CN114907161A - 一种含生防菌剂的有机肥及其制备方法 - Google Patents

一种含生防菌剂的有机肥及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种含生防菌剂的有机肥及其制备方法，属于有机肥料及微生物肥料技术领域。本发明以蚯蚓粪、秸秆、豆粕、腐殖酸等为有原料，筛选聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌作为活性微生物，制备得到一种生物有机肥，可以为植物生长提供必需的养分、增加有效养分含量和有机质含量、改善土壤结构以及增加土壤微生物活性，进而提高土壤肥力并促进作物生长，可代替无机化学肥料的使用，减少其对土壤的毒害作用，经济效益和社会效益显著。

Description

一种含生防菌剂的有机肥及其制备方法
技术领域
本发明属于有机肥料及微生物肥料技术领域，具体涉及一种含生防菌剂的有机肥及其制备方法。
背景技术
长期过量施用化肥引发了一系列问题，如土壤板结与酸化、有机质含量下降、生物活性降低、果蔬品质变差等，为了促进农业的可持续发展，减少化肥施用量并配合有机替代成为扭转上述不利局面的重要措施。生物有机肥是指畜禽粪便、农作物秸秆等废弃物经过腐熟堆肥处理后，与功能微生物复合而成的一类有机肥料。生物有机肥能增加土壤肥力、净化和修复土壤，同时在促进植物生长、降低植物发病率、增加产量和提高作物品质等方面发挥重要作用。
生物有机肥包括以下几种作用机理：生物有机肥施入土壤后，肥料中的功能菌通过各种代谢活动提高土壤肥力。比如施用含固氮微生物的肥料，其中的固氮菌能通过特有的生物固氮作用将空气中不能被植株直接吸收利用的氮气还原为氨，再进一步转化为其他不同形态的氮后才能被植株吸收利用；施用含解磷、解钾微生物的肥料，其中的微生物可将土壤中不能直接或者快速被植株吸收利用的不溶性或者有机类的养分，如磷酸三钙、磷酸铝、磷酸铁、有机磷等分解转换为植株可直接吸收利用的养分。(2)生物有机肥中的功能菌能分泌生长素(吲哚乙酸，IAA)等生理活性物质促进植物生长，同时当功能菌在植株根系繁殖形成优势种群时，也能抑制其他致病菌的生长繁殖，减少侵染作物根系的机会。(3)生物有机肥中既含有N、P、K以及中量元素(Ca、Mg、S等)和微量元素(Fe、Mn、Cu等)，供植物吸收利用，还含有氨基酸、蛋白质、糖、脂肪等有机成分，这些成分能够帮助肥料中功能菌的定殖与功能发挥。
我国生物有机肥的应用目前仍处于起步阶段，研究并不深入，制造的生物有机肥单独施用后，与单施无机肥料和单施有机肥料相比，产量常常有所下降，这主要由于生物有机肥养分释放缓慢，单独施用时不能及时提供给作物所需要的养分，从而会影响当季产量，因此，生物有机肥的应用受限，即使使用也必须与无机肥或有机肥搭配使用，但对作物生长和品质的促进并不明显。且肥效时间短，需要多次反复的施用，在实际中，应用率并不够高，且对于土壤环境，改良效果也比较一般。
发明内容
本发明针对现有技术中生物有机肥肥效差，功能单一的问题，提供一种高效生物有机肥，改善土壤理化性质生物活性，从根本上解决问题，同时为作物提供持续有效的营养，提高作物产量和品质。
为实现上述技术目的，本发明所采用的技术方案为：
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆50-90份、蚯蚓粪50-80份、豆粕20-50份、玉米粉10-40份、腐植酸10-15份、微生物菌剂5-15份、多孔沸石9-19份、钾矿粉1-4份、磷矿粉0.5-1份、氯化钙0.5-1份、增效剂0.1-0.5份。
进一步的，所述秸秆为玉米秸秆和/或小麦秸秆。
进一步的，所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置6-9d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
本发明选用蚯蚓粪作为主要有机原料，自然界的各种有机废弃物经发酵后，在蚯蚓消化***蛋白酶、脂肪酶、纤维酶和淀粉酶的作用下，迅速分解，转化成为自身或易于其他生物利用的营养物质，经***后成为蚯蚓粪。蚯蚓粪是一种理想的天然生物肥，其中不仅含有植物所需的大量元素，还有很多矿质元素和有益微生物，有利于植物生长，其质地均一且具有自然泥土气味的黑(灰)色细碎类物质及团粒结构和毛管孔隙，通气、排水和保水性俱佳，比表面积较大，为许多有益微生物提供良好的生存环境，并具有良好的吸收和保持营养物质的能力。同时，在施入土壤后通过对周围的土壤进行矿化作用，将土壤中的有效养分释放出来，还能增加土壤腐殖质的含量，比一般有机肥更能发挥改良土壤的作用。
进一步的，所述微生物菌剂为聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1:1混合而得。
更进一步的，所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2008年7月14日；
所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2015年2月25日；
所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2016年9月20日。
微生物菌剂的制备方法为：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
更进一步的，牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
进一步的，所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散30-50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1-2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10-20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
进一步的，所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散30-50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1-2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10-20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间10-12天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本发明各原料均市售可得。
本发明筛选聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌作为活性微生物，聚多曲霉可以有效祛土壤中的重金属元素等污染物，起到净化土壤的作用；副黄假单胞菌对多种重金属具有较好的耐受性，并有植物促生功能、固氮、溶磷和分泌铁载体能力，可将土壤中不能直接或者快速被植株吸收利用的不溶性或者有机类的养分；而枯草芽孢杆菌能分泌生长素(吲哚乙酸，IAA)等生理活性物质促进植物生长，同时当功能菌在植株根系繁殖形成优势种群时，也能抑制其他致病菌的生长繁殖，减少侵染作物根系的机会。三者等比例混合后，协同增效，共同实现对于土壤的调理和植物的促生抗病的双重功效。
于此同时，定殖能力对功能微生物的应用潜力具有决定作用，功能菌如果不能定殖，其在应用中的可行性就会降低。因此，本发明使用磁性纳米四氧化三铁粉末和丙烯酸乳液进行混合改姓，一方面填充了磁性纳米四氧化三铁粉末的沸石可以有效的定殖并保护微生物，而丙烯酸的混合改姓，可以实现营养物质以及微生物活性分泌物的缓释，延长肥效，一举两得。
有益效果
本发明以蚯蚓粪、秸秆、豆粕、腐殖酸等为有原料，筛选聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌作为活性微生物，制备得到一种生物有机肥，可以为植物生长提供必需的养分、增加有效养分含量和有机质含量、改善土壤结构以及增加土壤微生物活性，进而提高土壤肥力并促进作物生长，可代替无机化学肥料的使用，减少其对土壤的毒害作用，经济效益和社会效益显著。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但不限于此。
实施例1
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆50份、蚯蚓粪50份、豆粕20份、玉米粉10份、腐植酸10份、微生物菌剂5份、多孔沸石9份、钾矿粉1份、磷矿粉0.5份、氯化钙0.5份、增效剂0.1份。
所述秸秆为玉米秸秆。
所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置6d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
所述微生物菌剂为聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1:1混合而得。
所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2008年7月14日；所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2015年2月25日；所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2016年9月20日。
微生物菌剂的制备方法为：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散30min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散30min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间10天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本实施例各原料均市售可得。
实施例2
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆70份、蚯蚓粪60份、豆粕35份、玉米粉20份、腐植酸12份、微生物菌剂10份、多孔沸石13份、钾矿粉2份、磷矿粉0.8份、氯化钙0.7份、增效剂0.3份。
所述秸秆为小麦秸秆。
所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置7d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
所述微生物菌剂为聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1:1混合而得。
所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2008年7月14日；所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2015年2月25日；所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2016年9月20日。
微生物菌剂的制备方法为：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散40min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散40min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间11天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本实施例各原料均市售可得。
实施例3
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆90份、蚯蚓粪80份、豆粕50份、玉米粉40份、腐植酸15份、微生物菌剂15份、多孔沸石19份、钾矿粉4份、磷矿粉1份、氯化钙1份、增效剂0.5份。
所述秸秆为玉米秸秆和小麦秸秆按照质量比1:1混合。
所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置9d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
所述微生物菌剂为聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1:1混合而得。
所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2008年7月14日；
所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2015年2月25日；
所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2016年9月20日。
微生物菌剂的制备方法为：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间12天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本实施例各原料均市售可得。
对比例1
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆90份、蚯蚓粪80份、豆粕50份、玉米粉40份、腐植酸15份、微生物菌剂15份、多孔沸石19份、钾矿粉4份、磷矿粉1份、氯化钙1份、增效剂0.5份。
所述秸秆为玉米秸秆和小麦秸秆按照质量比1:1混合。
所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置9d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
所述微生物菌剂为聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1:1混合而得。
所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2008年7月14日；
所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2015年2月25日；
所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2016年9月20日。
微生物菌剂的制备方法为：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
所述多孔沸石为普通沸石颗粒。
所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间12天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本对比例各原料均市售可得。
本对比例除沸石未经过改性外，即直接使用商品沸石颗粒，其余原料和制备工艺均同实施例3。
对比例2
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆90份、蚯蚓粪80份、豆粕50份、玉米粉40份、腐植酸15份、微生物菌剂15份、多孔沸石19份、钾矿粉4份、磷矿粉1份、氯化钙1份、增效剂0.5份。
所述秸秆为玉米秸秆和小麦秸秆按照质量比1:1混合。
所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置9d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
所述微生物菌剂为副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1混合而得。
所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2015年2月25日；
所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2016年9月20日。
微生物菌剂的制备方法为：将副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1混合，得到微生物菌剂；
牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间12天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本对比例各原料均市售可得。
本对比例除微生物菌剂中不添加聚多曲霉外，其余原料和制备工艺均同实施例3。
对比例3
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆90份、蚯蚓粪80份、豆粕50份、玉米粉40份、腐植酸15份、微生物菌剂15份、多孔沸石19份、钾矿粉4份、磷矿粉1份、氯化钙1份、增效剂0.5份。
所述秸秆为玉米秸秆和小麦秸秆按照质量比1:1混合。
所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置9d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
所述微生物菌剂为聚多曲霉和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1混合而得。
所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2008年7月14日；
所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2016年9月20日。
微生物菌剂的制备方法为：将聚多曲霉和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1混合，得到微生物菌剂；
牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间12天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本对比例各原料均市售可得。
本对比例除微生物菌剂中不添加副黄假单胞菌外，其余原料和制备工艺均同实施例3。
对比例4
一种含生防菌剂的有机肥，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆90份、蚯蚓粪80份、豆粕50份、玉米粉40份、腐植酸15份、微生物菌剂15份、多孔沸石19份、钾矿粉4份、磷矿粉1份、氯化钙1份、增效剂0.5份。
所述秸秆为玉米秸秆和小麦秸秆按照质量比1:1混合。
所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置9d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
所述微生物菌剂为聚多曲霉和副黄假单胞菌按照质量比1:1混合而得。
所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2008年7月14日；
所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期为2015年2月25日；
微生物菌剂的制备方法为：将聚多曲霉和副黄假单胞菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1混合，得到微生物菌剂；
牛肉膏蛋白胨培养基的组成为：牛肉膏5.0g，蛋白胨15.0g，氯化钠5.0g，水1000mL，p H7.1-7.8，121-130℃高压蒸汽灭菌30min。
所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
所述增效剂为山梨醇。
一种生防菌剂的有机肥的制备方法，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉和副黄假单胞菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500mL摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间12天，发酵完成后干燥粉碎得所述含生防菌剂的有机肥。
本对比例各原料均市售可得。
本对比例除微生物菌剂中不添加枯草芽孢杆菌外，其余原料和制备工艺均同实施例3。
性能测试
将本发明实施例1-3和对比例1-4所得肥料进行性能测试
测定方法
有效活菌数：按照NY/T 2321—2013《微生物肥料产品检验规程》中的方法进行测定。
生物有机肥产品技术指标：按照NY884—2012《生物有机肥》中的方法测定。
检测结果如表1所示：
表1产品性能指标
Figure BDA0003730503390000131
种植试验
供试作物：玉米“登海605”
供试肥料：实施例1-3，对比例1-4所得肥料，施用量均为3000kg/hm2，肥料均作为底肥一次性施入土壤耕层，整个玉米生育期内不再追肥。其他管理措施与当地保持一致。设置空白对照，即不施加任何肥料。
玉米收获期每小区采集长势一致的连续30株的果穗，测定地上部分生物量、玉米产量和产量构成因素。
在玉米收获后采集表层土壤(0-20cm)样品，每小区按照S形采样法采集土壤样品。取土时,土钻一次性打到20cm深度,每小区采集3次重复，并将同一小区的3个重复样品混合成一个样品,去除砂砾、植物根系等可见杂物,带回实验室测定土壤养分含量和酶活性。
土壤微生物测定
采用稀释平板分离计数法测定土壤细菌、真菌和放线菌三大微生物类群数量，以每克干土所含菌落数(cfu)表示。细菌用牛肉膏蛋白胨培养基在37C下培养2-3d，真菌用马丁氏—孟加拉红培养基在27-28℃下培养3d,放线菌用高氏一号培养基27-28C下培养6d，记录每类菌种的菌落数，再依据土壤含水量计算出每克干土所含菌落数(cfu)。
土壤酶活性测定
采用靛蓝比色法测定土壤脲酶活性，3,5-二硝基水杨酸比色法测定土壤蔗糖酶活性，磷酸苯二钠比色法测定土壤碱性磷酸酶活性，采用高锰酸钾氧化法测定土壤过氧化氢酶活性。
表2种植试验及土壤指标
Figure BDA0003730503390000151
虫从表中数据我们可以看出，本发明实施例所得肥料试验组，玉米产量远高于对比例和空白试验组，对于土壤理化性能和生物活性的调节也十分显著。改变了菌剂组成的对比例2-4和不进行沸石改性的对比例1，无论是肥效还是对土壤的调节效果，均呈现了明显的下降趋势，这是由于微生物间的协同作用和改性沸石的保护作用消失，微生物无法高效发挥生物活性，因而导致的肥效下降。因此，本发明有机肥组成和制备工艺，是实现本发明稳定肥效和土壤调节作用的关键所在，缺一则效弱。
需要说明的是，上述实施例仅仅是实现本发明的优选方式的部分实施例，而非全部实施例。显然，基于本发明的上述实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例，都应当属于本发明保护的范围。

Claims (8)

1.一种含生防菌剂的有机肥，其特征在于，包括以下重量份的原料制备而成：秸秆50-90份、蚯蚓粪50-80份、豆粕20-50份、玉米粉10-40份、腐植酸10-15份、微生物菌剂5-15份、多孔沸石9-19份、钾矿粉1-4份、磷矿粉0.5-1份、氯化钙0.5-1份、增效剂0.1-0.5份。
2.根据权利要求1所述含生防菌剂的有机肥，其特征在于，所述秸秆为玉米秸秆和/或小麦秸秆。
3.根据权利要求1所述含生防菌剂的有机肥，其特征在于，所述蚯蚓粪使用时，将蚯蚓粪过25-30目筛后堆置6-9d，控制蚯蚓粪中水分含量为30-40％，备用。
4.根据权利要求1所述含生防菌剂的有机肥，其特征在于，所述微生物菌剂为聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌按照质量比1:1:1混合而得。
5.根据权利要求4所述含生防菌剂的有机肥，其特征在于，所述聚多曲霉的保藏编号为CGMCC3.11555，选自中国普通微生物保藏管理中心；所述副黄假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.15634，选自中国普通微生物保藏管理中心；所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC1.15832，选自中国普通微生物保藏管理中心。
6.根据权利要求1所述含生防菌剂的有机肥，其特征在于，所述多孔沸石为经过改性的沸石颗粒，具体制备方法为：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散30-50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1-2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10-20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒。
7.根据权利要求1所述含生防菌剂的有机肥，其特征在于，所述增效剂为山梨醇。
8.一种权利要求1-7任意一项所述生防菌剂的有机肥的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：
(1)制备微生物菌剂：将聚多曲霉、副黄假单胞菌和枯草芽孢杆菌分别接入灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基500m L摇瓶中，25-30℃、200r/min振荡培养24h，分别得到菌悬液，再将菌悬液按照体积比1:1:1混合，得到微生物菌剂；
(2)制备改性沸石：称取四氧化三铁粉末，按照料液比1g：15mL均匀分散于丙烯酸乳液中，再加入混合液质量2％的乙酸和0.5％的壳聚糖，超声分散30-50min，得到分散液；再将沸石按照固液比1g：10mL分散于2mol/l的氢氧化钠溶液中，浸泡1-2h后，再按照体积比1：1逐滴将分散液分散于沸石的氢氧化钠溶液中，磁力搅拌10-20min，之后过滤，用去离子水洗涤，干燥，得改姓沸石颗粒；
(3)按重量份称取各原料，调节湿度40-50％，混合后渥堆进行发酵，堆体温度控制在45-65℃，翻堆频率1次/天，发酵时间10-12天，发酵完成后干燥粉碎，得所述含生防菌剂的有机肥。
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