CN114732794B - 氧化还原双敏感型纳米给药***及其制备方法、应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种氧化还原双敏感型纳米给药***及其制备方法、应用。本发明提供的氧化还原双敏感型纳米给药***包括：如通式（Ⅰ）所示的聚合物，p=5‑60，R1、R2、R3、R4各自独立地选自碳原子个数在6以下的烷基或环烷基，x、y、m、n各自独立地为6以下的正整数。该聚合物主要作为载体材料以促进形成纳米给药***，其具有良好的生物安全性和生物相容性，同时，该聚合物还具有良好的生物降解性，载药量高。
Figure 662705DEST_PATH_IMAGE001
（Ⅰ）。

Description

氧化还原双敏感型纳米给药***及其制备方法、应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种氧化还原双敏感型纳米给药***及其制备方法、应用。
背景技术
在癌症进展过程中，肿瘤微环境经历了一系列分子和细胞变化，包括缺氧、有氧糖酵解、血管生成、免疫耐受和慢性炎症。尽管临床医生做出了巨大努力，肿瘤的医学干预效果仍然欠佳。复杂的肿瘤微环境是阻止抗癌药物渗透到肿瘤组织和导致治疗失败的一个主要原因。为了克服癌症治疗中的这些巨大挑战，近几十年来，刺激响应纳米递药***作为新兴的治疗方式备受关注。经过合理设计，肿瘤微环境中的质子、氧化还原、活性氧（ROS）和一些过表达的酶可触发内源性刺激响应纳米***，实现药物靶向递送和精准释放且具有高效、低毒副作用的特点。
肿瘤组织具有较高的ROS基础水平，由于大量ROS积累会破坏脂质、蛋白质和DNA等生物分子，最终能导致肿瘤细胞死亡。谷胱甘肽（GSH）是由三肽硫醇抗氧化剂组成的，是肿瘤组织内的主要解毒和活性氧清除剂。为维持肿瘤细胞的生存和生长，肿瘤细胞需要平衡高水平的氧化应激，其ROS和GSH的表达水平均高于正常组织。受此启发，如何利用肿瘤细胞内ROS和GSH的表达水平均高于正常组织的这一特点来构建一种给药***使得药物能在肿瘤细胞内靶向释放，成为了本领域研究人员的一个关注点。目前基于肿瘤特异的微环境已开发了众多氧化还原响应型药物递送平台，但仍然存在诸如载体材料的生物安全性差、降解性能一般、单一的氧化还原敏感能力对复杂的肿瘤微环境不能实现快速响应等问题，需要进一步完善。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种氧化还原双敏感型纳米给药***及其制备方法，以应用于制备靶向抗肿瘤药物。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种氧化还原双敏感型纳米给药***，包括：如通式（Ⅰ）所示的聚合物：
Figure 578549DEST_PATH_IMAGE001
（Ⅰ）
其中，p=5-60，
R1、R2、R3、R4各自独立地选自碳原子个数在6以下的烷基或环烷基，
x、y、m、n各自独立地为6以下的正整数。
作为一种实施方式，所述氧化还原双敏感型纳米给药***还包括：稳定剂，所述稳定剂包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类稳定剂、聚乙烯醇和磷脂分子中的至少一种。
作为一种实施方式，所述聚合物和所述稳定剂的质量比为2 : (1-3)；和/或
所述氧化还原双敏感型纳米给药***为具有疏水性内核和亲水性外壳的纳米颗粒，所述疏水性内核主要由所述聚合物构建。
作为一种实施方式，所述氧化还原双敏感型纳米给药***还包括：疏水性药物，所述聚合物负载所述疏水性药物。
一种上述氧化还原双敏感型纳米给药***的制备方法，所述制备方法包括制备聚合物的步骤：
提供如通式（Ⅱ）所示的胱氨酸酯和如通式（Ⅲ）所示的硫缩酮，X1和X2各自独立地选自卤素：
Figure 230110DEST_PATH_IMAGE002
Figure 806585DEST_PATH_IMAGE003
（Ⅱ） （Ⅲ）
将上述胱氨酸酯和所述硫缩酮进行酰胺化反应，得到如通式（Ⅰ）所示的聚合物。
作为一种实施方式，所述制备方法还包括以下步骤：
提供稳定剂，所述稳定剂包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类稳定剂、聚乙烯醇和磷脂分子中的至少一种；
将所述聚合物和所述稳定剂分散在有机溶剂中，作为油相；
将所述油相在搅拌状态下加入水相中，制得所述氧化还原双敏感型纳米给药***。
作为一种实施方式，将所述聚合物和稳定剂分散在有机溶剂中的步骤中还添加了疏水性药物，所述疏水性药物和所述聚合物、所述稳定剂的混合物形成油相。
作为一种实施方式，所述油相和所述水相的体积比为1 : (25-100)。
作为一种实施方式，将所述油相在搅拌状态下加入水相中的步骤包括：在1000-4000 rpm的搅拌速度下，将所述油相以小于或等于20μL/s的速度滴加入所述水相中。
前述氧化还原双敏感型纳米给药***或由上述制备方法制得的氧化还原双敏感型纳米给药***在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供的上述氧化还原双敏感型纳米给药***，其包括：如通式（Ⅰ）所示的聚合物，该聚合物主要作为载体材料以促进形成纳米给药***，其具有良好的生物安全性和生物相容性，体外细胞毒性实验显示其对人***癌细胞无明显毒性作用，各浓度组细胞均大于90%的存活量，同时，该聚合物还具有良好的生物降解性，由该聚合物与稳定剂和疏水性药物形成的纳米颗粒在ROS环境和GSH环境下的释药速率和药物累积释放量变化显著，而且，其载药量可高达17%。
本发明通过采用纳米沉淀法，通式（Ⅰ）所示的聚合物在适量的稳定剂和疏水性药物的参与下可以在水相中自组装为粒度较小且尺寸均一的纳米颗粒，方法简单，可重复性强。所形成的氧化还原双敏感型纳米给药***为具有疏水性内核和亲水性外壳的纳米颗粒，具有粒径小、载药量高、体内稳定性好、能特异性靶向肿瘤以及制备简单优化的特点。
此外，通过肿瘤组织的高通透性和高保留性（EPR效应），上述氧化还原双敏感型纳米给药***可实现被肿瘤细胞大量截留，从而具有被动靶向功能。利用肿瘤氧化还原微环境的作用，实现上述氧化还原双敏感型纳米给药***在肿瘤组织内的完全降解和包载药物的快速及大量释放，实现药物在肿瘤细胞的特异性释放，达到体内外对肿瘤高效抑制的结果。由此，将上述氧化还原双敏感型纳米给药***应用于制备靶向抗肿瘤药物，具有良好且广泛的应用前景。
附图说明
图1是实施例3中氧化还原双敏感型纳米给药***的形成过程示意图；
图2是实施例1合成的聚合物Ⅰ1的核磁氢谱；
图3是实施例3制备的THPP@NPs的透射电镜（TEM）测试和动态光散射（DLS）数据图，A为TEM图，B为DLS图；
图4是THPP@NPs在37℃时在谷胱甘肽（GSH）和过氧化氢（H2O2）作用下的THPP释放结果图；
图5是各组制剂以不同浓度分别在无超声作用和有超声作用下，对人***癌细胞（C4-2B cells）细胞杀伤结果图；
图6是NPs、THPP@NPs对荷瘤小鼠的抗肿瘤实验结果图（异种移植小鼠***癌）。
具体实施方式
在本发明的描述中，所涉及的化合物及其衍生物均是按照IUPAC（国际纯粹与应用化学联合会）或CAS（化学文摘服务社，位于俄亥俄州哥伦布市）命名***命名的，具体涉及到的化合物基团作如下阐述与说明：
“烷基”指的是一类仅含有碳、氢两种原子的饱和链状烃基，具有直链碳链和/或支链碳链，包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、异戊基、己基等。本发明中，烷基的碳原子个数优选为1-6，在一些具体的实施方式中，烷基的碳原子个数为1、2、3、4、5或6。
“环烷基”指的是一类分子中含有单环、联环、稠环、螺环和桥环等环状结构的饱和烃基，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。本发明中，环烷基的碳原子个数优选为3-6，在一些具体的实施方式中，环烷基的碳原子个数为3、4、5或6。
“卤素”指的是元素周期表中VIIA族元素，包括氟（F）、氯（Cl）、溴（Br）、碘（I）等元素。
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一种氧化还原双敏感型纳米给药***，包括：如通式（Ⅰ）所示的聚合物：
Figure 936215DEST_PATH_IMAGE001
（Ⅰ）
其中，p=5-60，
R1、R2、R3、R4各自独立地选自碳原子个数在6以下的烷基或环烷基，
x、y、m、n各自独立地为6以下的正整数。
该聚合物主要作为载体材料以促进形成纳米给药***，其具有良好的生物安全性和生物相容性，同时，该聚合物能够对环境中的ROS和GSH作出快速响应并发生降解，使得纳米给药***中负载的药物能够释放到特定环境中，赋予纳米给药***良好的药物控释性能，且具有载药量高的特点。
一些实施例中，R1、R2、R3、R4各自独立地选自甲基、乙基、丙基、叔丁基中的至少一种，x、y、m、n各自独立地为1-3以内的正整数。
一具体实施例中，聚合物为具有以下化学结构的聚合物Ⅰ1：
，p=5-60。
经体外细胞毒性实验证实，该聚合物具有良好的生物安全性和生物相容性，其对人***癌细胞无明显毒性作用，各浓度组细胞均大于90%的存活量。同时，该聚合物还具有良好的生物降解性，由该聚合物与稳定剂和疏水性药物形成的纳米颗粒在ROS环境和GSH环境下的释药速率和药物累积释放量变化显著，而且，其载药量可高达17%。
本发明实施例所提供的氧化还原双敏感型纳米给药***还包括：稳定剂，适量的稳定剂可促进聚合物在溶液体系中组装形成具有疏水性内核和亲水性外壳的纳米颗粒，疏水性内核主要由所述聚合物构建，亲水性外壳主要由稳定剂构建。可以理解的是，亲水性外壳是指包覆于疏水性内核外的、具亲水性的壳层。
一些实施例中，稳定剂包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类稳定剂、聚乙烯醇和磷脂分子中的至少一种，这类稳定剂有利于促进上述聚合物达到亲水-亲油平衡值而形成纳米粒子，也能防止形成的纳米粒子发生团聚。
一些实施例中，聚合物和稳定剂的质量比为2 : (1-3)。稳定剂在聚合物结合位点形成表面活性簇，此时会有一个浓度窗口期，当稳定剂用量小于上述范围时，不足以让所有结合位点形成簇状结构，聚合物之间会通过相互作用，形成几个相互连接的结构，导致聚合物再次聚集。在上述范围内，稳定剂用量进一步增加，每段聚合物都会形成单独的类似胶束的簇状结构。但是，稳定剂用量大于上述范围时，容易超过临界胶束浓度，此时，可能引起纳米粒子的构象发生改变。
氧化还原双敏感型纳米给药***还包括：疏水性药物，所述聚合物负载所述疏水性药物。具体地，疏水性药物负载于主要由聚合物构建形成的疏水性内核中。可以理解的是，该疏水性药物可分散在聚合物中，也可以被聚合物全包覆，具体参考聚合物和疏水性药物的种类及性能，以及制备氧化还原双敏感型纳米给药***所采用的具体方法。
本发明实施例所提供的上述氧化还原双敏感型纳米给药***可通过多种方法制得，包括但不限于纳米沉淀法、单乳液法或双乳液法等。
基于本申请人前期的研究工作，在以上实施例的基础上，本发明提供了一种上述氧化还原双敏感型纳米给药***的制备方法，所述制备方法包括制备聚合物的步骤：
S01、提供如通式（Ⅱ）所示的胱氨酸酯和如通式（Ⅲ）所示的硫缩酮，X1和X2各自独立地选自卤素：
Figure 750587DEST_PATH_IMAGE002
Figure 743688DEST_PATH_IMAGE003
（Ⅱ） （Ⅲ）
S02、将上述胱氨酸酯和所述硫缩酮进行酰胺化反应，得到如通式（Ⅰ）所示的聚合物。
其中，步骤S02中进行酰胺化反应的具体反应条件可参考胱氨酸酯和硫缩酮的种类进行灵活调整，本发明说明书对此不作具体限制。
胱氨酸酯可选为市售胱氨酸酯商品，也可采用本领域的常规技术手段进行制备得到的胱氨酸酯产物。一些实施例中，胱氨酸酯为胱氨酸酯盐酸盐采用脱盐酸剂进行脱盐酸处理后的产物，胱氨酸酯盐酸盐可选自L-胱氨酸二甲酯二盐酸盐、L-胱氨酸二乙酯二盐酸盐、L-胱氨酸双(叔丁酯)二盐酸盐等，脱盐酸剂可选自碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠等。
硫缩酮可选为市售硫缩酮商品，也可采用本领域的常规技术手段进行制备得到的硫缩酮产物，本发明说明书对此不作具体限制。
在以上实施例的基础上，本发明人采用经改进优化的纳米沉淀法制得了具有疏水性内核和亲水性外壳的氧化还原双敏感型纳米给药***，该制备方法还包括以下步骤：
S03、提供稳定剂，所述稳定剂包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类稳定剂、聚乙烯醇和磷脂分子中的至少一种；
S04、将所述聚合物和所述稳定剂分散在有机溶剂中，作为油相；
S05、将所述油相在搅拌状态下加入水相中，制得所述氧化还原双敏感型纳米给药***。
其中，步骤S04中，将所述聚合物和所述稳定剂分散在有机溶剂中，以使得聚合物和稳定剂均匀混合而作为油相。有机溶剂选自二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二氧六环、吡啶等，优选为二甲基亚砜。
一些实施例中，将所述聚合物和稳定剂分散在有机溶剂中的步骤中还添加了疏水性药物，所述疏水性药物和所述聚合物、所述稳定剂形成油相。
步骤S05中，将所述油相在搅拌状态下加入水相中，以使得聚合物在稳定剂的作用下在亲水体系中自组装形成具有疏水性内核和亲水性外壳的纳米颗粒，从而得到本发明实施例的氧化还原双敏感型纳米给药***。
一些实施例中，油相和所述水相的体积比为1 : (25-100)。当控制油相和水相的体积比在该比例范围内时，油-水的界面张力较为利于纳米粒子形成。稳定剂的加入会吸附在界面上从而降低其界面张力，使纳米粒子处于较稳定状态。若油相体积增加，两相间界面膜越来越膨胀，界面膜变薄，体系的不稳定性增加。
一些实施例中，将所述油相在搅拌状态下加入水相中的步骤包括：在1000-4000rpm的搅拌速度下，将所述油相以小于或等于20 μL/s的速度滴加入所述水相中，以促进聚合物在水相中充分分散，并通过亲疏水作用形成稳定的纳米粒子。优选的，油相的滴加速度为5-20 μL/s。
综上，本发明实施例通过采用上述优化改进的纳米沉淀法，通式（Ⅰ）所示的聚合物在适量的稳定剂和疏水性药物的参与下可以在水相中自组装为粒度较小且尺寸均一的纳米颗粒，方法简单，可重复性强。所形成的氧化还原双敏感型纳米给药***为具有疏水性内核和亲水性外壳的纳米颗粒，具有粒径小、载药量高、体内稳定性好、能特异性靶向肿瘤以及制备简单优化的特点。
在上述实施例的基础上，本发明实施例还提供了前述氧化还原双敏感型纳米给药***或由上述制备方法制得的氧化还原双敏感型纳米给药***在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。
通过肿瘤组织的高通透性和高保留性（EPR效应），可实现纳米颗粒在肿瘤的大量截留，从而具有被动靶向功能。利用肿瘤氧化还原微环境的作用，实现肿瘤组织内部载体的完全降解和包载药物的快速及大量释放，实现纳米颗粒在肿瘤细胞的特异性释放，达到体内外对肿瘤高效抑制的结果。由此，将上述氧化还原双敏感型纳米给药***应用于制备靶向抗肿瘤药物，具有良好且广泛的应用前景。
为使本发明上述实施细节和操作能清楚地被本领域技术人员理解，以及本发明实施例氧化还原双敏感型纳米给药***及其制备方法和应用的进步性能显著地体现，以下通过实施例对本发明的实施进行举例说明。
实施例1
本实施例合成了聚合物Ⅰ1，其化学结构如下：
Figure 745143DEST_PATH_IMAGE004
p=5-60
具体合成过程包括以下步骤：
（1）取1当量的巯基乙酸和2当量的无水丙酮，溶于无水二氯甲烷，在室温下搅拌，并将2 ml浓盐酸缓慢滴入搅拌混合物中，反应直到结晶完成。用-20℃的正己烷和4℃的冷水反复清洗、过滤晶体3次，然后真空冷冻干燥，得到干燥晶体。取1当量干燥晶体溶于干燥的二氯甲烷，逐滴添加亚硫酰氯（1.2当量），并在90℃下搅拌6 h，旋蒸即可获得2,2'-[丙烷-2,2-双硫基]二乙酰氯。
（2）将L-胱氨酸二甲酯二盐酸盐（(L-Cys-OMe)2·2HCl）置入锥形瓶中，加入适量饱和碳酸钠溶液溶解并在室温搅拌20-30 min，反应结束后用二氯甲烷萃取上述溶液并重复3次。将萃取液用一定量的无水硫酸钠干燥3-5h，最后旋转蒸发得到黄色油状的脱盐酸产物：L-胱氨酸二甲酯，其产率为56.23%。
（3）取1当量的L-胱氨酸二甲酯溶于无水二氯甲烷，在惰性气体保护下滴入现制2,2'-[丙烷-2,2-双硫基]二乙酰氯（1.2当量）的无水二氯甲烷溶液，室温下进行酰胺反应过夜，产物用超纯水淋洗三次，冷冻干燥，得到聚合物Ⅰ1。
实施例2
本实施例提供了一种未载药的氧化还原双敏感型纳米给药***，具体制备过程包括：
（1）以聚合物Ⅰ1为载体材料，以二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DSPE-PEG2000）为稳定剂，将2 mg聚合物Ⅰ1、1 mg DSPE-PEG2000溶解于1 mL DMSO中作为油相；在搅拌速度为1000 rpm的状态下，取100 μL上述油相按10 μL/s的速度滴加到9 mL去离子水中，加入1 mL 10×PBS使得到的纳米颗粒处在拟生理状态的缓冲液中。
（2）将纳米颗粒溶液用Millipore超滤离心管（15 mL/10000 D）超滤浓缩并定容到1 mL，即得到未载药的氧化还原双敏感型纳米给药***，标记为NPs。
实施例3
本实施例提供了一种载药的氧化还原双敏感型纳米给药***，具体制备过程包括：
（1）以聚合物Ⅰ1为载体材料，以二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DSPE-PEG2000）为稳定剂，以5,10,15,20-四（4-羟基苯基）卟啉（THPP）为疏水性药物，将2 mg聚合物Ⅰ1、1 mg DSPE-PEG2000、1 mg THPP溶解于1 mL DMSO中作为油相；在搅拌速度为1000rpm的状态下，取100 μL上述油相按10 μL/s的速度滴加到9 mL去离子水中，如图1所示，该混合体系中形成了具有疏水性内核和亲水性外壳的纳米颗粒；之后，加入1 mL 10×PBS使得到的纳米颗粒处在拟生理状态的缓冲液中。
（2）将纳米颗粒溶液用Millipore超滤离心管（15 mL/10000 D）超滤浓缩并定容到1 mL，即得到载药的氧化还原双敏感型纳米给药***，标记为THPP@NPs。
对比例1
本对比例制备了一种载药纳米颗粒，步骤如下：
将聚合物A、稳定剂DSPE-PEG2000和抗肿瘤药物DTX溶解在DMSO中作为油相，在搅拌状态下将油相滴加到去离子水中，得到载药纳米颗粒分散液；然后，将载药纳米颗粒分散液进行浓缩、冻干，得到载药纳米颗粒，备用
其中，聚合物A的化学结构如下：
Figure 740780DEST_PATH_IMAGE005
n=5-1000
测试例
1、采用核磁共振仪和红外光谱分析仪检测聚合物Ⅰ1的结构。图2为聚合物Ⅰ1的核磁共振氢谱，对谱图中氢信号进行指认，表明聚合物Ⅰ1被成功合成。
2、对实施例3制备的THPP@NPs进行外观性能表征，粒径和粒径分布由动态光散射粒度分析仪测量，DLS结果如图3的B所示，得到了直径91 nm且粒径分布均一的载药纳米粒溶液；THPP@NPs的表观形态采用透射电子显微镜来观察，图3的A显示了纳米颗粒的TEM结果，可以观察到THPP@NPs呈球形且粒度与DLS结果相一致。
3、将THPP@NPs分别置于5 mM谷胱甘肽和1 mM过氧化氢的透析液中并放置在摇床上于37℃孵育一段时间并于预设时间点取样，紫外-可见光分光光度计检测对应透析液中THPP@NPs包载THPP的量以计算累积释放量。
PBS组中不含谷胱甘肽和过氧化氢，作为阴性对照；US组为在孵育过程中给予超声刺激，超声刺激能加速药物释放，作为加速实验对照。
图4为测试结果，GSH或H2O2都能使载药纳米粒的释药速率和累积释放量变化显著，表明THPP@NPs在GSH或H2O2环境下均能发生降解而向外释放药物，具有氧化还原双敏感特性和优秀的缓释控释作用。
进一步的，以对比例1制备的载药纳米颗粒作为阳性对照，采用同样的测试条件，检测其在不同时间下的药物累积释放量，结果如表1，表明本发明实施例提供的THPP@NPs具有更为优异的氧化还原双敏感特性和优秀的缓释控释作用。
表1
Figure 816184DEST_PATH_IMAGE007
4、体外细胞毒性实验
通过CCK-8法在人***癌细胞（C4-2B）上探究了NPs和THPP@NPs的体外细胞毒性实验。将C4-2B细胞以5000细胞/孔的密度接种于96孔板中，在二氧化碳培养箱中孵育24 h使其贴壁；随后，用200 μL含不同浓度的NPs和THPP@NPs的新鲜培养基更换原培养基，每个浓度设置5个平行孔，继续共孵育12 h；孵育结束后，每孔加入含有10%的CCK-8培养基溶液100ul，将细胞在37℃下再孵育2h，并在450 nm处用酶标仪测量各孔的吸光度值。
同样地，按上述方法将NPs和THPP@NPs与细胞共孵育后，用超声刺激(1MHz, 2 W/cm2, 10min)，再次孵育CCK-8并测吸光度。
图5为各组制剂与C4-2B肿瘤细胞作用12 h后的实验结果，其中，NPs组是指以实施例2制备的NPs为制剂样品在无超声刺激作用下的实验组，THPP@NPs组是指以实施例3制备的THPP@NPs为制剂样品在无超声刺激作用下的实验组，NPs+US组是指以实施例2制备的NPs为制剂样品在超声刺激作用下的实验组，SDT组是指以实施例3制备的THPP@NPs为制剂样品在超声刺激作用下的实验组。图5显示，NPs和THPP@NPs对C4-2B肿瘤细胞无明显毒性作用，各浓度组细胞均达> 90%的存活量，表明本申请提供的氧化还原双敏感型纳米给药***具有良好的生物安全性和生物相容性；THPP@NPs在超声刺激作用下会向外释放THPP，而THPP具有细胞毒性，图5中仅SDT组表现出细胞毒性，且细胞毒性跟THPP@NPs浓度有关。
5、体内抗肿瘤活性实验
使用异种移植瘤小鼠验证了本发明提供的氧化还原双敏感型纳米给药***的体内抑瘤作用，具体为选用C4-2B细胞在雄性BALB/c小鼠的右臀部进行接种，每只小鼠接种105-106个细胞，待肿瘤体积达到150 cm3时进行给药并用超声（Ultrasound, US）处理(1MHz, 2 W/cm2，30 min)。荷瘤小鼠随机分配，每组6只，给药及分组方式如下：①生理盐水（saline），②NPs (5 mg/kg)，③THPP@NPs (5 mg/kg)。每1周给1次药，给药后24 h超声处理，连续给药4次，每天观察小鼠状态，每两天测量小鼠体重和肿瘤体积，至实验进行4周时结束实验。
抑瘤实验中各组荷瘤小鼠的肿瘤体积变化如图6所示，NPs未展现出任何抑瘤作用，而与对照组相比，其中声动力治疗（SDT）组（给药THPP@NPs，且进行超声处理）的抑瘤效果最佳。
6、通过调整聚合物Ⅰ1和DSPE-PEG2000的用量，对THPP@NPs的载药量作了进一步摸索，下表2为检测结果：
表2
Figure DEST_PATH_IMAGE009
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种氧化还原双敏感型纳米给药***，包括：如通式（Ⅰ）所示的聚合物：
Figure 883774DEST_PATH_IMAGE001
（Ⅰ）
其中，p=5-60，
R1、R2、R3、R4各自独立地选自碳原子个数在6以下的烷基或环烷基，
x、y、m、n各自独立地为6以下的正整数。
2.根据权利要求1所述的氧化还原双敏感型纳米给药***，其特征在于，所述氧化还原双敏感型纳米给药***还包括：稳定剂，所述稳定剂包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类稳定剂、聚乙烯醇和磷脂分子中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的氧化还原双敏感型纳米给药***，其特征在于，所述聚合物和所述稳定剂的质量比为2 : (1-3)；和/或
所述氧化还原双敏感型纳米给药***为具有疏水性内核和亲水性外壳的纳米颗粒，所述疏水性内核主要由所述聚合物构建。
4.根据权利要求1至3任一项所述的氧化还原双敏感型纳米给药***，其特征在于，所述氧化还原双敏感型纳米给药***还包括：疏水性药物，所述聚合物负载所述疏水性药物。
5.一种权利要求1所述的氧化还原双敏感型纳米给药***的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括制备聚合物的步骤：
提供如通式（Ⅱ）所示的胱氨酸酯和如通式（Ⅲ）所示的硫缩酮，X1和X2各自独立地选自卤素：
Figure 490336DEST_PATH_IMAGE002
Figure 342754DEST_PATH_IMAGE003
（Ⅱ） （Ⅲ）
将上述胱氨酸酯和所述硫缩酮进行酰胺化反应，得到如通式（Ⅰ）所示的聚合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括以下步骤：
提供稳定剂，所述稳定剂包括二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇类稳定剂、聚乙烯醇和磷脂分子中的至少一种；
将所述聚合物和所述稳定剂分散在有机溶剂中，作为油相；
将所述油相在搅拌状态下加入水相中，制得所述氧化还原双敏感型纳米给药***。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将所述聚合物和稳定剂分散在有机溶剂中的步骤中还添加了疏水性药物，所述疏水性药物和所述聚合物、所述稳定剂的混合物形成油相。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述油相和所述水相的体积比为1 :(25-100)。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将所述油相在搅拌状态下加入水相中的步骤包括：在1000-4000 rpm的搅拌速度下，将所述油相以小于或等于20μL/s的速度滴加入所述水相中。
10.权利要求1至4任一项所述的氧化还原双敏感型纳米给药***或由权利要求5至9任一项所述的制备方法制得的氧化还原双敏感型纳米给药***在制备靶向抗肿瘤药物中的应用。
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