CN114504055A - 一种无抗生素添加的饲料添加剂组合物及猪饲料 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种无抗生素添加的饲料添加剂组合物，按照重量百分比计，包括：凝结芽孢杆菌0.5～5％；酵母细胞壁30～80％；人参5～25％；浙麦冬5～25％；黄芪5～25％。本发明的无抗添加剂组合物实际使用时，可不同程度提高断奶仔猪生长速度、降低料重比和腹泻指数，显著提高断奶仔猪生产性能。本发明的无抗添加剂组合物实际使用时，可以显著提高绒毛高度，降低隐窝深度，提高绒隐比，改善肠道形态。本发明的无抗添加剂组合物实际使用时，可以提高仔猪空肠黏膜中二胺氧化酶、麦芽糖酶活性，保护肠道上皮细胞结构，利于营养物质消化吸收。

Description

一种无抗生素添加的饲料添加剂组合物及猪饲料

技术领域

本发明属于猪饲料研发技术领域，具体是涉及一种无抗生素添加的饲料添加剂组合物。

背景技术

在我国饲料工业全面“禁抗”、养殖业逐步“减抗”的发展态势下，研发饲用微生态制剂、天然植物提取物等安全饲料添加剂及其应用关键技术，以保障畜禽合理的生产性能、减少养殖损失，成为当前我国畜牧科研工作者及企业从业人员的重点工作之一。

凝结芽孢杆菌既可以像乳酸菌属类益生菌一样产酸，又能像芽孢杆菌形成芽孢，具有耐高温高压和易贮藏等优点，是近年来研究的热门益生菌种之一。凝结芽孢杆菌具有调节肠道菌群平衡、促进肠道健康与营养物质的吸收、提升机体免疫力等作用，因其良好的安全性、耐热性、抑菌性等优势，在仔猪饲料替抗应用领域得到了一定的认可与关注。凝结芽孢杆菌已获得美国、欧盟两大食品、药品安全机构的认可，多国将其应用于药品、食品和饲料添加剂等行业，我国于2004年逐渐批准凝结芽孢杆菌在饲料添加剂和其他行业使用。然而，饲用凝结芽孢杆菌至今未在肉禽养殖中规模化应用，因为早期凝结芽孢杆菌产品性价比达不到产业化要求，推广不理想。最近浙江省农科院吴吉安课题组和浙江大学王友明课题组合作，已经筛选出了具有产业化优势的凝结芽孢杆菌菌株，并研发了适宜的发酵和干燥工艺，也初步探明了在主要畜禽动物使用的剂量和确切的效果。但其在与其它添加剂组合使用研究有待于开展。

酵母细胞壁产品含β-1,3/1,6-葡聚糖(GLUCAN)≥30％,甘露寡糖(MOS)≥20％。高分子量的β-l，3-葡聚糖主要以一重和三重螺旋等形式存在，也存在由低分子或者带电荷的分子构成的随机链圈状态。β-1，3/1，6-葡萄糖苷有很强的选择性，仅与特殊的受体相结合，它的受体分子位于巨噬细胞的表面(Engstad等，1994)，可增强巨噬细胞对细菌的吞没、杀死及消化功能。和促进产生分子信号(细胞因子)，从而刺激T淋巴细胞进行反应，也刺激B淋巴细胞，从而产生抑制细菌和病毒的抗体。激发非特异性和特异性免疫反应，提高动物的抗病能力。β-1，3/1，6-葡萄糖苷既能增强非特异性防御功能又可提高特异性免疫效能双重影响。而露寡糖(MOS)，因含有a-1，6等糖苷键而不能为人和单胃动物所利用，但可以通过促进动物后肠有益菌(主要是双歧杆菌和乳酸杆菌)的增殖，提高人和动物的健康水平和免疫能力，它对病源微生物经行识别、粘附和排除，与有害细菌的聚集素结合遮盖它的结合部位，从而干扰有害细菌在肠道内的定植繁殖，减少肠道细菌病的危害。由于甘露寡糖结构与病原菌在肠壁上的受体非常相似，并与类丁质有很强的结合能力，从而避免细菌与肠壁的亲和，一旦甘露寡糖与这些类丁质结合，阻止病原菌附着于肠壁上。有害微生物一般是以葡萄糖作为主要的能源，不能利用甘露寡糖，导致病原菌因不能利用甘露寡糖而缺乏能源，且甘露寡糖不会被消化酶降解，从而携带病原菌通过肠道，可以起到防止病原菌定殖的作用。有益菌如双歧杆菌、乳酸杆菌等则是以寡糖为主要能源，从而调节肠道菌群结构，维护机体健康。它还可通过物理吸附或直接结合，消除和减弱霉菌毒素的毒害作用。

人参，味甘、微苦，微温，归脾肺经，用人参涉及到了扶正益气驱邪、复脉、固脱、养血、生津止渴、止痛、利水、和胃等功效。麦冬，味甘、微苦，微寒，具有润燥生津、清虚热、止咳、养阴生血等功效。黄芪，性微温。归脾胃经，黄芪涉及到了益气固表、利水、止痛、通阳、健脾、调和营卫等功效。《伤寒论》所论人参、黄芪、麦冬补益药，补益力度不同，补益作用各具特色，或益气固脱，或实卫固表，或滋阴润燥，用之得宜，常可收桴鼓之效。

发明内容

本发明提供了一种无抗生素添加的饲料添加剂组合物，该组合物添加在饲料中，能够提高断奶仔猪生长速度、降低料重比和腹泻指数，显著提高断奶仔猪生产性能。

本发明同时提供了一种含有上述饲料添加剂组合物的猪饲料。

一种无抗生素添加的饲料添加剂组合物，按照重量百分比计，包括：

作为优选，所述凝结芽孢杆菌的加入量为0.5～3％。

作为优选，所述酵母细胞壁的加入量为40～70％；更进一步优选为40～60％；进一步优选为45～60％。

作为优选，所述人参、浙麦冬、黄芪各自独立的加入量为10～25％；作为进一步优选，所述人参、浙麦冬、黄芪各自独立的加入量为10～20％。三者加入量可以相同也可以不同，可以根据需要单独进行调整。

作为优选，按照1吨基础饲料需要添加的量计算，包括：

作为优选，所述凝结芽孢杆菌加入量为20g；作为优选，酵母细胞壁加入量1kg；人参、浙麦冬、黄芪的加入量均为300g。

作为优选，所述凝结芽孢杆菌选自中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心的菌保号CGMCCNO.7023的凝结芽孢杆菌。作为进一步优选，批次号：20190311001。

作为优选，所述凝结芽孢杆菌中含凝结芽孢杆菌3.17×10¹¹cfu/g及其代谢产物，芽孢形成率84.7％。所述酵母细胞壁产品以酵母为原料，利用现代的生物技术和工艺设备，经自溶、特异酶解、高速离心分离、喷雾干燥等工艺精制而成的酵母细胞壁多糖，实测含β-1,3/1,6-葡聚糖(GLUCAN)≥33.5％，甘露寡糖(MOS)≥22.2％。

作为优选，所述酵母细胞壁中：β-1,3/1,6-葡聚糖≥30％，甘露寡糖≥20％。

作为优选，所述人参、浙麦冬、黄芪均为粒径为80～200目的粉剂。

本发明提供了一种猪饲料，该猪饲料中含有上述任一项技术方案所述的无抗生素添加的饲料添加剂组合物。

作为优选，所述饲料添加剂组合物的添加量为1000～3000g/吨。

作为优选，全价饲料中含0.5×10⁶cfu/g凝结芽孢杆菌。

作为优选，所述猪饲料为仔猪猪饲料。

与对照组组相比，无抗添加剂组(添加本发明的添加剂组合物)的仔猪生长性能有较大改善，与抗生素组仔猪差异不显著。本发明实验结果表明：本试验条件下，无抗添加剂组合能够使断奶仔猪获得与饲用抗生素较为接近的生长性能；饲粮中含有许多复杂的碳水化合物，这些化合物必须经过机体内的代谢途径和酶促反应才能进行降解，从而更容易被肠道消化吸收，提高饲料利用率。

另外，仔猪肠黏膜上皮细胞来源于隐窝处干细胞的***、增殖、增生和逐步向绒毛顶端的迁移，细胞在迁移过程中逐步完成功能的成熟，这些功能包括正常的消化、吸收和分泌等功能，由此绒毛高度显示肠上皮细胞的功能状况，而隐窝深度则更加反映上皮细胞的增殖和损失更替状况。因此，测定肠绒毛高度、隐窝深度是评估幼龄仔猪肠道发育和功能成熟以及损伤修复的重要标志。本研究表明，无抗添加剂组合仔猪绒毛高度显著大于基础饲粮组，表明无抗添加剂组合具有减少肠道有害菌对肠黏膜的损伤，维持断奶仔猪肠道健康的重要作用，且这一作用效果由于饲料中添加抗生素；这是无抗添加剂组合改善断奶仔猪生长性能的重要作用机理。

麦芽糖酶是仔猪肠上皮细胞合成并分泌进入肠腔，用于分解食糜中二糖、三糖的关键酶之一。由于仔猪肠上皮细胞只能以各种单糖的形式摄入饲料碳水化合物，因此麦芽糖酶对仔猪碳水化合物的营养有关键调控作用，所以麦芽糖酶经常用于反映幼龄仔猪肠道的发育和损伤程度。结果显示：日粮补充无抗添加剂组合的仔猪空肠黏膜的麦芽糖酶活性，与抗生素组差异不显著，且均高于饲喂基础饲粮的仔猪。这一结果表明：无抗添加剂组合与抗生素均有利于维护肠道机械屏障的完整性，有助于保障断奶仔猪的肠道健康。众所周知，肠道大肠杆菌、尤其是致病大肠杆菌所分泌的毒素、崩解的脂多糖等多种有害物质，极易破坏肠黏膜上皮细胞，造成肠上皮渗透性增加，肠道机械屏障完整性受损。本结果证明：日粮补充无抗添加剂组合能够通过抑制肠道有害菌及其可能的有害代谢产物，来减少对断奶仔猪肠道上皮细胞的损伤，且这一作用有明显的剂量效应。

二胺氧化酶活性也用于评估肠道机械屏障的完整性，即判断肠黏膜损伤程度，因为二胺氧化酶与上皮细胞内的核酸和蛋白合成密切相关，是上皮细胞损伤修复与更新的关键调控酶之一。日粮补充无抗添加剂组合的仔猪空肠黏膜的二胺氧化酶活性均显著高于抗生素组和饲喂基础饲粮的仔猪。

与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

本发明的无抗添加剂组合物实际使用时，可不同程度提高断奶仔猪生长速度、降低料重比和腹泻指数，显著提高断奶仔猪生产性能。

本发明的无抗添加剂组合物实际使用时，可以显著提高绒毛高度，降低隐窝深度，提高绒隐比，改善肠道形态。

本发明的无抗添加剂组合物实际使用时，可以提高仔猪空肠黏膜中二胺氧化酶、麦芽糖酶活性，保护肠道上皮细胞结构，利于营养物质消化吸收。

综合各指标结果，饲料中无抗添加剂组合可以替代抗生素使用，且生产性能有更大幅度提高。可以用于生产，解决仔猪易腹泻和生产性能低的问题。

具体实施方式

1材料与方法

1.1试验材料、时间和地点

凝结芽孢杆菌、酵母细胞壁、人参浙麦冬黄芪三合一产品，三个实验用材料均由浙江大学提供。

其中凝结芽孢杆菌(菌株WS4-1获得中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心的菌保号CGMCCNO.7023)，经浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所测定，产品本批次(批次号：20190311001)含凝结芽孢杆菌3.17×10¹¹cfu/g及其代谢产物，芽孢形成率84.7％

酵母细胞壁产品以酵母为原料，利用现代的生物技术和工艺设备，经自溶、特异酶解、高速离心分离、喷雾干燥等工艺精制而成的酵母细胞壁多糖，实测含β-1,3/1,6-葡聚糖(GLUCAN)≥33.5％,甘露寡糖(MOS)≥22.2％。

人参浙麦冬黄芪源自亳州亳爱药业有限公司，120目超微粉碎处理粉剂。

组合比例(用量)为，凝结芽孢杆菌，15-25g/吨添加，按照全价饲料中含0.5×10⁶cfu/g添加，酵母细胞壁1kg/吨饲料，人参浙麦冬黄芪各300克/吨饲料。

抗生素组：选用的抗生素为组合抗生素(吉他霉素50g/t、金霉素75g/t)。

试验饲料：由浙江华腾牧业有限公司提供。

试验动物：挑选(26±1)日龄断奶、平均体重约7.5kg的健康杜长大商品阉公猪。饲养试验时间：2019年5月12日至2019年6月11日，试验期30天。

饲养试验地点：浙江华腾嘉华牧场保育舍。

1.2试验日粮

参照NRC(2004)和中国饲养标准，结合实际而配置。如表1.

表1试验饲粮组成及营养水平

注：*预混料为每千克日粮提供：VA 13 500 IU、VD3 3 500 IU、VE 30.0IU、VK33.0mg、VB1 1.52mg、VB2 4.0mg、VB6 3.0mg、VB12 0.012mg、烟酸40mg、泛酸15mg、氯化胆碱400mg、铁84mg、铜180mg、锌80mg、锰20mg、碘0.48mg、硒0.36mg。(2)消化能为计算值，其余为实测值。

1.3动物选择和试验设计

挑选(26±1)日龄断奶、平均体重约7.5kg的健康(杜×长×大)商品阉公猪。72头，平均分成3个处理组，每个处理组3个重复，每个重复8头试验仔猪。①处理组1：基础饲粮组，即只饲喂基础日粮，且不添加任何抗生素及无抗添加剂组合；②处理组2：抗生素组，基础日粮+组合抗生素；③处理组3：无抗添加剂组，基础日粮+无抗添加剂组合

1.4饲养管理

试验猪群饲养于同一栋猪舍(嘉华牧场7#舍)，自由采食和饮水，饲养管理按常规进行。试验初始，禁食12h(自由饮水)，称重记录，试验期间每周记录饲料消耗量。试验结束后，禁食12h(自由饮水)，称重记录。计算平均日增重、平均日采食量、料重比、腹泻指数等生长性能指标的分析。

1.5屠宰及样品采集

试验结束后，从各处理组选取体重相近、健康状况良好的6头(每个重复2头)试猪进行屠宰试验。宰前12h禁食，自由饮水，称重并记录。取十二指肠、空肠、回肠中段1cm左右，置4％多聚甲醛固定液中，用于制作肠道切片；取盲肠内容物于1.5mL冻存管中，液氮速冻，于-80℃保存待测。取盲肠食糜、空肠及空肠黏膜，进行以下指标测定。

1.6检测指标及方法

试验开始和结束时，试验猪空腹12h后称重，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(A/G)。具体计算方法如下：

平均日增重(g)＝(个体平均末重(kg)-个体平均始重(kg))/天数×1000

平均日采食量(kg)＝各重复群体总采食量(kg)/总天数

料重比＝平均日采食量(kg)/平均日增重(kg)

腹泻指数(％)＝(累计腹泻猪只数×腹泻天数)÷(猪只数×饲养天数)×100。

空肠黏膜二胺氧化酶和麦芽糖酶活性

空肠冲洗干净食糜后，取20cm空肠，用载玻片刮取空肠黏膜，并分成2份，放置于-20℃冰箱中保存。1个月内完成二胺氧化酶和麦芽糖酶活性的测定，二胺氧化酶的检测方法参考Pan等(Pan L,Zhao P F,Ma X K,et al.Probiotic supplementation protectsweaned pigs against enterotoxigenic Escherichia coli K88 challenge andimproves performance similar to antibiotics[J].Journal of Animal Science,2017,95(6):2627-2639.)的报道，麦芽糖酶的检测方法参考程志斌等(程志斌,余冬友,胡小波,等.饲用凝结芽孢杆菌在仔猪生产中的应用研究进展[J].饲料工业,2017,38(23):25-28.)的报道。

空肠绒毛高度与隐窝深度，参考Che等(Che L Q,Xu Q,Wu C,et al.Effects ofdietary live yeast supplementation on growth performance,diarrhoea severity,intestinal permeability and immunological parameters of weaned pigletschallenged with enterotoxigenic Escherichia coli K88[J].British Journal ofNutrition,2017,118(11):949-958.)的方法进行，简单描述如下。空肠样品取出后，在甲醛固定液中固定，随后在二甲苯中漂洗，并用石蜡包埋。将包埋好的样品切割出4个5μm厚的切片，用苏木红-尹红染色，制成最终切片样品。切片样品在尼康双筒目镜(Warsaw公司，波兰)下，放大20倍，测定绒毛高度和隐窝深度。肠绒毛高度是从隐窝开口至绒毛顶端的距离，隐窝深度是基底层至隐窝开口的距离。每张切片至少连续观察测定20根绒毛的高度及其相应的隐窝深度，并计算平均值。

1.7数据处理和统计分析

实验数据采用Excel进行初步整理统计后，再利用SPSS(16.0)统计学软件进行方差分析，采用最小显著差数法(LSD)进行多重比较。以P<0.05作为差异显著性判断标准，结果均以平均数±标准差(X±SD)表示。

2试验结果

2.1对断奶仔猪生长性能的影响

表2对断奶仔猪生长性能的影响

注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，无字母或相同字母表示差异不显著(P≥0.05)。下同。

由表2可知：末重，抗生素组和无抗添加剂组与对照组相比分别提高了3.48％和5.45％，均显著高于对照组(P＜0.05)；平均日增重，抗生素组和无抗添加剂组与对照组相比分别提高5.79％和9.02％，无抗添加剂组显著高于对照组(P＜0.05)；平均日采食量，抗生素组和无抗添加剂组与对照组相比分别提高3.97％和5.90％，无抗添加剂组显著高于对照组(P＜0.05)；料重比，抗生素组和无抗添加剂组相比对照组分别降低1.71％和2.87％，无抗添加剂组组显著低于对照组(P＜0.05)；腹泻指数，抗生素组和无抗添加剂组相比对照组分别降低10.78％，23.69％，均显著低于对照组(P＜0.05)。

2.2对断奶仔猪肠道形态的影响

表3对断奶仔猪肠道形态的影响

由表3可知，绒毛高度，抗生素组与对照组相比降低了3.51％，差异不显著(P＞0.05)，无抗添加剂组与对照组相比提高了16.74％，显著高于对照组(P＜0.05)；隐窝深度，抗生素组与对照组相比提高了5.31％，差异不显著(P＞0.05)，无抗添加剂组与对照组相比降低了7.66％，显著低于对照组(P＜0.05)；绒隐比，抗生素组与对照组相比降低了8.37％(P＜0.05)，无抗添加剂组与对照组相比提高了26.42％(P＜0.05)。

2.3对仔猪空肠黏膜二胺氧化酶、麦芽糖酶活性的影响

表4对仔猪空肠黏膜二胺氧化酶、麦芽糖酶活性的影响

由表4可知，二胺氧化酶活性，抗生素组和无抗添加剂组相比对照组分别提高了12.69％和20.55％，均显著高于对照组(P＜0.05)；麦芽糖酶活性，抗生素组与对照组相比提高了1.36％(P＞0.05)，无抗添加剂组与对照组相比提高了9.31％(P＜0.05)。

Claims (10)

1.一种无抗生素添加的饲料添加剂组合物，其特征在于，按照重量百分比计，包括：

2.根据权利要求1所述的无抗生素添加的饲料添加剂组合物，其特征在于，按照1吨基础饲料需要添加的量计算，包括：

3.根据权利要求1所述的无抗生素添加的饲料添加剂组合物，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌选自中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心的菌保号CGMCCNO.7023的凝结芽孢杆菌。

4.根据权利要求1所述的无抗生素添加的饲料添加剂组合物，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌中含凝结芽孢杆菌3.17×10¹¹cfu/g及其代谢产物，芽孢形成率84.7％。

5.根据权利要求1所述的无抗生素添加的饲料添加剂组合物，其特征在于，所述酵母细胞壁中：β-1,3/1,6-葡聚糖≥30％，甘露寡糖≥20％。

6.根据权利要求1所述的无抗生素添加的饲料添加剂组合物，其特征在于，所述人参、浙麦冬、黄芪均为粒径为80～200目的粉剂。

7.一种猪饲料，其特征在于，该猪饲料中含有权利要求1～6任一项所述的无抗生素添加的饲料添加剂组合物。

8.根据权利要求7所述的猪饲料，其特征在于，所述饲料添加剂组合物的添加量为1000～3000g/吨。

9.根据权利要求7所述的猪饲料，其特征在于，全价饲料中含0.5×10⁶cfu/g凝结芽孢杆菌。

10.根据权利要求7所述的猪饲料，其特征在于，所述猪饲料为仔猪猪饲料。