CN114847276A - 一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，包括20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×106CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2‑3g/L、柠檬酸0.3‑0.5g/L、盐0.5‑1g/L，溶剂为水，本发明提供的脱叶链霉菌FT05W是从植物根系内部分离的链霉菌，该链霉菌可防治由核盘菌引起的菌核病，并对多种病原真菌具有良好的抑制效果，在温室条件下，能够提高生菜、番茄等园艺植物的抗逆性，促进其生长，对烟草和蔬菜种子等的萌发亦有一定促进作用，另外，链霉菌产生的包括几丁质酶在内的多种有益次生代谢产物和抑菌物质，是颇为有效的真菌病害生防菌株及植物促生细菌。

Description

一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液
技术领域
本发明属于切花保鲜液领域，具体为一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液。
背景技术
非洲菊又名扶郎花、猩猩菊等,为菊科多年生宿根草本花卉,花朵硕大,花色丰富,被誉为世界十大切花之一，非洲菊花头较大且重，采后花枝与母体间营养水分运输切断,加上细菌、真菌等微生物感染,以及乙烯产生和生理变化等影响,易发生花朵早焉、花茎弯曲、花瓣脱落等现象,极大地降低了其观赏品质。
目前,有关非洲菊切花保鲜配方研究已有不少报道，主要集中于化学保鲜，更多研究集中于化学保鲜，主要是使用氯化钾(KCl)、硼化钠(NaB)、硝酸银(AgNO3)、2,4,5-T(2,4,5-三氯酚氧乙酸)等化学药剂,这些化学药剂不仅会对人体产生危害，还会加剧环境污染的问题，而且对非洲菊切花的生物保鲜效果不佳。
发明内容：
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，解决了背景技术中提到的问题。
为了解决上述问题，本发明提供了一种技术方案：
一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，所述切花保鲜液的配方包括20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×106CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2-3g/L、柠檬酸0.3-0.5g/L、盐0.5-1g/L，溶剂为水。
作为优选，述水为纯净水、矿泉水、蒸馏水和过滤水中的一种。
作为优选，所述抗氧化剂为植酸钠和醋酸锌中的一种或任意比例的两种混合。
作为优选，所述盐为含有碱土金属离子的硫酸盐、硝酸盐、氯化盐、碳酸盐以及氢氧化物中的一种或任意比例的多种混合而成。
所述脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液的制备方法包括以下步骤：
S1、选取容量为2升的烧杯，然后向烧杯中倒入1升蒸馏水并将其加热至沸腾，在此过程中称取50g察氏培养基、8g琼脂，待蒸馏水沸腾后将称取后的察氏固体培养基、琼脂加入烧杯中，并进行持续混合，从而使察氏培养基、琼脂和酵母粉在蒸馏水中充分溶解得到溶液；
S2、将S1中的溶液倒入无菌锥形瓶中，并用棉花塞对无菌锥形瓶进行密封，然后将其置于120℃-125℃的温度下灭菌，灭菌完成后放到超净工作台冷却得到培养基；
S3、取100个90mm灭菌后的培养皿，将冷却后培养基倒入培养皿中，并确保每个培养皿倒入10mL，将培养基在培养皿中充分摇晃均匀，使其均匀且光滑的分布在培养皿底部，冷却待用；
S4、待培养基充分冷却完成后，采用画平板的方法呈波浪形将菌株母盘中的链霉菌接种到培养基上，全部接种完成后，用封口膜密封写上日期和菌株编号，放到恒温培养箱中，在24℃-28℃的条件下培养；
S5、将培养好的链霉菌从培养箱中取出，在超净工作台中将每盘链霉菌用无菌水将表面的孢子刮下，用灭菌的漏斗和纱布过滤到已灭菌的锥形瓶中待用；
S6、母液制作完成后，吸取1mL母液，采用等比稀释的方法进行稀释，吸取0.1mL的孢子悬浮液加入到链霉菌培养基中，用接种环涂抹均匀、密封；
S7、在恒温光照培养箱中保持24℃-28℃的条件下培养一周，统计菌落数量，倒推出母液的浓度；
S8、确定母液浓度后，根据处理需求用无菌水对母液进行稀释，从而制得脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液，然后装入到灭菌的离心管中待用。
作为优选，所述S2中的灭菌时间为25-30min。
作为优选，所述S5中漏斗和纱布的目数均为10000目。
作为优选，所述S4中培养的时间为6-8天。
本发明的有益效果是：脱叶链霉菌FT05W是从植物根系内部分离的链霉菌，该链霉菌可防治由核盘菌引起的菌核病，并对多种病原真菌具有良好的抑制效果，在温室条件下，能够提高生菜、番茄等园艺植物的抗逆性，促进其生长，对烟草和蔬菜种子等的萌发亦有一定促进作用，另外，链霉菌产生的包括几丁质酶在内的多种有益次生代谢产物和抑菌物质，为有效的真菌病害生防菌株及植物促生细菌。
附图说明：
为了易于说明，本发明由下述的具体实施及附图作以详细描述。
图1是链霉菌FT05W对非洲菊切花瓶插寿命的影响图；
图2是链霉菌FT05W对非洲菊切花外观品质的影响图；
图3是链霉菌FT05W对非洲菊切花瓶插液中菌落数量的影响。
具体实施方式：
如图1-3所示，本具体实施方式采用以下技术方案：
实施例：
本发明提供一种技术方案：一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，所述切花保鲜液的配方包括20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×106CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2-3g/L、柠檬酸0.3-0.5g/L、盐0.5-1g/L，溶剂为水。
可理解的，其中所述的柠檬酸是一种较强的有机酸，有3个H+可以电离，可以抑制切面上的微生物生长，从而达到防止腐化作用；硝酸钠能提高植物对水的利用率，能使植物的蒸腾作用达到很小，提高对水的吸收效率，减少植物对溶液或灌溉水中氯的吸收；脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液可防治由核盘菌引起的菌核病，并对多种病原真菌具有良好的抑制效果，在温室条件下，能够提高生菜、番茄等园艺植物的抗逆性，促进其生长，对烟草和蔬菜种子等的萌发亦有一定促进作用。
其中，上述水为纯净水、矿泉水、蒸馏水和过滤水中的一种。
其中，所述抗氧化剂为植酸钠和醋酸锌中的一种或任意比例的两种混合。
其中，所述盐为含有碱土金属离子的硫酸盐、硝酸盐、氯化盐、碳酸盐以及氢氧化物中的一种或任意比例的多种混合而成。
所述脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液的制备方法包括以下步骤：
S1、选取容量为2升的烧杯，然后向烧杯中倒入1升蒸馏水并将其加热至沸腾，在此过程中称取50g察氏培养基、8g琼脂，待蒸馏水沸腾后将称取后的察氏培养基、琼脂加入烧杯中，并进行持续混合，从而使察氏培养基、琼脂在蒸馏水中充分溶解得到溶液；
S2、将S1中的溶液倒入无菌锥形瓶中，并用棉花塞对无菌锥形瓶进行密封，然后将其置于120℃-125℃的温度下灭菌，灭菌完成后放到超净工作台冷却得到培养基；
S3、取100个90mm灭菌后的培养皿，将冷却后培养基倒入培养皿中，并确保每个培养皿倒入10mL，将培养基在培养皿中充分摇晃均匀，使其均匀且光滑的分布在培养皿底部，冷却待用；
S4、待培养基充分冷却完成后，采用画平板的方法呈波浪形将菌株母盘中的链霉菌接种到培养基上，全部接种完成后，用封口膜密封写上日期和菌株编号，放到恒温培养箱中，在24℃-28℃的条件下培养；
S5、将培养好的链霉菌从培养箱中取出，在超净工作台中将每盘链霉菌用无菌水将表面的孢子刮下，用灭菌的漏斗和纱布过滤到已灭菌的锥形瓶中待用；
S6、母液制作完成后，吸取1mL母液，采用等比稀释的方法进行稀释，吸取0.1mL的孢子悬浮液加入到链霉菌培养基中，用接种环涂抹均匀、密封；
S7、在恒温光照培养箱中保持24℃-28℃的条件下培养一周，统计菌落数量，倒推出母液的浓度；
S8、确定母液浓度后，根据处理需求用无菌水对母液进行稀释，从而制得脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液，然后装入到灭菌的离心管中待用。
其中，所述S2中的灭菌时间为25-30min。
其中，所述S5中漏斗和纱布的目数均为10000目。
其中，所述S4中培养的时间为6-8天。
实施例1、一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，切花保鲜液的配方为20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×104CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2g/L、柠檬酸0.3/L、盐0.5g/L，溶剂为水。
具体的，先选取一个适量的容器，参照配方称取20g蔗糖、10g硝酸钠、1ml1.0×104CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、2g抗氧化剂、0.3柠檬酸、0.5g盐和1升水，然后将称取后的原料倒入容器中，用玻璃棒对其进行搅拌，使蔗糖、硝酸钠、1.0×104CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂、柠檬酸和盐均在水中溶解，直至所有成分均与水充分混合即可制得所需保鲜液A。
实施例2、一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，切花保鲜液的配方为20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×105CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2g/L、柠檬酸0.3/L、盐0.5g/L，溶剂为水。
具体的，先选取一个适量的容器，参照配方称取20g蔗糖、10g硝酸钠、1ml1.0×105CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、2g抗氧化剂、0.3柠檬酸、0.5g盐和1升水，然后将称取后的原料倒入容器中，用玻璃棒对其进行搅拌，使蔗糖、硝酸钠、1.0×105CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂、柠檬酸和盐均在水中溶解，直至所有成分均与水充分混合即可制得所需保鲜液B。
实施例3、一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，切花保鲜液的配方为20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×106CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2g/L、柠檬酸0.3/L、盐0.5g/L，溶剂为水。
具体的，先选取一个适量的容器，参照配方称取20g蔗糖、10g硝酸钠、1ml1.0×106CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、2g抗氧化剂、0.3柠檬酸、0.5g盐和1升水，然后将称取后的原料倒入容器中，用玻璃棒对其进行搅拌，使蔗糖、硝酸钠、1.0×106CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂、柠檬酸和盐均在水中溶解，直至所有成分均与水充分混合即可制得所需保鲜液C。
实施例4、一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，切花保鲜液的配方为20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×107CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2g/L、柠檬酸0.3/L、盐0.5g/L，溶剂为水。
具体的，先选取一个适量的容器，参照配方称取20g蔗糖、10g硝酸钠、1ml1.0×107CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、2g抗氧化剂、0.3柠檬酸、0.5g盐和1升水，然后将称取后的原料倒入容器中，用玻璃棒对其进行搅拌，使蔗糖、硝酸钠、1.0×107CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂、柠檬酸和盐均在水中溶解，直至所有成分均与水充分混合即可制得所需保鲜液D。
实施例5、一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，切花保鲜液的配方为20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×108CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2g/L、柠檬酸0.3/L、盐0.5g/L，溶剂为水。
具体的，先选取一个适量的容器，参照配方称取20g蔗糖、10g硝酸钠、1ml1.0×108CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、2g抗氧化剂、0.3柠檬酸、0.5g盐和1升水，然后将称取后的原料倒入容器中，用玻璃棒对其进行搅拌，使蔗糖、硝酸钠、1.0×108CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂、柠檬酸和盐均在水中溶解，直至所有成分均与水充分混合即可制得所需保鲜液E。
性能测试
实验材料：
红色系非洲菊切花
测试内容：
采用不同浓度的链霉菌FT05W进行非洲菊切花保鲜，试验设计五个链霉菌瓶插液处理及一个对照。通过对瓶插寿命、外观形态、生理生化指标及瓶插液菌落数情况的检测，旨在探索非洲菊切花保鲜过程中的生理变化规律和保鲜效果，并筛选出适于非洲菊切花保鲜的新型生物保鲜剂—链霉菌FT05W孢子悬浮液的最佳浓度。
以红色系非洲菊切花为试验材料，在瓶插第0d、2d、4d、6d、8d、10d、12d分别进行外观形态和保鲜效果的观察、测定。
实施例1至5中链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液效果验证实验：
不同浓度的链霉菌孢子悬浮液为试验变量设计瓶插液处理，具体如下：
处理A:基础保鲜液+1.0×104CFU/mL链霉菌孢子悬浮液；
处理B:基础保鲜液+1.0×105CFU/mL链霉菌孢子悬浮液；
处理C:基础保鲜液+1.0×106CFU/mL链霉菌孢子悬浮液；
处理D:基础保鲜液+1.0×107CFU/mL链霉菌孢子悬浮液；
处理E:基础保鲜液+1.0×108CFU/mL链霉菌孢子悬浮液；
对照组(CK):基础保鲜液+蒸馏水。
选择初次开花、长势一致、无病虫害的新鲜花枝。花材带回后先放在清水中等待处理，处理时在清水中用刀片以45°角斜切，留长度(从斜口处到花朵顶部)约为30cm，将其***盛有300mL各处理瓶插液的三角瓶中，每瓶3枝，每处理重复3次；用脱脂棉将瓶口封好，防止水分蒸发；置于室温12℃左右、空气相对湿度60％～80％的无直射光照射、通风透光室内。瓶插中后期测定菌落数；逐日观察切花的瓶插寿命，并于当天开始每天早上八点进行观察并记录其外观形态指标和保鲜效果，直至花枝失去观赏价值为止。
外观形态指标和保鲜效果
切花外观品质及瓶插寿命：
每天观察切花的外观品质变化，具体包括对花瓣萎蔫、花茎弯折等现象进行记录(瓶插当天记为第0d)，瓶插寿命的终结以50％以上的舌状花瓣失水萎蔫掉落、花茎弯曲或花头下垂为准；
最大花径增加率：
每天用游标卡尺十字测量非洲菊的花径并计算出其平均值，最大花径增加率(％)＝(最终最大花径－初始最大花径)/初始最大花径×100％；
菌落培养及菌落数量测定
将各处理保鲜液等比稀释，取0.2mL均匀涂布于牛肉膏蛋白胨培养基中，每浓度3～5个重复，密封后放入37℃恒温培养箱中培养18～24h，随时观察生长状况，统计菌落数量,母液浓度(CFU/mL)＝平均菌落数×稀释倍数×5。
结果与分析
如图1所示，添有链霉菌的保鲜液能延长非洲菊切花瓶插寿命，以处理C最高，为18.67d，显著高于CK 4d。瓶插寿命依次为处理C＞D＞B＞A＞E＞CK。按处理A至E顺序，较CK分别增长了11.32％、18.13％、27.27％、20.45％和9.07％。同时，添加链霉菌处理对最大花径增加率也有促进效果，比CK分别高34.36％、92.82％、177.95％、122.31％和34.10％，以C处理最高，较CK显著，提升了切花的观赏质量。由此可知，链霉菌FT05W能延长非洲菊切花的瓶插寿命，提高最大花径增加率，以1.0×106CFU/mL浓度处理最佳。
如图2所示瓶插后7d内，各处理及CK非洲菊切花未见花瓣明显萎焉及花头下垂、花茎弯折等变化。第8d时，CK花枝花瓣出现失水萎焉现象，至此各处理切花外观品质相继发生变化。瓶插第10d时，对照及各处理均观察到明显花朵萎焉及花茎弯曲现象，其中以处理C、D变化最小，只有略微失水。第14d时，对照组切花约2/3舌状花瓣出现失水凋萎现象，观赏品质严重下降。处理C花枝状态良好，花瓣稍有失水但仍保持颜色鲜艳。此时就花朵萎焉程度而言，处理C最轻，处理D次之，处理A、B、E稍差，CK最严重，这表明链霉菌FT05W可保持非洲菊茎秆支持力，以防止花头下垂、切花弯茎，还能显著提高切花的鲜活力和观赏品质，以添加1.0×106CFU/mL链霉菌FT05W保鲜液的效果最好；
如图3所示，各链霉菌处理均能抑制微生物的繁殖，其中以处理C瓶插液中菌落数量最少，为1.7×106CFU/mL，较CK减少了87.02％，达显著差异；处理A、B、D、E次之，分别为6.6×106CFU/mL、4.1×106CFU/mL、5.4×106CFU/mL和7.6×106CFU/mL，较对照分别减少了49.62％、68.70％、58.78％及41.98％；对照瓶插液中的菌落数量最多，达13.1×106CFU/mL。这说明在瓶插液中加入链霉菌FT05W孢子悬浮液可有效抑制微生物繁殖，以1.0×106CFU/mL链霉菌抑菌效果最突出。
切花保鲜原理是通过保鲜液提供必要营养，保持水分平衡，抑制切花衰老的生理变化等，从而延长鲜切花的瓶插寿命，并且提高最大花径增加率，提升其观赏质量。本试验瓶插液中蔗糖、硝酸钙(20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L)等成分可为非洲菊切花提供能源，增加溶液渗透压和切花花瓣细胞膨压，以保持切花水分平衡，延缓衰老。
结果与讨论
瓶插寿命、外观品质、最大花径增加率及微生物菌落数等是衡量切花观赏价值的重要指标。通过研究发现，经链霉菌FT05W处理后的非洲菊，瓶插寿命最高可达18.67d，较CK延长4d，最大花径增加率也有显著的提升。这可能是链霉菌在非洲菊茎部切口表面形成一个半透性薄膜，抑制了有害微生物的入侵和繁殖，从而延长切花瓶插寿命，维持其品质，链霉菌FT05W也可能调控SOD、POD和CAT等植物细胞中能清除活性氧、保护细胞尤其是膜***免遭受自由基伤害的酶类，从而构建生物防御体系。
本研究发现，凡经链霉菌处理过的各组，其瓶插液菌落数均明显少于对照，其中又以处理C瓶插液中菌落数量最少，较对照减少了87.02％，达显著差异。这可能是链霉菌通过对营养物质、生长空间的有效竞争，使之定殖成为优势物种从而发挥拮抗作用，因此链霉菌FT05W具有明显抑菌作用，可有效抑制微生物繁殖，延长非洲菊瓶插保鲜时间。
综上可知，链霉菌FT05W可延长非洲菊切花瓶插保鲜时间，对其品质具有较好的维持作用，表明该菌株在切花保鲜实践方面具有一定的开发价值，其中以处理C(1.0×106CFU/mL)的效果最好。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“同轴”、“底部”、“一端”、“顶部”、“中部”、“另一端”、“上”、“一侧”、“顶部”、“内”、“前部”、“中央”、“两端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

Claims (8)

1.一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于，所述切花保鲜液的配方包括20g/L蔗糖、硝酸钠10g/L、1.0×106CFU/mL脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液、抗氧化剂2-3g/L、柠檬酸0.3-0.5g/L、盐0.5-1g/L，溶剂为水。
2.根据权利要求1所述的一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于，所述水为纯净水、矿泉水、蒸馏水和过滤水中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于，所述抗氧化剂为植酸钠和醋酸锌中的一种或任意比例的两种混合。
4.根据权利要求1所述的一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于，所述盐为含有碱土金属离子的硫酸盐、硝酸盐、氯化盐、碳酸盐以及氢氧化物中的一种或任意比例的多种混合而成。
5.根据权利要求1所述的一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于：所述脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液的制备方法包括以下步骤：
S1、选取容量为2升的烧杯，然后向烧杯中倒入1升蒸馏水并将其加热至沸腾，在此过程中称取50g察氏培养基、8g琼脂，待蒸馏水沸腾后将称取后的察氏培养基、琼脂加入烧杯中，并进行持续混合，从而使察氏培养基、琼脂在蒸馏水中充分溶解得到溶液；
S2、将S1中的溶液倒入无菌锥形瓶中，并用棉花塞对无菌锥形瓶进行密封，然后将其置于120℃-125℃的温度下灭菌，灭菌完成后放到超净工作台冷却得到培养基；
S3、取100个90mm灭菌后的培养皿，将冷却后培养基倒入培养皿中，并确保每个培养皿倒入10mL，将培养基在培养皿中充分摇晃均匀，使其均匀且光滑的分布在培养皿底部，冷却待用；
S4、待培养基充分冷却完成后，采用画平板的方法呈波浪形将菌株母盘中的链霉菌接种到培养基上，全部接种完成后，用封口膜密封写上日期和菌株编号，放到恒温培养箱中，在24℃-28℃的条件下培养；
S5、将培养好的链霉菌从培养箱中取出，在超净工作台中将每盘链霉菌用无菌水将表面的孢子刮下，用灭菌的漏斗和纱布过滤到已灭菌的锥形瓶中待用；
S6、母液制作完成后，吸取1mL母液，采用等比稀释的方法进行稀释，吸取0.1mL的孢子悬浮液加入到链霉菌培养基中，用接种环涂抹均匀、密封；
S7、在恒温光照培养箱中保持24℃-28℃的条件下培养一周，统计菌落数量，倒推出母液的浓度；
S8、确定母液浓度后，根据处理需求用无菌水对母液进行稀释，从而制得脱叶链霉菌FT05W孢子悬浮液，然后装入到灭菌的离心管中待用。
6.根据权利要求1所述的一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于，所述S2中的灭菌时间为25-30min。
7.根据权利要求1所述的一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于，所述S5中漏斗和纱布的目数均为10000目。
8.根据权利要求1所述的一种基于链霉菌孢子悬浮液的切花保鲜液，其特征在于，所述S4中培养的时间为6-8天。
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