CN114901690A - 用结合191p4d12蛋白的抗体药物偶联物（adc）治疗癌症 - Google Patents

用结合191p4d12蛋白的抗体药物偶联物（adc）治疗癌症 Download PDF

Info

Publication number
CN114901690A
CN114901690A CN202080071695.6A CN202080071695A CN114901690A CN 114901690 A CN114901690 A CN 114901690A CN 202080071695 A CN202080071695 A CN 202080071695A CN 114901690 A CN114901690 A CN 114901690A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
subject
amino acid
antigen
variable region
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080071695.6A
Other languages
English (en)
Inventor
O·O·阿比多也
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sijin Co
Agensys Inc
Original Assignee
Sijin Co
Agensys Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sijin Co, Agensys Inc filed Critical Sijin Co
Publication of CN114901690A publication Critical patent/CN114901690A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6863—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from stomach or intestines cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)

Abstract

本文提供了用结合191P4D12蛋白质的抗体药物偶联物(ADC)治疗癌症的方法。

Description

用结合191P4D12蛋白的抗体药物偶联物(ADC)治疗癌症
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年8月13日提交的美国临时专利申请序列号62/886,270的优先权，其公开通过引用全文纳入本文。
1.技术领域
本文提供了用结合191P4D12蛋白质的抗体药物偶联物(ADC)治疗癌症的方法。
2.背景
癌症是美国35至65岁人群的主要死因，也是全球第二大死因。据估计，2019年美国将有约170万新癌症病例，约61万人死于癌症(国家癌症研究所，2019年。癌症统计事实：任何部位的癌症。https://seer.cancer.gov/statfacts/html/all.html.查阅日期：2019年6月5日)。据估计，2018年全球新增癌症病例1810万例，2018年约960万人死于癌症(世界卫生组织新闻稿，2018年9月。https://www.who.int/cancer/PRGlobocanFinal.pdf.查阅日期：2019年6月5日)。现在大多数死亡发生在转移性癌症患者中。事实上，在过去20年中，包括手术、放疗和辅助化疗在内的治疗技术的进步治愈了大多数局部癌症患者。癌症表现为转移性疾病或复发的患者在总体生存率(OS)方面仅从传统疗法中获得了轻微的益处，很少治愈。
转移性癌症的新治疗策略包括靶向对癌细胞存活重要的分子途径和新型细胞毒性化合物。这些新药的益处体现在延长生存期；然而，大多数远端转移患者的预后仍然很差，需要新的治疗方法。
191P4D12(也称为柄蛋白(Nectin)-4)是一种I型跨膜蛋白，属于与细胞间粘附相关的免疫球蛋白样粘附分子家族。191P4D12属于粘附分子的柄蛋白家族。191P4D12由一个含有3个Ig样亚结构域的胞外结构域(ECD)、一个跨膜螺旋和一个胞内区域组成(Takai Y等人，Annu Rev Cell Dev Biol 2008；24:309-42)。柄蛋白被认为通过在粘附连接处的嗜同性和嗜异性反式相互作用介导Ca2+非依赖性细胞-细胞粘附，在粘附连接处它们可以招募钙粘蛋白并调节细胞骨架重排(Rikitake&Takai，Cell Mol Life Sci.2008；65(2)：253-63)。191P4D12与其他柄蛋白家族成员的序列相同性较低，在ECD中范围在25％到30％之间(Reymond N等人，J Biol Chem 2001；43205-15)。柄蛋白促进的粘附支持多种生物过程，如免疫调节、宿主-病原体相互作用和免疫逃逸(Sakisaka T等人，《细胞生物学最新观点》；2007，19:593-602)。
乳腺癌
在全球范围内，2018年新诊断的女性乳腺癌病例约为210万例，占女性癌症病例的近1/4。在绝大多数国家，该疾病是最常见的癌症，也是女性癌症相关死亡的主要原因。转移诊断后，预后不良，5年生存率约为15％。
由于转移性乳腺癌有多种治疗选择和生物异质性，因此选择合适的治疗方法相当复杂。可能的治疗选择受***和孕酮受体以及肿瘤的人表皮生长因子受体2(HER2)状态的影响。出现转移性乳腺癌的对象的治疗选择也可能受到使用的辅助治疗、辅助治疗后对象复发的时间以及转移部位影响。
激素受体阳性，人表皮生长因子受体2阴性乳腺癌
激素受体阳性(HR+)/HER2-阴性乳腺癌是最常见的乳腺癌亚型(>70％)，主要发生在绝经后妇女中。患有转移性疾病的女性的初始治疗主要包括内分泌治疗。这通常是单独或联合CDK4/6抑制剂，或作为双重内分泌阻断剂给药。对于内分泌难治或有症状性脏器疾病的女性，建议进行全身化疗。
几种细胞毒性化疗药物已在转移性乳腺癌中显示出活性，包括蒽环类药物、紫杉烷类药物、吉西他滨、卡培他滨、长春瑞滨、艾日布林和伊沙匹隆。这些药物的应答率因先前治疗的类型以及乳腺癌亚型而异。总的来说，基于蒽环类药物的联合治疗以及紫杉醇和多西它赛等紫杉烷类药物被认为是最具活性的(Piccart M，Clin Breast Cancer 2008；100-13)。鉴于蒽环类药物在辅助设置中的广泛使用以及心脏毒性风险的增加，蒽环类药物在转移设置中的使用是有限的。紫杉烷是局部晚期或转移性疾病患者最常用的药物，尤其是在一线环境中(Greene&Hennessy，J Oncol Pharm Pract 2015；201-12)。由于毒性较低且生存效益有限，建议采用循序单药疗法而非联合疗法。HR+/HER2-阴性乳腺癌患者对常用单药化疗的响应主要限于亚组分析，其范围在11％到36％之间(Robson M等人，N Engl JMed.2017；377(18)：1792-3；Kaufman PA等，J Clin Onco.2015；33(6):594-601；Cortes J等人，Lancet，2011；377:914-23)。总的来说，报告范围在10％到13％之间先前治疗的患者的响应往往较低(Perez EA等，J Clin Oncol.2007；25:3407-14；Jones S等，JClinOncol.1995；13(10)：2567-74)。
三阴性乳腺癌
三阴性乳腺癌(TNBC)的定义是***受体(ER)、孕酮受体(PR)和HER2缺乏免疫染色。总体而言，约15％至20％的乳腺癌被归类为TNBC。TNBC与侵袭性肿瘤生物学、内脏转移和不良预后有关(Plasilova ML等，Medicine(Baltimore).2016；95(35):e4614)。
基于紫杉烷的方案被认为是转移性乳腺癌(包括TNBC)患者一线治疗的标准。最近，FDA快速批准了阿特珠单抗联合nab-紫杉醇治疗不能切除的局部晚期或转移性TNBC患者，其肿瘤表达程序性死亡配体1(PD-L1；中位无进展生存期[PFS]为7.5个月，对比5.0个月；客观应答率(ORR)为56％，对比46％)(Schmid P等，N Engl J Med.2019；380(10)：987-988)。二线或后续线治疗尚无标准方法，化疗方案与其他亚型相同。由于缺乏生存益处和毒性增加，单剂细胞毒性化疗药物通常优于联合化疗药物，但在侵袭性疾病和内脏受累的情况下除外(Cardoso F等人，Ann Oncol.2017；28(2)：208-217；国家综合癌症网络，2017，非小细胞肺癌，NCCN肿瘤学临床实践指南(NCCN指南)，http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/nscl.pdf.查阅日期：2019年6月5日)。先前治疗的患者的标准化疗与低应答率(10％至15％)和短无进展生存期(2至3个月)相关(Hurvitz和Mead，Curr Opin Obstet Gynecol.2016；28(1)：59-69)。
非小细胞肺癌
肺癌(包括小细胞和非小细胞)是美国癌症死亡的主要原因(美国癌症协会，《肺癌关键统计数据》，2019年1月8日a.
https://www.cancer.org/cancer/non-small-cell-lung-cancer/about/key-statistics.html.查阅日期：2019年6月5日]。大多数被诊断为肺癌的患者年龄在65岁或以上，诊断时的平均年龄约为70岁。
非小细胞肺癌(NSCLC)约占所有肺癌的85％(Tan和Huq，非小细胞肺癌(NSCLC)，2019年4月13日，https://emedicine.medscape.com/article/279960-overview，查阅日期2019年6月5日；美国癌症协会：《什么是非小细胞肺癌》，2016年5月16日，https:// www.cancer.org/cancer/non-small-cell-lung-cancer/about/what-is-non-small- cell-lung-cancer.html，查阅日期2019年6月5日)，且可分为鳞状(约30％的NSCLC病例)和非鳞状(约40％的NSCLC病例)组织学类型(美国癌症协会，非小细胞肺癌，2019b。
http://www.cancer.org/Cancer/LungCancer-Non-SmallCell/DetailedGuide/lung-cancer--non-small-cell--non-small-cell-lung-cancer.查阅日期：2019年6月5日)。
鳞状非小细胞肺癌
鳞状NSCLC是NSCLC的一种独特组织学亚型，由于特定的患者和疾病特征，其治疗具有挑战性，包括老年、诊断时的转移性(包括恶性或转移性恶性)疾病、并存疾病以及肿瘤的中心位置(Socinski M等人，细胞肺癌2018；165-183)。这些特征对转移性(包括恶性或转移性恶性)鳞状NSCLC的治疗结果有影响，导致中位生存率比其他NSCLC亚型患者低约30％。
其治疗选择有限，尤其是转移性(包括恶性或转移性恶性)鳞状NSCLC的一线治疗，对生存结果产生影响(国家综合癌症网络，2017年，非小细胞肺癌，NCCN肿瘤临床实践指南(NCCN指南)，http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/nscl.pdf，查阅日期2019年6月5日；Novello S等人，Ann Oncol 2016；27(增刊5)：v1-v27；Masters GA等人，J Clin Oncol 2015；33(30):3488-3515)。鉴于近期对转移性(包括恶性或转移性恶性)NSCLC的靶向治疗和免疫治疗的批准，以及肺癌治疗个性化的持续发展，还需要评估这些新疗法对转移性(包括恶性或转移性恶性)鳞状NSCLC的有效性。
非鳞状非小细胞肺癌
非鳞状NSCLC是一种异质性疾病，有多种治疗选择，取决于分期、是否存在转移和患者因素，包括是否存在并存疾病等因素。因此，目前的治疗方案包括手术切除、化疗、放疗、免疫治疗和靶向治疗。目前，对于无可靶向基因畸变的转移性(包括恶性或转移性恶性)非鳞状非小细胞肺癌患者，一线治疗是铂双重化疗。除贝伐单抗外，尽管对多种靶向和细胞毒性药物进行了广泛研究，但在随机研究中，在铂双重化疗中添加第三种药物并没有显示出比单纯铂双重化疗更能改善无进展或OS(Reck M等人，Ann Oncol 2010；1804-09；Sandler A等，N Engl J Med 2006；355:2542-50)。
头颈癌
头颈癌是一组始于口腔、鼻、咽喉、喉(larynx)、鼻窦或唾液腺的癌症(美国国家癌症研究所，头颈癌，2017年3月29日，https://www.cancer.gov/types/head-and-neck/head-neck-fact-sheet，2019年6月5日查阅)。在世界范围内，头颈癌已经影响了550多万人(口240万人，咽喉170万人，喉140万人)，并导致37.9万人死亡(GBD,2016a.1990-2015年310种疾病和损伤的全球、地区和国家发病率、患病率和残疾生存年限：2015年全球疾病负荷研究的***分析，2019年6月5日查阅，https://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(16)31678-6/全文；GBD。2016b。1980-2015年249种死因的全球、区域和国家预期寿命、全因死亡率和特定原因死亡率：2015年全球疾病负担研究的***分析，https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0140673616310121，2019年6月5日查阅)。全球范围内，今年将出现大约60万例头颈癌病例，只有40％到60％的患者能存活5年(Rene Leemans C等人，《头颈癌分子生物学》，Nature Reviews Cancer，2011年12月16日，2019年6月5日查阅，https://www.nature.com/articles/nrc2982)。
最重要的风险因素是吸烟和饮酒，这似乎具有协同效应(Decker和Goldstein，NEngl J Med.1982；1151-1155)。头颈癌的一个亚组，尤其是口咽癌，是由高危型人***瘤病毒(HPV)感染引起的(Rene Leemans C等，头颈癌的分子生物学，Nature Reviews Cancer,，2011年12月16日，2019年6月5日查阅，https://www.nature.com/articles/nrc2982)。
治疗在很大程度上取决于存在的阶段，但可能包括手术、放疗、化疗和靶向治疗的组合(美国国家癌症研究所，2019年，《癌症统计事实：任何部位的癌症》，https://seer.cancer.gov/statfacts/html/all.html，2019年6月5日查阅)。然而，由于患者经常出现局部复发、远端转移和第二原发性肿瘤，因此近几十年来，患者的生存率并没有显著提高。关于头颈癌分子致癌作用的有限信息，以及该疾病的遗传和生物异质性，阻碍了新治疗策略的发展。
胃癌或食管癌
据估计，2019年，美国将有17650名成年患者被诊断为胃癌，约16080人死于该疾病(美国癌症协会，食管癌生存率，2019年1月31日c，https://www.cancer.org/cancer/esophagus-cancer/detection-diagnosis-staging/survival-rates.html，2019年6月6日查阅)。据估计，2019年，美国将有27510名成年人被诊断为食管癌，约有11140人死于该疾病(美国癌症协会，关于胃癌的关键统计数据，2009年1月9日)，https://www.cancer.org/cancer/stomach-cancer/about/key-statistics.html，2019年6月6日查询)。食管腺癌和贲门腺癌的发病率有所上升，而食管鳞状细胞癌和胃非贲门腺癌的发病率有所下降，这表明了不同的病因(Crew和Neugut，World J Gastroenterol.，2016；354-362)。
化疗可以显著降低无法切除、局部晚期或转移性疾病患者的症状。产生部分应答(PR)率的单一药物(顺铂、多柔比星和丝裂霉素)被认为在胃肠道(GI)癌症中最活跃(Preusser P等人，Oncology 1998；99 102)。与单药治疗相比，使用这些药物的联合治疗方案有更高的应答率(30％至50％)，但与更大程度的毒性相关，并产生类似OS(6至10个月不等)(Preusser P等人，肿瘤学1998；99 102)。因此，如果要延长患者的生存期，就必须鉴定新药物。
对癌症的额外疗法有很大的需求。其中包括使用抗体和抗体药物偶联物作为治疗方法。
3.发明简述
在一个方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中，对象具有激素受体阳性和人表皮生长因子受体2阴性(HR+/HER2-)乳腺癌。
在本文提供的方法的一些实施方式中，HR+/HER2-乳腺癌是***受体(ER)阳性和/或孕酮受体(PR)阳性且HER2阴性。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象患有局部晚期或转移性癌症。
在本文提供的方法的一些实施方式中，对象之前在转移性或局部晚期情形下接受过至少一线的内分泌治疗和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象先前已接受紫杉烷或蒽环类药物治疗。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象在乳腺癌易感基因(BRCA)1或BRCA2中具有有害种系突变，且其中该对象先前已用聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗。
在一些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中，该对象患有ER阴性、PR阴性和HER2阴性(ER-/PR-/HER2-)乳腺癌。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于本段前一段(第[0036]段)中描述的方法，对象患有局部晚期或转移性癌症。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象先前已接受至少两线的***治疗。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象先前已接受紫杉烷治疗。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于，本段前1-4段([0036]至[0039]段)中所述的方法中，该对象在乳腺癌易感基因(BRCA)1或BRCA2中具有有害种系突变，且其中该对象先前已用聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗。
在一些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中其中所述对象具有鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于本段前一段(第[0041]段)中描述的方法，对象患有局部晚期或转移性癌症。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象在基于铂的疗法后有进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象在基于铂的疗法后12个月内有进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，对象之前接受过程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制剂或程序性细胞死亡配体1(PD-L1)抑制剂的治疗，其中，PD-1的抑制剂任选为纳武单抗，且其中任选地，PD-L1的抑制剂选自阿特珠单抗、阿维单抗和度伐鲁单抗。
在一些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中所述对象具有非鳞状NSCLC。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象具有野生型表皮生长因子受体(EGFR)及野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于，本段前1-2段([0046]至[0047]段)中所述的方法中，对象具有局部晚期或转移性癌。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于，本段前1-3段([0046]至[0048]段)中所述的方法中，该对象在基于铂的疗法后有进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于，本段前1-4段([0046]至[0049]段)中所述的方法中，该对象在基于铂的疗法后12个月内有进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于，本段前1-5段([0046]至[0050]段)中所述的方法中，所述对象之前接受过程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制剂或程序性细胞死亡配体1(PD-L1)抑制剂的治疗，其中，PD-1的抑制剂任选为纳武单抗，且其中任选地，PD-L1的抑制剂选自阿特珠单抗、阿维单抗和度伐鲁单抗。
在一些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中所述对象具有局部晚期或转移性头颈癌。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于，本段前1段([0052]段)中所述的方法中，该对象在基于铂的疗法后有进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该对象在基于铂的疗法后6个月内有进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于，本段前1-3段([0052]至[0054]段)中所述的方法中，所述对象之前接受过程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制剂或程序性细胞死亡配体1(PD-L1)抑制剂的治疗，其中，PD-1的抑制剂任选为纳武单抗，且其中任选地，PD-L1的抑制剂选自阿特珠单抗、阿维单抗和度伐鲁单抗。
在一些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中所述对象具有胃或食管癌。
在本文提供的方法的一些实施方式中，例如但不限于本段前一段(第[0056]段)中描述的方法，对象患有局部晚期或转移性癌症。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述对象在基于铂的疗法或包括氟嘧啶的化疗后进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述对象在基于铂的疗法或包括氟嘧啶的化疗后6个月内进展或复发。
在本文提供的方法的一些实施方式中，该胃癌或食管癌是HER2阳性癌症，且其中该对象先前已接受HER2靶向治疗。
在一些本文提供的方法的实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括：含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的CDR H1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的CDR H2，含有氨基酸序列SEQID NO:11的CDR H3；含有氨基酸序列SEQ ID NO:12的CDR L1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:13的CDR L2，和含有氨基酸序列SEQ ID NO:14的CDR L3。
在一些本文提供的方法的实施方式中，抗体或其抗原结合片段包括：含有氨基酸序列SEQ ID NO:16的CDR H1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:17的CDR H2，含有氨基酸序列SEQID NO:18的CDR H3；含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的CDR L1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的CDR L2，和含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的CDR L3。
在本文提供的方法的一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，和所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:23。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体包括重链和轻链，所述重链包含从SEQ ID NO:7第20个氨基酸(谷氨酸)到第466个氨基酸(赖氨酸)范围的氨基酸序列，而所述轻链包含从SEQ ID NO:8第23个氨基酸(天冬氨酸)到第236个氨基酸(半胱氨酸)范围的氨基酸序列。
在本文提供的方法的一些实施方式中，抗原结合片段是Fab、F(ab′)2、Fv或scFv片段。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体是完全人抗体。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段是重组产生的。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体药物偶联物具有如下结构：
Figure BDA0003592694230000091
其中L-代表抗体或其抗原结合片段，并且p是1-10。
在本文提供的方法的一些实施方式中，p是2至8。
在本文提供的方法的一些实施方式中，p是3至5。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体或抗原结合片段通过接头连接单甲基奥瑞他汀E(MMAE)的各个单元。
在本文提供的方法的一些实施方式中，接头是酶可裂解接头，并且其中所述接头与所述抗体或其抗原结合片段的硫原子形成键。
在本文提供的方法的一些实施方式中，接头具有式：–Aa–Ww–Yy–；其中–A–是延伸体单元(stretcher unit)，a是0或1；–W–是氨基酸单元，w是0-12内的整数，和–Y–是间隔单元，y是0、1或2。
在本文提供的方法的一些实施方式中其中，所述延伸体单元具有下述式(I)结构；所述氨基酸单元是缬氨酸瓜氨酸；和所述间隔单元是包含下述式(2)结构的PAB基团：
Figure BDA0003592694230000101
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述延伸体单元与所述抗体或其抗原结合片段的硫原子形成键；并且其中所述间隔单元通过氨基甲酸酯基团与MMAE连接。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体药物偶联物在每个抗体或其抗原结合片段包含1至10个MMAE单位。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体药物偶联物在每个抗体或其抗原结合片段包含2至8个MMAE单位。
在本文提供的方法的一些实施方式中，所述抗体药物偶联物在每个抗体或其抗原结合片段包含3至5个MMAE单位。
在本文提供的方法的一些实施方式中，抗体药物偶联物配制在药物组合物中，其中所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂，其包含L-组氨酸，聚山梨醇酯-20(吐温-20)，和海藻糖二水合物和蔗糖之至少一者。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含浓度为1-20mg/mL、5-15mg/ml、8-12mg/ml的抗体药物偶联物。
在本文提供的方法的一些实施方式中，抗体药物偶联物的浓度为约10mg/ml。
在本文提供的方法的一些实施方式中，L-组氨酸的存在范围为5至50mM、10至40mM、15至35mM、15至30mM或15至25mM。
在本文提供的方法的一些实施方式中，L-组氨酸以约20mM的浓度存在。
在本文提供的方法的一些实施方式中，吐温-20的浓度在0.001至0.1％(v/v)、0.0025至0.075％(v/v)、0.005至0.05％(v/v)或0.01至0.03％(v/v)的范围内。
在本文提供的方法的一些实施方式中，吐温-20的浓度约为0.02％(v/v)。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含海藻糖二水合物。
在本文提供的方法的一些实施方式中，海藻糖二水合物的存在范围为1至20％(w/v)、2至15％(w/v)、3至10％(w/v)或4至6％(w/v)。
在本文提供的方法的一些实施方式中，海藻糖二水合物以约5.5％(w/v)的比例存在。
在本文提供的方法的一些实施方式中，海藻糖二水合物的存在范围为50mM至300mM、75mM至250mM、100mM至200mM或130mM至150mM。
在本文提供的方法的一些实施方式中，海藻糖二水合物以约146mM的浓度存在。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含蔗糖。
在本文提供的方法的一些实施方式中，蔗糖的存在范围为1至20％(w/v)、2至15％(w/v)、3至10％(w/v)或4至6％(w/v)。
在本文提供的方法的一些实施方式中，蔗糖以约5.5％(w/v)的比例存在。
在本文提供的方法的一些实施方式中，蔗糖的存在范围为50mM至300mM、75mM至250mM、100mM至200mM或130mM至150mM。
在本文提供的方法的一些实施方式中，蔗糖以约146mM的浓度存在。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物的pH值在5.5至6.5或5.7至6.3范围内。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物的pH值约为6.0。
在本文提供的方法的一些实施方式中，pH值是在室温、15℃至27℃、约4℃或约25℃下获得的。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含盐酸(HCl)或琥珀酸。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含约20mM L-组氨酸、约0.02％(w/v)吐温-20、约5.5％(w/v)海藻糖二水合物和HCl；其中25℃时pH值约为6.0。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含约20mM L-组氨酸、约0.02％(w/v)吐温-20、约5.5％(w/v)海藻糖二水合物和琥珀酸；其中25℃时pH值约为6.0。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含约20mM L-组氨酸、约0.02％(w/v)吐温-20、约5.5％(w/v)蔗糖和HCl；其中25℃时pH值约为6.0。
在本文提供的方法的一些实施方式中，药物组合物包含约20mM L-组氨酸、约0.02％(w/v)吐温-20、约5.5％(w/v)蔗糖和琥珀酸；其中25℃时pH值约为6.0。
在本文提供的方法的一些实施方式中，其中以1至10mg/kg对象体重、1至5mg/kg对象体重、1至2.5mg/kg对象体重或1至1.25mg/kg对象体重的剂量给予抗体药物偶联物。
在本文提供的方法的一些实施方式中，以约1mg/kg对象体重的剂量给予抗体药物偶联物。
在本文提供的方法的一些实施方式中，以约1.25mg/kg对象体重的剂量给予抗体药物偶联物。
在本文提供的方法的一些实施方式中，通过静脉内(IV)注射或输注给予抗体药物偶联物。
在本文提供的方法的一些实施方式中，抗体药物偶联物通过静脉内(IV)注射或输注在约30分钟内给予，每三周周期两次。
在本文提供的方法的一些实施方式中，抗体药物偶联物通过静脉内(IV)注射或输注在每三周周期的第1天和第8天在约30分钟内给予。
在本文提供的方法的一些实施方式中，抗体药物偶联物通过静脉内(IV)注射或输注在约30分钟内给予，每四周周期三次。
在本文提供的方法的一些实施方式中，配制在药物组合物中的抗体药物偶联物在约30分钟内通过静脉内(IV)注射或输注给予，每四周周期的第1天、第8天和第15天。
4.附图简要说明
图1A-E描述191P4D12蛋白的核苷酸和氨基酸序列(图1A)，Ha22-2(2.4)6.1的重链(图1B)和轻链(图1C)的核苷酸和氨基酸序列，以及Ha22-2(2.4)6.1的重链(图1D)和轻链(图1E)的氨基酸序列。
图2描述了Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE在SCID小鼠皮下建立的人肺癌异植物AG-L4中的疗效。结果表明，与经治疗和未经治疗的对照相比，经Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE治疗的裸鼠皮下移植的AG-L4肺癌异植物生长明显受到抑制。
图3描述了Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE在SCID小鼠皮下建立的人乳腺癌异植物BT-483中的疗效。结果表明，与经治疗和未经治疗的对照ADC相比，经Ha22-2(2,4)
6.1-vcMMAE治疗的SCID小鼠皮下移植的BT-483乳腺肿瘤异植物的生长明显受到抑制。
图4A-H.通过IHC检测癌症患者样本中的191P4D12蛋白。图4A-B显示乳腺癌样本。图4C-D显示肺癌样本。图4E-F显示食管癌样本。图4G-H显示头颈癌样本。
5.具体实施方式
在进一步描述本公开之前，应当理解的是，本公开并不限于本文所示具体实施方式，并且还应当理解的是，本文所用术语仅出于描述具体实施方式的目的，而不是限制性的。
5.1定义
本文所述或所引用的技术或方法包括本领域技术人员通常所熟知和/或一般通过常规方法采用的那些，例如，Sambrook等,《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)(第三版，2001)；《新编分子生物学实验指南》(Current Protocols inMolecular Biology)(Ausubel等编著,2003)；《治疗性单克隆抗体：从实验室和到临床》(Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic)(An等2009)；《单克隆抗体：方法和方案》(Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols)(Albitar等2010)；和《抗体工程改造》(Antibody Engineering)卷1和2(Kontermann和Dübel编著,第2版，2010)中所述广泛应用的方法。
除非另有定义，本文中所用的科技术语具有本领域普通技术人员所通常理解的含义。出于解释该说明书目的，将应用以下术语的描述，并在适当时，以单数形式使用的术语也将包括复数形式，反之亦然。如果所示术语的任何描述与通过引用纳入本文的任何文件相冲突，那么将以下文所示术语的描述为准。
术语“抗体”、“免疫球蛋白”或“Ig”在本文可互换使用，并以最广泛的含义使用并且具体涵盖，例如，单克隆抗体(包括激动剂、拮抗剂、中和抗体、全长或完整单克隆抗体)，具有多表位或单表位特异性的抗体组合物，多克隆或单价抗体，多价抗体，多特异性抗体(例如，双特异性抗体，只要它们表现出所需的生物活性)，形成自至少两个完整的抗体、单链抗体和其片段，如下所述。抗体可以是人的，人源化的，嵌合的和/或亲和力(affinity)成熟的，以及来自其他物种的抗体，例如，小鼠和兔等。术语“抗体”旨在包括能够结合特异性分子抗原且包含两对相同的多肽链的免疫球蛋白类多肽内的B细胞的多肽产物，其中各对多肽链具有一条重链(约50-70kDa)和一条轻链(约25kDa)，各链的各氨基末端部分包含约100-约130或更多氨基酸的可变区，并且各链的各羧基末端包含恒定区。参见例如，《抗体工 程改造》(Antibody Engineering)(Borrebaeck编著，第2版1995)；和Kuby,《免疫学》(Immunology)(第3版1997)。在具体实施方式中，特定分子抗原可以通过本文所提供的抗体结合，包括多肽或表位。抗体还包括但不限于，合成抗体，重组产生的抗体，骆驼化抗体，内抗体，抗-独特型(抗-Id)抗体，和上述任意一种的功能性片段(例如，抗原结合片段)，其指保留衍生该片段的抗体的一些或全部结合活性的抗体重链或轻链多肽的部分。功能性片段(例如，抗原结合片段)的非限制性示例包括：单链Fv(scFv)(例如，包括多特异性，双特异性等)，Fab片段，F(ab’)片段，F(ab)2片段，F(ab’)2片段，二硫键连接的Fv(dsFv)，Fd片段，Fv片段，双抗体，三抗体，四抗体和迷你抗体。具体地，本文所提供的抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋分子的免疫活性部分，例如，抗原结合结构域或含有结合抗原的抗原结合位点(例如，抗体的一个或多个CDR)的分子。这类抗体片段可以见于，例如，Harlow和Lane,《抗体实 验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual)(1989)；《分子生物学和生物技术：全面案头参考》(Mol.Biology and Biotechnology:A Comprehensive Desk Reference)(Myers等，1995)；Huston等,1993,Cell Biophysics 22:189-224；Plückthun和Skerra,1989,Meth.Enzymol.178:497-515；和Day,高级免疫化学(Advanced Immunochemistry)(第2版1990)。本文所提供的抗体可以是免疫球蛋白分子的任何类型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或任何亚型(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。抗体可以是激动性抗体或拮抗性抗体。
术语“单克隆抗体”指获自基本均一抗体群体的抗体，即除了存在少数可能天然发生的突变外，群体包含的单独抗体均是相同的。单克隆抗体具有针对单个抗原性位点的高度特异性。与可以包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相比，每一单克隆抗体针对抗原上单个决定簇。
“抗原”是抗体可以选择性结合的结构。靶抗原可以是多肽、碳水化合物、核酸、脂质、半抗原或天然存在或合成的其他化合物。在一些实施方式中，靶抗原是多肽。在某些实施方式中，抗原与细胞相关，例如存在于细胞上或细胞中，例如癌细胞。
“完整”抗体是这样的抗体，其包含抗原结合位点以及CL和至少重链恒定区，CH1、CH2和CH3。恒定区可以包含人恒定区或其氨基酸序列变体。在某些实施方式中，完整抗体具有一种或多种效应功能。
术语“抗原结合片段”、“抗原结合结构域”、“抗原结合区域”和相似的术语指这样的抗体部分，其包含与抗原相互作用并赋予结合剂其对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基(例如，CDR)。本文所用“抗原结合片段”包括“抗体片段”，其包含完整抗体的部分，例如完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的示例包括但不限于，Fab，Fab’，F(ab’)2，和Fv片段；双抗体和二-双抗体(参见例如，Holliger等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.90:6444-48；Lu等，2005，J.Biol.Chem.280:19665-72；Hudson等，2003，Nat.Med.9:129-34；WO 93/11161；和美国专利号5,837,242和6,492,123)；单链抗体分子(参见例如，美国专利号4,946,778；5,260,203；5,482,858；和5,476,786)；双可变结构域抗体(参见例如，美国专利号7,612,181)；单可变结构域抗体(sdAb)(参见例如，Woolven等，1999，Immunogenetics 50:98-101；和Streltsov等，2004，Proc Natl Acad Sci USA.
101:12444-49)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“结合”或“缔合”指分子之间的相互作用，包括，例如，以形成复合物。例如，相互作用可以是非共价的相互作用，包括氢键、离子键、疏水相互作用和/或范德华相互作用。复合物还可包括通过共价或非共价键、相互作用或力保持在一起的两个或多个分子的结合。抗体上单个抗原结合位点和靶分子(如抗原)的单个表位之间的全部非共价相互作用的强度是抗体或功能性片段对于表位的亲和力。结合分子(例如，抗体)对于单克隆抗原的解离速率(koff)与结合速率(kon)比例(koff/kon)是解离常数(KD)，其与亲和力成反比。KD值越低，抗体的亲和力越高。KD的值因抗体和抗原的不同复合物而异并取决于kon和koff。本文提供的抗体的解离常数KD可以使用本文提供的任何方法或本领域技术人员熟知的任何其他方法确定。一个结合位点的亲和力常常并不反映抗体和抗原之间相互作用真正的强度。当含有多个、重复抗原决定簇的复合抗原，如多价抗原与含有多个结合位点的抗原接触之时，一个位点处的抗原与抗体的相互作用将增加第二位点处反应的可能性。多价抗体和抗原之间这类多重相互作用的强度称为亲合力(avidity)。
与本文所述抗体或其抗原结合片段相关的术语，例如“结合”、“特异性结合”和类似术语在本文中也可互换使用，并且指特异性结合抗原的抗原结合结构域的结合分子，如多肽。结合或特异性结合抗原的抗体或抗原结合片段可与相关抗原交叉反应。在某些实施方式中，结合或特异性结合抗原的抗体或抗原结合片段与其它抗原不交叉反应。结合或特异性结合抗原的抗体或抗原结合片段可以通过例如，免疫试验、
Figure BDA0003592694230000161
或本领域技术人员已知的其他技术鉴定。在一些实施方式中，使用实验技术如放射免疫试验(RIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)确定，当抗体或抗原结合片段以比任何交叉反应抗原更高的亲和力结合抗原时，该抗体或抗原结合片段结合或特异性地结合抗原。通常，特异性或选择性反应将为背景信号或噪声的至少两倍并且可以为超过背景10倍。参见例如，《免疫学基础》(Fundamental Immunology)332-36(Paul编著，第2版1989)关于结合特异性的讨论。在某些实施方式中，抗体或抗原结合片段与非靶标“蛋白结合”的程度将小于结合分子或抗原结合结构域与其特定靶抗原的结合的约10％，例如，如通过荧光活化的细胞分选(FACS)分析或RIA所确定。对于诸如”特异性结合”、”特异性地结合(至)”或对“……具有特异性之类的术语，其意指与非特异性相互作用显著不同的结合。”例如，特异性结合可通过测定某分子的结合并与对照分子的结合进行比较来测量，对照分子通常是结构上相似但没有结合活性的分子。例如，可通过与靶标相似的对照分子(例如过量的未标记的靶标)的竞争来确定特异性结合。在这种情况下，如果标记靶标与探针的结合被过量的未标记靶标竞争性抑制，则表明特异性结合。结合抗原的抗体或抗原结合片段包括能够以足够的亲和力结合抗原的抗体或抗原结合片段，由此该结合分子能够用于例如靶向抗原的诊断剂。在某些实施方式中，结合抗原的抗体或抗原结合片段的解离常数(KD)小于或等于1000nM、800nM、500nM、250nM、100nM、50nM、10nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM。在某些实施方式中，抗体或抗原结合片段结合在不同物种的抗原之间(例如，人和食蟹猴物种之间)是保守的抗原的表位。
“结合亲和力”通常指分子(例如，结合蛋白，如抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。结合分子X对其结合伴侣Y的亲和力通常可以通过解离常数(KD)表示。亲和力可以通过本领域已知的常用方法来测量，包括本文所述的那些方法。低亲和力抗体通常缓慢结合抗原并倾向于容易地解离，而高亲和力抗体通常更快地结合抗原并倾向于保持更长的结合。本领域已知测量结合亲和力的多种方法，其中任何一种都可用于本公开的目的。具体的说明性实施方式包括以下内容。在一个实施方式中，“KD”或“KD值”可以通过本领域已知的试验，例如通过结合试验来测量。KD可以在RIA中测量，例如，使用感兴趣的抗体的Fab形式和其抗原(Chen等,1999,J.Mol Biol 293:865-81)。测量KD或KD值还可以通过使用生物层干扰量度法(biolayer interferometry，BLI)或表面等离振子共振(SPR)试验，通过
Figure BDA0003592694230000171
使用例如
Figure BDA0003592694230000172
QK384***，或通过
Figure BDA0003592694230000173
使用例如
Figure BDA0003592694230000174
TM-2000或
Figure BDA0003592694230000175
TM-3000。“on-速率”或“结合的速率“或“结合速率”或“kon”还可以使用上述相同的生物层干扰量度法(BLI)或表面等离振子共振(SPR)技术确定，使用例如，
Figure BDA0003592694230000176
QK384、
Figure BDA0003592694230000177
TM-2000或
Figure BDA0003592694230000178
TM-3000***。
在某些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以包含“嵌合”序列，其中重链和/或轻链的部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，同时，一条或多条链的其余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，还包括这类抗体的片段，只要它们表现出所需的生物学活性(参加美国专利号4,816,567；和Morrison等,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-55)。
在某些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以包含非人(例如，鼠)抗体“人源化”形式的部分，其为嵌合抗体，包含人免疫球蛋白(例如，受体抗体)，其中天然CDR残基被包含所需特异性、亲和力和性能的来自非人物种(例如，供体抗体)(如小鼠、大鼠、兔或非人哺乳动物)相应的CDR的残基所替换。在一些情形中，人免疫球蛋白的一个或多个FR区域残基替换成相应的非人残基。而且，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中未发现的残基。进行这些修饰以进一步改善抗体性能。人源化抗体重链或轻链可以包含基本上全部的至少一个或多个可变区，其中全部或基本上全部的CDR对应于非人免疫球蛋白的CDR区，且全部或基本上全部的FR是人免疫球蛋白序列的FR。在某些实施方式中，人源化抗体将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节，参见，Jones等.,1986,Nature 321:522-25；Riechmann等,1988,Nature 332:323-29；Presta,1992,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-96；Carter等,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285-89；美国专利号6,800,738；6,719,971；6,639,055；6,407,213；和6,054,297。
在某些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以包含“完全人抗体”或“人抗体”的部分，其中该术语在本文可以互换使用并且指包含人可变区和例如人恒定区的抗体。在具体实施方式中，该术语指包含人来源的可变区和恒定区的抗体。在某些实施方式中，“完全人”抗体还可以涵盖结合多肽并由核酸序列所编码的抗体，所述核酸序列为天然产生的人种系免疫球蛋白核酸序列体变体。术语“完全人抗体”包括包含对应人种系免疫球蛋白序列可变和恒定区的抗体，如Kabat等(参见，Kabat等(1991)《免疫学热门蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第5版，美国卫生与公共服务部，NIH公开出版号91-3242)所述。“人抗体”具有这样的氨基酸序列，其对应于人产生的抗体和/或已经使用用于制备人抗体的任何技术制备。人抗体的这一定义特特别排除含有非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom和Winter,1991,J.Mol.Biol.227:381；Marks等,1991,J.Mol.Biol.222:581)和酵母展示文库(Chao等,2006,Nature Protocols 1:755-68)。同样能够用于制备人单克隆抗体的方法述于Cole等,《单克隆抗体和癌症疗法》(Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy)77(1985)；Boerner等,1991,J.Immunol.147(1):86-95；和van Dijk和vande Winkel,2001,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74。人抗体可以通过将抗原给予这样的转基因动物制备，所述转基因动物已经修饰以响应抗原性攻击而产生这类抗体，但是其内源性基因座已经失效，例如，小鼠(参见例如，Jakobovits,1995,Curr.Opin.Biotechnol.6(5):561-66；Brüggemann和Taussing,1997,Curr.Opin.Biotechnol.8(4):455-58；和美国专利号6,075,181和6,150,584，关于XENOMOUSETM技术)。同样参见例如，Li等,2006,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:3557-62，关于经由人B细胞杂交瘤技术生成人抗体。
在某些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以包含“重组人抗体”的部分，其中该短于包括通过重组方法制备、表达、创造或分离的人抗体，诸如使用转染到宿主细胞的重组表达载体表达的抗体，分离自重组、组合人抗体库的抗体，分离自人免疫球蛋白基因转基因和/或转染色体(transchromosomal)动物(例如，小鼠或牛)的抗体(参见例如，Taylor,L.D.等(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)或通过涉及切割人免疫球蛋基因序列成其他DNA序列的任何其他方法制备、表达、创造或分离的抗体。这类重组人抗体可以具有源自人种系免疫球蛋序列的可变或恒定区(参见，Kabat等(1991)《免疫学热门蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第5版，美国卫生与公共服务部，NIH公开出版号91-3242)。然而，在某些实施方式中，这类重组人抗体经历体外诱变(或者，当使用人Ig序列转基因动物，体内体诱变)并因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是虽然衍生自或与人种系VH和VL序列相关，其可能并不天然出现在体内人抗体种系库(repertoire)内的序列。
在某些实施方式中，抗体或抗原结合片段可以包含“单克隆抗体”的部分，其中本文所用的该术语指获自基本均一抗体群体的抗体，例如，除了以少量存在的可能天然发生的突变外，群体包含的单独抗体是相同的，并且各单克隆抗体通常将识别抗原上的单一表位。在具体实施方式中，本文所用“单克隆抗体”是有单一杂交瘤或其它细胞产生的抗体。术语“单克隆”不限于生产抗体的任何特定方法。例如，能够用于本公开的单克隆抗体可以这样制备，通过首先由Kohler等,1975,Nature 256:495所述的杂交瘤方法，或者通过在细菌或真核动物或植物细胞中使用重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)。也可通过例如Clackson等，Nature 352:624-28(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.222:581-97(1991)所述的技术从噬菌体抗体文库中分离“单克隆抗体”。本领域熟知用于制备克隆细胞系和由此表达的单克隆抗体的其它方法，参见例如，《分子生物学简明方案》(ShortProtocols inMolecular Biology)(Ausubel等编著,第5版.2002)。
典型的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)组成的异四聚体糖蛋白。在IgG的情况下，4链单元通常约为150,000道尔顿。每条L链通过一共价二硫键与H链相连，而两条H链根据H链的同种型通过一个或多个二硫键彼此相连。各H链和L链也具有规则间隔的链内二硫桥。各H链具有N末端，可变结构域(VH)，其后为各自为α和γ链的三个恒定结构域(CH)，和μ和ε同种型的四个CH结构域。每条L链在N端具有可变结构域(VL)，在其另一端具有恒定结构域(CL)。VL与VH对齐，CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。某些特定氨基酸残基被认为会形成轻链可变结构域与重链可变结构域之间的界面。VH和VL的配对共同形成一个抗原结合位点。对于不同类型抗体的结构和特性，参见例如，《基础和临床免疫 学》(Basic and Clinical Immunology)71(Stites等编著，第8版1994)；和《免疫学》(Immunobiology)(Janeway等编著,第5版.2001)。
术语“Fab”或“Fab区”指结合抗原的抗体区。常规IgG通常包含两个Fab区，各自位于Y形IgG结构两个臂之一上。各Fab区通常由重链和轻链各自的一个可变区和一个恒定区组成。更具体地，Fab区中重链的可变区和恒定区为VH和CH1区，而Fab区中轻链的可变区和恒定区为VL区和CL区。Fab区中的VH、CH1、VL和CL可以以多种方式排列以赋予根据本公开的抗原结合能力。例如，类似于常规IgG的Fab区，VH和CH1区可以在一个多肽上，而VL和CL区可以在单独的多肽上。或者，VH、CH1、VL和CL区可以在相同的多肽上并以不同的顺序定向，如下文部分更详细地描述。
术语”可变区”、”可变结构域”、“V区域”或“V结构域”指通常位于轻链或重链的氨基末端且在重链中长度为约120-130个氨基酸和在轻链中长度为约100-110个氨基酸抗体轻链或重链的部分，并且用于各特定抗体与其特定抗原的特异性和结合。重链的可变区可以称之为“VH”。轻链的可变区可以称之为“VL”。术语“可变”指可变区的某些区段在序列上在抗体间广泛变化的事实。V区介导抗原结合并定义特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性在可变区的110个氨基酸范围内并不是均匀分布的。相反，V区由称之为框架区(FR)的约15-30个氨基酸的较少可变的(例如，相对稳定的)的延伸组成，这些延伸被称之为“超变区”长度各为9-12个氨基酸具有较大可变性(例如，极致可变性)的较短区域分隔。重链和轻链的可变结构域各包含四个FR区，主要采用β折叠构型，通过三个超变区相连，形成环间连接，并在某些情况下形成β折叠结构的部分。各链中的超变区被FR聚集在一起，紧密相邻，与另一条链的超变区一起形成抗体的抗原结合位点(参见例如，Kabat等,《免疫学感兴趣的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)(第5版1991))。恒定区并不直接参与抗体与抗原的结合，但是展现出各种效应物功能，诸如使抗体参与抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。不同抗体之间的可变区在序列上有很大差异。在具体实施方式中，可变区是人可变区。
术语根据“Kabat编号的可变区残基”或“根据Kabat编号的氨基酸位置”及其变化形式指用于Kabat等,引用如上中抗体汇编的重链可变区或轻链可变区的编码***。使用该编号***，实际的线性氨基酸序列可包含更少或额外的氨基酸，对应可变域FR或CDR的缩短或***。例如，重链可变结构域可包括残基52之后的单个氨基酸***物(根据Kabat为残基52a)和在残基82之后的3个***的残基(例如，根据Kabat为残基82a、82b和82c等)。可以通过在抗体序列的同源区域与“标准”Kabat编号序列进行比对来确定给定抗体的残基Kabat编号。当表示可变结构域中的残基时，通常使用Kabat编号***(大约为轻链的残基1-107和重链的残基1-113)(例如，Kabat等,引用如上)。当表示免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用"EU编号***"或"EU索引"(例如，如Kabat等,引用如上中报道的EU索引)。“Kabat中的EU索引”指IgG 1EU抗体的残基编号。已经描述了其它编号***，例如，通过AbM、Chothia、Contact、IMGT和AHon。
术语”重链”当参照抗体使用时指约50-70kDa的多肽链，其中氨基末端部分包含约120-130或更多个氨基酸的可变区，而羧基末端部分包含恒定区。恒定区可以是5个不同类型(例如，同种型)之一，基于重链恒定区的氨基酸序列，称之为α、δ、ε、γ和μ。不同重链的大小不同：α、δ和γ包含大约450个氨基酸，而μ和ε包含大约550个氨基酸。当与轻链组合时，这些不同类型的重链产生5个熟知类型(例如，同种型)的抗体，分别为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，包含4个亚型IgG，即IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
术语“轻链”当参照抗体使用时指约25kDa的多肽链，其中氨基末端部分包含约100-约110或更多个氨基酸的可变区，而羧基末端部分包含恒定区。轻链的大致长度为211-217个氨基酸。存在两种不同的类型，基于恒定结构域的氨基酸序列，称为κ或λ。
如本文所用，术语“高变区”、“HVR”、“互补决定区”和“CDR”可互换使用。“CDR”指免疫球蛋白(Ig或抗体)VHβ-折叠框架的非框架区内的三个高变区(H1、H2或H3)之一，或抗体VLβ-折叠框架的非框架区域内的三个高变区(L1、L2或L3)之一。因此，CDR是散布在构架区序列内的可变区序列。
CDR区是本领域技术人员众所周知的并且已经由众所周知的编号***定义。例如，Kabat互补决定区(CDR)基于序列变异性并且是最常用的(参见例如，Kabat等，同上)。Chothia指的则是结构环的位置(参见例如，Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-17)。取决于环的长度，当使用Kabat编号方法时，Chothia CDR-H1环的末端在H32和H34之间变化(这是因为Kabat编号方案将***置于H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，那么环在32结束；如果仅存在35A，那么环在33结束；如果同时存在35A和35B，那么环在34结束)。AbM超变区表示Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷，并且被牛津分子科技公司(OxfordMolecular)的AbM抗体建模软件所使用(参见例如，《抗体工程改造》(Antibody Engineering)第2卷(Kontermann和Dübel编著，第2版2010))。“Contact”超变区基于可变复合物晶体结构的分析。已经开发并广泛采用了另一通用编号***ImMunoGeneTics(IMGT)Information
Figure BDA0003592694230000212
(Lafranc等,2003,Dev.Comp.Immunol.27(1):55-77)。IMGT是专供人类和其他脊椎动物的免疫球蛋(IG)、T细胞受体(TCR)和主要组织相容复合物(MHC)的整合信息***。因此，就氨基酸序列和轻链或重链内的位置表示CDR。由于免疫球蛋白可变域结构内CDR的“位置”在物种之间是保守的并且存在于称为环的结构中，因此通过使用根据结构特征比对可变域序列的编号***，很容易识别CDR和框架残基。该信息可以用于移植或替换来自一个物种的免疫球蛋白的CDR残基到受体框架，其通常来自人抗体。Honegger和Plückthun,2001,J.Mol.Biol.309:657-70已经开发了额外的编号***(AHon)。编号***包括，例如，Kabat编号和IMGT独特编号***，之间的对应关系为本领域技术人员所熟知(参见例如，Kabat,引用如上；Chothia和Lesk,引用如上；Martin,引用如上；Lefranc等,引用如上)。来自这些高变区或CDR各自的残基如表1所述
表1
Figure BDA0003592694230000211
Figure BDA0003592694230000221
给定CDR的边界可以变化，取决于用于识别的方案。因此，除非另有说明，给定抗体或其区域的术语“CDR”和“互补决定区”，例如可变区，以及抗体或其区域的单个CDR(例如，“CDR-H1、CDR-H2)”应理解为包括如上文所述的任何已知方案所定义的互补决定区。在一些情况中，指定用于识别一个或多个特定CDR的方案，例如由Kabat、Chothia或Contact方法定义的CDR。在其他情况中，给定CDR的特定氨基酸序列。
超变区可以包含如下“延伸的超变区”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，和VH中的26-35或26-35A(H1)、50-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。
术语“恒定区”或“恒定结构域”指不直接参与抗体与抗原的结合但是展现出各种效应物功能，诸如与Fc受体相互作用的轻链和重链的羧基末端部分。该术语是指免疫球蛋白分子的部分，其包含相对于免疫球蛋白的其他部分(可变区)更保守的氨基酸序列，其包含抗原结合位点。恒定区可包含重链的CH1、CH2和CH3区和轻链的CL区。
术语“框架”或“FR”指侧接CDR的那些可变区残基。例如，FR残基存在于嵌合、人源化、人、结构域抗体、双抗体、线性抗体和双特异性抗体。FR残基是除了超变区残基或CDR残基之外的那些可变结构域残基。
如本文所用术语“Fc区”定义了免疫球蛋白重链的C-末端区域，包括例如，天然序列Fc区，重组Fc区域和变体Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可能会有所不同，但人IgG重链Fc区通常定义为从Cys226位置的氨基酸残基或从Pro230延伸到其羧基末端。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号***的残基447)可以被去除，例如，在抗体的生产或纯化过程中，或通过重组工程改造编码抗体重链的核酸。因此，完整抗体的组合物可包含去除了所有K447残基的抗体群，去除了K447残基的抗体群，和包含具有和不具有K447残基的抗体混合物的抗体群。功能性“Fc区”具有天然序列Fc区的“效应功能”。示例性的“效应功能”包括C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；吞噬作用；下调细胞表面受体(例如，B细胞受体)等。这类效应功能通常需要令Fc区与结合区或结合结构域(例如，抗体可变区或结构域)结合，并且可以使用本领域技术人员已知的各种试验进行评估。变体“Fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰(例如，取代、添加或缺失)而与天然序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。在某些实施方式中，变体Fc区相比天然序列Fc区或相比亲本多肽的Fc区有至少一处氨基酸取代，例如天然序列Fc区或亲本多肽Fc区中约1至约10处氨基酸取代，或约1至约5处氨基酸取代。本文的变体Fc区可与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区具有至少约80％的同源性，或与其至少约90％的同源性，例如，与其至少约95％的同源性。
如本文所用，“表位”是本领域中的术语并且指结合分子(例如，抗体)可以特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是线性表位或构象、非线性或不连续表位。例如，在多肽抗原的情况下，表位可以是多肽的连续氨基酸(“线性”表位)或者表位可以包含来自多肽的两个或更多个非连续区域的氨基酸(“构象”、“非线性”或“不连续”表位)。本领域技术人员将理解的是，一般而言，线性表位可能依赖于或不依赖于二级、三级或四级结构。例如，在一些实施方式中，结合分子与氨基酸组结合，无论它们是否在天然三维蛋白质结构中折叠。在其他实施方式中，结合分子需要构成表位的氨基酸残基以显示特定构象(例如，弯曲、扭曲、转弯或折叠)，从而识别和结合表位。
术语“多肽”和“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用并指代任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性或支化聚合物，可以包含经修饰的氨基酸，并且可间插有非氨基酸。该术语也包括已经天然或通过干预修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰。定义中还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物的多肽，包括但不限于非天然氨基酸，以及本领域已知的其他修饰。应当理解的是，因为本公开的多肽可以基于抗体或免疫球蛋白超家族的其他成员，所以在某些实施方式中，“多肽”可以作为单链或作为两个或更多个相关链出现。
本文所用术语“药学上可接受的”表示经联邦或州政府管理机构批准，或《美国药 典》(United States Pharmacopeia)、《欧洲药典》(European Pharmacopeia)或其它公认药典所列用于动物应用，更具体用于人。
“赋形剂”意指药学上可接受的物质材料、组合物或载剂，例如液体或固体填充剂、稀释剂、溶剂或包封材料。例如，赋形剂包括：包封材料或添加剂，如吸收促进剂、抗氧化剂、结合剂、缓冲剂、运载体、涂覆剂、着色剂、稀释剂、崩解剂、乳化剂、增量剂、填充剂、调味剂、湿润剂、润滑剂、香料、防腐剂、推进剂、释放剂、杀菌剂、甜味剂、增溶剂、润湿剂及其混合物。术语“赋形剂”还可指稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全或不完全)或载剂。
在一个实施方式中，每种组分在与药物制剂的其他成分相容的意义上是“药学上可接受的”，并且适合与人和动物的组织或器官接触而没有过度的毒性、刺激性、过敏反应、免疫原性或其他问题或并发症，与合理的获益/风险比相称。例如，Lippincott Williams&Wilkins：宾夕法尼亚州费城，2005；《药物赋形剂手册》(Handbook of PharmaceuticalExcipients)，第6版；Rowe等编，药学出版社和美国药学会(The Pharmaceutical Pressand the American Pharmaceutical Association)：2009：《药物添加剂手册》(Handbookof Pharmaceutical Additives)，第3版；Ash和Ash编著，高尔出版公司(Gower PublishingCompany)：2007；《药物预制剂和制剂》(Pharmaceutical Preformulation andFormulation)，第2版，Gibson编，CRC出版有限公司(CRC Press LLC)：佛罗里达州博卡拉顿，2009)。在一些实施方式中，药学上可接受的赋形剂对以所用剂量和浓度暴露于的细胞或哺乳动物没有毒性。在一些实施方案中，药学上可接受的赋形剂是pH缓冲水溶液。
缩写“MMAE”是指单甲基奥瑞他汀E。
除非另有说明，术语“烷基”指包含约1至约20个碳原子(以及其中碳原子的特定数量和范围的所有组合和亚组合)的饱和直链或支链烃，其中约1至约8个碳原子是优选的。烷基的示例是甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，正戊基，2-戊基，3-戊基，2-甲基-2-丁基，正己基，正庚基，正辛基，正壬基，正癸基，3-甲基-2-丁基，3-甲基-1-丁基，2-甲基-1-丁基，1-己基，2-己基，3-己基，2-甲基-2-戊基，3-甲基-2-戊基，4-甲基-2-戊基，3-甲基-3-戊基，2-甲基-3-戊基，2,3-二甲基-2-丁基和3,3-二甲基-2-丁基。烷基，无论是单独的还是作为另一基团的部分，可以任选地被一个或多个基团取代，优选地1至3个基团(以及选自卤素的任何其它取代基)，包括但不限于：-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R’，-OC(O)R’，-C(O)OR’，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-SR’，-SO3R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，＝O，-N3，-NH2，-NH(R’)，-N(R’)2和-CN，其中各R’独立地选自-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基，并且其中所述-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基和C2-C8炔基基团可以任选地被一个或多个基团取代，包括但不限于：-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R”，-OC(O)R”，-C(O)OR”，-C(O)NH2，-C(O)NHR”，-C(O)N(R”)2，-NHC(O)R”，-SR”，-SO3R”，-S(O)2R”，-S(O)R”，-OH，-N3，-NH2，-NH(R”)，-N(R”)2和-CN，其中各R”独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或芳基。
除非另有说明，术语“烯基”和“炔基”指包含约2至约20个碳原子的直链和支链碳链(以及其中碳原子的特定数量和范围的所有组合和亚组合)，其中优选约2至约8个碳原子。烯基链在链中具有至少一个双键，而炔基链在链中具有至少一个三键。烯基的示例包括但不限于：乙烯或乙烯基，烯丙基，-1-丁烯基，-2-丁烯基，-异丁烯基，-1-戊烯基，-2-戊烯基，-3-甲基-1-丁烯基，-2-甲基-2-丁烯基和-2,3-二甲基-2-丁烯基。炔基的示例包括但不限于：乙炔基，炔丙基，乙炔基，丙炔基，-1-丁炔基，-2-丁炔基，-1-戊炔基，-2-戊炔基，和-3-甲基-1丁炔基。烯基和炔基基团，无论是单独的还是作为另一基团的部分，可以任选地被一个或多个基团取代，优选1至3个基团(以及选自卤素的任何其它取代基)，包括但不限于：-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R’，-OC(O)R’，-C(O)OR’，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-SR’，-SO3R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，＝O，-N3，-NH2，-NH(R')，-N(R’)2和-CN，其中各R’独立地选自-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基(alkyenl)，-C2-C8炔基或-芳基，并且其中所述-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基和-C2-C8炔基基团可以任选地被一个或多个取代基取代，包括但不限于：-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2C8炔基)，-芳基，-C(O)R”，-OC(O)R”，-C(O)OR”，-C(O)NH2，-C(O)NHR”，-C(O)N(R”)2，-NHC(O)R”，-SR”，-SO3R”，-S(O)2R”，-S(O)R”，-OH，-N3，-NH2，-NH(R”)，-N(R”)2和-CN，其中各R”独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基。
除非另有说明，术语“亚烷基”指包含约1至约20个碳原子(以及其中碳原子的特定数量和范围的所有组合和亚组合)的饱和直链或支链烃基基团，其中约1至约8个碳原子是优选的，并且具有通过从亲本烷烃的相同或两个不同的碳原子去除两个氢原子而衍生的两个单价基团中心。典型的亚烷基包括但不限于：亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、壬基、癸烯、1,4-亚环己基等。烯基，无论是单独的还是作为另一基团的部分，可以任选地被一个或多个基团取代，优选地1至3个基团(以及选自卤素的任何其它取代基)，包括但不限于：-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R’，-OC(O)R’，-C(O)OR’，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-SR’，-SO3R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，＝O，-N3，-NH2，-NH(R’)，-N(R’)2和-CN，其中各R’独立地选自-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基，并且其中所述-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基和C2-C8炔基基团可以任选地被一个或多个取代基取代，包括但不限于：-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R”，-OC(O)R”，-C(O)OR”，-C(O)NH2，-C(O)NHR”，-C(O)N(R”)2，-NHC(O)R”，-SR”，-SO3R”，-S(O)2R”，-S(O)R”，-OH，-N3，-NH2，-NH(R”)，-N(R”)2和-CN，其中各R”独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或芳基。
除非另有说明，否则术语“亚烯基”指含有至少一个碳-碳双键的任选取代的亚烷基。示例性的亚烯基包括例如亚乙烯基(-CH＝CH-)和亚丙烯基(-CH＝CHCH2-)。
除非另有说明，否则术语“亚炔基”指含有至少一个碳-碳三键的任选取代的亚烷基。示例性的亚炔基包括，例如，乙炔(-C≡C-)，炔丙基(-CH2C≡C-)和4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡CH-)。
除非另有说明，否则术语“芳基”指通过由亲本芳香族环***的单个碳源自除去一个氢原子而衍生的具有6-20个碳原子(以及其中碳原子的特定数量和范围的所有组合和亚组合)的单价芳香族烃基基团。某些芳基以示例性的结构“Ar”表示。典型的芳基包括但不限于衍生自苯、经取代的苯、苯基、萘、蒽、联苯基等的基团。
芳基，无论是单独的还是作为另一基团的部分，可以任选地被一个或多个，优选1至5个，甚至1至2个基团取代，包括但不限于-卤素，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R’，-OC(O)R’，-C(O)OR’，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-SR’，-SO3R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，-NO2，-N3，-NH2，-NH(R’)，-N(R’)2和-CN，其中各R’独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基，并且其中所述-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)和-芳基基团进一步任选地被一个或多个取代基取代，包括但不限于：-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R”，-OC(O)R”，-C(O)OR”，-C(O)NH2，-C(O)NHR”，-C(O)N(R”)2，-NHC(O)R”，-SR”，-SO3R”，-S(O)2R”，-S(O)R”，-OH，-N3，-NH2，-NH(R”)，-N(R”)2和-CN，其中各R”独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基。
除非另有说明，否则术语“亚芳基”指任选取代的二价芳基(即通过由亲本芳香族环***的相同或两个不同碳原子去除两个氢原子而衍生)并且可以为如下述结构所示的邻位、间位或对位构型，其中苯基作为示例性芳基。
Figure BDA0003592694230000261
典型的“-(C1-C8亚烷基)芳基”、“-(C2-C8亚烯基)芳基”、“和-(C2-C8亚炔基)芳基”基团包括但不限于苄基，2-苯基乙烷-1-基，2-苯基乙烯-1-基，萘基甲基，2-萘基乙烷-1-基，2-萘基乙烯-1-基，萘酚苄基，2-萘酚苯基乙烷-1-基等。
除非另有说明，术语“杂环”指具有3至14个环原子(也称为环成员)的单环、双环或多环环***，其中至少一个环中的至少一个环原子是选自N、O、P或S的杂原子(和其中的碳原子和杂原子的范围和特定数目的所有组合和亚组合)。杂环可具有1至4个独立地选自N、O、P或S的环杂原子。杂环中的一个或多个N、C或S原子可被氧化。单环杂环优选具有3至7个环成员(例如，2至6个碳原子和1至3个独立地选自N、O、P或S的杂原子)，而双环杂环优选具有5至10个环成员(例如，4至9个碳原子和1至3个独立地选自N、O、P或S的杂原子)。包含杂原子的环可以是芳香族或非芳香族的。除非另有说明，否则杂环在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其附属基团相连。杂环述于Paquette,"《现代杂环化学原则》(Principles of Modern Heterocyclic Chemistry)"(W.A.Benjamin,纽约,1968)，特别是第1、3、4、6、7和9章；"《杂环化合物的化学，系列专著》(The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs)"(约翰威利父子公司(John Wiley&Sons,Inc.),纽约,1950至今)，特别是第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.82:5566(1960)。“杂环”基团的示例包括例如但不限于：吡啶基、二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、噻唑基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻吩基、吲哚基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氢呋喃基、双-四氢呋喃基、四氢吡喃基、双-四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、偶氮基、三嗪基、6H-1,2,5-噻二嗪基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻吨基、吡喃基、异苯并呋喃基、色烯基、呫吨基、苯氧噻吩基、2H-吡咯基、异噻唑基、异噻唑基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚嗪基、异吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹啉基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、肉桂基、蝶啶基、4H-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、呋喃基、吩恶嗪基、异色满基、色满基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、奎宁环基、吗啉基、恶唑烷基、苯并***基、苯并异恶唑基(benzisoxazolyl)、羟吲哚基(oxindolyl)、苯并恶唑啉基(benzoxazolinyl)和靛红酰基(isatinoyl)。优选的“杂环”基团包括但不限于：苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、异喹啉基、吡咯基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、***基、喹啉基、嘧啶基吡啶基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、异噻唑基、异噁唑基和四唑基。杂环基团，无论是单独的还是作为另一基团的部分，可以任选地被一个或多个基团取代，优选1至2个基团，包括但不限于：-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R’，-OC(O)R’，-C(O)OR’，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-SR’，-SO3R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，-N3，-NH2，-NH(R’)，-N(R’)2和-CN，其中各R’独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基，并且其中所示-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基和-芳基基团可以进一步任选地被一个或多个取代基取代，包括但不限于：-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R”，-OC(O)R”，-C(O)OR”，-C(O)NH2，-C(O)NHR”，-C(O)N(R”)2，-NHC(O)R”，-SR”，-SO3R”，-S(O)2R”，-S(O)R”，-OH，-N3，-NH2，-NH(R”)，-N(R”)2和-CN，其中各R”独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或芳基。
出于示例而非限制，碳键合的杂环可以键合在以下位置：吡啶的2、3、4、5或6位；哒嗪的3、4、5或6位；嘧啶的2、4、5或6位；吡嗪的2、3、5或6位；呋喃、四氢呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位；异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位；氮杂环丙烷的2或3位；氮杂环丁烷的2、3或4位；喹啉的第2、3、4、5、6、7或8位；或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。更典型地，碳键合的杂环包括：2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、6-哒嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
作为示例而非限制，氮键合的杂环可以键合在氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚或1H-吲唑的1位；异吲哚或异吲哚啉的2位；吗啉的4位；和咔唑或β-咔啉的9位。更典型地的是，氮键合的杂环包括：1-氮丙啶基(aziridyl)，1-氮杂环丁烷基(azetedyl)，1-吡咯基，1-咪唑基，1-吡唑基和1-哌啶基。
除非另有说明，术语“碳环”指具有3至14个环原子(以及其中碳原子的特定数量和范围的所有组合和亚组合)的饱和或不饱和的非芳香族单环、双环或多环***，其中所有环原子都是碳原子。单环碳环优选具有3至6个环原子，更优选具有5或6个环原子。双环碳环优选具有7至12个环原子，例如，排列为双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]***，或9或10个环原子排列为双环[5,6]或[6,6]***。例如，术语“碳环”包括与芳环融合的单环碳环(例如，与苯环融合的单环碳环)。碳环优选具有3至8个碳环原子。碳环基团，无论是单独的还是作为另一基团的部分，可以任选地被例如一个或多个基团，优选1或2个基团(以及选自卤素的任何其它取代基)取代，包括但不限于：-卤素，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R’，-OC(O)R’，-C(O)OR’，-C(O)NH2，-C(O)NHR’，-C(O)N(R’)2，-NHC(O)R’，-SR’，-SO3R’，-S(O)2R’，-S(O)R’，-OH，＝O，-N3，-NH2，-NH(R’)，-N(R’)2和-CN，其中各R’独立地选自：-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基，并且其中所述-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)和-芳基基团可以进一步任选地被一个或多个取代基取代，包括但不限于：-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基，-卤素，-O-(C1-C8烷基)，-O-(C2-C8烯基)，-O-(C2-C8炔基)，-芳基，-C(O)R”，-OC(O)R”，-C(O)OR”，-C(O)NH2，-C(O)NHR”，-C(O)N(R”)2，-NHC(O)R”，-SR”，-SO3R”，-S(O)2R”，-S(O)R”，-OH，-N3，-NH2，-NH(R”)，-N(R”)2和-CN，其中各R”是独立地选自-H，-C1-C8烷基，-C2-C8烯基，-C2-C8炔基或-芳基。
单环碳环取代基的示例包括：-环丙基、-环丁基、-环戊基、-1-环戊-1-烯基、-1-环戊-2-烯基、-1-环戊-3-烯基、环己基、-1-环己-1-烯基、-1-环己-2-烯基、-1-环己-3-烯基、-环庚基、-环辛基-1,3-环己二烯基、-1,4-环己二烯基、-1,3-环庚二烯基、-1,3,5-环庚三烯基和-环辛二烯基。
“碳环”，无论是单独使用还是作为另一基团的部分使用，指如上定义的为二价的任选取代的碳环基团(即通过从亲本碳环***相同或两个不同的碳原子去除两个氢原子而衍生)。
除非上下文另有说明，连字符(-)表示连接附属分子的点。因此，术语“-(C1-C8亚烷基)芳基”或“-C1-C8亚烷基(芳基)”指如本文所定义的C1-C8亚烷基基团，其中该亚烷基基团连接到亚烷基基团的任何碳原子处的附属分子，并且与亚烷基基团的碳原子键合的氢原子之一被如本文定义的芳基基团取代。
当特定基团被“取代”时，该基团可具有一个或多个取代基，优选1到5个取代基，更优选1到3个取代基，最优选1到2个取代基，其独立地选自取代基列表。然而，该基团通常可以具有任意数量的选自卤素的取代基。被取代的基团如此表示。这是旨在使分子中特定位置处的任何取代基或变量的定义独立于其在该分子中别处的定义。可以理解的是，本发明化合物的取代基和取代方式可以由本领域普通技术人员选择，以提供化学上稳定并且可以容易地通过本领域已知技术以及本文下述那些方法容易合成的化合物。
本文所用保护基团指选择性地(暂时或永久)封闭多官能化合物中的一个反应位点的基团。用于本发明的合适的羟基保护基团是药学上可接受的，并且在给予对象后可能需要或可能不需要从亲本化合物裂解以使化合物具有活性。裂解是通过体内正常的代谢过程进行的。羟基保护基团为本领域所熟知，参见，T.W.Greene a和P.G.M.Wuts的《有机合成 中的保护基团》(约翰韦利父子公司，第3版)，通过引用以其全部内容纳入本文并用于所有目的，并且其包括，例如、醚(例如，烷基醚和甲硅烷基醚，包括例如二烷基甲硅烷基醚、三烷基甲硅烷基醚、二烷基烷氧基甲硅烷基醚)、酯、碳酸酯、氨基甲酸酯、磺酸酯和磷酸酯保护基团。羟基保护基团的示例包括但不限于：甲基醚；甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(苯基二甲基甲硅烷基)甲氧基甲基醚、苄氧基甲基醚、对甲氧基苄氧基甲基醚、对硝基苄氧基甲基醚、邻硝基苄氧基甲基醚、(4-甲氧基苯氧基)甲基醚、愈创木酚甲基醚(guaiacolmethylether)、叔丁氧基甲基醚、4-戊烯氧基甲基醚、甲硅烷氧基甲基醚、2-甲氧基乙氧基甲基醚、2,2,2-三氯乙氧基甲基醚、双(2-氯乙氧基)甲基醚、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚、薄荷氧基甲基醚(menthoxymethyl ether)、四氢吡喃基醚、1-甲氧基环己基醚、4-甲氧基四氢噻喃基醚,4-甲氧基四氢噻喃醚S,S-二氧化物、1-[(2-氯代-4-甲基)苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基醚、1-(2-氟代苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基醚、1-(2-氟代苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基醚、1,4-二噁烷-2-基醚、四氢呋喃基醚、四氢硫代呋喃基醚；经取代的***，如1-乙氧基***、1-(2-氯代乙氧基)***、1-[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]***、1-甲基-1-甲氧基***、1-甲基-1-苄氧基***、1-甲基-1-苄氧基-2-氟代乙基醚、1-甲基-1苯氧基乙基醚、2-三甲基甲硅烷基醚、叔丁基醚、烯丙基醚、炔丙基醚、对氯苯基醚、对甲氧基苯基醚、苄基醚、对甲氧基苄基醚3,4-二甲氧基苄基醚、三甲基甲硅烷基醚、三乙基甲硅烷基醚、三丙基甲硅烷基醚、二甲基异丙基甲硅烷基醚、二乙基异丙基甲硅烷基醚、二甲基己基甲硅烷基醚、叔丁基二甲基甲硅烷基醚、二苯基甲基甲硅烷基醚、苯甲酰甲酸酯、乙酸酯、氯乙酸酯、二氯乙酸酯、三氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯甲氧基乙酸酯,苯乙酸酯、苯甲酸酯、碳酸烷基甲酯、9-芴甲基碳酸烷基酯、碳酸烷基乙酯、碳酸烷基2,2,2,-三氯乙基碳酸酯、1,1,-二甲基-2,2,2-三氯乙基碳酸酯、烷基磺酸盐、甲磺酸盐、苄基磺酸盐、甲苯磺酸盐、亚甲基缩醛、亚乙基缩醛和叔丁基亚甲基缩酮。通过下式表示优选的保护基团：-Ra，-Si(Ra)(Ra)(Ra)，-C(O)Ra，-C(O)ORa，-C(O)NH(Ra)，-S(O)2Ra，-S(O)2OH，P(O)(OH)2和-P(O)(OH)ORa，其中Ra是C1-C20烷基、C2-C20烯基、C2-C20炔基、-C1-C20亚烷基(碳环)、-C2-C20亚烯基(碳环)、-C2-C20亚炔基(碳环)、-C6-C10芳基、-C1-C20亚烷基(芳基)、-C2-C20亚烯基(芳基)、-C2-C20亚炔基(芳基)、-C1-C20亚烷基(杂环)、-C2-C20亚烯基(杂环)或-C2-C20亚炔基(杂环)，其中所述烷基、烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、芳基、碳环和杂环基团无论是单独的还是作为另一基团的部分被任选地取代。
术语“化疗剂”是指有效抑制肿瘤生长的所有化学化合物。化疗剂的非限制性示例包括烷基化剂；例如，氮芥、乙烯亚胺化合物和烷基磺酸盐；抗代谢药，例如叶酸、嘌呤或嘧啶拮抗剂；有丝***抑制剂，例如抗微管蛋白药物，如长春花生物碱、奥瑞他汀和鬼臼毒素衍生物；细胞毒性抗生素；破坏或干扰DNA表达或复制的化合物，例如，DNA小沟结合剂；和生长因子受体拮抗剂。此外，化疗剂包括细胞毒性剂(如本文所定义)、抗体、生物分子和小分子。
术语“化合物”指并包含化合物本身，以及无论是否明确说明或除非上下文明确说明以下内容不包括在内的：化合物的无定形和结晶形式，包括多晶形式，其中这些形式可能是混合物的一部分或分离存在；化合物的游离酸和游离碱形式，通常为本文提供的结构中所示的形式；化合物的异构体，指光学异构体和互变异构体，其中光学异构体包括对映体和非对映体、手性异构体和非手性异构体，且光学异构体包括分离的光学异构体以及光学异构体的混合物，包括外消旋和非外消旋混合物；其中异构体可能是分离的形式，或与一种或多种其他异构体的混合物；化合物的同位素，包括含氘和氚的化合物，以及含放射性同位素的化合物，包括治疗和诊断有效的放射性同位素；该化合物的多聚体形式，包括二聚体、三聚体等形式；该化合物的盐，优选医药上可接受的盐，包括酸加成盐和碱加成盐，包括具有有机抗衡离子和无机抗衡离子的盐，并且包括两性离子形式，其中如果一种化合物与两个或更多个抗衡离子缔合，则这两个或更多个抗衡离子可以相同或不同；以及该化合物的溶剂化物，包括半溶剂化物、单溶剂化物、双溶剂化物等，包括有机溶剂化物和无机溶剂化物，所述无机溶剂化物包括水合物；其中，如果一种化合物与两个或更多个溶剂分子缔合，则这两个或更多个溶剂分子可能相同或不同。在一些情况下，本文对本发明化合物的引用将包括对上述一种或多种形式的明确引用，例如盐和/或溶剂化物；然而，该引用仅用于强调，不得解释为排除上述其他形式。
如本文所用，术语“保守取代”是指本领域技术人员已知的通常可以在不改变所得分子的生物学活性的情况下进行的氨基酸取代。本领域技术人员认识到，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代基本上不改变生物学活性(参见例如,Watson,等,《基因的分子生物学》(MOLECULAR BIOLOGY OF THE GENE),本杰明·卡明斯出版公司(TheBenjamin/Cummings Pub.Co.),第224页(1987年第4版))。这种示例性取代优选根据表2和表3中列出的那些进行。例如，这种变化包括用异亮氨酸(I)、缬氨酸(V)和亮氨酸(L)中的任何一个取代任何其他这些疏水性氨基酸；天冬氨酸(D)取代谷氨酸(E)，反之亦然；谷氨酰胺(Q)取代天冬酰胺(N)，反之亦然；和丝氨酸(S)取代苏氨酸(T)，反之亦然。其他取代也可以被认为是保守的，这取决于特定氨基酸的环境及其在蛋白质三维结构中的作用。例如，甘氨酸(G)和丙氨酸(A)经常可以互换，丙氨酸(A)和缬氨酸(V)也可以互换。甲硫氨酸(M)是相对疏水的，经常可以与亮氨酸和异亮氨酸互换，有时与缬氨酸互换。赖氨酸(K)和精氨酸(R)经常可以互换位置，其中氨基酸残基的重要特征是其电荷，这两个氨基酸残基的pK值不同并不重要。在特定环境中还可以认为其他变化是“保守的”(参见例如，本文的表III；第13-15页“生物化学”(“Biochemistry”)第2版.Lubert Stryer编(斯坦福大学)；Henikoff等,PNAS1992第89卷第10915-10919页；Lei等,J Biol Chem 1995年5月19日；270(20):11882-11886)。其他取代也是允许的，并且可以根据经验或根据已知的保守取代来确定。
表2：氨基酸缩写。
单字母 三字母 全称
F Phe 苯丙氨酸
L Leu 亮氨酸
S Ser 丝氨酸
Y Tyr 酪氨酸
C Cys 半胱氨酸
W Trp 色氨酸
P Pro 脯氨酸
H His 组氨酸
Q Gln 谷氨酰胺
R Arg 精氨酸
I Ile 异亮氨酸
M Met 甲硫氨酸
T Thr 苏氨酸
N Asn 天冬酰胺
K Lys 赖氨酸
V Val 缬氨酸
A Ala 丙氨酸
D Asp 天冬氨酸
E Glu 谷氨酸
G Gly 甘氨酸
表3：氨基酸取代或相似性矩阵
改编自GCG软件9.0BLOSUM62氨基酸取代矩阵(区块替代矩阵)。值越高，在相关的天然蛋白质中发现取代的可能性越大。
Figure BDA0003592694230000331
术语“同源性”或“同源的”指两条多核苷酸之间或两条多肽之间的序列相似性。相似性可以通过比较每条序列中的一个位置来确定，为了进行比较，可以将其进行比对。如果两条多肽序列的给定位置不相同，可通过评估该位置的氨基酸相似性来确定该位置的相似性或保守性，例如，根据表3。序列之间的相似性程度是序列所共享的匹配或同源位置数量的函数。比对两条序列以确定其序列相似性百分数可以使用本领域已知的软件程序来完成，例如，Ausubel等,《新编分子生物学实验指南》(Current Protocols in Molecular Biology),约翰韦利父子公司(John Wiley&Sons),巴尔的摩，MD(1999))中描述的软件程序。优选地，默认参数用于比对，其示例如下所述。本领域已知的一个比对程序是BLAST，设置为默认参数。特别是，程序是BLASTN和BLASTP，使用以下默认参数：遗传代码＝标准；过滤器＝无；链＝两条；截留值＝60；期望值＝10；矩阵＝BLOSUM62；描述＝50个序列；排序方式＝HIGH SCORE；数据库＝非冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS翻译+SwissProtein+SPupdate+PIR。这些程序的详细信息可以在国家生物技术信息中心找到。
与给定氨基酸序列或核酸序列对应的术语“同源物”旨在表示“同源物”的对应序列与给定氨基酸序列或核酸序列具有实质相同性或同源性。
可采用数学算法实现确定两条序列(例如，氨基酸序列或核酸序列)之间的百分比相同性。用于比较两个序列的数学算法的优选的非限制性示例是Karlin和Altschul,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87:2264 2268的算法，如Karlin和Altschul,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:5873 5877中的修改。所述算法整合在Altschul等，1990,J.Mol.Biol.215:403的NBLAST和XBLAST程序中。可以用NBLAST核苷酸程序参数集进行BLAST核苷酸搜索，例如，对于得分＝100，字长＝12，以获得与本文所述核酸分子同源的核苷酸序列。可以用XBLAST程序参数集进行BLAST蛋白质搜索，例如，得分50，字长＝3，以获得与本文所述蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得出于比较目的的缺口比对结果，可以如Altschul等,1997,Nucleic Acids Res.25:3389 3402所述利用带缺口BLAST。或者，使用PSI-BLAST以进行迭代搜索，其检测分子之间的远近关系(见上)。利用BLAST、带缺口BLAST和PSI-Blast程序时，可以使用各程序(如XBLAST和NBLAST)的默认参数(参见例如，国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information(NCBI))互联网，ncbi.nlm.nih.gov)。用于比较序列的数学算法的另一个优选的非限制性示例是Myers和Miller，1988,CABIOS 4:11 17的算法。这样的算法被并入ALIGN程序(版本2.0)，其是GCG序列比对软件包的一部分。当利用ALIGN程序比较氨基酸序列时，使用PAM120加权残基表，可使用空位长度罚分为12，空位罚分为4。
两条序列间的百分比相同性可以使用与上述技术相似的技术确定，在允许缺口的情况下或不允许的情况下。在计算百分比相同性时，通常只考虑精确匹配。
术语“细胞毒性剂”指的是抑制或阻止细胞表达活性、细胞功能和/或导致细胞破坏的物质。该术语旨在包括放射性同位素、化疗剂和毒素，例如细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或小分子毒素，包括其片段和/或变体。示范性细胞毒性剂包括但不限于：奥瑞他汀(例如奥瑞他汀E、奥瑞他汀F、MMAE和MMAF)、金霉素(auromycin)、美登木素生物碱、蓖麻蛋白、蓖麻蛋白A链、康普瑞汀、多卡霉素、尾海兔素、柔红霉素、阿霉素、紫杉醇、顺铂、cc1065、溴乙锭、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、二羟蒽醌、放线菌素、白喉毒素、假单胞菌外毒素(PE)A、PE40、相思豆毒蛋白、相思豆毒蛋白A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲菌素、白树毒素、***毒素、局限曲菌素、酚霉素、依诺霉素、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、卡奇霉素、肥皂草(Sapaonaria officinalis)抑制剂和糖皮质激素以及其它化疗剂，和放射性同位素，例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212或213、P32和Lu的放射性同位素包括Lu177。抗体也可以与能够将前药转化为其活性形式的抗癌前药活化酶偶联。
如本文所用术语“有效量”或“治疗有效量”指足以产生所需结果的本文所提供的结合分子(例如，抗体)或药物组合物的量。
术语“对象”和“患者”可互换使用。如本文所用，在某些实施方式中，对象是哺乳动物，例如非灵长类动物(例如，牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)或灵长类动物(例如，猴和人)。在具体实施方式中，对象是人。在一个实施方式中，对象是诊断患有病症或紊乱的哺乳动物，例如人。在另一个实施方式中，对象是处于发展出病症或紊乱的风险中的哺乳动物，例如，人。
“给予”或“给药”指注射或以其他方式物理递送存在于体外的物质到患者中，如通过粘膜、皮内、静脉内、肌肉内递送，和/或本文所述或本领域已知的任何其他物理递送方法。
如本文所用，术语“治疗”、“处理”和“救治”指因给予一种或多种疗法所致疾病或病症的进展、严重性和/或持续时间的减少或改善。治疗可以通过评估与潜在病症相关的一种或多种症状是否已经减少、缓解和/或减轻从而观察到患者的改善来确定，尽管患者可能仍然患有潜在病症。术语“治疗”包括控制和改善疾病。术语“管理”、“控制”和“管控”指对象由不一定导致疾病治愈的疗法中获得的有益效果。
术语“预防”、“防御”和“防治”指减少疾病、紊乱、病症或一种或多种相关症状(例如，癌症)发作(或复发)的可能性。
术语“癌症”或“癌细胞”在本文中用于表示在赘生物中发现的组织或细胞，其具有区别于正常组织或组织细胞的特征。这些特征包括但不限于：发育不全的程度、形状不规则、细胞轮廓不清晰、细胞核大小、细胞核或细胞质结构变化、其他表型变化、存在指示癌变或癌前病变状态的细胞蛋白、有丝***数量增加和转移能力。与“癌症”有关的词包括癌、肉瘤、肿瘤、上皮瘤、白血病、淋巴瘤、息肉和卷毛、转化、赘生物等。
术语“约”和“大约”意指20％以内、15％以内、10％以内、9％以内、8％以内、7％以内、6％以内、5％以内、4％以内、3％以内、2％以内、1％以内或更少的给定值或范围。
在本说明书和权利要求书中所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式，除非上下文中另有明确的说明。
应当理解，凡以术语“包含”来描述实施方式的情形中既为同时提供以术语“由……组成/构成”和/或“基本上由……组成/构成”描述的类似实施方式。还应理解，凡以短于基本上由“……组成/构成”来描述实施方式的情形中既为同时提供以术语“由……组成/构成”描述的类似实施方式。
在例如“A和/或B”的短语中使用的术语“和/或”旨在包括A和B；A或B；A(单独)和B(单独)。类似地，在例如“A、B和/或C”的短语中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方式中的每一种：A、B、和C；A、B、或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
术语“变体”指表现出与所述类型或标准不同的分子，例如在特定所述蛋白质(例如图1中所示的191P4D12蛋白质)的相应位置具有一个或多个不同氨基酸残基的蛋白质。类似物是变体蛋白质的一个例子。剪接同种型和单核苷酸多态性(SNP)是变体的进一步例子。
本发明的“191P4D12蛋白质”和/或“191P4D12相关蛋白质”包括本文中具体鉴定的蛋白质(参见图1)，以及等位基因变体、保守取代变体、类似物和同系物，它们可以按照本文概述的方法或本领域现成的方法进行分离/生成和表征，而无需过度实验。还包括结合不同191P4D12蛋白质的部分或其片段的融合蛋白，以及191P4D12蛋白质和异源多肽的融合蛋白。此类191P4D12蛋白质统称为191P4D12相关蛋白质、本发明蛋白质或191P4D12。术语“191P4D12相关蛋白”是指含有4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或25个以上氨基酸；或者，至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、225、250、275、300、325、330、335、339或更多氨基酸的多肽片段或191P4D12蛋白序列。
5.2治疗癌症的方法
本文提供使用结合191P4D12的抗体药物偶联物(ADC)治疗各种癌症的方法，包括乳腺癌(例如，HER+/HER2-乳腺癌和ER阴性、PR阴性和HER2阴性的三阴性乳腺癌(ER-/PR-/HER2-)、肺癌(例如，鳞状肺癌、非鳞状肺癌、鳞状非小细胞肺癌和非鳞状非小细胞肺癌)、头颈癌，以及胃癌或食管癌。在一些实施方式中，ADC为恩诺单抗维多汀(Enfortmab-vedotin)(也称为抗191P4D12-ADC、Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE、ASG-22CE或AGS-22M6E)。
在一个方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中，对象具有激素受体阳性和人表皮生长因子受体2阴性(HR+/HER2-)乳腺癌。
在一些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中，该对象患有ER阴性、PR阴性和HER2阴性(ER-/PR-/HER2-)乳腺癌。
在另一个方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中所述对象具有鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)。
在另一个方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中所述对象具有非鳞状NSCLC。
在一些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中所述对象具有局部晚期或转移性头颈癌。
在某些方面，本文提供了一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和其中所述对象具有胃或食管癌。
在本文提供的所有方法中，特别是在前七段(第[00188]至[00194]段)中描述的方法中：第5.3节描述了可使用的治疗剂，治疗患者的选择见本文，并在第5.2节和第6节例证，第5.4节和第6节描述了用于给予治疗剂的给药方案和药物组合物，本文描述并在下文第5.2节和第6节列举了可用于鉴定治疗剂、选择患者、确定这些方法的结果和/或以任何方式作为这些方法标准的生物标志物，本文所提供方法的治疗结果可以是本文所述生物标志物的改善，例如，第5.2节和第6节描述和例举的生物标志物。因此，本领域技术人员将理解，本文提供的方法包括患者、治疗剂、给药方案、生物标志物和治疗结果的所有排列和组合，如上下文所述。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗对象的乳腺癌。在一些实施方式中，乳腺癌是激素受体阳性和人表皮生长因子受体2阴性(HR+/HER2-)乳腺癌。在一些实施方式中，乳腺癌为***受体(ER)阳性和/或孕酮受体(PR)阳性，且HER2阴性。在一些实施方式中，乳腺癌为ER阳性、PR阳性和HER2阴性。在一些实施方式中，乳腺癌为ER阳性和HER2阴性。在一些实施方式中，乳腺癌为PR阳性和HER2阴性。在一些实施方式中，乳腺癌，包括例如HR+/HER2-乳腺癌，ER阳性、PR阳性和HER2阴性乳腺癌，ER阳性和HER2阴性乳腺癌，PR阳性和HER2阴性乳腺癌，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上得到确认。在一些实施方式中，根据美国临床肿瘤学会/美国病理学家学院(ASCO/CAP)指南，基于最近分析的组织，进行组织学、细胞学或组织学和细胞学确认。
在一些实施方式中，激素受体阳性和人表皮生长因子受体2阴性(HR+/HER2-)乳腺癌是局部晚期或转移性乳腺癌。在一些实施方式中，ER阳性和/或孕酮受体(PR)阳性和HER2阴性乳腺癌是局部晚期或转移性乳腺癌。在一些实施方式中，ER阳性、PR阳性和HER2阴性乳腺癌是局部晚期或转移性乳腺癌。在一些实施方式中，ER阳性和HER2阴性乳腺癌是局部晚期或转移性乳腺癌。在一些实施方式中，PR阳性和HER2阴性乳腺癌是局部晚期或转移性乳腺癌。在一些实施方式中，局部晚期或转移性乳腺癌，包括例如HR+/HER2-乳腺癌，ER阳性、PR阳性和HER2阴性乳腺癌，ER阳性和HER2阴性乳腺癌，PR阳性和HER2阴性乳腺癌，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上得到确认。在一些实施方式中，根据美国临床肿瘤学会/美国病理学家学院(ASCO/CAP)指南，基于最近分析的组织，进行组织学、细胞学或组织学和细胞学确认。
在一些实施方式中，患有乳腺癌并用本文提供的方法治疗的对象在转移性或局部晚期情况下，已接受≥1线内分泌治疗和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂。在一些实施方式中，患有乳腺癌并用本文提供的方法治疗的对象在任何情况下均已接受紫杉烷或蒽环类药物的预先治疗。在一些实施方式中，患有乳腺癌并用本文提供的方法治疗的对象在乳腺癌易感基因(BRCA)1或2中具有有害的种系突变，必须用聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗。
在一些特定实施方式中，使用本文提供的方法治疗的对象具有根据美国临床肿瘤学会/美国病理学家学院(ASCO/CAP)指南，基于最近分析的组织组织学或细胞学证实的HR+/HER2-乳腺癌，其定义为ER阳性和/或孕酮受体(PR)阳性，以及HER2阴性；在局部晚期或转移性疾病情形下已接受≥1线内分泌治疗和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂；在任何情况下接受过紫杉烷或蒽环类药物治疗；和/或具有在乳腺癌易感基因(BRCA)1或2中有害的种系突变，必须用聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗对象的三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些实施方式中，TNBC是经组织学和/或细胞学证实的TNBC。在一些实施方式中，TNBC根据ASCO/CAP指南，基于最近分析的组织，根据TNBC组织学(ER阴性/PR阴性/HER2阴性)确定。在一些实施方式中，TNBC是局部晚期或转移性的。在一些实施方式中，患有TNBC并用本文提供的方法治疗的对象已进行过≥2线***性治疗。在一些实施方式中，患有TNBC并用本文提供的方法治疗的对象在任何情况下已进行过≥2线***治疗，包括紫杉烷。在一些实施方式中，患有TNBC并用本文提供的方法治疗的对象在BRCA1、BRCA2或BRCA1和BRCA2中具有有害的种系突变。在一些实施方式中，具有TNBC并用本文提供的方法治疗的对象已用PARP抑制剂治疗。在一些实施方式中，用本文为TNBC提供的方法治疗的对象具有本段中描述的特征的任何排列或组合。
在一些特定实施方式中，使用本文提供的方法治疗的对象具有组织学或细胞学证实的TNBC，其定义为根据ASCO/CAP指南基于最近分析的组织有明确TNBC组织学(ER阴性/PR阴性/HER2阴性)；患有局部晚期或转移性疾病；任何情形下已进行过≥2线***疗法，包括紫杉烷；BRCA1或BRCA2或两者具有有害种系突变；和/或已用PARP抑制剂治疗。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗对象中的鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)。在一些实施方式中，鳞状NSCLC是经组织学和/或细胞学证实的鳞状NSCLC。在一些实施方式中，鳞状NSCLC是局部晚期或转移性的。在一些实施方式中，患有鳞状NSCLC并使用本文提供的方法进行治疗的对象在基于铂的治疗后出现进展或复发，包括例如，如果在完成后12个月内出现复发，则在辅助情形下给予铂治疗。在一些实施方式中，患有鳞状NSCLC并使用本文提供的方法进行治疗的对象之前已经接受了抗程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)或抗程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的治疗，如果根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南符合条件。
在一些特定实施方式中，使用本文提供的方法治疗的对象具有经组织学或细胞学证实的鳞状NSCLC；患有局部晚期或转移性疾病；在基于铂类药物的治疗后出现进展或复发，包括如果在完成后12个月内出现复发，则在辅助情形下给予铂治疗作为方案；和/或之前已经接受了抗程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)或抗程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的治疗，如果根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南符合条件。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗对象的非鳞状NSCLC。在一些实施方式中，鳞状NSCLC是经组织学和/或细胞学证实的鳞状NSCLC。在一些实施方式中，鳞状NSCLC为表皮生长因子受体(EGFR)野生型和间变性淋巴瘤激酶(ALK)野生型。在一些实施方式中，根据当地实验室标准，鳞状NSCLC为EGFR野生型和ALK野生型。在一些实施方式中，非鳞状NSCLC是局部晚期或转移性的。在一些实施方式中，患有鳞状NSCLC并使用本文提供的方法进行治疗的对象在转移或局部晚期情形下基于铂的治疗后出现进展或复发，包括例如，如果在完成后12个月内出现复发，则在辅助情形下给予铂治疗。在一些实施方式中，患有鳞状NSCLC并使用本文提供的方法进行治疗的对象之前已经接受了抗PD-1或抗PD-L1的治疗，如果根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南符合条件。
在一些实施方式中，用本文提供的方法治疗的对象具有经组织学和/或细胞学证实的非鳞状NSCLC，其根据当地实验室标准，为EGFR野生型和ALK野生型；患有局部晚期或转移性疾病；在转移或局部晚期情形下基于铂的治疗后出现进展或复发，包括例如，如果在完成后12个月内出现复发，则在辅助情形下给予铂治疗；已接受了抗PD-1或抗PD-L1的治疗，如果根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南符合条件。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗对象的头颈癌。在一些实施方式中，头颈癌是经组织学和/或细胞学证实的头颈癌。在一些实施方式中，头颈癌是局部晚期或转移性的。在一些实施方式中，患有头颈癌并使用本文提供的方法进行治疗的对象在转移或局部晚期情形下使用含铂的疗法后出现进展或复发，其含铂疗法不包括在治愈性情形中作为多模式治疗部分给予的铂方案，除非该对象在完成后6个月内出现复发或进展。在一些实施方式中，患有头颈癌并使用本文提供的方法进行治疗的对象之前已经接受了抗PD-1或抗PD-L1的治疗，如果根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南符合条件。
在一些实施方式中，用本文提供的方法治疗的对象具有经组织学和/或细胞学证实的头颈癌；具有局部晚期或转移性疾病；在转移或局部晚期情形下使用含铂的疗法后出现进展或复发，其含铂疗法不包括在治愈性情形中作为多模式治疗部分给予的铂方案，除非该对象在完成后6个月内出现复发或进展；之前已经接受了抗PD-1或抗PD-L1的治疗，如果根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南符合条件。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗对象的胃癌或食管癌。在一些实施方式中，胃癌或食管癌是经组织学和/或细胞学证实的胃癌或食管癌。在一些实施方式中，胃癌或食管癌是局部晚期或转移性的。在一些实施方式中，患有头颈癌并使用本文提供的方法进行治疗的对象在使用针对转移或局部晚期疾病的含氟嘧啶和铂的化疗方案后出现进展或复发，其化疗方案不包括新辅助疗法或辅助疗法，除非该对象在完成后6个月内出现复发或进展。在一些实施方式中，如果对象患有HER2阳性癌症，则患有头颈癌并用本文提供的方法治疗的对象已接受HER2定向治疗。在一些实施方式中，患有头颈部癌症并用本文提供的方法治疗的对象具有HER2阳性癌症并接受了HER2定向治疗。
在一些实施方式中，用本文提供的方法治疗的对象具有经组织学或细胞学证实的胃癌或食管癌；具有局部晚期或转移性疾病；在使用针对转移或局部晚期疾病的含氟嘧啶和铂的化疗方案后具有进展或复发，其化疗方案不包括新辅助疗法或辅助疗法，除非该对象在完成后6个月内出现复发或进展；患有HER2阳性癌症且已接受HER2定向治疗。在另一个具体实施方式中，用本文提供的方法治疗的对象具有经组织学或细胞学证实的胃癌或食管癌；具有局部晚期或转移性疾病；在使用针对转移或局部晚期疾病的含氟嘧啶和铂的化疗方案后具有进展或复发，其化疗方案不包括新辅助疗法或辅助疗法，除非该对象在完成后6个月内出现复发或进展。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗具有表达191P4D12 RNA、表达191P4D12蛋白或同时表达191P4D12 RNA和191P4D12蛋白质的癌症的对象。在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗同时表达191P4D12 RNA和191P4D12蛋白质的癌症的对象，包括例如鳞状NSCLC、非鳞状NSCLC、胃(GEJ)癌、食管癌、HNSCC、NSCLC-腺癌、头颈癌(例如头颈鳞状癌)，和乳腺癌(包括HR+/HER2-乳腺癌和TNBC)。在一些实施方式中，癌症中的191P4D12RNA表达通过多核苷酸杂交、测序(评估序列的相对丰度)和/或PCR(包括RT-PCR)确定。在一些实施方式中，癌症中的191P4D12蛋白表达通过IHC、荧光激活细胞分选分析(FACS)和/或蛋白质印迹测定。在一些实施方式中，癌症中的191P4D12蛋白表达通过两种IHC方法确定。
在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗患有癌症的对象，其中癌症表达191P4D12 RNA、表达191P4D12蛋白质或同时表达191P4D12 RNA和191P4D12蛋白质，并且其中癌症对阻断微管聚合的细胞毒剂(例如Vinca和MMAE)敏感。在某些实施方式中，本文提供的方法用于治疗同时表达191P4D12 RNA和191P4D12蛋白质且对阻断微管聚合的细胞毒性剂(例如Vinca和MMAE)敏感的癌症的对象，癌症包括例如鳞状NSCLC、非鳞状NSCLC、胃癌(GEJ)、食管癌、HNSCC、NSCLC腺癌，头颈癌(如头颈鳞状癌)和乳腺癌(包括HR+/HER2-乳腺癌和TNBC)。
在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象是具有实体瘤的对象，包括例如患有激素受体阳性和人表皮生长因子受体2阴性(HR+/HER2-)乳腺癌的对象，患有ER阴性、PR阴性和HER2阴性(ER-/PR-/HER2-)乳腺癌的对象，患有NSCLC的对象，患有非鳞状NSCLC的对象，患有头部癌的对象，患有颈部癌的对象，患有头颈癌的对象，患有胃癌的对象，患有食管癌的对象和/或患有胃癌或食管癌的对象。
在某些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象还包括具有局部晚期、转移性(包括转移性恶性)实体瘤以及同时具有局部晚期和转移性实体瘤的对象。在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的实体瘤为局部晚期HR+/HER2-乳腺癌、局部晚期ER-/PR-/HER2-乳腺癌、局部晚期NSCLC、局部晚期非鳞状NSCLC、局部晚期头部癌、局部晚期颈部癌、局部晚期头颈癌、局部晚期胃癌，局部晚期食管癌和/或局部晚期胃癌和食管癌。在其他实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的实体瘤为转移性(包括恶性或转移性恶性)HR+/HER2-乳腺癌、转移性(包括恶性或转移性恶性)ER-/PR-/HER2-乳腺癌、转移性(包括恶性或转移性恶性)NSCLC，转移性(包括恶性或转移性恶性)非鳞状非小细胞肺癌，转移性(包括恶性或转移性恶性)头部癌，转移性(包括恶性或转移性恶性)颈部癌，转移性(包括恶性或转移性恶性)头颈癌，转移性(包括恶性或转移性恶性)胃癌，转移性(包括恶性或转移性恶性)食管癌和/或转移性(包括恶性或转移性恶性)胃癌和食管癌。
在一些实施方式中，局部晚期、转移性(包括恶性转移性)以及局部晚期和转移性实体瘤均在组织学、细胞学或组织学和细胞学上得到证实。
在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象在一种或多种其他癌症治疗后进展或复发。其后对象进展或复发的一种或多种治疗包括例如，一线或多线内分泌治疗、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂(包括转移性或局部晚期情形下)、紫杉烷治疗、蒽环类化合物治疗、聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂、基于铂的治疗，用程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制剂、程序性细胞死亡配体1(PD-L1)抑制剂的治疗、包括氟嘧啶的化疗、HER2定向治疗和/或本段和本文所述两种或两种以上治疗的任何排列或组合。
在某些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象之前已接受至少两线、三线、四线、五线或六线***治疗。这种***疗法可以是任何使用通过血液运输，到达并影响全身细胞的物质的治疗。此类***疗法可以是前一段(第[00215]段)中描述的疗法。在一个实施方式中，此类***疗法为紫杉烷。
在某些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象在其他治疗后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月内进展或复发，这些治疗包括但不限于本段前二段(第[00215]段)所述的任何治疗或任何治疗组合。在一些特定实施方式中，对象在基于铂的治疗或包括氟嘧啶的化疗后6个月内进展或复发。在其他特定实施方式中，对象在基于铂的治疗后的6个月内有进展或复发。在其他实施方式中，对象在基于铂的治疗后的12个月内有进展或复发。
在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象已接受一种或多种其他癌症治疗。对象已接受的一种或多种治疗包括例如，一线或多线内分泌治疗、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂(包括转移性或局部晚期情形下)、紫杉烷治疗、蒽环类化合物治疗、聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂、基于铂的治疗，用程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制剂、程序性细胞死亡配体1(PD-L1)抑制剂的治疗、包括氟嘧啶的化疗、HER2定向治疗和/或本段和本文所述两种或两种以上治疗的任何排列或组合。
在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象具有以下任意组合或排列：已接受上一段(段落[00218])所述的一种或多种其他癌症治疗，并在本段之前第四段(段落[00215])所述的一种或多种其他癌症治疗后进展或复发。
在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象具有某些表型或基因型特征。在一个实施方式中，对象患有HR+/HER2-乳腺癌，该乳腺癌也是***受体(ER)阳性和HER2阴性的。在一个实施方式中，对象患有HR+/HER2-乳腺癌，该乳腺癌也是孕酮受体(ER)阳性和HER2阴性的。在一个实施方式中，对象患有HR+/HER2-乳腺癌，该乳腺癌也是***受体(ER)阳性、孕酮受体(PR)阳性和HER2阴性的。在一个实施方式中，对象在乳腺癌易感基因(BRCA)1、BRCA2或BRCA1和BRCA2中具有有害的种系突变。在一个实施方式中，对象患有ER阴性、PR阴性和HER2阴性(ER-/PR-/HER2-)乳腺癌。在一个实施方式中，对象具有野生型表皮生长因子受体(EGFR)。在一个实施方式中，对象具有野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。在一个实施方式中，对象同时具有野生型表皮生长因子受体(EGFR)和野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。在一些实施方式中，对象具有本文所述表型或基因型特征的任何排列和组合。
在一些实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定表型或基因型特征。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定同时具有***受体(ER)阳性和HER2阴性的HR+/HER2-乳腺癌。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定同时具有孕酮受体(PR)阳性和HER2阴性的HR+/HER2-乳腺癌。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定同时具有***受体(ER)阳性、孕酮受体(PR)阳性和HER2阴性的乳腺癌。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定乳腺癌易感基因(BRCA)1、BRCA2或BRCA1和BRCA2两者中的有害种系突变。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定ER阴性、PR阴性和HER2阴性(ER-/PR-/HER2-)乳腺癌。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定野生型表皮生长因子受体(EGFR)。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上确定野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。在一个实施方式中，在组织学、细胞学或组织学和细胞学上同时确定野生型表皮生长因子受体(EGFR)和野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。
在本文提供的方法的一些实施方式中，表型和/或基因型特征的组织学和/或细胞学确定按照美国临床肿瘤学会/美国病理学家学院(ASCO/CAP)指南所述，基于最新分析的组织进行，其全部通过引用并入本文。
在一些实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定表型或基因型特征。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定还具有***受体(ER)阳性和HER2阴性的HR+/HER2-乳腺癌。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定还具有孕酮受体(PR)阳性和HER2阴性的HR+/HER2-乳腺癌。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定还具有***受体(ER)阳性、孕酮受体(PR)阳性和HER2阴性的HR+/HER2-乳腺癌。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定乳腺癌易感基因(BRCA)1、BRCA2或BRCA1和BRCA2中的有害种系突变。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定ER阴性、PR阴性和HER2阴性(ER-/PR-/HER2-)乳腺癌。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定野生型表皮生长因子受体(EGFR)。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来确定野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。在一个实施方式中，通过包括下一代测序(例如Illumina，Inc.的NGS)、DNA杂交和/或RNA杂交的测序来同时确定野生型表皮生长因子受体(EGFR)和野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。
在一些实施方式中，对象已接受的或其后对象癌症已进展或复发的一种或多种其他癌症治疗是PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。在某些实施方式中，PD-1抑制剂为派姆单抗或纳武单抗。在其他实施方式中，PD-L1抑制剂选自下组：阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)和度伐鲁单抗(durvalumab)。PD-l/PD-L1抑制剂的其它例子包括但不限于：美国专利号7,488,802；7,943,743；8,008,449；8,168,757；8,217,149，和PCT专利公开号WO2003042402，WO2008156712，WO2010089411，WO2010036959，WO2011066342，WO2011159877，WO2011082400和WO2011161699，其全部通过引用其全部内容纳入本文。
在某些实施方式中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。在一个实施方式中，抗PD-1抗体是BGB-A317，纳武单抗(也称之为ONO-4538、BMS-936558或MDX1106)或派姆单抗(也称之为MK-3475、SCH 900475或兰博利珠单抗(lambrolizumab))。在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是纳武单抗。纳武单抗是一种人IgG4抗PD-1单克隆抗体，以商品名OpdivoTM销售。在另一个实施方式中，抗PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗是一种人源化单克隆IgG4抗体，并以商品名KeytrudaTM销售。在又一个实施方式中，抗PD-1抗体是CT-011，一种人源化抗体。在又一实施方式中，抗PD-1抗体是AMP-224，一种融合蛋白。在另一实施方式中，PD-1抗体是BGB-A317。BGB-A317是一种单克隆抗体，其中结合Fcγ受体I的能力被专门设计出来，并且具有与PD-1的独特结合特征，具有高亲和力和卓越的靶标特异性。
在另一个实施方式中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是MEDI4736(度伐鲁单抗(durvalumab))。在另一实施方式中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(也称为MDX-1105-01)。在另一实施方式中，PD-L1抑制剂是阿特朱单抗(也称为MPDL3280A和
Figure BDA0003592694230000461
)。
在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象是哺乳动物。在一些实施方式中，可在本文提供的方法中治疗的对象是人。
5.3抗191P4D12抗体药物偶联物
一般而言，本文提供的方法利用本文和/或美国专利号8,637,642中描述的抗-191P4D12 ADC，其通过引用整体并入本文中。本文提供的抗191P4D12抗体药物偶联物包含偶联至一个或多个细胞毒剂单元(或药物单元)的结合191P4D12的抗体或其抗原结合片段。细胞毒性剂(或药物单元)可以直接或通过接头单元(LU)共价连接。
在一些实施方式中，抗体药物偶联物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有下述结构：
L-(LU-D)p (I)
其中：
L是抗体单元，例如，如下文第5.3.1部分中提供的抗191P4D12抗体或其抗原结合片段，和
(LU-D)是接头单元-药物单元部分，其中：
LU-是一个连接单元，和
D是对靶细胞具有细胞抑制性或细胞毒活性的药物单元；和
p是1-20的整数。
在一些实施方式中，p的范围为1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2。在一些实施方式中，p的范围为2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4或2-3。在其他实施方式中，p约为1。在其他实施方式中，p约为2。在其他实施方式中，p约为3。在其他实施方式中，p约为4。在其他实施方式中，p约为5。在其他实施方式中，p约为6。在其他实施方式中，p约为7。在其他实施方式中，p约为8。在其他实施方式中，p约为9。在其他实施方式中，p约为10。
在一些实施方式中，抗体药物偶联物化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物具有下述结构：
L-(Aa-Ww-Yy-D)p (II)
其中：
L是抗体单元，例如，如下文第5.3.1部分中提供的抗191P4D12抗体或其抗原结合片段，和
-Aa-Ww-Yy-是接头单元(LU)，其中：
-A-是延伸体单元，
a是0或1，
各-W-独立地为氨基酸单元，
w是0-12的整数，
-Y-是自毁型(self-immolative)间隔单元，
y是0、1或2；
D是对靶细胞具有细胞抑制性或细胞毒活性的药物单元；和
p是1-20的整数。
在一些实施方式中，a是0或1，w是0或1，和y是0、1或2。在一些实施方式中，a是0或1，w是0或1，和y是0或1。在一些实施方式中，p的范围为1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2。在一些实施方式中，p的范围为2-8、2-7、2-6、2-5、2-4或2-3。在其他实施方式中，p是1、2、3、4、5或6。在一些实施方式中，p是2或4。在一些实施方式中，当w不是零时，y是1或2。在一些实施方式中，当w是1-12时，y是1或2。在一些实施方式中，w是2-12，和y是1或2。在一些实施方式中，a是1，和w和y是0。
对于包含多种抗体或其抗原结合片段的组合物，药物加载由p表示，即药物分子的平均数/抗体单元。各抗体的药物加载的范围为1-20个药物(D)。制备偶联反应中各抗体的平均药物数可以通过常规方法表征，例如质谱、ELISA试验和HPLC。还可以确定抗体药物偶联物在p方面的定量分布。在一些情况中，可以通过诸如反相HPLC或电泳之类的方法实现对同质抗体药物偶联物的分离、纯化和表征，其中p是来自具有其他药物加载的抗体药物偶联物的特定值。在一些实施方式中，p是2-8。
5.3.1抗191P4D12抗体或抗原结合片段
在一个实施方式中，结合191P4D12相关蛋白的抗体或抗原结合片段是特异性结合包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的191P4D12蛋白(参见图1A)。编码191P4D12蛋白的相应cDNA具有序列SEQ ID NO:1(参图1A)。
特异性结合包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的191P4D12蛋白的抗体包括可以结合其它相关191P4D12蛋白的抗体。例如，结合包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的191P4D12蛋白的抗体可以结合191P4D12相关蛋白，如191P4D12变体及其同源物或类似物。
在一些实施方式中，本文提供抗191P4D12抗体是单克隆抗体。
在一些实施方式中，抗体包含重链和/或轻链，所述重链包含氨基酸序列SEQ IDNO:4(SEQ ID NO:3的cDNA序列)，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:6(SEQ ID NO:5的cDNA序列)，如图1B和1C所示。
在一些实施方式中，抗191P4D12抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含互补决定区(CDR)，其包含SEQ ID NO:22(其是SEQ ID NO:7从第20个氨基酸(谷氨酸)到第136个氨基酸(丝氨酸)的氨基酸序列)中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23(其是SEQ ID NO:8从第23个氨基酸(天冬氨酸)到第130个氨基酸(精氨酸)的氨基酸序列)中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列。SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8如图1D和1E所示，如下所列：
SEQ ID NO:22
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:23
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIKR
SEQ ID NO:7
MELGLCWVFLVAILEGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:8
MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
CDR序列可以根据熟知的编号***确定。如上所述，CDR区是本领域技术人员众所周知的并且已经由众所周知的编号***定义。例如，Kabat互补决定区(CDR)基于序列变异性并且是最常用的(参见例如，Kabat等，同上)。Chothia指的则是结构环的位置(参见例如，Chothia和Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-17)。取决于环的长度，当使用Kabat编号方法时，Chothia CDR-H1环的末端在H32和H34之间变化(这是因为Kabat编号方案将***置于H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，那么环在32结束；如果仅存在35A，那么环在33结束；如果同时存在35A和35B，那么环在34结束)。AbM超变区表示Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷，并且被牛津分子科技公司(Oxford Molecular)的AbM抗体建模软件所使用(参见例如，《抗体工程改造》(Antibody Engineering)第2卷(Kontermann和Dübel编著，第2版2010))。“Contact”超变区基于可变复合物晶体结构的分析。已经开发并广泛采用了另一通用编号***ImMunoGeneTics(IMGT)Information
Figure BDA0003592694230000491
(Lafranc等,2003,Dev.Comp.Immunol.27(1):55-77)。IMGT是专供人类和其他脊椎动物的免疫球蛋(IG)、T细胞受体(TCR)和主要组织相容复合物(MHC)的整合信息***。因此，就氨基酸序列和轻链或重链内的位置表示CDR。由于免疫球蛋白可变域结构内CDR的“位置”在物种之间是保守的并且存在于称为环的结构中，因此通过使用根据结构特征比对可变域序列的编号***，很容易识别CDR和框架残基。该信息可以用于移植或替换来自一个物种的免疫球蛋白的CDR残基到受体框架，其通常来自人抗体。Honegger和Plückthun,2001,J.Mol.Biol.309:657-70已经开发了额外的编号***(AHon)。编号***包括，例如，Kabat编号和IMGT独特编号***，之间的对应关系为本领域技术人员所熟知(参见例如，Kabat,引用如上；Chothia和Lesk,引用如上；Martin,引用如上；Lefranc等,引用如上)。来自这些高变区或CDR各自的残基在上述表1中注释。
在一些实施方式中，抗191P4D12抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含这样的互补决定区(CDR)，其包含根据Kabat编号的SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，所述轻链可变区包含这样的CDR，其包含根据Kabat编号的SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列。
在一些实施方式中，抗191P4D12抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含这样的互补决定区(CDR)，其包含根据AbM编号的SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，所述轻链可变区包含这样的CDR，其包含根据AbM编号的SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列。
在一些实施方式中，抗191P4D12抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含这样的互补决定区(CDR)，其包含根据Chothia编号的SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，所述轻链可变区包含这样的CDR，其包含根据Chothia编号的SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列。
在一些实施方式中，抗191P4D12抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含这样的互补决定区(CDR)，其包含根据Contact编号的SEQ IDNO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，所述轻链可变区包含这样的CDR，其包含根据Contact编号的SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列。
在一些实施方式中，抗191P4D12抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含这样的互补决定区(CDR)，其包含根据IMGT编号的SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，所述轻链可变区包含这样的CDR，其包含根据IMGT编号的SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列。
如上所述，可以容易地确定根据不同编号***的CDR序列，例如，使用在线工具，如由抗原受体编号和受体分类(Antigen receptor Numbering And ReceptorClassificatIon，ANARCI)提供的工具。例如，由ANARCI确定的根据Kabat编号的SEQ ID NO：22内的重链CDR序列和SEQ ID NO：23内的轻链CDR序列列于下表4中。
表4
SEQ ID NO:22的VH SEQ ID NO:23的VL
CDR1 SYNMN(SEQ ID NO:9) RASQGISGWLA(SEQ ID NO:12)
CDR2 YISSSSSTIYYADSVKG(SEQ ID NO:10) AASTLQS(SEQ ID NO:13)
CDR3 AYYYGMDV(SEQ ID NO:11) QQANSFPPT(SEQ ID NO:14)
又例如，由ANARCI确定的根据IMGT编号的SEQ ID NO：22内的重链CDR序列和SEQID NO：23内的轻链CDR序列列于下表5中。
表5
SEQ ID NO:22的VH SEQ ID NO:23的VL
CDR1 GFTFSSYN(SEQ ID NO:16) QGISGW(SEQ ID NO:19)
CDR2 ISSSSSTI(SEQ ID NO:17) AAS(SEQ ID NO:20)
CDR3 ARAYYYGMDV(SEQ ID NO:18) QQANSFPPT(SEQ ID NO:21)
在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括：含有氨基酸序列SEQ IDNO:9的CDR H1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的CDR H2，含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的CDR H3；含有氨基酸序列SEQ ID NO:12的CDR L1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:13的CDR L2，和含有氨基酸序列SEQ ID NO:14的CDR L3。
在一些实施方式中，所述抗体或其抗原结合片段包括：含有氨基酸序列SEQ IDNO:16的CDR H1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:17的CDR H2，含有氨基酸序列SEQ ID NO:18的CDR H3；含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的CDR L1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的CDR L2，和含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的CDR L3。
在一些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，和所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ IDNO:23。
在一些实施方式中，所述抗体包括重链和轻链，所述重链包含从SEQ ID NO:7第20个氨基酸(谷氨酸)到第466个氨基酸(赖氨酸)范围的氨基酸序列，而所述轻链包含从SEQID NO:8第23个氨基酸(天冬氨酸)到第236个氨基酸(半胱氨酸)范围的氨基酸序列。
在一些实施方式中，考虑了本文所述抗体的一种或多种氨基酸序列修饰。例如，可能需要优化抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性，包括但不限于，特异性，热稳定性，表达水平，效应物功能，糖基化，免疫原性降低或溶解性。因此，除了本文所述的抗体，考虑了可以制备抗体变体。例如，抗体变体可以通过将合适的核苷酸改变导入编码DNA和/或通过合成所需抗体或多肽制备。本领域技术人员将理解的是，氨基酸改变可能改变抗体的翻译后过程，诸如改变糖基化位点的数量或位置或者改变膜锚定特征。
在一些实施方式中，本文所提供的抗体经化学修饰，例如，通过共价连接任何类型的分子与抗体。抗体衍生物可以包括，已经化学修饰的抗体，例如，通过糖基化、乙酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化、由已知保护/阻断基团衍生、蛋白水解裂解、连接于细胞配体或其它蛋白质等。通过已知技术可进行多种化学修饰中的任一种，包括但不限于：特异性化学裂解、乙酰化、制剂、衣霉素的代谢合成等。此外，抗体可以包含一种或多种非经典氨基酸。
变异可以是一个或多个编码单域抗体或多肽的密码子的取代、缺失或***，其导致氨基酸序列相较于原始抗体或多肽发生变化。氨基酸取代可以是用包含相似结构和/或化学特性的一种氨基酸替换另一氨基酸的结果，诸如用丝氨酸置换亮氨酸，例如，保守性氨基酸替换。本领域技术人员已知的标准技术可用于在编码本文提供的分子的核苷酸序列中引入突变，包括例如导致氨基酸取代的定点诱变和PCR介导的诱变。***或缺失可任选地在约1-5个氨基酸的范围内。在某些实施方式中，取代、缺失或***包括相对于原始分子少于25个氨基酸取代，少于20个氨基酸取代，少于15个氨基酸取代，少于10个氨基酸取代，少于5个氨基酸取代，少于4个氨基酸取代，少于3个氨基酸取代或少于2个氨基酸取代。在具体实施方式中，取代是位于一个或多个预测的非必须氨基酸残基处的保守性氨基酸取代。允许的变异可以通过在序列中***地进行氨基酸的***、缺失或替换并测试所得变体的亲本抗体表现出的活性来确定。
氨基酸序列***包括长度范围从一个残基到包含多个残基的多肽的氨基-和/或羧基-末端融合体，以及单个或多个氨基酸残基的序列内***。末端***的示例包括具有N-末端甲硫氨酰残基的抗体。
通过保守氨基酸取代产生的抗体包括在本公开中。在保守氨基酸置换中，氨基酸残基被包含具有相似电荷的侧链的氨基酸残基替换。如上所述，本领域已定义具有带相似电荷的侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括：具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。或者，也可沿编码序列的全部或部分随机引入突变(例如通过饱和诱变)，然后可筛选所得突变体的生物学活性，以鉴定保持活性的突变体。诱变后，可以表达所编码的蛋白质并且可以确定蛋白质的活性，可以进行保守的(例如，在具有相似特性和/或侧链的氨基酸组内)取代，以保持或不显著地改变特性。
氨基酸可以根据其侧链性质中的相似性分组(参见例如，Lehninger,《生物化学》(Biochemistry)73-75(第2版1975))：(1)非极性：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)；(2)不带电荷的极性：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)；(3)酸性：Asp(D)、Glu(E)；和(4)碱性：Lys(K)、Arg(R)、His(H)。或者，天然产生的残基可以基于共同的侧链特性分组：(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；和(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
例如，也可对不涉及保持抗体适当构象的任何半胱氨酸残基进行取代，例如，用另一氨基酸，如丙氨酸或丝氨酸以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。
改变可采用本领域已知的方法进行，例如寡核苷酸介导的(定点)诱变、丙氨酸扫描以及PCR诱变。定点诱变(参见例如，Carter,1986,Biochem J.237:1-7；和Zoller等,1982,Nucl.Acids Res.10:6487-500)，盒式诱变(参见例如，Wells等,1985,Gene34:315-23)，或其他已知的技术可以在克隆的DNA上进行，以产生抗-抗MSLN抗体变体DNA。
抗体的共价修饰包括在本发明范围内。共价修饰包括使抗体的靶向氨基酸残基与有机衍生剂反应，所述有机衍生剂能够与抗体选定的侧链或N-或C-末端残基反应。其他修饰包括谷氨酰胺酰基和天冬酰胺酰基残基分别脱酰胺成相应的谷氨酰基和天冬氨酰基残基，脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰或苏氨酸残基的羟基磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基甲基化(参见例如，Creighton,《蛋白质结构和分子特性》(Proteins: Structure and Molecular Properties)79-86(1983))，N-末端胺的乙酰化和任何C-末端羧基的酰胺化。
本公开范围内包括的抗体的共价修饰的其他类型包括，改变抗体或多肽的天然糖基化模式(参见例如，Beck等,2008,Curr.Pharm.Biotechnol.9:482-501；和Walsh,2010,Drug Discov.Today 15:773-80)，和连接抗体与各种非蛋白性(nonproteinaceous)聚合物中的一种，例如，聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧烷基，以例如，美国专利号4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192；或4,179,337中所述方式。
在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:7中所示重链具有超过70％同源性或相同性的重链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:7中所示重链具有超过75％同源性或相同性的重链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:7中所示重链具有超过80％同源性或相同性的重链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ IDNO:7中所示重链具有超过85％同源性或相同性的重链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:7中所示重链具有超过90％同源性或相同性的重链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:7中所示重链具有超过95％同源性或相同性的重链。
在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:8中所示轻链具有超过70％同源性或相同性的轻链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:8中所示轻链具有超过75％同源性或相同性的轻链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:8中所示轻链具有超过80％同源性或相同性的轻链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ IDNO:8中所示轻链具有超过85％同源性或相同性的轻链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:8中所示轻链具有超过90％同源性或相同性的轻链。在一些实施方式中，本文提供的抗体或抗原结合片段包含与SEQ ID NO:8中所示轻链具有超过95％同源性或相同性的轻链。
在一些实施方式中，本文提供的抗191P4D12抗体包含由杂交瘤产生的名为Ha22-2(2,4)6.1的抗体的重链和轻链CDR区，所述杂交瘤以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏，或者包含这样的氨基酸序列的重链和轻链CDR区，所述氨基酸序列与Ha22-2(2,4)6.1的重链和轻链CDR区氨基酸序列具有同源性，并且其中抗体保留了以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的名为Ha22-2(2,4)6.1的抗191P4D12抗体所需的功能特性。
在一些实施方式中，本文提供的抗体或其抗原结合片段包含人源化重链可变区和人源化轻链可变区，其中：
(a)重链可变区包含这样的CDR，所述CDR包含以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体中所示重链可变区CDR的氨基酸序列；
(b)轻链可变区包含这样的CDR，所述CDR包含以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体中所示轻链可变区CDR的氨基酸序列。
在一些实施方式中，本文提供的抗191P4D12抗体包含由杂交瘤产生的名为Ha22-2(2,4)6.1的抗体的重链和轻链可变区，所述杂交瘤以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏(参见，图3)，或者包含这样的氨基酸序列的重链和轻链可变区，所述氨基酸序列与Ha22-2(2,4)6.1的重链和轻链可变区氨基酸序列具有同源性，并且其中抗体保留了本文提供的抗191P4D12抗体所需的功能特性。作为本发明抗体的恒定区，可以选择恒定区的任何亚类。在一个实施方式中，可以使用人IgGl恒定区作为重链恒定区和人Igκ恒定区作为轻链恒定区。
在一些实施方式中，本文提供的抗191P4D12抗体包含由杂交瘤产生的名为Ha22-2(2,4)6.1的抗体的重链和轻链，所述杂交瘤以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏(参见，图3)，或者包含这样的氨基酸序列的重链和轻链，所述氨基酸序列与Ha22-2(2,4)6.1的重链和轻链氨基酸序列具有同源性，并且其中抗体保留了本文提供的抗191P4D12抗体所需的功能特性。
在一些实施方式中，本文提供的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(a)重链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链可变区氨基酸序列具有至少80％同源性或相同性；和
(b)轻链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链可变区氨基酸序列具有至少80％同源性或相同性。
在一些实施方式中，重链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链可变区氨基酸序列具有至少85％同源性或相同性。在其它实施方式中，重链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链可变区氨基酸序列具有至少90％同源性或相同性。在其它实施方式中，重链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链可变区氨基酸序列具有至少95％同源性或相同性。在其它实施方式中，重链可变区可以与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链可变区氨基酸序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性或相同性。
在一些实施方式中，轻链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链可变区氨基酸序列具有至少85％同源性或相同性。在其它实施方式中，轻链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链可变区氨基酸序列具有至少90％同源性或相同性。在其它实施方式中，轻链可变区包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链可变区氨基酸序列具有至少95％同源性或相同性。在其它实施方式中，轻链可变区可以与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链可变区氨基酸序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性或相同性。
在其它实施方式中，本文提供的抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，其中：
(a)重链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链氨基酸序列具有至少80％同源性或相同性；和
(b)轻链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链氨基酸序列具有至少80％同源性或相同性。
在一些实施方式中，重链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链氨基酸序列具有至少85％同源性或相同性。在其它实施方式中，重链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链氨基酸序列具有至少90％同源性或相同性。在其它实施方式中，重链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链氨基酸序列具有至少95％同源性或相同性。在其它实施方式中，重链可以与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的重链氨基酸序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性或相同性。
在一些实施方式中，轻链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链氨基酸序列具有至少85％同源性或相同性。在其它实施方式中，轻链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链氨基酸序列具有至少90％同源性或相同性。在其它实施方式中，轻链包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链氨基酸序列具有至少95％同源性或相同性。在其它实施方式中，轻链可以与以美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号PTA-11267保藏的杂交瘤产生的抗体的轻链氨基酸序列具有85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源性或相同性。
本文提供的工程改造抗体包括已对VH和/或VL内框架残基进行修饰的那些(例如，以改善抗体的特性)。通常，进行这类框架修饰以降低抗体的免疫原性。例如，一种方法是将一个或多个框架残基“回复突变”为相应的种系序列。更具体地，经历体细胞突变的抗体可能含有与衍生抗体的种系序列不同的框架残基。这类残基可通过将抗体框架序列与衍生抗体的种系序列进行比较来鉴定。为了使框架区序列返回到它们的种系构型，可以通过例如定点诱变或PCR介导的诱变将体细胞突变“回复突变”为种系序列(例如，从亮氨酸“回复突变”为甲硫氨酸)。这类“回复突变的”抗体也旨在行涵盖在本发明中。
另一种类型的构架修饰涉及使构架区内或甚至一个或多个CDR区内的一个或多个残基突变，以去除T细胞表位，从而降减少体潜在的免疫原性。这种方法也称为“去免疫化”并在Carr等的美国专利公开号2003/0153043中更详细地描述。
除了在框架或CDR区内进行的修饰之外或以外，本发明的抗体可以经工程改造以在Fc区内包括修饰，通常以改变抗体的一种或多种功能特性，例如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合和/或抗原依赖性细胞毒性。此外，本文提供的抗191P4D12抗体可以经化学修饰(例如，一个或多个化学部分可以连接到抗体上)或经修饰以改变其糖基化，再次改变抗体的一种或多种功能特性。下文进一步详细描述了这些实施方式中的每一个。
在一个实施方式中，CHI的铰链区经修饰，从而使铰链区中半胱氨酸残基的数目改变，例如增加或减少。该方法在Bodmer等的美国专利号5,677,425中进一步描述。例如，改变CH1铰链区中半胱氨酸残基的数量，以促进轻链和重链的组装或增加或降低抗191P4D12抗体的稳定性。
在另一实施方式中，抗体的Fc铰链区经突变，以减少抗191P4D12抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3结构域界面区域，从而使该抗体相对于天然Fc-铰链结构域SpA结合而言具有受损的葡萄球菌蛋白A(SpA)结合。该方法在Ward等的美国专利号6,165,745中进一步描述。
在另一个实施方式中，抗191P4D12抗体经修饰以增加其生物半衰期。各种方法都是可能的。例如，可以引入突变，如Ward的美国专利号6,277,375中所述。或者，为了增加生物半衰期，可以在CH1或CL区内改变抗体，以含有取自IgG的Fc区的CH2结构域的两个环的补救受体结合表位，如Presta等的美国专利号5,869,046和6,121,022所述。
在其他实施方式中，通过用不同的氨基酸残基替换至少一个氨基酸残基来改变Fc区以改变抗体的一种或多种效应功能。例如，可以用不同的氨基酸残基替换选自氨基酸特异性残基的一个或多个氨基酸，从而使抗体对效应配体的亲和力改变但保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。该方法在Winter等的美国专利号5,624,821和5,648,260中进一步描述。
抗191P4D12抗体与191P4D12相关蛋白的反应性可以通过多种众所周知的方式来建立，包括Western印迹、免疫沉淀、ELISA和FACS分析，适当时使用191P4D12相关蛋白、191P4D12-表达细胞或其提取物。191P4D12抗体或其片段可以用可检测标志物标记或与第二分子偶联。合适的可检测标志物包括但不限于：放射性同位素、荧光化合物、生物发光化合物、化学发光化合物、金属螯合剂或酶。此外，使用本领域公知的方法产生对两个或更多个191P4D12表位具有特异性的双特异性抗体。同源二聚抗体也可以通过本领域已知的交联技术产生(例如，Wolff等，CancerRes.53：2560-2565)。
在另一具体实施方式中，本文提供的抗191P4D12抗体是包含命名为
Ha22-2(2,4)6.1的抗体的重链和轻链的抗体。Ha22-2(2,4)6.1的重链由SEQ IDNO:7的第20个E残基至第466个K残基的氨基酸序列组成，而Ha22-2(2,4)6.1的轻链由SEQID NO:8序列的第23个D残基到236个C残基的氨基酸序列组成。
产生命名为Ha22-2(2,4)6.1的抗体的杂交瘤于2010年8月18日送自(通过联邦快递)美国典型培养物保藏中心(ATCC)，邮政信箱1549，弗吉尼亚州马纳萨斯20108并指定了登录号PTA-11267。
5.3.2细胞毒剂(药物单元)
在一些实施方式中，ADC包含与海兔毒素或海兔毒素肽类似物和衍生物奥瑞他汀偶联的抗体或其抗原结合片段(美国专利号5,635,483；5,780,588)。已知海兔毒素和奥瑞他汀干扰微管动力学、GTP水解和以及核和细胞***(Woyke等，(2001)Antimicrob.Agentsand Chemother.45(12):3580-3584)并具有抗癌(美国专利号5,663,149)和抗真菌活性(Pettit等，(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)。海兔毒素或奥瑞他汀药物单元可以通过肽药物单元的N(氨基)末端或C(羧基)末端连接抗体(WO02/088172)。
示例性的奥瑞他汀实施方式包括N-末端连接的单甲基奥瑞他汀药物单元DE和DF，公开于“Senter等，美国癌症研究协会会刊(Proceedings of the American Associationfor Cancer Research)，第45卷，摘要编号623，2004年3月28日提交并描述于美国专利公开号2005/0238649，其公开的全部内容通过引用明确地纳入。
在一些实施方式中，奥瑞他汀是MMAE(其中波浪线表示共价连接于抗体药物偶联物的接头)。
Figure BDA0003592694230000591
在一些实施方式中，包含MMAE和接头组件(本文进一步描述)的示例性实施方式具有下述结构(其中L代表抗体且p的范围为1至12)：
Figure BDA0003592694230000592
通常，可以通过在两个或多个氨基酸和/或肽片段之间形成肽键来制备基于肽的药物单元。例如，可以根据肽化学领域熟知的液相合成方法(参见，E.
Figure BDA0003592694230000593
和K.Lübke,“肽学(The Peptides)”,第1卷,第76-136页,1965,学术出版社(Academic Press))制备这类肽键。可以根据下述方法制备奥瑞他汀/尾海兔素：US 5635483；US 5780588；Pettit等(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465；Pettit等(1998)Anti-Cancer Drug Design 13:243-277；Pettit,G.R.,等.Synthesis,1996,719-725；Pettit等(1996)J.Chem.Soc.PerkinTrans.1 5:859-863；和Doronina(2003)Nat Biotechnol 21(7):778-784。
5.3.3接头
通常，抗体药物偶联物包含药物单元(例如MMAE)和抗体单元(例如抗191P4D12抗体或其抗原结合片段)之间的接头单元。在一些实施方式中，接头在胞内条件下是可裂解的，从而使接头的裂解在胞内环境中由抗体释放药物单元。在其他实施方式中，接头单元不可裂解的，并且例如，药物通过抗体降解而释放。
在一些实施方式中，接头可以通过存在于胞内环境中(例如，在溶酶体或内体或胞膜窖)的裂解剂进行裂解。接头可以是例如这样的肽基接头，其被胞内肽酶或蛋白酶裂解，包括但不限于溶酶体或内体蛋白酶。在一些实施方式中，肽基接头的长度为至少两个氨基酸或至少三个氨基酸。裂解剂可以包括组织蛋白酶B和D以及纤溶酶，已知所有这些都可以水解二肽药物衍生物，导致活性药物在靶细胞内释放(参见例如，Dubowchik和Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123)。最典型的是可被表达191P4D12的细胞中存在的酶裂解的肽基接头。例如，可以使用将被癌组织中高度表达的硫醇依赖性蛋白酶组织蛋白酶B裂解的肽基接头(例如，Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly接头(SEQ ID NO:15))。这类接头的其它示例述于例如美国专利号6,214,345，通过引用其全部内容将其纳入本文用于所有目的。在具体实施方式中，胞内蛋白酶裂解的肽基接头是Val-Cit接头或Phe-Lys接头(参见例如，美国专利号6,214,345，其描述了用Val-Cit接头合成多柔比星)。使用治疗剂的胞内蛋白水解释放的一个优点是当偶联时该试剂通常被减弱并且偶联物的血清稳定性通常很高。
在其它实施方式中，可裂解接头具有pH敏感性，即某些pH值下对水解敏感。通常，pH敏感性接头在酸性条件下水解。例如，可使用在溶酶体中可水解的酸不稳定性接头(如腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺式-乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等)。(参见例如，美国专利号5,122,368；5,824,805；5,622,929；Dubowchik和Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville等,1989,Biol.Chem.264:14653-14661.)。这样的接头在中性pH条件(例如血液中那些)下相对稳定，但是在低于pH 5.5或5.0(溶酶体的近似pH值)时不稳定。在某些实施方式中，可水解接头是硫醚接头(如通过酰腙键连接治疗剂的硫醚(参见例如，美国专利号5,622,929))。
在其它实施方式中，该接头在还原条件下可裂解(如二硫化物接头)。本领域已知多种二硫化物接头，包括例如，可用SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫)甲苯)、SPDB和SMPT形成的那些(参见例如，Thorpe等,1987,Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak等,刊于《免疫偶联物：癌症的放射成像和治疗中的抗体偶联物(Immunoconjugates:AntibodyConjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer)》(C.W.Vogel编,牛津大学出版社(Oxford U.Press),1987。还参见美国专利号4,880,935)。
在其它具体实施方式中，接头是丙二酸接头(Johnson等，1995，AnticancerRes.15:1387-93)、马来酰亚胺苯甲酰接头(Lau等，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10):1299-1304)或3’-N-酰胺类似物(Lau等，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10):1305-12)。
在其他实施方式中，接头单元不可裂解的，并且药物通过抗体降解而释放。(见美国公开号2005/0238649，通过引用其全部内容纳入本文用于所有目的)。
通常，接头基本上对胞外环境不敏感。如本文所用，在接头的上下文中，“对胞外环境基本上不敏感”指当抗体药物偶联物存在于胞外环境中(例如，在血浆中)时，抗体药物偶联物的样品中不超过约20％，通常不超过约15％，更通常不超过约10％，甚至更多通常不超过约5％、不超过约3％或不超过约1％的接头被裂解。例如，可以通过将抗体药物偶联物化合物与血浆赋予预定时间段(例如，2、4、8、16或24小时)然后对血浆中存在的游离药物的量进行定量确定接头是否对胞外环境基本上不敏感。
在其他非互斥的实施方式中，接头促进细胞内化。在某些实施方式中，在与治疗剂偶联时(即在如本文所述的抗体药物偶联物化合物的接头治疗剂部分的环境中)促进细胞内化。在其他实施方式中，当与奥瑞他汀化合物和抗191P4D12抗体或其抗原结合片段偶联时，接头促进细胞内化。
可用于本发明组合物和方法的多种示例性接头描述于WO2004-010957、美国公开号2006/0074008、美国公开号20050238649和美国公开号2006/0024317(其各自通过引用其全部内容纳入本文)。
“接头单元”(LU)是可用于连接药物单元和抗体单元以形成抗体药物偶联物的双功能化合物。在一些实施方式中，接头单元具有下式：
-Aa-Ww-Yy-
其中：-A-是延伸体单元，
a是0或1，
各-W-独立地为氨基酸单元，
w是0-12的整数，
-Y-是自毁型间隔单元，和
y是0、1或2。
在一些实施方式中，a是0或1，w是0或1，和y是0、1或2。在一些实施方式中，a是0或1，w是0或1，和y是0或1。在一些实施方式中，当w是1-12时，y是1或2。在一些实施方式中，w是2-12，和y是1或2。在一些实施方式中，a是1，和w和y是0。
5.3.3.1延伸体单元
当存在时，延伸体单元(A)能够将抗体单元与氨基酸单元(-W-)(如果存在)连接到间隔单元(-Y-)(如果存在)；或到药物单元(-D)。可以天然地或通过化学操作存在于抗191P4D12抗体或其抗原结合片段(例如Ha22-2(2,4)6.1)上的有用官能团包括但不限于：巯基、氨基、羟基、碳水化合物的异头羟基和羧基。合适的官能团是巯基和氨基。在一个实例中，巯基基团可以通过还原抗191P4D12抗体或其抗原结合片段的分子内二硫键来生成。在另一个实施方式中，巯基可以通过抗191P4D12抗体或抗原结合片段的赖氨酸部分的氨基基团与2-亚氨基硫杂环己烷(2-iminothiolane)(塔氏试剂(Traut’s reagent))或其他巯基生成试剂反应来生成。在某些实施方式中，抗191P4D12抗体或其抗原结合片段是重组抗体并且经工程改造以携带一个或多个赖氨酸。在某些其他实施方式中，重组抗191P4D12抗体经工程改造以携带其它巯基，例如，额外的半胱氨酸。
在一个实施方式中，延伸体单元与抗体单元的硫原子形成键。硫原子可以源自抗体的巯基。该实施方式的代表性延伸体单元在下述式IIIa和IIIb的方括号内描述，其中L-、-W-、-Y-、-D、w和y如上所定义，并且R17选自：-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烯基-、-C1-C10亚炔基-、碳环-、-O-(C1-C8亚烷基)-、O-(C1-C8亚烯基)-、-O-(C1-C8亚炔基)-、-亚芳基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-C2-C10亚烯基-亚芳基、-C2-C10亚炔基-亚芳基、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-亚芳基-C2-C10亚烯基-、-亚芳基-C2-C10亚炔基-、-C1-C10亚烷基-(碳环)-、-C2-C10亚烯基-(碳环)-、-C2-C10亚炔基-(碳环)-、-(碳环)-C1-C10亚烷基-、-(碳环)-C2-C10亚烯基-、-(碳环)-C2-C10亚炔基、-杂环-、-C1-C10亚烷基-(杂环)-、-C2-C10亚烯基-(杂环)-、-C2-C10亚炔基-(杂环)-、-(杂环)-C1-C10亚烷基-、-(杂环)-C2-C10亚烯基-、-(杂环)-C1-C10亚炔基-、-(CH2CH2O)r-或-(CH2CH2O)r-CH2-，并且r是1-10的整数，其中所述烷基、烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、芳基、碳环(carbocycle)、碳环(carbocyclo)、杂环和亚芳基，无论是单独的还是作为另一基团的部分，任选地被取代。在一些实施方式中，所述烷基、烯基、炔基、亚烷基、亚烯基、亚炔基、芳基、碳环、碳环、杂环和亚芳基，无论是单独的还是作为另一基团的部分，都是未取代的。
在一些实施方式中，R17选自：-C1-C10亚烷基-、-碳环-、-O-(C1-C8亚烷基)-、-亚芳基-、-C1-C10亚烷基-亚芳基-、-亚芳基-C1-C10亚烷基-、-C1-C10亚烷基-(碳环)-、-(碳环)-C1-C10亚烷基-、-C3-C8杂环-、-C1-C10亚烷基-(杂环)-、-(杂环)-C1-C10亚烷基-、-(CH2CH2O)r-和-(CH2CH2O)r-CH2-；并且r是1-10的整数，其中所述亚烷基基团未被取代并且所述基团的其余部分被任选地取代。
从所有示例性实施方式应理解的是，即使在未明确表示的情况下，1-20个药物单元也可连接至抗体单元(p＝1-20)。
Figure BDA0003592694230000621
示例性的延伸体单元是式IIIa的延伸体单元，其中R17是-(CH2)5-：
Figure BDA0003592694230000631
另一示例性的延伸体单元是式IIIa的延伸体单元，其中R17
是-(CH2CH2O)r-CH2-；并且r是2：
Figure BDA0003592694230000632
示例性的延伸体单元是式IIIa的延伸体单元，其中R17是亚芳基-或亚芳基-C1-C10亚烷基-。在一些实施方式中，芳基是未取代的苯基。
另一示例性延伸体单元是式IIIb的延伸体单元，其中R17是-(CH2)5-：
Figure BDA0003592694230000633
在某些实施方式中，延伸体单元通过抗体单元的硫原子和延伸体单元的硫原子之间的二硫键连接到抗体单元。该实施方式的代表性延伸体单元述于式IV的方括号内，其中R17、L-、-W-、-Y-、-D、w和y如上所定义。
Figure BDA0003592694230000634
应当注意到是，在本申请全文中，除非上下文另有说明，下式中的S部分指抗体单元的硫原子。
Figure BDA0003592694230000635
在本文中硫连接的ADC的某些结构描述中，抗体表示为“L”。其也可以表示为“Ab-S”。包含“S”仅表示硫键特征，并不表示特定硫原子具有多个接头-药物部分。使用“Ab-S”描述的结构的左括号也可以放置在硫原子的左侧，在Ab和S之间，这将是本文通篇描述的本发明的ADC的等效描述。
在其他实施方式中，延伸体单元包含可与抗体单元的伯氨基基团或仲氨基基团形成键的反应位点。这些反应位点的实例包括但不限于：活化的酯，例如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯、酸酐、酰氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯。该实施方式的代表性延伸体单元述于式Va和Vb的方括号内，其中-R17-、L-、-W-、-Y-、-D、w和y如上所定义。
Figure BDA0003592694230000641
在一些实施方式中，延伸体包含与修饰的碳水化合物的(-CHO)基团反应的反应位点，所述修饰的-CHO基团可存在于抗体单元上。例如，可以使用诸如高碘酸钠的试剂温和地氧化碳水化合物，并且可以使用延伸体浓缩所产生的氧化碳水化合物的(-CHO)单元，所述延伸体包含官能团，诸如酰肼、肟、伯胺和仲胺、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸盐/酯和芳酰肼，诸如Kaneko等,1991,Bioconjugate Chem.2:133-41中所述的那些。该实施方式的代表性延伸体单元述于式VIa、VIb和VIc的方括号内，其中-R17-、L-、-W-、-Y-、-D、w和y如上所定义。
Figure BDA0003592694230000642
5.3.3.2氨基酸单元
当存在时，氨基酸单元(-W-)将延伸体单元连接到间隔单元(如果间隔单元存在)，将延伸体单元连接到药物单元(如果间隔单元不存在)，和将抗体单元连接到药物单元(如果不存在延伸体单元和间隔单元)。
例如，Ww-可以是单肽、二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽、十肽、十一肽或十二肽单元。各-W-单元独立地具有以下方括号中表示的式，并且w为0到12之间的整数
Figure BDA0003592694230000651
其中R19是氢、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、苄基、对羟基苄基、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(＝NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、-(CH2)3NHCHO、-(CH2)4NHC(＝NH)NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、-(CH2)3NHCONH2、-(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-吡啶甲基-、3-吡啶甲基-、4-吡啶甲基-、苯基、环己基，
Figure BDA0003592694230000652
在一些实施方式中，可以通过一种或多种酶来酶促裂解氨基酸单元，包括癌症或肿瘤相关蛋白酶，以释放药物单元(-D)，其中在一个实施方式中，在体内释放时被质子化以提供药物(D)。
在某些实施方式中，氨基酸单元包含天然氨基酸。在其他实施方式中，氨基酸单元包含非天然氨基酸。说明性的Ww单元由下述式VII-IX表示：
Figure BDA0003592694230000661
其中R20和R21如下所示：
Figure BDA0003592694230000662
Figure BDA0003592694230000663
其中R20、R21和R22如下所示：
Figure BDA0003592694230000664
Figure BDA0003592694230000671
Figure BDA0003592694230000672
其中R20、R21、R22和R23如下所示：
R<sup>20</sup> R<sup>21</sup> R<sup>22</sup> R<sup>23</sup>
H 苄基 异丁基 H；和
甲基 异丁基 甲基 异丁基
示例性氨基酸单元包括但不限于上述式VII的单元，其中：R20是苄基和R21是-(CH2)4NH2；R20是异丙基和R21是-(CH2)4NH2；或R20是异丙基和R21是-(CH2)3NHCONH2。
另一个示例性氨基酸单元是式VIII的单元，其中R20是苄基，R21是苄基，和R22是-(CH2)4NH2。
可以设计有用的-Ww-单元并优化其对特定的酶进行的酶促切割的选择性，例如，肿瘤相关蛋白酶。在一个实施方式中，-Ww-单元是对其的裂解是由组织蛋白酶B、C和D或纤溶酶蛋白酶催化的单元。
在一个实施方式中，-Ww-是二肽、三肽、四肽或五肽。当R19、R20、R21、R22或R23不是氢时，R19、R20、R21、R22或R23连接的碳原子是手性的。
R19、R20、R21、R22或R23连接的每个碳原子独立地处于(S)或(R)构型。
在一个具体实施方式中，氨基酸单元是缬氨酸-瓜氨酸(vc或Val-Cit)。在另一个具体实施方式中，氨基酸单元是苯丙氨酸-赖氨酸(即fk)。在又一个具体实施方式中，氨基酸单元是N-甲基缬氨酸-瓜氨酸。在又一个具体的实施方式中，氨基酸单元是5-氨基戊酸、高苯丙氨酸赖氨酸、四异喹啉羧酸赖氨酸、环己基丙氨酸赖氨酸、异果胶酸赖氨酸、β-丙氨酸赖氨酸、甘氨酸丝氨酸缬氨酸谷氨酰胺和异果胶酸。
5.3.3.3间隔单元
当氨基酸单元存在时，间隔单元(-Y-)在存在时将氨基酸单元连接至药物单元。或者，当氨基酸单元不存在时，间隔单元将延伸体单元连接到药物单元。当氨基酸单元和延伸体单元都不存在时，间隔单元还将药物单元连接到抗体单元。
间隔单元有两种一般类型：非自毁型(non self-immolative)的或自毁型。非自毁型间隔单元是这样的间隔单元，其中部分或全部间隔单元在由抗体药物偶联物裂解，特别是酶促裂解氨基酸单元后保持与药物单元结合。非自毁型间隔单元的示例包括但不限于：(甘氨酸-甘氨酸)间隔单元和甘氨酸间隔单元(均在方案1中描述)(下文)。当含有甘氨酸-甘氨酸间隔单元或甘氨酸间隔单元的偶联物通过酶(例如，肿瘤细胞相关蛋白酶、癌细胞相关蛋白酶或淋巴细胞相关蛋白酶)进行酶切时，甘氨酸-甘氨酸-药物单元或甘氨酸-药物单元裂解自L-Aa-Ww-。在一个实施方式中，在靶细胞内发生独立的水解反应，裂解甘氨酸-药物单元键并释放药物。
方案1
Figure BDA0003592694230000681
在一些实施方式中，非自毁型间隔单元(-Y-)是-Gly-。在一些实施方式中，非自毁型间隔单元(-Y-)是-Gly-Gly-。
在一个实施方式中，不存在间隔单元(-Yy-，其中y＝0)。
或者，包含自毁型间隔单元的抗体药物偶联物可释放-D。如本文所用，术语“自毁型间隔物”指能够将两个间隔开的化学部分共价连接在一起形成稳定的三方分子的双功能化学部分。如果它与第一个部分的键断裂，它将自发地与第二个化学部分分离。
在一些实施方式中，-Yy-是对氨基苯甲醇(PAB)单元(参见方案2和3)，其的亚苯基部分被Qm取代，其中Q是-C1-C8烷基、-C1-C8烯基、-C1-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C1-C8烯基)、-O-(C1-C8炔基)、-卤素，-硝基或-氰基；和m是0-4的整数。烷基、烯基和炔基，无论是单独的还是作为另一个基团的部分，都可以任选地被取代。
在一些实施方式中，-Y-是PAB基团，其通过PAB基团的氨基氮原子连接到-Ww-，并通过碳酸酯、氨基甲酸酯或醚基团直接连接到-D。不受任何特定理论或机制的束缚，方案2描述了PAB基团的药物释放的可能机制，其通过氨基甲酸酯或碳酸酯基团直接连接到-D，如Toki等,2002,J.Org.Chem.67:1866-1872所述。
方案2
Figure BDA0003592694230000691
在方案2中，Q是-C1-C8烷基、-C1-C8烯基、-C1-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C1-C8烯基)、-O-(C1-C8炔基)、-卤素、-硝基或-氰基；m为0-4之间的整数；和p为1至约20。烷基、烯基和炔基，无论是单独的还是作为另一个基团的部分，都可以任选地被取代。
不受任何特定理论或机制的束缚，方案3描述了PAB基团的药物释放的可能机制，其通过醚或胺连接直接连接到-D，其中D包括部分药物单元的氧或氮基团。
方案3
Figure BDA0003592694230000701
在方案3中，Q是-C1-C8烷基、-C1-C8烯基、-C1-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C1-C8烯基)、-O-(C1-C8炔基)、-卤素、-硝基或-氰基；m为0-4之间的整数；和p为1至约20。烷基、烯基和炔基，无论是单独的还是作为另一个基团的部分，都可以任选地被取代。
自毁型间隔物的其他示例包括但不限于：在电子学上与PAB基团相似的芳族化合物，例如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(Hay等,1999,Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237)和邻或对氨基苄基缩醛。可以使用在酰胺键水解时经历环化的间隔物，例如取代和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等,1995,Chemistry Biology 2:223)，适当取代的双环[2.2.1]和双环[2.2.2]环***(Storm等,1972,J.Amer.Chem.Soc.94:5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry等,1990,J.Org.Chem.55:5867)。消除在甘氨酸的α位取代的含胺药物(Kingsbury等,1984,J.Med.Chem.27:1447)也是自毁型间隔物的示例。
在一个实施方式中，间隔单元是如方案4中描述的支化双(羟甲基)-苯乙烯(BHMS)单元，其可用于纳入和释放多种药物。
方案4
Figure BDA0003592694230000711
在方案4中，Q是-C1-C8烷基、-C1-C8烯基、-C1-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C1-C8烯基)、-O-(C1-C8炔基)、-卤素、-硝基或-氰基；m为0-4之间的整数；n为0或1；p的范围为1至约20。烷基、烯基和炔基，无论是单独的还是作为另一个基团的部分，都可以任选地被取代。
在一些实施方式中，-D单元是相同的。在另一个实施方式中，-D部分是不同的。
在一方面中，间隔单元(-Yy-)由式X-XII表示：
Figure BDA0003592694230000712
其中Q是-C1-C8烷基、-C1-C8烯基、-C1-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C1-C8烯基)、-O-(C1-C8炔基)、-卤素、-硝基或-氰基；m为0-4的整数。烷基、烯基和炔基，无论是单独的还是作为另一个基团的部分，都可以任选地被取代。
Figure BDA0003592694230000713
包含抗体药物偶联物化合物的式I和II的实施方式可以包括：
Figure BDA0003592694230000714
其中，w和y各自为0、1或2，和
Figure BDA0003592694230000721
其中，w和y各自为0，
Figure BDA0003592694230000722
5.3.3.4药物加载
载药加载由p表示并且是分子中各抗体的平均药物单位数。药物加载的范围可以为1-20个药物(D)/抗体。本文提供的ADC包括与一定范围的药物单位(例如1-20)偶联的抗体或抗原结合片段的集合。来自偶联反应的ADC制备物中各抗体的平均药物单位数可以通过常规方法表征，例如质谱和ELISA试验。也可以确定ADC在p方面的定量分布。在一些情况中，可以通过诸如电泳之类的手段实现对同质ADC的分离、纯化和表征，其中p是来自具有其他药物加载的ADC的特定值。
在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-20。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-18。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-15。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-12。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-10。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-9。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-8。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-7。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-6。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-5。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-4。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-3。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-12。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-10。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-9。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-8。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-7。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-6。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-5。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为2-4。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-12。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-10。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-9。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-8。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-7。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-6。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-5。在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为3-4。
在某些实施方式中，本文提供的ADC的药物加载的范围为1-约8；约2-约6；约3-约5；约3-约4；约3.1-约3.9；约3.2-约3.8；约3.2-约3.7；约3.2-约3.6；约3.3-约3.8；或约3.3-约3.7。
在某些实施方式中，本文提供的ADC的载药量为约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12或更多。在一些实施方式中，本文提供的ADC的载药量为约3.1、约3.2、约3.3、约3.4、约3.5、约3.6、约3.7、约3.8或约3.9。
在某些实施方式中，在偶联反应期间与抗体偶联的药物单元少于理论最大值。抗体可包含例如不与药物-接头中间体或接头试剂反应的赖氨酸残基。通常，抗体不包含可能与药物单元连接的多种游离和反应性半胱氨酸硫醇基团；实际上，抗体中的大多数半胱氨酸硫醇残基以二硫键的形式存在。在某些实施方式中，可以在部分或全部还原条件下用还原剂如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原抗体，以生成反应性半胱氨酸硫醇基团。在某些实施方式中，抗体经受变性条件以显示反应性亲核基团，例如赖氨酸或半胱氨酸。在一些实施方式中，接头单元或药物单元通过抗体单元上的赖氨酸残基偶联。在一些实施方式中，接头单元或药物单元通过抗体单元上的半胱氨酸残基偶联。
在一些实施方式中，连接接头单元或药物单元的氨基酸在抗体或其抗原结合片段的重链中。在一些实施方式中，连接接头单元或药物单元的氨基酸在抗体或其抗原结合片段的轻链中。在一些实施方式中，连接接头单元或药物单元的氨基酸在抗体或其抗原结合片段的铰链区中。在一些实施方式中，连接接头单元或药物单元的氨基酸在抗体或其抗原结合片段的Fc区中。在其它实施方式中，连接接头单元或药物单元的氨基酸在抗体或其抗原结合片段的恒定区(例如，重链CH1、CH2或CH2，或者轻链CH1)中。在其它实施方式中，连接接头单元或药物单元的氨基酸在抗体或其抗原结合片段的VH框架区中。在其它实施方式中，连接接头单元或药物单元的氨基酸在抗体或其抗原结合片段的VL框架区中。
ADC的加载(药物/抗体比)可以以不同方式控制，例如，通过：(i)限制药物-接头中间体或接头试剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制偶联反应时间或温度，(iii)半胱氨酸硫醇修饰的部分或限制性还原条件，(iv)通过重组技术改造抗体的氨基酸序列，从而修饰半胱氨酸残基的数量和位置用于控制接头-药物连接的数量和/或位置(例如按照本文和WO2006/034488(通过引用其全部内容纳入本文)中公开制备的thioMab或thioFab)。
应当理解的是，当超过一个亲核基团与药物-接头中间体或接头试剂，然后与药物单元试剂反应时，所得产物是ADC化合物的混合物，分布有与抗体单元连接的一种或多种药物单元。可以通过双重ELISA抗体试验由混合物计算各抗体的平均药物数量，其对抗体和药物具有特异性。混合物中的单个ADC分子可以通过质谱法鉴定并通过HPLC分离，例如，疏水相互作用色谱法(参见例如，Hamblett,K.J.,等“药物加载对抗CD30抗体-药物偶联物药理学、药代动力学和毒性的影响(Effect of drug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate),”摘要第624期,美国癌症研究协会(American Association for Cancer Research),2004年年会,2004年3月27-31日,AACR会议录,第45卷,2004年3月；Alley,S.C.,等“控制抗体-药物偶联物中药物连接的位置(Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates),”摘要第627号,美国癌症研究协会,2004年年会,2004年3月27-31日,AACR会议录,第45卷,2004年3月)。在某些实施方式中，可以通过电泳或色谱法由偶联混合物分离具有单一加载值的均质ADC。
本领域普通技术人员已知制备、筛选和表征抗体药物偶联物的方法，例如，如美国专利号8,637,642所述，其通过引用整体并入本文。
在一些实施方式中，本文提供的方法的抗体药物偶联物为AGS-22M6E，其根据美国专利号8,637,642中描述的方法制备，并具有下式：
Figure BDA0003592694230000751
其中，L为Ha22-2(2,4)6.1，和p为1-20。
在一些实施方式中，p的范围为1–20、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2。在一些实施方式中，p的范围为2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4或2-3。在其他实施方式中，p约为1。在其他实施方式中，p约为2。在其他实施方式中，p约为3。在其他实施方式中，p约为4。在其他实施方式中，p约为5。在其他实施方式中，p约为6。在其他实施方式中，p约为7。在其他实施方式中，p约为8。在其他实施方式中，p约为9。在其他实施方式中，p约为10。在其他实施方式中，p约为3.1。在其他实施方式中，p约为3.2。在其他实施方式中，p约为3.3。在其他实施方式中，p约为3.4。在其他实施方式中，p约为3.5。在其他实施方式中，p约为3.6。在其他实施方式中，p约为3.7。在其他实施方式中，p约为3.8。在其他实施方式中，p约为3.9。在其他实施方式中，p约为4.0。在其他实施方式中，p约为4.1。在其他实施方式中，p约为4.2。在其他实施方式中，p约为4.3。在其他实施方式中，p约为4.4。在其他实施方式中，p约为4.5。在其他实施方式中，p约为4.6。在其他实施方式中，p约为4.7。在其他实施方式中，p约为4.8。
在其他实施方式中，p约为4.9。在其他实施方式中，p约为5.0。
在一些实施方式中，本文提供的方法中使用的ADC是恩诺单抗维多汀。恩诺单抗维多汀是一种ADC，包含通过蛋白酶可切割的接头与微管破坏剂(MMAE)偶联的完全人免疫球蛋白G1-κ(IgG1K)抗体(Challita-Eid PM等人,Cancer Res.2016；76(10):3003-13)。恩诺单抗维多汀通过与细胞表面的191P4D12蛋白结合导致ADC-191P4D12复合物内化，然后该复合物进入溶酶体小室，其中MMAE通过蛋白水解切割接头而释放，从而诱导抗肿瘤活性。随后，MMAE的胞内释放将破坏微管蛋白聚合，导致G2/M期细胞周期停滞和凋亡性细胞死亡(Francisco JA等人，《血液》2003年8月15日；102(4)：1458-65)。
如上所述，在美国专利号8,637,642中，AGS-22M6E是一种源自鼠杂交瘤细胞系的ADC。恩诺单抗维多汀是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系衍生的AGS-22M6E ADC等效物，是用于人类治疗的典型产品。恩诺单抗维多汀与AGS-22M6E具有相同的氨基酸序列、接头和细胞毒性药物。通过广泛的分析和生物学表征研究，如与191P4D12的结合亲和力、体外细胞毒性和体内抗肿瘤活性，证实了恩诺单抗维多汀和AGS-22M6E之间的可比性。
5.4药物组合物
在本文提供的方法的某些实施方式中，方法中使用的ADC在“药物组合物”中提供。这样的药物组合物包括本文提供的抗体药物偶联物和一种或多种药学上可接受的或生理学上可接受的赋形剂。在某些实施方式中，抗体药物偶联物与一种或多种其它试剂组合或分开提供。还提供了一种组合物，其包含这样的一种或多种其它试剂和一种或多种药学上可接受的或生理学上可接受的赋形剂。在具体实施方式中，抗体药物偶联物和一种或多种其它试剂以治疗上可接受的量存在。可以根据本文提供的方法和用途使用药物组合物。因此，例如，药物组合物可以离体或体内给予对象，从而实施本文提供的治疗方法和用途。本文提供的药物组合物可以配制成与预期给药方法或途径相容；示例性的给药途径在本文中阐述。
在一些实施方式中，提供了调控癌症或肿瘤的抗体药物偶联物的药物组合物。
在本文提供的方法的某些实施方式中，包含ADC的药物组合物可进一步包含本文公开或本领域技术人员已知的其他治疗活性剂或化合物，其可用于治疗或预防本文所述的各种疾病和紊乱(例如癌症)。如上所述，其它治疗活性剂或化合物可以存在于一种或多种单独的药物组合物中。
药物组合物通常包含治疗有效量的本文提供的至少一种抗体药物偶联物和一种或多种药学上可接受的制剂试剂。在某些实施方式中，药物组合物进一步包含本文所述的一种或多种其它试剂。
在一个实施方式中，药物组合物包含本文提供的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含治疗有效量的本文提供的抗体药物偶联物。在某些实施方式中，药物组合物包含药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物选自下文第5.3部分中描述的抗体药物偶联物。
在某些实施方式中，药物组合物包含浓度为0.1-100mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为1-20mg/mL的抗体药物偶联物。在其它实施方式中，药物组合物包含浓度为5-15mg/mL的抗体药物偶联物。在其它实施方式中，药物组合物包含浓度为8-12mg/mL的抗体药物偶联物。在其它实施方式中，药物组合物包含浓度为9-11mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约9.5mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约9.6mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约9.7mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约9.8mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约9.9mg/mL的抗体药物偶联物。在其它实施方式中，药物组合物包含浓度为约10mg/mL的抗体药物偶联物。在其它实施方式中，药物组合物包含浓度为约10.1mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约10.2mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约10.3mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约10.3mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约10.4mg/mL的抗体药物偶联物。在一些实施方式中，药物组合物包含浓度为约10.5mg/mL的抗体药物偶联物。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物包含：
L-组氨酸、吐温-20和海藻糖二水合物或蔗糖中的至少一种。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物还包含盐酸(HCl)或琥珀酸。
在一些实施方式中，用于本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度范围为5-50mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度范围为10-40mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度范围为15-35mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度范围为15-30mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度范围为15-25mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度范围为15-35mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约16mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约17mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约18mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约19mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约20mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约21mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约22mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约23mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约24mM。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物中的L-组氨酸的浓度为约25mM。
在一些实施方式中，用于本文提供的药物组合物中的吐温-20的浓度范围为0.001-0.1％(v/v)。在其它实施方式中，吐温-20的浓度范围为约0.0025-0.075％(v/v)。在一个实施方式中，吐温-20的浓度范围为约0.005-0.05％(v/v)。在其它实施方式中，吐温-20的浓度范围为约0.0075-0.025％(v/v)。在其它实施方式中，吐温-20的浓度范围为约0.0075-0.05％(v/v)。在其它实施方式中，吐温-20的浓度范围为约0.01-0.03％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.01％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.015％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.016％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.017％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.018％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.019％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.02％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.021％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.022％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.023％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.024％(v/v)。在一个具体实施方式中，吐温-20的浓度为约0.025％(v/v)。
在一个实施方式中，用于本文提供的药物组合物中的海藻糖二水合物的浓度范围为1％-20％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度范围为约2％-15％(w/v)。在一个实施方式中，海藻糖二水合物的浓度范围为约3％-10％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度范围为约4％-9％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度范围为约4％-8％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度范围为约4％-7％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度范围为约4％-6％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度范围为约4.5％-6％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约4.6％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约4.7％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约4.8％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约4.9％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.0％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.1％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.2％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.3％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.4％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.5％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.6％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.7％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.8％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约5.9％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约6.0％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约6.1％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约6.2％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约6.3％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约6.4％(w/v)。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的浓度为约6.5％(w/v)。
在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为50-300mM。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为75-250mM。在一些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为100-200mM。在其它实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为130-150mM。在一些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为135-150mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约135mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约136mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约137mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约138mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约139mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约140mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约141mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约142mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约143mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约144mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约145mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约146mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约150mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约151mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约151mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约152mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约153mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约154mM。在某些实施方式中，海藻糖二水合物的摩尔浓度为约155mM。
在一个实施方式中，用于本文提供的药物组合物中的蔗糖的浓度范围为1％-20％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度范围为约2％-15％(w/v)。在一个实施方式中，蔗糖的浓度范围为约3％-10％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度范围为约4％-9％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度范围为约4％-8％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度范围为约4％-7％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度范围为约4％-6％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度范围为约4.5％-6％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约4.6％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约4.7％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约4.8％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约4.9％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.0％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.1％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.2％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.3％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.4％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.5％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.6％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.7％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.8％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约5.9％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约6.0％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约6.1％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约6.2％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约6.3％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约6.4％(w/v)。在其它实施方式中，蔗糖的浓度为约6.5％(w/v)。
在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为50-300mM。在其它实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为75-250mM。在一些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为100-200mM。在其它实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为130-150mM。在一些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为135-150mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约135mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约136mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约137mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约138mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约139mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约140mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约141mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约142mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约143mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约144mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约145mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约146mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约150mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约151mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约151mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约152mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约153mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约154mM。在某些实施方式中，蔗糖的摩尔浓度为约155mM。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物包含HCl。在其它实施方式中，本文提供的药物组合物包含琥珀酸。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物具有5.5-6.5的pH。在其它实施方式中，本文提供的药物组合物的pH范围为5.7-6.3。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物的pH为约5.7。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物的pH为约5.8。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物的pH为约5.9。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物的pH为约6.0。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物的pH为约6.1。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物的pH为约6.2。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物的pH为约6.3。
在一些实施方式中，pH取自室温下。在其它实施方式中，pH取自约15℃-27℃下。在其它一些实施方式中，pH取自4℃下。在其它一些实施方式中，pH取自25℃下。
在一些实施方式中，pH通过HCl调节。在一些实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为5.5-6.5。在一些实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为5.7-6.3。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为约5.7。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为约5.8。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为约5.9。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.0。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.1。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.2。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.3。
在一些实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为5.5-6.5。在一些实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为5.7-6.3。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约5.7。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约5.8。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约5.9。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.0。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.1。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.2。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含HCl，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.3。
在一些实施方式中，pH通过琥珀酸调节。在一些实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为5.5-6.5。在一些实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为5.7-6.3。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为约5.7。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为约5.8。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为约5.9。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.0。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.1。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.2。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在室温下的pH范围为约6.3。
在一些实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为5.5-6.5。在一些实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为5.7-6.3。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约5.7。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约5.8。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约5.9。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.0。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.1。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.2。在一些更具体的实施方式中，药物组合物包含琥珀酸，并且药物组合物在15℃-27℃下的pH范围为约6.3。
在一些具体实施方式中，本文提供的药物组合物包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，和约5.5％(w/v)海藻糖二水合物或约5％(w/v)蔗糖中的至少一种。在一些实施方式中，本文提供的药物组合物还包含HCl或琥珀酸。在一些实施方式中，pH在室温下为约6.0。在一些实施方式中，pH在25℃下为约6.0。
在一些具体实施方式中，本文所提供的药物组合物包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，约5.5％(w/v)海藻糖二水合物和HCl。在一些实施方式中，pH在室温下为约6.0。在一些实施方式中，pH在25℃下为约6.0。
在一些具体实施方式中，本文所提供的药物组合物包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，约5％(w/v)蔗糖和HCl。在一些实施方式中，pH在室温下为约6.0。在一些实施方式中，pH在25℃下为约6.0。
在其它具体实施方式中，本文所提供的药物组合物包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，约5.5％(w/v)海藻糖二水合物和琥珀酸。在一些实施方式中，pH在室温下为约6.0。在一些实施方式中，pH在25℃下为约6.0。
在一些具体实施方式中，本文所提供的药物组合物包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，约5％(w/v)蔗糖和琥珀酸。在一些实施方式中，pH在室温下为约6.0。在一些实施方式中，pH在25℃下为约6.0。
在具体实施方式中，本文提供的包含：
(a)包含下述结构的抗体药物偶联物：
Figure BDA0003592694230000831
其中L-代表抗体或其抗原结合片段，并且p是1-10；和
(b)药学上可接受的赋形剂，其包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，约5.5％(w/v)海藻糖二水合物和HCl，其中抗体药物偶联物的浓度为约10mg/mL，并且其中pH在25℃下为约6.0。
在另一具体实施方式中，本文提供的药物组合物包含：
(a)包含下述结构的抗体药物偶联物：
Figure BDA0003592694230000832
其中L-代表抗体或其抗原结合片段，并且p是1-10；和
(b)药学上可接受的赋形剂，其包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，约5.5％(w/v)海藻糖二水合物和琥珀酸，
其中抗体药物偶联物的浓度为约10mg/mL，并且其中pH在25℃下为约6.0。
在另一具体实施方式中，本文提供的药物组合物包含：
(a)包含下述结构的抗体药物偶联物：
Figure BDA0003592694230000841
其中L-代表抗体或其抗原结合片段，并且p是1-10；和
(b)药学上可接受的赋形剂，其包含约20mM L-组氨酸，约0.02％(w/v)吐温-20，约5.0％(w/v)蔗糖和HCl，
其中抗体药物偶联物的浓度为约10mg/mL，并且其中pH在25℃下为约6.0。
虽然提供了某些数字(及其数值范围)，但应理解的是，在某些实施方式中，所述数字(或数值范围)内，例如，2％、5％、10％、15％或20％的数值也被考虑在内。下述实验部分中提供了其他示例性的药物组合物。
载剂中的主要溶剂本质上可以是水性的或非水性的。此外，载剂可以含有其他药学上可接受的赋形剂，用于改变或维持药物组合物的pH、渗透压、粘度、无菌性或稳定性。在某些实施方式中，药学上可接受的载剂是水性缓冲液。在其他实施方式中，载剂包括例如氯化钠和/或柠檬酸钠。
本文提供的药物组合物还可以包含其他药学上可接受的制剂，用于改变或维持抗体药物偶联物和/或其它试剂的释放速率，如本文所述。这类制剂包括在制备缓释制剂为本领域技术人员已知的物质。关于药学上和生理学上可接受的制剂的进一步参考，参见例如，《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Sciences),第18版(1990,宾夕法尼亚州伊斯顿的麦克出版公司(Mack Publishing Co.)18042)第1435-1712页，《默克索引》(The Merck Index),第12版(1996,新泽西州怀特豪斯的默克出版集团公司(MerckPublishingGroup))；和《固体剂型的药学原理》(Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms)(1993,宾夕法尼亚州兰卡斯特的泰克尼克出版有限公司(Technonic PublishingCo.,Inc.Lancaster,Pa))。适用于给药的其他药物组合物是本领域已知的并且适用于本文提供的方法和组合物。
一些实施方式中，本文提供的药物组合物呈液体形式。在其它实施方式中，本文提供的药物组合物是冻干的。
可以将药物组合物配制成与其预定的给药途径相容。因此，药物组合物包括适合通过包括肠胃外(例如，皮下(s.c.)、静脉内、肌肉内或腹膜内)、皮内、口服(例如，摄入)、吸入、腔内、颅内和经皮(局部)的途径给药的赋形剂。其他示例性给药途径在本文中示出。
药物组合物可以是无菌可注射水性或油性悬浮液的形式。可以使用本文公开的或本领域技术人员已知的合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制该悬浮液。无菌注射制剂也可以是配制在无毒的肠胃外可接受稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如配制在1,3-丁二醇中的溶液剂。可以采用的可接受的稀释剂、溶剂和分散介质包括：水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液、Cremophor ELTM(巴斯夫公司(BASF)，新泽西州的帕西帕尼)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)，和其合适的混合物。此外，常将无菌的非挥发油用作溶剂或悬浮介质。为此，可采用各种低刺激非挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，注射剂的制备中还用到脂肪酸如油酸。通过包括延缓吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)，可以实现特定可注射制剂的延长吸收。
在一个实施方式中，本文提供的药物组合物可以通过注射、输注或植入来肠胃外给予，用于局部或全身给药。如本文所用，肠胃外给药包括静脉内、动脉内、腹膜内、鞘内、心室内、尿道内、胸骨内、颅内、肌肉内、滑膜内和皮下给药。
在一个实施方式中，本文提供的药物组合物可以配制成适合肠胃外给药的任何剂型，包括溶液、混悬液、乳剂、胶束、脂质体、微球、纳米***和适用于注射前液体中的溶液或悬浮物的固体形式。这类剂型可根据药物科学技术领域技术人员已知的常规方法制备(参见例如，雷明顿：药物科学与实践(Remington:The Science and Practice of Pharmacy),引用如上)。
在一个实施方式中，旨在用于肠胃外给药的药物组合物可以包括一种或多种药学上可接受的赋形剂，包括但不限于，水性载剂，水混溶性载剂，非水性载剂，抗微生物生长的防腐剂或抗微生物剂，稳定剂、溶解度增强剂，等渗剂，缓冲剂，抗氧化剂，局部麻醉剂，悬浮剂和分散剂，润湿剂或乳化剂，复合剂，掩蔽剂或螯合剂，冷冻保护剂，冻干保护剂，增稠剂，pH调节剂和惰性气体。
在一个实施方式中，合适的水性载剂包括但不限于：水、盐水、生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、氯化钠注射液、林格注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖和乳酸林格注射液。非水性载剂包括但不限于植物来源的固定油，蓖麻油，玉米油，棉籽油，橄榄油，花生油，薄荷油，红花油，芝麻油，大豆油，氢化植物油，氢化大豆油、椰子油中链甘油三酯和棕榈籽油。水混溶性载剂包括但不限于：乙醇，1,3-丁二醇，液体聚乙二醇(例如，聚乙二醇300和聚乙二醇400)、丙二醇、甘油、N-甲基-2-吡咯烷酮、N,N-二甲基乙酰胺和二甲基亚砜。
在一个实施方式中，合适的抗微生物剂或防腐剂包括但不限于：苯酚、甲酚、汞、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵(例如，苄索氯铵)、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯和山梨酸。合适的等渗剂包括但不限于：氯化钠、甘油和葡萄糖。合适的缓冲剂包括但不限于磷酸盐和柠檬酸盐。合适的抗氧化剂是如本文所述的那些，包括亚硫酸氢盐和焦亚硫酸钠。合适的局部麻醉剂包括但不限于盐酸普鲁卡因。合适的悬浮剂和分散剂是如本文所述的那些，包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。合适的乳化剂包括本文所述的那些，包括聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯80和油酸三乙醇胺。合适的掩蔽剂或螯合剂包括但不限于EDTA。合适的pH调节剂包括但不限于：氢氧化钠、盐酸、柠檬酸和乳酸。合适的复合剂包括但不限于：环糊精，包括α-环糊精，β-环糊精，羟丙基-β-环糊精，磺丁基醚-β-环糊精和磺基丁基醚7-β-环糊精(
Figure BDA0003592694230000861
CyDex、Lenexa、KS)。
在一个实施方式中，本文提供的药物组合物可以配制用于单剂量或多剂量给药。单剂量制剂包装在安瓿、小瓶或注射器中。多剂量肠胃外制剂可包含抑菌或抑真菌浓度的抗微生物剂。如本领域已知和实践，所有肠胃外制剂必须是无菌的。
在一个实施方式中，药物组合物作为即用型无菌溶液提供。在另一个实施方式中，药物组合物作为无菌干燥可溶性产品提供，包括冻干粉末剂和皮下注射片剂，在使用前经载剂重建。在另一个实施方式中，药物组合物作为即用型无菌悬浮液提供。在另一个实施方式中，药物组合物作为无菌干燥不溶性产品提供，在使用前经载剂重建。在另一个实施方式中，药物组合物作为即用型无菌乳剂提供。
在一个实施方式中，本文提供的药物组合物可以配制成即用或改良释放剂型，包括延迟释放、持续释放、脉冲释放、控制释放、靶向释放和程序化释放形式。
适用于通过加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供活性成分，其与分散剂或湿润剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合。合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂的例子在本文进行列举。
药物组合物可以还包含赋形剂，以保护化合物不被身体快速降解或清除，例如控释配方，包括植入物、脂质体、水凝胶、前药和微囊化递送***。例如，可以单独使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯，或与蜡组合使用。通过包括延缓吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)，可以实现可注射药物组合物的延长吸收。也可通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)实现防止微生物的作用。
本文所提供的药物组合物储存于-80℃、4℃、25℃或37℃。
冻干组合物可以通过冷冻干燥本文提供的液体药物组合物来制备。在具体实施方式中，此处提供的药物组合物是冻干的药物组合物。在一些实施方式中，药物制剂是冻干粉末，其可以被重建以溶液，乳液和其它混合物的形式给药。它们也可以被重建并配制成固体或凝胶。
在一些实施方式中，本文提供的冻干制剂的制备涉及配制用于冻干的大量溶液，无菌过滤，填充小瓶，在冻干室中冷冻小瓶，然后冻干、加塞和加盖。
冻干剂可用于制备冻干制剂。例如，可以采用VirTis Genesis Model EL试验单元。该装置纳入带有三个工作架的室(总可用架面积约为0.4平方米)、外部冷凝器和机械真空泵***。级联机械制冷允许将架冷却至-70℃或更低，并将外部冷凝器冷却至-90℃或更低。支架温度和室压力分别自动控制为+/-0.5℃和+/-2微米(毫托)。该装置配备有电容式压力计真空计，皮拉尼真空计，压力传感器(测量从0到1个大气压)和相对湿度传感器。
通过将本文提供的抗体药物偶联物或其药学上可接受的衍生物溶解在合适的溶剂中可以制备冻干粉末。在一些实施方式中，冻干粉末是无菌的。所需的制剂由依次无菌过滤溶液随后在本领域技术人员已知的标准条件下冻干而提供。在一个实施方式中，所得溶液将分配到小瓶中用于冻干。各小瓶将包含单剂量或多剂量的抗体药物偶联物。冻干粉末可在适当条件下储存，如在约4℃至室温下。
用注射用水重建该冻干粉末可提供用于肠胃外给药的制剂。为了重建，将冻干粉末添加到无菌水或其他合适的赋形剂中。该量可根据具体需要凭经验确定和调整。
示例性的重建程序说明如下：(1)将具有18或20号针头的5mL或3mL注射器安装并用注射用水(WFI)级的水填充注射器；(2)用注射器刻度测量适量的注射用水，确保注射器没有气泡；(3)将针头穿过橡皮塞；(4)将注射器的全部内容物沿小瓶壁向下分配到容器中，取出注射器和针头并放入锋利的容器中；(4)连续摇动小瓶以小心地溶解整个小瓶内容物直到完全重建(例如，大约20-40秒)，并尽量减少可能导致起泡的蛋白质溶液的过度搅拌。
5.5在联合治疗中使用药物组合物的方法
使用本文提供的药物组合物联合化疗或辐射或两者抑制肿瘤细胞生长的方法包括在开始化疗或放疗之前、期间或之后，以及它们的任何组合时给予本发明的药物组合物(即在开始化疗和/或放疗之前和期间、之前和之后、期间和之后、或之前、期间和之后)。取决于治疗方案和特定患者的需求，该方法以提供最有效治疗并最终延长患者生命的方式进行。
化疗剂的给予可以多种方式完成，包括通过肠胃外和肠内途径全身给药。在一个实施方式中，单独给予化疗剂。化疗剂或化疗的具体示例包括顺铂、达卡巴嗪(DTIC)、放线菌素D、二氯甲基二乙胺(氮芥)、链脲菌素、环磷酰胺、卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、多柔比星(阿霉素)、柔红霉素、丝裂霉素、阿糖孢苷、依托泊苷、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、长春碱、长春新碱、博来霉素、卡培他滨(紫杉醇)、多西他赛(泰索帝)、阿地白介素、天冬酰胺酶、白消安、卡铂、克拉屈滨、达卡巴嗪、氟尿苷、氟达拉滨、羟基脲、异环磷酰胺、干扰素α、亮丙瑞林、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、普卡霉素、米托坦、培门冬酶、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、链脲佐菌素、他莫昔芬、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、噻替哌、尿嘧啶芥、长春瑞滨、吉西他滨、苯丁酸氮芥、紫杉醇和其组合。
与本文提供的药物组合物组合使用的辐射源可以在正在治疗的患者的外部或内部。当该源在患者外部时，这种疗法称为外照射放射疗法(EBRT)。当该辐射源在患者内部时，这种治疗称为近距离放射治疗(BT)。
上述治疗方案可以进一步与另外的癌症治疗剂和/或方案组合，例如，其它化疗，癌症疫苗，信号转导抑制剂，能够用于治疗异常细胞生长或癌症的试剂，抗体(例如抗-CTLA-4抗体，如WO/2005/092380(辉瑞公司(Pfizer))中所述)或通过接合IGF-1R和细胞因子来抑制肿瘤生长的其他配体。
当哺乳动物接受其它化疗时，可以使用上述化疗剂。此外，可以使用生长因子抑制剂，生物学反应调节剂，抗激素疗法，选择性***受体调节剂(SERM)，血管生成抑制剂和抗雄激素。例如，可以使用抗激素，例如抗***，如Nolvadex(他莫昔芬)或抗雄激素如Casodex(4'-氰基-3-(4-氟苯基磺酰基)-2-羟基-2-甲基-3-'-(三氟甲基)丙酰苯胺)。
在一些实施方式中，本文提供的药物与第二治疗剂联用，例如用于治疗癌症。
在一些实施方式中，第二治疗剂是免疫检查点抑制剂。如本文所用，术语“免疫检查点抑制剂”或“检查点抑制剂”是指完全或部分减少，抑制，干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。受特定理论的限制，检查点蛋白调节T细胞激活或功能。已知多种检查点蛋白，例如CTLA-4及其配体CD80和CD86；和PD-1及其配体PD-L1和PD-L2(Pardoll,NatureReviews Cancer,2012,12,252-264)。这些蛋白质看来负责T细胞反应的共刺激性或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白看来调节并维持自我耐受性以及生理免疫应答的持续时间和幅度。免疫检查点抑制剂包括抗体或源自抗体。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是CTLA-4抑制剂。在一个实施方式中，CTLA-4抑制剂是抗CTLA-4抗体。抗CTLA-4抗体的示例包括但不限于下述美国专利号中描述中的那些：5,811,097；5,811,097；5,855,887；6,051,227；6,207,157；6,682,736；6,984,720；和7,605,238，所有这些通过引用其全部内容纳入。在一个实施方式中，抗CTLA-4抗体是特姆单抗(tremelimumab)(也称为替西单抗(ticilimumab)或CP-675,206)。在一个实施方式中，抗CTLA-4抗体是伊匹单抗(ipilimumab)(也称为MDX-010或MDX-101)。伊匹单抗是接合CTLA-4的完全人单克隆IgG抗体。伊匹单抗以商品名YervoyTM销售。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是PD-1/PD-L1抑制剂。PD-l/PD-L1抑制剂的示例包括但不限于：美国专利号7,488,802；7,943,743；8,008,449；8,168,757；8,217,149，和PCT专利公开号WO2003042402，WO2008156712，WO2010089411，WO2010036959，WO2011066342，WO2011159877，WO2011082400和WO2011161699，其全部通过引用其全部内容纳入本文。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是PD-1抑制剂。在一个实施方式中，PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。在一个实施方式中，抗PD-1抗体是BGB-A317，纳武单抗(也称之为ONO-4538、BMS-936558或MDX1106)或派姆单抗(也称之为MK-3475、SCH 900475或兰博利珠单抗(lambrolizumab))。在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是纳武单抗。纳武单抗是一种人IgG4抗PD-1单克隆抗体，以商品名OpdivoTM销售。在另一个实施方式中，抗PD-1抗体是派姆单抗。派姆单抗是一种人源化单克隆IgG4抗体，并以商品名KeytrudaTM销售。在又一个实施方式中，抗PD-1抗体是CT-011，一种人源化抗体。单独给予的CT-011未能在治疗复发的急性髓性白血病(AML)中显示出响应。在又一实施方式中，抗PD-1抗体是AMP-224，一种融合蛋白。在另一实施方式中，PD-1抗体是BGB-A317。BGB-A317是一种单克隆抗体，其中结合Fcγ受体I的能力被专门设计出来，并且具有与PD-1的独特结合特征，具有高亲和力和卓越的靶标特异性。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是PD-Ll抑制剂。在一个实施方式中，PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。在一个实施方式中，抗PD-L1抗体是MEDI4736(度伐鲁单抗(durvalumab))。在另一实施方式中，抗PD-L1抗体是BMS-936559(也称为MDX-1105-01)。在另一实施方式中，PD-L1抑制剂是阿特朱单抗(也称为MPDL3280A和
Figure BDA0003592694230000891
)。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是PD-L2抑制剂。在一个实施方式中，PD-L2抑制剂是抗PD-L2抗体。在一个实施方式中，抗PD-L2抗体是rHIgM12B7A。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)抑制剂。在一个实施方式中，LAG-3抑制剂是IMP321，一种可溶性Ig融合蛋白(Brignone等,J.Immunol.,2007,179,4202-4211)。在一个实施方式中，LAG-3抑制剂是BMS-986016。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是B7抑制剂。在一个实施方式中，B7抑制剂是B7-H3抑制剂或B7-H4抑制剂。在一个实施方式中，B7-H3抑制剂是MGA271，一种抗B7-H3抗体(Loo等,Clin.Cancer Res.,2012,3834)。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是TIM3(T-细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域3)抑制剂(Fourcade等,J.Exp.Med.,2010,207,2175-86；Sakuishi等,J.Exp.Med.,2010,207,2187-94)。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是OX40(CD134)激动剂。在一个实施方式中，检查点抑制剂是抗OX40抗体。在一个实施方式中，抗OX40抗体是抗OX-40。在另一个实施方式中，抗OX40抗体是MEDI6469。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是GITR激动剂。在一个实施方式中，检查点抑制剂是抗GITR抗体。在一个实施方式中，抗GITR抗体是TRX518。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是CD137激动剂。在一个实施方式中，检查点抑制剂是抗CD137抗体。在一个实施方式中，抗CD137抗体是乌鲁单抗(urelumab)。在一个实施方式中，抗CD137抗体是PF-05082566。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是CD40激动剂。在一个实施方式中，检查点抑制剂是抗CD40抗体。在一个实施方式中，抗CD40抗体是CF-870,893。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是重组人白介素-15(rhIL-15)。
在一个实施方式中，检查点抑制剂是IDO抑制剂。在一个实施方式中，IDO抑制剂是INCB024360。在一个实施方式中，IDO抑制剂是吲哚莫德(indoximod)。
在某些实施方式中，本文提供的联合疗法包括两种或更多种本文所述的检查点抑制剂(包括相同或不同类别的检查点抑制剂)。此外，本文所述的联合疗法可与本文所述的一种或多种第二活性剂组合使用，其中适用于治疗本文所述的和本领域理解的疾病。
在一些实施方式中，在给予本药物组合物之前给予检查点抑制剂。在其他实施方式中，检查点抑制剂与本文提供的药物组合物同时(例如，以相同的给药周期)给予。在其他实施方式中，在给予本文提供的药物组合物之后给予检查点抑制剂。
在一些实施方式中，检查点抑制剂的量可以通过标准临床技术确定。
可以给予人这样的检查点抑制剂剂量用于预防和/或治疗癌症，所述免疫检查点抑制剂剂量导致约0.1μg/ml-约450μg/ml，并且在一些实施方式中，为至少0.1μg/ml、至少0.2μg/ml、至少0.4μg/ml、至少0.5μg/ml、至少0.6μg/ml、至少0.8μg/ml、至少1μg/ml、至少1.5μg/ml,such as at least 2μg/ml、至少5μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少30μg/ml、至少35μg/ml、至少40μg/ml、至少50μg/ml、至少75μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少200μg/ml、至少250μg/ml、至少300μg/ml、至少350μg/ml、至少400μg/ml或至少450μg/ml的血清效价。应当理解的是，检查点抑制剂将采用的精确剂量还将取决于给药途径和对象癌症的严重程度，并且应根据从业者的判断和各个患者的情况来决定。
在一些实施方式中，给予患者的检查点抑制剂(例如，PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂)的剂量通常为对象体重的0.1mg/kg-100mg/kg。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约1mg/kg-约75mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为1mg/kg-20mg/kg对象体重，诸如1mg/kg-5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约1mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约1.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约2mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约2.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约3mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约3.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约4mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约4.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约5.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约6mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约6.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约7mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约7.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约8mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约8.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约9.0mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约10.0mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约15.0mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约20.0mg/kg对象体重。
在一些实施方式中，本文提供的药物组合物以密封的容器内的干燥的冻干粉末或无水浓缩物提供并可以经重建，例如，用水或盐水，至对于给予对象合适的浓度。在某些实施方式中，抗体药物偶联物以密封容器内下述单位剂型的干燥的冻干的粉末或无水浓缩物提供：至少0.1mg、至少0.5mg、至少1mg、至少2mg或至少3mg，如至少5mg、至少10mg、至少15mg、至少25mg、至少30mg、至少35mg、至少45mg、至少50mg、至少60mg、至少75mg、至少80mg、至少85mg、至少90mg、至少95mg或至少100mg。冻干的抗体药物偶联物可以2-8℃储存于其原始容器内，而抗体药物练武可以在重建后12小时内给予，诸如6小时内，5小时内、3小时内或1小时内。在另一实施方式中，包含本文提供的抗体药物偶联物的药物组合物以密封容器中的液体形式提供，指明抗体药物偶联物的浓度和量。在某些实施方式中，抗体药物偶联物的液体形式在密封容器这样提供：至少0.1mg/ml、至少0.5mg/ml或至少1mg/ml，并且如至少5mg/ml、至少10mg/ml、至少15mg/ml、至少25mg/ml、至少30mg/ml、至少40mg/ml、至少50mg/ml、至少60mg/ml、至少70mg/ml、至少80mg/ml、至少90mg/ml或至少100mg/ml。
5.6方法的ADC剂量
在一些实施方式中，将在预防和/或治疗癌症中有效的本文所提供的预防性或治疗性试剂(例如，本文所提供的抗体药物偶联物)或组合物的量可以通过标准临床技术确定。
因此，可以给予人这样的药物组合物中抗体药物偶联物的剂量用于预防和/或治疗癌症，所述药物组合物中抗体药物偶联物的剂量导致约0.1μg/ml-约450μg/ml，并且在一些实施方式中，为至少0.1μg/ml、至少0.2μg/ml、至少0.4μg/ml、至少0.5μg/ml、至少0.6μg/ml、至少0.8μg/ml、至少1μg/ml、至少1.5μg/ml，例如至少2μg/ml、至少5μg/ml、至少10μg/ml、至少15μg/ml、至少20μg/ml、至少25μg/ml、至少30μg/ml、至少35μg/ml、至少40μg/ml、至少50μg/ml、至少75μg/ml、至少100μg/ml、至少125μg/ml、至少150μg/ml、至少200μg/ml、至少250μg/ml、至少300μg/ml、至少350μg/ml、至少400μg/ml或至少450μg/ml的血清效价。应当理解的是，将在制剂中采用的精确剂量还将取决于给药途径和对象癌症的严重程度，并且应根据从业者的判断和各个患者的情况来决定。
有效剂量可从体外或动物模型测试***所得剂量响应曲线外推。
对于本文所提供的包含抗体药物偶联物的药物组合物，给予患者的抗体药物偶联物的剂量通常是0.1mg/kg-100mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约1mg/kg-约75mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为1mg/kg-20mg/kg对象体重，诸如1mg/kg-5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约0.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约0.75mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约1mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约1.25mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约1.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约2mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约2.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约3mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约3.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约4mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约4.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约5.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约6mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约6.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约7mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约7.5mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约8mg/kg对象体重。在一些实施方式中，给予患者的剂量为约8.5mg/kg对象体重。
在一些实施方式中，基于患者在基线时的实际体重给予配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物，除非患者的体重从前一周期的基线变化≥10％，或符合剂量调整标准，否则剂量不会改变。在一些实施方式中，除了体重大于100kg的患者之外，将使用实际体重，在这类情况中，将基于100kg的体重计算剂量。在一些实施方式中，接受1.00mg/kg剂量水平的患者的最大剂量为100mg，而接受1.25mg/kg剂量水平的患者的最大剂量为125mg。
在一实施方式中，将大约100mg/kg或更少，大约75mg/kg或更少，大约50mg/kg或更少，大约25mg/kg或更少，大约10mg/kg或更少，大约5mg/kg或更少，大约1.5mg/kg或更少，大约1.25mg/kg或更少，大约1mg/kg或更少，大约0.75mg/kg或更少，大约0.5mg/kg或更少，或大约0.1mg/kg或更少的配制在药物组合物中的抗体药物偶联物给予5次、4次、3次、2次或1次，以治疗癌症。在一些实施方式中，将本文提供的包含抗体药物偶联物的药物组合物给予约1-12次，其中，可以根据医生所确定的需求给予剂量，例如，每周、每双周、每月、每两个月一次、每三个月一次等。在一些实施方式中，较低剂量(例如，0.1-15mg/kg)可以较频繁地给予(例如，3-6次)。在其他实施方式中，较高剂量(例如，25-100mg/kg)可以较不频繁地给予(例如，1-3次)。
在一些实施方式中，将配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物的单剂量在一时间段(例如，一年)内以每两周的周期(例如，约14天)给予患者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26次以预防和/或治疗癌症，其中剂量选自下组：0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(即，每月剂量的每个剂量可能相同也可能不同)。
在一些实施方式中，将配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物的单剂量在一时间段(例如，一年)内以每三周的周期(例如，约21天)给予患者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、21、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26次以预防和/或治疗癌症，其中剂量选自下组：0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(即，每月剂量的每个剂量可能相同也可能不同)。
在一些实施方式中，将配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物的单剂量在一时间段(例如，一年)内以每四周的周期(例如，约28天)给予患者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、28、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26次以预防和/或治疗癌症，其中剂量选自下组：0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(即，每月剂量的每个剂量可能相同也可能不同)。
在另一实施方式中，将配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物的单剂量在一时间段(例如，一年)内以约每个月(例如，约30天)的间隔给予患者1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次以预防和/或治疗癌症，其中，剂量选自下组：约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(每月剂量的每个剂量可能相同也可能不同)。
在另一实施方式中，将配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物的单剂量在一时间段(例如，一年)内以约每两个月(例如，约60天)的间隔给予患者1、2、3、4、5或6次以预防和/或治疗癌症，其中，剂量选自下组：约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(每月剂量的每个剂量可能相同也可能不同)。
在另一实施方式中，将配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物的单剂量在一时间段(例如，一年)内以约每三个月(例如，约120天)的间隔给予患者1、2、3或4次以预防和/或治疗癌症，其中，剂量选自下组：约0.1mg/kg、约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg、约90mg/kg、约95mg/kg、约100mg/kg或其组合(每月剂量的每个剂量可能相同也可能不同)。
在某些实施方式中，用于向患者提供本文配制在本文提供的药物组合物中的抗体药物偶联物的剂量的给药途径是鼻内、肌肉内、静脉内或其组合，但是也可以接受本文所述的其他途径。各剂量可以或者可以不通过相同的给药途径给予。在一些实施方式中，在本文提供的药物组合物中配制的抗体药物偶联物可以通过多种给药途径给予，其与一种或多种其他治疗剂的其它剂量同时或随后。
在一些更具体的实施方式中，在本文提供的药物组合物中配制的抗体药物偶联物以约10.5mg/kg、约0.755mg/kg、约1mg/kg、约1.25mg/kg或约1.5mg/kg对象体重的剂量通过静脉内(IV)注射或输注给予。
在一些更具体的实施方式中，在本文提供的药物组合物中配制的抗体药物偶联物以约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、1mg/kg、约1.25mg/kg或约1.5mg/kg对象体重的剂量在约30分钟内通过静脉内(IV)注射或输注给予，每三周周期两次。在一些实施方式中，配制在药物组合物中的抗体药物偶联物在约30分钟内通过静脉内(IV)注射或输注给予，每三周周期的第1天和第8天。在一些实施方式中，所述方法进一步包括通过静脉内(IV)注射或输注给予免疫检查点抑制剂，每三周周期一次或多次。在一些实施方式中，所述方法进一步包括通过静脉内(IV)注射或输注给予免疫检查点抑制剂，每三周周期的第1天。在一些实施方式中，免疫检查点抑制剂是派姆单抗，并且其中派姆单抗在约30分钟内以约200mg的量给予。在其它些实施方式中，免疫检查点抑制剂是阿特珠单抗，并且其中阿特珠单抗在约60分钟或30分钟内以约1200mg的量给予。在一些实施方式中，将抗体药物偶联物给予在用免疫检查点抑制剂治疗期间或之后显示疾病进展或复发的转移性尿路上皮癌患者。在一些实施方式中，将抗体药物偶联物给予在用免疫检查点抑制剂治疗期间或之后显示疾病进展或复发的尿路上皮癌患者。
在其它更具体的实施方式中，在本文提供的药物组合物中配制的抗体药物偶联物以约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、1mg/kg、约1.25mg/kg或约1.5mg/kg对象体重的剂量在约30分钟内通过静脉内(IV)注射或输注给予，每四周周期三次。在一些实施方式中，配制在药物组合物中的抗体药物偶联物在每28天(四周)周期的第1天、第8天和第15天给予。在一些实施方式中，配制在药物组合物中的抗体药物偶联物在约30分钟内通过静脉内(IV)注射或输注，在每28天(四周)周期的第1天、第8天和第15天给予。在一些实施方式中，所述方法进一步包括通过静脉内(IV)注射或输注给予免疫检查点抑制剂，每四周周期一次或多次。在一些实施方式中，免疫检查点抑制剂是派姆单抗。在其它实施方式中，免疫检查点抑制剂是阿特珠单抗。在一些实施方式中，将抗体药物偶联物给予在用免疫检查点抑制剂治疗期间或之后显示疾病进展或复发的转移性尿路上皮癌患者。在一些实施方式中，将抗体药物偶联物给予在用免疫检查点抑制剂治疗期间或之后显示疾病进展或复发的尿路上皮癌患者。
使用肯定的语言来描述多个实施方式，本发明在本文中大体上公开。本发明还具体包括其中全部或部分排除特定主题的实施方式，例如物质或材料、方法步骤和条件、方案、程序、测定或分析。因此，即使本发明通常不就本发明不包括的内容在本文中表达，但是未明确包括在本发明中的方面仍然在本文中公开。
本文描述了本发明的特定实施方式，包括发明人已知的用于实施本发明的最佳方式。在阅读前述描述后，公开的实施方式的变体对于本领域的工作人员而言成为显而易见的，并且预期本领域技术人员可以适当地采用这类变体。因此，本发明旨在以不同于本文具体描述的方式实施，并且本发明包括适用法律允许的所附权利要求中记载的主题的所有修改和等同物。而且，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素的所有可能变化形式的任何组合。
本说明书引用的所有出版物、专利申请、登录号和其他参考文献通过引用其全部内容纳入本文，就好像各发表物或专利申请特定和单独地通过引用纳入本文那样。提供本文讨论的出版物仅针对其在本申请提交日之前的公开。本文中所有内容均不应解释为承认本发明不能凭借在先发明而先于这些出版物。此外，所提供的出版日期可能与实际公开日期不同，这可能需要单独确认。
描述了本发明的许多实施方式。然而，应理解，可进行各种改进而不背离本发明的精神和范围。因此，实验部分中的描述旨在说明但不限制权利要求中描述的本发明的范围。
6.实施例
以下是对用于研究的各种方法和材料的描述，并且提出的目的是为本领域普通技术人员提供如何制作和使用本发明的完整公开和描述，并不旨在限制发明人认为的发明范围，也不旨在表示进行了下述实验并且是所进行的所有实验。应当理解的是，并不一定以现在时书写示例性描述，而是可以进行这些描述以生成与本发明的教导相关联的数据等。努力保证所用数值(如量、温度等)的准确性，但应允许一些实验误差和偏差。
6.1实施例1–Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE抑制体内肿瘤生长
191P4D12在肿瘤组织细胞表面的显著表达以及在正常组织中的限制性表达，使191P4D12成为抗体治疗和类似通过ADC治疗的良好靶点。因此评估了Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE在人膀胱癌、肺癌、乳腺癌和胰腺癌异种移植小鼠模型中的治疗效果。
在小鼠癌症异植物模型(例如皮下和原位)中研究了抗体药物偶联物对肿瘤生长和转移形成的影响。
通过在雄性SCID小鼠右侧注射5x104-106个与Matrigel(CollaborativeResearch)以1:1稀释度混合的癌细胞产生皮下(s.c.)肿瘤。为了测试ADC对肿瘤形成的效果，ADC注射与肿瘤细胞注射在同一天开始。作为对照，给小鼠注射纯化的人IgG或PBS；或者一种能识别人类细胞中不表达的无关抗原的纯化单克隆抗体。在初步研究中，未发现对照IgG或PBS对肿瘤生长的影响存在差异。肿瘤大小由卡尺测量确定，肿瘤体积按宽度2x长度/2计算，其中宽度为最小直径，长度为最大直径。处死皮下肿瘤直径大于1.5厘米的小鼠。
异种移植癌模型的一个优点是能够研究新生血管和血管生成。肿瘤生长部分依赖于新血管的发育。尽管毛细血管***和发育中的血液网络起源于宿主，但新生血管***的发生和构建受异种移植肿瘤的调节(Davidoff等人，Clin Cancer Res.(2001)7:2870；Solesvik等人，Eur J Cancer Clin Oncol.(1984)20:1295)。根据本领域已知的方法研究抗体和小分子对新生血管的影响，例如通过对肿瘤组织及其周围微环境的IHC分析。
Ha22-2(2,4)6.1ADC抑制肺癌和乳腺癌异植物的形成。这些结果表明，Ha22-2(2,4)6.1ADC在治疗局部和转移(包括恶性或转移性恶性)阶段的癌症，包括例如肺癌和乳腺癌中的可行性。
191P4D12 ADC:
上文描述了针对191P4D12的单克隆抗体及其与MMAE的偶联。通过FACS和本领域已知的其他方法来确定Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE结合191P4D12的能力。
细胞系和异植物：
如本领域所知，BT-483和HPAC细胞维持在补充有L-谷氨酰胺和10％的FBS的DMEM中。AG-L4异植物在SCID小鼠中通过系列增殖维持。
Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE对SCID小鼠皮下建立的人肺癌异植物AG-L4的疗效
在另一个实验中，来自患者的肺癌异植物AG-L4在SCID小鼠中通过系列传代维持。无菌收集储藏肿瘤并切成1mm3小块。将六(6)块植入独立SCID小鼠的体侧。使肿瘤未经治疗生长，直到达到大约200mm3的体积。Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE和对照ADC每七(7)天以10mg/kg的剂量通过静脉推注给予两个剂量。给予ADC的量基于给药前立即获得的每只动物各自的体重。每3至4天使用卡尺测量监测肿瘤生长。肿瘤体积按宽度2x长度/2计算，其中宽度为最小直径，长度为最大直径。
结果表明，与对照ADC相比，经Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE治疗的裸鼠中皮下移植的AG-L4肺癌异植物生长明显受到抑制。(图2)。此外，本研究还使用了其他191P4D12单克隆抗体。结果未显示。
Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE对SCID小鼠皮下建立的人乳腺癌异植物BT-483的效果
在本实验中，人乳腺癌BT-483细胞被用于产生储藏的异植物，并在SCID小鼠中通过系列传代维持。无菌收集储藏肿瘤并切成1mm3小块。将六(6)块植入独立SCID小鼠的体侧。使肿瘤未经治疗生长，直到达到大约100mm3的体积。Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE和对照ADC每四(4)天以5mg/kg的剂量通过静脉推注给予四个剂量。给予ADC的量基于给药前立即获得的每只动物各自的体重。每3至4天使用卡尺测量监测肿瘤生长。肿瘤体积按宽度2x长度/2计算，其中宽度为最小直径，长度为最大直径。
结果表明，与对照ADC相比，经Ha22-2(2,4)6.1-vcMMAE治疗的SCID小鼠皮下移植的BT-483乳腺肿瘤异植物的生长明显受到抑制。(图3)。此外，本研究还使用了其他191P4D12单克隆抗体。结果未显示。
结论
总之，图2和3显示，与对照ADC相比，命名为Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE的191P4D12ADC显著抑制表达191P4D12的肿瘤细胞的生长。因此，Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE可用于治疗目的，以治疗和管理各种癌症，包括例如乳腺癌和肺癌。
6.2实施例2–通过IHC检测癌症患者样本中的191P4D12蛋白
通过免疫组化法检测191P4D12蛋白在(i)乳腺、(ii)肺、(iii)食管和(iv)头颈癌患者肿瘤样本中的表达。简单说，***固定的石蜡包埋组织被切成四(4)微米切片，固定于载玻片上。切片脱蜡、再水化，并在EZ-Retriever微波炉(Biogenex，San Ramon，CA)中用EDTA抗原回收溶液(Biogenex，San Ramon，CA)95℃处理30分钟。然后用3％过氧化氢溶液处理切片，以灭活内源过氧化物酶活性。在与单克隆小鼠抗-191P4D12抗体或同型对照孵育之前，使用无血清蛋白封闭(protein block)(Dako，Carpenteria，CA)抑制非特异性结合。随后，用Super SensitiveTM聚合物-辣根过氧化物酶(HRP)检测***处理切片，包括在SuperEnhancerTM试剂中孵育然后与聚合物-HRP二抗偶联物(加州圣拉蒙BioGenex)一起孵育。然后使用DAB试剂盒(加利福尼亚州圣拉蒙市BioGenex)对切片显影。细胞核用苏木精染色，并用明视野显微镜分析。如棕色染色所示，使用191P4D12免疫反应抗体在患者样本中检测到特异性染色。(参见图4A、4C、4E和4G)。相比之下，对照抗体没有对两个患者样本染色。(参见图4B、4D、4F和4H)。
结果显示191P4D12在患者膀胱、乳腺、胰腺、肺、卵巢、食管和头颈癌组织的肿瘤细胞中表达。这些结果表明，191P4D12在人类癌症中表达，针对该抗原的抗体和名为Ha22-2(2,4)6.1vcMMAE的抗体药物偶联物可用于诊断和治疗目的。(图4A-H)。
6.3实施例3——可通过上述方法治疗的癌症示例
为了选择可通过本文提供的方法治疗的某些示例性癌症，在癌症样本中的RNA和蛋白质水平上测定了柄蛋白-4表达的普遍性(prevalence)。简单说，首先使用癌症基因组图谱(TCGA)数据库中的患者样品数据确定RNA水平上的柄蛋白-4表达普遍性。两种不同的IHC方法也被用于测定癌症患者组织样品中的柄蛋白-4蛋白表达。如表6所示，在蛋白质水平上，柄蛋白-4RNA表达的普遍性与柄蛋白-4表达的普遍性相似。评估了普遍表达柄蛋白-4RNA和柄蛋白-4蛋白的不同肿瘤对MMAE或Vinca(如果没有MMAE数据)的敏感性，Vinca通过阻断微管聚合，通过与MMAE相同的机制发挥细胞毒性。
表6：RNA的柄蛋白-4表达普遍性与不同肿瘤类型IHC中的柄蛋白-4普遍性相似
Figure BDA0003592694230000991
Figure BDA0003592694230001001
表6中的这些结果表明，鳞状NSCLC、胃癌(GEJ)、HNSCC、NSCLC腺癌、头颈鳞状癌和乳腺癌(包括HR+/HER2-乳腺癌和TNBC)在RNA和蛋白质水平上普遍表达柄蛋白-4。这些癌症对MMAE、Vinca或MMAE和Vinca的细胞毒性也很敏感，它们都通过阻断微管聚合的机制发挥细胞毒性。因此，鳞状NSCLC、胃癌(GEJ)、HNSCC、NSCLC-腺癌、头颈鳞状癌和乳腺癌(包括HR+/HER2-乳腺癌和TNBC)可以通过本文提供的方法进行治疗，并在下面实施例中描述的人体研究中进行测试。
6.4实施例4——一项开放标签、多中心、多群组、2期研究，评估先前接受局部晚期或转移恶性实体瘤治疗的对象中的抗191P4D12-ADC
6.4.1.研究总结
6.4.1.1.概要
Figure BDA0003592694230001002
Figure BDA0003592694230001011
Figure BDA0003592694230001021
Figure BDA0003592694230001031
Figure BDA0003592694230001041
Figure BDA0003592694230001051
Figure BDA0003592694230001061
Figure BDA0003592694230001071
研究方案
研究方案
Figure BDA0003592694230001072
在筛选/基线检查时进行疾病评估，并在整个研究过程中，从研究治疗的第一剂开始，每8周(56天±7天)重复一次，直到对象获得放射学证实的疾病进展、开始新的后续抗癌治疗、死亡、撤回同意书、不再随访或研究结束，以先发生者为准。第一次响应后4周(28天+7天窗口)必须进行确认性成像扫描。
在研究治疗1年后，响应评估的频率降低到每12周(84天±7天)。
6.4.2.关于该研究
6.4.2.1.非临床和临床研究中的恩诺单抗维多汀及其效力
6.4.2.1.1.恩诺单抗维多汀
恩诺单抗维多汀是一种ADC，包含通过蛋白酶可切割的接头与微管破坏剂(MMAE)偶联完全的人免疫球蛋白G1-κ(IgG1K)抗体(Challita-Eid PM等人,Cancer Res.2016；76(10):3003-13)。恩诺单抗维多汀通过与细胞表面的191P4D12蛋白结合导致ADC-191P4D12复合物内化，然后该复合物进入溶酶体小室，其中MMAE通过蛋白水解切割接头而释放，从而诱导抗肿瘤活性。随后，MMAE的胞内释放将破坏微管蛋白聚合，导致G2/M期细胞周期停滞和凋亡性细胞死亡(Francisco JA等人，《血液》2003年8月15日；102(4)：1458-65)。
6.4.2.1.2.非临床和临床数据
药理学
AGS-22M6E是一种衍生自鼠杂交瘤细胞系的ADC，用于药理学和毒理学研究，并已完成I期研究。恩诺单抗维多汀是一种中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系衍生的AGS-22M6E ADC，是用于临床开发的最终产品。恩诺单抗维多汀与AGS-22M6E具有相同的氨基酸序列、接头和细胞毒性药物。通过广泛的分析和生物学表征研究，如与191P4D12的结合亲和力、体外细胞毒性和体内抗肿瘤活性，证实了恩诺单抗维多汀和AGS-22M6E之间的可比性。
在体外药理学研究中，AGS-22M6E抑制了表达人191P4D12的工程改造细胞系以及内源性表达人191P4D12的T47D乳腺癌细胞系中的细胞存活，而AGS-22M6(未偶联抗体)不影响任何表达191P4D12的细胞系的细胞生长。
在一组肿瘤异植物模型中评估了AGS-22M6E的抗肿瘤活性，这些模型代表了各种癌症适应症，其中191P4D12的表达已得到证实。AGS-22M6E以剂量依赖性方式显著抑制来自患者的膀胱癌异植物中的肿瘤生长。在人HR+乳腺癌细胞系的异植物中，每4天给予5mg/kg，共4次。AGS-22M6E还显著抑制人肺腺癌细胞系和来自患者的肺腺癌异植物中的肿瘤生长。恩诺单抗维多汀和AGS-22M6E在来自患者的TNBC细胞异种移植模型中显示出类似的药理抗肿瘤活性。在这项研究中，在第21天2mg/kg剂量下，恩诺单抗维多汀和AGS-22M6E的肿瘤消退百分数分别为68％和70％。
毒理学
AGS 22M6E和恩诺单抗维多汀在食蟹猴体内的安全性和药代动力学相当。
在符合良好实验室规范的大鼠(≥5mg/kg；人***接触的1倍)和猴子(≥1mg/kg；人***接触的0.7倍)的毒性研究中发现了皮肤病灶。在6周的恢复期结束时，皮肤改变完全可逆。
在大鼠和猴的毒性研究中，临床研究中报告的高血糖均未出现，并且在每个物种的胰腺中均未发现组织病理学结果。
AGS-22M6E在雄性和雌性大鼠以及食蟹猴中具有中等免疫原性。AGS-22M6E和恩诺单抗维多汀在食蟹猴中显示出可比的免疫原性。
基因毒性研究表明，在细菌反向突变试验(Ames试验)或L5178Y TK+/-小鼠淋巴瘤突变试验中，MMAE没有明显的基因毒性潜力。MMAE确实在大鼠微核试验中诱发了染色体畸变，这与微管破坏剂的药理作用一致。
MMAE在290nm至700nm范围内没有吸光度，缬氨酸-瓜氨酸接头-MMAE(vc-MMAE)的吸光度不符合ICH S10指南中定义的光毒性测试标准。因此，恩诺单抗维多汀被认为没有足够的光活性导致直接光毒性。
仅在大鼠中观察到睾丸毒性。发现包括生精小管变性和附睾少***症(≥2.0mg/kg；大约是临床推荐剂量下人体***接触量的1倍)。在24周的恢复期结束时，这些发现部分逆转。在给予恩诺单抗维多汀的性未成熟的雄猴身上未观察到睾丸毒性，给药剂量高达6mg/kg(是临床推荐剂量下人体***接触量的6倍)。
6.4.2.1.3.临床数据
恩诺单抗维多汀目前正在多项研究中进行测试，包括1期、2期和3期研究，既可以作为单一疗法，也可以与几种抗癌疗法联合使用。以下总结的大部分安全性和有效性数据来自单一疗法数据，限于1期和2期研究。
EV-101是一项1期剂量递增/扩大研究，纳入了表达191P4D12的实体瘤(例如转移性尿路上皮癌[UC])的患者，这些患者在≥1的既往化疗方案后进展，包括一个群组的既往接受抗PD-(L)1治疗的转移性UC患者。
由于EV-101招募了具有表达191P4D12的实体瘤的患者，因此获得了与本研究相关的几种不同癌症类型患者的191P4D12表达数据。使用经验证的191P4D12 IHC测试(QuestDiagnostics)来指定191P4D12 H-评分，范围从0到300。98％的NSCLC(包括鳞状细胞癌和非鳞状细胞癌)患者表达191P4D12(n＝50)，中位H-评分为260。全部3名为EV-101预先筛查的乳腺癌患者均表达191P4D12，H-评分分别为140、230和290。两名胃癌患者和一名鼻咽癌患者表达191P4D12，H-评分分别为140、230和290。为了补充在EV-101中获得的191P4D12表达数据，对不同癌症类型的组织微阵列(TMA)进行了191P4D12 IHC测试。191P4D12在评估的大多数组织中表达：乳腺(包括三阴性和HR+/HER2；91％，n＝220)、胃(66％，n＝143)、头颈部(77％，n＝128)和食管(88％，n＝96)癌组织。
6.4.2.2.研究原理
目前，化疗是一种标准疗法，其响应率相对较低，响应持续时间短，且毒性显著。局部晚期或转移性癌症患者缺乏经批准的治疗方法，二线化疗观察到的活性有限；这充分表明该人群有大量未满足的医疗需求。
一项针对转移性尿路上皮癌和其他恶性实体瘤患者的恩诺单抗维多汀单药治疗的1期剂量递增和扩大研究(EV-101)显示，转移性尿路上皮癌患者中的抗肿瘤活性增强。在这项研究中，转移性尿路上皮癌患者的肿瘤减少。恩诺单抗维多汀在抗PD-(L)-1治疗后，在医疗需求高度未得到满足的人群中为患者提供了持久的响应和有意义的生存结果。通过对用1.25mg/kg恩诺单抗维多汀治疗的患者进行的中心评价，证实ORR为45％。鉴于历史中位总生存期(OS)≤10.3个月，12.3个月的中位总生存期(OS)令人鼓舞(Bellmunt J等人，NEng J Med.2017；376(11)：1015-1026)。
在一项关键的2期研究(EV-201)中，患者必须事先接受过含铂化疗，或没有接受过铂，且不适合顺铂治疗。这项研究的结果表明，在铂化疗和PD-1/L1抑制剂后进展的患者中，恩诺单抗维多汀是第一种显示出显著临床活性的新治疗药物。给予1.25mg/kg恩诺单抗维多汀的患者中证实的ORR为44％。中位OS为11.7个月，中位响应持续为7.6个月。这些结果与同一患者群体中的1期EV-101试验高度一致。
本研究选择的肿瘤(乳腺癌、肺癌、头颈癌、胃癌和食管癌)都是具有中到高191P4D12表达的肿瘤的代表，需要改善转移(包括恶性或转移性恶性)和难治情形的结果。此外，对恩诺单抗维多汀的支持性临床前敏感性、临床数据以及基于已发表文献的证据为当前研究提供了支持。
6.4.2.3.风险效益评估
本研究选择的患有局部晚期或转移性癌症的对象具有在接受标准护理治疗后复发或进展的癌症，且治疗选择有限。迄今为止的临床数据表明，在尿路上皮癌患者中，恩诺单抗维多汀具有良好的获益-风险比。此外，非临床数据和临床数据支持在除尿路上皮癌以外的表达191P4D12的肿瘤中使用恩诺单抗维多汀。
尽管最近在治疗方面取得了进展，但大约80％的患者对PD 1/L1抑制剂没有响应，这是含铂治疗作为转移性(包括恶性或转移性恶性)疾病的初始治疗失败后的标准治疗(Alhalabi O等人，Oncology(Williston Park)2019；33(1):11-8；Kim和Seo InvestigClin Urol.2018；59(5):285-296；National Comprehensive Cancer Network,2017(非小细胞肺癌,NCCN癌症学临床实践指南(NCCN指南),
http://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/nscl.pdf；NationalComprehensive Cancer Network(Bladder Cancer(Version 3,2019)
http:///www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/bladder.pdf)。这些患者几乎没有治疗选择，迫切需要新的治疗方法。
6.4.3.研究目的和终点
表7列出了本研究的主要、次要和其它目的及终点。
表7研究目的和终点
Figure BDA0003592694230001101
Figure BDA0003592694230001111
6.4.4.治疗和剂量
6.4.4.1.治疗
这是一项开放标签、多中心、多群组、2期研究，旨在评估恩诺单抗维多汀作为单一药物在局部晚期或转移性恶性实体瘤成年对象中的抗肿瘤活性和安全性。招募了约40名对象，分成以下6个群组：
群组1：HR+/HER2-乳腺癌；或
群组2：TNBC；或
群组3：SQNSCLC；或
群组4：NSCLC；或
群组5：头颈癌；或
群组6：胃或食管癌
计划进行1次中期分析，以评估每组的抗肿瘤活性。在20名具有可评估肿瘤响应数据的对象接受治疗后，对给定群组进行中期分析。第二阶段的贝叶斯优化设计(BOP2)(ZhouH等人，Stat Med.2017；36(21)：3302-3314)用于指导中期决策规则。对于每组，根据2阶段BOP2设计，当具有确认响应(CR和PR)的对象数量小于指定的1期响应者的最小数量时，组招募可停止；否则，招募将继续进行，直到达到组的计划规模。
该研究由三个阶段构成：筛选/基线，治疗和随访。
筛选/基线期在第一次研究治疗前28天内进行。在治疗期间，从第1周期开始，对象每28天周期在第1天、第8天和第15天接受恩诺单抗维多汀治疗，直到满足其中一项治疗中止标准。在筛选/基线检查时进行疾病评估，并在整个研究过程中，从研究治疗的第一剂开始，每8周(56天±7天)重复一次，直到对象获得放射学证实的疾病进展、开始新的后续抗癌治疗、死亡、撤回同意书、不再随访或研究结束，以先发生者为准。
治疗终点(EOT)访问应在最后一剂恩诺单抗维多汀或决定停止治疗后7天内进行，或在开始另一种抗癌治疗前进行，以较早发生者为准。随后进行30天的安全性随访，从最后一剂恩诺单抗维多汀起30天(+7天窗口)或决定停止治疗起，只需与对象电话联系，除非必须重复任何评估以确认药物相关不良事件的解决。
根据RECIST1.1版，除因放射学证实的疾病进展以外的原因而停止研究治疗的对象进入治疗后随访期，并继续每8周(56天±7天)接受一次影像扫描，直到对象获得放射学证实的疾病进展，开始新的抗癌治疗，死亡，撤回同意，不再随访或研究结束，以先发生者为准。
在研究治疗1年后，疾病评估的频率降低到每12周(84天±7天)。
放射学证实疾病进展或开始后续抗癌治疗(以先发生者为准)后，在长期随访期内，每12周联系对象一次，了解其生存状态，直至死亡、撤回同意、不再随访或研究结束(以先发生者为准)。
确认的ORR是主要终点。确认的(ORR)定义为根据RECIST 1.1版客观响应确认为CR或PR的患者比例。响应(CR或PR)必须在首次响应后4周(28天+7天窗口)通过重复成像扫描确认。
在方案规定的时间点采集血样用于药代动力学和ATA。经验证的分析用于测量血清或血浆中恩诺单抗维多汀和MMAE的浓度，并评估ATA。在方案规定的时间点收集用于生物标志物的样品。
6.4.4.2.剂量
在每组中，对象在每个28天周期的第1天、第8天和第15天接受1.25mg/kg剂量的恩诺单抗维多汀静脉(IV)输注。
6.4.5.患者群体
患者群体由具有先前治疗过的局部晚期或转移性恶性实体瘤的对象组成，包括：
HR+/HER2-乳腺癌；或
TNBC；或
SQNSCLC；或
NSCLC；或
头颈癌；或
胃或食管癌
所有筛查评估必须由研究人员完成和复查，以确认可能对象符合所有资格标准。未批准对资格标准的方案偏差的预期批准(也称为方案豁免或豁免)。
6.4.5.1.纳入标准
如果满足以下所有条件，对象有资格：
对于群组1-6的所有对象：
研究审查委员会(IRB)/独立伦理委员会(IEC)根据国家法规(例如，美国研究场所的健康保险便利和责任法案授权)批准的书面知情同意书和隐私语言必须在任何研究相关程序(包括停用禁止药物，如适用)之前从对象处获得。
根据当地法规，在签署知情同意书(ICF)时，对象被视为成年人。
根据RECIST1.1版，对象患有可测量的疾病。
对象具有从原发肿瘤或转移部位获得存档的肿瘤组织，其来源和可得性已在研究治疗前得到确认。如果没有可供存档的肿瘤组织，对象将在研究治疗前进行活检以获取肿瘤组织。如果对象出于安全考虑而无法进行活检，则必须与医疗监护者讨论是否招募入研究。
对象的ECOG表现状态为0或1。
对象有以下基线实验室数据：
绝对中性粒细胞计数(ANC)≥1.5×109/L
血小板计数≥100×109/L
血红蛋白≥9g/dL
血清总胆红素≤1.5x正常上限(ULN)或≤3xULN，对于患有吉尔伯特病的对象
根据机构标准或24小时尿液收集(肾小球滤过率[GFR]也可代替CrCl)估计为肌酐清除率(CrCl)≥30毫升/分钟。
丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)≤3x ULN。
未怀孕的女性对象，并适用以下条件至少之一：
不是有生育能力的女性(WOCBP)
同意从知情同意之日起至最后一剂研究治疗给药后至少6个月内遵守避孕指南的WOCBP
女性对象必须同意从筛选开始，在整个研究期间以及最后一剂研究治疗给药后的6个月内不进行母乳喂养。
女性对象从第一剂研究治疗开始，在整个研究期间以及最后一剂研究治疗给药后的6个月内不得捐献卵子。
具有有生育能力的女***(包括正在母乳喂养的伴侣)的男性对象必须同意在整个治疗期间以及最后一剂研究治疗给药后的6个月内使用避孕措施。
男性对象在治疗期间和最后一剂研究治疗给药后的6个月内不得捐献***。
有怀孕伴侣的男性对象必须同意在整个研究期间以及最后一剂研究治疗给药后的6个月内保持禁欲或使用避孕套。
对象同意在本研究中接受研究治疗时不参与另一项介入研究。
疾病特定纳入标准：
群组1：HR+/HER2-乳腺癌
对象患有组织学或细胞学证实的HR+/HER2乳腺癌；根据美国临床肿瘤学会/美国病理学家学会(ASCO/CAP)指南基于最近分析的组织，确定为ER阳性和/或孕酮受体(PR)阳性，HER2阴性。
对象具有局部晚期或转移性疾病。
在转移性或局部晚期情况下，对象必须已接受≥1线的内分泌治疗和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂。
对象必须在任何情况下接受过紫杉烷或蒽环类药物治疗。乳腺癌易感基因(BRCA)1或2发生有害种系突变的对象必须使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗。
群组2：三阴性乳腺癌
对象有组织学或细胞学证实的TNBC；根据ASCO/CAP指南，根据最近分析的组织，确定为明确的TNBC组织学(ER阴性/PR阴性/HER2阴性)。
对象具有局部晚期或转移性疾病。
对象已接受≥2线***治疗，包括任何情形下的紫杉烷。BRCA1或2中具有有害种系突变的对象必须接受PARP抑制剂治疗。
群组3：鳞状非小细胞肺癌
对象具有组织学或细胞学证实的鳞状NSCLC。
对象具有局部晚期或转移性疾病。
对象必须具有在基于铂的治疗后的进展或复发；如果在完成治疗后12个月内复发，则在辅助情形中给予的铂治疗也计入治疗方案。
对象必须先前已接受了抗程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)或抗程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的治疗，如果根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南符合条件。
群组4：非鳞状非小细胞肺癌
该对象具有组织学或细胞学证实的非鳞状NSCLC(根据当地实验室标准，表皮生长因子受体[EGFR]野生型以及间变性淋巴瘤激酶[ALK]野生型)
对象具有局部晚期或转移性疾病。
对象必须在转移性或局部晚期铂类药物治疗后有进展或复发；如果在完成治疗后12个月内复发，辅助情形中使用的铂类药物也算作治疗方案。
根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南，如果符合条件，对象必须接受抗PD-1或抗PD-L1治疗。
群组5：头颈癌
对象患有组织学或细胞学证实的头颈癌。
对象具有局部晚期或转移性疾病。
对象必须在转移或局部晚期情形下接受含铂方案治疗后有所进展或复发。在治愈性情形中作为多模式治疗的部分进行的铂疗法不算作先前的方案，除非对象在完成治疗后6个月内复发或进展。
根据对象的肿瘤PD-1或PD-L1表达和局部治疗指南，如果符合条件，对象必须接受抗PD-1或抗PD-L1治疗。
群组6：胃或食管癌
对象具有组织学或细胞学证实的胃或食管癌。
对象具有局部晚期或转移性疾病。
对象在接受化疗方案(包括氟嘧啶和铂治疗转移性疾病或晚期疾病)后必须有进展或复发。除非对象在完成后6个月内复发或进展，否则新辅助或辅助方案不算作先前方案。HER2阳性癌症的对象必须接受HER2定向治疗。
6.4.5.2.排除标准
如果符合任何以下条件，对象将被排除在研究之外：
对于群组1-6的所有对象：
对象已接受≥3线转移性疾病的先前化疗方案(非化疗方案无限制)。
对象先前存在的感觉或运动神经病变等级≥2。
对象有活动性中枢神经***(CNS)转移。如果符合以下所有条件，接受CNS转移治疗的对象可以参加研究：
CNS转移在筛选前在临床上已经稳定了≥6周
如果CNS转移需要类固醇治疗，给予对象≤20毫克/天的强的松或等效药物≥2周的稳定剂量
基线成像扫描显示没有新的或扩大的脑转移的证据
对象没有软脑膜疾病
对象具有与之前的治疗(包括***治疗、放疗或手术)相关的持续临床显著毒性(2级或以上，脱发除外)。
患有≤2级免疫治疗相关的甲状腺功能减退症或泛垂体功能减退症的对象可在用稳定剂量的激素替代疗法(如有指示)良好维持/控制的情况下纳入研究。排除具有≥3级免疫治疗相关的甲状腺功能减退症或泛垂体功能减退症的对象。排除正具有免疫治疗相关结肠炎、葡萄膜炎、心肌炎或肺炎的对象，或患有其他免疫治疗相关AE需要高剂量类固醇(>20mg/天强的松或等效物)的对象。
对象在接受第一剂研究治疗后3个月内有未受控制的糖尿病病史。未受控的糖尿病定义为血红蛋白(HbA1c)≥8％或HbA1c介于7和<8％之间，并伴有没有其它解释的糖尿病相关症状(多尿或多渴)。
对象之前曾使用恩诺单抗维多汀或其他基于单甲基奥瑞他汀E(MMAE)的ADC进行治疗。
对象在第一剂研究药物前3年内诊断出第二种恶性肿瘤，或有任何证据表明之前诊断出的恶性肿瘤有残余疾病。允许患有非黑色素瘤皮肤癌、在没有进展证据的情况下进行治疗的局部***癌、积极调查/观察但并不治疗的低风险或极低风险(根据标准指南)的局部化***癌，或任何类型的原位癌(如果进行了完全切除)的对象。
对象在第一次接受研究治疗时，正在接受病毒、细菌或真菌感染的***性抗菌治疗。允许常规抗菌预防。
对象患有已知的活动性乙型肝炎(例如，乙型肝炎表面抗原[HBsAg]反应性)或活动性丙型肝炎(例如，检测到丙型肝炎病毒[HCV]RNA[定性])。
对象具有已知的人类免疫缺陷病毒(HIV)感染史(HIV 1或2)。
对象在第一剂研究药物前6个月内记录了符合纽约心脏协会III-IV级的脑血管事件(中风或短暂性脑缺血发作)、不稳定型心绞痛、心肌梗死或心脏症状(包括充血性心力衰竭)的病史。
对象在首次研究药物前4周内进行了大手术。
对象接受了放疗、化疗、生物制剂、试验药物和/或使用免疫治疗的抗肿瘤治疗，这些治疗在第一剂研究药物前2周尚未完成。
对象已知对恩诺单抗维多汀或恩诺单抗维多汀药物配方中所含的任何赋形剂(包括组氨酸、海藻糖二水合物和聚山梨酯20)具有超敏性，或对象已知对CHO细胞中产生的生物药物具有超敏性。
对象患有活动性角膜炎或角膜溃疡。如果研究人员认为该疾病正在得到充分治疗，则接受患有浅表点状角膜炎的对象。
研究者认为对象有任何不适合参与研究的情况。
6.4.6.治疗药物
6.4.6.1.给予的治疗药物
治疗剂恩诺单抗维多汀(ASG-22CE)是一种无菌、无防腐剂、白色至灰白色的冻干粉末，可重建用于静脉内给药。治疗剂以一次性玻璃小瓶供应，每个小瓶中含有20mg或30mg恩诺单抗维多汀。治疗剂储藏在2-8℃。
6.4.6.1.1.治疗剂的剂量和给予
在每28天周期的第1天、第8天和第15天，静脉输注1.25mg/kg剂量的恩诺单抗维多汀约30分钟。在没有输液相关反应(IRR)的情况下，计算所有对象的输液率，以达到大约30分钟的输液周期。恩诺单抗维多汀不得作为静脉推注或团注给药。恩诺单抗维多汀不应与其他药物混合使用。两剂恩诺单抗维多汀之间必须至少间隔7天。
对象体重必须在评估时间表中所述的所有相关评估时间点进行测量。根据对象的实际体重计算基于体重的剂量。体重超过100kg的对象除外；这些人的剂量基于100公斤。该研究所允许的最大剂量是125mg。
对象在给予恩诺单抗维多汀期间以及在前3个周期输注后至少60分钟内进行观察。在整个研究过程中，根据机构标准，提供与最佳对象护理一致的所有支持措施。
在给药期间和给药后的任何时间，都要密切监测注射部位的发红、肿胀、疼痛和感染情况。建议对象在给药时或输注后立即报告发红或不适。
6.4.6.2.随机化和盲选
这是一项开放标签研究。恩诺单抗维多汀的对象招募和豁免通过交互式响应技术(IRT)***进行。在开始研究治疗之前，研究现场人员从IRT***获取对象编号和药物分配。本领域技术人员已知特定IRT程序。
6.4.6.3.剂量调整
根据毒性的类型和严重程度，允许将剂量降低至1、0.75或0.5mg/kg。需要减少剂量的对象可重新增加1个剂量水平(即，减少到0.75mg/kg的对象只能重新增加到1mg/kg)，前提是毒性不需要停止研究药物，并已恢复到基线或水平≤1级。如果毒性重现，不允许重新增加。具有≥2级角膜不良事件的对象不允许重新增加。表8和表9给出了恩诺单抗维多汀相关毒性的剂量调整建议
现场研究人员可自行决定是否允许因其他恩诺单抗维多汀相关毒性而中断剂量。剂量中断可持续达8周(2个周期)。如果对象的毒性不需要永久停药，则从治疗中获得临床益处的对象的剂量中断可延长至8周以上。在剂量中断期间，不调整响应评估时间表。
表8恩诺单抗维多汀相关血液学毒性的推荐剂量调整*
Figure BDA0003592694230001181
表9恩诺单抗维多汀相关的非血液学毒性的推荐剂量调整
Figure BDA0003592694230001182
Figure BDA0003592694230001191
6.4.7.研究程序和评估
6.4.7.1.疗效评估：
使用RECIST版本1.1评估疾病响应和进展(见6.4.8.3，RECIST版本1.1)。根据评估时间表进行放射学评估。按照评估时间表评估已确认的ORR、DOR、DCR、PFS和OS。
6.4.7.1.1.用于疾病评估的成像(计算机断层扫描/磁共振成像/正电子发射断层扫描-计
算机断层扫描)
在筛选/基线检查时进行成像/疾病评估，并在整个研究过程中，从研究治疗的第一剂开始，每8周(56天±7天)进行，直到对象获得放射学证实的疾病进展、开始新的后续抗癌治疗、死亡、撤回同意书、不再随访或研究结束，以先发生者为准。在知情同意之前进行的基线成像作为标准护理，只要在第一剂研究治疗前28天内进行即可。
如果研究人员将疾病响应评估为CR或PR，则需要在首次响应后4周(28天+7天)进行确认性成像扫描。在研究治疗1年后，疾病评估的频率降低到每12周(84天±7天)。
用BICR评估疾病响应和进展。基于RECIST 1.1版的扫描的现场评估作出治疗决定。
根据RECIST1.1版，除因放射学证实的疾病进展以外的原因而停止研究治疗的对象继续每8周(56天±7天)接受一次成像扫描，直到对象获得放射学证实的疾病进展，开始新的抗癌治疗，死亡，撤回同意，不再随访或研究结束，以先发生者为准。每当怀疑疾病进展时，也可进行肿瘤成像。
根据评估时间表进行脑扫描和骨成像，如果在筛查/基线检查时发现转移，或者如果已知或怀疑转移，或者在整个研究过程中有临床指示，则在响应评估时间点重复。
使用造影剂(胸部、腹部和脑部)的CT扫描是肿瘤评估的优选方式。如果当地标准实践或对象禁止进行CT扫描(例如，对象对造影剂过敏)，则可接受磁共振成像。所有其他RECIST批准的扫描方法(如x射线)都是可选的。成像评估的其他说明可在研究程序手册中找到。
评估包括目标病灶、非目标病灶和任何新病灶的肿瘤测量。响应评估的特点是针对给定的时间点进行评估。在每个对象的研究结束时，得出对研究方案的最佳总体响应。为了确保可比性，使用相同的技术进行筛选和随后的响应评估。如果可能的话，由同一人在研究期间评估任何一名对象的影像。建议对已知脑转移的对象进行重复成像，以便在整个研究过程中跟踪病灶。
eCRF中记录了疾病进展的部位，包括目标、非目标和/或新病灶。可随时进行额外成像，以确认疑似疾病进展。
本研究基于独立和局部(研究者)放射学评估的结果进行分析。在整个研究过程中收集所有成像扫描的副本，并根据本领域普通技术人员已知的标准进行分析。
6.4.7.1.2.目标病灶的评估
完全响应(CR)
CR定义为所有目标病灶消失且无目标病灶。任何病理性***(无论是目标***还是非目标***)的短轴必须从基线测量值减少到小于10mm。
部分响应(PR)
PR定义为与基线总直径相比，目标病灶的直径(对于非结节性病灶最长的；对于结节性病灶短轴)之和(SLD)至少减小30％。
稳定的疾病(SD)
SD指在用研究药物治疗期间最小的直径和为参比，既未充分缩小以符合PR标准，又未充分增加以符合进展性疾病标准。
进展性疾病(PD)
PD定义为目标病灶直径之和(对于非结节性病灶最长，对于结节性病灶短轴)至少增加20％，以研究中最小的总和为参考(如果是研究中最小的，则包括基线总和)。除了相对增加20％外，总和还必须显示出至少5mm的绝对增加。出现一个或多个新病灶也被视为进展。
非目标病灶的评估
为了在非目标病灶基础上实现明确的进展，非目标疾病的总体水平必须大幅恶化，这样，即使存在目标病灶的SD或PR，总肿瘤负荷也已增加到足以值得停止治疗的程度。一个或多个非目标病灶的大小适度增加通常不足以达到明确进展的条件。
不完全响应/无进展疾病
非目标病灶的无CR/无PD定义为1个或多个非目标病灶的持续存在。
进展性疾病
非目标病灶的PD定义为现有非目标病灶的明确进展或1个或多个新病灶的出现。
6.4.7.1.3.时间点响应评估
确定基线时患有可测量疾病的对象在每个时间点的响应状态。
6.4.7.1.4.生存状态
放射学证实疾病进展或开始后续抗癌治疗后，在长期随访期内，每12周联系对象一次，收集生存状态，直至死亡、撤回同意、不再随访或研究结束(以先发生者为准)。
6.4.7.2.其它评估
6.4.7.2.1.生物标志物
在研究过程中例如在本文所述研究的每个时间点收集的样品，可以分析其他生物标志物，包括DNA、RNA和蛋白质，以调查与研究治疗的耐药性或敏感性机制的可能关联性，与研究治疗相关的动态变化(在剂量、安全性、耐受性和效力等方面)以及与恩诺单抗维多汀相关的诊断分析的开发或验证。
用于生物标志物分析的血样
在血浆、血清和外周血单核细胞(PBMC)分离样品采集计划中规定的时间点，从所有对象采集用于生物标记物分析的血液样品。血浆样品的一个子组可用于循环游离DNA(cfDNA)的下一代测序(NGS)分析。血清样品的一个子组可用于表征可溶性191P4D12水平。血浆、血清和PBMC样品可进行细胞因子或免疫表型分析，以确定免疫功能和免疫细胞亚组的标志物。血样可用于本文所述且本领域普通技术人员已知的其它分析。
用于生物标志物分析的肿瘤组织样品
如评估计划所示，收集***固定、石蜡包埋肿瘤组织块或未染色荷电(charged)玻片形式的预处理肿瘤组织样品(来自原发或转移部位)。可接受存档或预处理的新鲜肿瘤组织。如果没有存档的肿瘤组织样品，对象可以在研究治疗前进行活检以获取肿瘤组织。如果收集了新鲜切片、未染色的荷电载玻片，则计划的生物标记物研究需要每个对象至少10到20张载玻片。
如果在研究治疗期间或随访期间进行活检作为标准护理，则按照本文所述收集和评估对象的肿瘤组织样品。
可以分析肿瘤组织样品的191P4D12和PD-L1表达、疾病亚型标志物以及与肿瘤免疫微环境相关的标志物。肿瘤组织样品可用于本文所述且本领域普通技术人员已知的其它分析。
6.4.7.2.2.生活质量和患者报道的结果评估
疼痛评估
对象按照0到10的评分表对自己的疼痛进行评分，该评分表最好地描述了过去24小时内最严重的疼痛，如评估表所示。见6.4.8.6疼痛评估。
生命-5维Euro质量
在每个周期的第1天和治疗结束时，对象完成EQ-5D-5L问卷。EQ-5D-5L是EuroQOL集团开发的一种标准化工具，用于作为基于偏好的通用健康结果测量。它适用于广泛的健康状况和治疗，并提供了一个简单的描述概况和健康状况的单一索引值。EQ-5D-5L是一个5项自我报告的功能和幸福指数，评估健康的5个维度，包括行动能力、自我护理、日常活动、疼痛/不适和焦虑/抑郁。每个维度包括5个级别(无问题、轻微问题、中等问题、严重问题、极端问题)。一个独特的EQ-5D-5L健康状态由5个维度中的每一个维度的1个级别组合而成。该问卷还记录了受访者在垂直刻度(0至100)视觉模拟量表上的自评健康状况。根据一般人群样品得出的值，对这5个项目的回答也可以转换为加权健康状态指数(效用分数)(Herdman，M等人，Qual-Life Res 2011；20(10)：1727-36)。见6.4.8.5EQ-5D-5L。
6.4.8.患者结果及其分析
6.4.8.1.疗效分析
对FAS、RES和RES-BICR进行疗效分析。肿瘤相关分析基于RECIST 1.1版进行总结。针对BICR和研究人员评估，对与肿瘤评估相关的疗效终点进行分析。
6.4.8.1.1.主要终点分析
主要分析
主要疗效终点是BICR确证的ORR。确认的ORR定义为根据RECIST 1.1版BOR确认为CR或PR的对象比例。计算每群组的经确认ORR，并通过Clopper-Pearson方法构建其95％置信区间。每个BICR确认的ORR的主要分析组是RES-BICR。还可以对FAS和RES进行额外分析。
6.4.8.1.2.次要终点的分析
响应持续
DOR定义为从第一次记录的响应日期(随后确认为CR或PR)到根据RECIST版本1.1首次记录的PD或因任何原因死亡的日期之间的时间，以先发生者为准。仅针对获得确认的CR或PR的对象计算DOR。使用Kaplan-Meier方法分析DOR，并提供Kaplan-Meier图。计算中位DOR及其双侧95％CI。
疾病控制率
DCR定义为BOR被确认为CR或PR或SD的对象比例。计算每群组的DCR，并通过Clopper-Pearson方法构建其95％置信区间。
无进展生存
PFS定义为从研究治疗开始到根据RECIST1.1版首次记录PD或因任何原因死亡(以先发生者为准)的时间。使用Kaplan-Meier方法分析PFS，并提供Kaplan-Meier图。计算中位PFS及其双侧95％CI。
总体生存
OS定义为从研究治疗开始至任何原因所致死亡日期的时间。使用Kaplan-Meier方法分析OS，并提供Kaplan-Meier图。计算中位OS及其双侧95％CI。
6.4.8.1.3.其它疗效终点的分析
最佳总体响应
根据对象所有可得的肿瘤时间点响应数据确定BOR。新的抗癌治疗或进展性疾病(PD)后记录的响应不包括在BOR推导中。列出了每群组和总体的BOR频率表。
根据RECIST1.1版，根据以下标准得出BOR：
如果对象至少有2次CR，且第一次和最后一次CR日期相隔超过28天，则BOR被定义为确认的CR。
如果一名对象具有PR与另一次CR/PR相隔超过28天，则该对象的BOR为确认的PR。
对于那些没有确认的CR或PR的对象，如果对象在第一次给药日期后至少49天内有至少一个CR/PR/SD肿瘤评估记录，则BOR被定义为SD。
对于那些没有如上定义的确认的CR、确认的PR或SD，但最后一次肿瘤评估为PD的对象，其BOR为PD。
否则，对于没有任何基线后肿瘤评估数据的对象，BOR被定义为不可评估(NE)或无数据(ND)。
直径总和
根据RECIST1.1版，通过每次肿瘤评估时所有目标病灶的直径总和(SOD)测量肿瘤负荷。计算每个对象的SOD比基线减少的最大百分比，并以瀑布图的形式呈现。
响应时间
响应时间(TRR)计算成从第一剂研究药物到第一次客观响应记录(随后确认的CR或PR)的时间。仅针对获得确认的CR或PR的对象计算TTR。用描述性统计学总结TTR。
6.4.8.2.其它分析
6.4.8.2.1.生物标志物的分析
潜在基因组和/或其他生物标志物(包括191P4D12表达)与临床结果(疗效、安全性或药效学)之间的关联可在具有必要基线和研究测量的对象上进行，以提供特定感兴趣参数的可解释结果。生物标志物可通过图形或描述方式进行总结，因为它们与临床测量相关(如适用)。汇总统计数据可制成表格。可以进行额外的事后分析，例如替代建模方法。本节所述的所有分析均基于数据的可用性。
6.4.8.2.2.生活质量和患者报告的结果参数分析
进行描述性QOL和PRO分析。总结了每个调查问卷的完成率。
6.4.8.3.RECIST 1.1版
表1-时间点响应：具有目标(+/-非目标)疾病的患者
Figure BDA0003592694230001251
CR＝完全响应，PR＝部分响应，SD＝稳定疾病，PD＝进展性疾病，和NE＝不可评估。
表2-时间点响应：仅具有非目标疾病的患者
非目标病灶 新病灶 总体响应
CR 无 CR
无－CR/无-PD 无 无-CR/无-PD<sup>a</sup>
未全部评估 无 NE
明确PD 是或否 PD
任意 是 PD
CR＝完全响应，PD＝进展性疾病，和NE＝不可评估。
a对于非目标疾病，“无-CR/无PD”比“稳定疾病”优选，因为SD在一些试验中越多地用作评估效力的终点，因此不建议在没有能测量的病灶时指定这一类别。
表3-当需要确证CR和PR时，最佳总体响应。
Figure BDA0003592694230001252
Figure BDA0003592694230001261
CR＝完全响应，PR＝部分响应，SD＝稳定疾病，PD＝进展性疾病，和NE＝不可评估。
a如果在第一时间点确实符合CR，然后在随后的时间点出现任何疾病，即使疾病相对基准标准符合PR标准，也在这个时间点评估为PD(因为疾病在CR后再发)。最佳响应取决于SD的最小持续时间是否得到满足。然而，有时评估为“CR”，在随后的扫描提示小病灶可能依然存在，且实际上病人在第一时间点为PR而非CR。这种情况下，原来的“CR”应该改为“PR”，最佳响应也应该是PR。
复制自：Eisenhauer EA,Therasse P,Bogaerts J,Schwartz LH,Sargent D,FordR,等人“实体瘤中的新响应评估标准：修正的RECIST指南(1.1版)”(New responseevaluation criteria in solid tumors:revised RECIST guideline(version 1.1)).Eur J Cancer.2009；45:228-47。
6.4.8.4.东部合作肿瘤小组表现状态
Figure BDA0003592694230001271
ECOG:东部合作肿瘤小组
复制自：Oken MM,Creech RH,Tormey DC,Horton J,Davis TE,McFadden ET,等人“东部合作肿瘤小组的毒性和响应标准”(Toxicity and response criteria of theEastern Cooperative Oncology Group).Am J Clin Oncol.1982；5:649-55.
6.4.8.5.EQ-5D-5L
在每个标题下，请在能最恰当地描述您今天的健康状况一个方格上打“√”。
Figure BDA0003592694230001281
美国(英语版)
Figure BDA0003592694230001282
2009EUROQOL集团EQ-5DTM是EUROQOL集团的商标。
Figure BDA0003592694230001291
美国(英语版)
Figure BDA0003592694230001295
2009EUROQOL集团EQ-5DTM是EUROQOL集团的商标。
6.4.8.6.疼痛评估
Figure BDA0003592694230001292
请圈出对你最近24小时内最剧烈的疼痛最恰当描述的数字以对疼痛评级。
Figure BDA0003592694230001293
6.4.8.7.用于人类临床研究的缩写和定义列表
缩写列表
Figure BDA0003592694230001294
Figure BDA0003592694230001301
Figure BDA0003592694230001311
6.4.8.8.人类研究用术语的定义
Figure BDA0003592694230001312
7.序列表
本说明书与序列表的计算机可读形式(CRF)副本一起提交。该CRF名为“14369-248-228_SEQ_LISTING.txt”，于2020年7月30日提交，大小为39,675字节，通过引用其全部内容纳入本文。

Claims (56)

1.一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，
其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和
其中，对象具有激素受体阳性和人表皮生长因子受体2阴性(HR+/HER2-)乳腺癌。
2.如权利要求1所述的方法，其中HR+/HER2-乳腺癌是***受体(ER)阳性和/或孕酮受体(PR)阳性且HER2阴性。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中该对象患有局部晚期或转移性癌症。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述对象之前在转移性或局部晚期情形下接受过至少一线的内分泌治疗和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4/6抑制剂。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该对象先前已接受紫杉烷或蒽环类药物治疗。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中该对象在乳腺癌易感基因(BRCA)1或BRCA2中具有有害种系突变，且其中该对象先前已用聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗。
7.一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，
其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和
其中，该对象患有ER阴性、PR阴性和HER2阴性(ER-/PR-/HER2-)乳腺癌(三阴性乳腺癌-TNBC)。
8.如权利要求7所述的方法，其中该对象患有局部晚期或转移性癌症。
9.如权利要求7或8所述的方法，其中该对象先前已接受至少两线的***治疗。
10.如权利要求9所述的方法，其中该对象先前已接受紫杉烷治疗。
11.如权利要求7至10中任一项所述的方法，其中该对象在乳腺癌易感基因(BRCA)1或BRCA2中具有有害种系突变，且其中该对象先前已用聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂治疗。
12.一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，
其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和
其中所述对象具有鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)。
13.如权利要求12所述的方法，其中该对象患有局部晚期或转移性癌症。
14.如权利要求12或13所述的方法，其中该对象在基于铂的疗法后有进展或复发。
15.如权利要求14所述的方法，其中该对象在基于铂的疗法后12个月内有进展或复发。
16.如权利要求12至15中任一项所述的方法，其中所述对象之前接受过程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)的抑制剂或程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的抑制剂的治疗，其中，PD-1的抑制剂任选为纳武单抗，且其中任选地，PD-L1的抑制剂选自阿特珠单抗、阿维单抗和度伐鲁单抗。
17.一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，
其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和
其中所述对象具有非鳞状NSCLC。
18.如权利要求17所述的方法，其中该对象具有野生型表皮生长因子受体(EGFR)及野生型间变性淋巴瘤激酶(ALK)。
19.如权利要求17或18所述的方法，其中该对象患有局部晚期或转移性癌症。
20.如权利要求17至19中任一项所述的方法，其中该对象在基于铂的疗法后有进展或复发。
21.如权利要求20所述的方法，其中该对象在基于铂的疗法后12个月内有进展或复发。
22.如权利要求17至21中任一项所述的方法，其中所述对象之前接受过程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)的抑制剂或程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的抑制剂的治疗，其中，PD-1的抑制剂任选为纳武单抗，且其中任选地，PD-L1的抑制剂选自阿特珠单抗、阿维单抗和度伐鲁单抗。
23.一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，
其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和
其中所述对象具有局部晚期或转移性头颈癌。
24.如权利要求23所述的方法，其中该对象在基于铂的疗法后有进展或复发。
25.如权利要求24所述的方法，其中该对象在基于铂的疗法后6个月内有进展或复发。
26.如权利要求23至25中任一项所述的方法，其中所述对象之前接受过程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)的抑制剂或程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的抑制剂的治疗，其中，PD-1的抑制剂任选为纳武单抗，且其中任选地，PD-L1的抑制剂选自阿特珠单抗、阿维单抗和度伐鲁单抗。
27.一种预防或治疗对象癌症的方法，包括给予对象有效量的抗体药物偶联物，
其中，所述抗体药物偶联物包含抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段结合与一个或多个单甲基奥瑞他汀E(MMAE)单元偶联的191P4D12，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含互补性决定区(CDR)，其包含SEQ ID NO:22中所示重链可变区的CDR的氨基酸序列，以及包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR，其包含SEQ ID NO:23中所示轻链可变区的CDR的氨基酸序列；和
其中所述对象具有胃或食管癌。
28.如权利要求27所述的方法，其中该对象患有局部晚期或转移性癌症。
29.如权利要求27或28所述的方法，其中所述对象在基于铂的疗法和/或包括氟嘧啶的化疗后进展或复发。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述对象在基于铂的疗法和/或包括氟嘧啶的化疗后6个月内进展或复发。
31.如权利要求27至30中任一项所述的方法，其中该胃癌或食管癌是HER2阳性癌症，且其中该对象先前已接受HER2靶向治疗。
32.如权利要求1至31中任一项所述的方法，其中，所述抗体或其抗原结合片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO:9的CDR H1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:10的CDR H2，含有氨基酸序列SEQ ID NO:11的CDR H3；含有氨基酸序列SEQ ID NO:12的CDR L1，含有氨基酸序列SEQID NO:13的CDR L2，和含有氨基酸序列SEQ ID NO:14的CDR L3，或
其中所述抗体或其抗原结合片段包括：含有氨基酸序列SEQ ID NO:16的CDR H1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:17的CDR H2，含有氨基酸序列SEQ ID NO:18的CDR H3；含有氨基酸序列SEQ ID NO:19的CDR L1，含有氨基酸序列SEQ ID NO:20的CDR L2，和含有氨基酸序列SEQ ID NO:21的CDR L3。
33.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:22，和所述轻链可变区包含氨基酸序列SEQ ID NO:23。
34.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述抗体包括重链和轻链，所述重链包含从SEQ ID NO:7的第20个氨基酸(谷氨酸)到第466个氨基酸(赖氨酸)范围的氨基酸序列，而所述轻链包含从SEQ ID NO:8的第23个氨基酸(天冬氨酸)到第236个氨基酸(半胱氨酸)范围的氨基酸序列。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中，所述抗原结合片段是Fab、F(ab′)2、Fv或scFv片段。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其中，所述抗体是完全人抗体。
37.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中，所述抗体或其抗原结合片段是重组产生的。
38.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其中，所述抗体药物偶联物具有如下结构：
Figure FDA0003592694220000051
其中L-代表抗体或其抗原结合片段，并且p是1-10。
39.如权利要求38所述的方法，其中p是2-8。
40.如权利要求38所述的方法，其中p是3-5。
41.如权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述抗体或抗原结合片段通过接头连接到单甲基奥瑞他汀E(MMAE)的每个单元。
42.如权利要求41所述的方法，其中，接头是酶可裂解接头，并且其中所述接头与所述抗体或其抗原结合片段的硫原子形成键。
43.如权利要求41所述的方法，其中接头具有式：–Aa–Ww–Yy–；其中–A–是延伸体单元，a是0或1；–W–是氨基酸单元，w是0-12内的整数，和–Y–是间隔单元，y是0、1或2。
44.如权利要求43所述的方法，其中，所述延伸体单元具有下述式(I)结构；所述氨基酸单元是缬氨酸瓜氨酸；和所述间隔单元是包含下述式(2)结构的PAB基团：
Figure FDA0003592694220000052
Figure FDA0003592694220000061
45.如权利要求43所述的方法，其中，所述延伸体单元与所述抗体或其抗原结合片段的硫原子形成键；并且其中所述间隔单元通过氨基甲酸酯基团与MMAE连接。
46.如权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述抗体药物偶联物在每个抗体或其抗原结合片段包含1至10个MMAE单位。
47.如权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述抗体药物偶联物在每个抗体或其抗原结合片段包含2至8个MMAE单位。
48.如权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述抗体药物偶联物在每个抗体或其抗原结合片段包含3至5个MMAE单位。
49.如权利要求1至48中任一项所述的方法，其中该抗体药物偶联物以1至10mg/kg对象体重、1至5mg/kg对象体重、1至2.5mg/kg对象体重或1至1.25mg/kg对象体重的剂量给予。
50.如权利要求49所述的方法，其中以约1mg/kg对象体重的剂量给予抗体药物偶联物。
51.如权利要求49所述的方法，其中以约1.25mg/kg对象体重的剂量给予抗体药物偶联物。
52.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中通过静脉内(IV)注射或输注给予抗体药物偶联物。
53.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中所述抗体药物偶联物通过静脉内(IV)注射或输注在约30分钟内给予，每三周周期两次。
54.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中所述抗体药物偶联物通过静脉内(IV)注射或输注在每三周周期的第1天和第8天再约30分钟内给予。
55.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中所述抗体药物偶联物通过静脉内(IV)注射或输注在约30分钟内给予，每四周周期三次。
56.如权利要求1至51中任一项所述的方法，其中，配制在所述药物组合物中的所述抗体药物偶联物于每四周周期的第1天、第8天和第15天，在约30分钟内通过静脉内(IV)注射或输注给予。
CN202080071695.6A 2019-08-13 2020-08-10 用结合191p4d12蛋白的抗体药物偶联物（adc）治疗癌症 Pending CN114901690A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962886270P 2019-08-13 2019-08-13
US62/886,270 2019-08-13
PCT/US2020/045567 WO2021030240A1 (en) 2019-08-13 2020-08-10 Treatment of cancers with antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114901690A true CN114901690A (zh) 2022-08-12

Family

ID=74569853

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080071695.6A Pending CN114901690A (zh) 2019-08-13 2020-08-10 用结合191p4d12蛋白的抗体药物偶联物（adc）治疗癌症

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20230001005A1 (zh)
EP (1) EP4013795A4 (zh)
JP (1) JP2022544227A (zh)
KR (1) KR20220054321A (zh)
CN (1) CN114901690A (zh)
AU (1) AU2020329761A1 (zh)
BR (1) BR112022002391A2 (zh)
CA (1) CA3150274A1 (zh)
IL (1) IL290391A (zh)
MX (1) MX2022001731A (zh)
TW (1) TW202120557A (zh)
WO (1) WO2021030240A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20230330223A1 (en) * 2020-04-27 2023-10-19 Agendia N.V. Treatment of her2 negative, mammaprint high risk 2 breast cancer
WO2024012536A1 (zh) * 2022-07-14 2024-01-18 百奥泰生物制药股份有限公司 抗Nectin-4抗体、其抗体药物偶联物及应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150306245A1 (en) * 2010-09-29 2015-10-29 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3303399A1 (en) * 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
CN113677364A (zh) * 2018-12-03 2021-11-19 艾更斯司股份有限公司 包含抗191p4d12抗体药物偶联物的药物组合物及其使用方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150306245A1 (en) * 2010-09-29 2015-10-29 Agensys, Inc. Antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JASMINA RAJC等: "Prognostic role of Nectin-4 expression in luminal B (HER2 negative) breast cancer", PATHOLOGY - RESEARCH AND PRACTICE, vol. 213, no. 9, pages 1102 - 1108, XP085197914, DOI: 10.1016/j.prp.2017.07.019 *
PIA M. CHALLITA-EID等: "Enfortumab Vedotin Antibody–Drug Conjugate Targeting Nectin-4 Is a Highly Potent Therapeutic Agent in Multiple Preclinical Cancer Models", CANCER RES, vol. 76, no. 10, pages 3003 - 3013, XP055385700, DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-15-1313 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20230001005A1 (en) 2023-01-05
JP2022544227A (ja) 2022-10-17
CA3150274A1 (en) 2021-02-18
WO2021030240A1 (en) 2021-02-18
KR20220054321A (ko) 2022-05-02
EP4013795A1 (en) 2022-06-22
MX2022001731A (es) 2022-07-13
TW202120557A (zh) 2021-06-01
BR112022002391A2 (pt) 2022-12-13
IL290391A (en) 2022-04-01
EP4013795A4 (en) 2023-11-15
AU2020329761A1 (en) 2022-03-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2694111T3 (en) Antibody pharmaceutical conjugates
US20200338206A1 (en) Egfr antibody conjugates
KR20220054700A (ko) 항-folr1 면역접합체 투약 섭생
KR20210041124A (ko) 항-folr1 면역접합체 투여 레지멘
US20220175950A1 (en) Pharmaceutical compositions comprising anti-191p4d12 antibody drug conjugates and methods of use thereof
US20230001005A1 (en) Treatment of cancers with antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
US20230025600A1 (en) Treatment of cancers with antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
CA3198359A1 (en) Methods for treating cancers with antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
US20140356383A1 (en) Administration of an anti-gcc antibody-drug conjugate and a dna damaging agent in the treatment of cancer
KR20230040989A (ko) 항체 약물 접합체(adc)로 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 마커
US20230330241A1 (en) Humanized anti-liv1 antibodies for the treatment of cancer
CN116490213A (zh) 用于治疗癌症的人源化抗liv1抗体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 40075918

Country of ref document: HK