CN114702585B - 一种抗cd22的单克隆抗体4f6及其制备方法和用途 - Google Patents

一种抗cd22的单克隆抗体4f6及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抗CD22的单克隆抗体4F6及其制备方法和用途，具体公开了抗4F6抗体或其抗原结合片段，其具有如SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示的三个重链互补决定区(CDR)，并具有如SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的三个轻链互补决定区。还公开了一种核苷酸序列，其特征在于：其编码如前述的抗CD22的单克隆抗体或其抗原结合片段；以及单克隆抗体作为检测试剂的用途。该抗体具有灵敏度高，特异性好等优点。

Description

一种抗CD22的单克隆抗体4F6及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及抗体领域，具体涉及一种抗CD22的单克隆抗体及其制备方法和用途。
背景技术
CD22，名为分化簇-22(英语：cluster of differentiation-22)，是成熟B细胞表面的一种跨 膜受体，属于SIGLEC家族。其主要功能是避免免疫***过度激活，可降低罹患自身免疫性疾 病的风险。CD22是B细胞受体的一个辅助受体，其与连结在抗原B细胞受体表面的抗原连接 后，自己会被磷酸化，进而激活一些磷酸酶以抑制免疫反应。CD22也可能作为抗癌药物的靶 标，美国国立卫生研究院正在测试一种名为BL22的免疫毒素(一种抗CD22的单克隆抗体)， 与CD22结合后可以进入细胞中，达到杀死细胞的效果，可能有助于治疗某些种类的白血病。 另外一种针对CD22的单克隆抗体药物Epratuzumab也正在测试中，可能有助于治疗白血病与 全身性红斑狼疮。同时抗CD22抗体可以结合毒素和放射性同位素等分子，为肿瘤细胞靶向化 疗或放疗提供了可能。由于抗体抗原识别的高度特异性，以CD22为靶点的单克隆抗体将大大 降低治疗副反应。
作为生物学研究领域应用最广泛的工具，抗体产品的地位毋庸置疑。而抗体的特异性和 应用范围长久以来困扰着抗体产业，也是整个生物学研究领域的极大危机。抗体产品糟糕的 质量会直接导致实验结果的误差，以及研究结果无法被重复和再现。研究项目的进展往往会 因为抗体带来的问题停滞不前，由此造成的损失也是惊人的。据2011年的数据统计，仅在美 国，平均每年就有3.5亿美元被浪费在这些无效抗体上。而在世界范围内，每年竟有8亿美 元被浪费，占到了全球科研抗体总开销的50％。
发明内容
为了克服上述问题，本发明提供一种抗CD22蛋白的单克隆抗体4F6，可以应用于免疫印 迹，流式细胞技术和ELISA等实验，是研究CD22功能的有力工具。
本发明一个方面提供了一种分离的抗CD22蛋白的抗体或其抗原结合片段，其具有如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的三个重链互补决定区(CDR)，并具有如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示的三个轻链互补决定区。
本发明另个方面提供了一种分离的抗CD22蛋白的抗体或其抗原结合片段，其具有如SEQ ID No：1所示的重链可变区，如SEQ ID No:9所示的轻链可变区。
本发明再一个方面提供了一种核苷酸序列，其特征在于：其编码如前述的抗CD22蛋白的 单克隆抗体或其抗原结合片段。
在本发明的技术方案中，所述的抗体为单克隆抗体。
本发明再一个方面提供了一种重组载体，其特征在于：包含前述的核苷酸序列。
本发明再一个方面提供了一种宿主细胞，其特征在于：包含前述载体或载体组，优选地， 所述宿主细胞是原核的或真核的，更优选的选自酵母细胞、哺乳动物细胞或适用于制备抗体 或其抗原结合片段的其它细胞。
本发明再一个方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含如前述的抗体或其抗原结合片段。
本发明再一个方面提供了一种检测试剂，所述检测试剂包含如前述的抗体或其抗原结合 片段。
本发明再一个方面提供了上述抗体或其抗原结合片段作为检测试剂的用途，所述试剂用 于以下用途的试剂：酶联免疫吸附检测(ELISA)、免疫印迹(Western Blot)、流式细胞术 (FACS)、免疫组织化学(IHC)检测或者免疫PCR。
在上述在免疫学检测中，抗体或其抗原结合片段可单独或与通过化学键偶联，静电吸附 或者亲疏水性吸附，而连接缀合物包括辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)，生物素 (Biotin)，异硫氰酸荧光素(FITC)，Cy3、Cy5、磁珠和琼脂糖等缀合物连接。
在本发明的技术方案中，检测试剂可用于非诊断的治疗目的检测。
本发明再一个方面提供了上述抗体或其抗原结合片段作为体外分离或纯化CD22蛋白的 试剂的用途。
在本发明中，上述抗体或其抗原结合片段通过杂交瘤方法制备。
在本发明中，所述抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区的核苷酸和氨基酸序列如 下所示。
重链可变区氨基酸序列：
EVLLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGITIYN QKFKGKATLTIDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARDRYDRGYALDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO.1
其中，重链可变区CDR1氨基酸序列为：DYNMD SEQ ID NO.2
重链可变区CDR2氨基酸序列为：DIDPNNGITIYNQKFKG SEQ ID NO.3
重链可变区CDR3氨基酸序列为：DRYDRGYALDY SEQ ID NO.4
重链可变区FR1氨基酸序列为：EVLLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFT SEQ ID NO.5
重链可变区FR2氨基酸序列为：WVKQSHGKSLEWIG SEQ ID NO.6
重链可变区FR3氨基酸序列为：KATLTIDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCAR SEQ IDNO.7
重链可变区FR4氨基酸序列为：WGQGTSVTVSS SEQ ID NO.8
轻链可变区氨基酸序列： DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWHQQKTGQSPKLLVYFASIRD SGVPDRFIGSGSGTDFTLTINSVQAEDLADYFCQQHYSTPFTFGSGTKLEIK SEQ IDNO.9
其中，轻链可变区CDR1氨基酸序列为：KSSQSLLNSSNQKNYLA SEQ ID NO.10
轻链可变区CDR2氨基酸序列为：FASIRDS SEQ ID NO.11
轻链可变区CDR3氨基酸序列为：QQHYSTPFT SEQ ID NO.12
轻链可变区FR1氨基酸序列为：DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMSC SEQ ID NO.13
轻链可变区FR2氨基酸序列为：WHQQKTGQSPKLLVY SEQ ID NO.14
轻链可变区FR3氨基酸序列为：GVPDRFIGSGSGTDFTLTINSVQAEDLADYFC
SEQ ID NO.15
轻链可变区FR4氨基酸序列为：FGSGTKLEIK SEQ ID NO.16
重链可变区基因全长360bp，编码氨基酸残基120个。重链可变区核苷酸序列如SEQID NO:17所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链CDR1氨基酸序列如SEQ IDNo:2所示，重链CDR 2氨基酸序列如SEQ ID No:3所示，重链CDR3氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。
轻链可变区基因序列全长339bp，编码氨基酸残基113个。轻链可变区核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:9，轻链CDR 1氨基酸序列如SEQID No:10所示，轻链CDR 2氨基酸序列如SEQ ID No:11所示，轻链CDR 3氨基酸序列如SEQID No:12所示。
有益效果
本发明提供了一种抗CD22蛋白的单克隆抗体的制备方法、鉴定及应用，该单克隆抗体 具有灵敏度高，特异性好等优点，适用于不同检测方法。本发明提供的单克隆抗体，可以广 泛用于Western blot、ELISA、flowCytometry等不同手段检测CD22蛋白，为研究人CD22蛋 白的功能提供了基础。
附图说明
图1为4F6抗体与CD22蛋白的亲和力结果图。
图2为实施例4中4F6在流式细胞检测中应用的结果。
具体实施方式
为了使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方 式做详细的说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。
实施例1CD22单克隆抗体的生产
采用杂交瘤法(由Kohler等，Nature,256:495(1975)首先提出)。用CD22蛋白抗原(购自义 翘神州)免疫雌性BALB/c小鼠(6周龄)，首次免疫使用弗氏完全佐剂进行乳化抗原，第二次 免疫开始，使用弗氏不完全佐剂乳化抗原，皮下5～6点注射，每只小鼠注射的抗原量为～100μg。 在第3次免疫后10天，对小鼠剪尾采集少量血液进行血清效价ELISA检测，选择抗体滴度高 (>1:100000)的小鼠进行加强第4次免疫，通过腹腔注射抗原蛋白，每只小鼠注射100μg。第 4次免疫后3～5天，处死小鼠取其脾细胞与SP2/0细胞融合，通过HAT培养基培养获得稳定的杂 交瘤细胞。通过ELISA法筛选得到能分泌CD22抗体的杂交瘤细胞，通过有限稀释的方法进行 亚克隆，ELISA法筛选得到能分泌CD22抗体的单克隆杂交瘤细胞株，通过逐级扩大培养，液 氮冻存保种。
腹水抗体制备：雌性BALB/c小鼠(8周龄)腹腔注射弗氏不完全佐剂，每只小鼠注射0.5mL， 3～5天后腹腔注射处于对数生长期的杂交瘤细胞，每只小鼠注射1～5×105个细胞(0.5mL)，注 射杂交瘤细胞～11天后处死小鼠，获得腹水。3000rpm，4℃离心10min，去除沉淀，用10倍体 积1×PB溶液稀释腹水，混匀后过0.45μm滤膜。通过Protein G(Protein GSepharose 4Fast Flow,GE Healthcare)亲和纯化腹水,得到纯化的CD22抗体蛋白，用BCA法测抗体浓度。将纯 化抗体跑SDS-PAGE(上样量5.4μg)，考马斯亮蓝染色。
实施例2 CD22单克隆抗体杂交瘤细胞的抗体基因测序
收获处于对数生长期的单克隆抗体杂交瘤细胞，TRIZOL裂解进行RNA提取，反转录后 获得cDNA，扩增并获得重链和轻链可变区，非功能性VK基因去除，克隆至pMD18-T载体，测序，使用IMGT/V-QUEST数据库进行测序结果比对，进一步分析。
单克隆抗体4F6重链氨基酸序列如下所示： EVLLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSLEWIGDIDPNNGITIYN QKFKGKATLTIDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARDRYDRGYALDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID NO.1；其中，
重链CDR1氨基酸序列为：DYNMD SEQ ID NO.2
重链CDR2氨基酸序列为：DIDPNNGITIYNQKFKG SEQ ID NO.3
重链CDR3氨基酸序列为：DRYDRGYALDY SEQ ID NO.4
重链FR1氨基酸序列为：EVLLQQSGPELVKPGASVKIPCKASGYTFT SEQ ID NO.5
重链FR2氨基酸序列为：WVKQSHGKSLEWIG SEQ ID NO.6
重链FR3氨基酸序列为：KATLTIDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCAR SEQ ID NO.7
重链FR4氨基酸序列为：WGQGTSVTVSS SEQ ID NO.8
单克隆抗体4F6轻链氨基酸序列如下所示： DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQSLLNSSNQKNYLAWHQQKTGQSPKLLVYFASIRD SGVPDRFIGSGSGTDFTLTINSVQAEDLADYFCQQHYSTPFTFGSGTKLEIK SEQ ID NO.9
其中，轻链CDR1氨基酸序列为：KSSQSLLNSSNQKNYLA SEQ ID NO.10
轻链CDR2氨基酸序列为：FASIRDS SEQ ID NO.11
轻链CDR3氨基酸序列为：QQHYSTPFT SEQ ID NO.12
轻链FR1氨基酸序列为：DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMSC SEQ ID NO.13
轻链FR2氨基酸序列为：WHQQKTGQSPKLLVY SEQ ID NO.14
轻链FR3氨基酸序列为：GVPDRFIGSGSGTDFTLTINSVQAEDLADYFC SEQ ID NO.15
轻链FR4氨基酸序列为：FGSGTKLEIK SEQ ID NO.16
实施例3CD22单克隆抗体的亲和力测定
使用10μg/mL CD22蛋白与传感器进行固化结合，使用SD buffer(PBS+0.02％Tween 20+0.1％BSA)配制不同浓度的4F6抗体(500nM、250nM、125nM、62.5nM、31.25nM、10.41nM、5.21nM)作为流动相，使用分子间相互作用仪(OCTET K2，PALL life science) 进行亲和力检测，程序设定为：Baseline 240s，Loading 360s，Baseline2 180s，Association480s， Dissociation 480s，使用AHC(Anti-hIgG Fc Capture)传感器。结果如图1所示，4F6抗体与CD22 的亲和力KD＝3.14×10-9M。
1.实施例4CD22单克隆抗体的应用
4.1CD22单克隆抗体的流式检测应用
1)收集急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞，吹散计数，分装5个离心管，每管3×105个细胞，500g离心5min，去上清，分别加入1mL PBS，500g离心5min，去上清。
2)按下表加入试剂：
放入冰上，孵育，30min。
3)各加入1mL PBS+5％FBS，500g离心5min，去上清，各加入100μL DMEM培养液+1μLAPC goat anti-mouse lgG(minimal x-reactivity)antibody(biolegend)，冰上孵育20min。
4)各加入1mL PBS+5％FBS，500g离心5min，去上清。
5)每管加入300μL PBS+5％FBS，重悬，使用贝克曼流式细胞仪(Beckman CytoFLEXCM) 检测。
如图2所示，4F6抗体能与B-ALL细胞表面的CD22蛋白结合，应用于流式细胞检测，且检 测灵敏度优于商品化阳性对照。
4.2 CD22单克隆抗体的ELISA检测应用
酶标板每孔包被100ng CD22蛋白，4℃包被过夜，经封闭洗板后，加入的4F6 抗体，浓度为1μg/mL，每孔100μL，37度孵育1h。PBST洗板5次，加入1:5000稀 释的HRP-羊抗小鼠IgG抗体，37℃孵育45min。PBST洗板5次，每孔加入100μL TMB，室温避光反应3min，每孔加入50μL终止液终止，酶标仪测OD450。结果 显示4F6能用于ELISA检测应用。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳宾德生物技术有限公司
<120> 一种抗CD22的单克隆抗体4F6及其制备方法和用途
<130> CP121010746C
<160> 16
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Ile Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Tyr Asp Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Asp Tyr Asn Met Asp
1 5
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Asp Ile Asp Pro Asn Asn Gly Ile Thr Ile Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Asp Arg Tyr Asp Arg Gly Tyr Ala Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 5
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Glu Val Leu Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Pro Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 6
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 7
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Lys Ala Thr Leu Thr Ile Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 9
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Thr Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr Phe Ala Ser Ile Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列
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Phe Ala Ser Ile Arg Asp Ser
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Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
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<213> 人工序列
<400> 13
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Met Ser Val Gly
1 5 10 15
Gln Lys Val Thr Met Ser Cys
20
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Trp His Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Val Tyr
1 5 10 15
<210> 15
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asn Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10

Claims (13)

1.一种分离的抗CD22的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：其具有如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的三个重链互补决定区，并具有如SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:12所示的三个轻链互补决定区；
其中，重链互补决定区CDR1如SEQ ID NO:2所示；
重链互补决定区CDR2如SEQ ID NO:3所示；
重链互补决定区CDR3如SEQ ID NO:4所示；
轻链互补决定区CDR1如SEQ ID NO:10所示；
轻链互补决定区CDR2如SEQ ID NO:11所示；
轻链互补决定区CDR3如SEQ ID NO:12所示。
2.一种分离的抗CD22的抗体或其抗原结合片段，其特征在于：其具有如SEQ ID No:1所示的重链可变区，如SEQ ID No:9所示的轻链可变区。
3.一种核苷酸，其特征在于：其编码如权利要求1或2所述的抗CD22的抗体或其抗原结合片段。
4.一种重组载体，其特征在于：包含权利要求3所述的核苷酸序列。
5.一种宿主细胞，其特征在于：包含权利要求4所述的重组载体。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞是原核的或真核的。
7.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞选自酵母细胞、哺乳动物细胞或适用于制备抗体或其抗原结合片段的其它细胞。
8.一种试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段。
9.一种检测试剂，其特征在于：所述检测试剂包含如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的检测试剂，其特征在于：所述检测试剂用于酶联免疫吸附检测、免疫印迹、流式细胞术、免疫组织化学检测或者免疫PCR。
11.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段在制备检测CD22的试剂中的用途。
12.根据权利要求11所述的用途，所述试剂用于以下用途的试剂：酶联免疫吸附检测、免疫印迹、流式细胞术、免疫组织化学检测或者免疫PCR。
13.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段在制备体外分离或纯化CD22的试剂中的用途。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101626782A (zh) * 2006-12-01 2010-01-13 梅达雷克斯公司 结合cd22的人抗体及其用途
WO2021235696A1 (ko) * 2020-05-19 2021-11-25 주식회사 이노베이션바이오 Cd22에 특이적인 항체 및 이의 용도

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101626782A (zh) * 2006-12-01 2010-01-13 梅达雷克斯公司 结合cd22的人抗体及其用途
WO2021235696A1 (ko) * 2020-05-19 2021-11-25 주식회사 이노베이션바이오 Cd22에 특이적인 항체 및 이의 용도

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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抗CD22抗体治疗非霍奇金淋巴瘤的研究进展;路萍萍;孟志云;周明霞;王敏伟;窦桂芳;;中国实验血液学杂志(06);1258-1261 *

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