CN114555110A - 与免疫检查点抑制剂组合的免疫调节性il-2剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用组合疗法治疗患者中的癌症的组合物和方法，所述组合疗法包含SEQ ID NO：1的融合蛋白与免疫检查点抑制剂的组合。优选地，所述患者对先前或正在进行的免疫检查点抑制剂的治疗未能实现完全或部分响应。

Description

与免疫检查点抑制剂组合的免疫调节性IL-2剂

相关申请

本申请要求2019年10月18日提交的美国临时申请第62/916936号的权益，其全部公开内容在此通过引用并入本文。

背景技术

SEQ ID NO：1的融合蛋白是设计用于选择性结合中等亲和力白介素-2(IL-2)受体IL-2Rβγ的人白介素-2(IL-2)变体融合蛋白。SEQ ID NO：1的融合蛋白的选择性通过与IL-2受体的IL-2Rα链(CD25)融合的循环置换的(cp)IL-2的稳定融合来实现。

SEQ ID NO：1的融合蛋白作为治疗剂具有优于天然IL-2的优点，因为其选择性靶向和IL-2Rβγ的活化导致CD8+细胞和NK细胞亚群的选择性活化，这可驱动抗肿瘤免疫反应。SEQ ID NO：1的融合蛋白的施用对癌症患者是有益的，因为它降低调节T细胞如CD4+T细胞的免疫抑制作用，同时增加CD8+记忆T细胞，从而募集患者自身的免疫***以消除癌细胞。SEQ ID NO：1的融合蛋白在施用后也表现出持续的作用，从而进一步改善患者对治疗的响应。

免疫检查点蛋白调节免疫***中的T细胞功能。T细胞在细胞介导的免疫中起关键作用。检查点蛋白与将信号发送到T细胞中的特异性配体相互作用，并基本上切断或抑制T细胞功能。癌细胞通过驱动其表面上的检查点蛋白的高水平表达来利用此***，所述高水平表达导致在进入肿瘤微环境的调节性T细胞的表面上表达检查点蛋白的T细胞的控制，从而抑制抗癌免疫反应。因此，检查点蛋白的抑制将导致T细胞功能的恢复和对癌细胞的免疫反应。

免疫检查点蛋白的实例包括但不限于CTLA-4、PDL1(B7-H1、CD274)、PDL2(B7-DC、CD273)、PD1、B7-H3(CD276)、B7-H4(B7-S1、B7x、VCTN1)、BTLA(CD272)、HVEM、TIM3(HAVcr2)、GAL9、LAG3(CD223)、VISTA、KIR、2B4(CD244；属于CD2分子家族并在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CHK 1和CHK2激酶、OX40、A2aR和各种B-7家族配体。已经从美国食物和药物管理局得到加速批准的用于癌症的免疫检查点抑制剂包括伊匹木单抗

派姆单抗

阿特珠单抗

德瓦鲁单抗

阿维鲁单抗

和纳武单抗

是靶向T细胞表面上的CTLA-4的单克隆抗体，并且被批准用于治疗黑素瘤。

靶向PD-L1并用于治疗黑素瘤和非小细胞肺癌。

也靶向PD-1并被批准用于治疗黑素瘤、肾细胞癌和非小细胞肺癌。

尽管使用例如纳武单抗和派姆单抗的临床研究已经证明了抗肿瘤活性，并且确定了抗PD-1治疗在复发性转移性铂经历的HNSCC群体中的疗效、活性和益处，例如，响应率仍然低，并且复发或未实现完全响应的患者数目保持在85％或更高的大多数中。由于患有HNSCC的患者具有该疾病的极高发病率和死亡率，并且任何单一药剂化学治疗的疗效仍然低，并且在抗PD-1治疗失败的这一群体中没有经过证实的挽救选择，因此存在发现新疗法或有效联合免疫疗法以增强、改善或恢复对抗PD-1治疗的响应的格外高的未满足需求。

发明内容

本发明提供了通过向患者施用SEQ ID NO：1的融合蛋白和免疫检查点抑制剂如阻断受体/配体对如CTLA-4或PD-1的抑制剂的组合来治疗患者的癌症的组合物、方法和组合治疗方案。

优选地，本发明的方法包括：i)向患者施用治疗有效量的SEQ ID NO：1的融合蛋白；和ii)向该患者施用治疗有效量的免疫检查点抑制剂；其中步骤(i)可以在步骤(ii)之前、之后或与其同时进行，其中组合治疗方案治疗患者的癌症。优选地，如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定，患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全或部分响应；优选地。优选地，如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定的，其中患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全响应。优选地，其中免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。优选地，其中该免疫检查点抑制剂是派姆单抗。优选地，其中免疫检查点抑制剂是抗CTLA4抗体。优选地，其中所述免疫检查点抑制剂是伊匹木单抗。优选地，其中将SEQ ID NO：1的融合蛋白肠胃外施用于患者。优选地，其中SEQ ID NO：1的治疗有效量是约0.1μg/kg、0.3μg/kg、1μg/kg、3μg/kg、3.5μg/kg、4μg/kg、4.5μg/kg、5μg/kg、5.5μg/kg、6μg/kg、6.5μg/kg、7μg/kg、7.5μg/kg、8μg/kg、8.5μg/kg、9μg/kg、9.5μg/kg、10μg/kg、10.5μg/kg、11μg/kg、11.5μg/kg、12μg/kg、12.5μg/kg、13μg/kg、13.5μg/kg、14μg/kg或14.5μg/kg的SEQ ID NO：1的剂量。

优选地，本发明的方法还提供用于治疗患者的癌症的组合治疗方案，其包括：i)向所述患者施用治疗有效量的SEQ ID NO：1的融合蛋白的变体，其中所述变体具有在全长SEQID NO：1的约20％至100％的连续片段上与SEQ ID NO：1约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列；和ii)向该患者施用治疗有效量的免疫检查点抑制剂；其中步骤(i)在步骤(ii)之前、之后或与其同时进行。优选地，如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定的，患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全或部分响应。优选地，其中如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定，患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全响应。优选地，其中免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。优选地，其中该免疫检查点抑制剂是派姆单抗。优选地，其中免疫检查点抑制剂是抗CTLA4抗体。优选地，其中所述免疫检查点抑制剂是伊匹木单抗。优选地，其中将SEQ ID NO：1的融合蛋白肠胃外施用于患者。优选地，其中SEQ ID NO：1的治疗有效量是约0.1μg/kg、0.3μg/kg、1μg/kg、3μg/kg、3.5μg/kg、4μg/kg、4.5μg/kg、5μg/kg、5.5μg/kg、6μg/kg、6.5μg/kg、7μg/kg、7.5μg/kg、8μg/kg、8.5μg/kg、9μg/kg、9.5μg/kg、10μg/kg、10.5μg/kg、11μg/kg、11.5μg/kg、12μg/kg、12.5μg/kg、13μg/kg、13.5μg/kg、14μg/kg或14.5μg/kg的SEQ ID NO：1的剂量。

在另一方面，本公开提供治疗有需要的患者中的癌症的方法，所述方法包括：

i)向所述患者施用治疗有效量的SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体；以及

ii)向该患者施用治疗有效量的免疫检查点抑制剂；

其中步骤(i)在步骤(ii)之前、之后或与其同时进行，

其中该患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全或部分响应，且

其中所述变体融合蛋白与全长SEQ ID NO：1至少80％相同。

在一个实施方案中，如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定的，患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全或部分响应。

在一个实施方案中，如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定的，患者先前未能实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全响应。

在一个实施方案中，该免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。在一个实施方案中，该免疫检查点抑制剂是派姆单抗。

在一个实施方案中，该免疫检查点抑制剂是抗CTLA4抗体。在一个实施例中，该免疫检查点抑制剂是伊匹木单抗。

在一个实施方案中，将SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体肠胃外施用于患者。在一个实施方案中，将SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体静脉内施用于患者。在一个实施方案中，将SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体皮下施用于患者。

在一个实施方案中，SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体的治疗有效量是约0.1μg/kg、0.3μg/kg、1μg/kg、3μg/kg、3.5μg/kg、4μg/kg、4.5μg/kg、5μg/kg、5.5μg/kg、6μg/kg、6.5μg/kg、7μg/kg、7.5μg/kg、8μg/kg、8.5μg/kg、9μg/kg、9.5μg/kg、10μg/kg、10.5μg/kg、11μg/kg、11.5μg/kg、12μg/kg、12.5μg/kg、13μg/kg、13.5μg/kg、14μg/kg或14.5μg/kg的SEQ IDNO：1的融合蛋白或其变体的剂量。

在一个实施方案中，以约3μg/kg的剂量向患者施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。在一个实施方案中，以约3μg/kg的剂量向患者静脉内施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

在一个实施方案中，连续5天每天向患者施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

在一个实施方案中，以约0.3mg、约0.6mg、约1mg、约3mg或约10mg的剂量向患者施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。在一个实施方案中，以约0.3mg、约0.6mg、约1mg、约3mg或约10mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

在一个实施方案中，每周一次、每两周一次或每三周一次向患者施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

在一个实施方案中，以200mg的剂量向患者施用派姆单抗。在一个实施方案中，以200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗。在一个实施方案中，每三周一次向患者施用派姆单抗。

在一个实施方案中，每三周连续五天每天以约3μg/kg的剂量向患者静脉内施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并且其中每三周一次以约200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗。

在一个实施方案中，每周一次以约0.3mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗，其中在施用派姆单抗之前，每周一次以约0.3mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体作为单一疗法，持续6周。

在一个实施方案中，每周一次以约0.6mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗，其中在施用派姆单抗之前，每周一次以约0.6mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体作为单一疗法，持续6周。

在一个实施方案中，每周一次以约1mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗，其中在施用派姆单抗之前，每周一次以约1mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体作为单一疗法，持续6周。

在一个实施方案中，每周一次以约3mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗，其中在施用派姆单抗之前，每周一次以约3mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体作为单一疗法，持续6周。

在一个实施方案中，每三周一次以约1mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量对患者静脉内施用派姆单抗，其中在施用派姆单抗之前，每三周一次以约1mg的剂量对患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体作为单一疗法，持续6周。

在一个实施方案中，每三周一次以约3mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗，其中在施用派姆单抗之前，每三周一次以约3mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体作为单一疗法，持续6周。

在一个实施方案中，每三周一次以约10mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向患者静脉内施用派姆单抗，其中在施用派姆单抗之前，每三周一次以约10mg的剂量向患者皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体作为单一疗法，持续6周。

在一个实施方案中，患者在先前的免疫检查点抑制剂治疗之后未实现完全缓解(CR)。

在一个实施方案中，患者在先前的免疫检查点抑制剂治疗之后具有稳定病情(SD)或部分响应(PR)而没有肿瘤大小的进一步减小或进一步响应。

在一个实施方案中，先前的免疫检查点抑制剂治疗包含抗PD-1治疗、抗PD-L1治疗和抗CTLA-4治疗中的一种或多种。

在一个实施方案中，所述方法导致患者中的一个或多个以下结果：相对于接受SEQID NO：1的融合蛋白或免疫检查点抑制剂作为单一疗法的患者，响应持续时间(DOR)增加；无进展存活期(PFS)增加；进展时间(TTP)增加；和总体存活期(OS)增加。

在一个实施方案中，癌症选自头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、结肠直肠癌、黑素瘤和乳腺癌。

附图说明

图1A和1B示出SEQ ID NO：1的融合蛋白(图1A)及其选择性结合的中等亲和力IL-2受体(图1B)的结构模型的图解。图1A和1B中的结构模型使用实验测定的与三聚体高亲和力受体结合的人IL2的四元复合物的晶体结构产生的(Wang等人，Science.2005；310(5751):1159-1163.doi:10.1126/science.1117893)。

图2是实施例1中描述的研究的研究设计示意图。对于派姆单抗方案：200mg，Q3W一次，通过IV输注。对于SEQ ID NO：1的融合蛋白方案：在每个3周治疗周期的第一周的第1天至第5天连续5天每天施用3μg/kg。缩写：CR＝完全响应；HNSCC＝头颈部鳞状细胞癌；PD-(L)1＝程序性细胞死亡配体-1；PR＝部分响应；SD＝稳定病情；Q3W＝每三周。

图3是实施例1中描述的研究的研究设计示意图。缩写：IV＝静脉内；Q3W＝每三周。

图4A-4C描述了施用SEQ ID NO：1的融合蛋白之前和之后淋巴细胞肿瘤浸润标志物的免疫荧光染色。在图4A中，CD3和CD8被染成交替颜色，并且观察到CD3和CD8之间的重叠。在图4B中，CD8和粒酶B被染成交替颜色，并且观察到CD8和粒酶B之间的重叠。在图4C中，PD-L1和肿瘤标志物被染成交替颜色，并观察到重叠。使用肿瘤标志物染色来描绘每一组中的肿瘤细胞。

图5A和5B图示描绘了接受以下方案的MC38结肠直肠肿瘤模型小鼠的平均肿瘤体积(图5A)和存活率(图5B)：SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗PD-1抗体的组合；单独的SEQ IDNO：2的融合蛋白；单独的抗PD-1抗体；或媒介物对照。

图6A和6B图示描绘了接受以下方案的MC38结肠直肠肿瘤模型小鼠的平均肿瘤体积(图6A)和存活率(图6B)：SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗CTLA-4抗体的组合；单独的SEQ IDNO：2的融合蛋白；单独的抗CTLA-4抗体；或媒介物对照。

图7A和7B图示描绘了接受以下方案的B16F10黑色素瘤模型小鼠的平均肿瘤体积(图7A)和存活率(图7B)：SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗CTLA-4抗体的组合；单独的SEQ IDNO：2的融合蛋白；单独的抗CTLA-4抗体；或媒介物对照。

图8A和8B图示描绘了接受以下方案的EMT-6乳腺肿瘤模型小鼠的平均肿瘤体积(图8A)和存活率(图8B)：SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗PD-1抗体的组合；单独的SEQ ID NO：2的融合蛋白；单独的抗PD-1抗体；或媒介物对照。

图9A和9B图示描绘了接受以下方案的EMT-6乳腺肿瘤模型小鼠的平均肿瘤体积(图9A)和存活率(图9B)：SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗CTLA-4抗体的组合；单独的SEQ IDNO：2的融合蛋白；单独的抗CTLA-4抗体；或媒介物对照。

具体实施方式

定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管在本发明的实践或测试中也可以使用与本文所述类似或等同的任何方法和材料，但现在描述优选的方法和材料。

如在说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”，“一个”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另外清楚地指明。因此，例如，“一个载体”包括多个载体。在本说明书和随后的权利要求书中，将参考许多术语，这些术语应被定义为具有以下含义，除非相反的意图是明显的。还应当注意，术语“包含”旨在是开放式的，并且允许但不要求包括附加的元素或步骤。当本文使用术语“包含”时，术语“由……组成”从而也被涵盖和公开。

应注意，比率、浓度、量和其它数字数据在本文中可以范围形式表达。应当理解，这样的范围形式是为了方便和简洁而使用的，并且因此，应当以灵活的方式解释为不仅包括作为范围界限而明确列举的数值，而且包括该范围内涵盖的所有单个数值或子范围，如同每个数值和子范围被明确列举一样。为了说明，“约0.1％至约5％”的浓度范围应解释为不仅包括明确列举的约0.1重量％至约5重量％的浓度，而且还包括所示范围内的单个浓度(例如1％、2％、3％和4％)和子范围(例如0.5％、1.1％、2.2％、3.3％和4.4％)。术语“约”可包括±1％、±2％、±3％、±4％、±5％、±6％、±7％、±8％、±9％或±10％或更多的被修饰的数值。此外，短语“约'x'至'y'”包括“约'x'至约'y'”。

本文所用的术语“蛋白质”或“肽”是指通过肽键连接在一起的至少两个或更多个氨基酸残基。蛋白质或肽中的氨基酸序列以标准形式显示，即从氨基末端(N-末端)到羧基末端(C-末端)。

术语“融合蛋白”是指通过它们各自的N-和C-末端氨基酸残基之间的肽键或反之亦然与另一蛋白或肽连接在一起的蛋白或肽，或通过在***的蛋白或肽的N-和C-末端的两个肽键将第一蛋白或肽***第二蛋白或肽的内部区域中。肽键是在一个氨基酸的羧基和另一个氨基酸的胺基之间形成的共价化学键。通过在表达宿主中表达融合蛋白基因产生融合蛋白，其中第一蛋白或肽的编码序列与第二蛋白或肽的编码序列连接。

本发明还包括使用SEQ ID NO：1的融合蛋白的“变体”，其氨基酸序列与SEQ IDNO：1融合蛋白全长的约20个氨基酸的连续片段具有约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。与SEQ ID NO：1的融合蛋白相比，SEQ ID NO：1的融合蛋白的变体在限定长度的连续氨基酸(例如，“比较窗口”)上可具有限定的序列同一性。用于比较的序列比对方法是本领域公知的。用于比较的序列的最佳比对可以例如通过Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源算法，通过Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)的同源比对算法，通过Pearson和Lipman,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA85:2444(1988)的相似性搜索方法，通过这些算法的计算机化实现(Wisconsin Genetics Software Package,Madison,Wis.中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或通过人工比对和视觉检查(参见例如Current Protocols in MolecularBiology(Ausubel et al.,eds.1995supplement))进行。

“SEQ ID NO：1的融合蛋白”在本文中也称为"cpIL-2：IL-2Rα"并描述于PCT申请公开号WO2013/184942中。SEQ ID NO：1的融合蛋白是与IL-2受体的IL-2Rα部分的细胞外结构域融合的环状排列的(cp)IL-2变体并且具有以下氨基酸序列：

SKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLTGGSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTG(SEQ ID NO:1)。

本发明还涉及SEQ ID NO：1的融合蛋白的变体的用途，所述变体具有与SEQ IDNO：1的融合蛋白的约20个氨基酸至全长的连续片段具有约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性的氨基酸序列。与SEQID NO：1的融合蛋白相比，SEQ ID NO：1的融合蛋白的变体在限定长度的连续氨基酸(例如，“比较窗口”)上可具有限定的序列同一性。用于比较的序列比对方法是本领域公知的。用于比较的序列比对方法是本领域公知的。用于比较的序列的最佳比对可以例如通过Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2:482(1981)的局部同源算法，通过Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.48:443(1970)的同源比对算法，通过Pearson和Lipman,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 85:2444(1988)的相似性搜索方法，通过这些算法的计算机化实现(Wisconsin Genetics Software Package,Madison,Wis.中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或通过人工比对和视觉检查(参见例如Current Protocols in MolecularBiology(Ausubel et al.,eds.1995supplement))进行。

作为实例，SEQ ID NO：1的融合蛋白的变体可包含与SEQ ID NO：1的融合蛋白的连续片段具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约98％或至少约99％的氨基酸序列同一性的氨基酸序列，所述连续片段为约20个氨基酸至约40个氨基酸、约40个氨基酸至约60个氨基酸、约60个氨基酸至约80个氨基酸、约80个氨基酸至约100个氨基酸、约100个氨基酸至约120个氨基酸、约120个氨基酸至约140个氨基酸、约140个氨基酸至约150个氨基酸、约150个氨基酸至约155个氨基酸、约155个氨基酸至SEQ ID NO：1的融合蛋白的全长。

“SEQ ID NO：2的融合蛋白”在本文中也称为“鼠cpIL-2：IL-2Rα”且描述于US16/897920中。SEQ ID NO：2的融合蛋白是SEQ ID NO：1的融合蛋白的鼠直向同源物并且具有以下氨基酸序列：SKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESATVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGSSSTQQQQQHLEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDELGPLRHVLDLTQGSGGGSELCLYDPPEVPNATFKALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNSHDKSRKQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPWKHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQPQLTCVDGSHHHHHH(SEQ ID NO:2)。

SEQ ID NO：2的融合蛋白的C-末端的His-标签用于纯化，并且可以存在于表达的蛋白中或任选地可以被除去。

术语“IL-2治疗”包括施用基于IL-2及其相关生物功能的免疫治疗作为免疫治疗，包括但不限于维持CD4⁺调节性T细胞和将CD4⁺T细胞分化为多种亚群；促进CD8⁺T细胞和NK细胞细胞毒性活性，以及调节响应于抗原的T细胞分化程序，从而促进原始CD4⁺T细胞分化成T辅助-1(Th1)和T辅助-2(Th2)细胞，同时抑制T辅助-17(Th17)分化。因此，本文所用的“IL-2治疗”包括但不限于rhIL-2或rhIL-2的变体如SEQ ID NO：1的融合蛋白的免疫治疗。

术语“高剂量IL-2”和“HD IL-2”包括约或至少约600,000国际单位(IU)/kg体重(kg)/剂的白介素-2(IL-2)剂量，或约或至少约720,000IU/kg/剂的白介素-2(IL-2)的剂量。

术语“低剂量IL-2”和“LD IL-2”包括小于约600,000IU/kg体重/剂的白介素-2(IL-2)剂量，例如约60,000或约72,000IU/kg/剂，例如约60,000至约72,000IU/kg/剂。

如本文所用，术语“受试者”或“患者”是指可以例如用于实验、诊断、预防和/或治疗目的施用根据本公开的组合物的任何生物体。典型的受试者包括动物(例如，哺乳动物如小鼠、大鼠、兔、非人灵长类和人)和/或植物。优选地，“患者”是指可能寻求或需要治疗、要求治疗、正在接受治疗、将接受治疗的人类受试者，或由接受受过训练的专业人员护理特定疾病或病症的受试者。

本文所用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适用于与人类和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的益处/风险比率相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

术语“药学上可接受的赋形剂”是指与本公开的化合物一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。药学上可接受的赋形剂通常是无毒的、生物学上可耐受的并且在生物学上适于向受试者施用的物质，如惰性物质，其被添加到药理组合物中或以其他方式用作媒介物、载体或稀释剂以促进药剂的施用并与其相容。赋形剂的实例包括水、任何和所有溶剂、分散介质、稀释剂或其它液体媒介物、分散或悬浮助剂、表面活性试剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等，其适合于所需的特定剂型。Remington's TheScience and Practice of Pharmacy,21^st Edition,A.R.Gennaro(Lippincott,Williams和Wilkins,Baltimore,Md.,2006；通过引用并入本文)公开了用于配制药物组合物的各种赋形剂及已知的其制备技术。除非任何常规赋形剂介质与物质或其衍生物不相容，如通过产生任何不期望的生物效应或另外以有害方式与药物组合物的任何其它组分相互作用，否则其用途预期在本公开的范围内。

如本文所用，术语“预防”是指部分或完全延迟感染、疾病、紊乱和/或病症的发作；部分或完全延迟特定感染、疾病、紊乱和/或病症的一种或多种症状、特征或临床表现的发作；部分或完全延迟特定感染、疾病、紊乱和/或病症的一种或多种症状、特征或表现的发作；部分或完全延迟感染、特定疾病、紊乱和/或病症的进展；和/或降低发展与感染、疾病、紊乱和/或病症相关的病理学的风险。

术语“重组DNA技术”是指操纵两个或多个DNA序列和将其组合在一起的技术，包括重组、PCR(聚合酶链式反应)、体外诱变和直接DNA合成。这些技术描述于许多出版的书籍和手册中，包括“Current protocols in molecular biology”(Ausubel编辑，2008，Johnwiley和Son)。

如本文所用，“组合”、“组合疗法”和/或“组合治疗方案”的任何施用形式或共同施用形式是指至少两种治疗活性药物或组合物，其可以以单独的或组合的制剂同时地施用或共同施用，或在由数分钟、数小时或数天分开的不同时间顺序地施用或共同施用，但以某种方式一起作用以提供所需治疗反应。

如本文所用，术语“肠胃外”是指旨在作为注射或输注施用的剂型，并且包括皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、心内、鞘内和肌内注射，以及通常通过静脉内途径的输注注射。

术语“治疗剂”包括施用以治疗需要这种治疗的个体的症状或疾病的任何药剂。这样的另外的治疗剂可以包含适合于所治疗的特定适应症的任何活性成分，优选具有彼此没有不利影响的互补活性的那些。优选地，另外的治疗剂是抗炎剂。

术语“化疗剂”是指可以与癌细胞相互作用的化合物或其衍生物，从而例如通过削弱细胞***或DNA合成，或通过破坏DNA，，有效地靶向快速***的细胞而降低细胞的增殖状态和/或杀伤细胞。化疗剂的实例包括但不限于烷化剂(例如环磷酰胺、异环磷酰胺)；代谢拮抗剂(例如甲氨蝶呤(MTX)、5-氟尿嘧啶或其衍生物)；取代的核苷酸；取代的核苷；DNA去甲基化剂(也称为抗代谢物；例如，阿扎胞苷)；抗肿瘤抗生素(例如丝裂霉素、阿霉素)；植物来源的抗肿瘤剂(例如长春新碱、长春地辛、

紫杉醇、abraxane)；顺铂；卡铂；依托泊苷；等等。这样的药剂可以进一步包括但不限于抗癌剂甲氨蝶呤(TMTX)；替莫唑胺；雷替曲塞；S-(4-硝基苄基)-6-硫代肌苷(NBMPR)；6-苄基胍(6-BG)；亚硝基脲(吡喃***糖基-N-甲基-N-亚硝基脲)(Aranose)、卡莫司汀(BCNU,BiCNU)、氯脲霉素、乙基亚硝基脲(ENU)、福莫司汀、洛莫司汀(CCNU)、尼莫司汀、N-亚硝基-N-甲基脲(NMU)、雷莫司汀(MCNU)、司莫司汀，链脲菌素(链脲佐菌素)；阿糖胞苷；和喜树碱；或其任何治疗性衍生物。

如本文所用的术语疾病(或病症或紊乱)的“治疗(treating)”或“疗法(treatment)”是指防止疾病在可能易患疾病但尚未经历或展现疾病的症状的人类受试者或动物受试者中发生(预防性治疗)、抑制疾病(减缓或阻止其发展)、提供疾病症状或副作用的缓解(包括姑息治疗)，以及引起疾病的消退。关于癌症，这些术语还指受癌症影响的个体的预期寿命可能增加或疾病的一种或多种症状将减少。关于癌症，“治疗”还包括增强或延长受试者中的抗肿瘤反应。

短语“治疗有效量”或“有效量”是指当施用于受试者时以能够对疾病、紊乱或病症的任何症状、方面或特征具有任何可检测的积极作用的量，单独或作为药物组合物的一部分并且以单剂量或作为一系列剂量的一部分施用于受试者。治疗有效量可以通过测量相关生理效应来确定，并且可以结合给药方案和受试者的病症的诊断分析等来调节。例如，施用后产生的炎性细胞因子的量的测量可以指示是否已经使用治疗有效量。关于与不受调节的细胞***相关的癌症或病状，治疗有效量是指具有以下作用的量：(1)减小肿瘤大小(即，肿瘤消退)，(2)抑制(即，在一定程度上减缓，优选地停止)异常细胞***，例如癌细胞***，(3)防止或减少癌细胞转移，和/或(4)在一定程度上缓解(或优选地消除)与部分地由不受调节或异常的细胞***相关或引起的病状(包括例如癌症)相关的一种或多种症状。“有效量”也是在施用本发明的治疗活性组合物时产生期望的PD和PK特征和期望的免疫细胞谱型的量。

如本文所用，术语“预防”是指部分或完全延迟感染、疾病、紊乱和/或病症的发作；部分或完全延迟特定感染、疾病、紊乱和/或病症的一种或多种症状、特征或临床表现的发作；部分或完全延迟特定感染、疾病、紊乱和/或病症的一种或多种症状、特征或表现的发作；部分或完全延迟感染、特定疾病、紊乱和/或病症的进展；和/或降低发展与感染、疾病、紊乱和/或病症相关的病理学的风险。

术语RECIST代表实体瘤响应评价标准，是由国际机构(例如欧洲癌症研究和治疗组织(EORTC)，美国国家癌症研究所(NCI)和加拿大国家癌症研究所)协作建立和公布的一组规则，其定义癌症患者在治疗期间何时改善(“响应”)，保持相同(“稳定”)或恶化(“进展”)。

术语iRECIST是由国际机构公布的一组规则，其更好地提供对免疫治疗剂的作用的评估。

如本文所述的癌症的上下文中所用的“无进展存活期(PFS)”是指在癌症治疗期间和之后直到患者的客观肿瘤进展或死亡的时间长度。治疗可通过客观或主观参数评估；包括身体检查、神经学检查或精神病学评估的结果。在优选的方面，PFS可以通过盲态成像中心审查进行评价，并且可以进一步任选地通过ORR或盲态独立中心审查(BICR)进行确认。

“总体存活期(OS)”可以通过Kaplan-Meier方法在某些时间点(例如，1年和2年)通过OS率进行评估，并且对应的95％CI将基于Greenwood公式通过研究治疗针对每种肿瘤类型得到。OS率定义为在该时间点存活的参与者的比例。参与者的OS定义为从首次给药日期至因任何原因死亡的日期的时间。

如本文所用，“完全响应”(CR)是响应于治疗的癌症所有体征的消失。完全响应在本文中也可称为“总体缓解”或“完全缓解”。

本文所用的术语“部分响应”是指响应于治疗的肿瘤大小的减小，或体内癌症程度的减小。部分响应在本文中也可称为“部分缓解”。

本文所用的术语“癌症”应被赋予其普通含义，作为其中异常细胞***不受控制的疾病的通用术语。

如本文所用的术语“减少肿瘤”或“肿瘤消退”是指减小肿瘤块的大小或体积、减少受试者中转移的肿瘤的数目、降低癌细胞的增殖状态(癌细胞增殖的程度)等。

本文所用的术语“增强”是指允许受试者或肿瘤细胞改善其响应于本文公开的治疗的能力。例如，增强的响应可以包括至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％或更高的响应性的增加。如本文所用，“增强”还可以指增强对治疗(例如包含化学治疗、抗药性免疫活性细胞和免疫检查点抑制剂的组合疗法)有响应的受试者的数目。例如，增强的响应可以指对治疗有响应的受试者的总百分比，其中该百分比为至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或98％或更多。

“免疫检查点蛋白”调节免疫***中的T细胞功能。T细胞在细胞介导的免疫中起重要作用。检查点蛋白与将信号发送到T细胞中的特异性配体相互作用，且基本上切断或抑制T细胞功能。癌细胞通过驱动其表面上的检查点蛋白的高水平表达利用该***，其导致控制进入肿瘤微环境的T细胞表面上表达检查点蛋白的T细胞，从而抑制抗癌免疫反应。因此，本文称为“(免疫)检查点抑制剂”或“检查点抑制剂”的药剂对免疫检查点蛋白的抑制将导致T细胞功能的恢复和对癌细胞的免疫反应。检查点蛋白的实例包括但不限于：CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、A2aR、OX40、B-7家族配体或其组合。优选地，免疫检查点抑制剂与检查点蛋白的配体相互作用，所述检查点蛋白可以是CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK1、CHK2、OX40、A2aR、B-7家族配体或其组合。

SEQ ID NO：1的融合蛋白

WO WO2013/184942中描述的重组人IL-2变体融合蛋白是与IL-2受体的IL-2Rα部分的细胞外结构域融合的环状排列的(cp)IL-2变体(图1)，并且在本文中称为“SEQ ID NO：1的融合蛋白”或具有以下氨基酸序列：

SKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFSQSIISTLTGGSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTG(SEQ ID NO:1)。

预期与SEQ ID NO：1的融合蛋白密切相关的融合蛋白，例如与SEQ ID NO：1的融合蛋白的至少约20个氨基酸直至全长的连续序列具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列同一性的那些融合蛋白也可适于根据本发明的方法施用。

SEQ ID NO：1的融合蛋白(图1A)被设计成选择性地结合并活化中等亲和力IL2R(图1B)而非高亲和力IL2R(图1B)。SEQ ID NO：1的融合蛋白的IL2Rα结构域用于空间阻碍SEQ ID NO：1的融合蛋白与高亲和力IL2R的结合，但仍允许与中间亲和力IL2R的结合。

体外和体内非临床药效学(PD)数据支持SEQ ID NO：1的融合蛋白通过中等亲和力IL2受体的选择性信号传导，导致效应细胞如NK细胞和CD8+细胞的活化和扩增，同时使免疫抑制性T_regs的活化和扩增最小化。另外，在小鼠体内，SEQ ID NO：1的融合蛋白的小鼠替代物在引起效应细胞(例如NK细胞和CD8+细胞)相对于T_regs的等同或更大扩增的剂量下相对于rhIL2显示改善的耐受性。

在共同未决美国专利申请第62/860182号中描述的人类临床数据中首先表明，SEQID NO：1的融合蛋白以剂量依赖性方式活化CD8+细胞和NK细胞的扩增，具有最小的、非剂量依赖性的Treg活化。因此，SEQ ID NO:1的融合蛋白可在人类患者中以与高剂量rhIL-2(例如，阿地白介素)相当的浓度给药，与例如高剂量rhIL-2(例如，阿地白介素)相比诱导NK细胞和CD8+细胞的等同或更大的扩增，但与高剂量rhIL-2相比，免疫抑制性Treg的相对扩增要小得多(至少少两倍)(表2)。

与免疫检查点抑制剂的组合疗法

复发性和转移性疾病，包括但不限于包含实体瘤的癌症，例如头颈部鳞状细胞癌(HNCC)、肾细胞癌(RCC)、肝细胞癌(HCC)、非小细胞肺癌(NBCLC)和小细胞肺癌(SCLC)，通常是难治的或不能用进一步的手术和/或放射疗法治疗。在许多类型的癌症中，晚期疾病的5年存活率估计为50％或更低。例如，转移性和复发性HNSCC，其不再适于局部手术/放射疗法，与高死亡率和6至9个月的中位存活期相关。使用基于铂的疗法与5FU和西妥昔单抗组合的一线疗法提供一些减轻和疗效，但也提供高治疗相关的毒性。对于一线治疗后具有疾病进展的患者，或铂不耐受或铂难治的患者，抗程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)抗体，纳武单抗和派姆单抗，已证明显著的缓解益处，并注意到持续的肿瘤消退。

派姆单抗指示用于治疗在含铂化疗时或之后具有疾病进展的患有复发性或转移性实体瘤患者，并且该疗法被视为标准护理。基于对174名含铂化疗难治的复发性或转移性HNSCC患者进行的非随机研究中的总响应率(ORR)为16％(95％置信区间[CI]：11,22)和完全响应率为5％，派姆单抗在2017年获得加速批准。患者每2周接受派姆单抗10mg/kg(Q2W；n＝53)或现在的每3周200mg标准方案(Q3W；n＝121)(Keytruda USPI)。在28名响应患者中，未达到中位响应持续时间(DOR)(范围2.4+至27.7+个月)，且无论剂量方案(10mg/kg Q2W或200mg Q3W)或人类***瘤病毒(HPV)状态(Keytruda USPI)如何，ORR和DOR都是相似的。随后，在177名铂和西妥昔单抗预治疗的HNSCC患者的单组研究中证明了派姆单抗的疗效，这些患者的ORR为16％(95％CI：11，23)，中位DOR为8个月(范围2+至12+个月)。在铂预治疗的HNSCC患者中进行的开放标签随机3期研究(Keynote 040)证实，与研究者选择的治疗相比，派姆单抗险些未能改善总体存活期(OS)的主要终点；派姆单抗组中研究的ORR为14.6％，而活性对照组为10.1％(风险比0.81，单侧P＝0.0204)。除了面部水肿发生率升高(所有等级10％；3-4级2.1％)和新发或恶化的甲状腺功能减退(14.6％)外，HNSCC患者发生的不良反应一般与患有黑素瘤或非小细胞肺癌(NSCLC)的患者发生的不良反应相似。

SEQ ID NO：1的融合蛋白是由设计为选择性地活化中等亲和力IL-2R，但不活化高亲和力IL-2R的环状排列的白介素(IL)-2和IL-2受体(R；IL-2R)-α组成的工程化融合蛋白。中等亲和力IL-2R主要在效应淋巴细胞上表达，其在驱动抗肿瘤免疫反应中起重要作用。相反，IL-2(例如重组人IL-1)优先活化高亲和力IL-2R，驱动表达高亲和力IL-2R的细胞类型(包括免疫抑制性CD4⁺调节性T细胞(T_regs))的扩增，这限制了通过重组人IL-2(阿地白介素)的抗癌活性。

SEQ ID NO：1的融合蛋白是IL-2Rβ和共同γ链的激动剂，这两条链构成中等亲和力IL-2R。这是由IL-15：IL-15Rα刺激的相同受体复合物。因此，SEQ ID NO：1的融合蛋白以类似于IL-15的方式起作用，因为它优先于其它类别的T细胞和淋巴细胞活化和扩增CD8⁺T细胞和自然杀伤(NK)细胞。在早期临床数据中，SEQ ID NO：1的融合蛋白和IL-15二者作为T细胞生长因子起作用，二者活化并诱导T细胞和NK细胞的扩增。PD-1阻断抗体“释放”T细胞，包括可识别和杀死肿瘤细胞的T细胞。理论上，T细胞生长因子与“释放”T细胞的试剂的组合在具有能够识别和杀死癌细胞的T细胞的患者中应该是协同的。据信，先前用免疫检查点抑制剂如抗PD-1疗法(例如派姆单抗或纳武单抗)治疗的未实现完全缓解(CR)的癌症患者可通过添加SEQ ID NO：1的融合蛋白与抗PD-1抗体治疗(例如派姆单抗或纳武单抗)组合来实现部分或完全肿瘤响应。

因此，本发明提供了用于在有需要的患者中治疗癌症的组合治疗方案的方法。本发明的方法包括：i)向所述患者施用治疗有效量的SEQ ID NO：1的融合蛋白；和ii)向该患者施用治疗有效量的免疫检查点抑制剂；其中步骤(i)在步骤(ii)之前、之后或与其同时进行。

本发明还提供了用于治疗患者的癌症的组合治疗方案，其包括：i)向患者施用治疗有效量的SEQ ID NO：1的融合蛋白的变体，其中所述变体在SEQ ID NO：1的融合蛋白的约20个氨基酸直至全长的连续序列上与SEQ ID NO：1的融合蛋白具有约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；和ii)向该患者施用治疗有效量的免疫检查点抑制剂；其中步骤(i)在步骤(ii)之前、之后或与其同时进行。

关于施用步骤(i)和(ii)，这些施用步骤可以以任一顺序(以及同时)进行，并且本发明在这方面不受限制。施用步骤(i)可以在施用步骤(ii)之前进行。施用步骤(ii)可以在施用步骤(i)之前进行。施用步骤(i)和(ii)可以同时进行。施用步骤(i)和/或(ii)可以重复进行。施用步骤(i)和(ii)可以仅进行一次。

优选地，本发明的组合疗法用于治疗针对单独使用免疫检查点抑制剂或与如本文所述的其他互补抗癌治疗剂组合的先前治疗或正在进行的治疗未实现完全缓解或部分缓解的患者的癌症。如本文使用的，用免疫检查点抑制剂治疗未实现完全缓解或部分缓解的患者与根据RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准未实现完全缓解或部分缓解的受试者有关。优选地，患者未实现对单独使用免疫检查点抑制剂或与互补抗癌治疗剂组合的先前或正在进行的治疗的完全缓解。

优选地，本发明的组合疗法治疗受试者中的癌症，其中用免疫检查点蛋白抑制剂的单一疗法或用SEQ ID NO：1的融合蛋白的单一疗法不能实现患者的完全缓解或部分缓解。

优选地，本发明的组合疗法在比使用单独的免疫检查点抑制剂或单独的SEQ IDNO：1的融合蛋白的治疗所实现的更短的时间框架内提供患者中癌症的完全缓解。

优选地，SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体的有效量是有效引起例如患者中循环NK细胞和CD8+细胞的剂量依赖性增加以及循环调节性T(Treg)细胞的最小、非剂量依赖性增加的量。优选地，在施用SEQ ID NO：1的融合蛋白的患者中，循环NK细胞和CD8+细胞的增加相对于循环调节性T(Treg)的增加更大。

本领域技术人员可以使用标准测定确定有效量，如对用SEQ ID NO：1的融合蛋白作为单一疗法或在与如本文实施例中所述的免疫检查点抑制剂的组合疗法中处理的细胞或组织的FACS分析。

通常，使用SEQ ID NO：1的融合蛋白的单一疗法或本文所述的任何组合疗法的给药参数规定剂量小于可能对受试者具有不可逆毒性的量(即，最大耐受剂量，“MTD”)且不小于对受试者产生可测量作用所需的量。这样的量通过例如与ADME相关的药代动力学和药效学参数，考虑施用途径和其它因素来确定。

有效剂量(ED)是在服用药剂的受试者的某一部分中产生治疗响应或所需效果的药剂的剂量或量。药剂的“中位有效剂量”或ED50是在其所施用的群体的50％中产生治疗响应或所需作用的药剂的剂量或量。尽管ED50通常用作药剂效果的合理预期的量度，但考虑到所有相关因素，其不一定是临床医生认为合适的剂量。因此，在一些情况下，有效量可以大于计算的ED50，在其他情况下，有效量可以小于计算的ED50，并且在另外的其他情况下，有效量可以与计算的ED50相同。

此外，SEQ ID NO：1的融合蛋白的有效剂量可以是当以一个或多个剂量施用于受试者时相对于健康受试者产生期望结果的量。例如，对于经历特定病症的受试者，有效剂量可以是将该病症的诊断参数、量度、标志物等改善至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或超过90％的剂量，其中100％定义为正常受试者表现出的诊断参数、量度、标志物等。

本发明提供了包含在“单位剂型”中的剂量。短语“单位剂型”是指物理上离散的单位，每个单位含有预定量的单独的或与一种或多种免疫检查点抑制剂和任选地足以产生所需作用的一种或多种另外的治疗剂组合的SEQ ID NO：1的融合蛋白。应当理解，单位剂型的参数将取决于具体的药剂和要达到的效果。

优选地，SEQ ID NO：1的融合蛋白的有效量是向患者施用包括在一个或多个以下范围内的量：约0.01至1mg/kg；约0.01mg/kg至约0.1mg/kg；约1mg/kg至约1000mg/kg；约2mg/kg至约900mg/kg；约3mg/kg至约800mg/kg；约4mg/kg至约700mg/kg；约5mg/kg至约600mg/kg；约6mg/kg至约550mg/kg；约7mg/kg至约500mg/kg；约8mg/kg至约450mg/kg；约9mg/kg至约400mg/kg；约5mg/kg至约200mg/kg；约2mg/kg至约150mg/kg；约5mg/kg至约100mg/kg；约10mg/kg至约100mg/kg；以及约10mg/kg至约60mg/kg。

优选地，本发明提供用于皮下施用的药物组合物，其包含固定剂量的SEQ ID NO：1的融合蛋白，所述固定剂量为至少约0.3mg、1mg、1.5mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、4.5mg、5mg、5.5mg、6mg、6.5mg、7mg、7.5mg、8mg、8.5mg、9mg、9.5mg、10mg、10.5mg、11mg、11.5mg、12mg、12.5mg、13mg、13.5mg、14mg、14.5mg、15mg、15.5mg、16mg、16.5mg、17mg、17.5mg、18mg、18.5mg、19mg、19.5mg、20mg、20.5mg、21mg、21.5mg、22mg、22.5mg、23mg、23.5mg、24mg、24.5mg、25mg、25.5mg、26mg、26.5mg、27mg、27.5mg、28mg、28.5mg、29mg、29.5mg或30mg的SEQID NO：1的融合蛋白。本发明的药物组合物可以任选地包括药学上可接受的赋形剂。

优选地，本发明提供用于皮下施用的药物组合物，其包含儿科患者通常所需的以mg/kg计的一定剂量的SEQ ID NO：1的融合蛋白，例如，基于约12至约50kg或更大的儿童或60-70kg的成人，本发明以约0.1μg/kg、0.3μg/kg、1μg/kg、3μg/kg、3.5μg/kg、4μg/kg、4.5μg/kg、5μg/kg、5.5μg/kg、6μg/kg、6.5μg/kg、7μg/kg、7.5μg/kg、8μg/kg、8.5μg/kg、9μg/kg、9.5μg/kg、10μg/kg、10.5μg/kg、11μg/kg、11.5μg/kg、12μg/kg、12.5μg/kg、13μg/kg、13.5μg/kg、14μg/kg、14.5μg/kg的剂量或其相应的固定剂量提供SEQ ID NO：1的融合蛋白。

当作为单一疗法递送时，与免疫检查点抑制剂组合的SEQ ID NO：1的融合蛋白的有效量可以与SEQ ID NO：1的融合蛋白的有效量不同。然而，只要组合治疗方案提供期望的结果，在组合治疗方案中使用的SEQ ID NO：1的融合蛋白的量被认为是治疗有效的。优选地，当与SEQ ID NO：1的融合蛋白组合使用时，通常作为单一疗法施用的免疫检查点抑制剂的量较少。

包括SEQ ID NO：1的融合蛋白的组合治疗方案可以包括在一系列连续或不连续的天内施用单一日剂量的SEQ ID NO：1的融合蛋白。例如，SEQ ID NO：1可以在治疗的第1-5天施用及具有1天至28天的休息期，而免疫检查点抑制剂可以在治疗的第1天施用并且在那之后每21天施用一次(即，每三周一次)，只要治疗持续。

SEQ ID NO：1的融合蛋白与免疫检查点抑制剂蛋白的组合的施用的实际剂量和频率将取决于受试者的年龄、体重和一般状况以及所治疗的病症的严重程度，健康护理专业人员的判断和所施用的配合物而变化。也可以基于患者是否对组合中的一种或多种化合物有响应来确定剂量和频率。例如，患者可能对单独的单个药剂以及组合有响应，但对组合响应更大。作为进一步的实例，患者可能对单个药剂中的一个无响应，但对组合有响应。作为又一实例，患者可能对单独的任一单个药剂无响应，但对组合有响应。

本文所述的组合治疗方法包括施用与SEQ ID NO：1的融合蛋白组合的至少一种免疫检查点抑制剂。本发明不限于任何特定的免疫检查点抑制剂，只要该免疫检查点抑制剂当以有效量作为单一疗法或与SEQ ID NO：1的融合蛋白组合施用时抑制靶检查点蛋白的一种或多种活性。在一些情况下，由于例如协同效应，免疫检查点抑制剂对免疫检查点蛋白的最小抑制在SEQ ID NO：1的融合蛋白存在下可能是足够的。许多免疫检查点抑制剂是本领域已知的，例如，以下是FDA批准的免疫检查点抑制剂的列表：

·伊匹木单抗

·派姆单抗

·阿特珠单抗

·德瓦鲁单抗

·阿维鲁单抗

·纳武单抗

·西米普利单抗(cemiplimab)

临床中抗-PD-1抗体的另外的实例包括但不限于，信迪利单抗(sintilimab)

特瑞普利单抗(toripalimab)(JS001)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)(AiRuiKa^TM))、替雷利珠单抗(tislelizumab)(BGB-A317)、斯巴达利珠单抗(spartalizumab)(PDR001)、瑞弗利单抗(retifanlimab)(MGA012)、巴斯替利单抗(balstilimab)(AGEN2034)、塞特瑞利单抗(cetrelimab)(JNJ-63723283)、多塔利单抗(dostarlimab)(TSR-042)和萨善利单抗(sasanlimab)(PF-06801591)。

作为用于阻断的候选物的免疫检查点蛋白(配体和受体)的实例(其中的一些在各种类型的肿瘤细胞中被选择性地上调)包括PD1、PDL1、BTLA、CTLA4、TIM3、LAG3；A2aR；和杀伤抑制性受体。

CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4；也称为CD152)。免疫检查点受体CTLA4属于免疫球蛋白受体超家族，该超家族还包括PD1；BTLA；淋巴细胞衰减子；TIM3，和T细胞活化的V-结构域免疫球蛋白抑制剂。CD80(也称为B7.1)和CD86(也称为B7.2)已被鉴定为CTLA4受体配体。CTLA4，临床靶向的第一免疫检查点受体，专门地在T细胞上表达，其中它主要调节T细胞活化的早期阶段的幅度。其已被证明抵消T细胞共刺激受体CD28的活性。在抗原识别时，CD28信号传导强烈放大T细胞受体信号传导以活化T细胞。[参见，例如，Riley等人，(2002)Proc.Natl Acad.Sci.USA99:11790-95]。CTLA4在T细胞活化后被转录诱导。尽管CTLA4由活化的CD8+效应T细胞表达，但据信其主要生理学作用通过对CD4+T细胞的两个主要亚群的不同作用而显现：i)辅助性T细胞活性下调，和ii)调节性T细胞免疫抑制活性增强。具体地，CTLA4阻断导致依赖于辅助T细胞的免疫反应增强，而调节性T细胞的CTLA4接合提高了它们的抑制性功能。[参见，例如，Fontenot等人，(2003)Nat.Immunol.Proc.4:330-36]。

已经描述了使用抗CTLA4拮抗性抗体靶向CTLA4信号传导通路的各种实验方法。已评估这些方法以辨别此类抗体在癌症(例如肿瘤)和感染性病症中的潜在效用。例如，IL-10先前已涉及CTLA4介导的抗肿瘤免疫反应的抑制(Jovasevic等人，(2004)J.Immunol.172：1449-54)。当它在2011年被批准用于治疗黑素瘤时，完全人源化的CTLA4单克隆抗体伊匹木单抗(YERVOY；Bristol-Myers Squibb)成为美国首个获得监管批准的免疫检查点抑制剂。另一种药剂，曲美木单抗(tremelimumab)(以前称替西里木单抗(ticilimumab)；Medimmune)目前在临床试验中用于例如肝细胞癌、黑素瘤和间皮瘤。

CD28信号传导通路也已经使用拮抗性CTLA4-Ig进行靶向，在自身免疫和移植条件下的潜在应用(Wu等人，(2012)Int.J.Biol.Sci.8:1420-30)。包含CTLA4和抗体的融合蛋白(CTLA4-Ig；abatcept(ORENCIA；Bristol-Myers Squibb))已被用于治疗类风湿性关节炎，并且其它融合蛋白已被证明在对EB病毒敏感的肾移植患者中是有效的。

PD1(程序性细胞死亡蛋白1；也称为CD279)和PDL1(PD1配体；也称为B7-H1)和PDL2。PD1是与CD28家族成员共享结构特性的T细胞活化的负调节物。PD1限制组织内的T细胞效应子功能。通过上调PD1的配体，肿瘤细胞阻断肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫反应。与许多其他免疫检查点抑制剂一样，PD1阻断逆转T细胞耗竭，恢复细胞因子产生，并且增加抗原依赖性T细胞的扩增。PDL1和PDL2是已知活化PD1通路的两种配体。已显示阻断PD1-PDL1/PDL2通路延迟肿瘤生长并延长肿瘤负荷小鼠的存活。此外，早期临床试验的结果表明PD1通路的阻断在多种肿瘤类型中诱导持续的肿瘤消退。对于PD1和PDL1/PDL2，据信最重要的相互作用是在肿瘤部位，而不是如与CTLA-4一样更广泛地在整个免疫***中。

已经评估了使用基因转移和/或拮抗性抗体调节PD1-PDL1/PDL2通路的各种免疫治疗途径。此类途径已在许多疾病、紊乱和病症中显示出前景，包括移植、感染、肿瘤和自身免疫疾病(Wu等人，(2012)Int.J.Biol.Sci.8:1420-30)。PD1的细胞外免疫球蛋白(Ig)V结构域已被证明对于PD1和PDL1/PDL2之间的相互作用是重要的，表明hPD1-IgV可以是用于特异性肿瘤免疫疗法的有前景的策略(Zhang等人，(2008)Cytotherapy 10(7):711-10)。PD1抗体正在开发中(例如，纳武单抗(Bristol-Myers Squibb)，匹地利珠单抗(pidilizumab)(CT-011；Curetech)和lambrolizumab(Merck))。纳武单抗在黑色素瘤、肺癌和肾癌患者中具有前景。还在肺癌中评估了包含纳武单抗和CTLA-4调节剂伊匹木单抗的组合疗法。还评估了抗PDL1抗体(例如BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)、MPDL3280A(Genentech/Roche)和MEDI4736(MedImmune)，以及抗PDL2抗体(例如AMP-224(Amplimmune/GlaxoSmithKline))。

优选地，免疫检查点抑制剂是生物治疗剂或小分子。优选地，免疫检查点抑制剂是单克隆抗体、人源化抗体、全人抗体、融合蛋白或其组合。

技术人员可以参考文献以获得关于鉴定和测试任何潜在的免疫检查点抑制剂的活性的信息，并且还确定单独或与SEQ ID NO：1组合施用免疫检查点抑制剂的合适的剂量和频率。所施用的足以促进检查点蛋白抑制的免疫检查点抑制剂的量在本文中称为“检查点蛋白抑制量”或剂量范围。本领域技术人员可参考科学文献和市售抑制剂的包装说明书以确定用于本发明组合疗法的检查点抑制量。

优选地，免疫检查点抑制剂的有效量是与SEQ ID NO：1的融合蛋白组合有效地引起肿瘤消退的量。优选地，免疫检查点抑制剂以小于0.0001mg/kg、0.0001-0.001mg/kg、0.001-0.01mg/kg、0.01-0.05mg/kg、0.05-0.1mg/kg、0.1-0.2mg/kg、0.2-0.3mg/kg、0.3-0.5mg/kg、0.5-0.7mg/kg、0.7-1mg/kg、1-2mg/kg、2-3mg/kg、3-4mg/kg、4-5mg/kg、5-6mg/kg、6-7mg/kg、7-8mg/kg、8-9mg/kg、9-10mg/kg、至少10mg/kg或其任何组合的剂量施用(以患者体重的kg计)。优选地，免疫检查点抑制剂至少每周一次、至少每周两次、至少每周三次、至少每两周一次、或至少每月或多个月一次施用。优选地，该免疫检查点抑制剂是作为单剂量、以两个剂量、以三个剂量、以四个剂量、以五个剂量，或以6个或更多个剂量施用的。

优选地，免疫检查点抑制剂是PD1免疫检查点抑制剂，其包括一种或多种抗PD-1抗体，包括纳武单抗和派姆单抗。本发明的优选治疗方案将SEQ ID NO：1的融合蛋白与免疫检查点抑制剂派姆单抗组合。优选地，根据制造商的建议施用200mg的派姆单抗，通常每三周或21天施用一次。

优选地，免疫检查点抑制剂是CTLA4免疫检查点抑制剂，包括一种或多种抗CTLA-4抗体(包括伊匹木单抗)。本发明的优选治疗方案将SEQ ID NO：1的融合蛋白与免疫检查点抑制剂伊匹木单抗组合。优选地，根据制造商的建议施用200mg的伊匹木单抗，通常每三周或21天施用一次。

通常，当与免疫检查点抑制剂组合时，SEQ ID NO：1的融合蛋白的治疗有效量是足以激活CD8+T细胞的细胞毒性以减少或消除肿瘤的量。优选地，本发明的组合疗法在用组合疗法测试的患者群体的至少约50％、约60％、约70％、约80％和约90％或更多中产生对治疗的完全响应，并且优选地，该完全响应是持续的完全响应。

优选地，SEQ ID NO：1的融合蛋白在癌症的组合治疗中通过静脉内或皮下注射施用，并且优选地免疫检查点抑制剂通过静脉内或皮下注射施用。然而，也考虑了两种化合物的其它施用方式，例如肺、鼻、口腔、直肠、舌下和透皮。如本文所用，术语“肠胃外”是指旨在作为注射或输注施用的剂型，并且包括皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、心内、鞘内和肌内注射，以及通常通过静脉内途径的输注注射。可以分别施用该方法的每种药理学组分。或者，如果期望同时施用两种药理学组分，并且两种药理学组分在一起和给定制剂中相容，则可通过施用单一剂型/制剂实现同时施用(例如，静脉内施用含有两种药理学活性剂的静脉内制剂)。本领域普通技术人员可以通过常规测试确定两种给定的药理学组分在一起和在给定的制剂中是否相容。

根据本发明施用的组合物可以进一步包含药学上可接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂，以及另一种药物组合物，其包含一种或多种治疗剂，例如治疗性抗体，以及药学上可接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。

只要监督患者护理的临床医师认为治疗方法是有效的，本文所述的组合治疗方法可以继续。指示治疗方法有效的非限制性参数包括以下：肿瘤收缩(以重量和/或体积计)；单个肿瘤集落数量的减少；肿瘤消除；及无进展生存期(PFS)。

与本文公开的组合疗法的过程相关联的示例性时间长度包括：约一周；两周；约三周；约四周；约五周；约六周；约七周；约八周；约九周；约十周；约十一周；约十二周；约十三周；约十四周；约十五周；约十六周；约十七周；十八周；约十九周；约二十周；约二十一周；约二十二周；约二十三周；约二十四周；约七个月；约八个月；约九个月；约十个月；约十一个月；约十二个月；约十三个月；约十四个月；约十五个月；约十六个月；约十七个月；约十八个月；约十九个月；约二十个月；约二十一个月；约二十二个月；约二十三个月；约二十四个月；约三十个月；约三年；约四年和约五年。

优选地，SEQ ID NO：1的融合蛋白及其药物组合物与一种或多种免疫检查点抑制剂组合以治疗和/或预防各种疾病、紊乱和病症(例如，癌症)是通过利用特定给药参数来实现的，其用于最小化与单独治疗本身的施用相关的任何不良作用。例如，将SEQ ID NO：1的融合蛋白方案添加到包含免疫检查点抑制剂(例如，伊匹木单抗)的方案中可能允许减少实现治疗目标所需的免疫检查点抑制剂的量，因此减少(或甚至消除)促使FDA要求关于某些免疫检查点抑制剂(例如，伊匹木单抗)的“黑盒子”警告的严重和致命的免疫介导的不良反应。

治疗适应症

本文所述的组合治疗方法特别适用于治疗癌症。癌细胞可以侵入附近的组织并且可以通过血流和淋巴***扩散到身体的其它部分。存在几种主要类型的癌症，例如，癌是在皮肤中或者内衬或覆盖内脏器官的组织中开始的癌症。肉瘤是在骨、软骨、脂肪、肌肉、血管或其它***或支持组织中开始的癌症。白血病是在血液形成组织如骨髓中开始，并导致大量异常血细胞产生并进入血流的癌症。淋巴瘤是在免疫***的细胞中开始的癌症。

当正常细胞丧失其表现为特定的、受控的和协调的单元的能力时，形成肿瘤。通常，实体瘤是通常不包含囊肿或液体区域的异常组织块(一些脑肿瘤确实具有充满液体的囊肿和中心坏死区域)。单个肿瘤甚至可以在其内具有不同的细胞群，具有出错的不同的过程。实体瘤可以是良性的(不是癌性的)或恶性的(癌性的)。不同类型的实体瘤由形成它们的细胞类型命名。实体瘤的实例是肉瘤、、癌瘤和淋巴瘤。白血病(血液的癌症)通常不形成实体瘤。

可以使用本文所述的组合治疗方案治疗的实体瘤癌症的实例包括但不限于：胰腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、肾细胞癌；头颈部鳞状细胞癌、膀胱癌、***癌、***、胃癌、子宫内膜癌、脑癌、肝癌、卵巢癌、睾丸癌、头癌、颈癌、皮肤癌(包括黑色素瘤和基底癌)、间皮内层癌、食道癌、乳腺癌、肌肉癌、***癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞癌)、肾上腺癌、甲状腺癌、肾癌或骨癌；胶质母细胞瘤、间皮瘤、胃癌、肉瘤、绒毛膜癌、皮肤基底细胞癌和睾丸***瘤。在优选的方面，所述癌症是***、非小细胞肺癌、肾细胞癌；头颈部鳞状细胞癌、膀胱癌、胰腺癌、黑色素瘤、淋巴瘤或胃癌。在更优选的方面，癌症是黑素瘤、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、膀胱癌、肾细胞癌或胃癌。本发明的治疗方案特别适用于治疗实体瘤，包括但不限于：淋巴瘤、黑素瘤、肾细胞癌(RCC)、晚期实体瘤、先前已用治疗性疗法治疗但仍对先前疗法难治的肿瘤。

也可根据本发明治疗的癌症包括但不限于急性成淋巴细胞性白血病，成人；急性淋巴细胞白血病，儿童；急性骨髓性白血病，成人；肾上腺皮质癌；肾上腺皮质癌，儿童；AIDS相关的淋巴瘤；AIDS相关的恶性肿瘤；***癌；星形细胞瘤，儿童小脑；星形细胞瘤，儿童脑；胆管癌，肝外；膀胱癌；膀胱癌，儿童；骨癌，骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；胶质母细胞瘤，儿童；成胶质细胞瘤，成人；脑干胶质瘤，儿童；脑肿瘤，成人；脑肿瘤，脑干胶质瘤，儿童；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤，儿童；脑肿瘤，脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤，儿童；脑肿瘤，室管膜瘤，儿童；脑肿瘤，成神经管细胞瘤，儿童；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童；脑肿瘤，视觉通路和下丘脑胶质瘤，儿童；脑肿瘤，儿童(其他)；乳腺癌；乳腺癌和妊娠；乳腺癌，儿童；乳腺癌，男性；支气管腺瘤/类癌，儿童：类癌瘤，儿童；类癌瘤，胃肠；肾上腺皮质癌；癌瘤，胰岛细胞；原发未知癌；原发性中枢神经***淋巴瘤；小脑星形细胞瘤，儿童；脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤，儿童；子***；儿童癌症；慢性淋巴细胞白血病；慢性髓性白血病；慢性骨髓增生性疾病；腱鞘透明细胞肉瘤；结肠癌；结直肠癌，儿童；皮肤T细胞淋巴瘤；子宫内膜癌；室管膜瘤，儿童；上皮癌，卵巢；食道癌；食管癌，儿童；尤文氏家族肿瘤；颅外生殖细胞肿瘤，儿童；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；眼癌，眼内黑素瘤；眼癌，视网膜母细胞瘤；胆囊癌；胃(gastric)(胃部(stomach))癌；胃(胃部)癌，儿童；胃肠类癌瘤；生殖细胞肿瘤，颅外，儿童；生殖细胞肿瘤，性腺外；生殖细胞肿瘤，卵巢；妊娠滋养细胞肿瘤；神经胶质瘤，儿童脑干；神经胶质瘤，儿童视觉通路和下丘脑；毛细胞白血病；头颈癌；肝细胞(肝)癌，成人(原发性)；肝细胞(肝)癌，儿童(原发性)；霍奇金淋巴瘤，成人；儿童霍奇金淋巴瘤；妊娠期间的霍奇金淋巴瘤；下咽癌；下丘脑和视觉通路胶质瘤，儿童；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波济氏肉瘤；肾癌；喉癌；喉癌，儿童；白血病，急性淋巴母细胞性，成人；白血病，急性淋巴母细胞性，儿童；白血病，急性骨髓性，成人；白血病，急性骨髓性，儿童；白血病，慢性淋巴细胞性；白血病，慢性髓性；白血病，毛细胞；唇和口腔癌；肝癌，成人(原发性)；肝癌，儿童(原发性)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；成淋巴细胞性白血病，急性成人；成淋巴细胞性白血病，儿童急性；慢性淋巴细胞性白血病；淋巴瘤，AIDS相关；淋巴瘤，中枢神经***(原发性)；淋巴瘤，皮肤T细胞；淋巴瘤，霍奇金氏，成人；淋巴瘤，霍奇金氏；儿童；妊娠期霍奇金淋巴瘤；淋巴瘤，非霍奇金，成人；淋巴瘤，非霍奇金，儿童；妊娠期非霍奇金淋巴瘤；淋巴瘤，原发性中枢神经***；华氏巨球蛋白血症；男性乳腺癌；恶性间皮瘤，成人；恶性间皮瘤，儿童；恶性胸腺瘤；成神经管细胞瘤，儿童；黑素瘤；黑素瘤，眼内；默克尔细胞癌；间皮瘤，恶性；转移性鳞状颈部癌伴隐匿性原发性；多发性内分泌腺瘤综合征，儿童；多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤；蕈样肉芽肿病；骨髓发育不良综合征；髓性白血病，慢性；髓样白血病，儿童急性；多发性骨髓瘤；慢性骨髓增生性疾病；鼻腔和鼻旁窦癌；鼻咽癌；鼻咽癌，儿童；成神经细胞瘤；神经纤维瘤；非霍奇金淋巴瘤，成人；儿童非霍奇金淋巴瘤；怀孕期的非霍奇金淋巴瘤；非小细胞肺癌；口腔癌，儿童；口腔和唇癌；口咽癌；骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤；卵巢癌，儿童；卵巢上皮癌；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低度恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，儿童，胰腺癌，胰岛细胞；鼻旁窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；***癌；嗜铬细胞瘤；松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童；垂体肿瘤；浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；妊娠和乳腺癌；妊娠和霍奇金淋巴瘤；妊娠和非霍奇金淋巴瘤；原发性中枢神经***淋巴瘤；原发性肝癌，成人；原发性肝癌，儿童；***癌；直肠癌；肾细胞(肾)癌；肾细胞癌，儿童；肾盂和输尿管，移行细胞癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；唾液腺癌，儿童；肉瘤，尤因家族肿瘤；肉瘤，卡波济氏肉瘤；肉瘤(骨肉瘤)/骨的恶性纤维组织细胞瘤；肉瘤，横纹肌肉瘤，儿童；肉瘤，软组织，成人；肉瘤，软组织，儿童；塞扎里综合征；皮肤癌；皮肤癌，儿童；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌，默克尔细胞；小细胞肺癌；小肠癌；软组织肉瘤，成人；软组织肉瘤，儿童；鳞状颈癌伴隐匿性原发性，转移性；胃部(胃)癌；胃部(胃)癌，儿童；幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童；皮肤T细胞淋巴瘤；睾丸癌；胸腺瘤，儿童；胸腺瘤，恶性的；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管移行细胞癌；滋养细胞肿瘤，妊娠；原发部位未知，儿童期癌症；儿童期异常癌症；输尿管和肾盂，移行细胞癌；尿道癌；子宫肉瘤；***癌；视觉通路和下丘脑胶质瘤，儿童；外阴癌；华氏巨球蛋白血症；和与维尔姆斯瘤，等。

本发明的治疗方案特别适用于治疗实体瘤，包括但不限于：淋巴瘤、黑素瘤、肾细胞癌(RCC)、肝细胞癌(HCC)、非小细胞肺癌(NBCLC)、小细胞肺癌(SCLC)、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)并且包括晚期实体瘤和先前已经用抗癌疗法治疗但对先前疗法不显疗效的肿瘤。

药物组合物

SEQ ID NO：1的融合蛋白和本公开的免疫检查点抑制剂可以为适于向受试者施用的一种或多种组合物的形式。通常，此类组合物是包含SEQ ID NO：1的融合蛋白和/或免疫检查点抑制剂以及一种或多种药学上可接受的或生理学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的“药物组合物”。

本发明的药物组合物可以配制成与预期的施用方法或途径相容；示例性的施用途径在本文中阐述。此外，药物组合物可与如本文所述的其它治疗活性剂或化合物组合使用以治疗或预防如本发明所涵盖的疾病、紊乱和病症。

药物组合物通常包含治疗有效量的SEQ ID NO：1的融合蛋白和一种或多种药学上和生理学上可接受的配制剂。合适的药学上可接受的或生理学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂包括但不限于抗氧化剂(例如抗坏血酸和硫酸氢钠)、防腐剂(例如苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、乳化剂、悬浮剂、分散剂、溶剂、填充剂、增量剂、洗涤剂、缓冲剂、媒介物、稀释剂和/或佐剂。例如，合适的媒介物可以是生理盐水溶液或柠檬酸盐缓冲盐水，可能补充有用于肠胃外施用的药物组合物中常见的其它材料。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是另外的示例性媒介物。本领域技术人员将容易地认识到可用于本文考虑的药物组合物和剂型中的多种缓冲剂。典型的缓冲剂包括但不限于药学上可接受的弱酸、弱碱或其混合物。例如，缓冲组分可以是水溶性物质，例如磷酸、酒石酸、乳酸、琥珀酸、柠檬酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、谷氨酸及其盐。可接受的缓冲剂包括例如Tris缓冲剂、N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)(HEPES)、2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、2-(N-吗啉代)乙磺酸钠(MES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)和N-三[羟甲基]甲基-3-氨基丙磺酸盐(TAPS)。

在配制药物组合物后，可将其作为溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体或脱水或冻干粉末储存在无菌小瓶中。这样的制剂可以即用形式、使用前需要重构的冻干形式、使用前需要稀释的液态形式或其它可接受的形式储存。

优选地，药物组合物提供在单次使用的容器(例如单次使用的小瓶、安瓿、注射器或自动注射器(类似于例如

))中，而在其它实施方案中提供多次使用的容器(例如多次使用的小瓶)。任何药物递送装置可用于递送IL-10，包括植入物(例如，可植入泵)和导管***、缓慢注射泵和装置，所有这些都是本领域技术人员熟知的。通常皮下或肌内施用的贮库注射剂也可用于在限定的时间段内释放本文公开的多肽。贮库注射剂通常是基于固体或油的，并且通常包含至少一种本文所述的制剂组分。本领域普通技术人员熟悉贮库注射剂的可能制剂和用途。

药物组合物可以是无菌的可注射水性或油性悬浮液的形式。该悬浮液可根据已知技术使用本文提及的那些合适的分散剂或润湿剂和助悬剂配制。无菌可注射制剂也可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的稀释剂、溶剂和分散介质包括水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液、CREMOPHOR EL^TM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其合适的混合物。此外，无菌的不挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸可用于制备注射剂。特定可注射制剂的延长吸收可通过包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝或明胶)来实现。

药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如片剂、胶囊、锭剂、糖锭、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆、溶液、微珠或酏剂。旨在用于口服使用的药物组合物可以根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法来制备，并且此类组合物可以含有一种或多种试剂，例如像甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以便提供药学上美观且可口的制品。片剂、胶囊等含有与适于制备片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是，例如，稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或***胶，和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。

适于口服施用的片剂、胶囊等可以是未包衣的或通过已知技术包衣的以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供持续作用。例如，可以使用延时材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可以通过本领域已知的技术包衣以形成用于控释的渗透治疗片剂。另外的试剂包括可生物降解的或生物相容的颗粒或聚合物质，例如聚酯、聚胺酸、水凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚酐、聚乙醇酸、乙烯-乙酸乙烯酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硫酸鱼精蛋白或丙交酯/乙交酯共聚物、聚丙交酯/乙交酯共聚物或乙烯醋酸乙烯酯共聚物，以控制施用的组合物的递送。例如，可以将口服药剂包埋在分别通过凝聚技术或通过界面聚合，通过使用羟甲基纤维素或明胶-微胶囊或聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊制备的微胶囊中，或在胶体药物递送体系中。胶态分散***包括大分子复合物、纳米胶囊、微球、微珠和基于脂质的***，包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体。制备上述制剂的方法对本领域技术人员来说是显而易见的。

用于口服使用的制剂还可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙、高岭土或微晶纤维素)混合，或呈现为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

水性悬浮液含有与适于其制造的赋形剂混合的活性物质。这样的赋形剂可以是悬浮剂，例如羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟基-丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和***胶；分散剂或润湿剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七亚乙基氧基十六烷醇)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯山梨聚糖单油酸酯)。水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂。

油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中进行配制。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可以添加如上所述的甜味剂和调味剂以提供适口的口服制剂。

适于通过添加水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。本文例举了合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂。

药物组合物还可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡，或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如***树胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂和衍生自脂肪酸的酯或偏酯；己糖醇酐，例如，山梨聚糖单油酸酯；和偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯。

制剂还可以包括载体以保护组合物免于从身体快速降解或消除，例如控释制剂，包括植入物、脂质体、水凝胶、前药和微囊化递送***。例如，可以应用延时材料如单独的甘油单硬脂酸酯或甘油硬脂酸酯或其与蜡组合。

栓剂可通过将药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在常温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这样的材料包括但不限于可可脂和聚乙二醇。

适用于本发明的药物组合物可以是目前已知或将来开发的任何形式(例如，用于鼻或吸入使用的喷雾剂)。

制剂中SEQ ID NO:1的融合蛋白或免疫检查点抑制剂的浓度可以变化很大(例如，按重量计从小于约0.1％、通常为或至少约2％至多达20％至50％或更多)并且将根据例如所选择的具体施用模式通常主要基于流体体积、粘度以及基于受试者的因素进行选择。

补充组合疗法/另外的治疗剂

还考虑了与SEQ ID NO：1的融合蛋白和免疫检查点抑制剂的组合疗法进一步组合的其他抗癌治疗方案，以用作用于治疗癌症的进一步组合疗法。其他抗癌治疗方案包括其他治疗性免疫疗法，如过继性细胞转移方案、抗原特异性疫苗接种、DNA修复蛋白的抑制(例如核酸酶聚(腺苷5’-二磷酸核糖)聚合酶的抑制[“聚(ADP-核糖)聚合酶”PARP抑制剂")以及与多于一种免疫检查点抑制剂分子的组合。

本发明的方法可以进一步与其它治疗剂和/或抗癌剂组合。优选地，治疗剂和/或抗癌剂是抗体。优选地，治疗剂是治疗性蛋白质。优选地，治疗剂是小分子。优选地，抗癌剂是抗原。优选地，治疗剂是细胞群体。优选地，治疗剂是治疗性抗体。优选地，治疗剂是另一种细胞毒性剂和/或化学治疗剂。本文所用的术语“细胞毒性剂”是指抑制或防止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。化疗剂包括可用于治疗癌症的化合物。

在任何此类的另外的组合疗法中，各种另外的治疗剂经常具有与SEQ ID NO：1的融合蛋白和/或免疫检查点抑制剂不同的作用机制。通过允许一种或多种药剂的进一步剂量减少，由此减少或消除与一种或多种药剂相关的副作用，这种另外的组合疗法可以是特别有利的；此外，此类另外的组合疗法可对潜在疾病、紊乱或病症具有协同治疗或预防作用。

优选地，SEQ ID NO：1的融合蛋白、免疫检查点抑制剂和另外的治疗剂各自可以处于分开的剂型或处于组合的剂型中。优选地，顺序地施用或应用SEQ ID NO：1的融合蛋白，免疫检查点抑制剂和补充剂(例如，化疗剂)。然而，治疗剂中的一种或多种可以同时施用，同时一种或多种顺序地施用。无论是顺序地、同时地或以其一些变化形式施用SEQ ID NO：1的融合蛋白、免疫检查点抑制剂和另外的治疗剂，出于本公开的目的，它们被认为是作为补充组合疗法施用。

在该情况下可接受的、适当的或最佳的用于另外的组合疗法的任何可能的给药方案是优选的。下文描述的方案是示例性的，而非排除性的。优选地，用SEQ ID NO：1的融合蛋白、免疫检查点抑制剂和另外的治疗剂的治疗维持一段时间。优选地，在一段时间内(例如，当受试者稳定时)减少或持续SEQ ID NO：1的融合蛋白、免疫检查点抑制剂和另外的治疗剂的治疗。优选地，减少或中断另外的治疗剂的治疗(例如，当该受试者是稳定的时)，同时将SEQ ID NO：1的融合蛋白和免疫检查点抑制剂的治疗维持于恒定的给药方案。优选地，减少或中断补充剂的治疗(例如，当受试者是稳定的时)，减少用SEQ ID NO：1的融合蛋白的治疗(例如，较低剂量、较低频率给药或较短治疗方案)，并且免疫检查点抑制剂的治疗维持在恒定的给药方案。优选地，减少或中断另外的治疗剂的治疗(例如，当该受试者是稳定的时)，减少SEQ ID NO：1的融合蛋白的治疗(例如，更低剂量、更低频率的给药或更短的治疗方案)，并且免疫检查点抑制剂的治疗维持在恒定的给药方案。优选地，将另外的治疗剂和SEQID NO：1的融合蛋白的治疗维持在恒定的给药方案，而减少或中断免疫检查点抑制剂的治疗(例如，当受试者稳定时)。优选地，另外的治疗剂和免疫检查点抑制剂的治疗维持在恒定的给药方案，而减少或中断用SEQ ID NO：1的融合蛋白的治疗(例如，更低剂量、更低频率的给药或更短的治疗方案)。其它给药方案的鉴定和使用对于本领域技术人员是显而易见的。

本发明提供另外的治疗剂(例如化学治疗剂)用于治疗和/或预防癌症、肿瘤或者癌前的或癌症相关的疾病、紊乱或病症的用途。化疗剂的实例包括但不限于烷化剂，例如噻替派和环磷酰胺；烷基磺酸盐，例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，例如苯多巴、卡波醌、美妥多巴和乌拉多巴；乙烯亚胺类和甲基三聚氰胺类，包括三聚氰胺、三乙烯三聚氰胺、三乙烯磷酰胺、三乙烯硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺；氮芥类，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲洛磷胺、尿嘧啶芥；亚硝基脲例如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，如阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素、加利车霉素、卡比星、卡米霉素、carzinophilin、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)、霉酚酸、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星、链黑霉素、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)和佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU；雄激素类如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯；抗肾上腺药如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；地磷酰胺(defosfamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌；依氟鸟氨酸(elformithine)；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；二胺硝吖啶；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；西佐喃；螺锗胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺；尿烷；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(Ara-C)；环磷酰胺；塞替派(thiotepa)；紫杉烷类，例如紫杉醇和多西他赛；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫代鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂和铂配位络合物如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维本；诺万特龙；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT11；拓扑异构酶抑制剂；二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine)(DMFO)；视黄酸；esperamicins；卡培他滨；以及任何上述化合物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。

化疗剂还包括起调节或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂，例如抗***药，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制4(5)-咪唑的芳香酶、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、奥那司酮和托瑞米芬；和抗雄激素药如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及任何上述化合物的药学上可接受的盐、酸或衍生物。优选地，组合疗法包括施用激素或相关激素试剂。

可用于治疗或预防本文所述的癌性病症的任何其它药剂预期作为补充剂，包括但不限于细胞因子如IL-2或细胞因子拮抗剂如IL-12、INFα或抗表皮生长因子受体、放射疗法、针对另一肿瘤抗原的单克隆抗体、单克隆抗体与毒素的复合物、T细胞佐剂、骨髓移植物或抗原呈递细胞(例如树突细胞疗法)。本文还提供了疫苗(例如作为可溶性蛋白质或作为编码该蛋白质的核酸)。

重组生产

优选地，使用重组技术产生SEQ ID NO：1的融合蛋白。使用任何合适的构建体和任何合适的宿主细胞，可以将融合蛋白产生为细胞内蛋白或分泌蛋白，所述宿主细胞可以是原核或真核细胞，分别如细菌(例如大肠杆菌)或酵母宿主细胞。可用作宿主细胞的真核细胞的其它实例包括昆虫细胞、哺乳动物细胞和/或植物细胞。当使用哺乳动物宿主细胞时，它们可以包括人细胞(例如，Hela、293、H9和Jurkat细胞)；小鼠细胞(例如NIH3T3、L细胞和C127细胞)；灵长类细胞(例如，Cos 1、Cos 7和CV1)；和仓鼠细胞(例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞)。

根据本领域已知的标准方法，可以使用多种适于表达多肽的宿主-载体***。参见，例如，Sambrook等人，1989Current Protocols in Molecular Biology Cold SpringHarbor Press,New York；和Ausubel等人，(1995)Current Protocols in MolecularBiology,Eds.Wiley and Sons。将遗传物质引入宿主细胞中的方法包括例如转化、电穿孔、接合、磷酸钙法等。可以选择转移方法以用于引入的编码多肽的核酸的稳定表达。编码多肽的核酸可以作为可遗传的附加型元件(例如质粒)提供或可以是基因组整合的。用于生产目的多肽的各种合适载体是可商购的。

载体可用于在宿主细胞中的染色体外维持或可用于整合到宿主细胞基因组中。表达载体提供转录和翻译调节序列，并且可以提供诱导型或组成型表达，其中编码区在转录起始区及转录和翻译终止区的转录控制下可操作地连接。通常，转录和翻译调控序列可包括但不限于启动子序列、核糖体结合位点、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列，和增强子或激活子序列。启动子可以是组成型或诱导型的，并且可以是强组成型启动子(例如，T7)。

表达构建体通常具有位于启动子序列附近的方便的限制性位点，以提供编码目的蛋白的核酸序列的***。可存在可在表达宿主中操作的选择标记以促进含有载体的细胞的选择。此外，表达构建体可以包括另外的元件。例如，表达载体可以具有一个或两个复制***，因此允许其在生物体中维持，例如在用于表达的哺乳动物或昆虫细胞中和在用于克隆和扩增的原核宿主中。此外，表达构建体可含有选择标记基因以允许选择转化的宿主细胞。选择性基因是本领域熟知的，并且将随所用的宿主细胞而变化。

蛋白质的分离和纯化可以根据本领域已知的方法完成。例如，可以从经遗传修饰以组成型表达蛋白质和/或在诱导后表达蛋白质的细胞的裂解物中分离蛋白质，或者通过免疫亲和纯化从合成的反应混合物中分离蛋白质，所述免疫亲和纯化通常包括将样品与抗蛋白质抗体接触，洗涤以去除非特异性结合的物质，并洗脱特异性结合的蛋白质。经分离的蛋白质可通过透析和其它通常用于蛋白质纯化的方法进一步纯化。在一个实施方案中，可以使用金属螯合层析方法分离蛋白质。蛋白质可含有修饰以促进分离。

SEQ ID NO：1的融合蛋白可以制备成基本上纯的或分离的形式(例如，不含其它多肽)。所述多肽可存在于相对于可存在的其它组分(例如，其它多肽或其它宿主细胞组分)富集所述多肽的组合物中。例如，可以提供纯化的融合蛋白，使得该融合蛋白存在于基本上不含其它表达蛋白(例如少于约90％、少于约60％、少于约50％、少于约40％、少于约30％、少于约20％、少于约10％、少于约5％或少于约1％)的组合物中。

优选地，SEQ ID NO：1的融合蛋白可以使用生物重组表达***产生，该***通常包括用含有编码SEQ ID NO：1的融合蛋白的遗传模板的DNA载体转染细胞，然后培养细胞以使得它们转录和翻译融合蛋白。然后通常裂解细胞以提取表达的蛋白质用于随后的纯化。原核和真核体内蛋白表达***都适合使用。优选地，SEQ ID NO：1的融合蛋白在CHO细胞中产生。

试剂盒

还提供了试剂盒，其包含配制用于施用的SEQ ID NO：1的融合蛋白和任选的任何其它化疗剂或抗癌剂。试剂盒通常为容纳各种组分的物理结构的形式，如下所述，并且可用于例如实施上述方法。试剂盒可以包括SEQ ID NO：1的融合蛋白(在例如无菌容器中提供)，其可以是适合施用于受试者的药物组合物的形式。

药物组合物可以以备用的形式或以需要例如在施用前重构或稀释的形式提供。当组合物为需要由使用者重构的形式时，试剂盒还可包括与SEQ ID NO：1的融合蛋白一起包装或分开包装的缓冲剂、药学上可接受的赋形剂等。当考虑组合疗法(例如，SEQ ID NO：1的融合蛋白和一种或多种免疫检查点抑制剂)时，试剂盒可以单独含有几种试剂或它们可以已经在试剂盒中组合。类似地，当需要另外的补充疗法(例如，SEQ ID NO：1的融合蛋白、免疫检查点抑制剂和另外的补充疗法或药剂)时，试剂盒可以单独地含有该若干药剂，或它们中的两种或更多种可以已经在试剂盒中组合。

本发明的试剂盒可设计成用于适当维持其中容纳的组分所需的条件(例如，冷藏或冷冻)。试剂盒可以含有标签或包装插页，其包括其中组分的识别信息和其使用说明(例如给药参数、活性成分的临床药理学(包括作用机制、药代动力学和药效学)、副作用、禁忌症等)。

试剂盒的各组分可以封装在单独的容器内，并且所有各种不同的容器可以在单个包装内。标签或插页可包括制造商信息，如批号和有效期。标签或包装插页可例如整合到容纳组件的物理结构中，单独包含在物理结构内，或固定到试剂盒的组件(例如安瓿、注射器或小瓶)上。

标签或插页可另外包括或并入计算机可读介质中，例如磁盘(例如，硬盘、卡、存储盘)、光盘(例如CD或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁带)或电存储介质(例如RAM和ROM)或这些的混合(例如磁/光存储介质、闪存介质或存储型卡)。在一些实施方案中，试剂盒中不存在实际说明书，但提供了用于从远程来源(例如经由互联网网站)获得说明书的手段。

实施例

以下实施例是以举例说明的方式提供的，并且不应解释为以任何方式限制所要求保护的发明。

实施例1-研究设计ION STUDY

表2：缩写和术语定义列表

总结：

该2期多位点试验，临床研究，被设计为在用抗-PD-(L)1抗体治疗没有达到完全响应的晚期或复发性头颈鳞状细胞癌患者中，估计对SEQ ID NO：1的融合蛋白联合抗-PD-1治疗

(派姆单抗)的响应率。次要目的包括评估接受SEQ ID NO：1的融合蛋白组合派姆单抗治疗的晚期或复发性头颈部鳞状细胞癌患者的响应持续时间、无进展生存期、进展时间和总生存期。作为探索性目的，本临床研究将使用成对肿瘤活检评估肿瘤微环境，以评估对添加SEQ ID NO：1的融合蛋白的响应的潜在预测性生物标志物。

目的：

主要：

·在之前已接受抗程序性细胞死亡蛋白1(抗PD-1)或抗程序性细胞死亡配体-1(抗PD-L1)(下文称为PD-[L]1)疗法但尚未实现完全缓解(CR)的头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者中，评估SEQ ID NO：1的融合蛋白与派姆单抗的组合的响应率。将评估以下2组的主要目的：

-组1：患有稳定疾病(SD)的患者，定义为根据实体瘤响应评估标准(RECIST)v1.1标准的≥12周的SD，或在先前的抗PD-(L)-1治疗≥8周的部分响应(PR)且肿瘤大小未进一步缩小(即，PR且没有进一步改善)的患者；

-组2：在接受抗PD-1治疗≥8周后没有对抗PD-(L)1治疗的先前响应的进行性疾病(PD)患者，或在先前实现SD或PR的最佳响应后且在接受抗PD-(L)1治疗≥8周后目前具有PD的患者。

次要：

·评估接受派姆单抗加SEQ ID NO：1的融合蛋白的晚期或复发性HNSCC患者的响应持续时间(DOR)、无进展存活期(PFS)、进展时间(TTP)和总体存活期(OS)；

·评估派姆单抗加SEQ ID NO：1融合蛋白的安全性和耐受性。

探索性：

·评估来自在用抗PD-(L)1治疗未实现CR的患者的活检预处理的评估是否可鉴定可能对添加SEQ ID NO：1的融合蛋白有响应的患者亚组；

·评估在组合治疗期间安排的第二次活检是否可以识别肿瘤的变化，这些变化将预测对添加SEQ ID NO:1的融合蛋白的响应或无响应。

方法学：这是一项多中心，2期，开放标签治疗研究，旨在评估SEQ ID NO：1组合派姆单抗在晚期、复发性和/或转移性HNSCC患者中用抗PD-(L)1抗体治疗而未实现CR时的抗肿瘤疗效。

研究产品、剂量、持续时间和施用方式：SEQ ID NO：1的融合蛋白药物产品是用于IV输注的无菌，白色至灰白色的冻干的粉末。每个一次性小瓶含有2.28mg以递送2mg的SEQID NO：1的融合蛋白。当按指示重构时，每mL含有1mg透明无色溶液形式的SEQ ID NO：1的融合蛋白。包含在SEQ ID NO：1的融合蛋白制剂中的赋形剂是柠檬酸一水合物，美国药典-国家处方集(USP-NF)；柠檬酸钠三水合物，USP-NF；蔗糖，USP-NF；和聚山梨酯20，USP-NF。SEQID NO：1融合蛋白药物产品必须在2℃至8℃(36°F至46°F)下储存和冷藏。SEQ ID NO：1融合蛋白药物产品与无菌注射用水(USP)一起提供，用于重构冻干的材料。单独提供含有聚山梨酯20的稀释剂以供使用。重构的SEQ ID NO：1的融合蛋白在每个治疗周期的第一周通过30分钟IV输注每天一次连续5天施用。

SEQ ID NO：1的融合蛋白应在派姆单抗输注完成后60-90分钟开始通过输注的施用。派姆单抗在30分钟内以200mg Q3W的剂量静脉输注施用，施用时间长达1年，只要患者获得临床益处(即客观响应或SD)且良好地耐受治疗。

研究的持续时间：本研究包括28天筛选期、治疗期和30天治疗后随访。治疗期由至少5个3周的周期组成，其可重复多达1年的筛选。

统计方法：对于所有适用参数，将提供描述性统计。

疗效：将使用实体瘤响应评价标准v1.1(RECIST1.1)和免疫相关响应标准(Irecist)评估对治疗的响应。对于患有客观可测量疾病的患者，将计算对治疗的响应、DOR、PFS和OS。

主要疗效终点将在疗效可评估人群(接受至少1剂两种研究药物的所有患者)中对于各组进行单独和总体评估。用具有SEQ ID NO：1融合蛋白的持续抗PD-1治疗后的客观改善率将按组(第1组和第2组)和总体群体用描述统计学进行概括。使用精确二项式检验对各组和总体分别进行客观响应的分析；将报告95％置信区间。

将在疗效可评估人群(第1组和第2组)中评估次要疗效终点。

按组和总体计算并总结DOR和TTP。PFS和OS曲线将使用Kaplan-Meier(KM)方法按组和总体绘制。将报告PFS和OS的中位生存期(如果适用)及其95％CI。将使用KM方法估计6个月和12个月时的PFS和OS率。

将总结4个组群每一个的客观响应率。

目标病变相对于基线的百分比变化将按组和总体进行总结。

研究原理

尽管纳武单抗和派姆单抗的临床研究已经证明了抗肿瘤活性，并确定了抗PD-1治疗在复发性转移性铂经验的HNSCC群体中的疗效、活性和益处，但响应率仍然低，且复发或未能实现CR的患者数量仍然占85％或更高的大多数。由于患有HNSCC的患者具有该疾病的巨大发病率和死亡率，并且任何单一药剂化学疗法的疗效仍然低，并且在抗PD-1治疗失败的群体中没有经过证实的挽救选择，因此存在发现新疗法或有效联合免疫疗法以增强、改善或恢复对抗PD-1治疗的响应的格外高的未满足需求。

本研究将招募之前接受过抗PD-1抗体治疗(派姆单抗或纳武单抗)作为最后一次治疗的患者或正在接受目前抗PD-1抗体治疗但未实现CR的患者。程序性细胞死亡蛋白-1：程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)(此后称为PD-[L]1)抑制剂在几乎每种组织学类型的癌症的小子集中是有效的，然而大多数治疗的患者不能受益。此外，有响应的许多肿瘤最终复发。因此，在不久的将来，在抗PD-(L)1治疗上稳定病情(SD)或有进展的患者很可能是美国最大的单一类别的患者。在对192例HNSCC患者进行的单一药剂派姆单抗的KEYNOTE-012研究的长期随访分析中，客观响应率为18％(95％CI，13％-24％)(Mehra等人，2018,Br.J.Cancer.119(2):153-159)。在实现响应的患者的亚组中，实现最佳响应的中位时间为2个月(范围，2-17个月)。因此，在使用派姆单抗单一疗法治疗8周后，如果继续使用派姆单抗单一疗法，预期约9％的原始群体或约10％的尚未响应的剩余群体将预期经历新的响应。如果相对于单一疗法抗PD-(L)1响应，SEQ ID NO：1的融合蛋白可以增加响应，这将支持使用SEQ ID NO：1的融合蛋白加免疫检查点阻断的组合作为HNSCC和其它恶性肿瘤的一线组合免疫疗法的策略的进一步发展。

在对于用抗PD1或抗PD-L的PD-(L)1抑制没有实现完全消退的患者中辨别肿瘤的特征是必要的。因此，将要求进行预处理活检。目前，最有可能对抗PD-1响应的肿瘤是那些突变数量增加，且因此含有潜在的免疫原性表位的异常蛋白质和能够识别异常蛋白质的T细胞浸润增加的肿瘤。肿瘤对抗PD-1无响应的机制尚未全面定义，但包括浸润性CD8+T细胞不足、浸润性CD8+T细胞分泌的干扰素(IFN)-γ的PD-L1诱导缺乏、缺乏对肿瘤对细胞毒性分子的响应、细胞凋亡失败、肿瘤微环境(TME)中存在抑制性细胞和分子以及由血管或基质因子介导的机械屏障。可能存在更多冗余和非冗余的失败机制。据推测SEQ ID NO：1的融合蛋白将挽救一些失败机制(例如，将CD8+T细胞募集至TME)，而一些则不会。

尽管目前不可能假设每种机制的频率或比例，但我们认为在治疗之前和治疗期间来自参与者的活检将洞察所声称的失败或成功机制，以产生将为未来研究设计提供基础的假设。

评估添加SEQ ID NO：1的融合蛋白是否能诱导对抗PD-1治疗无响应的肿瘤患者的缓解是本研究的基本目的。理解SEQ ID NO：1的融合蛋白是否改变肿瘤内N细胞和T细胞的数量也是关键的。因此，将在第2周(周期[C]1，第[D]12天或者从C1D8到C1D19的任何时间)采集治疗后(第二次)活检。

研究人群指定患有晚期或复发性HNSCC的患者(其在先前的抗-PD-(L)1治疗中是难治性的和进行性的，或者对抗PD-1治疗超过8周未能获得响应或肿瘤消退)以接受SEQ IDNO：1的融合蛋白与派姆单抗组合。该人群中的患者如下：

第1组(群组1和群组2)将由具有当前SD(至少12周)或部分响应(PR)的所有患者组成，在≥8周内没有肿瘤尺寸的进一步减小或进一步响应(即，PR并且没有进一步改善)。

第2组(群组3和群组4)将由在抗-PD-(L)1治疗≥8周后具有进行性疾病(PD)而没有对抗-PD-(L)1治疗的先前响应，或在SD或PR实现最佳响应后和在抗-PD-(L)1治疗≥8周后具有当前PD的患者组成。

HNSCC被选为典型癌症，因为在这一难以治疗且没有有效的治疗选择的患者群体中存在高度未满足的需求，并且由于以下多种原因：1)已证明的派姆单抗疗效且最近批准用于先前铂经历的复发或转移性HNSCC，2)在一部分患者中易于在容易接近的肿瘤部位进行连续活检，和3)对SEQ ID NO：1的融合蛋白和派姆单抗的组合的响应方便和易于评估。然而，如果观察到疗效或响应，则可以在许多不同的癌症中测试该组合。

本研究将与免疫肿瘤网络(ION)合作进行，后者将执行与临床位点的监督和管理、医疗监测和实验室分析服务相关的活动，但不限于此。

剂量选择

派姆单抗

200mg Q3W的派姆单抗剂量是治疗HNSCC患者(Keytruda USPI)的批准剂量。

SEQ ID NO：1的融合蛋白

本研究中的所有患者将在每个3周治疗周期的第一周的第1天至第5天以3μg/kg的日剂量连续5天给予SEQ ID NO：1的融合蛋白。

使用SEQ ID NO：1的融合蛋白的首次人体(FIH)临床研究已经开始并且目前正在进行。本研究在患有晚期实体瘤的患者中进行，所述患者对已知提供临床益处的疗法是难治的或不耐受的。在重复周期中通过每天30分钟的静脉内(IV)输注对患者施用SEQ ID NO：1，持续5天，随后是治疗停止期。

除了在第一个治疗周期(14天)期间外，每21天重复给药。来自FIH研究中接受0.1至3.0μg/kg/天SEQ ID NO：1的融合蛋白的研究参与者的中期数据显示全身暴露于SEQ IDNO：1的融合蛋白的剂量成比例增加且循环NK细胞和CD8⁺T细胞的剂量依赖性增加，且对Treg具有最小的和非剂量依赖性的作用。在3μg/kg剂量水平下(n＝8)，3级发热性中性粒细胞减少症和3级低白蛋白血症各有一例事件符合剂量限制性毒性(DLT)的方案定义。随后对DLT定义进行了修订，以放宽DLT标准并允许继续剂量递增。

3μg/kg的SEQ ID NO：1的融合蛋白的预期药效学效应和有利耐受性的组合支持在组合疗法中评估此剂量。

总体研究设计和计划

该研究将评估SEQ ID NO：1的融合蛋白组合派姆单抗在用抗PD-(L)1抗体(派姆单抗或纳武单抗)治疗而未实现CR时的抗肿瘤疗效。

该研究是与ION协作的多中心，2期，开放标签治疗研究。患者在入组本研究之前必须接受抗PD-(L)1治疗。入组本研究后，将SEQ ID NO：1的融合蛋白与派姆单抗施用于4组接受抗PD-(L)1治疗的晚期、复发性和/或转移性HNSC患者，其当前的响应如下：

·组群1：SD，根据RECIST标准定义为SD≥12周；

·组群2：PR而没有肿瘤大小的进一步减小或进一步响应≥8周(即，PR且没有进一步改善)；

·组群3：在抗PD-(L)1≥8周之后没有对抗PD-(L)1治疗的先前响应的PD，或

·组群4：在先前实现SD或PR的最佳响应之后和在抗PD-(L)1治疗≥8周之后的当前PD。

向患者施用SEQ ID NO：1的融合蛋白和派姆单抗的组合。为简化起见，将4个组群的患者组合并成2个组：

·第1组将由当前SD或PR的患者(组群1和组群2)组成，这些患者没有进展或没有进一步显示肿瘤尺寸的减小。

·第2组由具有PD的患者组成(组群3和组群4)。

在筛选程序完成后且在第一次施用组合方案之前，在进入研究时将需要基线肿瘤活检以评估每个患者的肿瘤特征，以尽力鉴定患有可能具有有限派姆单抗疗效或对抗PD-1/SEQ ID NO：1融合蛋白组合的潜在响应的肿瘤的患者。评估肿瘤中肿瘤浸润性T细胞和其它白细胞的数量和特征，并定量评估PD-L1表达、与响应或响应缺乏相关的基因印记，并进行测序以确定可能作为T细胞靶标的非同义基因突变的数量。

患者还将在C1D12或在从C1D8到C1D19的任何时间进行治疗后(第二次)的活检，以评估向治疗方案中添加SEQ ID NO：1的融合蛋白是否改变TME以及治疗(免疫药效学)上的什么变化倾向于对组合的响应。

研究计划对组1和组2分别入组19名和12名可评估患者。根据患者对先前治疗的响应，在入组时确定入组到每组中每个组群的患者的数量。有可能将感兴趣的特定组群扩展到每组最多50名患者。

派姆单抗将根据200mg固定剂量IV Q3W的标准方案施用。将以3μg/kg的日剂量IV施用SEQ ID NO：1的融合蛋白，在每个3周治疗周期的第一周的第1天至第5天连续5天每天给与。

SEQ ID NO：1的融合蛋白可以继续直到毒性发生。如果出现归因于SEQ ID NO：1的融合蛋白的毒性，将保持派姆单抗和SEQ ID NO：1的融合蛋白二者的给药。在从符合剂量保持标准的AE中恢复后，患者可以在随后的周期中与医学监查员咨询恢复全剂量的派姆单抗和全剂量或减少剂量的SEQ ID NO：1的融合蛋白，或者可以停止研究。派姆单抗将继续Q3W直至终止标准得到证实；不允许对派姆单抗进行剂量调整。可以允许SEQ ID NO：1的融合蛋白从3μg/kg/天至1μg/kg/天的剂量减少。

对治疗有响应的肿瘤患者将继续直至以下：

·确认出现进展(经与ION和Alkermes医学监测员达成共识，可允许耐受治疗并获得临床益处的患者继续研究长达1年；

·直至出现不可接受的毒性；

·出现其他中止标准。

安全性和耐受性将使用不良事件的标准通用术语标准(CTCAE)v5.0标准进行评估和报告。安全性将由研究主要研究者(PI)、参与站点PI、ION协同中心PI和工作人员以及Alkermes的代表进行监测。SRC章节中描述了与安全审查委员会(SRC)有关的详细信息，包括参与者、会议频率和触发临时会议的标准。

如果观察到的不可接受的AE是已知的派姆单抗和/或SEQ ID NO：1的融合蛋白的典型毒性，则将考虑以下：(1)修订方案合格性要求以降低毒性的可能性，(2)修改剂量或时间表，或(3)假设本研究中的患者将患有致命性疾病并很少有其它治疗选择，允许研究按照设计继续进行。在这种情况下，需要评估风险/利益比。

如果考虑非预期的、不可接受的AE与同时施用SEQ ID NO：1的融合蛋白和派姆单抗有关，则PI、参与站点PI、ION协同中心PI和工作人员以及Alkermes的代表将考虑修订方案合格性要求以降低毒性的可能性，或者可以考虑允许研究根据该人群的风险/利益比按照设计继续进行。

研究设计示意图如图2和图3所示。

肿瘤成像和疾病的评估

为了本研究的目的，基线扫描必须在开始治疗前28天内进行。除基线扫描外，第一研究中成像时间点将在首次给药后6周(±7天)进行，然后在此后的每个第二周期之前的7天内进行，或者如果在患者进行研究的同时临床指示时更频繁地进行。

响应从PD或SD转换为PR或从PR转换为CR的患者将在响应定义扫描后6周进行肿瘤评估的确认性扫描。如果患者在确认性扫描后继续研究，则患者将按照常规时间表接受扫描。此后，肿瘤评估的时机将取决于患者是否继续使用研究药物。

如果具有根据RECIST v1.1的研究者确定的确认CR的患者1)在停止治疗之前已经用派姆单抗和SEQ ID NO：1治疗至少24周，和2)在宣称初始CR的日期之后接受至少2次用派姆单抗和SEQ ID NO：1的治疗，则可以停止研究药物。

如果放射成像显示PD，在等待放射学确认进展的同时，如下所述可在之后约4-6周由该位点重复肿瘤评估以确认PD而选择继续治疗。如果与证实PD的初始扫描相比，重复成像显示肿瘤负荷减少，则可以按照治疗日程继续治疗。

累积的证据表明，尽管有PD的初始证据，但少数用免疫疗法治疗的患者可获得临床益处。尽管具有最初的放射学进展，但允许继续治疗考虑到一些患者在免疫治疗开始后的最初几个月内可能会出现短暂的肿瘤发作，但随后会出现疾病响应。只要符合以下标准，将允许患者继续治疗超过初始RECIST v1.1-定义的PD：

·研究者评估的临床益处，且无快速疾病进展。

·通过ION和Alkermes医学监测员(或指定人员)与研究者的讨论所确定的，患者继续符合相关适格标准。

·稳定的表现状态。

·患者耐受研究治疗。

·进展后的治疗不延迟即将发生的干预以预防疾病进展的严重并发症(例如，CNS转移)。

应与ION和Alkermes医学监测员(或指定人员)讨论在初始研究者评估的进展后继续治疗的决定，并记录在研究记录中。应在6周后的下一次预定成像评估时进行随访扫描，以确定肿瘤尺寸是否减小或是否具有继续的PD。临床益处的评估应通过临床判断来平衡，即关于患者是否临床恶化并且不太可能从继续治疗中获得任何益处。如果研究者认为患者通过继续治疗继续获得临床益处，则患者应继续参与研究并根据评估的计划继续接受监测。

在确定肿瘤负荷是否增加或减少时，研究者应考虑所有目标病变和非目标病变。在通过放射成像确定疾病进展的第一个证据之后继续研究药物的决定由研究者基于表1中所述患者的临床状态决定。

如果患者通过以下标准定义为临床稳定，则可在等待确认PD的同时接受研究药物：

·没有迹象和症状(包括实验室值的恶化)表明疾病进展。

·ECOG性能状态没有下降。

·疾病没有快速进展。

·关键解剖部位无需要紧急替代医疗干预的进行性肿瘤(如脊髓压迫)。

表1：肿瘤成像/疾病进展评估

缩写：CR＝完全缓解；NA＝不适用；PD＝进行性疾病；PR＝部分响应；RECIST＝实体瘤响应评估标准；SD＝稳定病情。

^a另外临床稳定的患者可根据研究者判断继续使用研究药物。即使患者另外地保持稳定，如果在最初确认进展后肿瘤负荷增加25％或更多，则停止研究药物。

^b将在基线、9周时和每3个周期之前进行肿瘤成像/评估。

本研究将使用修订后的RECIST v1.1指南中提出的新的国际标准评估用于发表目的的响应和进展。恶性***的情况中肿瘤病变的最大直径(一维测量)和最短直径的变化将用于RECIST标准。

通常对于免疫疗法，肿瘤在尺寸减小之前表现为更大。如果SEQ ID NO：1的融合蛋白驱动NK和CD8+T细胞进入肿瘤，这可能是特别相关的。鼓励临床医生考虑这种可能性，以避免太快停止潜在有效的免疫治疗。

定义

毒性可评估：自同意时起，所有患者的毒性均可评估。

客观响应可评估：只有那些在基线时存在可测量疾病，已经接受至少一个治疗周期，并且已经对其疾病进行了再评估的患者才被认为是响应可评估的。这些患者将根据下述定义对其响应进行分类。(注：在第1周期结束前表现出客观疾病进展的患者也将被认为是可评估的。)

可评估的非目标疾病响应：在基线时存在可评估但不符合可测量疾病定义的病变，已接受至少一个治疗周期且已对其疾病进行再评估的患者将被视为可评估非目标疾病。响应评估将基于病变的存在、不存在或明确进展。

疾病参数

可测量的疾病：为了本研究的目的，根据RECIST v1.1标准定义可测量的病变。所有肿瘤测量必须以mm(或厘米的十进制分数)记录。注：位于先前照射区域中的肿瘤病变可能被认为或不被认为是可测量的。

恶性***：为了被认为是病理性扩大和可测量的，当通过计算机断层扫描(CT)进行评估时，***的短轴必须为≥15mm(CT扫描切片厚度建议不大于5mm)。在基线和随访时，仅测量和跟踪短轴。

不可测量的疾病：所有其他病变(或疾病部位)，包括小病变(最长直径<10mm或病理***短轴≥10至<15mm)，均被视为不可测量的疾病。骨病变、柔脑膜疾病、腹水、胸膜/心包积液、皮肤/肺***炎、炎性乳腺疾病和腹部肿块(未通过CT或磁共振成像[MRI]跟踪)被认为是不可测量的。

注：符合放射学定义的简单囊肿标准的囊肿性病变不应被认为是恶性病变(既不是可测量的也不是不可测量的)，因为根据定义，它们是简单囊肿。如果它们符合上述可测量性的定义，则认为代表囊性转移的“囊性病变”可被认为是可测量的病变。然而，如果在同一患者中存在非囊性病变，则优选选择这些病变作为目标病变。

目标病变：应将每个器官最多2处病变和代表所有涉及器官的5处病变的所有可测量病变确定为目标病变，并在基线时记录和测量。目标病变应根据其大小(具有最长直径的病变)选择，代表所有涉及的器官，但另外应是允许其自身进行可再现的重复测量的病变。可能的情况是，偶而最大的病变本身不能进行可再现的测量；在这种情况下，应该选择可以重复测量的次最大的病变。计算所有目标病变的直径总和(对于非结节病变的最长直径，对于结节病变的短轴)，并报告为基线直径总和。如果在总和中包括***，则仅将短轴添加到总和中。基线总和直径将用作参考以进一步表征疾病的可测量维度中的任何客观肿瘤消退。

非目标病变：所有其他(或疾病部位)，包括5个目标病变上和超过5个目标病变的任何可测量病变，均应确定为非目标病变，并也应在基线时记录。无需对这些病变进行测量，但在整个随访过程中应记录每个病变的存在、不存在或罕见的明确进展情况。

评估可测量的疾病的方法

应使用直尺或卡尺以公制符号获取和记录所有测量结果。所有基线评估应尽可能接近治疗的开始进行，且在治疗的开始之前不超过4周。

在基线时和随访期间，应使用相同的评估方法和相同的技术表征每个识别和报告的病变。基于成像的评估优于通过临床检查的评估，除非所跟踪的病变不能被成像并且仅可通过临床检查评估。疾病评估允许的方法如下：

·临床检查：对于皮肤病变，建议通过彩色摄影记录，包括估计病变尺寸的标尺。只有当临床病变为浅表病变(例如，皮肤结节和可触知的***)和使用卡尺评估的直径≥10mm(例如，皮肤结节)时，才被认为是可测量的。

·X-线胸片：当X-线胸片上病变被明确定义并被通气肺包围时，可接受为可测量病变。然而，CT是优选的。

·常规CT和MRI：如果CT切片厚度为5mm或更小，则CT扫描可用于测量病变。如果CT扫描的切片厚度大于5mm，则可测量病变的最小尺寸应为切片厚度的两倍。在某些情况下(例如，对于身体扫描)，MRI也是可接受的。对于两种扫描方法，应优化所用扫描序列的技术规范以评估疾病的类型和部位。随访时使用的形式应与基线时使用的形式相同，并且应在相同的脉冲序列上测量/评估病变。理想地，应当使用相同类型的扫描仪，并且图像采集方案应当尽可能地接近先前的扫描。如果可能，应采用屏气扫描技术进行身体扫描。

·正电子发射断层摄影(PET)-CT：组合的PET-CT并不总是具有与RECIST测量一起使用的最佳诊断CT质量。然而，如果该位点可以证明作为PET-CT的一部分进行的CT与诊断性CT(使用IV和口服造影剂)具有相同的诊断质量，则PET-CT的CT部分可用于RECIST测量并且可以与常规CT互换使用，以随着时间准确测量癌症病变。

氟脱氧葡萄糖(FDG)-PET：FDG-PET扫描是任选的，且可用于补充CT扫描以评估进展(特别是可能的“新”疾病)。基于FDG-PET成像的新病变可根据以下算法进行鉴定：

1.基线时FDG-PET阴性，随访时FDG-PET阳性是基于新病变的PD的征象。

2.基线时无FDG-PET，随访时为阳性FDG-PET：如果随访时FDG-PET阳性对应CT确认的新疾病部位，则为PD。如果随访时的阳性FDG-PET未被确认为CT上的新疾病部位，则需要另外的随访CT扫描以确定在该部位是否真正发生进展(如果是，PD的日期将是初始异常FDG-PET扫描的日期)。如果随访时的阳性FDG-PET对应于CT上基于解剖图像未进展的预先存在的疾病部位，则这不是PD。

3.在认为残留放射影像学异常代表纤维化或瘢痕形成的情况下，FDG-PET可用于以类似于活检的方式升级对CR的响应。在这种情况下FDG-PET的使用应在方案中进行前瞻性描述，并得到针对适应症的疾病特异性医学文献的支持。然而，必须承认由于FDG-PET和活检分辨率/灵敏度的限制，两种方法都可能导致假阳性CR。

注：“阳性”FDG-PET扫描病变表示衰减校正图像上摄取大于周围组织摄取的两倍的FDG亲和的扫描病变。

超声不适用于评估病变尺寸，和不应用作测量方法。如果在研究过程中通过超声识别新的病变，建议通过CT或MRI确认。

细胞学和组织学技术可用于区分罕见病例中的PR和CR(例如，肿瘤类型中的残留病变，如生殖细胞肿瘤，其中可保留已知的残留良性肿瘤)。

当可测量的肿瘤已经满足响应或SD的标准时，在治疗期间出现或恶化的任何渗出物的肿瘤起源的细胞学确认是区分响应或SD(渗出物可能是治疗的副作用)和PD所必需的。

响应标准

目标病变的评估

CR：所有目标病变消失。任何病理性***(无论是目标***还是非目标***)的短轴必须减小到<10mm。

PR：以基线直径总和为参考，目标病变直径总和至少减少30％。

PD：目标病变直径总和至少增加20％、以研究中最小总和作为参考(如果研究中最小，这包括基线总和)。除了相对增加20％之外，总和还必须显示出至少5mm的绝对增加。(注：一个或多个新病变的出现也被认为是进展)。

SD：既没有足够的收缩以符合PR的要求，也没有足够的增加以符合PD的要求，以研究时的最小直径总和为参考。

非目标病变的评估

CR：所有非目标病变消失，和肿瘤标志物水平正常化。所有***的大小必须是非病理性的(短轴<10mm)。

注：如果肿瘤标志物最初高于正常上限，则它们必须对于被认为是完全临床响应的患者正常化。

非CR/非PD：一个或多个非目标病变的持续性和/或肿瘤标志物水平维持在正常限度以上。

PD：出现一个或多个新病变和/或现有非目标病变的明确进展。明确的进展通常不应超过目标病变状态。它必须代表总体疾病状态的变化，而不是单个病变的增加。

尽管“非目标”病变的明确进展仅是不寻常的，但在此类情况下应以治疗医师的意见为准，随后应由审查小组(或PI)确认进展状态。

最佳总体响应的评估

最佳总体响应是从治疗开始直到疾病进展/复发记录的最佳响应(以从治疗开始起记录的最小测量值作为PD的参考)。患者的最佳响应分配将取决于测量和确认标准的实现。表2描述了患有可测量的疾病的患者的最佳总体响应，表3描述了患有不可测量的疾病的患者的最佳总体响应。

表2：具有可测量的疾病(即，目标疾病)的患者的最佳总体响应

缩写：CR＝完全缓解；SD＝稳定病情；PD＝进展疾病；PR＝部分响应；RECIST＝实体瘤响应评估标准。

^a仅用于以响应为主要终点的非随机研究。

^b在例外情况下，非目标病变的明确进展可被接受为疾病进展。

注：总体健康状况恶化需要停止治疗而此时没有疾病进展的客观证据的患者应报告为“症状性恶化”。即使在停止治疗后，也应尽一切努力记录客观进展。

有关新病变证据的详细信息，参见RECIST v1.1手稿。

注：出于本试验的目的，将在响应定义测量之后6周而非RECIST v1.1标准中规定的4周时间点确认响应。

表3：具有不可测量的疾病(即非目标疾病)的患者的最佳总体响应

非目标病变	新病变	总体响应
			CR	否	CR
非CR/非PD	否	非CR/非PD<sup>a</sup>
			未全部评估	否	未评估
明确PD	是或否	PD
			任何	是	PD

缩写：CR＝完全缓解；PD＝进展疾病；SD＝稳定病情

^a对于非目标疾病，“非CR/非PD”优于“稳定病情”，因为在一些试验中SD越来越多地用作有效性评估的终点，以不建议没有病变可测量时指定该类别。

响应的持续时间

总体响应的持续时间：从符合CR或PR的时间测量标准(以最先记录的为准)直至客观记录复发或PD的首个日期(以治疗开始后记录的最小测量值作为PD的参考)测量总体响应的持续时间。

从首次满足CR的时间测量标准直至客观记录PD的首个日期测量总体CR的持续时间。

SD的持续时间：SD的持续时间是从治疗开始直到满足进展标准测量，以自治疗开始以来记录的最小测量值(包括基线测量值)作为参考。

实验室评估

将在表4规定的时间点采集用于实验室评估的血液和尿液样品。表10中列出了具有差分的特定全血细胞计数(CBC)、完整血清化学和尿液分析评估。将按照位点的通常程序收集样品，并由位点的当地实验室分析具有差分的CBC、完整血清化学和尿液分析。

用于筛选的实验室测试应在首次剂量前10天内进行。在周期1之后，可以在每个周期的第1天给药前进行给药前实验室程序直达72小时。必须由研究者或有资质的指定人员对结果进行审查，结果在每个研究药物剂量前是可接受的。

如果由于低血红蛋白或其他问题如静脉通路，位点无法收集所有样本，则在访视时应按以下顺序收集样本：

·毒性/安全性样本

·体液(基于血浆和血清)测定

·细胞(基于外周血单核细胞[PBMC])测定。

实验室相关性研究

在指定时间点采集样本用于若干计划的相关研究。许多样品将被处理和存储，以分批运行。当血容量有限时，相关研究将被认为是次于做出临床决定所需的测试。而且，如果收集样本可能对患者造成危险，如果不能处理或分析样品，或者如果确定结果对于实现研究目的而言是非必要的，则可以延迟或省略测试。

活检的相关性研究

必须采集治疗前肿瘤组织(通过切除、切开或芯针进行新鲜活检并足够大以显示组织结构)；如果无法收集治疗前组织(例如，无法访问或存在患者安全问题)，则在申办者同意的情况下可以提交存档标本。为了实现方案目标和研究治疗后TME，必须获得治疗后(第二)活检，但出于患者安全原因，只有在与申办者讨论后才能避开。基于活检的相关研究被认为是探索性的。基于实验室手册中包含的技术考虑因素，采集的样品总数和基于上述考虑因素的相关研究的可行性，对活检样本进行优先排序。

在进行所有筛选评估后和在第1周期，第1周，第1天第一次施用派姆单抗和SEQ IDNO：1的融合蛋白前，收集治疗前活检。如果已获得研究知情同意书或作为常规患者护理的一部分进行活检，则可在第1天开始治疗前最多6周(42天)获得治疗前样本。治疗后(第二)活检将在C1D12的第一个治疗周期期间或C1D8至C1D19的任何时间对相同或相似的肿瘤部位进行。细针抽吸物不允许用于组织取样，但可用于在组织取样之前定位活动性疾病。将根据临床研究中心标准操作规程(SOP)采集活检标本。

肿瘤PD-L1表达和多参数免疫组织化学

由于肿瘤浸润的免疫细胞与临床结果相关，因此将通过IHC评估治疗前肿瘤组织和治疗期间活检组织的浸润，以确定T细胞浸润的程度和性质以及TME的免疫环境。将在基线***固定石蜡包埋的肿瘤样本中定量PD-L1表达。另外，为了进一步表征免疫细胞浸润，还可以通过IHC测定肿瘤的多种其它标志物，包括但不限于CD56和CD16(NK细胞)、CD68、CD8、PD-1、TIM-3和LAG3。

将对来自组织的肿瘤细胞相对于来自全血的非肿瘤细胞的全基因组、全外显子组和RNA测序基因组测序进行谱型分析，以鉴定可能有助于响应或疾病进展的基因组差异并提供对分子异常的认识。如果适用，突变负荷将通过具有HPV序列或暴露于环境因素(如吸烟史)的患者的亚组进行定量和分析。通过RNA测序分析基因表达，并与脱氧核糖核酸(DNA)突变进行比较。可以基于突变状态或表达结果分析目的蛋白质编码基因的蛋白质表达水平。

所有基因组和转录组分析将是回顾性和探索性的。为了确定患者肿瘤的基因组图谱并鉴定基因突变、基因扩增、RNA表达水平和蛋白质表达水平，将评估基因组/转录组图谱与疗效结果之间的相关性。适当地，可通过

或其它TMB分析评估肿瘤突变负荷。

活检的基因表达谱分析

使用nanoString或类似技术进行核糖核酸表达分析，以鉴定与肿瘤T细胞浸润模式和临床响应相关的潜在特征。尽管nanoString技术不区分核酸的来源(肿瘤细胞与淋巴细胞与其它浸润细胞)，但来自未分离的细胞混合物的不同模式可能与临床结果相关。这些基因表达谱可提供另外的详细表型以指导相关性研究。

T细胞克隆性

T细胞克隆性的评估将涉及肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的TCR测序，其中可以获得治疗前和治疗后活检。T细胞受体β链(TCRB)高通量测序将使用immunoSEQ^TM人TCRB(hsTCRB)试剂盒(Adaptive Biotechnologies)对提取的基因组DNA和从固定的肿瘤样品(治疗前和治疗后)扩增的聚合酶链反应(PCR)进行，并使用共享资源设施(Fred Hutchinson CancerResearch Center[FHCRC])或外包给Adaptive Biotechnologies(Seattle)或其他类似承包商在Illumina MiSeq平台上进行测序。

抽血的相关性研究

外周血单核细胞的免疫分型

在研究期间的各个时间点采集血样。在派姆单抗存在下，由SEQ ID NO：1的融合蛋白治疗产生的T细胞(CD3+CD4+CD56-和CD3+CD8+CD56-)和NK细胞(CD3-CD56+)的频率变化将使用全血和/或PBMC通过流式细胞术评估。将样品送至中央免疫监测实验室(CIML)进行分析。这些数据不会用于对本方案做出临床决策。为此，CIML将使用22色全血分型板对全血中的细胞进行免疫表型分析。该板使用针对CD4、CD8、CD45RA、CCR7、CD28、CD127和CD62L的抗体对记忆和幼稚T细胞亚群的绝对数量和比例；使用针对CD127和CD25的抗体对Treg的绝对数量和比例；以及使用针对CTLA-4、PD-1、HLA-DR、Tim-3、LaG-3和TIGIT的抗体对的T细胞的活化状态进行表征并定量的绝对数目和比例。相同的板将评估和定量NK细胞(CD56+CD3-)、NK T细胞(CD56+CD3+)、B细胞(CD19+)、单核细胞(CD16+)、树突细胞(HLA-DR+CD123+或CD11c+)和嗜中性粒细胞(CD14+)的绝对数目。

外周血髓细胞来源的抑制细胞也可以在单独的板中使用HLA-DR、CD11b和CD33以及其它谱系标志物进行评估。

对于表型分析，将在研究药物施用后的时间点对标志物呈阳性的细胞的绝对数目和百分比和/或平均荧光强度(MFI)与基线进行比较，并将变化计算为#后/#基线，％后/％基线或MFI后/MFI基线。

T-和NK-细胞功能测定

为了评估T-和NK-细胞增殖功能，将在PBMC中CD4+和CD8+α/β和γ/δT细胞和CD3-CD56+NK细胞的表型表征的背景下分析细胞内Ki-67表达。

SEQ ID NO：1的融合蛋白对NK细胞功能的影响将使用脱粒标志物CD107a的流式细胞术表示并通过细胞因子(即，IFN-γ和肿瘤坏死因子-α)分泌进行测量。将在SEQ ID NO：1治疗之前和之后比较NK细胞对导致NK细胞脱粒或细胞因子分泌的限定刺激(板结合的抗-CD16、IL12和IL18，和标准NK-刺激细胞系，K562)响应的能力。将评估在未刺激和刺激(板结合的抗CD16、IL-12和IL-18，和标准NK-刺激细胞系，K562)条件下脱粒和细胞因子分泌随时间变化的数据。在考虑背景脱粒和细胞因子分泌后，将给药后的时间点处表达CD107a或细胞因子的CD3-CD56+NK细胞的百分比除以治疗前时间点的结果以确定两者之间的倍数差异。可以测试其它条件和标志物以获得NK细胞和T细胞功能的最佳评估。这些试验将在CIML或华盛顿大学、西雅图或其他签约供应商处进行。

血浆细胞因子测定

促炎性和免疫抑制性细胞因子的血浆细胞因子浓度的变化可与SEQ ID NO：1的融合蛋白的施用相关。这也将用作验证和比较SEQ ID NO：1的融合蛋白与派姆单抗相对于先前研究的治疗效果的重要评估。来自基线和治疗后的样品将在SEQ ID NO：1的融合蛋白施用后4至6小时收集并在多重细胞因子酶联免疫吸附测定(ELISA或Luminex)中进行测试。用于细胞因子的血浆和用于抗药物抗体(ADA)/免疫原性的血清都将在本地处理，分批运送到CIML，并分配到测定位点。

犬尿氨酸/色氨酸比率和血浆精氨酸水平

将在本方案的基线、治疗期间和治疗结束时测量血浆中犬尿氨酸与色氨酸的比率，以在对治疗无临床响应的患者中分析无响应是否可能与增加的Kyn/Trp水平相关。

将在本方案的基线、治疗期间和治疗结束时测量血浆精氨酸水平，以在对治疗无临床响应的患者中分析无响应是否可能与血浆中精氨酸水平增加相关。

SEQ ID NO：1的融合蛋白的免疫原性

监测患者SEQ ID NO：1的融合蛋白的自身抗体的存在和进展。从基线，每个周期的第1天和最后一次治疗后14天评估系列血清样品。

所有符合适格标准，具有可分析样本并接受至少1剂SEQ ID NO：1的融合蛋白的患者将包括在免疫原性分析中。对于完成SEQ ID NO：1的融合蛋白的每个完整周期的所有患者将前瞻性地分析亚组分析。

免疫测试将遵循与SEQ ID NO：1的融合蛋白的每个周期类似的方案。用于评估抗SEQ ID NO：1抗体诱导的血清样品将在预定时间点从每个患者获得。使用Meso ScaleDiscovery平台的有效电化学发光方法将用于检测人血清中针对SEQ ID NO：1的融合蛋白的ADA。每个研究患者的免疫响应诱导的评估将基于给药前和给药后样品结果的比较。将保存剩余血清样品，以便在未来日期进行抗派姆单抗抗体诱导的潜在分析。

注：必须在患者在任何预定日期接受SEQ ID NO:1的融合蛋白之前抽取所需的所有免疫原性样品的血液。

微生物组分析

在基线时从患者收集粪便样品，并通过16S rRNA基因测序和宏基因组学WGS测序用于分类学谱分析。使用标准的家庭粪便收集程序收集并储存粪便样品，并评估肠道微生物群落的景观。分析测序数据并与临床响应进行比较，以确定对治疗的响应或非响应是否可与特定微生物群相关。试验将与Dr.David Fredricks(FHCRC)或其他商定供应商合作进行。

本文提及的专利和科学文献确立了本领域技术人员可获得的知识。本文引用的所有美国专利和公布或未公布的美国专利申请均通过引用并入本文。本文引用的所有公开的外国专利和专利申请在此通过引用并如本文。本文引用的所有其它公开的参考文献、文献、手稿和科学文献在此通过引用并如本文。

实施例2-用SEQ ID NO：1的融合蛋白组合抗PD-1抗体治疗的卵巢癌患者的临床结 果：ARTISTRY-1试验

方法：ARTISTRY-1是正在进行的探索用SEQ ID NO：1的融合蛋白作为单一疗法的静脉内(IV)递送和与抗PD-1抗体派姆单抗组合的治疗的多群组1/2期试验。卵巢癌(OC)患者入组到患有混合抗PD1/PD-L1未经批准的肿瘤类型的患者组群中，所述患者在先前的化疗中进展。OC患者在21天周期的第1-5天接受IV的SEQ ID NO：1的融合蛋白(3μg/kg)和在第1天接受派姆单抗(200mg)。呈现的结果包括抗肿瘤活性(RECIST v1.1)和安全性。为了解肿瘤微环境，采集了治疗前和治疗中的活检样品。

结果：入组了14例主要为铂抗性和重度预处理的OC患者。患者接受了中位数为5(范围，2-11)的既往治疗方案；所有患者先前均接受基于铂的治疗。在13例具有≥1评估的患者中，9例出现疾病控制，4例发生疾病进展。3名BRCA野生型和未抗-PD-1/PD-L1处理的患者发生客观响应，包括1名完全响应，1名部分响应(PR)和1名未经证实的PR。5名患者发生肿瘤负荷降低(表5)。在测试的剂量下，治疗相关的不良事件通常是短暂的和可控的。总之，与SEQ ID NO:1的融合蛋白的组合没有显示出与单独使用派姆单抗已经证实的毒性相比有任何附加毒性。收集正在进行的组群中另外的安全性和有效性数据。SEQ ID NO：1融合蛋白单一疗法也增加1个配对活检中淋巴细胞浸润的标志物(1/1；第2周期的治疗中活检)；CD8⁺T细胞密度和PD-L1肿瘤比例得分分别增加5.2倍和11倍，表明SEQ ID NO：1的融合蛋白对肿瘤微环境的免疫刺激影响，并支持用派姆单抗进一步评估SEQ ID NO：1的融合蛋白的基本原理(图4A-4C)。

表5：卵巢癌患者中响应观察结果的总结

^a由研究者评估。

^b由于结节收缩至<10mm短轴所致，其视为正常。

^c患者目前正在进行试验。

BEV，贝伐单抗；CAP，卡培他滨；CBP，卡铂；CDDP，顺铂；CR，确认的响应；DOC，多西他赛；GEM，吉西他滨；max，最大值；NIR，尼拉帕尼；OR，客观响应；PAC，紫杉醇；PCA，紫杉醇白蛋白；PD，进展疾病；PLD，聚乙二醇化脂质体盐酸多柔比星；SD，稳定病情；TAM，他莫昔芬，TOP，拓扑替康；uPR，未确认的部分响应。

结论：SEQ ID NO:1的融合蛋白和抗PD-1抗体的组合治疗证明了可接受的安全性特征，并通过对复发性OC患者的持久肿瘤收缩和疾病稳定化提供临床活性。

实施例3-在患有晚期实体瘤的患者中皮下施用SEQ ID NO：1的融合蛋白作为单一 疗法和与派姆单抗组合：ARTISTRY-2

方法：ARTISTRY-2(NCT03861793)是一项正在进行的1/2期研究，在有和没有抗PD1抗体派姆单抗的情况下皮下(SC)递送SEQ ID NO：1的融合蛋白。在1期中，在6周导入期期间，以每7天[q7d]或每21天[q21d]的时间表施用组群特异性剂量的SC SEQ ID NO：1融合蛋白，随后后与IV派姆单抗200mg q21d组合。分配给给定组群的每个患者以单剂量水平和q7d或q21d的时间表接受SEQ ID NO：1的融合蛋白。来自剂量递增的安全性、耐受性、剂量限制性毒性(DLT)和药代动力学/药效学。

结果：在7个指定的组群中，38名患者用SEQ ID NO：1的融合蛋白治疗，SC剂量范围为0.3mg至10mg(中位年龄，61.5[28-82]岁；先前治疗的中位数4[0-17]；45％先前用免疫疗法进行治疗)。25患者完成单一疗法并开始组合治疗。治疗持续时间中位数为64.5(1-506)天。对SEQ ID NO：1的融合蛋白的全身暴露随着剂量的增加而增加，导致循环天然杀伤细胞和CD8⁺T细胞的剂量依赖性增加，而对调节性T细胞没有显著影响。总体而言，33名(86.8％)患者发生了治疗出现的不良事件(TEAE)。治疗相关的AE(TRAE；研究者评估)发生在32名(84.2％)患者中，最常见的TRAE如表6所示。1例患者发生严重TRAE，3级肿瘤闪烁，表现为结肠梗阻；尚未达到最大耐受剂量。

表6：最常见的(≥20％)TRAE，按照总体和剂量时间表

^a注射部位反应包括注射部位的红斑、反应、瘙痒、疼痛、肿胀、刺激、炎症和发热。

结论：SC安全性特性与SEQ ID NO：1的融合蛋白的已知和预期的药理学作用一致。如药效学结果所证明的，与IV给药一致，SC施用SEQ ID NO：1的融合蛋白q7d或q21d维持了所需的免疫反应。相对于IV给药，观察到的发热和寒战的潜在较低发生率被认为与通过SC途径达到的较低峰值浓度一致。

实施例4-肿瘤负荷小鼠中的环状排列(cp)IL-2：IL-2Rα融合蛋白与免疫检查点抑 制剂组合

MC38肿瘤负荷小鼠：

下表7中所示的研究设计对于MC38结肠直肠肿瘤模型实施。

表7-针对MC38结肠直肠肿瘤模型进行的研究设计

N＝研究中的小鼠数；na＝不适用；sc＝皮下；ip＝腹膜内

SEQ ID NO：2的融合蛋白是SEQ ID NO：1的融合蛋白的鼠直向同源物。当SEQ IDNO：2与抗PD-1抗体组合时，肿瘤生长抑制(TGI)从单一疗法治疗的45-60％增加到组合治疗的74％。组合治疗也导致2个完全响应(图5A和图5B)。当SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗CTLA-4抗体组合时，TGI从单一疗法治疗的43-60％增加到组合疗法的84％。组合治疗也导致5个完全响应(图6A和图6B)。

总之，结果表明cpIL-2：IL-2Rα融合蛋白和免疫检查点抑制剂(例如，抗PD-1或抗CTLA-4)的组合增强抗肿瘤响应，例如在结肠直肠癌中。

B16F10肿瘤负荷小鼠：

下表8所示的研究对于MC38黑素瘤肿瘤模型实施。

表8-针对B16F10黑素瘤肿瘤模型进行的研究设计

当SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗CTLA-4抗体组合时，TGI从单一疗法治疗的3-36％增加到组合治疗的62％(图7A和图7B)。

EMT-6肿瘤负荷小鼠：

对EMT-6乳腺肿瘤模型进行下表9所示的研究设计。

表9-针对EMT-6乳腺肿瘤模型进行的研究设计

当SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗PD-1抗体组合时，TGI从单一疗法治疗的14-17％增加到组合治疗的43％(图8A和图8B)。当SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗PD-1抗体组合时，TGI从单一疗法治疗的14-17％增加到组合治疗的43％(图8A和图8B)。当SEQ ID NO：2的融合蛋白与抗CTLA-4抗体组合时，TGI从单一疗法治疗的28-31％增加到组合治疗的77％。组合治疗也导致2个完全响应(图9A和图9B)。

虽然已经参考本发明的优选实施方式具体示出和描述了本发明，但是本领域技术人员将理解，在不脱离由所附权利要求所包含的本发明的范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种改变。还应当理解，在不脱离由所附权利要求书所包含的本发明的范围的情况下，这里描述的实施方案并不是相互排斥的，而是可以以各种方式组合。

Claims (34)

1.一种治疗有需要的患者中的癌症的方法，所述方法包括：

i)向所述患者施用治疗有效量的SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体；以及

ii)向该患者施用治疗有效量的免疫检查点抑制剂；

其中步骤(i)在步骤(ii)之前、之后或与其同时进行，

其中所述患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全或部分响应，且

其中所述变体融合蛋白与全长SEQ ID NO：1至少80％相同。

2.如权利要求1所述的方法，其中如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定的，所述患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或正在进行的治疗的完全或部分响应。

3.如权利要求1所述的方法，其中如通过RECIST(实体瘤响应评价标准)标准或根据irRECIST(实体瘤免疫相关响应评价标准)标准所确定的，所述患者先前未实现对免疫检查点抑制剂的先前治疗或对正在进行的治疗的完全响应。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。

5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是派姆单抗。

6.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抗CTLA4抗体。

7.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是伊匹木单抗。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中向所述患者肠胃外施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

9.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中向所述患者静脉内施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

10.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体的治疗有效量是约0.1μg/kg、0.3μg/kg、1μg/kg、3μg/kg、3.5μg/kg、4μg/kg、4.5μg/kg、5μg/kg、5.5μg/kg、6μg/kg、6.5μg/kg、7μg/kg、7.5μg/kg、8μg/kg、8.5μg/kg、9μg/kg、9.5μg/kg、10μg/kg、10.5μg/kg、11μg/kg、11.5μg/kg、12μg/kg、12.5μg/kg、13μg/kg、13.5μg/kg、14μg/kg或14.5μg/kg的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体的剂量。

12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中以约3μg/kg的剂量向所述患者施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中以约3μg/kg的剂量向所述患者静脉内施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中连续5天每天向所述患者施用所述SEQID NO：1的融合蛋白或其变体。

15.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中以约0.3mg、约0.6mg、约1mg、约3mg或约10mg的剂量向所述患者施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

16.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中以约0.3mg、约0.6mg、约1mg、约3mg或约10mg的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

17.如权利要求15或16任一项所述的方法，其中每周一次、每两周一次或每三周一次向所述患者施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体。

18.如权利要求5所述的方法，其中所述派姆单抗以200mg的剂量向所述患者施用。

19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中以200mg的剂量向所述患者静脉内施用派姆单抗。

20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中每三周一次向所述患者施用派姆单抗。

21.如权利要求5所述的方法，其中每三周连续五天每天以约3μg/kg的剂量向所述患者静脉内施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变异体，且

其中以约200mg的剂量每三周一次向所述患者静脉内施用所述派姆单抗。

22.如权利要求5所述的方法，其中以约0.3mg的剂量每周一次的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向所述患者静脉内施用所述派姆单抗，其中在施用所述派姆单抗之前，每周一次以约0.3mg的剂量向所述患者皮下施用作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，持续6周。

23.如权利要求5所述的方法，其中每周一次以约0.6mg的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向所述患者静脉内施用所述派姆单抗，其中在施用所述派姆单抗之前，每周一次以约0.6mg的剂量向所述患者皮下施用作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，持续6周。

24.如权利要求5所述的方法，其中每周一次以约1mg的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向所述患者静脉内施用所述派姆单抗，其中在施用所述派姆单抗之前，每周一次以约1mg的剂量向所述患者皮下施用作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，持续6周。

25.如权利要求5所述的方法，其中每周一次以约3mg的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向所述患者静脉内施用所述派姆单抗，其中在施用所述派姆单抗之前，每周一次以约3mg的剂量向所述患者皮下施用作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，持续6周。

26.如权利要求5所述的方法，其中每三周一次以约1mg的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向所述患者静脉内施用所述派姆单抗，其中在施用所述派姆单抗之前，每三周一次以约1mg的剂量向所述患者皮下施用作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，持续6周。

27.如权利要求5所述的方法，其中每三周一次以约3mg的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向所述患者静脉内施用所述派姆单抗，其中在施用所述派姆单抗之前，每三周一次以约3mg的剂量向所述患者皮下施用作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，持续6周。

28.如权利要求5所述的方法，其中每三周一次以约10mg的剂量向所述患者皮下施用所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，并每三周一次以约200mg的剂量向所述患者静脉内施用所述派姆单抗，其中在施用所述派姆单抗之前，每三周一次以约10mg的剂量向所述患者皮下施用作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，持续6周。

29.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者在先前的免疫检查点抑制剂治疗后未实现完全缓解(CR)。

30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述患者在先前的免疫检查点抑制剂治疗后具有稳定病情(SD)或部分响应(PR)而没有肿瘤大小的进一步减小或进一步响应。

31.如权利要求29和30所述的方法，其中所述先前的免疫检查点抑制剂治疗包含抗PD-1治疗、抗PD-L1治疗和抗CTLA-4治疗中的一种或多种。

32.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其中相对于接受作为单一疗法的所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或所述免疫检查点抑制剂的患者，所述方法对于所述患者导致以下结果中的一种或多种：响应持续时间(DOR)增加；无进展存活期(PFS)增加；进展时间(TTP)增加；和总体存活期(OS)增加。

33.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述癌症选自头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、结肠直肠癌、黑素瘤和乳腺癌。

34.一种试剂盒，其包含在无菌容器中提供的SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体，其可以是适于向受试者施用的药物组合物的形式，和在与所述SEQ ID NO：1的融合蛋白或其变体不同的无菌容器中或在相同的无菌容器中提供的免疫检查点抑制剂。

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