CN115025001A - 一种具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物及其应用,该组合物包含5~15份雪肌肽、2~7份九肽‑1、1~10份肌肽、3~8份维生素C,还可包含1~5份葡糖酸铜、1~7份三肽‑1及2~8份谷胱甘肽。本发明组合物从细胞层面达到美白祛斑;将其应用于化妆品中,可解决皮肤屏障受损、纹理粗糙、皮肤色泽不均匀、色暗、色斑等问题,特别适合色暗肌肤使用,可作为化妆品的添加剂添加到化妆水、卸妆膏、乳液、精华、面霜、啫喱、面膜等化妆品中。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域,公开了一种具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物及其应用。
背景技术
爱美之心,人皆有之。拥有靓丽的容颜是每个女性的梦想,有美丽才有自信。然而,肌肤暗黄、晒黑、晒斑、雀斑和黄褐斑严重影响每一个爱美之心的心情。人的皮肤与人种有关,基本肤色是天生的和后天逐渐协同的结果。皮肤的颜色与黑色素的聚集有关。产生的原因也各种各样。总的说来,遗传因素、内分泌因素、紫外线和阳光的照射、自由基的作用、空气和环境污染等相关。
黑色素的机理形成如下:皮肤黑色素的形成过程包括黑色素细胞的迁移、黑色素细胞的***成熟、黑色素小体的形成、黑色素颗粒的转运以及黑色素的降解等一系列复杂的生理生化过程。从生物化学反应的角度来看,黑色素的形成必须有三种基本物质:酪氨酸为制造黑色素的主要原料;酪氨酸酶是酪氨酸转变为黑色素的主要限速酶,为铜及蛋白质的组合物;酪氨酸在酪氨酸酶的作用下产生黑色素,此作用为氧化过程,必须与氧结合才能转变为黑色素。任何具有中断黑色素形成的因素,均具有美白祛斑功能。其次,皮肤衰老是肤色暗黄和色素沉积的重要原因。
一般的美白祛斑分为五个维度:1)主要从直接控制、抑制黑色素细胞生成过程中的各种酶;2)选择性破坏黑色素细胞、抑制黑色素小体的形成及改变其结构;3)还原多巴胺;4)黑色素细胞的胞外抑制;5)外源性影响因素,如加速细胞更新等;6)保持细胞保持年轻的状态,增加细胞活力和呈现旺盛的态势。
从美白机理可以看出,几乎所有的美白产品都会或多或少的改变皮肤自身结构,或是破坏黑色素细胞、或是抑制黑色素小体、或是改变黑色素细胞环境,或是加速细胞更新等,均破坏了皮肤的保护屏障,经皮水分流失TEWL值是原来皮肤的几倍,甚至十几倍。造成了皮肤极易起皮、干燥甚至发红和瘙痒等症状,皮肤屏障的破坏,同时增加了环境,尤其是紫外线和阳光对皮肤的影响,可能会造成更深的色素沉积,肤色加深的问题。为了减少美白祛斑剂对皮肤自身结构的损害,通常是在组方上着手,增加修护、舒缓、保湿等功效成分,以其达到保护肌肤的作用。其实,这些方法仅仅是外源上的方法,是修补的方法,是一边拆墙一边补墙的方式。如果这个平衡稍许被打破,如果美白祛斑被强化,会造成生理紊乱的情况,例如日本“杜鹃醇”事件,使几十万人的皮肤造成了不可逆的伤害。反之美白祛斑若被弱化,则达不到预期效果。
因此,寻求一种不改变皮肤功能的美白祛斑组合物,是化妆品领域和医药领域的研发重点和难点。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,该组合物从细胞层面达到美白祛斑;将其应用于化妆品中,可解决皮肤屏障修护,纹理细致,皮肤色泽不均匀,色暗、色斑等问题,特别适合色暗肌肤使用。
本发明提供的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,包含如下重量份组分:5~15份雪肌肽、2~7份九肽-1、1~10份肌肽、3~8份维生素C。
进一步地,该组合物还包含1~5份葡糖酸铜、1~7份三肽-1。
进一步地,该组合物还包含2~8份谷胱甘肽。
优选地,该组合物包含如下重量份组分:7~12份雪肌肽、3~6份九肽-1、4~8份肌肽、4~7份维生素C。
更优选地,所述组合物包含如下重量份组分:8~11份雪肌肽、4~5份九肽-1、5~7份肌肽、5~6份维生素C、2~4份葡糖酸铜、3~6份三肽-1。
更优选地,所述组合物包含如下重量份组分:8~11份雪肌肽、4~5份九肽-1、5~7份肌肽、5~6份维生素C、2~4份葡糖酸铜、3~6份三肽-1、4~7份谷胱甘肽。
本发明提供的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物可作为化妆品的添加剂添加到化妆水、卸妆膏、乳液、精华、面霜、啫喱、面膜等化妆品中。在生产时,化妆品中其他组分的选用和制备工艺可按照本领域中的常规操作进行。
与现有技术相比,本发明具有的有益效果如下:
(1)本发明提供的组合物中肌肽是一种天然的二肽,具有抗氧化和抗自由基的作用,是对抗皮肤衰老的主要因素;可以使细胞保持年轻的状态,增加细胞活力和呈现旺盛的态势;具有良好的抗糖化作用,可以与糖发生反应,降低灰黄色胶原糖化反应,避免皮肤产生褐黄色。维生素C是天然存在的抗氧化剂,补充维生素C是避免氧化应激和皮肤老化的重要途径,对胶原蛋白的合成起到至关重要的作用。维生素C直接参与黑色素的形成过程,具有抑制黑色素生成作用。肌肽的螯合作用和抗氧化可以与维生素C的抗氧化相互稳定,减少维生素C的氧化降解。雪肌肽是由羟乙基哌嗪乙烷磺酸、AA2G和烟酰胺组成。羟乙基哌嗪乙烷磺酸具有表皮更新的作用,增加透皮吸收能力,保持皮肤正常的pH值,可以吸收紫外线,减少紫外线对黑色素细胞的刺激,从而能够减少皮肤中黑色素的形成,有一定防晒美白效果。AA2G是稳定的水溶性维生素C改良剂。烟酰胺是维生素PP,自身能够穿过角质层,增加活性物质的透皮吸收功能。雪肌肽直接参与细胞之间的生理作用,抑制黑色素小体从黑色素细胞输送至角质,通过对输送途径的控制,黑色素细胞停止或暂缓产生黑色素,从而达到美白祛斑功效,抑制皮肤发黄,具有和肌肽、维生素C的协同效果。九肽-1可以作用于黑色素形成的第一步,即可以与促黑色素细胞激素竞争黑色素皮质素受体,降低其结合率,全程阻断和抑制黑色素的形成,具有直接抑制黑色素细胞活性和减少黑色素细胞合成黑色素的功能。且雪肌肽可快速深入皮肤,抑制组胺的产生和消除组胺,能收缩血管平滑肌,增加主动脉平滑肌静息张力,消除阳光和紫外线对皮肤的损失,抑制络氨酸酶活性,加速皮肤表皮更新等功效。维生素C的加入给予了皮肤充足的营养,在加速修护的同时,加快了皮肤新陈代谢,具有持久修护滋润的效果,与其他组分协同可提供肌肤适度的滋润修护,将肌肤调理到平衡状态,从而有效的美白祛斑,恢复屏障。
(2)本发明提供的组合物中葡糖酸铜是具有α-羟基酸结构的铜盐,葡糖酸铜具有抗氧化和抗炎作用,能促进皮肤再生,减少皱纹,对皮肤抗衰老有好处。葡糖酸铜与肌肽反应,生成肌肽铜,肌肽铜是一种新功效的信号肽,可以作为组织重塑的激活剂和抗氧化剂,促进伤疤外部大量胶原蛋白集聚物的降解、皮肤正常胶原蛋白的合成、弹力蛋白、蛋白聚糖和葡萄胺聚糖的生成、不同细胞类型的生长速度和迁移、抗炎、抗氧化反应。三肽-1是真皮促生因子,是一种信号肽,有卓越的活化作用,激活受体,愈合受损或受伤皮肤,可以保证足够数量的活角蛋白细胞来参与伤口表皮的重新形成和迁移,在皮肤愈合中起着非常重要的生理作用。三肽-1与葡糖酸铜反应生成三肽-1铜,与肌肽铜一样,具有修复和舒缓功效。雪肌肽、九肽-1、肌肽、维生素C复配,从细胞层面达到了美白肌肤、祛除色斑、修复屏障和滋养保湿等功效。
(3)本发明提供的组合物中谷胱甘肽是由还原型和氧化型两种形式组成,是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽,其卓越作用是抗氧化,清除自由基、抑制细胞膜脂质过氧化和抑制酪氨酸酶活性等。谷胱甘肽与维生素C互为稳定和加强的关系,在抑制酪氨酸酶和抗氧化层面上,二者联合使用比单独使用效果更强。
(4)本发明提供的组合物是从分子层面对黑色素合成进行干预的,如九肽-1和谷胱甘肽对黑色素的抑制,烟酰胺对黑色素小体输送的干预,肌肽、三肽-1和葡萄糖酸铜对细胞活性的干预等,均是在细胞生理功能条件下完成的,但本发明组方在不影响不干预细胞生理功能的条件下,却在无形中达到了美白祛斑的功效。
具体实施方式
下面通过对本发明的技术方案进行清楚、详细地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例,而不是全部实施例。对于未特别注明的工艺参数或者条件,可参照常规技术进行。
本发明所用的原料均通过商业渠道购买。其中,维生素C、葡糖酸铜采购于广州伽能生物有限公司,肌肽、谷胱甘肽采购于广州熙诺生物科技有限公司,雪肌肽、九肽-1、三肽-1采购于上海睿犀贸易有限公司。
实施例1
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.5g雪肌肽、0.2g九肽-1、0.1g肌肽、0.3g维生素C。
实施例2
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.7g雪肌肽、0.3g九肽-1、0.4g肌肽、0.4g维生素C。
实施例3
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.9g雪肌肽、0.5g九肽-1、0.6g肌肽、0.6g维生素C。
实施例4
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.2g雪肌肽、0.6g九肽-1、0.8g肌肽、0.7g维生素C。
实施例5
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.5g雪肌肽、0.7g九肽-1、1g肌肽、0.8g维生素C。
实施例6
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.5g雪肌肽、0.2g九肽-1、0.1g肌肽、0.3g维生素C、0.1g葡糖酸铜1份、0.1g三肽-1。
实施例7
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.8g雪肌肽、0.4g九肽-1、0.5g肌肽、0.5g维生素C、0.2g葡糖酸铜1份、0.3g三肽-1。
实施例8
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.1g雪肌肽、0.5g九肽-1、0.7g肌肽、0.6g维生素C、0.4g葡糖酸铜1份、0.6g三肽-1。
实施例9
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.5g雪肌肽、0.7g九肽-1、1g肌肽、0.8g维生素C、0.5g葡糖酸铜1份、0.7g三肽-1。
实施例10
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.5g雪肌肽、0.2g九肽-1、0.1g肌肽、0.3g维生素C、0.2g谷胱甘肽。
实施例11
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.1g雪肌肽、0.5g九肽-1、0.7g肌肽、0.8g维生素C、0.7g谷胱甘肽。
实施例12
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.5g雪肌肽、0.7g九肽-1、1g肌肽、0.8g维生素C、0.8g谷胱甘肽。
实施例13
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.5g雪肌肽、0.2g九肽-1、0.1g肌肽、0.3g维生素C、0.1g葡糖酸铜、0.1g三肽-1、0.2g谷胱甘肽。
实施例14
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.8g雪肌肽、0.4g九肽-1、0.5g肌肽、0.5g维生素C、0.2g葡糖酸铜、0.3g三肽-1、0.4g谷胱甘肽。
实施例15
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.1g雪肌肽、0.5g九肽-1、0.5g肌肽、0.6g维生素C、0.4g葡糖酸铜、0.6g三肽-1、0.7g谷胱甘肽。
实施例16
本实施例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:1.5g雪肌肽、0.7g九肽-1、1g肌肽、0.8g维生素C、0.5g葡糖酸铜、0.7g三肽-1、0.8g谷胱甘肽。
上述实施例1~16组合物的制备方法为:称取各个组分,在常温下搅拌混合均匀,即得。
上述实施例1~16任意一组组合物的使用方法,是将任意一组组合物添加至化妆品中,所述组合物占化妆品总质量的0.5%~8%,可根据制备化妆品的常规工艺及辅料,制备化妆水、卸妆膏、乳液、精华、面霜、啫喱、面膜等护肤化妆品。在生产时,化妆品中其他组分的选用和制备工艺可按照本领域中的常规操作进行。
为了证明本发明的效果,下面给出本发明实施例的对比例:
对比例1
本对比例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.8g雪肌肽、0.5g肌肽。
对比例2
本对比例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.4g九肽-1、0.5g维生素C。
对比例3
本对比例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.8g雪肌肽、0.5g肌肽、0.2g葡糖酸铜。
对比例4
本对比例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.4g九肽-1、0.5g维生素C、0.3g三肽-1。
对比例5
本对比例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.8g雪肌肽、0.5g肌肽、0.2g葡糖酸铜、0.4g谷胱甘肽。
对比例6
本对比例具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,由如下组分组成:0.4g九肽-1、0.5g维生素C、0.3g三肽-1、0.4g谷胱甘肽。
为了更好地说明本发明的优点,下面给出本发明提供技术方案的实验效果:
1、配方稳定性
因为维生素C和谷胱甘肽不稳定,非常容易氧化,所以对实施例1~16和对比例1~6组合物的稳定性进行了研究。具体方法如下:
(1)样品处置:分别将刚刚制备的实施例1~16和对比例1~6组合物,所得数据记作A0;将实施例1~16和对比例1~6组合物避光放置50℃烘箱内30天的样品,所得数据记作A50。实施例1~16和对比例1~6组合物均配置成质量浓度为5%的水溶液。
(2)测试方法:维生素C用GB14754法测试;谷胱甘肽用《中国药典》谷胱甘肽测试标准测试。
(3)数据处理:变化率=1-A0/A50,结果如表1所示。
表1样品维生素C和谷胱甘肽变化率
从表1可以看出,维生素C的稳定性分成四个等次,分别为实施例1~5、实施例6~9、实施例10~12和实施例13~16,稳定性由低到高。其结果是由于配方的成分不同引起的。单独比较每个等次内的成分,可以看出配方内的原料组分所占比例对维生素C的稳定性影响不大,维生素C的稳定性基本只与原料的种类有关。实施例10~16的谷胱甘肽稳定性也是如此。对比例2、对比例4、对比例6中因为原料组分的原因,造成维生素C的大比例氧化分解变性。对比例5和对比例6中谷胱甘肽的结果也是如此。尤其对比例6中同时含有维生素C和谷胱甘肽,但下降比例也是非常的大。结合实施例1~16的结果说明本发明组合物的组分之间是协同增效的。
2、美白祛斑功效测试
(1)测试样品:将实施例1~16和对比例1~6的组合物分别添加到普通乳液外用基质中制备测试样品,组合物占乳液总质量的5%;对照品为2%氢醌软膏(处方药,广东人人康药业有限公司生产),同时以普通乳液外用基质为空白组。
(2)测试方法:将B-16黑色素瘤细胞用0.1%葡糖胺培养至完全白化,再加入2mmol/L茶碱促细胞恢复到黑色素合成状态。同时加入测试样品,镜检细胞颗粒的色调判断样品对新生的黑色素抑制/促进效果。最后对细胞颗粒进行离心分离,使细胞内颗粒释放出来,于420nm测吸收光度,进行黑色素总量测定,以判断测试样品对黑色素数量的影响。
抑制率*100%=100%-样品干预吸收度/样品未干预的吸收度*100%
抑制率越大,说明测试样品对黑色素的生成抑制越好。结果如表2所示。
表2测试样品对黑色素的抑制率
从表2的黑色素测试结果可以看出,实施例与对比例均达到了预期效果,且黑色素细胞的抑制率均超过40%。根据配方组分的不同,黑色素抑制率优于对照组,说明实施例和对比例均具有美白祛斑效果。黑色素的抑制效果分为四个层级,分别为实施例1~5、实施例6~9、实施例10~12和实施例13~16,黑色素的抑制率由低到高,其是由测试样品的组分不同造成的。对比例1~6的黑色素抑制率也优于氢醌,在稳定性测试中,对比例2、对比例4、对比例5和对比例6比较差,不能用于传统的化妆品剂型中,用于次抛产品中具有可行性。
3、人体安全性检验方法
人体安全性检验方法参照《化妆品安全技术规范》(2015年版)第七章第2节人体皮肤斑贴试验方法测试皮肤封闭型斑贴试验。
(1)测试样品:将实施例1~16和对比例1~6的组合物分别添加到普通乳液外用基质中制备测试样品,其中组合物占乳液总质量的5%。同时以2%氢醌软膏为对照组,以普通乳液外用基质为空白组。
(2)测试者选择:选择18~60岁符合试验要求的志愿者作为受试对象。有如下条件的人群不能作为受试者:近一周使用抗组胺药或近一个月内使用免疫抑制剂者;近两个月内受试部位应用任何抗炎药物者;受试者患有炎症性皮肤病临床未愈者;胰岛素依赖性糖尿病患者;正在接受治疗的哮喘或其他慢性呼吸***疾病患者;在近6个月内接受抗癌化疗者;免疫缺陷或自身免疫性疾病患者;哺乳期或妊娠妇女;双侧***切除及双侧腋下***切除者;在皮肤待试部位由于瘢痕、色素、萎缩、鲜红斑痣或其他瑕疵而影响试验结果的判定者;参加其他的临床试验研究者;体质高度敏感者;非志愿参加者或不能按试验要求完成规定内容者。
(3)测试方法:选择合适的受试者50名,其中女30名,男20名。选用面积不超过50mm2、深度约1mm的合格斑试器材。将测试样品放入斑试器小室内,用量约为0.020~0.025g。将加有测试样品的斑试器用低致敏胶带贴敷于受试者的前臂曲侧,用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上,持续24小时。分别于去除测试样品斑试器后30分钟(待压痕消失后)、24小时和48小时按表3标准观察皮肤反应,并记录观察结果,结果如表4。
表3皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准
表4斑贴测试得分
从表4的斑贴结果可以看出,实施例1~16组合物达到了预期效果,均为阴性反应。而对比例1~4却存在很大安全隐患,对比例2和对比例4引起刺激性太强,提前中止了试验,这是对比例1~6的组分和配比不同引起的。结合稳定性测试、功效测试和安全测试结果可以看出,对比例1~4尽管黑色素抑制率也很不错,但在人体安全性却存在很大隐患,如果作为美白剂,还需要进一步完善。对比例5~6用于次抛产品是存在可行性的。
4、修护功效测试
参照T/ZHCA 003-2018化妆品影响经表皮水分流失测试方法测试。
(1)测试样品:将实施例1~16和对比例1~6的组合物分别配制成5%的水溶液。同时以水为对照组。
(2)受试者选择
受试者人数:有效受试者220人,每组10人。
受试者条件:18~60岁符合试验要求的志愿者。不能选择有以下情况者作为受试者:近一周使用抗组胺药或近一个月内使用免疫抑制剂者;近两个月内受试部位应用任何抗炎药物者;受试者患有炎症性皮肤病临床未治愈者;胰岛素依赖性糖尿病患者;正在接受治疗的哮喘或其他慢性呼吸***疾病患者;近六个月内接受抗癌化治疗者;免疫缺陷或自身免疫性疾病者;哺乳期或妊娠妇女;双侧***切除及双侧腋下***切除者;在皮肤待试部位由于瘢痕、色素、萎缩、鲜红斑痣或其他瑕疵面影响试验结果的判定者;参加其他的临床试验研究者;体质高度敏感者;非志愿参加者或不能按试验要求完成规定内容者。
(3)测定步骤
测定方法:受试者左、右前臂曲侧随机分为样品涂抹侧和对照侧,确保样品涂抹侧和对照侧在统计学上达到平衡。每次测量前用清水清洁受试部位,并用无屑吸水干纸巾吸干。在符合标准的测试环境中静坐至少20分钟,不能喝水和饮料,前臂暴露,保持放松,避免触碰测试区域。按经表皮水分流失测试仪Tewameter使用说明进行测试。测量TEWL值时,仪器探头须置于测试区域中心位置。测量时,取TEWL值曲线的10个连续点的平均值(其标准差应小于0.2g/(h·m2))作为测量值;先测量各区域的初始值(使用样品前),然后在设定时间后测定受试区域和对照区域的TEWL值。设定时间为7天和14天。同一个受试者的测试必须使用同一仪器由同一测试人员完成。样品使用期间如受试者皮肤出现不良反应,应立即中止测试,并对受试者进行适当医治,对不良反应予以记录。
(4)计算结果
描述性统计:对各测试区域的测量值进行描述性统计,包括数量、均值、标准差、最小值、中值、最大值。
差异性分析:分别计算样品涂抹侧和对照侧TEWL平均值的变化率,然后利用此变化率,统计分析不同测量时间点样品涂抹区域和对照区域的差别。如测试数据为正态分布,则采用t检验方法进行统计分析;如测试数据为非正态分布,则釆用秩和检验方法进行统计分析。统计方法均采用双尾检验,检验水准α=0.05。
(5)结果判定
阳性结果:与对照侧相比,样品涂抹侧TEWL值的变化率呈显著性差异,P<0.05,表示被测样品对屏障受损皮肤的经表皮水分流失的恢复有促进效果。
阴性结果:与对照侧相比,样品涂抹侧TEWL值的变化率无显著性差异P≥0.05,表示被测样品对屏障受损皮肤的经表皮水分流失的恢复无促进效果。
测试结果见表5。
表5测试样品在不同时间的经皮水分流失TEWL值
对表5的实验结果进行统计分析,使用7天、14天实施例1~16的经皮水分流失TEWL值与0天对比明显降低,其变化率与对照组对比均具有显著性差异,P<0.001。说明实施例1~16的组合物对屏障受损皮肤的经皮水分流失的恢复有促进效果。且分为四个等级,分别为实施例1~5、实施例6~9、实施例10~12和实施例13~16,经皮水分流失的恢复由低到高。而对比例1~6的经皮水分流失TEWL值的变化率远远高于对照组,说明皮肤屏障受到了损伤。此修复功效测试的结果也进一步佐证了配方各组成及含量之间的协同作用。
5、人体美白祛斑功效测试
按照《化妆品安全技术规范》2015年版第八章5化妆品祛斑美白功效测试方法(紫外线诱导人体皮肤黑化模型祛斑美白功效测试法)的具体要求进行检验。
(1)测试样品:将实施例1~16的组合物分别添加到普通乳液外用基质中制备测试样品,其中组合物占乳液总质量的5%。
阴性对照:黑化区空白对照。
(2)受试者选择:按入选和排除标准选择合格的受试者,确保各测试区最终完成有效例数均不低于30人。
入选标准:18~60岁,健康男性或女性;测试部位肤色ITA°值在20~41°者;无过敏性疾病,无化妆品或其它外用制剂过敏史;既往无光感性疾病史,近期内未使用影响光感性的药物;受试部位的皮肤应无色素沉着、炎症、瘢痕、色素痣、多毛等现象;能够接受测试区域皮肤使用人工光源进行晒黑者;能理解测试过程,自愿参加试验并签署书面知情同意书者。
排除标准:妊娠或哺乳期妇女,或近期有备孕计划者;有银屑病、湿疹、异位性皮炎、严重痤疮等皮肤病史者;近1个月内口服或外用过皮质类固醇激素等抗炎药物者;近2个月内口服或外用过任何影响皮肤颜色的产品或药物(如氢醌类制剂)者;近3个月内参加过同类试验或3个月前参加过同类试验,但试验部位皮肤黑化印迹没有完全褪去者;近2个月内参加过其他临床试验者;其他临床评估认为不适合参加试验者。
(3)测定步骤
测试仪器:采用具有连续性光谱辐射、能够产生UVA+UVB波长紫外线的氙弧灯日光模拟仪,290nm以下的波长应用适当的过滤***去除,输出波谱需经过计量检定或校准;具有可以测量国际照明委员会(CIE)制定的L*a*b*颜色空间数据的皮肤色度仪;具有基于光谱吸收的原理检测皮肤MI值的皮肤黑素检测仪。
环境条件:试验过程中仪器测试环节都应在温度为21±1℃、相对湿度为50±10%RH的环境下进行。
试验流程:合格受试者进入建立人体皮肤黑化模型阶段。首先应确定每位受试者试验部位的MED,然后在试验部位选定各测试区,用日光模拟仪在相同照射点按0.75倍MED剂量每天照射1次,连续照射4天。照射结束后的4天为皮肤黑化期,不作任何处理。照射结束后第5天,对各测试区皮肤颜色进行肤色仪器检测,应剔除一致性差的测试区(ITA°值与全部测试区均值相差大于5的区域)。当天开始在各黑化测试区根据随机表涂抹相应受试物。连续涂抹受试物至少4周,在涂抹后1周、2周、3周和4周应对皮肤颜色进行仪器检测,并记录。结果见表6。
数据分析:应用统计分析软件进行数据的统计分析。计量资料表示为:均值±标准差,并进行正态分布检验,符合正态分布要求,自身前后的比较采用配对t检验,否则采用两个相关样本秩和检验;等级资料使用前后的比较,采用两个相关样本秩和检验;测试区和对照区之间比较采用独立样本t检验或秩和检验;同时,计算各参数随时间变化的回归系数(斜率k值),显著性水平均为P<0.05。
试验结论:测试样品涂抹前后任一时间点肤色视觉评分差值或ITA°差值与阴性对照相比有显著改善(P<0.05),或经回归系数分析整体判断测试样品与阴性对照相比皮肤黑化显著改善时(P<0.05),则认定测试样品具有祛斑美白功效性,否则认为测试样品无祛斑美白功效。
表6测试样品使用后不同时间的ITA°值、MI值
注:ITA°值越大,肤色越浅,反之肤色越深;MI值越小,表示皮肤黑素含量越低,反之皮肤黑素含量越高。
对表6的实验结果进行统计分析,使用1周、2周、3周、4周实施例1~16的ITA°值与0周对比明显提高,其差值与阴性对照相比较具有显著性差异,P<0.01;使用1周、2周、3周、4周实施例1~16的MI值与0周对比明显降低,其差值与阴性对照相比较具有显著性差异,P<0.01。说明实施例1~16的组合物具有祛斑美白功效性,且分为四个等级,分别为实施例1~5、实施例6~9、实施例10~12和实施例13~16,对比皮肤美白的功效由低到高,其是由组合物的组分不同造成的。
6、鸡胚绒毛***(CAMVA)实验
测试样品:将实施例1~16和对比例1~6的组合物分别添加到普通乳液外用基质中制备测试样品,其中组合物占乳液总质量的5%。
测试方法:将鸡胚置于微电脑全自动孵化机孵育,于第4天在鸡胚窄端钻一小孔,抽取约4mL蛋清。在鸡环位置的上方开约2cm的窗口,用保鲜膜覆盖。随后放入恒温恒湿箱继续孵育。第10天,取出鸡胚,剥去窗口周围的蛋壳,选取生长良好的鸡胚226只,随机分成24组,分别为阴性对照组3只(空白),阳性对照组3只(普通乳液外用基质),实施例1~16、对比例1~6的组合物制备的测试样品(各10只),暴露绒毛膜血管,选择血管密集处放置特富龙环,每只鸡胚放置一个特富龙环,每环内加入各组样品40μL后再放入恒温恒湿箱孵育30分钟,取下特富龙环,用PBS冲洗,直至供试品无明显残留。以特富龙环外的区域作为对照,在体视显微镜下观察特富龙环内的血管损伤情况,根据表7对血管刺激效应进行评分。结果见表8。
表7 CAMVA试验评分标准
表8 CAMVA试验得分表
样品 | 得分 |
阴性对照组 | 均为0级 |
阳性对照组 | 均为0级 |
实施例1 | 均为0级 |
实施例2 | 均为0级 |
实施例3 | 均为0级 |
实施例4 | 均为0级 |
实施例5 | 均为0级 |
实施例6 | 均为0级 |
实施例7 | 均为0级 |
实施例8 | 均为0级 |
实施例9 | 均为0级 |
实施例10 | 均为0级 |
实施例11 | 均为0级 |
实施例12 | 均为0级 |
实施例13 | 均为0级 |
实施例14 | 均为0级 |
实施例15 | 均为0级 |
实施例16 | 均为0级 |
对比例1 | 2个0级,4个1级,3个2级,1个3级 |
对比例2 | 3个0级,4个1级,3个2级 |
对比例3 | 1个0级,3个1级,3个2级,3个3级 |
对比例4 | 4个1级,3个2级,3个3级 |
对比例5 | 均为0级 |
对比例6 | 均为0级 |
从表8的CAMVA试验结果可以看出,实施例1~16组合物达到了预期效果,均为0级。而对比例1~4组合物却存在很大刺激隐患。这源于对比例1~6组合物的组分和配比不同引起的。
综上所述,本发明通过雪肌肽、九肽-1、肌肽、维生素C、葡糖酸铜、三肽-1、谷胱甘肽这几种活性物之间的协同作用,在结合稳定性测试、功效测试和安全测试结果可以看出,实施例在美白功效方面均有较好的表现且分为4个等级的美白级别,虽实施例与对比例黑色素抑制率均超过40%,但对比例稳定性较差;在人体安全性测试中,实施例结果均为阴性,安全合格,而对比例存在很大安全隐患;在修护功效测试中,实施例对屏障受损皮肤的经皮水分流失的恢复有促进作用,而对比例会对皮肤造成损伤;鸡胚绒毛***实验结果也说明对比例均存在对皮肤不同程度的刺激隐患,而实施例均为0级,对皮肤无刺激。从而论证了该发明是在保证人体安全皮肤无损伤的基础上又能有效起到美白祛斑且保护皮肤屏障的作用。
Claims (7)
1.一种具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,其特征在于包含如下重量份组分:5~15份雪肌肽、2~7份九肽-1、1~10份肌肽、3~8份维生素C。
2.根据权利要求1所述的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,其特征在于:还包含1~5份葡糖酸铜、1~7份三肽-1。
3.根据权利要求1或2所述的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,其特征在于:还包含2~8份谷胱甘肽。
4.根据权利要求1所述的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,其特征在于:包含如下重量份组分:7~12份雪肌肽、3~6份九肽-1、4~8份肌肽、4~7份维生素C。
5.根据权利要求2所述的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,其特征在于包含如下重量份组分:8~11份雪肌肽、4~5份九肽-1、5~7份肌肽、5~6份维生素C、2~4份葡糖酸铜、3~6份三肽-1。
6.根据权利要求3所述的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物,其特征在于包含如下重量份组分:8~11份雪肌肽、4~5份九肽-1、5~7份肌肽、5~6份维生素C、2~4份葡糖酸铜、3~6份三肽-1、4~7份谷胱甘肽。
7.权利要求1所述的具有多重美白祛斑功效的胜肽组合物作为护肤品添加剂的应用。
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