CN115025027B - 一种生物因子睫毛滋养液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物因子睫毛滋养液，包括黄芪提取物、干姜浸膏、维生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氢氧化钠、乳酸。利用含有FGF‑10基因Ri质粒的发根农杆菌侵染黄芪外植体，可产生FGF‑10蛋白，改善生发细胞活性和毛囊环境，提高促毛囊生长因子的活性和含量，刺激毛母细胞及毛***细胞再生，结合黄芪本身药性，可提升毛发再生速度。干姜中所含姜酚、姜烯酮等物质能促进血液循环，增加毛囊营养，刺激毛囊，促进毛发再生。氮酮与丙二醇合用能产生协同作用，作用于细胞类脂双分子层增加双分子层的流动性，促进了FGF蛋白和药物通过细胞间的扩散，从而增加了有效物质的渗透。本发明具有安全和见效快的特点。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体为一种生物因子睫毛滋养液。
背景技术
孕期及哺乳期妇女，有脱发和掉睫毛现象。在孕期胎儿发育，对于母体的需求量较大，在这个过程中，容易出现微量元素的缺乏，会引起身体条件下降，内分泌紊乱，而出现掉睫毛。哺乳期随着孩子的生长，营养需求量会逐渐加大，母乳喂养会引起母亲自身的营养供应不良，也会引起头发或睫毛的脱落。
睫毛脱落严重影响形象，也会给女性带来额外压力，孕期坏情绪对孩子发育有不良影响，哺乳期女性也会更加焦躁，增加产后抑郁症风险。而孕期及哺乳期妇女用药需要相当谨慎，这就需要一款可以促进睫毛快速生长的睫毛滋养液。市面上对脱发研究较多，而针对孕期及哺乳期睫毛脱落研究较少。
因此，设计安全和见效快的一种生物因子睫毛滋养液及其制备方法是很有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物因子睫毛滋养液及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种生物因子睫毛滋养液，包括黄芪提取物、干姜浸膏、维生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氢氧化钠、乳酸。
根据上述技术方案，所述一种生物因子睫毛滋养液，按照质量比黄芪提取物3-5份、干姜浸膏1-3份、维生素E 0.5-2份、甘油2-8份、氮酮0.8-3.5份、丙二醇0.4-3份、氢氧化钠0.1-0.6份、乳酸0.5-4份。
根据上述技术方案，所述一种生物因子睫毛滋养液，按照质量比黄芪提取物5份、干姜浸膏1.5份、维生素E 0.5份、甘油6份、氮酮1.2份、丙二醇1.5份、氢氧化钠0.3份、乳酸1.6份。
一种生物因子睫毛滋养液及其制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：黄芪提取物的制备：取黄芪毛状根洗净，放入研钵中液氮研磨，加入去离子水搅拌均匀后静止3-5h，8000-12000rpm离心20-40min，取上清液得黄芪提取物；
步骤二：干姜浸膏的制备：取干姜粉，用90%乙醇作溶剂，浸渍24h后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液850ml，另器保存，继续渗漉至漉液近无色、姜的香气和辣味已淡薄为止，收集渗漉液，在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，混匀，滤过，静置，俟澄清，滤过，即得姜流浸膏；
步骤三：将10%甘油碾匀，加入纯化水适量，待充分溶胀后，加入黄芪提取物、干姜浸膏、丙二醇、氮酮、丙二醇、VE、乳酸，搅拌均匀，用氢氧化钠调节pH为5.5-6.5。
根据上述技术方案，所述黄芪提取物，提取自外植体毛状根中，外植体可以为根、茎、叶。
根据上述技术方案，所述外植体毛状根，用发根农杆菌对黄芪外植体进行侵染：取茎段为外植体，培养基值pH为5-6，蔗糖浓度为2-5%，外植体龄为30-35D，超声波处理时间4s，预培养和共培养2-3D，侵染时间为5-10min，加入外源激素0.1mg/mLNAA。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌为A4、15834、1025和1000菌株中的一种。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌其Ri质粒含有FGF-10基因，通过PCR扩增FGF10基因，经双酶切后，连接到Ri质粒。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根进行PCR检测：根据设计的一对FGF-10基因引物，在条带（627bp）出现了与基因引物相同的条带，而未转化的黄芪外植体则没有扩增出条带，证明农杆菌Ri质粒的己经整合进毛状根的基因组中。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根转接到液体培养基中扩大增殖培养：用MS液体培养基，蔗糖浓度为30g/L，添加30µmol/L的JA，培养25-35D。
黄芪，是豆科中药材。功能主治为：补气固表，托毒排脓，利尿，生肌，可促进毛发生长。
FGF10的临床应用十分广泛，主要包括促进损伤修复（如烧伤、角膜损伤、肺损伤等），对面部红血丝有一定作用，还能促进干细胞增殖、分化。尤为突出的是FGF10能改善生发细胞活性和毛囊环境，提高促毛囊生长因子的活性和含量，刺激毛母细胞及毛***细胞再生，从而达到促进毛发再生的作用。
利用含有FGF-10基因Ri质粒的发根农杆菌侵染黄芪外植体，可以在黄芪外植体内产生FGF-10蛋白，结合黄芪本身药性，制得的黄芪提取物对可促进毛发快速生长，提升再生速度。
干姜中所含姜酚、姜烯酮等姜辣素类物质能使血管扩张，促进血液循环，它们都易溶于乙醇。用乙醇制成姜流浸膏，其主要具有扩张皮下血管，促进血液循环，增加毛囊营养，刺激毛囊，促进毛发再生的功能。
氮酮(Azone)是一种优良的经皮吸收促进剂。它主要作用于细胞类脂双分子层增加双分子层的流动性，降低了相变温度，促进了FGF蛋白和药物通过细胞间的扩散，从而增加了药物的渗透。氮酮对很多亲脂性和亲水性药物均有透皮促进作用，与丙二醇(PG)合用能产生协同作用。氮酮尤其对低浓度药物透皮的增强作用最佳，副反应低。所以选用氮酮和PG作为复合透皮促进剂。
由于干姜提取物是亲脂性的，而甘油具有增稠、保湿、润滑作用，并可用作载体溶剂，PG在药剂中常用作溶剂、潜溶剂、润湿剂、保湿剂和防腐剂，并具有促渗作用，故加入甘油和PG以增加药物溶解并使之分散均匀。
VE沸点高，对热稳定，易溶于乙醇，无毒，且还具有显著的抗皮肤衰老的作用，能改善皮肤粗糙度、鳞屑、光滑度及皱纹等，故本发明选用VE作抗氧剂。
与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：本发明，
（1）利用含有FGF-10基因Ri质粒的发根农杆菌侵染黄芪外植体，可以在黄芪外植体内产生FGF-10蛋白，改善生发细胞活性和毛囊环境，提高促毛囊生长因子的活性和含量，刺激毛母细胞及毛***细胞再生，从而达到促进毛发再生，结合黄芪本身药性，可提升毛发再生速度；
（2）干姜中所含姜酚、姜烯酮等姜辣素类物质能使血管扩张，促进血液循环，它们都易溶于乙醇，用乙醇制成姜流浸膏，其主要具有扩张皮下血管，促进血液循环，增加毛囊营养，刺激毛囊，促进毛发再生；
（3）氮酮是一种优良的经皮吸收促进剂，丙二醇(PG)合用能产生协同作用，主要作用于细胞类脂双分子层增加双分子层的流动性，降低了相变温度，促进了FGF蛋白和药物通过细胞间的扩散，从而增加了有效物质的渗透。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供技术方案：一种生物因子睫毛滋养液，包括黄芪提取物、干姜浸膏、维生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氢氧化钠、乳酸。
根据上述技术方案，所述一种生物因子睫毛滋养液，按照质量比黄芪提取物3-5份、干姜浸膏1-3份、维生素E 0.5-2份、甘油2-8份、氮酮0.8-3.5份、丙二醇0.4-3份、氢氧化钠0.1-0.6份、乳酸0.5-4份。
根据上述技术方案，所述一种生物因子睫毛滋养液，按照质量比黄芪提取物5份、干姜浸膏1.5份、维生素E 0.5份、甘油6份、氮酮1.2份、丙二醇1.5份、氢氧化钠0.3份、乳酸1.6份。
一种生物因子睫毛滋养液及其制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：黄芪提取物的制备：取黄芪毛状根洗净，放入研钵中液氮研磨，加入去离子水搅拌均匀后静止3-5h，8000-12000rpm离心20-40min，取上清液得黄芪提取物；
步骤二：干姜浸膏的制备：取干姜粉，用90%乙醇作溶剂，浸渍24h后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液850ml，另器保存，继续渗漉至漉液近无色、姜的香气和辣味已淡薄为止，收集渗漉液，在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，混匀，滤过，静置，俟澄清，滤过，即得姜流浸膏；
步骤三：将10%甘油碾匀，加入纯化水适量，待充分溶胀后，加入黄芪提取物、干姜浸膏、丙二醇、氮酮、丙二醇、VE、乳酸，搅拌均匀，用氢氧化钠调节pH为5.5-6.5。
根据上述技术方案，所述黄芪提取物，提取自外植体毛状根中，外植体可以为根、茎、叶。
根据上述技术方案，所述外植体毛状根，用发根农杆菌对黄芪外植体进行侵染：取茎段为外植体，培养基值pH为5-6，蔗糖浓度为2-5%，外植体龄为30-35D，超声波处理时间4s，预培养和共培养2-3D，侵染时间为5-10min，加入外源激素0.1mg/mLNAA。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌为A4、15834、1025和1000菌株中的一种。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌其Ri质粒含有FGF-10基因，通过PCR扩增FGF10基因，经双酶切后，连接到Ri质粒。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根进行PCR检测：根据设计的一对FGF-10基因引物，在条带（627bp）出现了与基因引物相同的条带，而未转化的黄芪外植体则没有扩增出条带，证明农杆菌Ri质粒的己经整合进毛状根的基因组中。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根转接到液体培养基中扩大增殖培养：用MS液体培养基，蔗糖浓度为30g/L，添加30µmol/L的JA，培养25-35D。
案例1：
一种生物因子睫毛滋养液，包括黄芪提取物、干姜浸膏、维生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氢氧化钠、乳酸。
按照质量比黄芪提取物5份、干姜浸膏1.5份、维生素E 0.5份、甘油6份、氮酮1.2份、丙二醇1.5份、氢氧化钠0.3份、乳酸1.6份。
一种生物因子睫毛滋养液及其制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：黄芪提取物的制备：取黄芪毛状根洗净，放入研钵中液氮研磨，加入去离子水搅拌均匀后静止4h，10000rpm离心30min，取上清液得黄芪提取物；
步骤二：干姜浸膏的制备：取干姜粉，用90%乙醇作溶剂，浸渍24h后，以每分钟2ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液850ml，另器保存，继续渗漉至漉液近无色、姜的香气和辣味已淡薄为止，收集渗漉液，在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，混匀，滤过，静置，俟澄清，滤过，即得姜流浸膏；
步骤三：将10%甘油碾匀，加入纯化水适量，待充分溶胀后，加入黄芪提取物、干姜浸膏、丙二醇、氮酮、丙二醇、VE、乳酸，搅拌均匀，用氢氧化钠调节pH为5.5-6.5。
根据上述技术方案，所述黄芪提取物，提取自外植体毛状根中，选择根作为外植体。
根据上述技术方案，所述外植体毛状根，用发根农杆菌对黄芪外植体进行侵染：取茎段为外植体，培养基值pH为5-6，蔗糖浓度为3%，外植体龄为30-35D，超声波处理时间4s，预培养和共培养2-3D，侵染时间为10min，加入外源激素0.1mg/mLNAA。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌为A4菌株。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌其Ri质粒含有FGF-10基因，通过PCR扩增FGF10基因，经双酶切后，连接到Ri质粒。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根进行PCR检测：根据设计的一对FGF-10基因引物，在条带（627bp）出现了与基因引物相同的条带，而未转化的黄芪外植体则没有扩增出条带，证明农杆菌Ri质粒的己经整合进毛状根的基因组中。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根转接到液体培养基中扩大增殖培养：用MS液体培养基，蔗糖浓度为30g/L，添加30µmol/L的JA，培养30D。
案例2：
一种生物因子睫毛滋养液，包括黄芪提取物、干姜浸膏、维生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氢氧化钠、乳酸。
根据上述技术方案，所述一种生物因子睫毛滋养液，按照质量比黄芪提取物4份、干姜浸膏3份、维生素E 0.8份、甘油4份、氮酮0.8份、丙二醇0.9份、氢氧化钠0.2份、乳酸2份。
一种生物因子睫毛滋养液及其制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：黄芪提取物的制备：取黄芪毛状根洗净，放入研钵中液氮研磨，加入去离子水搅拌均匀后静止5h，8000rpm离心40min，取上清液得黄芪提取物；
步骤二：干姜浸膏的制备：取干姜粉，用90%乙醇作溶剂，浸渍24h后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液850ml，另器保存，继续渗漉至漉液近无色、姜的香气和辣味已淡薄为止，收集渗漉液，在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，混匀，滤过，静置，俟澄清，滤过，即得姜流浸膏；
步骤三：将10%甘油碾匀，加入纯化水适量，待充分溶胀后，加入黄芪提取物、干姜浸膏、丙二醇、氮酮、丙二醇、VE、乳酸，搅拌均匀，用氢氧化钠调节pH为5.5-6.5。
根据上述技术方案，所述黄芪提取物，提取自外植体毛状根中，外植体可以为根、茎、叶。
根据上述技术方案，所述外植体毛状根，用发根农杆菌对黄芪外植体进行侵染：取茎段为外植体，培养基值pH为5-6，蔗糖浓度为4%，外植体龄为30-35D，超声波处理时间4s，预培养和共培养3D，侵染时间为10min，加入外源激素0.1mg/mLNAA。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌为1025菌株。
根据上述技术方案，所述发根农杆菌其Ri质粒含有FGF-10基因，通过PCR扩增FGF10基因，经双酶切后，连接到Ri质粒。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根进行PCR检测：根据设计的一对FGF-10基因引物，在条带（627bp）出现了与基因引物相同的条带，而未转化的黄芪外植体则没有扩增出条带，证明农杆菌Ri质粒的己经整合进毛状根的基因组中。
根据上述技术方案，所述黄芪毛状根转接到液体培养基中扩大增殖培养：用MS液体培养基，蔗糖浓度为30g/L，添加30µmol/L的JA，培养35D。
为检测本发明一种生物因子睫毛滋养液效果，特进行体外试验：
1、皮肤刺激性试验
采用多次涂抹睫毛滋养液皮肤刺激性试验。取家兔5只，用10%硫化钠于脊柱两侧脱毛，每侧面积约为40cm2，24h后于家兔左侧脱毛区涂睫毛滋养液约1g，右测脱毛区涂纯净水约1g，每日1次，连续给药7天，于末次涂药24h后用温水洗去药物，观察除去残留睫毛滋养液后1h、24h、48h、72h家兔皮肤的刺激性反应，并参照表1进行评分：
表1 皮肤刺激性试验的评价指标
按表1的评分原则对每只家兔进行评分，求平均值，结果见表2：
表2 皮肤刺激性实验结果(n=5)
由实验结果可知，睫毛滋养液具有略微刺激性，应用后皮肤无水肿。
2、睫毛滋养液体外透皮实验
取处理好的大鼠皮肤，角质层向上，固定在透皮仪的Franz扩散池上，在角质层一面均匀涂上睫毛滋养液2g（注意排除气泡），有效扩散面积为2.48cm2，在接受池中加入含20%PEG400生理盐水7ml做接受液。将扩散池置(37±1)℃恒温水浴中，搅拌速度300r/min，分别在1、2、4、6、8、10、12、24h取样1ml，并补充等温度同体积含20%PEG400生理盐水。所取样品用0.45µm微孔滤膜滤过，取续滤液20µl进样，测定含量，并按下式计算出一定时间单位面积的累计透过量：
Qs={Cn*Vo+V}/S
其中，Qs：第n次取样时单位面积累积渗透量；Cn：第n次取样时接受液中的浓度；Vo：扩散池体积；V：取样体积；S：扩散面积。
表3 单位面积累积渗透量
由直观分析法试验结果进行分析，睫毛滋养液的经皮渗透性良好。氮酮、丙二醇在睫毛滋养液经皮渗透过程中起主要促渗作用。
3、睫毛滋养液对小鼠脱毛区体毛生长影响试验
取昆明种小鼠20只，背部毛剪短，将脱毛剂(10%NaS)涂于小鼠背部约2～3min，用温水洗净，以小鼠背部光滑，无伤无残毛为净，脱毛面积约3×3cm2。次日将小鼠随机分为2组，每组10只，分别于脱毛区涂空白、睫毛滋养液，每日2次，每次0.2ml/只，连续15日。于16日在每鼠脱毛区相同位置取最长毛10根，显微镜下用显微测微尺测量其长度，以10根毛均长代表每只鼠的毛长，求出各组小鼠毛长的均值；随后脱颈处死小鼠，将背部脱毛区毛皮剪下，用14mm打孔器于每鼠脱毛区相同位置取一圆形皮片，用手术刀刮下皮片上所有体毛，万分之一天平称重，计算每组平均毛重。
表4 睫毛滋养液对小鼠脱毛区体毛长度及重量的影响
实验结果见表4，与空白基质组相比，睫毛滋养液组小鼠毛长及单位体表面积毛重均有不同程度的增加，睫毛滋养液组小鼠比空白基质组小鼠的体毛更长、更密，说明睫毛滋养液可促进化学性脱毛小鼠的体毛再生。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种生物因子睫毛滋养液，其特征在于：包括黄芪提取物、干姜浸膏、维生素E、甘油、氮酮、丙二醇、氢氧化钠、乳酸；
所述黄芪提取物，提取自外植体毛状根中，外植体为根、茎、叶；
所述外植体毛状根，用发根农杆菌对黄芪外植体进行侵染：取茎段为外植体，培养基pH值为5-6，蔗糖浓度为4%，外植体龄为30-35D，超声波处理时间4s，预培养和共培养3D，侵染时间为10min，加入外源激素0.1mg/mLNAA；
所述发根农杆菌为1025菌株；
所述发根农杆菌其Ri质粒含有FGF-10基因，通过PCR扩增FGF10基因，经双酶切后，连接到Ri质粒；
按照质量比黄芪提取物4份、干姜浸膏3份、维生素E 0.8份、甘油4份、氮酮0.8份、丙二醇0.9份、氢氧化钠0.2份、乳酸2份；
所述生物因子睫毛滋养液的制备方法，包括以下具体步骤：
步骤一：黄芪提取物的制备：取黄芪毛状根洗净，放入研钵中液氮研磨，加入去离子水搅拌均匀后静止5h，8000rpm离心40min，取上清液得黄芪提取物；
步骤二：干姜浸膏的制备：取干姜粉，用90%乙醇作溶剂，浸渍24h后，以每分钟1～3ml的速度缓缓渗漉，收集初漉液850ml，另器保存，继续渗漉至漉液近无色、姜的香气和辣味已淡薄为止，收集渗漉液，在60℃以下浓缩至稠膏状，加入初漉液，混匀，滤过，静置，待澄清，滤过，即得干姜浸膏；
步骤三：将10%甘油碾匀，加入纯化水适量，待充分溶胀后，加入黄芪提取物、干姜浸膏、丙二醇、氮酮、维生素E、乳酸，搅拌均匀，用氢氧化钠调节pH为5.5-6.5。
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