病的药物，特别是由于制备EGFR抑制剂药物。
采用本发明的技术方案，优势如下:
本发明提供一种嘧啶类类化合物，该类化合物具有良好的EGFR抑制活性，对H1975细胞和PC9细胞的抑制活性较好，可用于制备与肿瘤有关疾病的药物，特别是由于制备EGFR抑制剂药物。
附图说明
图1是化合物RX-5作用H1975细胞24后，检测H1975细胞内p-EGFR蛋白的表达情况；
图2是流式细胞仪测试化合物RX-5对H1975细胞作用72h后的细胞周期组织情况；
图3是H2S荧光探针WSP-1，在50μM浓度下，化合物RX-10的H2S释放水平；其中，图a是对照组的空白组，图b是对照组，图c是实验组的空白组，图d是实验组。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-1H-吲哚的合成(2)
将2,4二氯嘧啶(10g,67.1mmol)加入到100mL DME溶液中，加入氯化铝(8.96g，67.1mmol)，室温搅拌20分钟，加入N-甲基吲哚8.36mL，85℃反应10h，将冷却至室温的溶液倒入500mL搅拌的冰水中，搅拌30分钟。抽滤得紫色的化合物13.2g，产率80.9％。
N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-胺的合成(3)
将化合物(2)(10g，41mmol)溶于100mL二氧六环，加入PTSA(8.58g,41mmol)，4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(8.39g,41mmol),90℃，封管反应12h。将冷却至室温的溶液倒入500mL搅拌的冰水中，搅拌30分钟。抽滤得绿色的化合物14.2g，产率88.1％。
N1-(3-氯丙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)-2-硝基苯-1,4-二胺的合成(4a)
将化合物(3)(1.5g,3.81mmol)溶20mL DMF，加入(0.7g,4.85mmol)盐酸盐，0.875mL DIPEA，110℃，鼓氮，封管反应9h。将溶液倒入200mL搅拌的冰水中，搅拌30分钟，抽滤得橘黄色固体1.1g，产率61.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.52(s,1H),8.36-8.35(d,J＝4.0Hz,1H),8.26(s,1H),8.16-8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(s,1H),7.4-7.38(m,1H),7.32-7.28(m,2H),7.19-7.17(d,J＝8.0Hz,1H),6.62(s,1H),3.96(s,3H),3.93(s,3H),3.65-3.61(m,2H),3.38-3.34(m,2H),2.85(s,3H),2.12-2.05(m,2H).
叔丁基(2-((2-氨基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)氨基甲酸乙酯的合成(4b)
将原料(3)(2.5g，6.35mmol)溶于25mL DMF，加入(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.21g,6.9mmol),DIPEA(1.55mL)，鼓氮，70℃反应12h。将溶液倒入200mL搅拌的冰水中，搅拌30分钟，抽滤得橘黄色固体2.8g，产率82％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.53(s,1H),8.38-8.36(d,J＝8.0Hz,1H),8.24(s,1H),8.17-8.14(m,1H),7.58(m,1H),7.38(m,1H),7.31-7.29(m,2H),7.19-7.17(d,J＝8.0Hz,1H),7.35(t,J＝4.0Hz,1H),7.3-7.26(m,2H),7.20(d,J＝4.0Hz,1H),6.91-6.88(m,2H),6.64(s,1H),5.09(s,1H),3.98(s,3H),3.93(s,3H),3.36-3.31(m,4H),2.84(s,3H),1.39(s,9H).
叔丁基(3-((2-氨基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)氨基甲酸丙酯的合成(4c)
将原料(3)(2.5g,6.35mmol)溶于25mL DMF，加入(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g,6.9mmol),DIPEA(1.55mL)，鼓氮，70℃反应12h。将溶液倒入200mL搅拌的冰水中，搅拌30分钟，抽滤得橘黄色固体2.7g，产率75.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.55(s,1H),8.37-8.36(d,J＝4.0Hz,1H),8.25(s,1H),8.16-8.13(m,1H),7.58(m,1H),7.4-7.38(m,1H),7.32-7.28(m,2H),7.18-7.17(d,J＝4.0Hz,1H),6.58(s,1H),4.88(m,1H),3.97(s,3H),3.92(s,3H),3.19-3.16(m,4H),2.83(s,3H),1.86-1.79(m,2H)1.41(s,9H).
N1-(3-氯丙基)-5-甲氧基-N1-甲基-N4-(4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)苯-1,2,4-三胺的合成(5a)
将化合物(4a)(0.6g,1.24mmol)溶于10mL甲醇中，加入浓盐酸(0.5mL)，加入氯化亚锡(1.44g,6.38mmol),65℃回流6h。将反应液在冰浴条件下，调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.4g，产率71％。
叔丁基(2-((2-氨基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)氨基甲酸乙酯的合成(5b)
将化合物(4b)(1.8g,3.28mmol)溶于20mL的四氢呋喃中，加入(0.18g,1.69mmol)的钯碳，甲酸铵(1.03g,16.3mmol),65℃封管反应10h。将冷却至室温的混合物，抽滤，将滤液蒸干。加入DCM萃取，在蒸干溶液得1.2g,产率70％。
叔丁基(3-((2-氨基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)氨基甲酸丙酯的合成(5c)
将化合物(4c)(1.8g,3.2mmol)溶于20mL的四氢呋喃中，加入(0.18g,1.69mmol)的钯碳，甲酸铵(1.03g,16.3mmol),65℃封管反应10h。将冷却至室温的混合物，抽滤，将滤液蒸干。加入DCM萃取，在蒸干溶液得1.1g，产率64％。
N-(2-((3-氯丙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的合成(6a)
将化合物(5a)(0.54g,1.19mmol)溶于10mL无水DCM中，加入DIPEA0.6mL，将丙烯酰氯0.145mL溶于2mL DCM中，在0℃滴加进入反应液，室温反应过夜。将反应液用10mL饱和食盐水洗涤三次，饱和硫酸钠干燥。蒸干，纯化得产物0.4g，产率66.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.85(s,1H),9.05(s,1H),8.25(s,1H),8.80(s,1H),8.36(s,1H),8.05(s,1H),7.78(s,1H),7.38(s,1H),7.25(s,2H),7.2(s,1H),6.76(s,1H),6.45-6.33(m,2H),3.98(s,3H),3.88(s,3H),3.56-3.55(d,J＝4.0Hz,2H),3.04(s,2H),2.64(s,3H),1.9-1.89(d,J＝4.0Hz,2H).
叔丁基(2-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)氨基甲酸乙酯的合成(6b)
/>
将化合物(5b)(1.7g,3.28mmol)溶于20mL无水DCM中，加入DIPEA(1.6mL)，将丙烯酰氯0.31mL溶于2mL。DCM中，在0℃下滴加进入反应液，室温反应过夜。将反应液用10mL饱和食盐水洗涤三次。饱和硫酸钠干燥。蒸干，纯化得产物0.8g，产率44.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.82(s,1H),9.05(s,1H),8.86(s,1H),8.36-8.36(d,J＝4.0Hz,1H),8.06-8.04(m,1H),7.81(s,1H),7.4-7.37(m,1H),7.3-7.26(m,2H),7.21-7.19(m,1H),6.75(s,1H),6.45-6.43(m,2H),5.75-5.72(m,1H),4.64(s,1H),3.98(s,3H),3.88(s,3H),3.23-3.29(m,2H),3.98-2.95(m,2H),2.67(s,3H),1.47-1.41(m,9H).
叔丁基(3-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)氨基甲酸丙酯的合成(6c)
将化合物(5c)(1.7g,3.2mmol)溶于20mL无水DCM中，加入DIPEA(1.6mL),将丙烯酰氯0.3mL溶于2mL。DCM中，在0℃滴加进入反应液，室温反应过夜。将反应液用10mL饱和食盐水洗涤三次。饱和硫酸钠干燥。蒸干，纯化得产物0.82g，产率44.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.8(s,1H),9.17-9.07(m,2H),8.34-8.33(d,J＝4.0Hz,1H),8.05-8.02(m,1H),7.87-7.83(m,1H),7.4-7.38(m,1H),7.28-7.26(m,2H),7.2-7.19(d,J＝4.0Hz,1H),6.73(s,1H),6.6-6.56(m,1H),6.6-6.42(m,1H),6.6-6.42(m,1H),5.74-5.71(m,1H),4.47(s,1H),3.98(s,3H),3.88(s,3H),3.17-3.15(m,2H),2.95-2.91(m,2H),2.59(s,3H),1.6-1.56(m,2H),1.44(s,9H).
5-对羟基苯基-3H-1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(ADT-OH)的合成
向单口瓶中加入5-对甲氧基苯基-3H-1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(0.24g,1mmol)和吡啶盐酸盐(1.20g,10mmol)充分混匀。于210℃条件下熔融反应0.5h，TLC监测反应，反应结束后冷却至室温，加入1mol/L的稀盐酸，抽滤，得棕褐色固体，真空干燥。收率81％。
ZWQ-1的合成
向单口瓶中加入(6a)(0.5g,0.99mmol)，无水DMF10 mL，碳酸钾(0.27g,1.95mmol)，催化量碘化钾，搅拌10min，加入ADT-OH(0.246g,1.08mmol)，80℃下反应，TLC监测反应，反应结束后冷却至室温，将反应液倒入冰水中，搅拌30min，抽滤，真空干燥，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：乙酸乙酯(2:1))，加入1mL甲醇，得橙色固体0.1g，收率14.7％,Mp:96.1-98℃。
3-烯丙基二硫基丙酸(ACS-81)的合成
向三口瓶中加入二烯丙基二硫(5.85g,40mmol)，3-巯基丙酸(0.85g,8mmol)，甲醇：***(2:1V/V)混合溶剂，然后加入10mol/L NaOH(0.24g,6mmol)，通入氮气30min,25℃反应24h。TLC监测反应，反应结束后，将反应液蒸干，加入1mol/L HCl，用***萃取，减压蒸除溶剂，得米白色油状物1.2g，收率84％。
5-对羧乙氧基苯基-3H-1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(ACS-60)的合成
向三口瓶中加入ADT-OH(0.45g,2mmol)、碳酸钾(0.55g,4mmol)和溴乙酸乙酯(0.66mL,6mmol)，加入无水DMF 30mL充分搅拌溶解，50℃反应3h，TLC监测，反应结束后冷却至室温，乙酸乙酯萃取，蒸馏水洗涤3次，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得棕褐色油状物。将上步所得的油状物(0.31g,1mmol)直接用于下步反应，加入50％的硫酸(2.2mL,20mmol)，乙酸20mL，100℃反应2h，TLC监测反应，反应结束后冷却至室温，加入蒸馏水，抽滤得深绿色固体，收率49％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.83(s,1H),9.05(s,1H),8.8(s,1H),8.35(d,J＝8.0Hz,1H),8.04(t,J＝8.0Hz,1H),7.92(d,J＝12.0Hz,1H),7.57-7.54(m,2H),7.4-7.38(m,1H),7.35(t,J＝4.0Hz,1H),7.3-7.26(m,2H),7.20(d,J＝4.0Hz,1H),6.91-6.88(m,2H),6.78(s,1H),6.39(q,1H),6.22(q,1H),5.67(q,1H),4.01(t,J＝12.0Hz,2H),3.96(s,3H),3.88(s,3H),3.08(t,J＝8.0Hz,2H),2.67(s,3H),1.94(t,J＝8.0Hz,2H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ215.22,173.11,162.51,162.31,162.24,159.55,157.94,144.49,138.35,135.09,134.72,133.66,132.41,128.73,128.33,127.86,126.43,126.04,124.34,122.02,121.14,120.41,115.50,113.72,110.23,109.52,108.20,103.90,66.16,56.25,53.79,44.35,33.22,27.43.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C36H34N6O3S3([M+H]+):695.1933,found:695.1929.
ZWQ-6的合成
向单口瓶中加入(6a)(0.5g,0.99mmol)，无水DMF 10mL，碳酸钾(0.27g,1.95mmol)，催化量碘化钾，搅拌10min，加入ACS-81，室温下反应，TLC监测反应，反应结束后冷却至室温，将反应液倒入冰水中，搅拌30min，抽滤，真空干燥，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1))，加，得淡黄色固体0.1g，收率14.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.83(s,1H),9.07(s,1H),8.86(s,1H),8.34(d,J＝4.0Hz,1H),8.05(q,J＝8.0Hz,1H),7.85(s,1H),7.4-7.38(m,1H),7.3-7.26(m,2H),7.20(d,J＝4.0Hz,1H),6.75(s,1H),6.44(q,2H),5.77-7.72(m,2H),5.2-5.06(m,2H),4.16(t,J＝12.0Hz,2H),3.98(s,3H),3.88(s,3H),3.30(q,J＝8.0Hz,1H),3.13-3.11(m,1H),2.95-2.88(m,3H),2.74-2.69(m,2H),2.62(d,J＝4.0Hz,3H),2.57(t,J＝16.0Hz,1H),1.81-1.74(m,2H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.07,162.71,162.39,159.39,157.64,144.51,138.38,135.37,134.19,133.90,132.64,128.40,127.68,126.39,126.07,121.96,121.12,120.37,117.44,113.72,110.23,109.76,108.07,103.86,62.29,56.28,53.25,44.20,34.88,34.61,33.21,27.08,25.68.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcdfor C33H38N6O4S2([M+H]+):647.2474,found:647.2472.
N-(2-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的合成(7b)
将(6b)(0.25g,0.43mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.15g，产率75％。
N-(2-((3-氨基丙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺的合成(7c)
将(6c)(0.25g,0.42mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.14g，产率70％。
ZL-1的合成
向单口瓶中加入ACS-60(0.265g,0.93mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.35g,0.92mmol)，三乙胺(0.14mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.4g,0.84mmol)(7b)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后抽滤得灰色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1))得最终淡橙色固体产物0.09g，收率14.5％Mp:123.2-124.4℃。1HNMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.14(s,1H),8.97(s,1H),8.58(s,1H),8.31-8.2(m,3H),7.88(s,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(s,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),7.19(q,J＝16.0Hz,2H),7.11(t,J＝12.0Hz,1H),7.0(d,J＝8.0Hz,2H),6.93(s,1H),6.69(q,1H),6.20(q,J＝16.0Hz,1H),5.63(d,J＝12.0Hz,1H),4.55(s,2H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),3.3(s,2H),2.98(t,J＝16.0Hz,2H),2.64(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ215.03,172.30,167.56,162.83,162.17,159.85,159.31,157.73,144.43,138.30,134.88,134.12,132.28,128.59,127.73,127.64,126.77,125.98,125.42,122.14,121.25,120.58,115.60,113.60,110.20,110.09,108.10,103.90,67.16,56.21,55.87,44.40,38.11,33.22.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C37H35N7O4S3([M+H]+):738.1991,found:738.1989.
ZL-2的合成
向单口瓶中加入ACS-60(0.32g,1.12mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.43g,1.53mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.4g,1.1mmol)(7c),25℃反应24h,TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后抽滤得灰色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1))得最终淡橙色固体产物0.1g，收率12.9％,Mp:125.2-127.3℃。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.14(s,1H),8.97(s,1H),8.58(s,1H),8.31-8.2(m,3H),7.88(s,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(s,1H),7.48(t,J＝8.0Hz,1H),7.19(q,J＝16.0Hz,2H),7.11(t,J＝12.0Hz,1H),7.0(d,J＝8.0Hz,2H),6.93(s,1H),6.69(q,1H),6.20(q,J＝16.0Hz,1H),5.63(d,J＝12Hz,1H),4.55(s,2H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),3.3(s,2H),2.98(t,J＝16.0Hz,2H),2.64(s,3H).13C NMR(100MHz,d6-DMSO)δ215.36,174.17,167.67,163.40,162.21,161.61,160.42,158.13,146.87,138.49,138.20,134.85,134.28,133.05,129.44,126.69,126.63,125.87,125.24,124.74,122.54,121.99,121.48,116.28,115.66,112.97,111.02,107.61,104.80,67.50,56.51,52.69,43.27,36.27,33.51,27.36.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C38H37N7O4S3([M+H]+):752.2147,found:752.2146.
Zl-3的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.187g,1.04mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.39g,1.02mmol)，三乙胺0.15mL室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.45g,0.92mmol)(7b)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1))得最终米色固体产物0.1g，收率16.6％,Mp:72.5-75.3℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.71(s,1H),8.95(s,1H),8.72(s,1H),8.31(d,J＝4.0Hz,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.83(s,1H),7.38-7.36(m,1H),7.31-7.26(m,1H),7.17(d,J＝4.0Hz,1H),6.71(s,1H),6.45(t,J＝8.0Hz,2H),5.87(t,J＝8.0Hz,2H),5.84-5.75(m,2H),5.19-5.1(m,2H),3.95(s,3H),3.87(s,3H),3.36-3.32(m,2H),3.29-3.27(m,2H),3.06(t,J＝12.0Hz,2H),2.92(t,J＝12.0Hz,2H),2.65(s,3H),2.5(t,J＝12.0Hz,2H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.44,162.81,162.26,159.54,157.85,144.67,138.30,134.89,134.40,133.29,132.42,127.61,126.73,126.01,122.02,121.12,120.47,118.87,113.68,110.32,110.19,108.13,103.88,56.20,44.17,42.02,38.08,36.06,33.83,33.20.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C32H37N7O3S2([M+H]+):632.2478found:632.2475.
ZL-4的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.43g,2.41mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.43g,1.13mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,1mmol)7c，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1))得最终米色固体产物0.14g，收率21％,Mp:73.2-76.3℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.81(s,1H),9.01(s,H),8.29(s,1H),8.38-8.36(d,J＝4.0Hz,1H),7.88(s,1H),7.38(q,J＝8.0Hz,1H),7.3-7.25(m,2H),7.19(d,J＝8.0Hz,1H),6.73(s,1H),6.56(q,J＝16.0Hz1H),6.44(q,J＝16.0Hz,1H),5.79-5.69(m,3H),5.11-5.05(m,2H),3.97(s,3H),3.87(s,3H),3.28(q,J＝16.0Hz,2H),3.12-3.1(m,2H),2.92(t,J＝16.0Hz,2H),2.73(t,J＝12.0Hz,2H),2.59(s,3H),2.40(t,J＝16.0Hz,2H),1.62-1.57(m,2H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.95,163.00,162.17,159.49,157.78,144.43,138.20,134.94,134.25,133.26,132.60,128.12,127.14,126.26,125.90,121.90,121.02,120.34,118.71,113.52,110.27,110.12,107.96,103.70,56.13,52.99,44.24,41.91,36.80,35.80,33.92,33.10,27.62.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C33H39N7O3S2([M+H]+):646.2634,found:646.2635.
叔丁基(R)-(1-((2-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)乙基)氨基)-4-甲基-1-氧戊丹-2-基)氨基甲酸酯的合成(8d)
向单口瓶中加入亮氨酸(0.269g,1.16mmol)，DMF10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.44g,1.16mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(7b)(0.5g,1.06mmol)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(100:1))得最终米色固体产物0.12g，收率16.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.74(s,1H),9.05(s,1H),8.96(s,1H),8.75(s,1H),8.36-8.35(d,J＝4.0Hz,1H),8.07-8.06(d,J＝4.0Hz,1H),7.72(s,1H),7.39-7.37(m,1H),7.29-7.25(m,3H),7.19-7.18(d,J＝4.0Hz,2H),6.71(s,1H),6.6-6.57(m,1H),6.48-6.44(m,2H),5.76-5.73(m,1H),4.81(s,1H),3.96(s,3H),3.87(s,3H),3.45-3.42(m,1H),3.25-3.21(m,1H),3.04-3.01(t,J＝12.0Hz,2H),2.63(s,3H),1.65-1.62(m,2H),1.45-1.41(m,1H),1.38(s,9H),0.9-0.88(m,6H).
叔丁基(R)-(1-((2-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)乙基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酸酯的合成(8e)
向单口瓶中加入丙氨酸(0.22g,1.16mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.44g,1.16mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,1.06mmol)(7b)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(100:1))得最终米色固体产物0.09g，收率13.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.742(s,1H),8.97(s,1H),8.96(s,1H),8.72(s,1H),8.35(s,1H),8.06(s,1H),7.72(s,1H),7.37(s,1H),7.25(s,2H),7.18(s,1H),6.71(s,1H),6.58(m,2H),6.48-6.44(m,1H),5.75(s,1H),4.91(s,1H),4.07(s,1H),3.96(s,3H),3.87(s,3H),3.41(s,1H),3.27(s,1H),3.03(s,2H),2.63(s,3H),1.38(m,12H).
叔丁基(2-((2-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基][甲基)氨基)乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯的合成(8f)
向单口瓶中加入甘氨酸(0.2g,1.14mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.44g,1.16mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g)(7b)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：乙酸乙酯(80:1))得最终米色固体产物0.1g，收率15.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.67(s,1H),8.93(s,1H),8.66(s,1H),8.35-8.34(d,J＝4.0Hz,1H),8.08-8.06(m,1H),7.71(s,1H),7.39-7.37(m,1H),7.28-7.25(m,2H),7.19-7.17(m,1H),6.71(s,1H),6.55-6.46(m,3H),5.71-5.74(m,1H),5.28(s,1H),3.96(s,3H),3.87(s,3H),3.7-3.68(m,2H),3.36-3.35(m,2H),3.04(s,2H),2.64(s,3H),1.39(m,9H).
叔丁基(S)-(1-((3-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基)苯基)(甲基)氨基)丙基)氨基)-4-甲基-1-氧戊烷-2-基)氨基甲酸酯的合成(8g)
向单口瓶中加入亮氨酸(0.26g,1.12mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.43g,1.13mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g，1.02mmol)(7c)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(100:1))得最终米色固体产物0.11g，收率15.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.8(s,1H),9.05(s,1H),9.08-9.04(m,1H),8.36-8.35(d,J＝4.0Hz,1H),8.06-8(m,1H),7.75(s,1H),7.39-7.36(m,1H),7.29-7.25(m,3H),7.21-7.18(m,1H),6.72(s,1H),6.2-6.56(m,1H),6.47-6.42(m,1H),6.13(m,1H),5.75-5.72(m,1H),4.82(s,1H),3.98(s,3H),3.87(s,3H),3.34-3.22(m,2H),2.94-2.87(m,2H),2.57(s,3H),1.67-1.58(m,5H),1.4(m,9H).
叔丁基(S)-(1-((3-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)丙基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酸酯的合成(8h)
向单口瓶中加入丙氨酸(0.16g,0.84mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.34g,0.89mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,1.1mmol)(7c)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(100:1))得最终米色固体产物0.09g，收率13.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.8(s,1H),9.06-9.04(m,2H),8.36-8.35(d,J＝4.0Hz,1H),8.06-8.04(m,1H),7.75(s,1H),7.4-7.37(m,1H),7.29-7.25(m,2H),7.2-7.18(m,1H),6.72(s,1H),6.59-6.55(m,1H),6.47-6.42(m,1H),6.16(s,1H),5.75-5.72(m,1H),4.92(s,1H),4.1-4.05(m,1H),3.98(s,3H),3.87(s,3H),3.32-3.24(m,2H),2.92-2.89(m,2H),2.58(s,3H),1.61-1.57(m,2H),1.45-1.41(m,12H).
叔丁基(2-((3-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基][甲基)氨基)丙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸酯的合成(8i)
向单口瓶中加入甘氨酸(0.19g,1.08mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.43g,1.13mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,1.1mmol)(7c)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1))得最终米色固体产物0.1g，收率16.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.79(s,1H),9.01-8.98(m,2H),8.36-8.35(d,J＝4.0Hz,1H),8.09-8.04(m,1H),7.74(s,1H),7.39-7.37(m,1H),7.29-7.25(m,2H),7.2-7.18(m,1H),6.72(s,1H),6.58-6.51(m,1H),6.47-6.42(m,1H),6.12(s,1H),5.76-5.73(s,1H),5.12(s,1H),3.97(s,3H),3.87(s,3H),3.75-3.73(m,2H),3.31-3.26(m,2H),2.92-2.88(m,2H),2.59(s,3H),1.61-1.58(m,2H),1.41(m,9H).
RX-1的合成
将(8d)(0.5g,0.73mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.35g，产率83.3％,Mp:140.3-142.5℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.78(s,1H),9.04(s,2H),8.31(d,J＝4.0Hz,1H),8.07-8.05(d,J＝4.0Hz,1H),7.70(s,1H),7.56(s,1H),7.31(s,1H),7.28-7.25(m,2H),7.2-7.19(d,J＝4.0Hz,1H),6.73(s,1H),6.48-6.46(q,J＝8.0Hz 2H),5.75-5.72(m,1H),3.93(s,3H),3.88(s,3H),3.38-3.37(d,J＝4.0Hz m,3H),3.07-3.06(s,2H),2.66(s,3H),1.70-1.66(s,1H),1.28(s,2H),0.94-0.93(d,J＝4.0Hz,,3H),0.89-0.87(d,J＝8.0Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.84,162.56,162.09,159.47,157.86,144.39,138.18,134.96,134.16,132.55,127.87,127.50,126.23,125.91,121.79,120.92,120.25,113.60,110.04,109.78,108.01,103.88,56.27,56.09,53.34,44.18,43.82,37.35,33.05,24.82,23.42,21.11.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd forC32H40N8O3([M+H]+):585.3302,found:585.3302.
RX-2的合成
/>
将(8g)(0.5g,0.71mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.34g，产率80.9％，Mp:143.3-145.6℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.74(s,1H),9.07-8.97(m,1H),8.35(d,J＝4.0Hz,1H),8.06-7.96(m,1H),7.68(s,1H),7.38-7.25(s,4H),7.18-7.16(d,J＝8.0Hz 1H),6.75s,1H),6.6-6.53(m,1H),6.45-6.41(m,1H),5.75-5.72(m,1H),3.95(s,3H),3.86(s,3H),3.35-3.2(m,3H),2.92-2.86(m,2H),2.57(s,3H),1.97(s,2H),1.65-1.64(d,J＝4.0Hz 2H),1.31-1.25(m,2H),0.91-0.90(d,J＝8.0Hz,3H),0.88-0.87(d,J＝4.0Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.29,162.95,162.07,159.43,157.76,144.38,138.13,134.92,134.25,132.55,128.02,127.12,126.13,125.85,121.76,120.89,120.22,113.50,110.23,110.02,107.89,103.62,56.05,53.33,53.04,44.05,43.89,36.20,33.02,27.55,24.78,23.32,21.20.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd forC33H42N8O3([M+H]+):599.3458,found:599.3455.
RX-3的合成
将(8e)(0.5g,0.77mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.34g，产率80.9％，Mp:140.3-142.5℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.82-9.81(m,1H),8.92(s,2H),8.78(s,1H),8.38-8.32(m,1H),8.09-8.04(m,1H),7.7-7.64(m,1H),7.24-7.21(d,J＝12.0Hz,2H),7.16-7.15(s,1H),6.76-6.67(m,1H),6.58-6.52(m,2H),5.73-5.71(d,J＝8.0Hz,1H),3.95(s,3H),3.87-3.84(s,3H),3.44-3.43(s,2H),3.29-3.27(m,1H),3.02(s,2H),2.6(s,2H),2.59(s,1H),1.64(m,3H),1.29-1.23(m,3H).
13C NMR(100MHz,CDCl3)δ175.98,162.79,162.26,159.61,157.98,144.59,138.33,135.03,134.37,132.62,127.92,127.62,126.45,126.04,121.97,121.09,120.42,113.72,110.19,110.06,108.16,104.02,56.28,56.25,50.77,44.31,37.50,33.20,21.72.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C29H34N8O35([M+H]+):543.2832,found:543.2832.
RX-4的合成
将(8h)(0.5g,0.76mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.31g，产率73.8％，Mp:144.3-145.6℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.8(s,1H),9.06-9.02(s,1H),8.37-8.36(s,1H),8.06-8.04(s,1H),7.7(s,1H),7.39-7.23(m,4H),7.19-7.18(d,J＝4.0Hz,2H),6.72(s,1H),6.66-6.54(m,1H),6.47-6.42(m,1H),5.86-5.66(m,1H),3.97(s,3H),3.8(s,3H),3.5-3.46(m,2H),3.32(s,1H),2.91-2.88(m,2H),2.58(S,3H),1.63-1.6(m,2H),1.31-1.29(m,3H).13C NMR(100MHz,d6-DMSO)δ175.57,162.87,162.06,159.46,157.84,144.30,138.16,135.03,133.94,132.61,128.22,127.29,126.10,125.89,121.73,120.87,120.20,113.57,110.08,110.03,107.90,103.59,56.08,53.08,50.67,44.19,36.18,33.04,27.63,21.79.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C30H36N8O3([M+H]+):557.2989,found:557.2986.
RX-5的合成
将(8f)(0.5g,0.79mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.36g，产率85.7％，Mp:144.3-146.2℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.82-9.78(d,J＝8.0Hz,1H),8.97(s,1H),8.78(s,1H),8.36-8.35(d,J＝4.0Hz,1H),8.08-8.05(m,1H),7.69(s,1H),7.51-7.49(d,J＝8.0Hz,1H),7.39-7.36(m,1H),7.29-7.25(m,2H),7.24(s,1H),7.19-7.18(d,J＝4.0Hz,1H),6.73(s,1H),6.47-6.44(m,2H),5.75-5.72(m,1H),3.96(s,3H),3.87(s,3H),3.37-3.36(d,J＝4.0Hz,2H),3.29(s,2H),3.08-3.05(m,2H),2.65(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.92,162.80,162.26,159.65,158.00,144.61,138.35,135.02,134.35,132.61,127.99,127.68,126.44,126.07,121.98,121.10,120.44,113.76,110.19,110.06,108.19,104.08,56.32,56.27,44.66,44.26,37.43,33.21.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C29H34N8O3([M+H]+):529.2676,found:529.2675.
RX-6的合成
将(8i)(0.5g,0.77mmol)溶于10mL二氧六环，然后将4M HCl-二氧六环溶液(V＝1:2)3mL滴加入反应液，室温反应3h。将反应液蒸干，加入饱和碳酸钾溶液调节pH至碱性，加入DCM萃取，蒸干得产物0.33g，产率78.5％，Mp:146.3-147.8℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.8(s,2H),9.15-8.96(m,2H),8.4-8.33(m,2H),8.11-8.04(m,1H),7.76-7.72(s,2H),7.39-7.35(m,1H),7.27-7.25(m,1H),7.19-7.18(s,1H),6.73(s,1H),6.53-6.41(m,2H),5.76-5.72(m,1H),3.96(s,3H),3.87(s,3H),3.49-3.42(m,2H),3.32-3.29(m,3H),2.11-2.07(m,2H),2.64-2.58(s,3H),1.65-1.52(m,2H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.64,162.81,162.07,159.43,157.80,144.31,138.15,134.99,133.94,132.53,128.19,127.30,126.17,125.87,121.75,120.88,120.19,113.54,110.03,109.97,107.90,103.63,56.07,53.34,44.53,44.10,36.25,33.03,27.66.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C29H34N8O3([M+H]+):543.2832,found:543.2831.
RX-7的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.16g,0.89mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.35g,0.92mmol)，三乙胺(0.14mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,0.85mmol)(9d)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(120:1))得最终米色固体产物0.09g，收率14.2％，Mp:132.44-135.6℃。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.15(s,1H),8.95(s,1H),8.59(s,1H),8.28(d,J＝4.0Hz,1H),8.21(d,J＝8.0Hz,1H),8.05-7.99(m,2H),7.89(s,1H),7.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.19(t,J＝8.0Hz,2H),7.13(t,J＝12.0Hz,1H),6.92(s,1H),6.39(q,1H),6.75(q,1H),6.23(t,J＝16.0Hz,2H),5.74-5.64(m,2H),5.10-4.99(m,2H),4.31-4.25(m,1H),3.87(s,3H),3.83(s,3H),3.15(q,J＝8.0Hz,2H),3.09(d,J＝8.0Hz,2H),3.0-2.98(m,2H),2.60(s,3H),2.57-2.53(m,2H),2.37-2.31(m,2H),1.41-1.28(m,2H),1.19(s,1H),0.79(t,J＝8.0Hz,3H),0.77(d,J＝4.0Hz,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.41,171.60,163.21,162.19,159.44,157.67,144.79,138.18,135.35,134.73,133.18,132.47,127.01,126.95,126.61,125.90,121.95,121.06,120.43,118.74,113.54,111.49,110.11,108.00,103.53,56.10,55.24,51.96,43.90,41.87,40.13,37.67,35.50,33.72,33.12,24.77,22.98,21.93.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C38H48N8O4S2([M+H]+):745.3318,found:745.3315.
RX-8的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.16g,0.89mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.34g,0.89mmol)，三乙胺(0.14mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,0.83mmol)(9g),25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(120:1))得最终米色固体产物0.092g，收率14.6％，Mp:144.3-145.1℃。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.38(s,1H),8.76(s,1H),8.59(s,1H),8.28(d,J＝8.0Hz,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.12(t,J＝12.0Hz,1H),6.88(s,1H),6.76(q,J＝16.0Hz,1H),6.23(q,J＝12.0Hz,1H),5.82-5.68(m,2H),5.17-5.06(m,2H),4.21(d,J＝4.0Hz,1H),3.87(s,3H),3.82(s,3H),3.33(t,J＝4.0Hz,2H),3.30(s,1H),3.27(s,1H),3.05(d,J＝4.0Hz,2H),2.89-2.81(m,4H),2.52(s,3H),1.52(t,J＝16.0Hz,2H),1.38(t,J＝16.0Hz,2H),1.19(s,1H),0.82(d,J＝8.0Hz,3H),0.78(d,J＝4.0Hz,3H).13C NMR(100MHz,d6-DMSO)δ171.87,171.18,163.01,162.12,159.34,144.48,138.18,134.97,134.42,133.14,132.55,127.56,127.06,126.26,125.89,121.83,120.97,120.28,118.74,113.58,110.56,110.06,107.87,103.53,77.32,77.00,76.68,56.08,52.68,51.83,43.65,41.81,40.51,36.60,35.41,33.53,33.07,27.06,24.76,22.91,21.90.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C39H50N8O4S2([M+H]+):759.3475,found:759.3475.
RX-9的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.18g，1mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.38g,1mmol)，三乙胺(0.15mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入4-(3-氯-4-氟苯胺基)-6-氨基喹唑啉(0.317g,1.1mmol)(9e),25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(100:1))得最终米色固体产物0.1g，收率15.6％Mp:78.4-80.3℃。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.21(s,1H),8.85(s,1H),8.72(s,1H),8.49(s,2H),7.16-7.14(d,J＝8.0Hz,1H),6.99(s,1H),6.76-6.69(m,1H),6.22-6.18(m,1H),5.91-5.69(m,2H),5.17-5.07(m,2H),4.27-4.23(m,1H),3.88(s,3H),3.8(s,3H),3.(s,2H),2.84-2.81(m,2H),2.67(s,3H),2.50-2.46(m,2H),1.13-1.11(d,J＝8Hz,3H).13CNMR(100MHz,CDCl3)δ172.44,171.38,163.23,162.24,159.56,157.78,144.88,138.25,135.47,134.74,133.22,132.44,127.05,126.68,125.97,122.02,121.12,120.50,118.83,113.64,111.50,110.16,108.09,103.63,56.17,55.35,49.03,43.89,41.94,37.74,35.58,33.71,33.20,17.53.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd for C35H42N8O4S2([M+H]+):703.2849,found:703.2845.
RX-10的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.17g,0.95mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.37g,0.97mmol)，三乙胺(0.15mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,0.89mmol)(9h),25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(100:1))得最终米色固体产物0.094g，收率14.6％，Mp:74.2-76.3℃。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ9.73(s,1H),8.95(s,1H),8.35-8.34(m,2H),8.05(s,1H),7.74(s,1H),7.36(s,1H),7.28-7.25(m,2H),7.18-7.12(s,1H),6.70(s,1H),6.59-6.52(m,1H),6.46-6.35(m,3H),5.8-5.73(m,2H),5.16-5.08(m,2H),4.4(m,1H),3.96(s,3H),3.88(s,3H),3.30-3.19(m,4H),2.93-2.81(m,4H),2.64-2.49(m,5H),1.62-1.56(m,2H),1.33-1.3(m,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ172.08,170.91,162.98,162.13,159.33,157.58,144.49,138.15,134.90,134.37,133.13,132.49,127.64,127.05,126.30,125.86,121.83,120.96,120.27,118.74,113.53,110.51,110.05,107.87,103.55,56.07,52.77,48.95,43.75,41.83,36.65,35.41,33.57,33.06,27.13,17.96.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd forC36H44N8O4S2([M+H]+):717.3005,found:717.3002.
RX-11的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.18g,1mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.39g,1.02mmol)，三乙胺(0.16mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,0.94mmol)(9f)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1))得最终米色固体产物0.11g，收率16.9％，Mp:76.2-77.3℃。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ9.21(s,1H),8.71(s,1H),8.5(s,1H),8.21-8.18(m,3H),7.96(s,1H),6.99(s,1H),6.76-6.70(m,1H),6.22-6.18(m,1H),5.80-5.70(m,2H),3.88(s,3H),3.80(s,3H),3.66-3.51(m,2H),3.35-3.33(m,2H),2.99(s,2H),2.86-2.82(m,2H),2.68(s,3H),2.49-2.46(d,J＝12.0Hz,2H).13C NMR(100MHz CDCl3,)δ171.96,169.41,163.28,162.23,159.60,157.85,144.95,138.24,135.56,134.58,133.21,132.31,126.94,126.82,125.94,122.10,121.17,120.52,118.85,113.62,111.48,110.19,108.17,103.73,56.16,55.31,43.79,43.66,41.91,37.76,35.34,33.69,33.22.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd forC34H40N8O4S2([M+H]+):689.2692,found:689.2686.
RX-12的合成
向单口瓶中加入ACS81(0.18g,1mmol),DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.38g,1mmol)，三乙胺(0.15mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,0.92mmol)(9i)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇(80:1)得最终米色固体产物0.09g，收率14％Mp:79.2-80.3℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.7(s,1H),8.9-8,82(s,2H),8.36-8.34(d,J＝8Hz,2H),8.07-8.06(m,1H),7.69(s,1H),7.39-7.36(m,1H),7.27-7.25(m,2H),7.18-7.17(d,J＝4.0Hz,1H),6.73-6.67(m,2H),6.55-6.45(m,2H),6.36-6.33(m,1H),5.78-5.72(m,2H),5.15-5.07(m,2H),3.95(s,3H),3.86(s,3H),3.82(m,2H),3.25-3.15(m,4H),2.88(m,4H),2.59(s,3H),2.55-2.52(m,2H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.54,168.86,163.05,162.05,159.43,157.79,144.53,138.13,134.67,134.39,133.08,132.35,127.34,126.95,126.46,125.83,121.88,120.98,120.28,118.78,113.54,110.53,110.07,107.96,103.56,56.05,52.85,43.49,43.38,41.76,36.69,35.10,33.51,33.08,26.90.MS(m/z):HRMS(ESI)Calcd forC35H42N8O4S2([M+H]+):703.2849,found:703.2845.
2P、2EL、2S、2X、2B、2L、2G和2BA的合成
叔丁基(S)-2-((2-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)乙基)氨甲酰)吡咯烷-1-羧酸酯的合成(2P)
向单口瓶中加入脯氨酸(0.269g,1.16mmol)，DMF10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.44g,1.16mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(7b)(0.5g,1.06mmol)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(乙酸乙酯：石油醚(2:1))得最终米色固体产物0.14mg，收率19.7％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.73(s,1H),8.99(s,1H),8.69(s,1H),8.36(d,J＝5.3Hz,1H),8.07(d,J＝7.4Hz,1H),7.40(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.32–7.26(m,2H),7.20(d,J＝5.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.59(d,J＝26.6Hz,2H),6.50(d,J＝1.9Hz,1H),5.77(dd,J＝9.9,1.9Hz,1H),5.08(s,1H),4.19(q,J＝7.4Hz,1H),3.98(s,3H),3.90(s,3H),3.50–3.40(m,1H),3.29(dd,J＝14.0,6.1Hz,1H),3.06(t,J＝6.1Hz,2H),2.65(s,3H),2.57–2.43(m,2H),2.07(s,3H),1.83–1.83(m,1H),1.40(s,9H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ170.41,161.23,159.92,157.83,153.71,143.41,136.16,135.46,131.04,124.78,124.26,123.75,120.29,119.35,111.04,108.69,105.71,102.45,76.61,54.37,53.42,51.96,41.26,35.50,31.33,30.41,28.25,26.57,22.11,13.21.
由化合物7b(0.5g,1.06mmol)和异亮氨酸(268mg,1.16mmol)反应，纯化得184mg目标化合物2EL，白色固体，产率25.4％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.75(s,1H),9.00(s,1H),8.74(s,1H),8.36(d,J＝5.3Hz,1H),8.07(d,J＝8.7Hz,1H),7.76(s,1H),7.41-7.37(m,1H),7.31-7.26(m,2H),7.20(d,J＝5.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.55(d,J＝9.8Hz,1H),6.49(d,J＝2.0Hz,1H),6.28(s,1H),5.77(dd,J＝9.8,2.0Hz,1H),4.97(s,1H),3.98(s,3H),3.89(s,3H),3.82(t,J＝7.8z Hz,1H),3.39-3.48(m,1H),3.32-3.19(m,1H),3.05(t,J＝6.2Hz,2H),2.65(s,3H),1.92-1.83(m,1H),1.41(s,11H),1.14–1.05(m,1H),0.91-0.85(m,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ163.15,162.44,159.32,157.41,144.65,138.35,135.40,132.81,128.39,126.16,121.94,121.11,120.38,113.69,110.20,107.96,103.82,56.28,47.27,44.47,38.72,36.77,36.61,33.19,28.48,24.80,20.96.
由化合物7b(0.5g,1.06mmol)和甲硫氨酸(289mg,1.16mmol)反应，纯化得181mg目标化合物2S，白色固体，产率24.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.20(d,J＝9.0Hz,1H),8.89(s,1H),8.59(d,J＝4.1Hz,1H),8.27(d,J＝5.3Hz,1H),8.22(d,J＝8.0Hz,1H),8.03-7.90(m,2H),7.49(d,J＝8.2Hz,1H),7.20(dd,J＝8.1,6.3Hz,2H),7.12(t,J＝7.5Hz,1H),6.92(s,1H),6.73(dd,J＝17.0,10.1Hz,1H),6.22(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),5.71(dd,J＝12.24,5.48Hz,1H),4.07-3.95(m,2H),3.87(s,3H),3.82(s,3H),3.29-3.16(m,4H),3.01-2.94(m,2H),2.66(s,3H),2.12-2.12(s,1H),1.99(s,1H),1.79-1.66(m,3H),1.34(s,3H),1.25(s,6H).13C NMR(101MHz,CHLOROFORM-D)δ163.08,162.23,159.64,157.97,144.47,138.34,135.21,132.84,128.47,127.47,126.07,121.88,121.02,120.35,113.74,110.16,108.04,103.77,80.59,77.48,77.36,77.16,76.84,60.50,56.25,52.76,47.25,44.46,36.61,33.16,28.47,21.14,14.29,1.12,0.09.
由化合物7b(0.5g,1.06mmol)和缬氨酸(251mg,1.16mmol)反应，纯化得204mg目标化合物2X，白色固体，产率28.7％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.72(s,1H),8.38(d,J＝5.3Hz,1H),8.08(d,J＝7.5Hz,1H),7.71(s,1H),7.42-7.37(m,1H),7.32-7.27(m,2H),7.20(d,J＝5.3Hz,1H),6.73(s,1H),6.60-6.44(m,2H),6.26(s,1H),5.77(dd,J＝9.6,2.2Hz,1H),4.98(s,1H),3.98(s,3H),3.89(s,3H),3.78(t,J＝7.7Hz,1H),3.44(dd,J＝13.7,6.6Hz,1H),3.28(s,1H),3.05(t,J＝6.1Hz,2H),2.65(s,3H),2.15-2.04(m,1H),1.41(s,9H),0.91(dd,J-＝12.6,6.8Hz,6H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ172.25,162.94,162.24,159.53,157.88,156.14,144.63,138.30,135.07,134.35,132.55,127.76,127.51,126.64,126.03,121.95,121.08,120.42,113.69,110.59,110.19,108.10,103.66,80.16,77.48,77.36,77.16,76.84,60.52,56.19,55.88,44.28,37.79,33.19,30.45,28.37,19.54,18.05,1.14,0.12.
由化合物7b(0.5g,1.06mmol)和苯丙氨酸(307mg,1.16mmol)反应，纯化得172mg目标化合物2B，白色固体，产率22.6％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.71(s,1H),8.98(s,1H),8.66(s,1H),8.32(d,J＝5.7Hz,1H),8.06(d,J＝7.1Hz,1H),7.80(s,1H),7.38(dd,J＝7.5,1.6Hz,1H),7.31-7.27(m,2H),7.25-7.15(m,7H),6.70(s,1H),6.48-6.44(m,2H),6.24(s,1H),5.76(dd,J＝7.1,4.9Hz,1H),5.03(s,1H),3.96(s,3H),3.88(s,3H),3.35(dd,J＝13.6,6.5Hz,1H),3.26–3.16(m,1H),3.29-3.05(m,4H),2.62(s,3H),1.37(s,9H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.80,162.89,162.41,144.66,138.32,136.82,135.28,134.48,132.49,129.36,128.75,127.70,127.34,127.09,126.71,126.01,122.00,121.16,120.41,113.64,110.58,110.23,108.00,103.65,80.47,77.48,77.16,76.84,56.20,55.73,44.17,38.73,38.24,37.80,33.21,28.32.
由化合物7b(0.5g,1.06mmol)和亮氨酸(268mg,1.16mmol)反应，纯化得151mg目标化合物2L，白色固体，产率24.4％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.71(s,1H),9.00(s,1H),8.74(s,1H),8.34(d,J＝5.3Hz,1H),8.07(dd,J＝9.5,3.1Hz,1H),7.84(s,1H),7.40(dd,J＝6.6,2.4Hz,1H),7.31-7.27(m,2H),7.20(d,J＝5.4Hz,1H),6.72(s,1H),6.67-6.54(m,2H),6.47(dd,J＝16.9,1.8Hz,1H),5.76(dd,J＝10.0,1.8Hz,1H),4.93(s,1H),4.16-4.06(m,1H),3.98(s,3H),3.89(s,3H),3.47-3.40(m,1H),3.32-3.23(m,1H),3.10–3.00(m,3H),2.65(s,3H),1.40(s,12H),1.32(d,J＝7.0Hz,3H),1.30-1.20(m,2H).
由化合物7b(0.5g,1.06mmol)和甘氨酸(203mg,1.16mmol)反应，纯化得122mg目标化合物2G，白色固体，产率21.8％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.64(s,1H),8.98(s,1H),8.69(s,1H),8.32(d,J＝5.5Hz,1H),8.06(d,J＝7.4Hz,1H),7.90(s,1H),7.41-7.37(m,1H),7.32-7.27(m,2H),7.19(d,J＝5.5Hz,1H),6.73(s,1H),6.55(dd,J＝16.8,9.8Hz,1H),6.46(dd,J＝16.8,2.1Hz,2H),5.94-5.64(m,1H),5.17(s,1H),3.97(s,3H),3.89(s,3H),3.72(d,J＝6.0Hz,2H),3.39(q,J＝6.0Hz,2H),3.08(q,J＝7.1,6.0Hz,2H),2.66(s,3H),1.40(s,9H).
由化合物7b(0.5g,1.06mmol)和丙氨酸(219mg,1.16mmol)反应，纯化得129mg目标化合物2BA，白色固体，产率22.5％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.71(s,1H),8.98(s,1H),8.66(s,1H),8.38-8.27(m,1H),8.06(d,J＝7.5Hz,1H),7.80(s,1H),7.40-7.36(m,1H),7.32-7.27(m,2H),7.16(s,1H),6.70(d,J＝1.4Hz,1H),6.50-6.42(m,2H),6.24(s,1H),5.76(dd,J＝7.1,4.9Hz,1H),5.03(s,1H),4.26(d,J＝7.5Hz,1H),3.96(s,3H),3.88(s,3H),3.05-2.92(m,4H),2.62(s,3H),1.36(s,9H),1.29-1.22(m,3H).
3P、3EL、3S、3X和3B的合成
叔丁基(S)-2-((3-((2-丙烯酰胺基-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)丙基)氨甲酰)吡咯烷-1-羧酸酯的合成(3P)
向单口瓶中加入脯氨酸(0.22g,1.16mmol)，DMF 10mL，搅拌使溶解，加入HATU(0.44g,1.16mmol)，三乙胺(0.17mL)室温搅拌活化20min，缓慢加入(0.5g,1.06mmol)(7c)，25℃反应24h，TLC监测反应，反应结束后，将反应液倒入100mL冰水中，搅拌后，用乙酸乙酯萃取，食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥，得米黄色固体，经硅胶柱层析分离(乙酸乙酯：石油醚(2:1))得最终米色固体产物0.15g，收率21.2％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.77(s,1H),9.13(d,J＝15.8Hz,2H),8.32(s,1H),8.07-8.01(m,1H),7.43–7.39(m,1H),7.32-7.27(m,3H),7.21(d,J＝5.5Hz,1H),6.74(s,1H),6.63(s,1H),6.45(dd,J＝16.9,1.9Hz,1H),5.75(dd,J＝10.2,1.8Hz,1H),4.31(t,J＝6.7Hz,1H),4.26(s,1H),4.00(s,3H),3.90(s,3H),3.44-3.22(m,4H),2.98-2.86(m,2H),2.59(s,3H),2.34(s,1H),2.06(d,J＝21.4Hz,1H),1.95-1.78(m,4H),1.43(s,9H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ162.34,159.41,157.62,144.70,138.36,135.28,132.77,127.68,126.31,126.06,121.96,121.12,120.42,113.73,110.20,108.03,103.70,80.72,56.24,47.33,37.72,33.20,28.49.
由化合物7c(0.5g,1.06mmol)和异亮氨酸(268mg,1.16mmol)反应，纯化得192mg目标化合物3EL，白色固体，产率26.5％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.80(s,1H),9.09(d,J＝31.1Hz,2H),8.38–8.32(m,1H),8.09–8.00(m,1H),7.74(s,1H),7.42-7.36(m,1H),7.31-7.26(m,2H),7.24(d,J＝5.6Hz,2H),7.22-7.18(m,1H),6.74(s,1H),6.48–6.42(m,1H),5.77-5.71(m,1H),4.34-4.18(m,1H),3.99(d,J＝1.1Hz,3H),3.88(d,J＝1.0Hz,3H),2.98-2.86(m,4H),3.00-2.85(m,3H),2.80(d,J＝1.0Hz,1H),2.58(s,3H),2.09(d,J＝1.1Hz,1H),1.87(s,4H),1.75-1.69(m,1H),1.43(s,10H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ172.31,162.98,162.30,159.48,157.73,156.09,144.69,138.33,135.11,134.49,132.61,127.76,127.50,126.55,126.05,121.96,121.10,120.43,113.70,110.73,110.18,108.07,103.73,80.18,59.75,56.22,55.90,44.22,37.81,36.93,36.68,33.16,28.38,24.83,15.78,11.31.
由化合物7c(0.5g,1.06mmol)和甲硫氨酸(289mg,1.16mmol)反应，纯化得211mg目标化合物3S，白色固体，产率27.8％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.80(s,1H),9.04(s,2H),8.36(d,J＝5.3Hz,1H),8.12-8.00(m,1H),7.81(s,1H),7.42-7.38(m,1H),7.31-7.27(m,2H),7.23(d,J＝7.7Hz,1H),7.20(d,J＝5.4Hz,1H),6.74(s,1H),6.58(dd,J＝16.8,9.9Hz,1H),6.46(dd,J＝16.8,1.9Hz,1H),6.23(s,1H),5.75(dd,J＝9.9,2.0Hz,1H),5.13(s,1H),4.25-4.07(m,1H),3.99(s,3H),3.89(s,3H),3.38-3.23(m,2H),2.95-2.88(m,2H),2.60(s,3H),2.58–2.48(m,2H),2.13-2.03(m,5H),1.95-1.84(m,2H),1.42(s,9H).
由化合物7c(0.5g,1.06mmol)和缬氨酸(251mg,1.16mmol)反应，纯化得184mg目标化合物3X，白色固体，产率25.4％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.80(s,1H),9.09(s,2H),8.34(s,1H),8.06(s,2H),7.90(s,1H),7.40(s,1H),7.29(s,1H),7.21(s,1H),6.74(s,1H),6.67–6.52(m,1H),6.46(d,J＝16.2Hz,1H),6.00(s,1H),5.76(d,J＝8.3Hz,1H),4.98(s,1H),4.00(d,J＝4.0Hz,3H),3.90(s,3H),3.83(d,J＝7.3Hz,1H),3.31(s,2H),2.92(s,2H),2.60(s,3H),2.21-2.10(m,1H),1.43(s,11H),0.94(dd,J＝15.8,9.3Hz,6H).13C NMR(101MHz,CHLOROFORM-D)δ171.80,163.04,162.38,156.08,144.53,138.35,135.41,133.95,132.77,128.46,127.38,126.26,126.05,121.94,121.11,120.36,113.69,110.33,110.23,107.98,103.75,80.17,77.48,77.36,77.16,76.84,60.48,56.24,52.88,44.59,36.75,33.22,30.56,28.40,27.78,19.52,17.91.HR-MS(m/z)calculated for C37H48N8O5[M+H]+:685.3748,found 685.4
由化合物7c(0.5g,1.06mmol)和苯丙氨酸(307mg,1.16mmol)反应，纯化得182mg目标化合物3B，白色固体，产率23.4％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ9.78(s,1H),9.09(d,J＝12.3Hz,2H),8.31(s,1H),8.10(d,J＝6.8Hz,1H),8.05(d,J＝7.1Hz,1H),7.43-7.39(m,1H),7.33-7.27(m,3H),7.25-7.16(m,6H),6.72(s,1H),6.60(dd,J＝16.8,10.0Hz,1H),6.47(dd,J＝16.8,1.9Hz,1H),5.82(s,1H),5.77(dd,J＝9.9,1.9Hz,1H),5.00(s,1H),4.28(dd,J＝16.4,8.8Hz,1H),4.00(s,3H),3.90(s,3H),3.72(q,J＝7.0Hz,1H),3.30-3.14(m,2H),3.05(d,J＝7.0Hz,2H),2.83(t,J＝6.8Hz,2H),1.49(t,J＝6.8Hz,3H),1.39(s,9H),1.29-1.22(m,3H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.33,162.99,162.34,144.49,138.35,135.35,133.87,132.76,129.37,128.82,128.47,127.12,126.34,126.06,121.94,121.10,120.37,113.72,110.22,108.04,103.75,77.48,77.36,77.16,76.84,56.24,53.00,44.51,38.54,36.88,33.23,28.36,27.66.
2PT、2ET、2XT和2BT的合成
(S)-N-(2-((2-丙烯酰胺-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成(2PT)
向单口瓶中加入2P(0.133g,0.2mmol)，DCM 2mL，搅拌使溶解，在冷井中加入TFA1mL，室温搅拌3h，TLC监测反应，反应结束后，饱和碳酸氢钠溶液调pH值至9，抽滤，滤饼真空干燥，得最终米黄色固体0.105g，收率93％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.93(s,1H),9.67(s,1H),9.15(d,J＝6.0Hz,1H),8.84(s,1H),8.50(s,1H),8.25(s,2H),7.59(d,J＝8.2Hz,1H),7.43(d,J＝6.7Hz,1H),7.31(t,J＝7.6Hz,1H),7.20(s,1H),7.06(s,1H),6.95(dd,J＝16.8,10.2Hz,1H),6.21(d,J＝16.9Hz,1H),5.73(d,J＝10.6Hz,1H),4.26(t,J＝7.2Hz,1H),3.93(s,3H),3.83(s,4H),3.38-3.31(m,2H),3.22-3.14(m,3H),2.77(s,3H),2.35-2.25(m,1H),1.90-1.64(m,3H),1.39-1.20(m,1H).
由化合物2EL(137mg,0.2mmol)脱Boc得101mg目标化合物2ET，黄绿色固体，产率87.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H),8.96(s,1H),8.62(d,J＝11.8Hz,1H),8.32(d,J＝5.3Hz,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),8.06(s,1H),7.90(d,J＝6.1Hz,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.26-7.13(m,4H),6.96(s,1H),6.76(dd,J＝16.8,10.2Hz,1H),6.27(dd,J＝16.84,1.92Hz,1H),5.75(dd,J＝10.2,1.5,Hz,1H),3.91(s,4H),3.87(s,3H),3.86(s,1H),3.07(d,J＝5.4Hz,1H),2.99(t,J＝6.4Hz,2H),2.66(s,3H),1.07-0.99(m,1H),0.87-0.83(m,2H),0.82-0.74(m,6H).HR-MS(m/z)calculated for C32H40N8O3[M+H]+:585.3257,found585.6.
由化合物2X(134mg,0.2mmol)脱Boc得99mg目标化合物2XT，白色固体，产率87.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H),8.96(s,1H),8.61(s,1H),8.32(d,J＝5.4Hz,1H),8.26(d,J＝8.1Hz,1H),7.97(t,J＝5.6Hz,1H),7.90(s,1H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.26-7.21(m,2H),7.16(t,J＝7.5Hz,1H),6.96(s,1H),6.76(dd,J＝16.9,10.3Hz,1H),6.26(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.75(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),3.91(s,3H),3.87(s,3H),3.28-3.20(m,2H),2.98(t,J＝6.4Hz,2H),2.93(d,J＝5.2Hz,1H),2.65(s,3H),1.90–1.81(m,2H),1.26-1.15(m,1H),0.83(d,J＝6.8Hz,3H),0.74(d,J＝6.8Hz,3H).HR-MS(m/z)calculated for C31H38N8O3[M+H]+:571.3100,found 571.4.
由化合物2B(144mg,0.2mmol)脱Boc得113mg目标化合物2BT，白色固体，产率92.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(s,1H),8.96(s,1H),8.61(s,1H),8.31(d,J＝5.3Hz,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.25-7.14(m,9H),6.94(s,1H),6.83(dd,J＝16.8,10.1Hz,1H),6.25(dd,J＝16.6,1.9Hz,1H),5.72(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),3.90(s,3H),3.87(s,3H),3.51(d,J＝6.8Hz,1H),3.22(s,2H),2.97-2.89(m,3H),2.63(s,3H),1.23(s,2H),0.94-0.81(m,1H).HR-MS(m/z)calculated forC35H38N8O3[M+H]+:619.3100,found 619.3.
3PT、3ET、3XT和3BT的合成
(S)-N-(3-((2-丙烯酰胺-5-甲氧基-4-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基)丙基)吡咯烷-2-甲酰胺的合成(3PT)
向单口瓶中加入3P(0.136g,0.2mmol)，DCM 2mL，搅拌使溶解，在冷井中加入TFA1mL，室温搅拌3h，TLC监测反应，反应结束后，饱和碳酸氢钠溶液调pH值至9，抽滤，滤饼真空干燥，得最终米黄色固体0.116g，收率88％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(s,1H),9.62(s,1H),9.12(s,1H),8.84(s,1H),8.56–8.45(m,1H),8.35-8.15(m,2H),7.60(d,J＝8.3Hz,1H),7.42(d,J＝6.8Hz,1H),7.31(t,J＝7.6Hz,1H),7.20(s,1H),7.04(s,1H),6.94(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.20(d,J＝16.9Hz,1H),5.73(d,J＝10.7Hz,1H),4.30-4.21(m,1H),3.93(s,3H),3.83(s,4H),3.35(dd,J＝11.5,5.6Hz,2H),3.24-3.10(m,4H),2.76(s,3H),2.34-2.24(m,1H),2.00(q,J＝7.4Hz,1H),1.87-1.79(m,2H),1.77-1.67(m,1H),1.23(s,2H).
由化合物3EL(139mg,0.2mmol)脱Boc得120mg目标化合物3ET，黄色固体，产率86.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.40(s,1H),8.97(s,1H),8.62(s,1H),8.32(d,J＝5.3Hz,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(t,J＝5.4Hz,2H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.26-7.21(m,2H),7.19-7.14(m,1H),6.92(s,1H),6.80(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.26(dd,J＝16.9,2.1Hz,1H),5.73(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),3.91(s,3H),3.86(s,3H),3.16-3.09(m,2H),3.00(d,J＝5.4Hz,1H),2.90(t,J＝6.9Hz,2H),2.58(s,3H),1.64–1.56(m,3H),1.44-1.37(m,1H),1.26-1.21(m,1H),1.10–0.99(m,1H),0.86-0.76(m,7H).
由化合物3X(134mg,0.2mmol)脱Boc得108mg目标化合物3XT，黄色固体，产率92.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.39(s,1H),8.97(s,1H),8.62(s,1H),8.32(d,J＝5.3Hz,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.89(s,1H),7.85(t,J＝5.9Hz,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.26-7.21(m,2H),7.19-7.14(m,1H),6.92(s,1H),6.80(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.25(dd,J＝17.0,2.0Hz,1H),5.73(dd,J＝10.1,2.0Hz,1H),3.91(s,3H),3.86(s,3H),3.15-3.08(m,1H),2.90(dd,J＝9.0,6.0Hz,3H),2.58(s,3H),1.90-1.82(m,1H),1.78(s,1H),1.63-1.54(m,1H),1.24-1.15(m,1H),0.86(d,J＝6.8Hz,3H),0.77(d,J＝6.8Hz,3H).HR-MS(m/z)calculated for C32H40N8O3[M+H]+:585.3257,found 585.4.
由化合物3B(146mg,0.2mmol)脱Boc得107mg目标化合物3BT，黄色固体，产率84.7％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(s,1H),9.00(s,1H),8.62(s,1H),8.32(d,J＝5.3Hz,1H),8.26(d,J＝8.0Hz,1H),7.89-7.85(m,2H),7.73-7.65(m,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.27-7.14(m,9H),6.92(s,1H),6.80(dd,J＝16.9,10.2Hz,1H),6.26(dd,J＝16.9,2.0Hz,1H),5.74(dd,J＝10.5,2.0Hz,1H),4.14(dd,J＝5.8,3.4Hz,1H),3.90(s,3H),3.86(s,3H),3.13-3.06(m,2H),2.95-2.88(m,1H),2.84(t,J＝7.0Hz,2H),2.66-2.59(m,1H),2.58(s,3H).HR-MS(m/z)calculated for C36H40N8O3[M+H]+:633.3257,found 633.4.
下面是本发明的代表化合物的部分药理试验及结果：
1、CCK-8法测定化合物单浓度抑制率
在检测化合物对人肿瘤细胞体外增殖的影响实验中，将处于对数期生长的癌细胞，接于96孔细胞培养板中每孔加入100μL细胞悬液，培养24h后，给药，设定给药浓度为10μM，在药物作用72h后，加入CCK-8溶液，在450nm处测定OD值，计算抑制率。实验结果如表1所示。
表1化合物抑制率数据
/>
a.ZWQ-5为阳性对照药AZD9291。
由表1可知：化合物浓度在10μM条件下对H1975肿瘤细胞和PC9肿瘤细胞增殖抑制作用因不同的取代基表现出一定的差异性。其中，化合物ZL-1，ZL-2对两种腺癌细胞的抑制活性多数不太理想，与阳性对照药相差较大。而化合物中RX-3，RX-4，RX-5对两种细胞的抑制率都较高。另外，化合物中RX-10，RX-11，RX-12对肿瘤细胞的抑制相对较好。化合物中2EL和3EL对肿瘤细胞的抑制略优于阳性对照。
2、CCK-8法测定化合物IC50
根据以上初筛结果，选取对H1975细胞和PC9细胞单浓度抑制率较高的化合物RX-2，RX-3，RX-4，RX-5，RX-8，RX-9，RX-10，RX-11和RX-12测定其对肿瘤细胞生长的半数抑制浓度(IC50)，同时选择其中几个抑制率较好化合物，测试其对野生型细胞株A549的IC50，化合物每个药物浓度设置3个复孔，测试结果如表2所示。
表2化合物对H1975细胞、PC9细胞和细胞株A549的IC50数据
/>
a.ZWQ-5为阳性对照药AZD9291
由表2可知：所测化合物对H1975，PC9细胞具有较好的细胞增殖抑制活性，其IC50值在3.448-12.799μM范围内。其中化合物RX-5对H1975的抑制效果最好，IC50＝3.448μM，RX-2对PC-9细胞的抑制活性最好，IC50＝3.448μM，RX-2对PC-9细胞的抑制活性最好，IC50＝4.075μM，值得对其进行深一步研究。通过比较对野生型和突变型细胞的一直浓度，发现所测的化合物对突变型选择性不高。
3、化合物针对激酶的抑制活性研究
本实验主要利用Kinase-Glo Plus发光激酶测定试剂盒测定化合物浓度为1μM时对EGFR(L858R/T790M)的抑制率，结果如表3所示。
表3化合物对EGFR的抑制率数据
a.ZWQ-5为阳性对照药AZD9291
由表3可知，所测化合物在浓度为1μM时，对EGFR(L858R/T790M)有一定的抑制效果，其中RX-5的抑制率和对照相当，达到了100％。我们选取其中抑制率较高的化合物RX-2，RX-3，RX-4，RX-5，RX-10进一步的测试它们在EGFR(WT)，EGFR(T790M)以及EGFR(T790M/L858R)中的IC50值。结果如表4、表5、表6所示。
表4化合物对EGFR(WT)的IC50数据
a.ZWQ-5为阳性对照药AZD9291
表5化合物对EGFR(T790M)的IC50数据
a.ZWQ-5为阳性对照药AZD9291
表6化合物对EGFR(T790M/L858R)的IC50数据
a.ZWQ-5为阳性对照药AZD9291
由表4、表5和表6可知，所测化合物对EGFR(WT)的效果最好，EGFR(T790M)次之，EGFR(T790M/L858R)的较低。其中化合物RX-5对EGFR(WT)，EGFR(T790M)，EGFR(L858R/T790M)中的抑制活性最好，IC50分别是12.7±2.4，13.2±3.2，46±9nM。化合物RX-10的抑制效果相比较对照药来说，不太理想。
4、Western blot法检测EGFR及相关蛋白的磷酸化水平
我们选用化合物RX-5，作用H1975细胞24后，检测H1975细胞内p-EGFR蛋白的表达情况，结果如图1所示。
从图1可知，化合物RX-5对H1975细胞内的p-EGFR蛋白的表达有抑制效果，且随着化合物RX-5的浓度增加，对H1975细胞内的p-EGFR蛋白的表达抑制越显著。
5PI单染法检测细胞周期
为了考察化合物RX-5对H1975细胞周期的阻滞情况，我们采用流式细胞仪测试了化合物RX-5对H1975细胞作用72h后的细胞周期组织情况。结果如图2所示。
从图2中可以看出，与空白对照组相比，随着化合物RX-5的浓度增加，H1975细胞的周期被阻滞在G2/M期，并且H1975细胞呈现出浓度依赖性，表明化合物可以通过阻滞肺癌细胞的细胞周期，抑制肺癌。
6硫化氢荧光探针检测硫化氢释放
本实验通过H2S荧光探针WSP-1，在50μM浓度下，测试化合物RX-10的H2S释放水平，结果如图3所示。
由图3可知，图a是对照组的空白组，图b是对照组，图c是实验组的空白组，图d是实验组。通过对比实验组和对照组，我们发现实验组的荧光增强，表明RX-10能释放H2S。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可能对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (4)
1.化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
2.一种药物组合物，它以权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体。
3.权利要求1中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备与肿瘤有关疾病的药物方面的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备EGFR抑制剂药物方面的应用。
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