CN114906876B - 一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法 - Google Patents
一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114906876B CN114906876B CN202210445458.2A CN202210445458A CN114906876B CN 114906876 B CN114906876 B CN 114906876B CN 202210445458 A CN202210445458 A CN 202210445458A CN 114906876 B CN114906876 B CN 114906876B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polyvinyl alcohol
- modified
- sio
- magnetic beads
- dna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000011324 bead Substances 0.000 title claims abstract description 71
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 title claims abstract description 69
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 title claims abstract description 69
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 230000004048 modification Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 40
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims abstract description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 7
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 4
- 125000001261 isocyanato group Chemical group *N=C=O 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 abstract description 21
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 13
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 abstract description 11
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 10
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 9
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 abstract description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 abstract description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 75
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 68
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 61
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 61
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 56
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 40
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 31
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 26
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 21
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 14
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 13
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 10
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 9
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 9
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 9
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 9
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 9
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 8
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 8
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 7
- 239000007984 Tris EDTA buffer Substances 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 3
- 238000002470 solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 3
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000006136 alcoholysis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 iron ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000000593 microemulsion method Methods 0.000 description 1
- 238000004853 microextraction Methods 0.000 description 1
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- ACTRVOBWPAIOHC-UHFFFAOYSA-N succimer Chemical compound OC(=O)C(S)C(S)C(O)=O ACTRVOBWPAIOHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01G—COMPOUNDS CONTAINING METALS NOT COVERED BY SUBCLASSES C01D OR C01F
- C01G49/00—Compounds of iron
- C01G49/02—Oxides; Hydroxides
- C01G49/08—Ferroso-ferric oxide [Fe3O4]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01B—NON-METALLIC ELEMENTS; COMPOUNDS THEREOF; METALLOIDS OR COMPOUNDS THEREOF NOT COVERED BY SUBCLASS C01C
- C01B33/00—Silicon; Compounds thereof
- C01B33/113—Silicon oxides; Hydrates thereof
- C01B33/12—Silica; Hydrates thereof, e.g. lepidoic silicic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/60—Particles characterised by their size
- C01P2004/62—Submicrometer sized, i.e. from 0.1-1 micrometer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2004/00—Particle morphology
- C01P2004/80—Particles consisting of a mixture of two or more inorganic phases
- C01P2004/82—Particles consisting of a mixture of two or more inorganic phases two phases having the same anion, e.g. both oxidic phases
- C01P2004/84—Particles consisting of a mixture of two or more inorganic phases two phases having the same anion, e.g. both oxidic phases one phase coated with the other
- C01P2004/86—Thin layer coatings, i.e. the coating thickness being less than 0.1 time the particle radius
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C01—INORGANIC CHEMISTRY
- C01P—INDEXING SCHEME RELATING TO STRUCTURAL AND PHYSICAL ASPECTS OF SOLID INORGANIC COMPOUNDS
- C01P2006/00—Physical properties of inorganic compounds
- C01P2006/42—Magnetic properties
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Iron (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,包括如下步骤:以Fe3O4@SiO2为原料,将其超声分散于无水DMSO中,搅拌后往其中加入1,6‑己二基二异氰酸酯,得到异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2;然后,将异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2分散于聚乙烯醇的DMSO溶液中,反应后得到聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠。本发明不仅可以得到单分散性好、高饱和磁强度的磁珠,还能够避免团聚、氧化等因素对磁珠性能的影响;本发明方法制得的聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠有优异的DNA提取性能,能够在较短的磁响应时间内,实现对DNA的分离富集;本发明制得的聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠DNA提取灵敏度高,能够在较低的浓度下,实现DNA实时荧光PCR扩增,Ct值为18。
Description
技术领域
本发明涉及一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法。
背景技术
脱氧核糖核酸(DNA)是一种携带生物细胞中合成蛋白质所必需的遗传信息的核酸,是生物体发育和正常运转所必需的。DNA分析由于其固有的特异性和技术能力,使得检测灵敏、快速对临床诊断、基因组学和食品安全有着至关重要的作用。在复杂的生物样品中,DNA的含量相对较低(相对于其他成分),因此样品中含有的蛋白质、多糖、磷脂和代谢物会严重干扰DNA检测。
传统DNA检测方法如苯酚/氯仿抽提法,异丙醇沉淀法,甲酰胺裂解法等主要借助沉淀,离心和过滤步骤,耗时耗力且提取效率低下。近年来,新的DNA提取方法如液-液萃取法、液-液微萃取法、固相萃取法、磁固相微萃取法等得到了越来越多的研究。在以上提及这些方法中,磁固相微萃取因其低成本、少用有机溶液、过程简单、省时省力等优点,被广泛用于DNA的富集检测。同时,磁固相微萃取中使用的磁性纳米颗粒(MNPs)可以利用外部磁场快速收集,从而避免了因离心步骤产生的剪切力导致核酸降解损失。
在实际应用中,通常需要对磁性纳米颗粒(MNPs)进行合适的表面修饰,一方面是为防止裸露的磁性纳米颗粒氧化和团聚,另一方面可以实现对核酸的高通量、自动化提取。常用于表面修饰的材料包括氨基硅烷化试剂、二巯基丁二酸、壳聚糖、聚乙烯亚胺、聚乙烯醇等。聚乙烯醇因其生物相容、无毒、低成本等优点,被广泛用于磁性纳米颗粒的修饰。基于聚乙烯醇修饰的Fe3O4,材料表面富含大量的羟基官能团,材料分散性得到了很大的提高。如在WO 01/70831中,W.Jeffery等报道了PVA修饰的磁性纳米颗粒的合成及其生物材料分离方面的潜在性能。他们以体积分数2~7%的戊二醛为交联剂,质量分数为2.5~5%、分子量大于50000g/mol的聚乙烯醇为聚合物层,10-200nm的Fe3O4为磁核,采用反向微乳液法合成了聚乙烯醇包覆的磁性纳米颗粒,但该方法制得的磁性纳米粒子尺寸大小为0.5~5μm,分布范围宽,尺寸大小不均一。再如在WO 2014/015966中,Jungen Oster等人探究了搅拌速度、聚合物浓度和交联剂浓度等因素对PVA修饰的磁性纳米颗粒尺寸的影响,并将其用于实时定量荧光PCR检测。结果表明,高搅拌速度、低浓度聚合物和交联剂可以使微粒尺寸减小,磁性核心占比增加,甚至可以达到90%以上,但带来的是微粒悬浮分散性能变差。以上方法制得的磁性纳米粒子虽然可以实现对游离DNA的分离富集,但都存在修饰过程繁琐,材料尺寸不一,尺寸分布范围较宽,磁性核心占比较少等问题,导致批次之间分离性能差异较大,分离时间有所延长。
发明内容
发明目的:本发明目的旨在提供一种磁珠尺寸均一、且不同批次间磁珠尺寸差异小、磁性核心占比大、磁响应速度快的四氧化三铁磁珠的制备方法。
技术方案:本发明所述的基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,在有机溶剂中,以1,6-己二基二异氰酸酯作为交联剂将Fe3O4@SiO2与聚乙烯醇进行桥联得到聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠。
上述制备方法具体包括如下步骤:
(1)将Fe3O4@SiO2超声分散于无水DMSO中,搅拌下再往其中加入1,6-己二基二异氰酸酯,得到异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2;
(2)将步骤(1)得到的异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2分散于聚乙烯醇的DMSO溶液中,反应后得到聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠。
其中,步骤(1)中,Fe3O4@SiO2中Fe3O4的尺寸为15~400nm,二氧化硅壳层厚度为5~10nm。
其中,步骤(1)中,对于每g Fe3O4@SiO2,1,6-己二基二异氰酸酯的加入量为不大于1mL。
其中,步骤(2)中,聚乙烯醇的DMSO溶液中,聚乙烯醇的质量分数为1~1.5%,聚乙烯醇的醇解度为92~94mol%。
其中,步骤(2)中,异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2与聚乙烯醇DMSO溶液的质量体积比为10:1。
其中,步骤(1)中,Fe3O4@SiO2采用如下方法制备而成:
(1.1)按质量比1:1.5~3将FeCl3·6H2O和NaAc加入到有机溶剂中,充分溶解后,将混合物料置于高温下反应,得到Fe3O4纳米粒子;所述Fe3O4纳米粒子的粒径范围为15-400nm;通过控制原料FeCl3·6H2O和NaAc的加入比例,控制铁离子的水解速度快慢,最后通过加热得到超顺磁性Fe3O4颗粒;
(1.2)将步骤(1.1)得到的Fe3O4纳米粒子超声分散于盐酸溶液中,超声处理后用水洗涤至中性;将Fe3O4纳米粒子与盐酸反应,使铁氧键暴露出来利于与二氧化硅的结合;
(1.3)将步骤(1.2)处理过的Fe3O4超声分散于乙醇和水的混合溶剂中,加入氨水调节溶液为碱性,然后加入正硅酸四乙酯,反应后得到Fe3O4@SiO2;Fe3O4@SiO2为以四氧化三铁为核,在四氧化三铁表面包裹有二氧化硅层;通过控制Fe3O4与正硅酸四乙酯的加入比,控制Fe3O4外SiO2层的包裹厚度,当SiO2层的包裹厚度厚会影响终产物磁珠的磁性强度。
本发明方法的合成路线为:
本发明制得的聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠应用于核酸富集分离的原理为:在一定浓度NaCl和PEG溶液的协同作用下,游离的DNA分子被沉淀下来,借助Na+的盐桥作用,实现Fe3O4磁珠对DNA的结合,达到分离富集检测的目的。
本发明制得的聚乙烯醇修饰的Fe3O4在细菌质粒DNA提取方面的应用,具体为:
S1、裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清液;向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎,然后加入400μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清;取出离心管,然后加入300μL细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm下离心5~10min,留上清液,得到细菌裂解液;
S2、结合:取15μL Fe3O4磁珠浓度为10mg/mL的悬浮液,悬浮液是将磁珠分散在水里,与结合缓冲液按合适体积比混匀,然后加入S1所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min;磁分离20s后,弃上清液,向离心管中加入质量分数为70%乙醇溶液洗涤2~3次,晾干至管内无液体残留;所用结合缓冲液为质量分数20%PEG 8000和浓度2mol/L NaCI的混合溶液,结合缓冲液和悬浮液的体积比为50:1;
S3、洗脱:加入TE缓冲溶液洗脱吸附在Fe3O4磁珠表面的DNA,65℃水浴5~10min,间或混匀,磁分离,小心取上清液至新的离心管,获得细菌组DNA。
有益效果:(1)本发明方法制得的聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠尺寸均一,不同批次间尺寸差异小且重现性良好;(2)本发明方法制得的Fe3O4磁珠磁性核心占比高,四氧化三铁外的二氧化硅和聚乙烯醇共同形成的壳层厚度为10nm以下,而Fe3O4核尺寸大,为400nm左右,磁性核心占比高,磁性强,磁珠的饱和磁强度为77.21emu/g,磁响应时间为20s,具有磁响应速度快、分离时间短的优点,在磁分离过程中,能够实现30s以内的快速分离;(3)本发明方法制得的Fe3O4磁珠表面富含羟基基团,材料在样品中分散稳定性良好,在一定浓度PEG和NaCl溶液协助下,与游离的DNA分子实现结合,从而实现其能够应用于微量核酸的分离富集;(4)本发明制得的聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠DNA提取灵敏度高,能够在较低的浓度下,实现DNA实时荧光PCR扩增,Ct值为18。
附图说明
图1为实施例1制得的Fe3O4磁珠提取细菌质粒DNA的流程以及原理图;
图2为实施例1制得的Fe3O4磁珠的磁滞回线图;
图3为不同Fe3O4磁珠用量对细菌质粒DNA提取效率的影响;
图4为不同浓度NaCl对Fe3O4磁珠细菌质粒DNA提取效率的影响;
图5为不同浓度PEG 8000对Fe3O4磁珠细菌质粒DNA提取效率的影响;
图6为洗脱温度对Fe3O4磁珠细菌质粒DNA提取效率的影响;
图7为在优化条件下,Fe3O4磁珠与Fe3O4@SiO2提取细菌质粒DNA的磁响应速度对比图;
图8为在优化条件下,Fe3O4磁珠与Fe3O4@SiO2提取细菌质粒DNA的实时PCR扩增结果图。
图9为在优化条件下,Fe3O4磁珠与Fe3O4@SiO2提取细菌质粒DNA的荧光PCR扩增结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
本发明基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,包括如下步骤:
(1)将200mgFe3O4@SiO2超声分散于40mL无水DMSO中,搅拌(搅拌速度100r/min)后往其中加入200μL1,6-己二基二异氰酸酯,得到异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2;
(2)将步骤(1)中200mg异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2分散于20mL质量浓度为1%的聚乙烯醇DMSO溶液中,反应后得到聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠。超声混匀后测定固含量,即每毫升溶液中,聚乙烯醇包覆的四氧化三铁磁珠的质量为4.2mg/mL。
从图2可以看出,制得的聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠呈现超顺磁性,无任何磁滞现象,饱和磁强度为77.21emu/g。
实施例2
聚乙烯醇修饰Fe3O4磁珠加入量的不同对细菌质粒DNA提取效率的影响:
(1)裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清。向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎。然后加入200μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清。取出离心管,然后加入细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm离心5~10min,留上清,得到细菌裂解液。
(2)结合:设置磁珠用量梯度,分别取5μL、10μL、15μL、20μL、25μL和30μL浓度为10mg/mL的聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠与结合缓冲液按体积比1:50混匀,其中结合缓冲液中NaCl浓度为2mol/L,PEG 8000质量分数为20%。然后分别加入(1)所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min;磁分离,弃上清,向离心管中加入70%乙醇洗涤2~3次,晾干至管内无液体残留。
(3)洗脱:加入pH=8的TE缓冲溶液洗脱吸附在材料表面的DNA,65℃水浴5~10min,间或混匀,磁分离,小心取上清至新的离心管,获得细菌组DNA。
(4)检测:借助Nanodrop 2000微量紫外分光光度计测定DNA浓度;具体如下,首先将得到的细菌组DNA摇动混匀,取1μL滴加到检测台上,读出DNA浓度。然后依据公式q=C×V/m,计算得到提取DNA的效率。其中,q为提取DNA的效率(mg/g),m为加入的聚乙烯醇修饰的磁珠质量(μg),C为得到的DNA浓度,V为得到的细菌DNA的体积。
从图3的结果可以看出,随着聚乙烯醇修饰Fe3O4磁珠加入量的增加,提取DNA量效率先是不断增加,然后逐渐降低,推测原因可能为菌液中DNA总量有限,磁珠吸附已经达到饱和。(加入量增加提取量降低的原因是随着磁珠加入量增加,分母增大,分子不变,提取效率降低),临界点加入聚乙烯醇修饰Fe3O4磁珠的体积为15μL。可以得出,当聚乙烯醇修饰Fe3O4磁珠的加入量为15μL,吸附效率最高。
实施例3
结合缓冲液中NaCl浓度的不同对细菌质粒DNA提取效率的影响:
(1)裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清。向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎。然后加入200μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清。取出离心管,然后加入细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm离心5~10min,留上清,得到细菌裂解液。
(2)结合:取15μL、10mg/mL聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠与一系列结合缓冲液按体积比1:50混匀,其中,结合缓冲液中NaCl浓度分别为0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L、2.0mol/L、2.5mol/L、3.0mol/L和3.5mol/L。然后分别加入(1)所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min。磁分离,弃上清,向离心管中加入70%乙醇洗涤2~3次,晾干至管内无液体残留。
(3)洗脱:加入pH=8的TE缓冲溶液洗脱吸附在材料表面的DNA,65℃水浴5~10min,间或混匀,磁分离,小心取上清至新的离心管,获得细菌组DNA。
(4)检测:借助Nanodrop 2000微量紫外分光光度计测定DNA浓度。具体如下,首先将得到的细菌组DNA摇动混匀,取1μL滴加到检测台上,读出DNA浓度。然后依据公式q=C×V/m,计算得到提取DNA的效率。其中,q为提取DNA的效率(mg/g),m为加入的聚乙烯醇修饰的磁珠质量(μg),C为得到的DNA浓度,V为得到的细菌DNA的体积。
从图4可以看出,随着NaCl浓度的增加,提取DNA的效率是不断增加,然后逐渐降低。可以得出,当NaCl浓度为2.5mol/L时,吸附效率最高。原因是当NaCl浓度不断升高,溶液中离子强度增大,聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠出现聚沉现象,影响其吸附效率。
实施例4
结合缓冲液中PEG 8000浓度的不同对细菌质粒DNA提取效率的影响:
(1)裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清。向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎。然后加入200μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清。取出离心管,然后加入细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm离心5~10min,留上清,得到细菌裂解液。
(2)结合:取15μL、10mg/mL聚乙烯醇修饰的高磁性Fe3O4与一系列结合缓冲液按体积比1:50混匀,其中,结合缓冲液中PEG 8000质量分数分别为5%、10%、15%、20%、25%和30%,然后分别加入(1)所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min。磁分离,弃上清,向离心管中加入70%乙醇洗涤2~3次,晾干至管内无液体残留。
(3)洗脱:加入pH=8的TE缓冲溶液洗脱吸附在材料表面的DNA,65℃水浴5~10min,间或混匀,磁分离,小心取上清至新的离心管,获得细菌组DNA。
(4)检测:借助Nanodrop 2000微量紫外分光光度计测定DNA浓度。具体如下,首先将得到的细菌组DNA摇动混匀,取1μL滴加到检测台上,读出DNA浓度。然后依据公式q=C×V/m,计算得到提取DNA的效率。其中,q为提取DNA的效率(mg/g),m为加入的聚乙烯醇修饰的磁珠质量(μg),C为得到的DNA浓度,V为得到的细菌DNA的体积。
从图5可以看出,随着PEG 8000质量分数的增加,提取DNA的效率先是不断增加,然后略微降低,但分离时间显著增加。原因是PEG 8000质量分数过高时,混合液黏性增强,磁性粒子扩散受阻,混合和磁分离时间延长,给实际操作带来了一定困难。由此可以得出,当PEG 8000质量分数为15%,分离时间短且吸附效率最高。
实施例5
洗脱温度的不同对细菌质粒DNA提取效率的影响:
(1)裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清。向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎。然后加入200μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清。取出离心管,然后加入细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm离心5~10min,留上清,得到细菌裂解液。
(2)结合:取15μL、10mg/mL聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠与一系列结合缓冲液按体积比1:50混匀,其中,结合缓冲液中NaCl的浓度为2.5mol/L,PEG 8000质量分数分别为15%,然后分别加入(1)所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min。磁分离,弃上清,向离心管中加入70%乙醇洗涤2~3次,晾干至管内无液体残留。
(3)洗脱:分别加入pH=8的TE缓冲溶液洗脱吸附在材料表面的DNA,分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃和90℃条件下水浴5~10min,间或混匀,磁分离,小心取上清至新的离心管,获得细菌组DNA。
(4)检测:借助Nanodrop 2000微量紫外分光光度计测定DNA浓度。具体如下,首先将得到的细菌组DNA摇动混匀,取1μL滴加到检测台上,读出DNA浓度。然后依据公式q=C×V/m,计算得到提取DNA的效率。其中,q为提取DNA的效率(mg/g),m为加入的聚乙烯醇修饰的磁珠质量(μg),C为得到的DNA浓度,V为得到的细菌DNA的体积。
从图6可以看出,随着洗脱温度的增加,提取得到的DNA量先是不断增加,然后略微降低。原因是温度升高减弱了DNA和材料间的相互作用,提取的细菌DNA更容易脱附下来,脱附效率显著提高。但温度过高给实际操作带来了一定麻烦,相应操作繁琐(如冷却到室温时间长,影响后续相关PCR实验的开展)、升温时间长(水浴升温时间长)。由此可以得出,当洗脱温度为70℃,脱附效率最高。
实施例6
为了凸显本发明制备的聚乙烯醇修饰的Fe3O4提取质粒DNA的磁响应速度快,将聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠与Fe3O4@SiO2提取细菌质粒DNA的磁响应速度进行了对比:
1)裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清。向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎。然后加入200μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清。取出离心管,然后加入细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm离心5~10min,留上清,得到细菌裂解液。
(2)结合:分别取15μL、10mg/mL聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠、Fe3O4@SiO2与结合缓冲液按体积比1:50混匀,其中,结合缓冲液中NaCl的浓度为2.5mol/L,PEG 8000质量分数分别为15%,然后分别加入(1)所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min。磁分离,弃上清,评估磁分离速度快慢。
磁响应速度结果如图7所示,可以清楚的看到,相较于Fe3O4@SiO2(图8左),在外部磁场作用下,聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠可以在20s内快速响应,而Fe3O4@SiO2响应时间稍稍延长。因此,可以得出结论,本发明制得的聚乙烯醇修饰的Fe3O4具有快的磁响应速度,将其应用于微量核酸的分离,大大节省时间。
实施例7
为了凸显本发明制备的聚乙烯醇修饰的Fe3O4提取质粒DNA的效率高,将聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠与Fe3O4@SiO2提取细菌质粒DNA的效果进行了对比:
(1)裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清。向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎。然后加入200μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清。取出离心管,然后加入细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm离心5~10min,留上清,得到细菌裂解液。
(2)结合:分别取15μL、10mg/mL聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠、Fe3O4@SiO2与结合缓冲液按体积比1:50混匀,其中,结合缓冲液中NaCl的浓度为2.5mol/L,PEG 8000质量分数分别为15%,然后分别加入(1)所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min。磁分离,弃上清,向离心管中加入70%乙醇洗涤2~3次,晾干至管内无液体残留。
(3)洗脱:分别加入pH=8的TE缓冲溶液洗脱吸附在材料表面的DNA,分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃和90℃条件下水浴5~10min,间或混匀,磁分离,小心取上清至新的离心管,获得细菌组DNA。
(4)PCR扩增:选用的合适的Mix体系进行扩增,具体条件如下:首先依次在PCR扩增管中加入5μL 2×mix buffer,2μL ddH2O,上游引物和下游引物各1μL,模板为提取的细菌DNA2μL,总体积为10μL。然后将其放入PCR扩增仪进行扩增,循环扩增条件如下:95℃预变性2min,94℃变形30s,61℃退火30s,72℃预延伸30s,72℃延伸10min,循环次数为35次。
PCR扩增结果如图8所示,聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠和Fe3O4@SiO2提取的乙肝病毒质粒DNA均得到了良好的扩增。相较于Fe3O4@SiO2,聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠对应的条带更亮,说明聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠提取出的初始DNA模板量比Fe3O4@SiO2多,由此可以得出结论,本发明制得的聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠具有良好的DNA提取效果,可以将其应用于微量核酸的检测。
实施例8
为了凸显本发明制备的聚乙烯醇修饰的Fe3O4提取质粒DNA的灵敏度更高,将聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠与Fe3O4@SiO2提取细菌质粒DNA的荧光PCR扩增结果进行了对比:
(1)裂解:菌体裂解液的制备:取过夜培养液于离心管中,4℃下10000r/min条件离心5min,弃上清。向离心管中加入200μL溶菌酶溶液重悬菌体,37℃水浴30min,间或混匀直至细胞壁破碎。然后加入200μL细菌裂解液I和20μL蛋白酶K,震荡混匀5-6次,至溶液完全澄清。取出离心管,然后加入细菌裂解液II,充分混匀,12000rpm离心5~10min,留上清,得到细菌裂解液。
(2)结合:分别取15μL、10mg/mL聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠、Fe3O4@SiO2与结合缓冲液按体积比1:50混匀,其中,结合缓冲液中NaCl的浓度为2.5mol/L,PEG 8000质量分数分别为15%,然后分别加入(1)所得的细菌裂解液中,吹打混匀,室温静置1min。磁分离,弃上清,向离心管中加入70%乙醇洗涤2~3次,晾干至管内无液体残留。
(3)洗脱:分别加入pH=8的TE缓冲溶液洗脱吸附在材料表面的DNA,分别在40℃、50℃、60℃、70℃、80℃和90℃条件下水浴5~10min,间或混匀,磁分离,小心取上清至新的离心管,获得细菌组DNA。
(4)荧光PCR扩增:选用的合适的Mix体系进行扩增,具体条件如下:首先依次在PCR扩增板中加入10μL 2×mix buffer,6μL ddH2O,上游引物和下游引物各0.5μL,探针0.5μL,模板为提取的细菌DNA2.5μL,总体积为20μL。然后将其放入PCR扩增仪进行扩增,循环扩增条件如下:95℃预变性2min,94℃变形15s,61℃退火30s,72℃预延伸30s,72℃延伸10min,循环次数为40次。
荧光PCR扩增结果如图9所示,可以明显看到,聚乙烯醇修饰的Fe3O4磁珠和Fe3O4@SiO2提取的乙肝病毒质粒DNA均得到了良好的扩增,当荧光PCR扩增信号到达设定阈值时,相应的Ct值分别为18和22,即达到相同的荧光强度时,聚乙烯醇修饰的Fe3O4循环圈数更少,灵敏度更高。
Claims (6)
1.一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,其特征在于,所述制备方法为在有机溶剂中,以1,6-己二基二异氰酸酯作为交联剂将Fe3O4@SiO2与聚乙烯醇进行桥联得到聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠。
2.根据权利要求1所述的基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
(1)将Fe3O4@SiO2超声分散于无水DMSO中,搅拌下再往其中加入1,6-己二基二异氰酸酯,得到异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2;
(2)将步骤(1)得到的异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2分散于聚乙烯醇的DMSO溶液中,反应后得到聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠。
3.根据权利要求2所述的基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,Fe3O4@SiO2中Fe3O4的尺寸为15~400nm,二氧化硅壳层厚度为5~10nm。
4.根据权利要求2所述的基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,对于每g Fe3O4@SiO2,1,6-己二基二异氰酸酯的加入量为不大于1mL。
5.根据权利要求2所述的基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,聚乙烯醇的DMSO溶液中,聚乙烯醇的质量分数为1~1.5%。
6.根据权利要求2所述的基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法,其特征在于:步骤(2)中,异氰酸基修饰的Fe3O4@SiO2与聚乙烯醇DMSO溶液的质量体积比为10:1。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210445458.2A CN114906876B (zh) | 2022-04-26 | 2022-04-26 | 一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210445458.2A CN114906876B (zh) | 2022-04-26 | 2022-04-26 | 一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114906876A CN114906876A (zh) | 2022-08-16 |
CN114906876B true CN114906876B (zh) | 2023-08-04 |
Family
ID=82765741
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210445458.2A Active CN114906876B (zh) | 2022-04-26 | 2022-04-26 | 一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114906876B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115430410A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-12-06 | 四川大学华西医院 | 一种由苯胺化修饰的磁珠复合物及其制备方法与应用 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102294208A (zh) * | 2010-06-23 | 2011-12-28 | 北京金麦格生物技术有限公司 | 一种聚乙烯醇和二氧化硅复合包被多孔磁珠的制备方法及应用 |
CN107490681A (zh) * | 2017-09-29 | 2017-12-19 | 安徽安龙基因科技有限公司 | 一种EpCAM抗体免疫磁珠的制备方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20200124592A1 (en) * | 2017-06-30 | 2020-04-23 | Apostle, Inc. | Magnetic nanoparticle |
-
2022
- 2022-04-26 CN CN202210445458.2A patent/CN114906876B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102294208A (zh) * | 2010-06-23 | 2011-12-28 | 北京金麦格生物技术有限公司 | 一种聚乙烯醇和二氧化硅复合包被多孔磁珠的制备方法及应用 |
CN107490681A (zh) * | 2017-09-29 | 2017-12-19 | 安徽安龙基因科技有限公司 | 一种EpCAM抗体免疫磁珠的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Green, cost‐effective and efficient procedure for Heck and Sonogashira coupling reactions using palladium nanoparticles supported on functionalized Fe3O4@SiO2 by polyvinyl alcohol as a highly active, durable and reusable catalyst;Ali Reza Sardarian等;《Appl Organometal Chem.》;e4856 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114906876A (zh) | 2022-08-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2965131B2 (ja) | 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法 | |
US10724031B2 (en) | Highly active silica magnetic nanoparticles for purifying biomaterial and preparation method thereof | |
US8697020B2 (en) | Silica magnetic particles having a spherical form and a process for preparing the same | |
Min et al. | Isolation of DNA using magnetic nanoparticles coated with dimercaptosuccinic acid | |
US7964380B2 (en) | Nanoparticles for manipulation of biopolymers and methods of thereof | |
US20070026435A1 (en) | Hydroxysilane functionalized magnetic particles and nucleic acid separation method | |
Ma et al. | Magnetic nanoparticles-based extraction and verification of nucleic acids from different sources | |
CN113004546B (zh) | 一种硅羟基磁珠及其制备方法和应用 | |
CN111330558B (zh) | 一种用于痕量核酸提取纯化的磁性微球制作方法 | |
CN109727761A (zh) | 一种单分散超顺磁性纳米磁珠的制备方法和应用 | |
EP1260595A2 (en) | Nucleic acid-bondable magnetic carrier and method for isolating nucleic acid using the same | |
CN110548489B (zh) | 一种氨基磁性纳米粒子的制备方法及其在dna提取中的应用 | |
CN114906876B (zh) | 一种基于聚乙烯醇修饰的四氧化三铁磁珠的制备方法 | |
CN113058545A (zh) | 一种新型磁珠及其制备方法 | |
KR20070018501A (ko) | 고순도 및 고용량으로 dna를 분리 정제할 수 있는아미노 치환기를 가지는 실리카 코팅 자성나노입자와 그의제조방법 | |
CN114870759B (zh) | 树莓状硅羟基磁性微球的制备方法 | |
CN113584129B (zh) | p53基因检测探针、所得生物传感器及其应用 | |
KR101800004B1 (ko) | 산화그래핀으로 수식된 자성 비드, 이의 제조방법 및 이를 이용한 핵산의 분리방법 | |
Patil et al. | Superparamagnetic core/shell nanostructures for magnetic isolation and enrichment of DNA | |
CN114231596B (zh) | 基于CRISPR/dcas9和磁纳米材料的基因检测方法及应用 | |
US20240025759A1 (en) | Magnetic nanoparticles for sample separation | |
CN116272903A (zh) | 用于提取纯化dna的离子型磁珠及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |