CN114502184A - 防治冠状病毒感染的包括杜英萃取物的药物和食品组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明是有关于一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的含有杜英叶萃取物作为活性成分的药物组合物、以及一种用于预防或缓解冠状病毒感染的食品组合物。由于杜英叶萃取物对冠状病毒(其为引起哺乳动物呼吸道疾病、消化***疾病、肝脏疾病或脑部疾病的病毒，具体而言是冠状病毒‑19)显示出优异的抗病毒活性，因此其可有效地用于药物及食品中，用于预防、缓解或治疗由冠状病毒感染引起的疾病。
Description
技术领域
本发明是有关于一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的组合物，所述组合物包括杜英(Elaeocarpus sylvestris)萃取物。
背景技术
冠状病毒是在哺乳动物及鸟类中引起呼吸道疾病、消化***疾病、肝脏疾病及脑部疾病的核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)病毒(加拉格尔TM.等人(Gallagher TM.etal.)，病毒学(Virology)，279(2):371-374,2001)。具体而言，在属冠状病毒的病毒中，猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus，TGEV)及猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)是具有极高传染性的病毒，其侵入消化道及消化***，由于呕吐及腹泻而引起脱水及高烧，并且由于高死亡率而造成相当大的经济损失(杜阿尔特M.等人(Duarte M.et al.)，普通病毒学杂志(J Gen Virol)，75(Pt 5):1195-1200,1994)。尽管该些病毒具有极高的死亡率，但尚未像其他病毒感染引起的疾病那样研发出治疗剂。因此，预防病毒感染的疫苗开发研究正在取得进展，但其有效性仍然为低(阿朗索S.等人(Alonso S.et al.)，普通病毒学杂志(J Gen Virol)，83(Pt 3):567-579,2002)。
由冠状病毒引起的冠状病毒疾病2019(Coronavirus disease 2019，COVID-19)或冠状病毒-19(corona-19)是一种由新型冠状病毒(SARS-CoV-2；属冠状病毒科(Coronaviridae)的RNA病毒)引起的呼吸道感染。尽管最初仅知晓其为一种原因不明的呼吸道传染病，但世界卫生组织(World Health Organization，WHO)在2020年1月9日透露，所述肺炎的病因是一种被确认为病原体的新型冠状病毒(SARS-CoV-2，2月11日被国际病毒分类委员会(International Virus Classification Committee)命名)。
COVID-19的病原体是【SARS-冠状病毒-2(SARS-CoV-2)】。国际病毒分类委员会(International Virus Classification Committee，ICTV)于2020年2月11日发表论文，其提出将名称SARS-CoV-2作为COVID-19的病原体，并强调所述病毒类似于2003年流行的严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)。
韩国疾病控制预防中心(Korean Centers for Disease Control andPrevention)经过学术界获得并分析了中国发布的病毒的基因序列，并确认其与源自蝙蝠的类似冠状病毒具有最高同源性(89.1％)。证实与四种人类冠状病毒的同源性低至39％至43％，与MERS的同源性为50％，且与SARS的同源性为77.5％。
当前为全球性问题的COVID-19被定义为由新型冠状病毒(严重急性呼吸道综合征冠状病毒2，SARS-CoV-2)感染引起的呼吸道综合征，并被归类为法定传染病、一级传染病及新传染病综合征的类别，且其疾病代码为U07.1。病原体为SARS-CoV-2，其为属冠状病毒科的RNA病毒，且已知其传播途径为经由飞沫(唾液)及接触。因此，已知病毒是经由咳嗽或打喷嚏产生的飞沫传播的，或者藉由接触被冠状病毒污染的物体且然后接触人的眼睛、鼻子及嘴巴传播的。
已知全球冠状病毒感染的死亡率平均约为3.4％(基于WHO为3.5％)。然而，因国家及年龄而异的死亡率水平各不相同，使得全世界有6％的感染者被登记为死亡，且所述感染主要在老年人、免疫功能低下的患者及有基础疾病的患者中引起严重症状及死亡。
冠状病毒是一种具有螺旋结构及单个正链的RNA病毒，且由总共五种结构蛋白组成，且在该些蛋白中，由于棘醣蛋白(spike glycoprotein)(S蛋白)，在电子显微镜下观察到其似乎有冠(crown)或晕(halo)(斯库曼及菲尔丁(Schoeman and Fielding)，2019)。已知冠状病毒是现有的27KB到34KB的RNA病毒中最大的，并被细分为四组：α、β、δ及γ。在这些亚组中，已知β群具有高度传染性及毒性。SARS-CoV-2入侵时，其表面存在的S蛋白与宿主细胞的血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2，ACE2)结合，且由于ACE2广泛分布在口腔及鼻腔、鼻咽、肺、胃、小肠及大肠的黏膜中，因此通常观察到病毒性肺炎(海明等人(Hamming et al.)，2004年)。
冠状病毒的潜伏期为1至14天(平均4至7天)，且作为诊断标准，自已感染传染病病原体的人的样本中分离出病毒，或者自样本中侦测出特定基因，且然后用于诊断。COVID-19的症状包括轻度至严重的各种呼吸道感染症状，例如发烧、不适(malaise)、咳嗽、呼吸困难及肺炎、以及痰、喉咙痛、头痛、咯血、恶心及腹泻。目前，除了例如液体补充剂及退热药物等保守治疗外，无特定的抗病毒药剂，且世界卫生组织(WHO)宣布，没有证据表明针对SARS-CoV-2的抗体可以保护人们免受COVID-19的再感染及感染，这一点使得研发治疗剂变得更为重要。
杜英(Elaeocarpus sylvestris)是杜英(Elaeocarpaceae)科的一种常绿高大乔木，且分布于包括韩国济州岛在内的亚热带地区以及中国及日本的南部地区。杜英可能是一种活性成分及功效鲜为人知的资源，并且是一种材料差异化程度极高且研发稀有的材料。
然而，迄今为止尚无发布的文献揭露杜英萃取物在预防、减轻或治疗冠状病毒感染(特别是COVID-19)方面是有效的。
[相关技术文件]
韩国注册专利第10-1834872号
发明内容
技术问题
本发明是有关于提供一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
本发明还有关于提供一种用于预防或缓解冠状病毒感染的食品组合物，所述食品组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
本发明的目的并非仅限于上述目的。根据以下描述，本发明的目的将变得更加清楚，并且将藉由在申请专利范围及其组合中描述的手段来达成。
技术解决方案
为实现上述目的，将提供以下解决方案。
本发明的一个方面提供一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
在本发明的一个实施方式中，所述萃取物可为水、C1至C5低级醇或C1至C5低级醇水溶液的萃取物。
在本发明的另一实施方式中，所述萃取物可用30％至95％的乙醇水溶液萃取。
在本发明的再一实施方式中，所述萃取物可用40％至60％的乙醇水溶液萃取。
在本发明的又一实施方式中，所述杜英萃取物可为杜英叶萃取物。
在本发明的又一实施方式中，所述冠状病毒可为选自由猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus，TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemicdiarrhea virus，PEDV)、犬冠状病毒(canine coronavirus)、牛冠状病毒(bovinecoronavirus)、严重急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)及冠状病毒-19(SARS-CoV-2)组成的群组中的一或多者。
在本发明的又一实施方式中，所述药物组合物可包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
在本发明的又一实施方式中，所述药物组合物可以选自由粉末、颗粒、片剂、胶囊及液体组成的群组中的一者的形式口服施用。
本发明的另一方面提供一种用于预防或缓解冠状病毒感染的食品组合物，所述食品组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
[有利效果]
本发明的杜英萃取物可表现出针对冠状病毒的优异抗病毒活性(所述冠状病毒是导致哺乳动物呼吸道疾病、消化***疾病、肝脏疾病及脑部疾病的病毒，具体而言是COVID-19病毒)，且因此可有效地用于预防、缓解或治疗由冠状病毒感染引起的疾病的药物及食品中。
附图说明
图1示出本发明的杜英萃取物在Vero-E6宿主细胞中的冠状病毒感染抑制效果。
图2示出本发明的杜英萃取物在感染冠状病毒的Vero-E6宿主细胞中的病毒复制抑制效果。
图3示出本发明的杜英萃取物对SARS-CoV-2感染仓鼠的SARS-CoV-2棘蛋白结合活性的抑制效果。
具体实施方式
除非另有说明，否则由于本文中使用的表示组分、反应条件及成分含量的所有数字、值及/或表达式皆为近似值(其反映在本质上不同的事物中为获得该些值而出现的量测的各种不确定性)，因此在所有情形中，应理解，所述值被术语“大约(about)”修饰。此外，当在本说明书中规定了数值范围时，此范围是连续的，且除非另外指明，否则包括自所述范围的最小值至最大值的所有值。此外，当此范围指示整数时，除非另外指明，否则所述范围包括最小值与最大值之间的所有整数。
在本说明书中，当所述范围由变量指定时，应理解，所述变量包括在所揭露范围内的所有值，包括在此范围内揭露的端点。举例而言，自“5至10”的范围不仅包括5、6、7、8、9及10，还包括任何子范围，例如6至10、7至10、6至9或7至9，并且应理解，亦包括在本文中揭露的范围内的合适整数之间的任何值，例如5.5、6.5、7.5、5.5至8.5及6.5至9。此外，例如，自“10％至30％”的范围不仅包括包含10％、11％、12％、13％及高达30％在内的所有整数，还包括包含10％至15％、12％至18％或20％至30％的任何子范围，并且应理解，所述范围亦包括在本文中揭露的范围内的合适整数之间的任何值，例如10.5％、15.5％或25.5％。
此外，在本文中使用的术语及缩写将被解释为由本发明所属技术中具有通常知识者通常理解的含义。
本发明是有关于一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的组合物，所述组合物包括杜英萃取物作为活性成分，作为使用杜英萃取物抑制SARS-CoV-2病毒感染及在Vero-E6细胞中复制的实验的结果，以剂量依赖性方式证实了显著的结果。此外，作为在冠状病毒感染的仓鼠模型中证实SARS-CoV-2棘蛋白结合活性(binding activity)的结果，其证实了活性降低极佳，并且证实了对实验动物体温升高及体重减轻的抑制。因此，表明杜英萃取物藉由抑制SARS-CoV-2的棘蛋白结合活性来抑制冠状病毒感染细胞。根据本发明，将有可能研发一种用于预防或缓解冠状病毒感染的组合物，所述组合物在高浓度下无毒性并且具有优异的治疗效果，并且将有可能藉由额外的研究将其研发为保健功能性食品或药物。
本发明提供一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
在本发明的一个实施方式中，”冠状病毒”可为”β冠状病毒”，但本发明并非仅限于此。
在本发明的一个实施方式中，”冠状病毒”可为”SARS-CoV-2(COVID-19)”，但本发明并非仅限于此。
本发明提供一种用于预防或缓解冠状病毒感染的保健功能性食品，所述保健功能性食品包括杜英萃取物作为活性成分。
由于包括2002年流行的SARS、2012年流行的MERS及2019年底至2020年流行的SARS-CoV-2(COVID-19)在内的各种类型的冠状病毒，全世界出现了许多感染及死亡病例。由于冠状病毒是一种RNA病毒，并且由于其性质而容易突变，因此其具有病毒的修饰形式出现的概率高的特性。当Vero-E6细胞感染SARS-CoV-2病毒时，本发明的杜英萃取物表现出以剂量依赖性方式抑制病毒感染及复制的结果，并且抑制了SARS-CoV-2感染仓鼠的体温升高及体重减轻。此外，在SARS-CoV-2感染仓鼠中，杜英萃取物表现出显著抑制SARS-CoV-2棘蛋白结合活性的结果。因此，藉由使用杜英萃取物抑制SARS-CoV-2的棘蛋白结合活性，证实了抑制冠状病毒复制及感染的效果，且因此完成了本发明。
在下文中，将详细描述本发明。
本发明是有关于提供一种萃取用于预防或治疗冠状病毒感染的组合物中的杜英萃取物的方法，所述组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
在本发明中，萃取物是藉由使用本领域已知的萃取及分离方法自天然物质中萃取及分离而获得的，并且本文中定义的”萃取物”是使用合适的溶剂自杜英中萃取的。”萃取物”包括所有的粗萃取物、极性溶剂可溶性萃取物或非极性溶剂可溶性萃取物。作为用于自杜英萃取的萃取物的合适溶剂，可使用任何一种药学上可接受的有机溶剂。作为溶剂，可单独或组合使用各种溶剂，例如蒸馏水、C1至C4醇(例如，乙醇、甲醇、异丙醇及丁醇)、丙酮、***、苯、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、己烷及环己烷。萃取方法可选自热萃取、冷萃取、回流冷却萃取、蒸汽蒸馏、超声萃取、洗脱及压缩。此外，依据目的，萃取物可另外经受传统分馏过程，并可根据传统纯化方法进行纯化。
对制备本发明的萃取物的方法无限制，且可使用本文中揭露的任何方法。举例而言，本发明的组合物中所包括的萃取物可藉由将由上述热水萃取或溶剂萃取经由额外的制程(例如，在减压下蒸馏)而萃取的初级萃取物粉末化并进行冷冻干燥或喷雾干燥来制备。此外，可另外藉由对所述初级萃取物进行各种层析法(例如，硅胶管柱层析、高效能液相层析及薄层层析)来获得纯化的级分(fraction)。因此，在本发明中，萃取物可被理解为涵盖在萃取、分馏或纯化的每个步骤中获得的所有萃取物、分离的化合物、级分及纯化产物、其稀释物、浓缩物及干燥产物的概念。
本发明是有关于提供一种用于预防或治疗冠状病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
本文中所使用的“治疗(treatment)”是指藉由施用本发明的组合物缓解冠状病毒感染的症状或将冠状病毒感染的症状改变为正常状态所涉及的所有动作。据判断，本发明所属领域中具有通常知识者将参照由韩国医学协会(Korean Medical Association)呈现的数据知晓治疗效果的确切标准，并且所述标准可确定用本发明的组合物缓解、改善及治疗冠状病毒感染的症状的程度。
药物组合物可为选自口服制剂、外用制剂、栓剂、无菌注射液及喷雾剂中的一或多者，并且较佳地使用无菌注射液。
本文中所使用的“预防(prevention)”是指藉由施用根据本发明的药物组合物来抑制或推迟冠状病毒感染的发生、扩散及复发的所有动作。
本文中所使用的“治疗有效量(therapeutically effective amount)”是指作为有效预防或治疗由冠状病毒感染引起的疾病的组合物的量的药学上可接受的盐的量。本发明的组合物的治疗有效量可根据包括施用方法、靶向部位及患者的状况在内的各种因素而变化。因此，当将所述组合物应用于人体时，虑及安全性及有效性，应以适当的量施用，并且可根据藉由动物实验确定的有效量来估计用于人体的量。
本文中所使用的“药物有效量(pharmaceutically effective amount)”是指足以以适用于医学治疗的合理受益/风险比治疗疾病且不引起副作用的量。有效剂量可根据包括患者健康状况、疾病类型、疾病严重程度、药物疗效、对药物的敏感性、施用方法、时间及途径、***率、治疗持续时间及混合或同时使用的药物以及在医学领域中众所周知的其他参数在内的参数来确定。本发明的组合物可单独施用或与其他治疗剂联合施用，并且可与另一种治疗剂依序或同时施用，或者以单剂量或多剂量施用。虑及所有上述参数，重要的是以能够以最小量达成最大效果而无副作用的量施用本发明的组合物，并且此量由本领域技术人员确定。
本发明的药物组合物可进一步包括药学上可接受的添加剂。药学上可接受的添加剂可为微晶纤维素、粉状纤维素、羟丙基纤维素、淀粉、糊化淀粉、预糊化淀粉、玉米淀粉、白糖、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、麦芽、乳糖、胶体二氧化硅、聚维酮、欧巴代、合成硅酸铝、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙或滑石。用于本发明的组合物的药学上可接受的添加剂的量相对于所述组合物可为0.1至90重量份，但本发明并非仅限于此。
本发明的药物组合物可包括传统上用于生物制剂的载体、稀释剂或赋形剂、或其组合。药学上可接受的载体不受特别限制，只要其适合于组合物的体内递送即可。举例而言，药学上可接受的载体包括盐水、无菌水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油、乙醇及化合物，所述载体在默克公司(Merck&Co.Inc.)默克索引(Merck Index)第13版中进行了揭露。此外，该些组分中的一或多种组分可在使用前混合，并且可根据需要应用其他传统添加剂，例如抗氧化剂、抑菌剂及缓冲剂。此外，藉由另外添加稀释剂、表面活性剂、分散剂、黏合剂或润滑剂，本发明的药物组合物可制备成可注射制剂(例如水溶液、混悬剂或乳剂)、丸剂、胶囊、颗粒或片剂。本发明的药物组合物较佳地根据组分、患者的疾病及严重程度，使用在《雷明顿药学科学》(Remington’s PharmaceuticalScience)(麦克出版公司(Mack Publishing Company)，宾夕法尼亚州伊斯顿(Easton PA)，第18版，1990年)中呈现的方法作为对应领域的合适方法来制备。
本发明的药物组合物可肠道外(静脉内、皮下、腹膜内或用局部可注射制剂)或口服施用。剂量可依据患者的药剂、性别、健康状况、体重、饮食、施用时间及方法、***率及疾病的严重程度而变化。本发明的组合物的日剂量可为0.0001至10毫克/毫升(mg/mL)，且较佳地为0.0001至5毫克/毫升，所述日剂量可一次施用或分次施用。
作为口服施用的液体制剂，可使用混悬剂、内部使用的液体、乳剂或糖浆。可包括通常使用的简单稀释剂(例如，无菌水、盐水或液体石蜡)以及各种类型的赋形剂(例如，甜味剂、芳香剂以及防腐剂及润湿剂)。肠道外施用的制剂可为冻干剂、无菌水溶液、非水溶剂、乳剂、混悬剂或栓剂。
本发明的药物组合物可与用于治疗冠状病毒感染的传统组合物一起施用，以增加冠状病毒感染治疗效果，并且伴随施用可与传统治疗组合物同时或依序执行。
本发明旨在提供一种用于预防或缓解冠状病毒感染的保健功能性食品组合物，所述保健功能性食品组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
当本发明的杜英萃取物用于保健功能性食品组合物中时，其可与其他食品或食品成分一起使用，并且可根据传统方法适当使用。
除了活性成分之外，组合物的使用可包括营养学上可接受的食品补充剂，并且活性成分的混合量根据使用目的(预防或辅助治疗)适当确定。
在本文中使用的”食品补充剂(food supplement)”是指可补充添加至食品中的构成成分。此乃为制备保健功能性食品的每种制剂而添加的元素，并且可由本领域技术人员适当选择。食品补充剂的实施例包括各种营养素、维生素、电解质、合成及天然香料、着色剂、填充剂、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、酸碱度调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇或碳酸化剂，但本发明并非仅限于此。
此外，本发明的组合物可应用于保健功能性食品。本文中所使用的”保健功能性食品(health functional food)”是指使用具有对人体有用的功能性的原料或组分生产及加工成片剂、胶囊、颗粒、液体、丸剂或粉末形式的食品。”功能性(functionality)”是指获得对健康有用的效果，例如控制人体的营养或生理作用。
本发明的组合物可制备成各种形式的食品组合物，并且制备成任何被识别为保健功能性食品的形式，对此并无限制。当作为食品组合物摄入时，所述组合物的优点在于长期使用药物时不会出现副作用。
本发明的组合物可藉由相关领域中传统使用的方法制备为保健功能性食品，并且可藉由添加在制备中传统使用的原料及组分来制备。此外，可不受限制地应用使用所述组合物制备的保健功能性食品，只要其可以保健功能性食品的形式制备即可。
由于对本发明的组合物可用于的保健功能性食品的类型并无限制，因此包含本发明的杜英萃取物作为活性成分的组合物可藉由混合可根据本领域技术人员的选择而包含在保健功能性食品中的合适的辅助组分及添加剂来制备。可添加杜英萃取物的食品的实施例包括肉、香肠、巧克力、糖果、零食、蜜饯、面包、拉面及其他面条、口香糖、包括冰淇淋在内的乳制品、各种类型的茶、食品饮料、饮料、酒精饮料及维生素复合物。此外，保健功能性食品可藉由将根据本发明的杜英萃取物作为主要成分添加至萃取物、茶或果汁中来制备。
在下文中，将描述本发明的各个方面。
本发明的一个方面提供一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
本发明的另一方面提供一种预防、缓解或治疗冠状病毒感染的方法，所述方法包括给需要预防、缓解或治疗冠状病毒感染的受试者施用有效量的杜英萃取物。
本发明的又一方面提供一种将用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的杜英萃取物。
本发明的又一方面提供杜英萃取物在制备用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的药物中的用途。
在本发明的一个实施方式中，萃取物是水、C1至C5低级醇或C1至C5低级醇水溶液的萃取物。
在本发明的一个实施方式中，萃取物是用30％至95％的乙醇水溶液萃取的。
在本发明的一个实施方式中，萃取物是用40％至60％的乙醇水溶液萃取的。
在本发明的一个实施方式中，杜英萃取物是杜英叶萃取物。
在本发明的一个实施方式中，可不受限制地栽培或购买杜英叶。此外，除了杜英叶之外，还可对包括茎、枝及根在内的整株植物进行萃取。
在本发明的一个实施方式中，较佳地使用水、醇或其混合物作为萃取溶剂。所述醇较佳地为C1至C4低级醇，且所述低级醇较佳地为乙醇。乙醇较佳地(但不限于)为30％至95％的乙醇水溶液，且更佳地为45％至55％的乙醇水溶液。作为萃取方法，较佳地使用振荡萃取(shaking extraction)、索氏萃取(Soxhlet extraction)或回流萃取(refluxextraction)，但本发明并非仅限于此。萃取较佳地藉由加入量为干燥杜英叶量的1至30倍、1至20倍或1至10倍的萃取溶剂来执行。萃取温度较佳地为20℃至100℃，更佳地为20℃至80℃，且最佳地为室温，但本发明并非仅限于此。另外，萃取时间较佳地为1至10天，但本发明并非仅限于此。此外，萃取的次数可为一或多次，但随着萃取的继续，活性成分的产率显著降低，且因此重复5次以上可能不经济。因此，萃取次数较佳地为1至5次，且更佳地为2至5次，但本发明并非仅限于此。
萃取方法是本领域传统已知的方法，且举例而言，可使用利用萃取设备的方法(例如，超临界萃取、亚临界萃取、高温萃取、高压萃取或超声萃取)、或者使用包括XAD及HP-20的吸附树脂的方法。
在此方法中，真空蒸发较佳地使用真空蒸发器或旋转蒸发器，但本发明并非仅限于此。此外，干燥较佳地为减压干燥、真空干燥、沸腾干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，但本发明并非仅限于此。
在本发明的一个实施方式中，冠状病毒是选自由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、犬冠状病毒、牛冠状病毒、严重急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)及冠状病毒-19(SARS-CoV-2)组成的群组中的一或多者。
在本发明的一个实施方式中，冠状病毒是β冠状病毒。
在本发明的一个实施方式中，药物组合物包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
在本发明的一个实施方式中，药物组合物以选自由粉末、颗粒、片剂、胶囊及口服液体组成的群组中的一者的形式制备。
根据本发明的药物组合物包括杜英叶萃取物作为活性成分，并且相对于组合物的总重量，活性成分的含量可为0.1重量％至50重量％，但本发明并非仅限于此。
同时，本发明的药物组合物以药物有效量施用。本文中所使用的术语”施用(administration)”是指将预定材料引入受试者体内，且所述组合物的施用途径可为能够到达靶组织的任何常见途径。施用途径可为腹膜内施用、静脉内施用、肌肉内施用、皮下施用、皮内施用、口服施用、局部施用、鼻内施用、肺内施用或直肠内施用，但本发明并非仅限于此。
术语”受试者(subject)”指所有动物，包括人、大鼠、小鼠及家畜。较佳地，受试者包括包含人类在内的哺乳动物。
本文中所使用的”药物有效量(pharmaceutically effective amount)”是指足以以适用于医学治疗的合理受益/风险比治疗疾病且不引起副作用的量，并且本领域技术人员可根据包括患者的性别、年龄、体重及健康状况、疾病类型、疾病严重程度、药物疗效、对药物的敏感性、施用方法、时间及途径、***率、治疗的持续时间及混合或同时使用的药物、以及在医学领域中众所周知的其他参数在内的参数而轻易地确定有效剂量。然而，为获得较佳的效果，对于成人而言，可以0.0001至1,000毫克/千克(mg/kg)、且较佳地为10至300毫克/千克(体重)的剂量包括本发明的组合物。所述日剂量可一次施用或分次施用。所述剂量不以任何方式限制本发明的范围。
本发明的另一方面提供一种用于预防或缓解冠状病毒感染的食品组合物，所述食品组合物包括杜英萃取物作为活性成分。
杜英萃取物在预防、缓解或治疗冠状病毒感染中的效果如上所述，且当本发明的组合物用作食品添加剂时，杜英萃取物可单独使用或与其他食品或食品成分结合使用，并且可根据传统方法恰当使用。活性成分的混合量可依据使用目的(预防、保健或治疗)适当确定，并且可进一步包括营养学上可接受的食品补充剂。由于本发明的组合物包括来源于天然物质的萃取物及其级分作为活性成分，因此在稳定性方面不存在问题，因此对混合量无大的限制。
本发明的食品组合物可包括一般意义上的所有类型的食品，并且可与此项技术中已知的术语(例如，功能性食品、保健功能性食品或类似物)互换使用。
本文中所使用的术语”功能性食品(functional food)”是指根据韩国关于保健功能性食品的第6727号法案，使用具有对人体有用的功能性的原料或成分生产及加工的食品，并且”功能性”是指为调节人体的结构及功能方面的营养或获得对健康有用的效果(例如，生理作用)而摄入。
此外，本文中所使用的术语”保健功能性食品(health functional food)”是指藉由萃取、浓缩、纯化或混合用作原料或包含在食品成分中用于健康补充目的的特定组分来生产及加工的食品，以及被设计及加工以充分表现出生物调节功能的食品，所述生物调节功能例如为生物防御、生物节律的控制以及藉由所述成分预防及康复人体疾病。用于保健食品的组合物可执行与疾病预防及康复相关联的功能。
对含有本发明的组合物的食品类型并无限制。此外，包括杜英萃取物作为活性成分的本发明的组合物可藉由混合可藉由本领域技术人员的选择而包含在食品中的其他合适的辅助成分及已知的添加剂来制备。可添加杜英萃取物的食品的实施例包括肉、香肠、面包、巧克力、糖果、零食、蜜饯、比萨饼、拉面、其他面条、口香糖、包括冰淇淋在内的乳制品、各种类型的汤、食品饮料、茶、饮料、酒精饮料及维生素复合物，且所述保健功能性食品可藉由将根据本发明的萃取物及其级分作为主要成分添加至萃取物、茶、果冻及果汁中来制备。
此外，可应用于本发明的食品可包括所有类型的食品，例如，特殊营养食品(例如，牛奶配方、婴儿/幼儿食品等)、加工肉制品、鱼肉制品、豆腐、橡子冻(acorn jelly)、面条(例如，拉面、面条等)、健康补充食品、调味料(例如，酱油、豆瓣酱、红椒酱、混合酱等)、调味汁、蜜饯(confectioneries)(例如，零食)、乳制品(例如，发酵牛奶，奶酪等)、其他加工食品、辛奇(kimchi)、腌制食品(各种类型的泡菜、腌菜等)、食品饮料(例如，水果、蔬菜、豆奶、发酵饮料等)以及天然调味料(例如，拉面粉等)。
当本发明的保健功能性食品组合物以食品饮料的形式使用时，其可如普通饮料般含有各种甜味剂、调味剂或天然碳水化合物作为附加成分。此外，本发明的组合物可含有各种营养物、维生素、电解质、调味剂、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、酸碱度调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇或碳化剂。除此之外，本发明的组合物可含有用于生产天然果汁、水果饮料及蔬菜饮料的果浆。
实施例
在下文中，将参照实施例、实验例及制备例进一步详细描述本发明的构成及效果。提供该些实施例、实验例及制备例仅为例示本发明，但本发明的范围不受实施例的限制。
实施例1、制备杜英萃取物
在购买、干燥及切碎原产于韩国济州岛的杜英叶后，将100千克(kg)杜英叶用2,000升(L)50％乙醇在60℃下萃取了16小时，进行了过滤、浓缩、且然后进行了干燥，藉此获得28千克杜英萃取物(产率：28％)。
实验例1、杜英萃取物的病毒感染抑制效果
将Vero-E6细胞在DMEM(-/-)中培养，并在病毒感染实验中以5×105个细胞/孔(cells/well)的浓度接种至12孔板中。将所述细胞在37℃下在CO2培养箱中培养了24小时，且在移除细胞培养基后用1×PBS洗涤了两次。将杜英萃取物经浓度(25、50或100微克/毫升(μg/mL))预处理，并在37℃下在CO2培养箱中培养了2小时。随后，对于病毒感染，移除细胞培养基，并以50pfu/孔(pfu/well)将SARS-CoV-2病毒处理了1小时。然后，移除细胞培养基，向每个孔中加入1.5毫升(mL)培养基，并反应了72小时，且然后确认结果。在此，将已知对治疗SARS-CoV-2病毒有效的5μM瑞德西韦(remdesivir，Rem)及作为疟疾治疗剂的10μM氯醌磷酸酯(chloroquinone phosphate，C.P)设置为比较组来进行实验。
如图1所示，杜英萃取物显示出优异的病毒感染抑制效果，并且所述结果是以剂量依赖性方式达成的。相较于比较组、Rem或C.P，杜英萃取物表现出好得多的结果。
实验例2、杜英萃取物的病毒复制抑制效果
将Vero-E6细胞在DMEM(-/-)中培养，并以5×105个细胞/孔的浓度接种至12孔板中。将所述细胞在37℃下在CO2培养箱中培养了24小时，且然后移除了细胞培养基，并随后用1×PBS洗涤了两次。对于病毒感染，以50pfu/孔将SARS-CoV-2病毒处理了1小时，向每个孔中加入1.5毫升含有一定浓度(25、50或100微克/毫升)的杜英萃取物的培养基，并反应了72小时，然后确认结果。在此，将已知对治疗SARS-CoV-2病毒有效的5μM瑞德西韦(Rem)及作为疟疾治疗剂的10μM氯醌磷酸酯(C.P)设置为比较组来进行实验。
如图2所示，杜英萃取物显示出有效的SARS-CoV-2病毒复制抑制效果，并且所述结果是以剂量依赖性方式达成的。即使在高浓度下，亦显示出抗病毒效果，而无细胞毒性。就病毒复制抑制效果而言，相较于C.P的结果，杜英萃取物的结果是优异的，并且自50微克/毫升或大于50微克/毫升的浓度来看，杜英萃取物的结果优于C.P的结果。然而，所有浓度的杜英萃取物皆示出较Rem略低的复制抑制能力水平。
实验例3、杜英萃取物的抗病毒效果
取6周龄仓鼠，将其随机分组，并驯化1周。用SARS-CoV-2感染所述仓鼠，且在24小时后，以25、50或100毫克/千克的剂量口服施用杜英萃取物4天。在病毒施用前及施用后4天，每天量测仓鼠的体重，并在感染前后量测一次温度。
在病毒施用后的第4天，收集仓鼠的唾液并进行预处理，且然后使用SARS-CoV-2棘RBD纳抗体试剂盒(Spike RBD Nanobody kit)确认了棘蛋白结合活性，藉此量测抗病毒效果。
结果，如图3所示，杜英萃取物显示出呈剂量依赖性的病毒结合活性抑制效果，并且在高浓度下示出统计学上显著的结果(P<0.05)。
实验例4、杜英萃取物的解热效果
COVID-19伴随着由于病毒感染引起的发热，且因此，在实验例3的实验中，藉由在感染的第0天及第4天量测仓鼠的体温，量测了COVID-19症状缓解效果。
结果，如表1所示，当体温因冠状病毒感染而升高时，证实了升高的体温藉由施用杜英萃取物而得到抑制，并且以剂量依赖性方式显示出其降低效果。
[表1]
表1、杜英萃取物对冠状病毒感染仓鼠的升高的温度的抑制效果
实验例5、杜英萃取物的体重减轻抑制效果
COVID-19藉由病毒感染导致体重下降，并且在实验例3的实验中，自感染的第0天至第4天，总共量测仓鼠的体重五次，藉此量测体重减轻抑制效果。
结果，如表2所示，尽管体重因冠状病毒感染而下降，但证实了体重减轻由于施用杜英萃取物(Elaeocarpus sylvestris extract，ESE)而受到抑制，并且以剂量依赖性方式显示出其缓解效果。
[表2]
表2、杜英萃取物对冠状病毒感染仓鼠体重减轻的抑制效果
根据实验例，本发明的杜英萃取物对SARS-CoV-2病毒表现出显著的感染及复制抑制效果。此外，在仓鼠感染病毒后，量测了体重、体温及SARS-CoV-2棘蛋白结合能力，藉此确认抗病毒功效。将实验例放在一起，预期杜英萃取物藉由抑制RNA复制及抑制SARS-CoV-2蛋白结合能力来抑制冠状病毒。本发明的杜英萃取物可被研发为用于预防、缓解及治疗冠状病毒感染的组合物，其即使在高浓度下亦无毒性，并且具有优异的治疗效果，并且作为食品补充剂或添加剂、保健功能性食品或药物可具有巨大的研发潜力。
[制备例]
在下文中，将提供用于制备药物组合物或食品组合物的制备例，其包括根据本发明的实施例1的萃取物作为活性成分。提供以下制备例仅为详细描述本发明，且本发明并非仅限于此。
制备例1：药物组合物的制备
制备例1-1：制备片剂
藉由将10克聚维酮溶解在50克乙醇中制备了结合液体，并将150克活性成分加入结合液体中，然后均匀搅拌。在将130克硅化微晶纤维素、15克交联羧甲基纤维素钠及20克胶体二氧化硅混合后，加入已与活性成分均匀搅拌的结合液体进行造粒制程，随后干燥并造粒成颗粒。向所制备的颗粒中加入15克交联聚维酮，然后混合在一起，并加入3.5克胶体二氧化硅及6.5克硬脂酸镁进行润滑制程，随后制备片剂。
制备例1-2：制备片剂
藉由将19克聚维酮溶解在50克乙醇中制备了结合液体，并将150克活性成分加入结合液体中，然后均匀搅拌。在将143克硅化微晶纤维素、15克交联羧甲基纤维素钠及20克硅酸铝镁(Neusilin)混合后，加入已与活性成分均匀搅拌的结合液体进行造粒制程，随后干燥并造粒成颗粒。向所制备的颗粒中加入15克交联聚维酮，然后混合在一起，并加入5克胶体二氧化硅及8克硬脂酸镁进行润滑制程，随后制备片剂。
制备例1-3：制备片剂
藉由将12.5克聚维酮溶解在50克乙醇中制备了结合液体，并将150克活性成分加入结合液体中，然后均匀搅拌。在将62.5克硅化微晶纤维素、65克乳糖水合物、15克交联羧甲基纤维素钠及20克胶体二氧化硅混合后，加入已与活性成分均匀搅拌的结合液体进行造粒制程，随后干燥并造粒成颗粒。向所制备的颗粒中加入15克交联聚维酮，且然后混合在一起，并加入3.5克胶体二氧化硅及6.5克硬脂酸镁进行润滑制程，随后制备片剂。
制备例1-4：制备片剂
藉由将19克聚维酮溶解在33.5克乙醇中制备了结合液体，并将150克活性成分加入结合液体中，且然后均匀搅拌。在将105克硅化微晶纤维素(硅化微晶纤维素的加入量与主要组分中所含乙醇的量相同)、17.5克交联羧甲基纤维素钠及20克硅酸铝镁(Neusilin)混合后，加入已与活性成分均匀搅拌的结合液体进行造粒制程，随后干燥并造粒成颗粒。向所制备的颗粒中加入17.5克交联聚维酮及33克硅化微晶纤维素，且混合在一起，并加入7.5克胶体二氧化硅及8克硬脂酸镁进行润滑制程，随后制备片剂。
制备例1-5：制备包衣片剂
使用传统的锅包衣***(pan coating system)(
或
)由在制备例1-1至1-4中的每一者中制备的755毫克片剂(含有300毫克活性成分)制备了包衣片剂。
制备例1-6：制备可注射溶液
将1克活性成分、0.6克氯化钠及0.1克抗坏血酸溶解在蒸馏水中，藉此制备100毫升溶液。将此溶液倒入瓶中，且藉由在20℃下将其加热30分钟进行了灭菌。
制备例2：制备保健食品
将1000毫克活性成分、1000毫克柠檬酸、100克低聚糖及1克牛磺酸混合，并加入蒸馏水至最终体积为900毫升。在85℃下搅拌并加热约1小时后，将制备的溶液过滤并放入灭菌的2升容器中，密封并灭菌，藉此制备食品饮料。
Claims (9)
1.一种用于预防、缓解或治疗冠状病毒感染的药物组合物，包括：
杜英萃取物，作为活性成分。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述萃取物是水、C1至C5低级醇或C1至C5低级醇水溶液的萃取物。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述萃取物用30％至95％的乙醇水溶液萃取。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述萃取物用40％至60％的乙醇水溶液萃取。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述杜英萃取物是杜英叶萃取物。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述冠状病毒是选自由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、犬冠状病毒、牛冠状病毒、严重急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)及冠状病毒-19(SARS-CoV-2)组成的群组中的一或多者。
7.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
8.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物选自由粉末、颗粒、片剂、胶囊及口服液体组成的群组。
9.一种用于预防或缓解冠状病毒感染的食品组合物，包括杜英萃取物作为活性成分。
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