CN114456949A - 一株白僵菌jsha-md912及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株白僵菌JSHA‑MD912及其应用，属于微生物技术领域。该菌株为白僵菌真菌菌株，该白僵菌菌株为Beauveriasp.JSHA‑MD912，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211673，保藏日期为2021年12月24日。本发明还公开了上述白僵菌JSHA‑MD912的应用。本发明的白僵菌JSHA‑MD912，具有很强的溶解无机磷和有机磷的特性，同时具有促生及拮抗植物病原菌的功能，能够用于农业生产和生态改造应用等实践中，能够有效减少化肥和农药的施用，具有广阔的应用前景。

Description

一株白僵菌JSHA-MD912及其应用

技术领域

本发明涉及一株白僵菌JSHA-MD912及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

磷是农业生产中的一个重要限制因素，磷肥作为常用肥料在农业中的大批量使用，也让难溶性磷不断地在土壤中累积。在土壤生态环境中，大部分磷元素通过与金属阳离子结合，以不溶解无机磷或有机磷的形式存在，植物难以直接吸收利用。近年来，我国的功能性溶磷微生物研究还比较少，尤其是在溶磷真菌类群的广泛分离筛选和多样性资源方面，不同类群和不同种属之间的解磷微生物在溶磷作用上也差异明显，使得溶磷微生物肥料的产业化发展受到制约。

尽管真菌促生与拮抗功能的研究和相关真菌资源很多，但大多是单一促生或拮抗作用，并且只是针对某一种植物病原菌的拮抗，具有溶磷、拮抗等多功能菌株资源还较少，无法满足绿色农业和生态应用实践的实际需求。

白僵菌在真菌分类体系中属于半知菌亚门(Deuteromycontina)丝孢纲(Hyphomycetales)丛梗孢目(Moniliales)丛梗孢科(Moniliaoeae)白僵菌属(Beauveria)，广泛分布于全世界。白僵菌属真菌是常见的昆虫寄生菌，寄主范围很广，主要侵染幼虫，有的也见于成虫。孢子在虫体表萌发后穿过体壁进入虫体，致使虫体僵死，呈白色茸毛状至粉末状。分生孢子梗瓶状，可多次分叉，孢子球状或卵状，在密集的孢子梗上成团，形成密实的孢子头。

白僵菌可以存在于多种生态环境中，最多的是作为昆虫病原物在昆虫上被发现报道，拥有广泛寄主范围，能够侵染超过700多个种类的昆虫。白僵菌还可以在土壤中及植物根际存活，也可以内生于植物。它能够以腐生菌丝或休眠的繁殖体存在于土壤或内生于植物中，直到它在周围的微环境中黏附到合适的寄主上。

白僵菌属真菌种类多为有害昆虫寄生菌，并广泛制备成有害昆虫的生防菌剂。但目前该类群中能够对植物病原真菌拮抗或具有溶磷作用的菌株种类很少，同时具备多功能的菌株更是缺少。如果能够筛选出既有溶磷又有拮抗等多功能的白僵菌种类，将为绿色农业和生态环境的实践应用提供重要的资源基础。鉴于此，新的高效多功能白僵菌菌株对克服现有技术和资源不足具有重要价值和意义。

发明内容

本发明的目的之一，是提供一株白僵菌JSHA-MD912。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一株白僵菌JSHA-MD912，该菌株为白僵菌真菌菌株，该白僵菌菌株为Beauveriasp.JSHA-MD912，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：中国湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 20211673，保藏日期为2021年12月24日。

本发明从江苏省淮安市金湖县毛豆根际筛选出具有很强的溶解有机磷和无机磷特性，同时具有促生及拮抗植物病原菌功能的菌株——僵菌 JSHA-MD912，具有以下形态特征：

(1)在PDA培养基平板25℃培养，生长较缓慢，菌落表面有绵毛状物，白色或淡黄色，气生菌丝透明，细胞壁薄且光滑，松散，有时丛生。

(2)菌株分生孢子梗无隔膜，由轮生、致密、透明、细胞壁平滑的产孢细胞团簇组成；产孢细胞合轴分枝，短球状或长颈瓶状；轴顶为人字形，表面呈锯齿状，在上面可见一连串无色，透明，全***的分生孢子，分生孢子呈球形、近球形和椭圆形到圆柱形等形状。

菌株JSHA-MD912的分子***学鉴定：

为了进一步确定菌株JSHA-MD912的分类地位，结合分子生物学方法进行鉴定。首先从培养平板刮取活化菌株JSHA-MD912菌丝，至EP管通过CTAB 法提取菌株JSHA-MD912基因组DNA，以基因组DNA作为模板，采用真菌ITS 通用引物进行PCR扩增。将扩增产物送上海生工公司测序，得到长约512bp 的ITS序列，如SEQ ID NO.3所示。同时将该序列与BlastN比对结果中来源不同的白僵菌属真菌不同种类的ITS序列进行多序列比对分析，利用MEGA7.0软件中的ClustalW进行多序列比对，再采用MEGA7.0中邻接法 (Neighborjoining，NJ)构建***发育树，如图5所示。结果表明，菌株 JSHA-MD912与麻江白僵菌B.majiangensis相似性最高，亲缘关系最近。因此，菌株JSHA-MD912在分子***发育分类学上属于白僵菌。该结果与形态学鉴定特征相符，菌株JSHA-MD912为白僵菌属种类，初步命名为 Beauveria sp.JSHA-MD912。实验结果证明，该菌株具有很强的溶解有机磷和无机磷的特性，同时具有促生及拮抗植物病原菌的功能。

本发明的白僵菌JSHA-MD912的有益效果是：

本发明的白僵菌JSHA-MD912，具有很强的溶解有机磷和无机磷的特性，同时具有促生及拮抗植物病原菌的功能，能够用于农业生产和生态改造应用等实践中，能够有效减少化肥和农药的施用，具有广阔的应用前景。

本发明的目的之二，是提供上述白僵菌JSHA-MD912在土壤溶磷中的应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：上述白僵菌JSHA-MD912在土壤溶磷中的应用。

本发明的白僵菌JSHA-MD912在土壤溶磷中的应用的有益效果是：

本发明的白僵菌JSHA-MD912，可广泛应用于土壤中不能被植物吸收的无效的无机磷和有机磷转化成植物可利用的有效磷过程，可以提高植物可吸收利用的磷元素，增加土壤固定的难溶磷的利用率。

本发明的目的之三，是提供上述白僵菌JSHA-MD912在制备微生物肥料中的应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：上述白僵菌JSHA-MD912在制备微生物肥料中的应用。

本发明的白僵菌JSHA-MD912在制备微生物肥料中的应用的有益效果是：

本发明的白僵菌JSHA-MD912，可以用于制备微生物肥料，在保持活性的情况下，对植物植株的促生长和生态土壤改造起到显著有益的作用，可以促进植物发芽和生根，减少化肥和农药的施用量，提高作物产量和品质。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，在所述微生物肥料中，所述白僵菌JSHA-MD912的活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

采用上述进一步的有益效果是：经过试验发现，在微生物肥料中，白僵菌JSHA-MD912具有上述活菌总浓度，可以更好地实现微生物肥料的溶磷效果。

进一步，所述微生物肥料为液态肥料，其制备方法是：将白僵菌 JSHA-MD912的菌液按2％-5％体积比的接种量，接入马铃薯液体培养基中，在 25℃-30℃、160r/min的条件下，震荡培养7d，即得微生物肥料，其活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

采用上述进一步的有益效果是：本发明的白僵菌JSHA-MD912可以制备液态肥料，具有显著的溶磷效果，既能溶解难溶态无机磷，又能降解难溶态有机磷，利用白僵菌JSHA-MD912自身的代谢能力将不溶态的无机磷素和有机磷素释放出来，大幅度提高菌液或土壤中的有效磷含量。

本发明的目的之四，是提供上述白僵菌JSHA-MD912在制备生防菌剂中的应用。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：上述白僵菌JSHA-MD912在制备生防菌剂中的应用。

本发明的白僵菌JSHA-MD912在制备生防菌剂中的应用的有益效果是：

本发明的白僵菌JSHA-MD912，可以用于制备生防菌剂，对油茶炭疽菌、大豆核盘菌和尖孢镰刀菌均有明显防治效果，能够显著促进植物的生长及产量，使用方便，起效快，便于应用和推广。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

进一步，在所述生防菌剂中，所述白僵菌JSHA-MD912的活菌总浓度为 1×10⁶CFU/mL。

采用上述进一步的有益效果是：经过试验发现，在生防菌剂中，白僵菌 JSHA-MD912具有上述活菌总浓度，可以更好地实现生防菌剂的防治效果。

进一步，所述生防菌剂的制备方法是：将白僵菌JSHA-MD912的菌液按 2％-5％体积比的接种量，接入马铃薯液体培养基中，在25℃-30℃、160r/min 的条件下，震荡培养7d，即得生防菌剂，其活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

采用上述进一步的有益效果是：采用上述方法，可以制备得到生防菌剂，制备方法简单，操作容易，成本低廉，适合规模化推广应用。

附图说明

图1为本发明的实施例1中，菌株JSHA-MD912在有机磷培养基正面的溶磷圈图。

图2为本发明的实施例1中，菌株JSHA-MD912在有机磷培养基反面的溶磷圈图。

图3为本发明的实施例1中，菌株JSHA-MD912在无机磷培养基正面的溶磷圈图。

图4为本发明的实施例1中，菌株JSHA-MD912在无机磷培养基反面的溶磷圈图。

图5为本发明的实施例2中，菌株JSHA-MD912的***发育树。

图6为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912对黄瓜苗促生作用图。

其中，从上至下第一行的三株黄瓜苗为空白对照，从上至下第二行的三株黄瓜苗为菌株JSHA-MD912的促生作用。

图7为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912对大豆核盘菌抑制作用检测的对峙培养图。

图8为本发明的实施例4中，对峙培养空白对照大豆核盘菌菌落图。

图9为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912对尖孢镰刀菌抑制作用检测的对峙培养图。

图10为本发明的实施例4中，空白对照尖孢镰刀菌菌落图。

图11为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912对灰葡萄孢霉抑制作用检测的对峙培养图。

图12为本发明的实施例4中，空白对照灰葡萄孢霉菌落图。

图13为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912对油茶炭疽菌抑制作用检测的对峙培养图。

图14为本发明的实施例4中，空白对照油茶炭疽菌菌落图。

图15为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912发酵液对油茶炭疽菌的抑制效果图。

图16为本发明的实施例4中，空白对照油茶炭疽菌菌落图。

图17为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912发酵液对灰葡萄孢霉的抑制效果。

图18为本发明的实施例4中，空白对照灰葡萄孢霉菌落图。

图19为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912发酵液对尖孢镰刀菌的抑制效果图。

图20为本发明的实施例4中，空白对照尖孢镰刀菌菌落图。

图21为本发明的实施例4中，菌株JSHA-MD912发酵液对大豆核盘菌的抑制效果图。

图22为本发明的实施例4中，空白对照大豆核盘菌菌落图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

实施例1：菌株的分离、纯化

1.1供试材料

1.1.1植物根际土壤样品来源：使用“五点采样法”，在江苏省淮安市金湖县黎城街道，收集毛豆根际土壤。在靠近根处设点，铲去表层1-2cm的土壤后，取毛豆根系周围的土壤约200g，混合装入样品袋中，做好采样地点的经纬度、日期、植物名称等信息记录，如表1所示，并对采样毛豆植株及环境进行拍照。土样带回实验室4℃保存备用。

表1

植物名称	采集地点	经纬度	采样时间
				毛豆	江苏省淮安市金湖县	E118°59′33″N33°2′20″	2020年10月13日

1.1.2培养基

无机磷培养基(g/L)：葡萄糖10g、(NH₄)₂SO₄0.5g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、MgSO₄0.3g、MnSO₄0.03g、FeSO₄·7H₂O 0.03g、酵母膏0.5g、Ca₃(PO₄)₂3g、琼脂16g和蒸馏水1000mL，pH值为6.8-7.0。121℃灭菌30min备用。

有机磷培养基(g/L)：葡萄糖10g、(NH₄)₂SO₄0.5g、NaCl 0.3g、KCl 0.3g、MgSO₄0.3g、MnSO₄0.03g、FeSO₄·7H₂O 0.03g、酵母膏0.4g、卵磷脂0.2g、 CaCO₃5g、琼脂16g和蒸馏水l000mL，pH值为7.0-7.2。121℃灭菌30min 备用。

1.2溶磷真菌的分离筛选

(1)称取10g土样于90mL灭菌水中，于28℃摇床中振荡培养30min，转速为150r/min；

(2)采用梯度稀释法，土壤悬液浓度依次稀释成10^-3、10^-4和10^-5，再依次取100μL分别涂布于无机磷培养基平板和有机磷培养基平板，每种浓度3次重复，28℃恒温暗箱倒置培养；

(3)培养5-7d后，挑取具有溶磷圈的单菌落于无机磷固体平板和有机磷固体平板上进行纯化验证，每个单菌落2次重复，28℃恒温倒置培养；

(4)纯化后对同种作物中形态相似的菌株进行合并保存。

1.3平板解磷能力测定

通过平板测定法，将纯化后的解磷真菌接种于无机磷和有机磷培养基平板上，28℃恒温倒置培养，在第5-7d时采用十字交叉法测定菌落的直径(d) 和溶磷圈的直径(D)，按式(1)计算溶磷指数(SPI)。

SPI＝溶磷圈的直径/菌落的直径式(1)。

1.4结果

菌株JSHA-MD912在有机磷和无机磷培养基上生长7d后，SPI值分别达到1.09和1.35。如图1-图4所示。菌株JSHA-MD912具有很强的溶解有机磷和无机磷的能力。

实施例2：菌株JSHA-MD912的鉴定

菌株形态学鉴定：在净工作台中，用直径6.0mm的无菌打孔器截取新鲜的菌株JSHA-MD912菌块，放于PDA培养基中心处，在28℃恒温下培养。及时观察菌落生长状况、形态、颜色等，并记录菌落的横纵直径。培养第7d 时，挑取菌落边缘的菌丝，置于载玻片上，利用光学显微镜观察菌丝的形态特征，进行形态学鉴定。形态学鉴定参照《真菌鉴定手册》。

菌株JSHA-MD912的形态特征：

(1)在PDA培养基平板25℃培养，生长较缓慢，菌落表面有绵毛状物，白色或淡黄色，气生菌丝透明，细胞壁薄且光滑，松散，有时丛生。

(2)菌株分生孢子梗无隔膜，由轮生、致密、透明、细胞壁平滑的产孢细胞团簇组成；产孢细胞合轴分枝，短球状或长颈瓶状；轴顶为人字形，表面呈锯齿状，在上面可见一连串无色，透明，全***的分生孢子，分生孢子呈球形、近球形和椭圆形到圆柱形等形状。

上述固体培养基由葡萄糖20g、马铃薯200g、琼脂16g和水1L组成，pH 值自然。上述固体培养基在使用前，先于0.1MPa下121℃灭菌20min。

上述液体发酵培养基由葡萄糖20g、马铃薯200g和水1L组成，pH自然。上述原料混合均匀后即得液体发酵培养基。上述液体发酵培养基在使用前，先于0.1MPa下121℃灭菌20min。

菌株JSHA-MD912的分子***发育学鉴定：

(1)待活化的菌株JSHA-MD912生长至铺满PDA培养平板后，用灭菌手术刀刮取菌丝并收集，采用2％CTAB法提取基因组DNA。

(2)使用真菌ITS通用引物进行PCR扩增。上游引物ITS₁如SEQ ID NO.1 所示，5'-tccgtaggtgaacctgcgg-3'，下游引物ITS₄如SEQ ID NO.2所示， 5'-tcctccgcttattgatatgc-3'。PCR反应体系(25μL)：2×Es Taq Master Mix(北京天根生物技术有限公司)12.5μL、DNA模板1μL、上游引物ITS₁和下游引物ITS₄各1μL、dd H₂O 9.5μL，对照加入dd H₂O代替DNA模板。 PCR扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸 1min，35个循环；72℃延伸10min，8℃无穷。扩增产物用1.2％的琼脂糖凝胶电泳检测后,送上海生工公司测序，得到长512bp的序列，如SEQ ID NO.3 所示。

tcctacccttatgtgaacctacctattgttgcttcggcggactcgccccagccggacgcgg actggaccagcggccgccggggaccctcaaactcttgtattatcagcatcttctgaatacgccgc aaggcaaaacaaataaatcaaaactttcaacaacggatctcttggctctggcatcgatgaagaac gcagcgaaacgcgataagtaatgtgaattgcagaatccagtgaatcatcgaatctttgaacgcac attgcgcccgccagcattctggcgggcatgcctgttcgagcgtcatttcaaccctcgacctccct ttggggaagtcggcgttggggaccggcagcacaccgccggccctgaaatggagtggcggcccgtc cgcggcgacctctgcgtagtaatccaactcgcaccggaaccccgacgtggccacgccgtaaaaca cccaacttctgaacgttgacctcgaatcaggtaggactacccgctgaacttaagcatatca(SEQID NO.3)。

(3)将测序结果与NCBI的GenBank中的ITS序列进行比对，选取序列相似性较高的作为参考序列，再用BioEdit软件(version 7.0.9)进行序列比对并手动校正，将处理好的数据通过MEGA6.0软件和测序序列进行多位点序列比对，手动剪切校正序列，选择邻接法(Neighbor-Joining Tree) 构建分子***发育树，鉴定菌株JSHA-MD912的分类地位。构建***发育树，如图5所示。

菌株JSHA-MD912与白僵菌属的麻江白僵菌(B.majiangensis)种类聚为一个分支，为其相近种类，初步鉴定菌株JSHA-MD912为白僵菌属真菌种类。

实施例3：菌株的保藏

将菌株JSHA-MD912进行保藏，该白僵菌真菌菌株为Beauveria sp. JSHA-MD912，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO： M 20211673，保藏日期为2021年12月24日。

实施例4：真菌菌株促生试验

(1)黄瓜试管苗促生评价实验

将实验菌株接种到PDA培养平板活化，28℃培养5d后，菌株菌丝和孢子铺满培养平板备用。其中，PDA平板培养基由200g/L马铃薯、20g/L葡萄糖和16g/L琼脂粉组成。

选用籽粒饱满的中农6号黄瓜种子，首先用10％次氯酸钠消毒5分钟，然后用无菌水冲洗5次；将冲洗好的种子蘸质量百分数为1％的CMC(羧甲基纤维素钠)，然后分别蘸取菌株孢子；将蘸有孢子的种子按10粒/皿放在铺有纱布的培养皿(纱布和培养皿灭菌处理)，滴加灭菌水保湿，培养箱28℃培养4d，长出子叶和根，然后光照培养24h，备用。

取150×15mm试管，灭菌；1/8MS培养基，灭菌；将灭菌后的试管放于试管架上，加入半量灭菌后的1/8MS培养基。1/8MS培养基购自艾美捷科技有限公司(Hygroscopic,USA)。

将上述黄瓜幼苗移种于试管中，1株/管，每株5个重复，放在温室中培养，温度23-25℃，组织培养灯白天、晚上交替光照、黑暗培养，15-20d后收获，测定其鲜重和干重。

(2)实验数据分析

用Excel软件整理数据，DPS软件来进行方差分析。通过式(2)来计算实验菌株对黄瓜试管苗的株高的促生率，鲜重、干重亦同。

实验菌株促生率(％)＝(处理试管苗重量-对照试管苗重量)/对照试管苗重量×100％式(2)。

(3)结果

菌株JSHA-MD912对黄瓜苗生长的影响，如表2和图6所示。

表2菌株JSHA-MD912对黄瓜苗生长的影响

编号	鲜重	干重
			对照(CK)	0.57g±0.005g	0.091g±0.002g
菌株JSHA-MD912	0.768g±0.02g	0.119g±0.01g
			促生率	34.74％±0.043％	30.29％±0.111％

黄瓜试管苗评价试验结果表明，相较于对照，菌株JSHA-MD912对黄瓜苗鲜重和干重的促生率分别为34.74％±0.043％和30.29％±0.111％。

实施例5：菌株拮抗试验

(1)供试病原菌

作物病原菌油茶炭疽菌(Colltotrichum camelliae)、灰葡萄孢霉 (Botrytiscinerea)、大豆核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)，由中国农业科学院植物保护研究所李世东实验室提供。

(2)平板对峙法试验方法

将待测的实验菌株接种到PDA培养平板活化，28℃培养7d后，用打孔器分别取病原菌与待测菌饼，将两菌接种于同一PDA平板上，相距4cm，每组3-5个重复，以单接病原菌为对照，置于28℃培养，7d后测量病原菌朝向实验菌株的菌落半径，按式(3)计算抑制率。

抑制率(％)＝(对照病原菌菌落半径-处理病原菌菌落半径)/对照病原菌菌落半径×100％式(3)

(3)发酵液拮抗试验方法

实验菌株接种到PDA培养基上培养7d左右，从长满菌落的培养平板中取8个直径为5mm的菌饼接种PDB液体培养基中，28℃、200r/min摇床振荡培养培养4d，通过灭菌滤纸过滤来除去菌株的孢子和菌丝体，常温条件下 7830r/min离心10min，用0.22μm的滤膜过滤上清液，制成无菌滤液。再冷却到50℃左右，向90mL PDA培养基中加入10mL实验菌株的无菌滤液，混匀后倒平板。接种植物病原菌到平板的正中央，28℃恒温暗箱培养7d。用十字交叉法测量病原菌的菌落半径来计算其抑菌效果。用Excel 2010软件整理数据，DPS软件来进行方差分析。按式(3)计算对植物病原菌的抑制率。

(4)结果

菌株JSHA-MD912对4种植物病原菌的拮抗作用，如表3、图7-图22所示。以单独接种病原菌培养菌落直径作为对照(CK)。

表3对峙培养对植物病原菌的抑制作用

平板拮抗试验结果表明，菌株JSHA-MD912对油茶炭疽菌、灰葡萄孢霉、大豆核盘菌和尖孢镰刀菌抑菌率分别达到56.58％±0.019％、57.66％± 0.009％、50.5％±0.009％和58.44％±0.017％。

菌株JSHA-MD912发酵液作用病原菌的直径(mm)及抑制率(％)，如表 4所示。以没有加菌株发酵液的病原菌培养生长菌落作为对照(CK)。

表4菌株发酵液作用病原菌的直径(mm)及抑制率(％)

病原菌	油茶炭疽菌	灰葡萄孢霉	大豆核盘菌	尖孢镰刀菌
					菌落直径	59.33mm±0.88mm	35mm±0.58mm	26.67mm±2.4mm	7mm±0.58mm
对照(CK)	71mm±0.58mm	35mm±1.73mm	41.67mm±0.88mm	67.67mm±1.45mm
					抑制率	16.43％±0.012％	0％±0.016％	36.01％±0.057％	89.66％±0.008

菌株发酵液拮抗实验结果表明，菌株JSHA-MD912发酵液对上述4种病原菌抑制率分别为16.43％±0.012％、0％±0.016％、36.01％±0.057％和89.66％±0.008％，对尖孢镰刀菌具有非常强烈的抑制作用(89.66％)，但对灰葡萄孢霉没有抑制活性。

上述试验表明，第一点，本发明的菌株JSHA-MD912可用于土壤溶磷。

第二点，本发明的菌株JSHA-MD912可以用于制备微生物肥料。在所述微生物肥料中，所述白僵菌JSHA-MD912的活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。所述微生物肥料为液态肥料，其制备方法是：将白僵菌JSHA-MD912的菌液按 2％-5％体积比的接种量，接入马铃薯液体培养基中，在25℃-30℃、160r/min 的条件下，震荡培养7d，即得微生物肥料，其活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

第三点，本发明的菌株JSHA-MD912可以用于制备生防菌剂。在所述生防菌剂中，所述白僵菌JSHA-MD912的活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。所述生防菌剂的制备方法是：将白僵菌JSHA-MD912的菌液按2％-5％体积比的接种量，接入马铃薯液体培养基中，在25℃-30℃、160r/min的条件下，震荡培养7d，即得生防菌剂，其活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

综上，本发明的白僵菌JSHA-MD912，具有很强的溶解有机磷和无机磷的特性，同时具有促生及拮抗植物病原菌的功能，能够用于农业生产和生态改造应用等实践中，能够有效减少化肥和农药的施用，具有广阔的应用前景。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 贵州民族大学

<120> 一株白僵菌JSHA-MD912及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

tccgtaggtg aacctgcgg 19

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tcctccgctt attgatatgc 20

<210> 3

<211> 512

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tcctaccctt atgtgaacct acctattgtt gcttcggcgg actcgcccca gccggacgcg 60

gactggacca gcggccgccg gggaccctca aactcttgta ttatcagcat cttctgaata 120

cgccgcaagg caaaacaaat aaatcaaaac tttcaacaac ggatctcttg gctctggcat 180

cgatgaagaa cgcagcgaaa cgcgataagt aatgtgaatt gcagaatcca gtgaatcatc 240

gaatctttga acgcacattg cgcccgccag cattctggcg ggcatgcctg ttcgagcgtc 300

atttcaaccc tcgacctccc tttggggaag tcggcgttgg ggaccggcag cacaccgccg 360

gccctgaaat ggagtggcgg cccgtccgcg gcgacctctg cgtagtaatc caactcgcac 420

cggaaccccg acgtggccac gccgtaaaac acccaacttc tgaacgttga cctcgaatca 480

ggtaggacta cccgctgaac ttaagcatat ca 512

Claims (8)

1.一株白僵菌JSHA-MD912，其特征在于，该菌株为白僵菌真菌菌株，该白僵菌菌株为Beauveriasp.JSHA-MD912，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20211673，保藏日期为2021年12月24日。

2.权利要求1所述的白僵菌JSHA-MD912在土壤溶磷中的应用。

3.权利要求1所述的白僵菌JSHA-MD912在制备微生物肥料中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在所述微生物肥料中，所述白僵菌JSHA-MD912的活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述微生物肥料为液态肥料，其制备方法是：将白僵菌JSHA-MD912的菌液按2％-5％体积比的接种量，接入马铃薯液体培养基中，在25℃-30℃、160r/min的条件下，震荡培养7d，即得微生物肥料，其活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

6.权利要求1所述的白僵菌JSHA-MD912在制备生防菌剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，在所述生防菌剂中，所述白僵菌JSHA-MD912的活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述生防菌剂的制备方法是：将白僵菌JSHA-MD912的菌液按2％-5％体积比的接种量，接入马铃薯液体培养基中，在25℃-30℃、160r/min的条件下，震荡培养7d，即得生防菌剂,其活菌总浓度为1×10⁶CFU/mL。

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