CN114746448A - 用于肿瘤治疗的双特异性融合蛋白 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种二聚体在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，所述二聚体由两条多肽链形成，其中所述两条多肽链中的每一条均包含抗体Fc亚单位，其中所述二聚体包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)，所述ISVD中的至少一个特异于PD‑L1，并且所述ISVD中的至少一个特异于CTLA4。本公开还提供了一种用于治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，其中所述受试者对免疫检查点抑制剂疗法耐药。

Description

用于肿瘤治疗的双特异性融合蛋白
背景技术
阻断PD1/PD-L1相互作用可导致肿瘤特异性T细胞免疫增强，进而导致免疫***清除肿瘤细胞。程序性死亡配体-1(PD-L1)在抗原呈递细胞以及许多人类肿瘤细胞上表达，并且已显示在结合PD-1时会下调T细胞活化和细胞因子分泌。
类似地，消除免疫调节分子(如细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA4))代表一种通过操纵免疫***来诱导肿瘤消退和延长患者生存的新的和有前途的策略。抗CTLA4抗体(如易普利姆玛(ipilimumab))也已被开发和上市用于肿瘤治疗。
近来，有报道显示了同时使用不同静脉内剂量的PD1/PD-L1抗体和CTLA4抗体进行治疗。然而，存在多种与这些同时疗法相关的缺点。例如，增加了患者的不便，添加了痛苦，并且添加了制造和表征多种药剂的难度。此外，也已经报道了次佳有效性和安全性问题。因此，仍然存在对用于肿瘤治疗的新的有希望的药剂、尤其是能够同时作用于各个靶标上的药剂的未获满足的医学需要。
发明内容
本公开提供了一种二聚体在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，以及包含两条多肽链单体的二聚体，其中该两条多肽链单体中的每条包含抗体Fc亚单位。二聚体包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)，ISVD中的至少一个特异于PD-L1，并且ISVD中的至少一个特异于CTLA4。本公开还提供了一种用于治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，包括对所述受试者施用有效量的二聚体，其中所述受试者对免疫检查点抑制剂疗法耐药。
在一个方面，本公开提供了一种二聚体在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，其中所述二聚体由两条多肽链形成，所述两条多肽链中的每一条均包含抗体Fc亚单位，所述二聚体包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)，所述ISVD中的至少一个特异于PD-L1，并且所述ISVD中的至少一个特异于CTLA4。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的至少一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的每一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者，所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；并且所述特异于CTLA4的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD的N末端融合；并且所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；并且所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于PD-L1的ISVD的N末端融合；并且所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
在一些实施方式中，所述抗体Fc亚单位来源于IgG Fc亚单位。
在一些实施方式中，所述IgG为人IgG1。
在一些实施方式中，所述抗体Fc亚单位包含如SEQ ID NO:35、38和39中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD还能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和R113，并且其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125，并且其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQID NO:2所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体为特异于PD-L1的ISVD。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD与参考抗CTLA4抗体交叉竞争结合CTLA4，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，参考抗CTLA4抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQID NO:16所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体为特异于CTLA4的ISVD。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述二聚体为均二聚体。
在一些实施方式中，所述连接子包含如SEQ ID NO:33-34中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC和乳腺癌组成的组。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由食管鳞状细胞癌(ESCC)和鼻咽癌(NPC)组成的组。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过免疫检查点抑制剂。
在一些实施方式中，所述受试者对所述免疫检查点抑制剂基本无应答。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂选自由PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂和CTLA4抑制剂组成的组。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过化疗、化放疗、CTL细胞疗法、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和/或血管生成抑制剂。
在一些实施方式中，所述化疗包含一线化疗和/或二线化疗。
在一些实施方式中，所述二线化疗包含紫杉醇、多西他赛、卡培他滨和/或5-FU。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由局部晚期或转移性黑素瘤、非角质化局部晚期复发性或转移性NPC、转移性NSCLC、鳞状和非鳞状NSCLC、复发性或转移性ESCC以及三阴性乳腺癌(TNBC)组成的组。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由无EGFR突变或ALK融合的晚期NSCLC、伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC、伴有阳性PD-L1表达的NPC以及局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
在一些实施方式中，所述二聚体与化疗剂组合施用。
在一些实施方式中，所述化疗剂包含含铂双药和/或紫杉醇。
在一些实施方式中，所述化疗剂包含顺铂、吉西他滨和/或白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)。
在另一方面，本公开提供了一种用于治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，包括对所述受试者施用有效量的本公开的二聚体。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC和乳腺癌组成的组。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由食管鳞状细胞癌(ESCC)和鼻咽癌(NPC)组成的组。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过免疫检查点抑制剂。
在一些实施方式中，所述受试者对所述免疫检查点抑制剂基本无应答。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂选自由PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂和CTLA4抑制剂组成的组。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过化疗、化放疗、CTL细胞疗法、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和/或血管生成抑制剂。
在一些实施方式中，所述化疗包含一线化疗和/或二线化疗。
在一些实施方式中，所述二线化疗包含紫杉醇、多西他赛、卡培他滨和/或5-FU。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由无EGFR突变或ALK融合的晚期NSCLC、伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC、伴有阳性PD-L1表达的NPC以及局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
在一些实施方式中，所述二聚体与化疗剂组合施用。
在一些实施方式中，所述化疗剂包含含铂双药和/或紫杉醇。
在一些实施方式中，所述化疗剂包含顺铂、吉西他滨和/或含铂双药。
在一些实施方式中，所述二聚体的剂量为1mg/kg至5mg/kg。
在一些实施方式中，所述二聚体的剂量为1mg/kg至3mg/kg。
在一些实施方式中，所述二聚体的剂量为3mg/kg至5mg/kg。
在一些实施方式中，所述二聚体按每两周一次或每三周一次施用。
在一些实施方式中，所述二聚剂通过静脉内施药来施用。
在另一方面，本公开提供了一种本公开的二聚体与本公开的铂基药剂的组合在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由实体肿瘤和血液肿瘤组成的组。
在一些实施方式中，所述肿瘤包含NSCLC和/或乳腺癌。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由鳞状和非鳞状NSCLC和三阴性乳腺癌(TNBC)组成的组。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC和局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
在一些实施方式中，所述二聚体以每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次的给药频率施用。
在一些实施方式中，所述铂基药剂以每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次的给药频率施用。
在一些实施方式中，所述二聚体以静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内的方式施用。
在一些实施方式中，所述铂基药剂以静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内的方式施用。
在一些实施方式中，所述二聚体以0.01mg/kg至100mg/kg的剂量施用。
在一些实施方式中，所述化疗剂以0.01mg/kg至100mg/kg的剂量施用。
在另一方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含本公开的二聚体与本公开的化疗剂的组合。
通过以下详细描述，本公开的其他方面和优点对于本领域技术人员来说将容易变得显而易见，其中仅示出和描述了本公开的示例性实施方式。如将要实现的，本公开能够实现其他和不同的实施方式，并且其若干细节能够在各种明显方面进行修改，所有这些都不脱离本公开。因此，附图和描述应被视为说明性的，而不是限制性的。
通过引用并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度与每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用被具体和单独地指示为并入的程度相同。
附图说明
本发明的新特征在所附权利要求书中具体阐述。通过参考阐述采用发明原理的示例性实施方式的以下详细描述和附图(以及本文中的“图”(“figure”和“FIG.”)，将获得对本发明的特征和优点的更好理解，其中：
图1说明了本公开的二聚体的示例。
图2说明了实体肿瘤患者的I期研究的有效性概要。
图3说明了使用本公开的二聚体得到的目标病变相对于基线的变化。
具体实施方式
尽管在本文中已显示和描述了发明的各种实施方式，对本领域技术人员来说显而易见的是，此类实施方式仅通过示例的方式提供。在不背离发明的情况下，本领域技术人员可做出许多变化、改变和替换。应理解，可采用本文描述的发明实施方式的各种替代方案。
如本文所用的，术语“同源性”、“同源”或“序列同一性”通常是指两个或更多个多核苷酸序列之间或者两个或更多个多肽序列之间的序列相似性或可互换性。当使用程序(例如Emboss Needle或BestFit)确定两个不同氨基酸序列的序列同一性、相似性或同源性时，可使用默认设置，或者可选择合适的打分矩阵(如blosum45或blosum80)以优化同一性、相似性或同源性分数。在一些实施方式中，同源的多核苷酸是在严格条件下杂交的那些多核苷酸，并且与参考序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、甚至100％的序列同一性。当对具有可比较长度的序列进行最佳比对时，同源的多肽可彼此具有至少80％或至少90％或至少95％或至少97％或至少98％或至少99％的序列同一性。
如在本文所识别的多肽序列的上下文中所使用的，术语“百分比(％)序列同一性”通常是指，在比对序列并且在必要情况下引入间隙以实现最大百分比序列同一性并且不考虑任何保守性替换作为序列同一性的一部分之后，查询序列中与第二参考多肽序列或其一部分的氨基酸残基或核苷酸相同的氨基酸残基或核苷酸的百分比。为确定氨基酸/核苷酸序列同一性百分比进行的比对可通过本领域技术范围内的各种途径实现，例如，使用公众可得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN、NEEDLE或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员能够确定用于测量比对的合适参数，包括在所比对的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。同一性百分比可在整个的定义的多肽/多核苷酸序列的长度上测量，或者可在较短的长度上(例如在取自较大的、定义的多肽/多核苷酸序列的片段的长度上)测量。应理解，表格、附图或序列表中的本文所示序列所支持的任何片段长度可用于描述可在其上测量同一性百分数的长度。
如本文所用的，术语“双特异性抗体”通常是指具有结合单个抗原上的两个不同表位或者结合两个不停抗原的能力的抗体。
如本文所用的，术语“PD-L1”通常是指程序性死亡配体1蛋白、其功能变体和/或其功能片段。PD-L1也被称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，是一种由CD274基因编码的蛋白质(在人类中)。PD-L1结合其受体程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)，该蛋白在活化T细胞、B细胞和巨噬细胞中表达(Ishida等人，1992EMBO J，11:3887-3395；Okazaki等人，Autoimmune dilated cardiomyopathy in PD-1receptor-deficient mice.Science，2001；291：319-22)。PD-L1和PD-1的复合通过抑制T细胞增殖以及IL-2和IFN-γ的细胞因子产生来发挥免疫抑制作用(Freeman等人，Engagement of PD-1immunoinhibitoryreceptor by a novel B7 family member leads to negative regulation oflymphocyte activation，J.Exp.Med.2000，192:1027-1034；Carter等人，PD-1：PD-Linhibitory pathway affects both CD4(+)and CD8(+)T cells and is overcome byIL-2.Eur.J.Immunol.2002，32：634-643)。例如，术语“PD-L1”可包括与NCBI登录号Q9NZQ7具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合PD1的多肽或其片段。术语PD-L1包括整个PD-L1配体、可溶性PD-L1配体和包含共价连接到例如蛋白质结构域的第二部分的PD-L1配体的功能活性部分的融合蛋白。PD-L1的定义中还包含的是氨基酸序列相对于天然PD-L1发生变化但保留了特异性地结合受体PD1的能力的变体。PD-L1的定义中进一步包括的是增强PD1的生物活性的变体。PD-L1序列是本领域中已知的，并且以例如GenBank登录号29126提供。如本文所用的，术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)，hPD-L1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“PD-L1”还包括来自其他物种的PD-L1，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔、非人灵长类动物、猪或者牛。完整hPD-L1序列可在GenBank登录号29126下找到。
如本文所用的，术语“人PD-L1的N-末端IgV结构域”通常是指人PD-L1中位于其N-末端的细胞外结构域。术语“人PD-L1的N-末端IgV结构域”也可指所述结构域内的表位。人PD-L1蛋白(包括信号肽)的N-末端IgV结构域可包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
如本文所用的，术语“CTLA4”通常是指细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4、其功能变体和/或其功能片段。CTLA4是属于CD28家族的免疫抑制受体。CTLA4在体内仅在T细胞(CD4+和CD8+细胞)上表达，并且结合两种配体CD80和CD86(分别称为B7-1和B7-2)。例如，术语“CTLA4”可包括与NCBI登录号AAL07473.1具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合CD80和/或CD86的多肽或其片段。术语“CTLA4”包括整个CTLA4受体、其细胞外结构域和包含共价连接到例如蛋白质结构域的第二部分的CTLA4的功能活性部分的融合蛋白。CTLA4的定义中还包含的是氨基酸序列相对于天然CTLA4发生变化但保留了特异性地结合配体CD80和/或CD86的能力的变体。CTLA4序列是本领域中已知的，并且以例如GenBank登录号1493提供。如本文所用的，术语“CTLA4”包括人CTLA4(hCTLA4)，hCTLA4的变体、同种型和物种同源物，以及与hCTLA4具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“CTLA4”还包括来自其他物种的CTLA4，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔、非人灵长类动物、猪或者牛。完整hCTLA4序列可在GenBank登录号1493下找到。
如本文所用的，术语“抗体Fc亚单位”通常是指抗体Fc结构域的组成部分。例如，抗体Fc结构域可由两个或更多个成员形成，每个成员可视为一个Fc亚单位。如本文所用的，术语“Fc结构域”通常是指抗体重链的Fc部分或Fc片段。例如，其可指免疫球蛋白重链恒定区的羧基末端部分或者其能够结合Fc受体的类似物或部分。如所知的，每一个免疫球蛋白重链恒定区包含四个或五个结构域。这些结构域通常依次命名：CH1-铰链-CH2-CH3(-CH4)。CH4存在于IgM中，其没有铰链区。可用于本公开中的Fc结构域或Fc亚单位可包含CH3结构域。例如，Fc结构域或Fc亚单位可包含CH2结构域和CH3结构域。在一些实施方式中，Fc结构域或Fc亚单位还可包含免疫球蛋白铰链区。例如，Fc结构域或Fc亚单位从N末端到C末端可包含CH2结构域和CH3结构域或由CH2结构域和CH3结构域组成。在另一个示例中，Fc结构域或Fc亚单位从N末端到C末端可包含免疫球蛋白铰链区、CH2结构域和CH3结构域或者由免疫球蛋白铰链区、CH2结构域和CH3结构域组成。Fc结构域或Fc亚单位内的氨基酸残基位置可根据以下确定：Kabat，E.A.等人，(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版，NIH公开号91-3242。
如本文所用的，术语“Fc结构域”通常是指免疫球蛋白重链的C-末端区域，包括天然序列Fc区域和变体Fc区域。尽管免疫球蛋白重链的Fc区域的边界可能发生变化，人IgG重链Fc区域通常被定义为从位置Cys226处的氨基酸残基或者从Pro239延伸到羧基末端。Fc区域的C-末端赖氨酸(根据EU编号***为残基447)可被去除，例如，在抗体的生产或纯化过程中，或者通过对编码抗体重链的核酸进行重组工程改造。因此，完整抗体的组成可包含去除所有K447残基的抗体群、未去除K447残基的抗体群以及带有或不带有K447残基的抗体的混合物的抗体群。适合用于本发明抗体中的天然序列Fc区域包括人IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3和IgG4。
除非本文另有说明，否则免疫球蛋白链中残基的编号为如以下所述的EU指数编号：Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，PublicHealth Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991)。“如Kabat所述的EU指数”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。
如本文所用的，术语“二聚体”通常是指由两个、通常非共价结合的单体单元形成的大分子复合物。每一个单体单元均可为大分子，如多肽链或多核苷酸。如本文所用的，术语“均二聚体”通常是指由两个基本相同的单体(如两个基本相同的多肽链)组成或形成的二聚体。在一些情形下，均二聚体的两个单体可在一个或多个区域或位置处有所不同，但是此类差别不会导致单体功能或结构的显著改变。例如，在本公开中考虑的生物学特性的上下文中，本领域普通技术人员将会认为两个单体之间的差别几乎没有或没有生物学和/或统计学显著性。所述两个单体之间的结构/组成差别可例如小于约50％，小于约40％，小于约30％，小于约20％，小于约10％，小于约5％或更少。
如本文所用的，术语“融合的”或“融合”通常是指两条多肽之间的共价连接。多肽通常经由肽键直接彼此接合或经由氨基酸连接子接合。任选地，肽可经由本领域技术人员已知的非肽共价连接来接合。
如本文所用的，术语“融合蛋白”通常是指如下的多肽：其包含直接或间接地(例如，经由连接子)与异源多肽(即，与后一多肽或其结构域无关的多肽)的氨基酸序列融合的多肽的氨基酸序列，或者可替代地，其由直接或间接地(例如，经由连接子)与异源多肽(即，与后一多肽或其结构域无关的多肽)的氨基酸序列融合的多肽的氨基酸序列组成。
本文使用的术语“免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)”通常分别指抗原结合结构域或片段，如VHH结构域或VH或VL结构域。术语抗原结合分子或抗原结合蛋白可互换使用，并且还包括术语纳米抗体。免疫球蛋白单一可变结构域进一步可为轻链可变结构域序列(例如，VL序列)，或者重链可变结构域序列(例如，VH序列)；更具体地，它们可为来源于常规四链抗体的重链可变结构域序列或者来源于重链抗体的重链可变结构域序列。因此，免疫球蛋白单一可变结构域可为结构域抗体或者适合用作结构域抗体的免疫球蛋白序列，单一结构域抗体或适合用作单一结构域抗体的免疫球蛋白序列，“dAb”或适合用作dAb的免疫球蛋白序列或纳米抗体，包括但不限于VHH序列。免疫球蛋白单一可变结构域包括全人源免疫球蛋白序列、人源化免疫球蛋白序列、其他序列优化的免疫球蛋白序列或者嵌合的免疫球蛋白序列。免疫球蛋白单一可变结构域和免疫球蛋白单一可变结构域的结构可被认为是——然而并不限于此——由四个框架区或“FR”构成，它们在本领域和本文中分别被称为“框架区1”或“FR1”；“框架区2”或“FR2”；“框架区3”或“FR3”；和“框架区4”或“FR4”，这些框架区被三个互补决定区或“CDR”中断，它们在本领域中分别被称为“互补决定区1”或“CDR1”；“互补决定区2”或“CDR2”；和“互补决定区3”或“CDR3”。
如本文所用的，术语“人源化”通常是指其中非人抗体的CDR结构域之外的一些、大部分或全部氨基酸被替换为来源于人免疫球蛋白的相应氨基酸的抗体或其片段。例如，在抗体的人源化形式中，CDR结构域之外的一些、大部分或全部氨基酸已被替换为来自人免疫球蛋白的氨基酸，但一个或多个CDR区域内的一些、大多数或全部氨基酸不变。氨基酸的少量添加、缺失、***、替换或修饰是允许的，只要它们不会废除抗体与其特异性抗原/表位结合的能力即可。人源化抗体可保留与初始抗体相似的抗原特异性。
如本文所用的，术语“表位”或“抗原决定簇”通常是指抗原上与抗体结合的位点。表位可由连续氨基酸形成(线性表位)或通过蛋白的三次折叠并列的非连续氨基酸形成(构象表位)。由连续氨基酸形成的表位在暴露于变性溶剂时通常得以保持，但通过三次折叠形成的表位在用变性溶剂处理时通常会丧失。表位通常包括具有独特空间构象的至少3个、更通常为至少5个或8-10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括，例如，x-射线晶体学和2维核磁共振。参见，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in MolecularBiology，第66卷，Glenn E.Morris编(1996)。
如本文所用的，术语“构象表位”通常是指通过蛋白质的三次折叠并列的抗原(如PD-L1抗原)的非连续的氨基酸残基。当多肽链折叠形成天然蛋白质时，这些非连续的氨基酸残基可在表面上集合在一起。构象表位包括但不限于功能性表位。
如本文所用的，术语“功能性表位”通常是指积极地有利于抗体结合(即，形成“活性表位”)的氨基酸残基。使抗原的任何一个积极有利的残基突变为丙氨酸将会破坏抗体的结合，从而使抗体的相对KD比率(KD突变体/KD野生型)可能例如大于2倍，如大于3倍，大于4倍，大于6倍，大于10倍，大于20倍，大于30倍，大于40倍，大于50倍，大于60倍，大于70倍，大于80倍，大于90倍，大于100倍，大于150倍，大于200倍或更多倍。
如本文所用的，术语“细胞外结构域”通常是指从细胞器和/或细胞的外膜突出的蛋白(例如，膜蛋白，如受体)的一部分。如果多肽链多次跨越双分子层，则细胞外结构域包含通过膜盘绕的环。细胞外结构域可识别和应答于特异性配体。
如本文所用的，术语“连接子”通常是指连接或链接两条多肽序列、例如连接两个多肽结构域的合成氨基酸序列。连接子可经由肽键连接两个氨基酸序列。在一些实施方式中，本公开的连接子以线性序列将生物学活性部分连接到第二部分。例如，肽连接子可为非免疫原性和柔性的，如包含丝氨酸和甘氨酸序列或者Ala-Ala-Ala重复序列的那些肽连接子。取决于二聚体的特定构建体，肽连接子可包含，例如，3-30个(如至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个、至少26个、至少27个、至少28个、至少29个、至少30个)氨基酸残基。
术语“N末端(N-terminal)”可与“N-末端(N-terminus)”互换使用，并且如本文所用的，它们通常是指多肽链的氨基末端/终端。
术语“C末端(C-terminal)”可与“C-末端(C-terminus)”互换使用，并且如本文所用的，它们通常是指多肽链的羧基末端/终端。
如本文所用的，术语“肿瘤”通常是指任何临床可测量程度的肿瘤生长或转移。肿瘤可为实体肿瘤、血液肿瘤或淋巴瘤。例如，肿瘤可选自肺癌(如小细胞肺癌)、乳腺癌(如三阴性乳腺癌)、肾癌(如肾细胞癌)、黑素瘤、***、子宫癌、胰腺癌、腹膜癌、卵巢癌和结肠癌。肿瘤可为晚期肿瘤或转移肿瘤。肿瘤可选自由NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC和乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌(TNBC))组成的组。
如本文所用的，术语“受试者”通常是指人或非人动物，包括但不限于，猫、狗、马、猪、牛、绵羊、山羊、兔、小鼠、大鼠或猴子。在一些实施方式中，受试者是人。在一些实施方式中，受试者对免疫检查点抑制剂疗法耐药。
如本文所用的，术语“约”通常是指在本领域通常容忍的范围内变化，并且通常表示在±10％内，如在所述值的±9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非上下文另有明确说明，本文提供的所有数值范围均被术语约修饰。
如本文所用的，术语“共同施用(co-administration、co-administered或co-administering)”通常是指一种药剂(例如二聚体)与另一种药剂(例如免疫检查点抑制剂)一起施用。一种药剂的施用可作为单一制剂或作为两种单独的制剂(例如，一种是二聚体，一种是免疫检查点抑制剂)。共同施用可为同时或以任何顺序依次进行的。
如本文所用的，术语"治疗"通常是指在生物体中具有治有效性果并且至少部分改善或消除异常状况。术语"治疗"是指相对于不接受药物的对照组，在对其施用药物的患者组中改善了医学状况的症状。可通过以下方式监控治疗作用：测量细胞表型的变化或无变化、细胞增殖的变化或无变化、肿瘤大小的变化或无变化、肿瘤大小的变化或无变化、进行性疾病的变化或无变化、稳定疾病的变化或无变化、疾病控制率的变化或无变化、部分应答的变化或无变化。术语“治疗(treating或treatment)”并非必然表示彻底治愈。疾病的任何不理想症状的任何程度的任何减轻或者疾病进展的延缓可被视为治疗。此外，治疗可能会包括可能会使患者的整体幸福感或外表变差的行为。
如本文所用的，术语“特异性地结合”或“特异于”通常是指在异质分子群(包括生物分子)的存在下确定靶标存在的可测量和可再现的相互作用，如靶标和抗体之间的相互作用。例如，特异性地结合靶标(其可为表位)的抗体是与结合其他靶标相比以较大亲和力、亲和性、更容易和/或以更长时间结合该靶标的抗体。在一个实施方式中，抗体与不相关抗体的结合程度小于抗体与所测量(例如通过放射免疫测定法(RIA)测量)的靶标的结合程度的约10％。在某些实施方式中，特异性地结合靶标的抗体具有<1×10-6M、<1×10-7M、<1×10-8M、<1×10-9M或<1×10-10M的解离常数(KD)。在某些实施方式中，抗体特异性地结合蛋白上的表位，该表位在来自不同物种的蛋白之间保守。在另一实施方式中，特异性地结合可包括但并非必须专一结合。
如本文所用的，术语“抗体”通常是指免疫球蛋白或者其片段或衍生物，并且涵盖任何包含抗原结合部位的多肽，无论其是在体外还是在体内产生的。该术语包括但不限于多克隆、单克隆、单特异性、多特异性、非特异性、人源化、单链、嵌合、合成、重组、杂交、突变和移植抗体。除非被术语“完整”修饰，如在“完整抗体”中那样，否则对本公开而言，术语“抗体”也包括抗体片段，如Fab、F(ab)2、Fv、scFv、Fd、dAb和其他保留抗原结合功能(即，特异性地结合例如CTLA-4或PD-Ll的能力)的抗体片段。通常，此类片段将包含抗原结合结构域。
基本的4-链抗体单元是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元和额外的称为J链的多肽组成，并且包含10个抗原结合位点，而IgA抗体由2-5个基本的4链单元组成，这些单元可聚合形成与J链结合的多价集合物(assemblages)。在IgG的情况下，4-链单元通常为约150，000道尔顿。每条L链通过一个共价二硫键连接到H链，而取决于H链同种型，两条H链通过一个或多个二硫键彼此连接。每条H和L链还具有规矩间隔的链内二硫键桥。每条H链在N-末端具有可变结构域(VH)，对于α和γ链中的每一条来说，后面是三个恒定结构域(CH)，对于μ和ε同种型来说，后面是四个CH结构域。每条L链在N-末端具有可变结构域(VL)，在其末端是恒定结构域。VL与VH对齐，并且CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。特定氨基酸残基被认为在轻链和重链可变结构域之间形成接口(interface)。VH和VL的配对共同形成单一抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和性质，参见例如以下文献：Basic and Clinical Immunology，第8版，Daniel P.Sties，Abba I.Terr和Tristram G.Parsolw(编)，Appleton&Lange，Norwalk，Conn.，1994，第71页和第6章。根据恒定结构域的氨基酸序列，可将任何脊椎动物物种的L链分为两种明显不同的类型(称为κ和λ)之一。取决于重链的恒定结构域(CH)的氨基酸序列，可将免疫球蛋白分为不同的类别或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有名为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能中的相对小的差异，γ和α类进一步分为多种子类，例如，人类表达以下子类：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1和IgK1。
如本文所用的，术语“多肽链”通常是指包含两个或更多个共价连接的肽的大分子。多肽链内的肽可经由肽键彼此连接。每条多肽链可包含一个N-末端或氨基末端和一个C-末端或羧基末端。
如本文所用的术语“CD80”通常是指CD28/CTLA4的配体(也称为B7.1)、其功能变体和/或其功能片段。CD80通常在专业的抗原呈递细胞(APC)表面上表达。例如，术语“CD80”可包含与NCBI登录号P33681具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合CTLA4的多肽或其片段。CD80的定义中还包含氨基酸序列与天然CD80不同但保持了特异性地结合CTLA4的能力的变体。CD80的定义中还包含增强CTLA4的生物学活性的变体。CD80序列在本领域是已知的，并且，例如，以GenBank登录号P33681提供。如本文所用的，术语“CD80”包括人CD80(hCD80)，hCD80的变体、同种型和物种同源物，以及与hCD80具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“CD80”还包括来自其他物种的CD80，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔、非人灵长类动物、猪或者牛。完整hCD80序列可在GenBank登录号P33681下找到。
如本文所用的术语“CD86”通常是指CD28/CTLA4的配体(也称为B7.2)、其功能变体和/或其功能片段。CD86通常在专业的抗原呈递细胞(APC)表面上表达。例如，术语“CD86”可包括与NCBI登录号P42081具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合CTLA4的多肽或其片段。CD86的定义中还包含氨基酸序列与天然CD86不同但保持了特异性地结合CTLA4的能力的变体。CD86的定义中还包含增强CTLA4的生物学活性的变体。CD86序列在本领域是已知的，并且，例如，以GenBank登录号U04343提供。如本文所用的，术语“CD86”包括人CD86(hCD86)，hCD86的变体、同种型和物种同源物，以及与hCD86具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“CD86”还包括来自其他物种的CD86，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔、非人灵长类动物、猪或者牛。完整hCD86序列可在GenBank登录号U04343下找到。
如本文所用的术语“PD1”通常是指程序性死亡-1受体(也称为CD279)、其功能变体和/或其功能片段。Pd1通常在T细胞、B细胞、自然杀伤T细胞、活化单核细胞和树突细胞(DC)上表达。PD1可结合其配体PD-L1和PD-L2。例如，术语“PD1”可包含与NCBI登录号P42081具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合PD-L1的多肽或其片段。PD1的定义中还包含氨基酸序列与天然PD1不同但保持了特异性地结合PD-L1的能力的变体。PD1的定义中还包含增强PD-L1的生物学活性的变体。PD1序列在本领域是已知的，并且，例如，以GenBank登录号Q15116.3提供。如本文所用的，术语“PD1”包括人PD1(hPD1)，hPD1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD1具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“PD1”还包括来自其他物种的PD1，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔、非人灵长类动物、猪或牛。完整hPD1序列可在GenBank登录号Q15116.3下找到。
如本文所用的术语“阻断”通常是指抑制或降低分子及其特异性结合伴侣之间(如配体及其特异性受体之间)的结合能力。
术语“阻断抗体”和“拮抗抗体”在本文中可互换使用，并且通常是指抑制或降低其所结合的抗原的生物学活性的抗体。在一些实施方式中，阻断抗体或拮抗抗体基本上或完全抑制抗原的生物学活性。本公开的PD-L1特异性ISVD或CTLA4特异性ISVD可为阻断性或拮抗性ISVD。例如，本公开的PD-L1特异性ISVD可阻断PD-L1与其受体PD-1之间的相互作用，从而阻断通过PD-1的信号传递，进而使T细胞从功能障碍状态恢复对抗原刺激的功能性应答。本公开的CTLA4特异性ISVD可阻断CTLA4与CD80/CD86之间的相互作用，从而阻断通过CTLA4的信号传递，进而使T细胞从功能障碍状态恢复对抗原刺激的功能性应答。
术语“交叉竞争结合(cross-competes for binding”、“交叉竞争(cross-competition)”、“交叉阻断(cross-block、cross-blocked和cross-blocking)”在本文中可互换使用，并且通常是指抗体或其片段通过本发明的另一抗体(例如，本公开的PD-L1特异性ISVD或CTLA4特异性ISVD)对靶/抗原(例如，分别为PD-L1或CTLA4)的变构调节来直接或间接干扰结合的能力。可使用竞争结合分析来确定抗体或其片段能够干扰另一抗体与靶结合的程度，以及因此确定根据本发明是否可称之为交叉阻断或交叉竞争。一种特别合适的定量交叉竞争试验使用基于FACS或基于AlphaScreen的方法来测量标记(例如His标签、生物素化或放射性标记)的抗体或其片段与另一种抗体或其片段之间的其与靶的结合方面的竞争。一般而言，交叉竞争抗体或其片段是例如以下的抗体或其片段：其将会在交叉竞争测定中结合靶标，使得在测定过程中以及在第二抗体或其片段存在下，根据本发明的免疫球蛋白单一可变结构域或多肽的记录位移高达待测抗体的最大理论位移的100％(例如，在基于FACS的竞争测定中)(例如，通过需要被交叉阻断的冷(例如，未标记的)抗体或其片段的位移)，该待测抗体可能会交叉阻断以指定量存在的抗体或其片段。优选地，交叉竞争抗体或其片段具有10％至100％之间、如50％至100％之间的记录位移。
如本文所用的，术语“显著减少”或“显著不同”通常是指在两个数值(通常一个与分子相关并且另一个与参考/对比分子相关)之间存在显著高度的差异，使得本领域技术人员将认为在通过所述值(例如，KD值)测量的生物学特性的背景下，这两个值之间的差异具有统计学显著性。所述两个值之间的差异为，例如，大于约10％、大于约20％、大于约30％、大于约40％和/或大于约50％，其是参考/对比分子的值的函数。
如本文所用的，术语“显著相似”或“显著相同”通常是指在两个数值(例如，一个与本公开的分子相关并且另一个与参考/对比分子相关)之间的显著高度的相似性，使得本领域技术人员将认为在通过所述值{例如，KD值}测量的生物学特性的背景下，这两个值之间的差异几乎不具有或没有生物学和/或统计学显著性。所述两个值之间的差异为，例如，小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％和/或少于约10％，其是参考/对比值的函数。
如本文所用的，术语抗体的“可变区”或“可变结构域”通常是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常是可变性最大的抗体部分(相对于同类的其他抗体)，并且包含抗原结合部位。
如本文所用的，术语“可变”通常是指以下事实：可变结构域的某些链段在抗体之间有很大的序列差别。V结构域介导抗原结合并且定义特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性在可变结构域的整个跨度上并不是均匀分布的。相反，在轻链和重链可变结构域中，其均集中在被称为高变区(CDR或HVR)的三个链段中。可变结构域的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，主要采用β片层构造，由三个CDR连接，这三个CDR形成连接β片层结构的环，并且在某些情形下形成β片层结构的一部分。每条链中的CDR通过FR区紧密保持在一起，并且与来自其他链的CDR一起有利于形成抗体的抗原结合部位(参见Kabat等人，Sequences of Immunological Interest，第5版，National Institute of Health，Bethesda，Md.(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但是显示出各种效应功能，如抗体对抗体依赖性细胞毒性的参与。
如本文所用的，术语“CDR”、“HVR”或“HV”通常是指在序列上高度可变和/或形成结构定义的环的抗体可变结构域区域。通常，抗体包含六个CDR；三个在VH中(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，三个在VL中(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。本公开的ISVD可仅包含3个CDR(例如，在VH中，为HCDR1、HCDR2和HCDR3)。在天然抗体中，HCDR3和LCDR3在六个CDR中显示出最大的多样性，尤其是HCDR3被认为在赋予抗体良好特异性方面起到独特的作用。参见，例如，Xu等人，Immunity 13:37-45(2000)；Johnson和Wu，在Methods in Molecular Biology 248:1-25中(Lo编，Human Press，Totowa，N.J.，2003)。相反，仅由重链组成的天然骆驼抗体在缺失轻链的情况下是有功能的和稳定的。参见，例如，Hamers-Casterman等人，Nature 363:446-448(1993)；Sheriff等人，Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。
许多CDR描绘正在使用并且涵盖在本文中。Kabat互补决定区(CDR)基于序列可变性，并且是最常用的(Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991))。Chothia则参考结构环的位置(Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM CDR代表了Kabat HVR和Chothia结构环之间的折衷，并且由牛津分子AbM抗体建模软件使用。
“contact”CDR是基于对现有复杂晶体结构的分析。这些CDR中每一个的残基在表1中标出:
表1
环 Kabat AbM Chothia Contact
LCDR1 L24-L34 L24-L34 L26-L32 L30-L36
LCDR2 L50-L56 L50-L56 L50-L52 L46-L55
LCDR3 L89-L97 L89-L97 L91-L96 L89-L96
HCDR1(Kabat编号) H31-H35B H26-H35B H26-H32 H30-H35B
HCDR1(Chothia编号) H31-H35 H26-H35 H26-H32 H30-H35
HCDR2 H50-H65 H50-H58 H53-H55 H47-H58
HCDR3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101
CDR可包含如下的“扩展CDR(extended CDR)”：VL中的24-36或24-34(LCDR1)、46-56或50-56(LCDR2)和89-97或89-96(LCDR3)，以及VH中的26-35(HCDR1)、50-65或49-65(HCDR2)和93-102、94-102或95-102(HCDR3)。可变结构域残基根据上述Kabat等人的定义进行编号。
表达方式“如Kabat所述的可变结构域残基编号”或“如Kabat所述的氨基酸位置编号”及其变体通常是指前文所述的Kabat等人所述的用于二聚体/多肽链编辑的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号***。对于给定的多肽，残基的Kabat编号可通过在多肽序列与“标准”Kabat编号序列的同源区域进行比对来确定。
“框架”或“FR”残基是与本文中定义的CDR残基不同的那些可变结构域残基。“人共有框架”或“受体人框架(受体人框架)”是代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选择中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如以下中所述的亚组：Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.(1991)。对于VL，示例包括，亚组可为如前文中Kabat等人所述的亚组κI、κII、κIII或κIV。另外地，对于VH，亚组可为如前文中Kabat等人所述的亚组I、亚组II或亚组III。可替代地，人共有框架可来源于以上，其中通过将供体框架序列与各种人类框架序列的集合进行比对而基于人类框架残基与供体框架的同源性来选择特定残基，诸如人类框架残基。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与其相同的氨基酸序列，或者其可包含先前存在的氨基酸序列变化。在一些实施方式中，先前存在的氨基酸变化的数量是10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少或者2个或更少。
术语“基本无应答”通常用于描述当使用一种或多种常规疗法(如肿瘤治疗)(如化疗、化放疗、手术、激素疗法和/或生物疗法/免疫疗法，尤其是用于治疗特定肿瘤患者的标准治疗方案)时，所述治疗方法不足以在临床上治愈患者，例如，患者可能仍然对治疗敏感，因此这些患者需要额外的有效治疗。该术语也用于描述对治疗的应答伴有副作用、复发或耐药等的情况。在一些实施方式中，“基本无应答”意味着患者对于肿瘤治疗的标准疗法显示难治、不耐受或已拒绝，包括患者可能证明疾病进展的客观证据，无论是否使用免疫检查点抑制剂治疗。
在本公开中，特定SEQ ID NO.所示的氨基酸序列或核苷酸序列也包含具有与其基本相同的功能/性质的其同源物或变体。例如，与其具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更高的序列同一性的序列；和/或具有一个或多个(例如，数个，如1-10个、1-9个、1-8个、1-7个、1-6个、1-5个、1-4个、1-3个、1-2个)氨基酸或核苷酸添加、缺失或置换的序列。
二聚体
在一个方面，本公开提供了二聚体在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，所述二聚体由两条多肽链形成，所述两条多肽链中的每一条均包含抗体Fc亚单位，其中所述二聚体包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)，所述ISVD中的至少一个特异于PD-L1，并且所述ISVD中的至少一个特异于CTLA4。
在另一方面，本公开提供了一种用于治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，包括对所述受试者施用有效量的二聚体。
在一些实施方式中，二聚体可由两条多肽链形成，其中两条多肽链中的每一条均包含抗体Fc亚单位。例如，二聚体可由两条多肽链组成，每条多肽链均包含抗体Fc亚单位，并且一条多肽链的抗体Fc亚单位可与另一条多肽链的抗体Fc亚单位相关联以形成二聚体。在示例中，二聚体的两条多肽链不会彼此融合(例如，经由肽连接子或通过肽键)成为一条单一多肽链。
二聚体可包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)。例如，二聚体的一条多肽链可包含两个或更多个ISVD，二聚体的另一条多肽链则不含任何ISVD。在另一个示例中，两条多肽链中的每一条可包含一个或多个ISVD。在仍然另一个示例中，两条多肽链中的每一条可包含两个或更多个ISVD。
至少一个ISVD可特异于PD-L1，并且至少一个ISVD可特异于CTLA4。例如，二聚体的一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD，二聚体的另一条多肽链则不含任何ISVD。在另一个示例中，二聚体的一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD，二聚体的另一条多肽链可包含一个或多个特异于CTLA4的ISVD。在另一个示例中，二聚体的一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD，二聚体的另一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和/或一个或多个特异于CTLA4的ISVD。
一个或多个特异于PD-L1的ISVD可相同或不同。一个或多个特异于CTLA4的ISVD可相同或不同。
在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链CDR。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链可变区。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链或其任何片段。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD至少包含重链CDR3。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR2。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链可变区。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD是抗PD-L1 VHH。特异于PD-L1的ISVD可为人源化的。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链CDR。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链可变区。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链或其任何片段。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD至少包含重链CDR3。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR1。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链可变区。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD是抗CTLA4 VHH。特异于CTLA4的ISVD可为人源化的。
在一些情形下，两条多肽链中的至少一条可包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。例如，两条多肽链中的一条可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD。在另一个示例中，两条多肽链中的每一条可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD。
对于两条多肽链中的一条或二者，特异于PD-L1的ISVD可任选地经由连接子与特异于CTLA4的ISVD融合。例如，在两条多肽链中的一条或二者中，可存在一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD。当在单一多肽链中存在两个或更多个特异于PD-L1的ISVD时，它们可彼此融合(例如，直接地或经由肽连接子)，并且其中的一个或多个可进一步与一个或多个特异于CTLA4的ISVD融合。当在单一多肽链中存在两个或更多个特异于CTLA4的ISVD时，它们可彼此融合(例如，直接地或经由肽连接子)，并且其中的一个或多个可进一步与一个或多个特异于PD-L1的ISVD融合。在任何两个ISVD之间可存在一个或多个连接子(例如，肽连接子)，例如，存在于两个特异于PD-L1的ISVD之间，存在于两个特异于CTLA4的或ISVD之间，或存在于在一个特异于PD-L1的ISVD与一个特异于CTLA4的ISVD之间。
对于两条多肽链中的一条或二者，特异于PD-L1的ISVD可任选地经由连接子与特异于CTLA4的ISVD融合；并且特异于CTLA4的ISVD又可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，在单一多肽链中，特异于PD-L1的ISVD可直接地(例如，在框架中)或经由连接子与特异于CTLA4的ISVD融合，并且特异于CTLA4的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。当在单一多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD与特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，并且至少一个特异于CTLA4的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，对于两条多肽链中的一条或二者，特异于PD-L1的ISVD的C末端可任选地经由连接子与特异于CTLA4的ISVD的N末端融合；且特异于CTLA4的ISVD的C末端可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。例如，在单一多肽链中，特异于PD-L1的ISVD中的一个的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与特异于CTLA4的ISVD中的一个的N末端融合，且特异于CTLA4的ISVD中的一个的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。在示例中，当在单一多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD与特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，然而，至少一个特异于PD-L1的ISVD的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与至少一个特异于CTLA4的ISVD的N末端融合，并且至少一个特异于CTLA4的ISVD的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。
对于两条多肽链中的一条或二者，特异于CTLA4的ISVD可任选地经由连接子与特异于PD-L1的ISVD融合；并且特异于PD-L1的ISVD又可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，在单一多肽链中，特异于CTLA4的ISVD可直接地(例如，在框架中)或经由连接子与特异于PD-L1的ISVD融合，并且特异于PD-L1的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。当在单一多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD与特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，并且至少一个特异于PD-L1的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，对于两条多肽链中的一条或二者，特异于CTLA4的ISVD的C末端可任选地经由连接子与特异于PD-L1的ISVD的N末端融合；且特异于PD-L1的ISVD的C末端可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。例如，在单一多肽链中，特异于CTLA4的ISVD中的一个的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与特异于PD-L1的ISVD中的一个的N末端融合，且特异于PD-L1的ISVD中的一个的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。在示例中，当在单一多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD与特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，然而，至少一个特异于CTLA4的ISVD的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与至少一个特异于PD-L1的ISVD的N末端融合，并且至少一个特异于PD-L1的ISVD的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。
本申请中采用的连接子(例如，肽连接子)(例如，如本申请的二聚体所采用的)可为合成氨基酸序列，其例如经由肽键连接或链接两条多肽序列。例如，肽连接子可包含1-10个氨基酸(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个氨基酸)，1-15个氨基酸(例如，1-10个、11个、12个、13个、14个或15个氨基酸)，1-20个氨基酸(例如，1-15个、16个、17个、18个、19个或20个氨基酸)，1-30个氨基酸或更多个氨基酸(例如，1-20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个或更多个氨基酸)。例如，肽连接子可包含如SEQ ID NO:33-34中任一项所示的氨基酸序列。例如，肽连接子可包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列。
抗体Fc亚单位可来源于IgG Fc亚单位。例如，IgG可选自由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4组成的组。在一些实施方式中，IgG是人IgG1，并且IgG Fc亚单位是人IgG1 Fc亚单位。在一些实施方式中，Fc亚单位包含与如SEQ ID NO:35、38和39中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。例如，Fc亚单位可包含具有SEQ ID NO:35、38和39中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。例如，Fc亚单位可包含具有SEQ ID NO:38和39中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在一些实施方式中，Fc亚单位可为IgG Fc亚单位的变体(例如，人IgG1 Fc亚单位的变体)。例如，变体可包含增强或降低ADCC活性或CDC活性的一个或多个氨基酸突变。作为另一个示例，变体可包含一个或多个影响包含该变体的分子的FcRn结合活性和/或半衰期的氨基酸突变。作为仍然另一个示例，变体可包含一个或多个影响两个或更多个Fc亚单位(或Fc单体)之间的相互作用(例如，关联)和/或增加或降低Fc杂二聚体形成效率的氨基酸突变，例如，变体可包含如CN102558355A、CN103388013A、CN105820251A或CN106883297A中所述的一个或多个氨基酸置换，以上每一篇文献均通过引用并入本文。
特异于PD-L1的ISVD能够特异性地结合人PD-L1。例如，特异于PD-L1的ISVD能够特异性地结合人PD-L1细胞外结构域中的表位。此类表位是本领域中已知的，例如，如以下中所示：Gang Hao等人，J.Mol.Recognit.2015；28：269–276，Zhang等人，Oncotarget.2017年10月；08(52):90215-90224，和Zhang等人，Cell Discov.2017年3月7日；3:17004。
例如，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。人PD-L1的N-末端IgV结构域(包括信号肽)可包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。在本公开中，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113。在特定实施方式中，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和R113(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113)。特异于PD-L1的ISVD能够进一步结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，该构象表位可包含人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113)。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，该构象表位可包含人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)。
本公开的特异于PD-L1的ISVD(例如，PD-L1 ISVD-9及其人源化变体)结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。以PD-L1 ISVD-9为例，PD-L1 ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Phe101与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Tyr56相互作用，并且当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Tyr56被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和性降低逾200倍。当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Ile54被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和性降低约40倍。PD-L1 ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Asp99与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Arg113相互作用，并且当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Arg113被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和性降低约90倍。PD-L1 ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Ser100与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Glu58相互作用，并且当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Glu58被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和性降低约25倍。PD-L1 ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Thr105与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Gln66相互作用，并且当人PD-L1N-末端IgV结构域的Gln66被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9与PD-L1之间的结合亲和性降低约82倍。此外，人PD-L1N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125可参与PD-L1 ISVD-9与人PD-L1之间的相互作用，用Ala置换这些残基导致结合亲和性降低约2-10倍。这些结果总结在下表2中。
表2人PD-L1中的置换对于PD-L1 ISVD-9的结合的作用
Figure BDA0003668202940000241
Figure BDA0003668202940000251
特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
特异于PD-L1的ISVD可与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1。
参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如DSFX1X2PTCX3X4X5X6SSGAFQY(SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列，其中X1可为E或G；X2可为D或Y；X3可为T或P；X4可为L或G；X5可为V或P；X6可为T或A。在一些情形下，参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。参考抗PD-L1抗体还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如GX1X2X3X4X5RCMA(SEQ ID NO:2)所示的氨基酸序列，其中X1可为K或N；X2可为M或I；X3可为S或I；X4可为S或R；X5可为R或V。例如，参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR2。重链CDR2可包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗PD-L1抗体是特异于PD-L1的ISVD，如抗PD-L1 VHH。参考抗PD-L1抗体可包含重链可变结构域。参考抗PD-L1抗体可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的特异于PD-L1的ISVD)可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如DSFX1X2PTCX3X4X5X6SSGAFQY(SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列，其中X1可为E或G；X2可为D或Y；X3可为T或P；X4可为L或G；X5可为V或P；X6可为T或A。例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR3，该重链CDR3包含与如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR3可包含在如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的特异于PD-L1的ISVD)还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如GX1X2X3X4X5RCMA(SEQ ID NO:2)所示的氨基酸序列，其中X1可为K或N；X2可为M或I；X3可为S或I；X4可为S或R；X5可为R或V。例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR1，该重链CDR1包含与如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR1可包含在如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的特异于PD-L1的ISVD)还可包含重链CDR2。重链CDR2可包含任何合适的氨基酸序列。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含与如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR2可包含在如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包括包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的CDR3、包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的CDR2和包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的CDR1。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的特异于PD-L1的ISVD)可包含重链可变结构域。特异于PD-L1的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含与如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含在如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD可包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。例如，特异于PD-L1的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的特异于PD-L1的ISVD)可包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，特异于PD-L1的ISVD可包含与如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD可包含在SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域(VH或VHH)或由重链可变结构域(VH或VHH)组成。
例如，特异于PD-L1的ISVD可选自PD-L1 ISVD-9、PD-L1 ISVD-6、PD-L1 ISVD-m3、PD-L1 ISVD-4、PD-L1 ISVD-11和PD-L1 ISVD-13。又例如，特异于PD-L1的ISVD可选自PD-L1ISVD-9。
特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4。例如，特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4细胞外结构域中的表位，此类表位可包括在CN107400166A中描述的那些表位，以及由Udupi A.Ramagopal等人，PNAS 2017年5月，114(21)描述的那些表位。
特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可为人源化的。
特异于CTLA4的ISVD可与参考抗CTLA4抗体交叉竞争结合CTLA4。
参考抗CTLA4抗体可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。参考抗CTLA4抗体还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗CTLA4抗体可包含重链CDR2。重链CDR2可包含如AIX1X2GGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:16)所示的氨基酸序列，其中X1可为Y或S；X2可为I或L。例如，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗CTLA4抗体是特异于CTLA4的ISVD，如抗CTLA4 VHH。参考抗CTLA4抗体可包含重链可变结构域。参考抗CTLA4抗体可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的特异于CTLA4的ISVD)可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR3，该重链CDR3包含与如SEQ IDNO:19所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR3可包含在SEQ ID NO:19所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的特异于CTLA4的ISVD)还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR1，该重链CDR1包含与如SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR1可包含在SEQ ID NO:17所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的特异于CTLA4的ISVD)还可包含重链CDR2。重链CDR2可包含如AIX1X2GGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:16)所示的氨基酸序列，其中X1可为Y或S；X2可为I或L。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含与如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR2可包含在如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包括包含如SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列的CDR3、包含如SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列的CDR2和包含如SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列的CDR1。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的特异于CTLA4的ISVD)可包含重链可变结构域。特异于CTLA4的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含与如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含在如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD可包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。例如，特异于CTLA4的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的特异于CTLA4的ISVD)可包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包含与如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含在如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域(VH或VHH)或由重链可变结构域(VH或VHH)组成。
例如，特异于CTLA4的ISVD可选自CTLA4 ISVD-34、CTLA4 ISVD-C1、CTLA4 ISVD-13、CTLA4 ISVD-26、CTLA4 ISVD-27、CTLA4 ISVD-28、CTLA4 ISVD-29、CTLA4 ISVD-30、CTLA4 ISVD-31、CTLA4 ISVD-32和CTLA4 ISVD-33。
例如，本申请的二聚体可包含两条多肽链或由两条多肽链组成。两条多肽链的氨基酸序列可相同或不同。在一些情形下，本公开的二聚体可为均二聚体。
在本公开中，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含如权利要求40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列。例如，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
在具体示例中，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含与如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含在如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的序列中具有一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在示例中，特异于PD-L1的ISVD可(直接地或间接地，例如，经由连接子，如肽连接子)与特异于CTLA4的ISVD的N-末端氨基酸融合以形成双特异性地结合部分。随后，一个此类双特异性地结合部分可(直接地或间接地，例如，经由连接子，如肽连接子)与一个本公开的Fc亚单位的N-末端氨基酸融合以提供二聚体的一条多肽链。随后，另一个此类双特异性地结合部分可(直接地或间接地，例如，经由连接子，如肽连接子)与另一个本公开的Fc亚单位的N-末端氨基酸融合以提供二聚体的另一条多肽链。两条多肽链的两个Fc亚单位可彼此相关联(例如，经由非共价相互作用和/或二硫键或其他共价键，在一些情形下，此类共价键不是肽键)以形成二聚体。两个双特异性地结合部分可相同或不同。两个Fc亚单位可相同或不同。
在一些实施方式中，二聚体是包含两条相同的多肽链的蛋白质均二聚体，每条多肽链包含与一个Fc亚单位融合的一个双特异性地结合部分，两个Fc亚单位彼此相关联以形成蛋白质均二聚体。两个Fc亚单位可经由非共价相互作用和/或二硫键或其他共价键彼此相关联，在一些情形下，此类共价键不是肽键。
图1A-1B提供了本公开的二聚体的示例，其中1表示特异于PD-L1的ISVD，2表示特异于CTLA4的ISVD，3表示包含Fc亚单位的Fc结构域，4表示双特异性地结合部分。
本公开的二聚体能够与CD80和/或CD86竞争结合CTLA4。例如，可在体外实验中使用表达CTLA4的细胞系(如表达CTLA4的HEK293细胞系)检验竞争。作为另一个示例，可在ELISA测定(如竞争ELISA测定)中检验竞争。
本公开的二聚体能够与PD1和/或CD80竞争结合PD-L1。例如，可在体外实验中使用表达PD-L1的细胞系(如表达PD-L1的A375细胞系)检验竞争。作为另一个示例，可在ELISA测定(如竞争ELISA测定)中检验竞争。
本公开的二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。在一些情形下，本公开的二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。在一些情形下，本公开的二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。在一些情形下，本公开的二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
本公开的二聚体可以不多于约1×10-6M，例如，不多于约1×10-7M，不多于约1×10-8M，不多于约0.5×10-8M，不多于约1×10-9M，不多于约1×10-10M或更低的KD值来结合CTLA4。
本公开的二聚体可以不多于约1×10-6M，例如，不多于约1×10-7M，不多于约1×10-8M，不多于约0.5×10-8M，不多于约1×10-9M，不多于约1×10-10M或更低的KD值来结合PD-L1。
本公开的二聚体能够刺激免疫细胞(例如，PBMC细胞)的免疫调节因子(例如，IL-2)的分泌。
例如，本公开的二聚体可选自aPDL1.9-aCTLA4.34-Fc、aPDL1.9-L-aCTLA4.34-Fc、aCTLA4.34-aPDL1.9-Fc、aCTLA4.34-L-aPDL1.9-Fc，aPDL1.6-aCTLA4.34-Fc，aPDL1.m3-aCTLA4.34-Fc和aPDL1.9-aCTLA4.13-Fc。
例如，本公开的二聚体可包含特异于CTLA4的ISVD和特异于PDL1的ISVD。特异于PD-L1的ISVD可包括包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的CDR3、包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的CDR2和包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的CDR1。并且特异于CTLA4的ISVD可包括包含如SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列的CDR3、包含如SEQ ID NO.18所示的氨基酸序列的CDR2和包含如SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列CDR1。并且本公开的二聚体可包括包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列的特异于PD-L1的ISVD以及包含如SEQ IDNO.20所示的氨基酸序列的特异于CLTA4的ISVD。例如，本公开的二聚体可包含SEQ IDNO.40的氨基酸序列。
并且本公开的二聚体被命名为KN046。
用途和方法
在本公开中，提供了一种二聚体在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途。本公开还提供了一种用于治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，包括对所述受试者施用有效量的二聚体。
在一些实施方式中，受试者可能现在已用一种或多种可用疗法治疗过肿瘤，但是对其基本无应答。术语“基本无应答”可为如下状况：其中经历一种或多种当前可用疗法(例如，肿瘤疗法，如化疗、放疗、化放疗、CTL细胞疗法、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)疗法、血管生成抑制剂疗法、手术、激素疗法和/或生物疗法/免疫疗法、免疫检查点抑制剂疗法，特别是针对特定肿瘤的标准治疗方案)或者用该一种或多种当前可用疗法治疗的患者在临床上不足以治疗该患者，或者该患者不再从疗法中接受任何有益效果，因此这些患者需要额外的有效治疗。
在一些实施方式中，疗法可包括用于NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC和乳腺癌、NPC或乳腺癌(例如，三阴性乳腺癌(TNBC))的那些疗法。
在本公开中，所述肿瘤可选自由NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC或乳腺癌组成的组。
例如，所述肿瘤可选自由食管鳞状细胞癌(ESCC)和鼻咽癌(NPC)组成的组。
例如，所述肿瘤可选自由局部晚期或转移性黑素瘤、非角质化局部晚期复发性或转移性NPC、转移性NSCLC、鳞状和非鳞状NSCLC、复发性或转移性ESCC以及三阴性乳腺癌(TNBC)组成的组。
例如，所述肿瘤可选自无EGFR突变或ALK融合的晚期NSCLC、伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC、伴有阳性PD-L1表达的NPC以及局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
在一些实施方式中，已对受试者施用过免疫检查点抑制剂。例如，可在施用免疫检查点抑制剂之后施用二聚体约1分钟、2分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、12小时、18小时、1天、2天、3天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、6个月、1年、2年、3年或更久。
在一些实施方式中，受试者对所述免疫检查点抑制剂基本无应答。在某些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂选自由PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂和CTLA4抑制剂组成的组。
对免疫检查点抑制剂基本无应答的受试者先前可能对免疫检查点抑制剂有应答，但可能对免疫检查点抑制剂的应答较低，或者受试者可能从未对免疫检查点抑制剂有应答。对免疫检查点抑制剂的应答不足意味着在标准剂量的免疫检查点抑制剂后预期改善的状况没有得到改善，和/或只有在施用超过标准剂量的情况下才会出现改善。在一些实施方式中，对免疫检查点抑制剂基本无应答的受试者可能已经历、或者正在经历以下情况：在接受标准剂量至少两周、至少三周、至少四轴、至少六周或至少十二周之后对免疫检查点抑制剂的应答不足。“标准”剂量由医学专业人员确定，并且可能取决于受试者的年龄、体重、健康史、疾病严重程度、给药频率等。
在本公开中，已对所述受试者施用过化疗、化放疗、CTL细胞疗法、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和/或血管生成抑制剂。
在本公开中，所述化疗可指通过化学药剂进行的针对所述肿瘤的任何治疗。所述化学药剂可杀死肿瘤细胞、缩小肿瘤和/或缓解癌症的体征和症状。例如，所述化疗可包括一线化疗和/或二线化疗。在本公开中，所述一线化疗可指医疗机构普遍接受的用于指定类型和阶段的癌症的初始治疗的一种或多种化疗方案。例如，所述一线化疗可包含基于铂的化疗。在一些实施方式中，所述一线基于铂的化疗可包含用铂(P)化合物(顺铂或卡铂)进行的化疗。
在本公开中，所述二线化疗可指当一线化疗不能充分生效时所尝试的那些二线化疗。例如，所述二线化疗可包含紫杉醇、多西他赛、卡培他滨和/或5-FU。
在本公开中，所述化放疗(CRT、CRTx、CT-RT)可指化疗与放疗联用的治疗。
在本公开中，所述CTL细胞疗法可指细胞毒性T淋巴细胞疗法。
在本公开中，所述EGFR酪氨酸激酶抑制剂可指阻断被称为表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白质的活性的物质。所述EGFR酪氨酸激酶抑制剂可包含针对受体表面的单克隆抗体和/或针对受体细胞内结构域的酪氨酸激酶抑制剂。
在本公开中，所述血管生成抑制剂可指抑制新血管生长(血管生成)的物质。
在一些实施方式中，药物组合物或二聚体可通过静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内的方式施用。可施用有效量的药物以预防或治疗疾病。可基于要治疗的疾病类型、药物类型、疾病的严重程度和病程、个体的临床状况、受试者的临床史和对治疗的应答以及主管医生的判断来确定药物的合适剂量。例如，合适剂量可为约0.1mg或l mg/kg/天至约500mg/kg/天(如约0.1mg/kg至约0.3mg/kg、约0.1mg/kg至约1mg/kg、约0.1mg/kg至约3mg/kg、约0.1mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg，如约1mg/kg至约5mg/kg，如约3mg/kg至约5mg/kg，如约1mg/kg至约3mg/kg，如约1mg/kg至约500mg/kg，或者如约1mg/kg至约150mg/kg)；有时，剂量甚至可更高。
在一些实施方式中，药物或二聚体可每两周一次或每三周一次施用。
可通过任何方便的途径施用药物，例如通过输注或推注，通过上皮层或粘膜层(例如，口腔粘膜、直肠粘膜和肠粘膜等)吸收，并且可与其他生物学活性药剂共同施用。施用可为全身的或局部的。在一些实施方式中，药物可静脉内施用。
在特定实施方式中，理想的可为将本公开的药物局部地施用到需要治疗的区域；这可通过例如但不限于局部输注、局部施加(topical application)、通过注射、通过导管、通过栓剂或通过植入体来实现，所述植入体为多孔的、无孔的或凝胶状的材料(包括膜)。优选地，当施用本公开的药物时，必须注意使用蛋白质不吸收的材料。
药物和/或免疫检查点抑制剂可通过相同的施药途径施用，或者可通过不同的施药途径施用。
药物能够治疗有需要的受试者的肿瘤。肿瘤可为实体肿瘤、血液肿瘤或淋巴瘤。肿瘤可为晚期肿瘤或转移肿瘤。在一些实施方式中，肿瘤可选自由NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC或(例如，三阴性乳腺癌(TNBC))组成的组。
在一些情形下，肿瘤可对使用免疫检查点抑制剂(例如，PD-1拮抗剂和/或PD-L1拮抗剂)进行的治疗无应答。例如，使用PD-1拮抗剂和/或PD-L1拮抗剂进行的治疗不会导致肿瘤进展或肿瘤生长的显著或可观察到的延缓或抑制。在一些情形下，在施用本公开的二聚体/组合物/免疫缀合物之前，没有使用PD-1拮抗剂和/或PD-L1拮抗剂治疗过肿瘤。PD-1拮抗剂可为PD-1阻断抗体.PD-L1拮抗剂可为PD-L1阻断抗体。
肿瘤或肿瘤细胞可在受试者体内，例如，人或非人动物(例如，哺乳动物)体内的肿瘤或肿瘤细胞。在一些情形下，肿瘤可为不可切除的。在一些情形下，肿瘤可为转移性的(如转移性实体肿瘤)。在一些情形下，肿瘤可为对标准疗法来说难治和/或不耐受的。例如，肿瘤可为难治性肿瘤，这是指在治疗开始时即已耐药或者在治疗期间变得耐药的肿瘤。
在本公开中，所述转移是指肿瘤已经从初始部位或原发部位扩散到受试者体内的不同部位或继发部位的情况。
在本公开中，所述复发是指在治疗之后和/或在不能检测到肿瘤一段时间之后发现肿瘤的情况。复发性肿瘤可在其最初开始时的相同位置或者在受试者体内的其他一些地方。
在本公开中，所述突变是指基因组核苷酸序列的改变。例如，所述突变可包括基因(例如，外显子)的核苷酸和/或组成部分的缺失、***和/或置换。
在本公开中，所述二聚体与化疗剂组合施用。
在本公开中，所述化疗剂可为能够用于化疗的任何药剂。例如，所述化疗剂可包括含铂双药和/或紫杉醇。例如，所述化疗剂可包含顺铂、吉西他滨和/或白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)。
例如，所述肿瘤可包括复发性或转移性ESCC，患有该病的受试者在6个月内没有通过CRT进行治疗，并且随后接受由顺铂、紫杉醇和放疗组成的姑息性CRT。
例如，所述肿瘤可包括无EGFR突变或ALK融合的晚期NSCLC，其当使用一线的基于铂的化疗时有进展，但没有用任何PD-(L)1免疫检查点抑制剂治疗过。
例如，所述肿瘤可包括伴有EGFR外显子20-***突变的NSCLC，患有该病的受试者经EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗无效。
例如，所述肿瘤可包括NPC，患有该病的受试者经所述一线化疗、所述二线化疗和/或抗PD-1剂治疗无效。
组合
在另一方面，本公开提供了一种与本公开的化疗剂组合的本公开的二聚体在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途。
在另一方面，本公开提供了与本公开的化疗剂组合的本公开的二聚体，其用于治疗有需要的受试者的肿瘤。
在另一方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，包括施用与本公开的化疗剂组合的本公开的二聚体。
在本公开中，所述肿瘤可选自由实体肿瘤和血液肿瘤组成的组。例如，所述肿瘤可选自由NSCLC和乳腺癌组成的组。
例如，所述肿瘤可选自由鳞状和非鳞状NSCLC以及三阴性乳腺癌(TNBC)组成的组。例如，所述肿瘤可选自由伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC和局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
在本公开中，可已对所述受试者施用过EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。
在本公开中，所述二聚体可以每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次的给药频率施用。例如，所述二聚体可以每两周一次的频率施用。
在本公开中，所述化疗剂可以每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次的给药频率施用。
在本公开中，所述二聚体可以静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内的方式施用。
在本公开中，所述化疗剂可以静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内的方式施用。
在本公开中，所述二聚体可以0.01mg/kg至100mg/kg的剂量施用。例如，所述二聚体可以约1mg/kg至约5mg/kg、约3mg/kg至约5mg/kg或约1mg/kg至约3mg/kg的剂量施用。
在本公开中，所述化疗剂可以0.01mg/kg to 100mg/kg的剂量施用。例如，所述铂基药剂可以约1mg/kg至约5mg/kg、约3mg/kg至约5mg/kg或约1mg/kg至约3mg/kg的剂量施用。
在一些实施方式中，所述二聚体可以与含铂双药组合施用。例如，所述肿瘤可包括伴有EGFR外显子20-***突变的NSCLC，患有该病的受试者经EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)治疗无效。
在一些实施方式中，所述二聚体可以与紫杉醇(例如，白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel))组合施用。例如，所述肿瘤可包括转移性三阴性乳腺癌(mTNBC)，患有该病的受试者未经治疗。例如，所述肿瘤可包括局部晚期不可手术或转移性TNBC。
在另一方面，本公开提供了一种试剂盒，其包含与本公开的化疗剂组合的本公开的二聚体。
实施例
以下实施例阐述用于向本领域技术人员提供完整的公开和说明如何制作和使用本发明，并非旨在限制发明人视为其发明的范围，也并非旨在表示以下实验是进行的全部或仅有的实验。已经努力确保所用数字的准确性(例如数量、温度等)，但应当考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，份数为重量份，分子量为中均分子了，温度以摄氏度计，压力为大气压或接近大气压。可使用标准缩写，例如：bp，碱基对；kb，千碱基；pl，微微升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；nt，核苷酸；i.m.，肌内；i.p.，腹腔内；s.c.，皮下；诸如此类。
实施例1肿瘤患者的I期研究
这是一项Ia/Ib期、开放标签、多中心、剂量递增和扩展研究，旨在评估二聚体在晚期实体肿瘤患者和晚期淋巴瘤患者中的安全性、耐受性、药代动力学和抗肿瘤活性。估计纳入了16例参与者。
入选标准：
1.签署知情同意书；愿意并能够完成所有需要的研究程序。
2.通过组织学或细胞学证实的实体肿瘤。受试者为自上次抗肿瘤治疗以来经历进展的晚期或转移性实体肿瘤(不可切除)患者；标准疗法不可用或排斥；或者受试者患有难治性实体肿瘤，其不能耐受标准治疗(包括化疗、靶向治疗等)或有标准治疗禁忌症；
3.对于研究剂量/组扩展阶段的特定肿瘤类型：
a.黑素瘤：通过组织学证实的局部晚期或转移性黑素瘤(不可切除)；一线化疗或一线靶向疗法(例如，化疗、TSA-CTL细胞疗法、免疫检查点抑制剂疗法)已失败；
b.鼻咽癌：通过组织学证实的非角质化局部晚期复发性或转移性鼻咽癌；一线或一线以上含铂化疗(例如，含铂化放疗或含铂化放疗加辅助化疗)已失败；
c.NSCLC：一线疗法(化疗、血管生成抑制剂治疗和免疫检查点抑制剂治疗)已失败。
Ia期：静脉内(IV)输注，每2周1、3和5毫克/千克(mg/kg)。Ib期：静脉内(IV)输注，每2周1、3或3、5毫克/千克(mg/kg)，Ib期的剂量基于Ia期的结果。或者每3周300、500毫克/千克(mg/kg)。
在Ia期，主要结果指标是具有剂量限制毒性(DLT)的参与者人数。在Ib期，根据RECIST1.1或Lugano 2014标准，主要结果指标为客观应答率(ORR)和应答持续时间(DoR)。次要结果指标为治疗紧急不良事件(TEAE)、不良反应、PK参数(包括但不限于AUC0-t、Cmax、CL、T1/2、Ctrough)等。
治疗期持续到疾病进展或出现不可接受的毒性。在随访期间，监测受试者的疾病活动性和安全性。
图2显示了免疫检查点抑制剂治疗失败的患者的结果。ORR为12.5％，并且DCR为63％。在5mg/kg Q2W组(N＝8)中，ORR为12.5％，并且DCR为75％。16例NSCLC、NPC或黑素瘤患者中的14例患者未发生疾病进展。
单一药剂具有可接受的安全性曲线。
实施例2KN046加同步化放疗治疗食管鳞状细胞癌的初步有效性和安全性
背景已采用确定性或姑息性化放疗以控制食管鳞状细胞癌(ESCC)。免疫检查点抑制剂在转移性IV期患者中具有改善的结果。因此我们报告了将KN046(一种PD-L1/CTLA-4双特异性抗体)添加到同步化放疗(CRT)疗法中以确定该方法的安全性和有效性(ChiCTR2000031544)。
目标和方法招募6个月内未接受CRT治疗的复发性或转移性ESCC的合格患者(PT)，使他们接受姑息性CRT，该CRT由顺铂(75mg/m2 IV Q3W，持续4至6个周期)、紫杉醇(135至175mg/m2 IV Q3W，持续4至6个周期)和放疗(30至40Gy，根据机构标准，研究者自行决定)组成。在放疗(RT)以及同步化疗完成后7-14天内，添加剂量为1、3和5mg/kg的KN046，随后维持KN046 Q2W。评估第一个KN046治疗周期的剂量限制毒性(DLT)。在第一年，每6周根据RECIST1.1评估抗肿瘤活性，随后每12周评估。
结果截至2020年6月30日，纳入18例受试者接受KN046治疗(1mg/kg，n＝3；3mg/kg，n＝11；5mg/kg，n＝4)。中位KN046暴露为11.5周。未报告DLT。3例(16.7％)受试者经历3级KN046相关不良事件(1例3级肺炎通过使用类固醇和抗生素Tx恢复，1例3级结肠炎在单独使用抗生素Tx后恢复，1例3级结肠炎通过使用类固醇和抗生素Tx恢复)。在3mg/kg时，9例有效性可评价的患者中有5例(55.6％)观察到客观反应，疾病控制率为100％；8/9(88.9％)患者在开始KN046治疗后经历了进一步肿瘤缩小。
结论向CRT加入KN046耐受良好并且在复发性或转移性ESCC中显示了有希望的有效性信号。这项初步研究使得能够进一步研究KN046与CRT联用治疗这种预后不良的疾病的新的治疗方式。
实施例3KN046在转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者(pts)中的II期研究
背景：KN046是一种新型双特异性抗体，其阻断PD-L1与PD-1/CD80的相互作用和CTLA-4与CD80/CD86的相互作用。这项多组、单臂II期研究评估了KN046在转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的初步安全性和有效性。
方法：合格患者(pts)是无EGFR突变或ALK融合的晚期NSCLC，当使用一线的基于铂的化疗时有进展，但没有用任何PD-(L)1免疫检查点抑制剂治疗过。对所有患者给予KN0463mg/kg(组A)或5mg/kg(组B)Q2W IV，直到出现疾病进展、不可耐受的毒性等。研究人员根据RECIST 1.1每8周进行有效性评价，并且根据NCI-CTCAE v5.0评价安全性和耐受性。
结果：截至2020年7月27日，组A中纳入30例患者，组B中纳入33例患者。中位年龄为59岁，男性/女性为51/12，PS为0/1 9/54，鳞状NSCLC/非鳞状NSCLC为23/40。在21例(33.3％)患者中观察到≥3级的TRAE，治疗相关SAE为16例(25.4％)患者，irAE为34例(54.0％)患者，≥3级的irAE为11例(17.5％)患者。常见(≥10％)TRAE为输注相关反应(16例，25.4％)、贫血(14例，22.2％)、皮疹(13例，20.6％)、高血糖症(12例，19.0％)、肝功能异常(10例，15.9％)、甲状腺功能减退症(10例，15.9％)、丙氨酸转氨酶增加(8例，12.7％)、虚弱(8例，12.7％)、天冬氨酸转氨酶增加(7例，11.1％)和瘙痒症(7例，11.1％)。比较两组的安全性曲线。
截至截止日期，24例患者(37.5％)仍在接受研究治疗，39例患者(60.9％)因疾病进展(n＝27)、AE(n＝7)、患者依从性差(n＝4)和一例死亡而停止治疗。药物暴露的中位持续时间为14周(两周至56周)。56例可评价患者的ORR和DCR为10.7％和71.4％。中位PFS为3.7(2.9，7.3)，6个月和12个月PFS率(95％CI)为36.6％(23.0，50.4)和18.3％(6.2，35.5)，6个月和12个月OS率(95％CI)为86.9％(74.2，93.6)和60.7％(36.0，78.4)。在鳞状NSCLC中，中位PFS为7.3(3.7，NE)，9个月PFS率(95％CI)为46.6％(19.0，70.3)，6个月和12个月OS率(95％CI)为88.2％(60.2，96.9)和52.9％(13.2，81.9)。
结论：双特异性抗体KN046耐受良好，并且作为晚期NSCLC的二线治疗是有效的。KN046在鳞状NSCLC中显示了有希望的PFS和OS利益。
临床试验信息：NCT03838848
实施例4初步突破性治疗指定请求(BTDR)建议
本文件将作为部门评论突破性治疗指定(BTD)请求是否合适的依据，此时其可能过于初步，或者目前不符合BTD标准。
1.提供与适应症是否严重且危及生命的信息。简要描述旨在使用该产品的适应症和疾病：
说明KN046与含铂双药组合用于治疗伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC。
2.简要描述药物、药物的作用机理(如果已知)、药物与现有疗法的关系：
KN046是阻断PD1/PD-L1和CTLA-4途径的PD-L1/CTLA-4双特异性抗体。
3.简要描述可用疗法，如果有的话：
约0.5％-4％的EGFRmut NSCLC伴有外显子20***。获批的EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)无效，客观应答率(ORR)为16.1％。伴有或不伴有TKI的化疗得到了27.5％的ORR。现有疗法的PFS为约5个月，OS为约16个月。这种亚型的NSCLC需要新疗法。
Figure BDA0003668202940000401
4.提供与初步临床证据相关的信息*，包括试验设计、试验终点、治疗组和纳入的受试者人数：
KN046-202(NCT04054531)是一项开放标签、平行分组、2期试验，旨在评估KN046与含铂双药组合作为鳞状和非鳞状非小细胞肺癌一线治疗的有效性和安全性。允许纳入伴有非EGFR致敏突变的NSCLC。
截至2020年9月3日，纳入9例伴有EGFR外显子20***突变的受试者，对他们使用KN046与卡铂和培美曲塞组合进行治疗。观察到55.5％(5/9，95％CI 21.2％-86.3％)的应答率和88.9％(8/9)的疾病控制率(图3)。
例如，对于肿瘤学/血液学产品，初步临床证据可能包括应答率、应答持续时间和先前治疗的程度。
实施例5初步突破性治疗指定请求(BTDR)建议
本文件将作为部门评论突破性治疗指定(BTD)请求是否合适的依据，此时其可能过于初步，或者目前不符合BTD标准。
1.提供与适应症是否严重且危及生命的信息。简要描述旨在使用该产品的适应症和疾病：
预计使用该产品的适应症是伴有阳性PD-L1表达的鼻咽癌(NPC)。
2.简要描述药物、药物的作用机理(如果已知)、药物与现有疗法的关系：
KN046是一种阻断PD1/PD-L1和CTLA-4途径的PD-L1/CTLA-4双特异性抗体。
3.简要描述可用疗法，如果有的话：
含铂双药(例如，顺铂/吉西他滨)是标准一线疗法，中位无进展生存期(PFS)为7个月，中位中生存期(OS)为29.1个月。二线疗法包括紫杉醇、多西他赛、卡培他滨或5-FU以及甲氨蝶呤，中位OS小于12个月。派姆单抗(pembrolizumab)和纳武单抗(nivolumab)在第二个和第三个疗程的初步有效性数据显示，12个月OS率分别为63％和62％。
4.提供与初步临床证据相关的信息*，包括试验设计、试验终点、治疗组和纳入的受试者人数：
KN046-CHN-001是一项针对患有晚期实体肿瘤的受试者的Ia/Ib期剂量递增和扩展试验。本实验纳入总共59例NPC患者。所有患者至少未能通过一线***治疗，24例(40.7％)患者未能通过先前的二线***治疗，25例(42.4％)患者未能通过抗PD-1剂治疗。
在未进行抗PD-1的人群中，29例患者可进行有效性评估，观察到24.1％(7/29)的应答率。在29例患者中，有20例患者的PD-L1表达阳性(定义为使用SP263测定时，在免疫细胞中有≥10％的PD-L1表达)，应答率为30％。
中位随访13个月，最低随访5.2个月，未达到总生存率。未进行抗PD-1的人群和抗PD-1预先治疗人群的12个月OS率分别为71.5％(95％CI 50.1％-85％)和74.3％(95％CI47％-89％)。
例如，对于肿瘤学/血液学产品，初步临床证据可能包括应答率、应答持续时间和先前治疗的程度。
实施例6KN046(抗PD-L1/CTLA-4双特异性抗体)与白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)联用在转移性三阴性乳腺癌(mTNBC)中的初步安全性、耐受性和有效性结果
背景：
与其他浸润性乳腺癌亚型相比，三阴性乳腺癌(TNBC)的预后最差。IMpassion130和Keynote-355研究证实，当抗PD-(L)-1剂与一线化疗联用时，在PD-L1阳性TNBC中有改善的临场结果。
KN046是一种新型双特异性抗体，其阻断PD-L1和CTLA-4途径。在这里，我们报告了正在进行的KN046与白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)联用在mTNBC患者(pts)中的II期研究的中期结果。
方法：
该研究纳入了未接受治疗的局部晚期不可手术或转移性TNBC的患者。合格的患者接受两个剂量水平的白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)加KN046(DL1：KN046 3mg/kgQ2W或DL2：KN046 5mg/kg Q2W)。根据RECIST 1.1评估肿瘤应答Q8W。使用SP142测定法测量PD-L1表达。
结果：
截至2020年10月29日，有27例患者纳入DL1(n＝16)和DL2(n＝11)。12例患者保持接受研究，15例患者因疾病进展(n＝8)、死亡(n＝3)和其他原因(n＝3)停止治疗。患者对KN046加白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)耐受良好。没有导致死亡的KN046治疗相关不良作用(TRAE)。在27例(100％)患者中发生TRAE，13例(48.1％)为3级或以上。11例(40.7％)患者经历免疫相关不良事件(irAE)，包括2例患者经历一次3级免疫介导的肝病和一次3级皮疹。最常见(≥20％)的TRAE是AST增加(48％)、ALT增加(48％)、发热(33％)、中性粒细胞计数减少(30％)、贫血(26％)、皮疹(26％)和白细胞计数减少(26％)。最常见(≥15％)的3级或以上的TRAE是中性粒细胞计数减少(26％)、白细胞计数减少(22％)和AST增加(15％)。
中位PFS为7.33(4.04，NE)个月，12个月PFS率为38.3％(95％CI 19.7至74.6％)。未达到中位OS，12个月OS率为80％(95％CI 61.4至100％)。
在PD-L1阳性肿瘤患者(IC PD-L1≥1％)或PD-L1情况未知肿瘤患者(排除PD-L1<1％)中，中位PFS为7.36(95％CI 7.36，NE)个月，12个月PFS率为49.4％(95％CI 20.6至100％)。12个月OS率为90.9％(95％CI 75.1至100％)。
结论：KN046与白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)联用耐受良好，并且对PD-L1阳性TNBC已显示了良好的临床有效性。初步的总体生存数据令人鼓舞。
临床试验信息：NCT03872791
虽然在本文中已经显示和描述了本发明的优选实施方式，但对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方式仅通过示例的方式提供。这并不意味着发明受说明书中提供的具体实施例的限制。虽然已经参考前述说明书描述了发明，但是本文实施方式的描述和图示并不意味着以限制意义进行解释。在不背离发明的情况下，本领域技术人员现在将进行许多变化、改变和替换。此外，应理解，发明的所有方面不限于本文所述的取决于各种条件和变量的特定描述、构造或相对比例。应理解，在实施发明时可采用本文所述的发明实施方式的各种替代方案。因此，预期发明还应涵盖任何此类替代、修改、变化或等效物。以下权利要求旨在定义发明的范围，并由此涵盖这些权利要求及其等效物范围内的方法和结构。
序列表
<110> 江苏康宁杰瑞生物制药有限公司；
<120> 用于肿瘤治疗的双特异性融合蛋白
<130> 0096-PA-015CN
<160> 64
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> antiPD-L1 CDR3
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X1=E/G
<220>
<221> X
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<220>
<221> X
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<223> ,X=T/P
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> ,X=L/G
<220>
<221> X
<222> (11)..(11)
<223> ,X=V/P
<220>
<221> X
<222> (12)..(12)
<223> X=T/A
<400> 1
Asp Ser Phe Xaa Xaa Pro Thr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> antiPD-L1 CDR1
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X=K/N
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=M/I
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=S/I
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=S/R
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=R/V
<400> 2
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR1
<400> 3
Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR2
<400> 4
Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR3
<400> 5
Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 6
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR1
<400> 7
Gly Asn Ile Ile Arg Val Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR2
<400> 8
Asn Ile Leu Thr Thr Thr Ile Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 9
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR3
<400> 9
Asp Ser Phe Gly Tyr Pro Thr Cys Pro Gly Pro Ala Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 10
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6
<400> 10
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Asn Ile Ile Arg Val Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Gly
35 40 45
Pro Asn Ile Leu Thr Thr Thr Ile Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Gly Tyr Pro Thr Cys Pro Gly Pro Ala Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-m3 CDR2
<400> 11
Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 12
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-m3
<400> 12
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 13
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-4
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-11
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-13
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 CDR2
<220>
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<223> X=Y/S
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=I/L
<400> 16
Ala Ile Xaa Xaa Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR1
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Ala Tyr Cys Met Gly
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR2
<400> 18
Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR3
<400> 19
Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser Gly Pro
1 5 10 15
Phe Gly Tyr
<210> 20
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-C1 CDR2
<400> 21
Ala Ile Tyr Leu Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-C1
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Gly Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Leu Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Ile Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-13 CDR2
<400> 23
Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 24
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-13
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 25
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-26
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 26
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-27
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 27
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-28
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 28
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-29
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 29
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-30
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 30
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-31
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 31
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-32
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 32
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-33
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 33
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 短连接肽
<400> 33
Gly Ala Pro
1
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 长连接肽
<400> 34
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 35
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgGl-Fc 区带有铰链
<400> 35
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 36
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IgGl 恒定区
<400> 36
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 37
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 对照dAb
<400> 37
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr Cys Met Gly
20 25 30
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ala Leu Ala
35 40 45
Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65 70 75 80
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser
85 90 95
Thr Ile Arg Tyr Val Cys Pro Gly Leu Asn Arg Gly Asp Gln Phe Lys
100 105 110
Asn Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgGl-Fc 区带有铰链 (C-S)
<400> 38
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 39
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人 IgG1-Fc 区不带铰链
<400> 39
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 40
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-aCTLA4.34-Fc
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr
145 150 155 160
Ser Ala Tyr Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Gly Val Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
195 200 205
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly
225 230 235 240
Ser Trp Ser Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
275 280 285
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
290 295 300
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
305 310 315 320
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
325 330 335
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
340 345 350
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
355 360 365
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
370 375 380
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
385 390 395 400
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
405 410 415
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
420 425 430
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
435 440 445
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
450 455 460
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
465 470 475 480
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485 490
<210> 41
<211> 505
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-L-aCTLA4.34-Fc
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr Cys
165 170 175
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val Ala
180 185 190
Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser Gly
245 250 255
Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 42
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aCTLA4.34-aPDL1.9-Fc
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser
145 150 155 160
Ser Arg Arg Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg
165 170 175
Glu Arg Val Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
195 200 205
Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Ser Ser Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
275 280 285
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
290 295 300
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
305 310 315 320
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
325 330 335
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
340 345 350
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
355 360 365
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
370 375 380
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
385 390 395 400
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
405 410 415
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
420 425 430
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
435 440 445
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
450 455 460
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
465 470 475 480
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485 490
<210> 43
<211> 505
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aCTLA4.34-L-aPDL1.9-FC
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg Cys
165 170 175
Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val Ala
180 185 190
Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser Gly
245 250 255
Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 44
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-dAb-Fc
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln
130 135 140
Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr
145 150 155 160
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
165 170 175
Ala Leu Ala Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
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420 425 430
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435 440 445
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
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<223> CTLA4-muFc
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Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala Ser Ser Arg Gly Ile
1 5 10 15
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Ala Ser Pro Gly Lys Ala Thr Glu Val
20 25 30
Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln Val Thr Glu Val Cys
35 40 45
Ala Ala Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr Phe Leu Asp Asp Ser
50 55 60
Ile Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val Asn Leu Thr Ile Gln
65 70 75 80
Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile Cys Lys Val Glu Leu
85 90 95
Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly Asn Gly Thr Gln Ile
100 105 110
Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser Asp Gln Gly Ser Met
115 120 125
Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
130 135 140
Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val
145 150 155 160
Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile
165 170 175
Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val
180 185 190
Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
195 200 205
Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro
245 250 255
Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys
260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr
275 280 285
Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr
290 295 300
Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser
325 330 335
Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser
340 345 350
His Ser Pro Gly Lys
355
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<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1-muFc
<400> 53
Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn
1 5 10 15
Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe
35 40 45
Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln
50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
85 90 95
Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val
115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
130 135 140
Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr
145 150 155 160
Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Asn Leu Phe Asn Val Thr Ser
165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
180 185 190
Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro
195 200 205
Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr Gly Ser Met Asp
210 215 220
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
245 250 255
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
260 265 270
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
275 280 285
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
385 390 395 400
Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
405 410 415
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420 425 430
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
435 440 445
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450
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1-huFc
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1 5 10 15
Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe
35 40 45
Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln
50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
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100 105 110
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115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
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165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
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130 135 140
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145 150 155 160
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Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
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195 200 205
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
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Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
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Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
260 265 270
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275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
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340 345 350
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355
<210> 57
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
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<400> 57
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100 105 110
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115 120 125
Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu Arg
130 135 140
Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Ile Met Gln Lys Ser Gln
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Val Ser
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr
245 250 255
Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser
290 295 300
Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln
370 375 380
Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met
385 390 395 400
Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys
405 410 415
Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 58
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD1-muFc
<400> 58
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
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Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
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Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
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Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
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Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
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His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile
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Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys
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Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu
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Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
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Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
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Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro
275 280 285
Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr
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Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln
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Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly
325 330 335
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355 360 365
His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
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<210> 59
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Ipilimumab HC
<400> 59
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Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
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Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
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Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
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Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 60
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Ipilimumab LC
<400> 60
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 61
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Durvalumab HC
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 62
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Durvalumab LC
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人PD-L1
<400> 63
Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn
1 5 10 15
Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe
35 40 45
Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln
50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
85 90 95
Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val
115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
130 135 140
Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr
145 150 155 160
Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Asn Leu Phe Asn Val Thr Ser
165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
180 185 190
Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro
195 200 205
Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr
210 215 220
<210> 64
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人PD-L1 N-端 IgV 区
<400> 64
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr
115 120 125

Claims (102)

1.二聚体在制备用于***的药物中的用途，其中：
所述二聚体由两条多肽链形成，所述两条多肽链中的每一条包含抗体Fc亚单位，其中所述二聚体包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)，所述ISVD中的至少一个特异于PD-L1，并且所述ISVD中的至少一个特异于CTLA4。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述两条多肽链中的至少一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，其中所述两条多肽链中的每一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者，所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；并且所述特异于CTLA4的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD的N末端融合；和
所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；和
所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
8.根据权利要求7所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于PD-L1的ISVD的N末端融合；和
所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的用途，其中所述抗体Fc亚单位来源于IgG Fc亚单位。
10.根据权利要求9所述的用途，其中所述IgG为人IgG1。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的用途，其中所述抗体Fc亚单位包含如SEQ IDNO:35、38和39中任一项所示的氨基酸序列。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD还能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和R113，并且其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125，并且其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
20.根据权利要求19所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
21.根据权利要求19-20中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求19-21所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
23.根据权利要求19-22中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
24.根据权利要求19-23中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体为特异于PD-L1的ISVD。
25.根据权利要求19-24中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
26.根据权利要求19-25中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD与参考抗CTLA4抗体交叉竞争结合CTLA4，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
38.根据权利要求37所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
39.根据权利要求37-38中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
40.根据权利要求37-39中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
41.根据权利要求37-40中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体为特异于CTLA4的ISVD。
42.根据权利要求37-41中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
43.根据权利要求37-42中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
45.根据权利要求1-44中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
50.根据权利要求1-49中任一项所述的用途，其中所述二聚体为同二聚体。
51.根据权利要求4-50中任一项所述的用途，其中所述连接子包含如SEQ ID NO:33-34中任一项所示的氨基酸序列。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的用途，其中所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的用途，其中所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
54.根据权利要求1-53中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
55.根据权利要求1-54中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
56.根据权利要求1-55中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
57.根据权利要求1-56中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
58.根据权利要求1-57中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC和乳腺癌组成的组。
59.根据权利要求1-58中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由食管鳞状细胞癌(ESCC)和鼻咽癌(NPC)组成的组。
60.根据权利要求1-59中任一项所述的用途，其中已对患有所述肿瘤的受试者施用过免疫检查点抑制剂。
61.根据权利要求60所述的用途，其中所述受试者对所述免疫检查点抑制剂基本无应答。
62.根据权利要求60-61中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂选自由PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂和CTLA4抑制剂组成的组。
63.根据权利要求60-62中任一项所述的用途，其中已对所述受试者施用过化疗、化放疗、CTL细胞疗法、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和/或血管生成抑制剂。
64.根据权利要求63所述的用途，其中所述化疗包括一线化疗和/或二线化疗。
65.根据权利要求64所述的用途，其中所述二线化疗包括紫杉醇、多西他赛、卡培他滨和/或5-FU。
66.根据权利要求1-65中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由局部晚期或转移性黑素瘤、非角质化局部晚期复发性或转移性NPC、转移性NSCLC、鳞状和非鳞状NSCLC、复发性或转移性ESCC以及三阴性乳腺癌(TNBC)组成的组。
67.根据权利要求1-66中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由无EGFR突变或ALK融合的晚期NSCLC、伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC、伴有阳性PD-L1表达的NPC以及局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
68.根据权利要求1-67中任一项所述的用途，其中所述二聚体与化疗剂组合施用。
69.根据权利要求68所述的用途，其中所述化疗剂包含含铂双药和/或紫杉醇。
70.根据权利要求68-69中任一项所述的用途，其中所述化疗剂包含顺铂、吉西他滨和/或白蛋白结合紫杉醇(nab-paclitaxel)。
71.一种治疗有需要的受试者的肿瘤的方法，包括对所述受试者施用有效量的根据权利要求1-70中任一项所述的二聚体。
72.根据权利要求71所述的用途，其中所述肿瘤选自由NSCLC、黑素瘤、食管鳞状细胞癌(ESCC)、NPC和乳腺癌组成的组。
73.根据权利要求71-72中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由食管鳞状细胞癌(ESCC)和鼻咽癌(NPC)组成的组。
74.根据权利要求71-73中任一项所述的用途，其中已对所述受试者施用过免疫检查点抑制剂。
75.根据权利要求74所述的用途，其中所述受试者对所述免疫检查点抑制剂基本无应答。
76.根据权利要求74-75中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂选自由PD-L1抑制剂、PD-1抑制剂和CTLA4抑制剂组成的组。
77.根据权利要求71-76中任一项所述的用途，其中已对所述受试者施用过化疗、化放疗、CTL细胞疗法、EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)和/或血管生成抑制剂。
78.根据权利要求77所述的用途，其中所述化疗包括一线化疗和/或二线化疗。
79.根据权利要求78所述的用途，其中所述二线化疗包括紫杉醇、多西他赛、卡培他滨和/或5-FU。
80.根据权利要求71-79中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由局部晚期或转移性黑素瘤、非角质化局部晚期复发性或转移性NPC、转移性NSCLC、鳞状和非鳞状NSCLC、复发性或转移性ESCC以及三阴性乳腺癌(TNBC)组成的组。
81.根据权利要求71-80中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由无EGFR突变或ALK融合的晚期NSCLC、伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC、伴有阳性PD-L1表达的NPC以及局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
82.根据权利要求71-81中任一项所述的用途，其中所述二聚体与化疗剂组合施用。
83.根据权利要求82所述的用途，其中所述化疗剂包含含铂双药和/或紫杉醇。
84.根据权利要求82-83中任一项所述的用途，其中所述化疗剂包含顺铂、吉西他滨和/或白蛋白结合紫杉醇。
85.根据权利要求71-84中任一项所述的方法，其中所述二聚体的有效量为1mg/kg至5mg/kg的剂量。
86.根据权利要求85所述的方法，其中所述剂量为1mg/kg至3mg/kg。
87.根据权利要求85所述的方法，其中所述剂量为3mg/kg至5mg/kg。
88.根据权利要求71-87中任一项所述的方法，其中所述二聚体每两周一次或每三周一次施用。
89.根据权利要求71-88中任一项所述的用途，其中所述二聚体通过静脉内施药来施用。
90.根据权利要求1-70中任一项所述的二聚体与根据权利要求68-70中任一项所述的化疗剂组合用于制备***的药物的用途。
91.根据权利要求90所述的用途，其中所述肿瘤选自由实体肿瘤和血液肿瘤组成的组。
92.根据权利要求90-91中任一项所述的用途，其中所述肿瘤包括NSCLC和/或乳腺癌。
93.根据权利要求90-92中任一项所述的用途，其中已对患有所述肿瘤的受试者施用过EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。
94.根据权利要求90-93中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由鳞状和非鳞状NSCLC以及三阴性乳腺癌(TNBC)组成的组。
95.根据权利要求90-94中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由伴有EGFR外显子20***突变的NSCLC和局部晚期不可手术或转移性TNBC组成的组。
96.根据权利要求90-95中任一项所述的用途，其中所述二聚体以每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次的给药频率施用。
97.根据权利要求90-96中任一项所述的用途，其中所述铂基药剂以每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次的给药频率施用。
98.根据权利要求90-97中任一项所述的用途，其中所述二聚体以静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内的方式施用。
99.根据权利要求90-98中任一项所述的用途，其中所述化疗剂以静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内的方式施用。
100.根据权利要求90-99中任一项所述的用途，其中所述二聚体以0.01mg/kg至100mg/kg的剂量施用。
101.根据权利要求90-100中任一项所述的用途，其中所述化疗剂以0.01mg/kg至100mg/kg的剂量施用。
102.一种试剂盒，包含有效量的根据权利要求1-70中任一项所述的二聚体和根据权利要求68-70中任一项所述的化疗剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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US20160145355A1 (en) * 2013-06-24 2016-05-26 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
CN106397592A (zh) * 2015-07-31 2017-02-15 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 针对程序性死亡配体(pd-l1)的单域抗体及其衍生蛋白
AU2016355568A1 (en) * 2015-11-18 2018-06-21 Merck Sharp & Dohme Llc PD1/CTLA4 Binders
CN107400166A (zh) * 2016-05-19 2017-11-28 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 针对ctla4的单域抗体及其衍生蛋白
CN106967172B (zh) * 2016-08-23 2019-01-08 康方药业有限公司 抗ctla4-抗pd-1 双功能抗体、其药物组合物及其用途
WO2019042153A1 (zh) * 2017-09-01 2019-03-07 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 重组双特异性抗体
KR20200091382A (ko) * 2017-11-02 2020-07-30 시스트이뮨, 인코포레이티드 이중특이성 항체 및 이의 제조 및 사용 방법
TWI831789B (zh) * 2018-06-05 2024-02-11 大陸商江蘇康寧杰瑞生物製藥有限公司 二聚體及其用途

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