CN114478812A - 一种毛木耳多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种毛木耳多糖的提取方法,包括以下步骤:步骤1、粉碎;步骤2、超声波处理;步骤3、酶解:调节毛木耳粉末混液的pH,然后加入复合酶进行酶解处理,得到酶解后的混液;步骤4、灭酶:将酶解后的混液进行灭酶处理,得到灭酶混合物;步骤5、乙醇处理:向灭酶混合物中加入无水乙醇,放入冰箱中,静置过夜,乙醇处理混合液;步骤6、第一次离心;步骤7、第二次离心;步骤8、冷冻干燥;步骤9、计算提取率。使用本发明的方法提取毛木耳多糖,提取率为11%‑15%。本发明使用纤维素酶和木瓜蛋白酶的酶解,进行木耳多糖的提取具有反应条件温和,提取率高,杂质易除,工艺简单的特点,并有利于对制得的多糖更进一步的加工。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域,具体涉及一种毛木耳多糖的提取方法。
背景技术
毛木耳(Auricularia polytricha),也名黄背木耳、大木耳或粗木耳,为担子菌纲,木耳目,木耳科,木耳属中的毛木耳种。广泛分布于我国的河南、陕西、浙江、福建、四川、云南、广西、海南等地区。毛木耳性平味甘,归胃、大肠经,具有滋阴壮阳、清肺益气、补血活血、止血止痛和提高免疫力等功效,用于气虚血亏,四肢搐榻,肺虚咳嗽,咯血,吐血,蚓血,崩漏,高血压病和便秘等。
研究表明毛木耳多糖(Auricularia polytricha polysaccharide,APP)为毛木耳中的主要活性成分。具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗凝血、抗菌、抗辐射、抗突变、降血糖、保肝和增强免疫等多种生物活性。毛木耳多糖具有多种保健功能,可以美白肌肤,抗电磁辐射,抗放射线作用较好,预防雀斑的形成,能对抗由环磷酰胺引起的白细胞降低,是美容美白抗辐射的不二之选。
随着科学技术的快速发展,人们生活水平在不断提高,对食品、保健品、化妆品的要求也越来越高,毛木耳多糖的添加,使得各类产品受到广大消费者的青睐。然而目前国内对毛木耳多糖的提取工艺,多是以酸浸法和碱浸法处理,容易使部分多糖发生水解,破坏多糖的成分和活性结构,减少多糖的提取率,不适用于大规模的提取应用。
发明内容
针对现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供一种新的毛木耳多糖的提取方法,通过改进工艺克服现有提取工艺的缺陷,以适合高效率、大规模的提取应用。
本发明为实现上述目的,提供如下的技术方案:
一种毛木耳多糖的提取方法,包括以下步骤:
步骤1、粉碎:将毛木耳产品干燥处理后,用高速粉碎机粉碎,得到毛木耳粉末;
步骤2、超声波处理:取毛木耳粉末与水混合,超声波处理,得到毛木耳粉末混液;
步骤3、酶解:调节毛木耳粉末混液的pH,然后加入复合酶进行酶解处理,得到酶解后的混液;
步骤4、灭酶:将酶解后的混液进行灭酶处理,得到灭酶混合物;
步骤5、乙醇处理:向灭酶混合物中加入无水乙醇,放入冰箱中,静置过夜,乙醇处理混合液;
步骤6、第一次离心:将乙醇处理混合液离心处理,得到第一沉淀和第一上清液;
步骤7、第二次离心:将第一上清液再次离心后,得到第二沉淀和第二上清液,将第一沉淀和第二沉淀合并,即为毛木耳粗多糖;
步骤8、冷冻干燥:用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干,得到毛木耳多糖的粉末;
步骤9、计算提取率:利用硫酸-苯酚法测量木耳多糖的粉末中毛木耳多糖的含量,根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率。
优选地,所述步骤1中的干燥处理是在70℃下处理至少5h。
优选地,所述步骤1中,毛木耳粉末的粒径为100目。
优选地,所述步骤2中,毛木耳粉末与水的料液比为1:40。
优选地,所述步骤2中,超声波处理的条件为:超声功率为100-300W,超声温度为30-60℃,超声时间为10-60min。
优选地,所述步骤3中,酶解处理的条件为:pH调至5.5-6.0,温度40-50℃,时间1h。
优选地,所述步骤3中,复合酶为重量比为1:1的纤维素酶和木瓜蛋白酶,复合酶与底物的重量比为1:50。
优选地,所述步骤4中,灭酶处理的条件为:在沸水中加热15min。
优选地,所述步骤5中,无水乙醇的体积为灭酶混合物的三倍,冰箱的温度为4℃。
优选地,所述步骤6中,离心的转速为5000r/min,离心时间为15min。
优选地,所述步骤7中,再次离心的转速为5000r/min,离心时间为15min。
优选地,所述步骤9中,硫酸-苯酚法具体为:吸取0.1g/mL的多糖样液1.0mL,加入质量分数为6%的苯酚水溶液1.0mL、浓硫酸5.0mL,震荡混匀,沸水浴中加热15min后迅速冷却,利用紫外分光光度计在490nm处测吸光值,每个样品平行测定3次,根据葡萄糖的标准曲线计算出多糖的浓度,代入公式计算多糖的提取率。
优选地,所述步骤9中,提取公式为:
本发明的有益效果为:
1、本发明通过改进毛木耳多糖的提取工艺,采用酶解的方法,突破了现有以酸浸法和碱浸法处理时容易使部分多糖发生水解、破坏多糖的成分和活性结构,降低了多糖的提取率的问题;采用本发明复合酶解的方法,工艺紧凑,提取过程中多糖不发生水解,不会破坏多糖的成分和活性结构,提高了多糖的提取率,并且加工批量大、适合于规模化生产。
2、使用本发明的方法提取毛木耳多糖,提取率为11%-15%。使用纤维素酶和木瓜蛋白酶进行木耳多糖的提取具有反应条件温和,具备提取率高,杂质易除,工艺步骤简单的特点,并且有利于制得的毛木耳多糖进行更进一步的提纯和加工。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明作进一步说明,但附图中的实施例不构成对本发明的任何限制,对于本领域的普通技术人员,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据以下附图获得其它的附图。
图1为实施例1中超声波功率和超声波时间对木耳多糖提取率影响的等高线示意图;
图2为实施例1中超声波功率和超声波时间对木耳多糖提取率影响的响应面示意图;
图3为实施例2中超声波功率和超声波温度对木耳多糖提取率影响的等高线示意图;
图4为实施例2中超声波功率和超声波温度对木耳多糖提取率影响的响应面示意图;
图5为实施例3中超声波时间和超声波温度对木耳多糖提取率影响的等高线示意图;
图6为实施例3中超声波时间和超声波温度对木耳多糖提取率影响的响应面示意图。
具体实施方式
为了更清楚的说明本发明,对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解,现对本发明的技术方案进行以下详细说明,但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。
实施例中所用试剂如无特殊说明均可从市场常规购得。
下面结合以下实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
一种毛木耳多糖的提取方法,实施步骤如下:
(1)粉碎:对毛木耳产品干燥5h(70℃),用高速粉碎机对木耳进行粉碎,得到毛木耳粉末,粒径为100目。
(2)超声波处理:取毛木耳粉末溶解在水中(料液比为1:40),进行超声波处理,其中处理条件为超声功率为100W,超声温度为30℃,超声时间为40min。
(3)酶解:将上一步得到的混合物的pH调至5.5,然后加入复合酶在50℃下进行酶解1h,其中复合酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶,复合酶与底物的量为1:50(w/w)。
(4)灭酶:将上一步得到的混合物在沸水中加热15min灭酶,得到灭酶混合物。
(5)乙醇处理:将上一步的灭酶混合物加入约3倍体积的无水乙醇,放入温度为4℃的冰箱,静置过夜。
(6)第一次离心:将上一步得到的混合物离心15min(5000r/min),得到第一沉淀和上清液。
(7)第二次离心:将上一步得到的上清液再次离心15min(5000r/min)后,将得到的沉淀与第一沉淀合并即为毛木耳粗多糖。
(8)冷冻干燥:用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干,得到毛木耳多糖的粉末。
(9)提取率:利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为28.7μg/mL,根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为:(28.7×100×40×10-6)×100%=11.5%。
实施例2
一种毛木耳多糖的提取方法,实施步骤如下:
(1)粉碎:对毛木耳产品干燥5h(70℃),用高速粉碎机对木耳进行粉碎,得到毛木耳粉末,粒径为100目。
(2)超声波处理:取毛木耳粉末溶解在水中(料液比为1:40),进行超声波处理,其中处理条件为超声功率为150W,超声温度为40℃,超声时间为50min。
(3)酶解:将上一步得到的混合物的pH调至5.5,然后加入复合酶在50℃下进行酶解1h。其中复合酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶,酶与底物的量为1:50(w/w)。
(4)灭酶:将上一步得到的混合物在沸水中加热15min灭酶,得到灭酶混合物。
(5)乙醇处理:将上一步的混合物加入约3倍体积的无水乙醇,放入温度为4℃的冰箱,静置过夜。
(6)第一次离心:将上一步得到的混合物离心15min(5000r/min),得到沉淀和上清液,沉淀即为粗多糖。
(7)第二次离心:将上一步得到的上清液多次离心15min(5000r/min)后,将得到的沉淀物合并即为木耳粗多糖。
(8)冷冻干燥:用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干,得到毛木耳多糖的粉末。
(9)提取率:利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为33.7μg/mL,根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为:(33.7×100×40×10-6)×100%=13.48%。
实施例3
一种毛木耳多糖的提取方法,实施步骤如下:
(1)粉碎:对毛木耳产品干燥5h(70℃),用高速粉碎机对木耳进行粉碎,得到毛木耳粉末,粒径为100目。
(2)超声波处理:取毛木耳粉末溶解在水中(料液比为1:40),进行超声波处理,其中处理条件为超声功率为200W,超声温度为50℃,超声时间为60min。
(3)酶解:将上一步得到的混合物的pH调至5.5,然后加入复合酶在50℃下进行酶解1h。其中复合酶为纤维素酶和木瓜蛋白酶,酶与底物的量为1:50(w/w)。
(4)灭酶:将上一步得到的混合物在沸水中加热15min灭酶,得到灭酶混合物。
(5)乙醇处理:将上一步的混合物加入约3倍体积的无水乙醇,放入温度为4℃的冰箱,静置过夜。
(6)第一次离心:将上一步得到的混合物离心15min(5000r/min),得到沉淀和上清液,沉淀即为粗多糖。
(7)第二次离心:将上一步得到的上清液多次离心15min(5000r/min)后,将得到的沉淀物合并即为木耳粗多糖。
(8)冷冻干燥:用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干,得到毛木耳多糖的粉末。
(9)提取率:利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为31.3μg/mL,根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为:(31.3×100×40×10-6)×100%=12.52%。
实施例4
一种毛木耳多糖的提取方法,实施步骤如下:
(1)粉碎:对毛木耳产品干燥5h(70℃),用高速粉碎机对木耳进行粉碎,得到毛木耳粉末,粒径为100目。
(2)超声波处理:使用Design Expert软件对上述数据进行分析,确定超声功率为155W,超声温度为44℃,超声时间为53min(料液比为1:40)。
(3)-(8)的方法和上述实施例3一致。
(9)提取率:利用硫酸-苯酚法测量多糖的含量为35.7μg/mL,根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率为:(35.7×100×40×10-6)×100%=14.28%。
发明人将实施例1的方法与常规木耳提取方法(热水法)相比,热水法的提取率不足5%,而且提取温度高,能耗大。此方法提取温度较温和,也不会破坏多糖的结构。
最后应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1、粉碎:将毛木耳产品干燥处理后,用高速粉碎机粉碎,得到毛木耳粉末;
步骤2、超声波处理:取毛木耳粉末与水混合,超声波处理,得到毛木耳粉末混液;
步骤3、酶解:调节毛木耳粉末混液的pH,然后加入复合酶进行酶解处理,得到酶解后的混液;
步骤4、灭酶:将酶解后的混液进行灭酶处理,得到灭酶混合物;
步骤5、乙醇处理:向灭酶混合物中加入无水乙醇,放入冰箱中,静置过夜,乙醇处理混合液;
步骤6、第一次离心:将乙醇处理混合液离心处理,得到第一沉淀和第一上清液;
步骤7、第二次离心:将第一上清液再次离心后,得到第二沉淀和第二上清液,将第一沉淀和第二沉淀合并,即为毛木耳粗多糖;
步骤8、冷冻干燥:用冷冻干燥机将得到的毛木耳粗多糖冻干,得到毛木耳多糖的粉末。
2.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤1中的干燥处理是在70℃下处理至少5h;毛木耳粉末的粒径为100目。
3.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤2中,毛木耳粉末与水的料液比为1:40;超声波处理的条件为:超声功率为100-300W,超声温度为30-60℃,超声时间为10-60min。
4.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤3中,酶解处理的条件为:pH调至5.5-6.0,温度40-50℃,时间1h;复合酶为重量比为1:1的纤维素酶和木瓜蛋白酶,复合酶与底物的重量比为1:50。
5.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤4中,灭酶处理的条件为:在沸水中加热15min。
6.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤5中,无水乙醇的体积为灭酶混合物的三倍,冰箱的温度为4℃。
7.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤6中,离心的转速为5000r/min,离心时间为15min。
8.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤7中,再次离心的转速为5000r/min,离心时间为15min。
9.根据权利要求1所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,其还包括:
步骤9、计算提取率:利用硫酸-苯酚法测量木耳多糖的粉末中毛木耳多糖的含量,根据提取公式计算出毛木耳多糖的提取率。
10.根据权利要求9所述的毛木耳多糖的提取方法,其特征在于,所述步骤9中,硫酸-苯酚法具体为:吸取0.1g/mL的多糖样液1.0mL,加入质量分数为6%的苯酚水溶液1.0mL、浓硫酸5.0mL,震荡混匀,沸水浴中加热15min后迅速冷却,利用紫外分光光度计在490nm处测吸光值,每个样品平行测定3次,根据葡萄糖的标准曲线计算出多糖的浓度,代入公式计算多糖的提取率。
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CN115501132A (zh) * | 2022-06-28 | 2022-12-23 | 广州大学 | 一种毛木耳多糖-锌复合物的制备方法 |
CN116041559A (zh) * | 2022-09-28 | 2023-05-02 | 广州大学 | 一种增强抗氧化性的毛木耳多糖-铁复合物及其制备方法 |
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Non-Patent Citations (1)
Title |
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马昱阳等: ""超声波辅助酶法提取毛木耳多糖工艺条件优化"", 《食品研究与开发》 * |
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