CN114736950A - Dna二代测序文库及其构建方法、构建试剂盒 - Google Patents

Dna二代测序文库及其构建方法、构建试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；步骤二：反应液的制备：将壳聚糖溶液10‑30份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂5‑10份、DTT 1‑5份、PEG400 1‑2份。本发明DNA样本通酶进行切断处理，通过反应液、磁化剂改进，反应液中的壳聚糖与营养剂配合，从而为原料提供充足的营养，提高产品原料的动力；同时通过磁化剂为四氧化三铁、氯化钠，氯化钠进一步的提供能量，同时配合四氧化三铁聚集，进而提高产品的构建效率。

Description

DNA二代测序文库及其构建方法、构建试剂盒
技术领域
本发明涉及测序文库技术领域，具体涉及DNA二代测序文库及其构建方法、构建试剂盒。
背景技术
测序文库的构建首先准备基因组(虽然测序公司要求样品量要达到200ng，但是Gnome Analyzer***所需的样品量可低至100ng,能应用在很多样品有限的实验中)，然后将DNA随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头(Adaptor)。如果是转录组测序，则文库的构建要相对麻烦些，RNA片段化之后需反转成cDNA，然后加上接头，或者先将RNA反转成cDNA，然后再片段化并加上接头。片段的大小(Insert size)对于后面的数据分析有影响，可根据需要来选择。对于基因组测序来说，通常会选择几种不同的insert size，以便在组装(Assembly)的时候获得更多的信息。
2)锚定桥接；Solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行，flow cell 又被细分成8个Lane，每个Lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的DNA片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构，以供后续的预扩增使用。
现有的DNA二代测序文库构建方法简单，构建效率低，基于此需进一步的改进处理。
发明内容
本发明的目的在于提供DNA二代测序文库及其构建方法、构建试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液10-30份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂5-10份、DTT 1-5份、PEG400 1-2份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应1-5min，反应转速为100-500r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
优选地，所述营养剂的制备方法为：将氯化镁1-5份、氯化钠1-5份和1-2 份氯化钾以100-500r/min的转速搅拌10-20min；然后再以500-1000r/min的转速搅拌15-25min，得到营养剂。
优选地，所述壳聚糖溶液的质量分数为10-20％。
优选地，所述壳聚糖溶液的质量分数为15％。
优选地，所述磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
优选地，所述磁化强度为1-5Bt，磁化时间为10-20min。
优选地，所述磁化强度为3Bt，磁化时间为15min。
一种DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
一种DNA二代测序文库构建试剂盒。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的DNA样本通酶进行切断处理，通过反应液、磁化剂改进，反应液中的壳聚糖与营养剂配合，从而为原料提供充足的营养，提高产品原料的动力；同时通过磁化剂为四氧化三铁、氯化钠，氯化钠进一步的提供能量，同时配合四氧化三铁聚集，进而提高产品的构建效率。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液10-30份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂5-10份、DTT 1-5份、PEG400 1-2份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应1-5min，反应转速为100-500r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
本实施例的营养剂的制备方法为：将氯化镁1-份、氯化钠1-5份和1-2份氯化钾以100-500r/min的转速搅拌10-20min；然后再以500-1000r/min的转速搅拌15-25min，得到营养剂。
本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为10-20％。
本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为15％。
本实施例的磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
本实施例的磁化强度为1-5Bt，磁化时间为10-20min。
本实施例的磁化强度为3Bt，磁化时间为15min。
本实施例的一种DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
本实施例的一种DNA二代测序文库构建试剂盒。
实施例1.
DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液10份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂5份、DTT 1份、 PEG4001份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应1min，反应转速为100r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
本实施例的营养剂的制备方法为：将氯化镁1份、氯化钠1份和1份氯化钾以100r/min的转速搅拌10min；然后再以500r/min的转速搅拌15min，得到营养剂。
本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为10％。
本实施例的磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
本实施例的磁化强度为1Bt，磁化时间为10min。
本实施例的一种DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
本实施例的一种DNA二代测序文库构建试剂盒。
实施例2.
DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液30份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂10份、DTT 5份、 PEG4002份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应5min，反应转速为500r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
本实施例的营养剂的制备方法为：将氯化镁5份、氯化钠5份和2份氯化钾以500r/min的转速搅拌20min；然后再以1000r/min的转速搅拌25min，得到营养剂。
本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为20％。
本实施例的磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
本实施例的磁化强度为5Bt，磁化时间为20min。
本实施例的一种DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
本实施例的一种DNA二代测序文库构建试剂盒。
实施例3.
DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液20份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂7.5份、DTT 3 份、PEG400 1.5份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应3min，反应转速为300r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
本实施例的营养剂的制备方法为：将氯化镁3份、氯化钠3份和1.5份氯化钾以300r/min的转速搅拌15min；然后再以750r/min的转速搅拌20min，得到营养剂。
本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为15％。
本实施例的磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
本实施例的磁化强度为3Bt，磁化时间为15min。
本实施例的一种DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
本实施例的一种DNA二代测序文库构建试剂盒。
实施例4.
DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液15份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂7.5份、DTT 2 份、PEG400 1.5份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应2min，反应转速为200r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
本实施例的营养剂的制备方法为：将氯化镁2份、氯化钠2份和1.3份氯化钾以200r/min的转速搅拌13min；然后再以600r/min的转速搅拌17min，得到营养剂。
本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为13％。
本实施例的磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
本实施例的磁化强度为2Bt，磁化时间为12min。
本实施例的一种DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
本实施例的一种DNA二代测序文库构建试剂盒。
实施例5.
DNA二代测序文库的构建方法，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液10-30份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂7.5份、DTT 3份、PEG400 1.8份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应4min，反应转速为300r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
本实施例的营养剂的制备方法为：将氯化镁4份、氯化钠4份和1.6份氯化钾以400r/min的转速搅拌15min；然后再以80r/min的转速搅拌22min，得到营养剂。
本实施例的壳聚糖溶液的质量分数为18％。
本实施例的磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
本实施例的磁化强度为3Bt，磁化时间为18min。
本实施例的一种DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
本实施例的一种DNA二代测序文库构建试剂盒。
因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (9)

1.DNA二代测序文库的构建方法，其特征在于，构建方法包括以下步骤：
步骤一：将DNA样本通酶切获得片段化的原始模板DNA；
步骤二：反应液的制备：
将壳聚糖溶液10-30份送入到磁力搅拌器中，然后加入营养剂5-10份、DTT 1-5份、PEG400 1-2份；
步骤三：原始模板DNA采用反应液反应处理，然后进行多重PCR扩增，扩增后送入到磁化剂中反应1-5min，反应转速为100-500r/min；
步骤四：然后进行单链接头方式进行构建DNA。
2.根据权利要求1所述的DNA二代测序文库的构建方法，其特征在于，所述营养剂的制备方法为：将氯化镁1-5份、氯化钠1-5份和1-2份氯化钾以100-500r/min的转速搅拌10-20min；然后再以500-1000r/min的转速搅拌15-25min，得到营养剂。
3.根据权利要求2所述的DNA二代测序文库的构建方法，其特征在于，所述壳聚糖溶液的质量分数为10-20％。
4.根据权利要求3所述的DNA二代测序文库的构建方法，其特征在于，所述壳聚糖溶液的质量分数为15％。
5.根据权利要求1所述的DNA二代测序文库的构建方法，其特征在于，所述磁化剂为四氧化三铁、氯化钠按照重量比3:1混合，然后磁化罐内磁化处理。
6.根据权利要求5所述的DNA二代测序文库的构建方法，其特征在于，所述磁化强度为1-5Bt，磁化时间为10-20min。
7.根据权利要求6所述的DNA二代测序文库的构建方法，其特征在于，所述磁化强度为3Bt，磁化时间为15min。
8.一种如权利要求7所述任一项DNA二代测序文库的构建方法构建的测序文库。
9.一种如权利要求1-8所述任一项DNA二代测序文库构建试剂盒。
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