CN114423774A - 蛔苷衍生物和使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及使用某些调节剂化合物治疗免疫疾病和/或炎症的方法。例如，本发明提供通过施用包含具有式(I)的结构的化合物的组合物治疗免疫和/或炎症性病症的方法。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求享有2019年5月17日提交的美国临时申请号No.62/849,387的权益，通过引用将其全部内容并入本申请。
联合研究协议35U.S.C.102(c)下的共同所有权
本申请中公开的主题由或代表联合研究协议的一个或多个当事方研发并且所要求保护的本发明由或代表联合研究协议的一个或多个当事方完成，该联合研究协议在所要求保护的发明的有效申请日或之前生效。该联合研究协议的当事方如下：CaliforniaInstitute of Technology和Holoclara，Inc.。
背景
已知许多线虫物种寄生于人类；认为这种关系已经存在了数千年。
寄生线虫流行地区与自身免疫病高发地区之间存在反比关系。这一观察结果激发了寄生线虫或线虫来源的分泌物可以预防自身免疫性疾病的假设，且许多人体临床试验和动物模型研究已证实了这一点，其中寄生线虫的施用减轻了疾病症状。
已经鉴定了一些用于治疗自身免疫性疾病和炎症性疾病的基于线虫的方法。然而，对与寄生线虫的因素和/或分离物相比得到改进的治疗存在需求。
概述
在一方面，本申请中提供的是具有式(I)的结构的化合物：
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3,
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。
在另一方面，本申请中提供的是包含药学上可接受的载体和具有式(I)的结构的化合物的药物制剂：
在另一方面，本申请中提供的是治疗有此需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括：
向受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物，
其中所述的疾病或病症为炎症性疾病、自身免疫疾病或它们二者。
本发明的其他特征和优点将从以下详细描述，结合附图变得显而易见，附图举例说明本发明的不同实施方案。
附图简述
在所注明的附图中举例说明实例实施方案。意图是本申请中公开的实施方案和附图被视为示例而不是限制。
图1A显示体外试验中化合物1减少刺激后72小时THP-1衍生的巨噬细胞释放的IL-6的量。
图1B显示体外试验中化合物10减少刺激后72小时THP-1衍生的巨噬细胞释放的IL-6的量。
图2A显示体外试验中化合物1减少刺激后72小时THP-1衍生的巨噬细胞释放的IL-6的量，超过ascr#7。
图2B显示体外试验中化合物10减少刺激后72小时THP-1衍生的巨噬细胞释放的IL-6的量，超过ascr#7。
图3A显示体外试验中化合物1减少刺激后72小时THP-1衍生的巨噬细胞释放的TNFα的量。
图3B显示体外试验中化合物10减少刺激后72小时THP-1衍生的巨噬细胞释放的TNFα的量。
图4显示ascr#7在小鼠、大鼠和人肝细胞中的半衰期和化合物1在大鼠肝细胞和人肝细胞中的半衰期。
图5A显示ascr#7在大鼠血浆和人血浆中的清除率和化合物1在大鼠血浆和人血浆中的清除率。
图5B显示ascr#7在小鼠血浆中的清除率。
图6显示ascr#7在CaCo-2细胞中的双向通透性和化合物1在CaCo-2细胞中的双向通透性。
图7显示ascr#7和化合物1的血浆蛋白结合程度。
图8显示在CYP抑制测定法中ascr#7和化合物1对细胞色素P450同种型的抑制。
图9化合物1、2、3、5、6、8、9、10、11和13在人巨噬细胞(THP-1)中以统计显著的剂量依赖性方式抑制IL-6。
图10A化合物1在人肺上皮细胞(BEAS-2B)中抑制IL1β-诱导的多种炎性细胞因子(IL-6、IL-8、IL-25、IL-33)。
图10B化合物1在人肺上皮细胞(BEAS-2B)中抑制IL1β-诱导的多种炎性细胞因子(嗜酸性粒细胞趋化因子、GMCSF、MCP-1、TSLP)。
图11A化合物1在人肺上皮细胞(BEAS-2B)中抑制IL1β-诱导的多种炎性细胞因子(IL-6、IL-8、IL-25、IL-33)。
图11B化合物1在人肺上皮细胞(BEAS-2B)中抑制LPS-诱导的多种炎性细胞因子(GMCSF、MCP-1、TSLP)。
图12化合物6在人肺上皮细胞(BEAS-2B)中抑制IL1β-诱导的多种炎性细胞因子(IL-25、IL-33、嗜酸性粒细胞活化趋、TSLP)。
图13化合物2在人肺上皮细胞(BEAS-2B)中抑制IL1β-诱导的嗜酸性粒细胞趋化因子炎性细胞因子。
图14化合物1在人T细胞中以统计显著的剂量依赖性方式抑制多种炎性细胞因子(IL-5、IFNγ、TGFβ)。
图15化合物3和4在人T细胞中抑制炎性细胞因子(IL-6、IL-8、TNFα)。
图16化合物1在人肺泡上皮细胞(A549)中抑制多种炎性细胞因子(IL-8、IL-25、IL-33、MCP-1、GM-CSF)。
图17化合物10在人肺泡上皮细胞(A549)中抑制多种炎性细胞因子(IL-25、IL-33、MCP-1、GM-CSF)。
图18化合物1和10在人肺泡上皮细胞(A549)中抑制多种炎性细胞因子(嗜酸性粒细胞趋化因子、IL-6、RANTES、TSLP)。
图19A化合物1、3、4、10和13在人原代食管角质形成细胞(EPC2)中以统计显著的方式抑制TSLP表达。
图19B化合物1、2、3、4和10在人原代食管角质形成细胞(EPC2)中以统计显著的方式抑制IL6表达。
图19C化合物1、2、3、4、10、11和13在人原代食管角质形成细胞(EPC2)中以统计显著的方式抑制MCP-1表达。
图20用噁唑酮抗原致敏/局部攻击的L2-IL5转基因小鼠的图示时间线-嗜酸细胞性食管炎的体内模型。
图21NDM-X和化合物1抑制用噁唑酮抗原致敏/局部攻击的L2-IL5转基因小鼠中的体内模型嗜酸细胞性食管炎。
图22NDM-X和化合物1抑制用噁唑酮抗原致敏/局部攻击的L2-IL5转基因小鼠中的体内模型嗜酸细胞性食管炎。
图23化合物1抑制用噁唑酮抗原致敏/局部攻击的L2-IL5转基因小鼠中的体内模型嗜酸细胞性食管炎。
图24NDM-X抑制用噁唑酮抗原致敏/局部攻击的L2-IL5转基因小鼠中的体内模型嗜酸细胞性食管炎。
详细描述
概述
本发明至少部分基于如下发现：蛔苷(小分子线虫信息素家族)调节免疫应答并且对各种自身免疫和炎症性疾具病有治疗作用。蛔苷衍生物之一，式(I)或(II)的化合物，显著地抑制哮喘、炎性肠病和1型糖尿病的小鼠模型中的标志性病理现象并且显著减少IL-6和IL-1β分泌。这些发现表明，该化合物对其中IL-6和/或IL-1β水平的升高促成疾病发病机制的疾病具有治疗作用。
在一些方面，本发明提供治疗受试者的炎性疾病、自身免疫疾病或它们二者的方法。该方法包括对所述受试者施用有效量的具有式(I)或(II)的结构的化合物。
在一些实施方案中，受试者具有升高水平的IL-6、IL-1β和/或TNFα(本申请也称作TNF-α)。在某些实施方案中，IL-6、IL-1β和/或TNFα促成疾病的一种或多种症状。在实施方案例如这些中，所述方法可以包括评估受试者受影响组织中的IL-6、IL-1β和/或TNFα水平，且如果对于受侵害的组织该水平超过正常水平的200％，则施用式(I)或(II)的化合物。
因此，本发明部分涉及治疗受试者的炎性疾病、自身免疫疾病或它们二者的方法。在一些实施方案中，本发明涉及通过对受试者施用式(I)的化合物治疗该受试者的IL-6、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病的方法。在其它方面，本发明涉及通过使细胞或关联细胞接触式(I)或(II)的化合物来减少IL-6和/或IL-1β从细胞中产生的方法。
定义
除非另有定义，否则本申请中使用的技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。Singleton等人，Dictionary of Microbiology andMolecular Biology第3版，J.Wiley&Sons(New York，NY 2001)；March，Advanced OrganicChemistry Reactions，Mechanisms and Structure第5版，J.Wiley&Sons(New York，NY2001)；以及Sambrook and Russel，Molecular Cloning：A Laboratory Manual第3版，ColdSpring Harbor Laboratory Press(Cold Spring Harbor，NY 2001)为本领域技术人员提供了本申请中使用的许多术语的一般指南。
本领域技术人员将识别许多方法和材料，其类似于或等同于本申请中描述的方法和材料，其可以用于实施本发明。事实上，本发明绝不限于所述方法和材料。为了本发明的目的，将下列术语定义如下。
如本申请中所用，除非另有说明，否则以下术语应理解为具有以下含义。如果本申请中未另行定义，则本申请中使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。在本申请中某个术语具有多种定义的情况下，以本节中的定义为准，除非另有说明。
术语“本发明的化合物”及其等同表达意指包含所述的化合物，以及任何立体异构体形式或该化合物的任何这种形式的任何比例的混合物，另有具体规定的除外。包合复合物描述在Remington，The Science and Practice of Pharmacy，第19版，1：176-177(1995)中，通过引用将其全部内容并入本申请。最常用的包合复合物是与环糊精的包合复合物和所有天然和合成的环糊精复合物均具体包含在权利要求中。为清楚起见，上下文允许这样时有时在文本中显示特定实例，但这些实例纯粹是举例说明，在上下文允许这样时并不想排除其他实例。
在本公开的方法和组合物中有用的许多化合物在其结构中具有至少一个立体形成中心。这个立体形成中心可以以R或S构型存在，所述R和S符号按照Pure Appl.Chem.(1976)，45，11–30中所述的规则使用。本公开考虑了所述化合物的所有立体异构体形式，例如对映体和非对映体形式、盐、前药或其混合物(包括所有可能的立体异构体混合物)。参见，例如，WO 01/062726。
此外，包含烯基的某些化合物可以作为Z(zusammen)或E(entgegen)异构体存在。在每种实例中，本公开包括混合物和单独的个体异构体二者。
所述化合物的一些还可以以互变异构体形式存在。尽管在本申请中所述的式中没有明确显示，但是预想将这类形式包括在本公开的范围内。
在一些实施方案中，式(I)或(II)的化合物在侧链甲基组立体形成中心上富含对映体。可以将化合物的对映体富含水平表示为对映体过量(ee)。可以通过将对映体分数之差除以对映体分数总和来测定化合物的ee。例如，如果发现化合物包含98％(S)-对映体和2％(R)-对映体，则化合物的ee为(98-2)/(98+2)，或为96％。在某些实施方案中，式(I)的化合物具有约5％ee或更大、10％ee或更大、15％ee或更大、20％ee或更大、25％ee或更大、30％ee或更大、40％ee或更大、50％ee或更大、60％ee或更大、70％ee或更大、约80％ee、约85％ee、约88％ee、约90％ee、约91％ee、约92％ee、约93％ee、约94％ee、约95％ee、约96％ee、约97％ee、约98％ee、约99％ee或高于约99％ee，甚至其中该％ee大于原料的％ee，例如0％ee(外消旋体)。在一些实施方案中，式(I)或(II)的化合物富含对映体。在一些实施方案中，式(I)或(II)的化合物为纯对映体，例如，具有化合物1或10的结构。在其中原料具有多于一个的立体中心的实施方案中，本公开的反应可以富含带有甲基基团的立体中心(相对于原料的该中心的富集，如果有)，并且基本上独立于分子的任何其他立体中心的立体化学布置/富集(de)。例如，本申请中所述的式(I)或(II)的化合物在带有甲基的式(I)的化合物的立体中心上可以具有5％de或更大、10％de或更大、15％de或更大、20％de或更大、25％de或更大、30％de或更大、40％de或更大、50％de或更大、60％de或更大、70％de或更大、80％de或更大、90％de或更大、95％de或更大、甚或98％de或更大。
如本申请中所用，术语“ascr#7”是指化合物，
或其药学上可接受的盐。
化合物
在一方面，本申请中提供的是具有式(I)的结构的化合物：
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3；
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。
在一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在一些实施方案中，X为-C(R5)2-C(R5)2-。在一些实施方案中，X为E或Z-CH＝CH-。在一些实施方案中，X为-C(H)2-C(H)2-。在一些实施方案中，X为-C(H)(OH)-C(H)2-。
在一些实施方案中，X-C(R5)2-C(R5)2-，两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环。在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，Y为NR6。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为H。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为C1-C6烷基。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH2CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，Y为O。
在一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R为CH3；且R1为H。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丙基。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丁基。
在一些实施方案中，R2为H；R3为H或CH3；且R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基，或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，R2、R3和R4各自为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为CH3；且R4为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH2CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为环己基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为苯基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为吡啶基。
在一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在一方面，本申请中提供的是具有如下结构式的式(II)的化合物：
其中
环D选自
在一些实施方案中，式(II)的化合物为具有如下结构式的化合物：
在一些实施方案中，式(II)的化合物为具有如下结构式的化合物：
在一些实施方案中，式(II)的化合物选自
在某些实施方案中，环D为
在某些实施方案中，环D为
在某些实施方案中，环D为
在一些实施方案中，
为双键。
在一些实施方案中，甲基取代的碳上的立体化学为R。
在一些实施方案中，
为双键；且甲基取代的碳上的立体化学为R。
方法
在另一方面，本申请提供的是在有需要的受试者中减少巨噬细胞、T细胞、B细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞或淋巴细胞或其组合的增殖或活化的方法，该方法包括向所述受试者施用治疗有效量的具有式(I)结构的化合物：
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3；
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环；
从而减少受试者中巨噬细胞、T细胞、B细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞、淋巴细胞或其组合的增殖或活化。
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，X为-C(R5)2-C(R5)2-。在一些实施方案中，X为E或Z-CH＝CH-。在一些实施方案中，X为-C(H)2-C(H)2-。在一些实施方案中，X为-C(H)(OH)-C(H)2-。
在一些实施方案中，X-C(R5)2-C(R5)2，两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环。在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，Y为NR6。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为H。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为C1-C6烷基。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH2CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，Y为O。
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R为CH3；且R1为H。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丙基。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丁基。
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，R2为H；R3为H或CH3；且R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基，或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，R2、R3和R4各自为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为CH3；且R4为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH2CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为环己基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为苯基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为吡啶基。
在另一方面，本申请中提供的是在有需要的受试者中减少巨噬细胞、T细胞、B细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞或淋巴细胞或其组合的增殖或活化的方法，该方法包括向该受试者施用治疗有效量的具有式(II)结构的化合物：
其中
环D选自
由此减少受试者的巨噬细胞、T细胞、B细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞或淋巴细胞或其组合的增殖或活化。
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，式(II)的化合物为具有如下结构的化合物：
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，式(II)的化合物为具有如下结构的化合物：
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，式(II)的化合物为选自如下的化合物：
在另一方面，本申请中提供的是治疗有此需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括
向该受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物，
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3,
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环；且
所述的疾病或病症为炎症性疾病、自身免疫疾病或它们二者。
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，X为-C(R5)2-C(R5)2-。在一些实施方案中，X为E或Z-CH＝CH-。在一些实施方案中，X为-C(H)2-C(H)2-。在一些实施方案中，X为-C(H)(OH)-C(H)2-。
在一些实施方案中，X-C(R5)2-C(R5)2，两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环。在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，Y为NR6。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为H。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为C1-C6烷基。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH2CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，Y为O。
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R为CH3；且R1为H。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丙基。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丁基。
在本申请中公开的方法的一些实施方案中，R2为H；R3为H或CH3；且R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基，或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，R2、R3和R4各自为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为CH3；且R4为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH2CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为环己基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为苯基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为吡啶基。
在另一方面，本申请中提供的是治疗有此需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括
向该受试者施用有效量的具有式(II)的结构的化合物：
其中
环D选自
所述的疾病或病症为炎症性疾病、自身免疫疾病或它们二者。
在某些实施方案中，所述的疾病为IL-6、IL-1β和TNFα-介导的疾病。可以用包含具有式(I)的结构的化合物治疗的IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病包括，但不限于本申请中所讨论的疾病。
在一些实施方案中，所述的炎性疾病、自身免疫疾病或它们二者选自
寻常痤疮，
丙种球蛋白缺乏血症，
变应性鼻炎，
淀粉样变性病，
过敏反应，
强直性脊柱炎，
抗GBM/抗TBM肾炎(抗肾小球基膜抗体病)，
抗磷脂综合征，
孤独症，
自身免疫性肝炎，
自身免疫性内耳病，
特应性皮炎，
哮喘，
Castleman病，
乳糜泻，
查加斯(Chagas)病，
慢性非细菌性骨髓炎，
慢性***炎，
慢性复发性多病灶性骨髓炎，
科根(Cogan)综合征，
冷凝集素疾病，
CREST综合征，
克罗恩(Crohn)病，
皮肌炎，
Devic病(视神经脊髓炎)，
盘状狼疮，
子宫内膜异位症，
嗜酸细胞性哮喘，
嗜酸细胞性心肌病，
嗜酸细胞性结肠炎，
嗜酸细胞性膀胱炎，
嗜酸性粒细胞障碍，
嗜酸细胞性肠炎，
嗜酸细胞性食管炎(EoE)，
嗜酸细胞性筋膜炎，
嗜酸细胞性胃炎，
嗜酸细胞性胃肠炎，
伴有多血管炎的嗜酸细胞性肉芽肿，
嗜酸细胞性肺炎，
埃文斯(Evan)综合征，
纤维肌痛，
食物过敏，
巨细胞动脉炎，
巨细胞心肌炎，
肾小球肾炎，
古德帕斯丘(Goodpasture)综合征(抗GBM)，
伴有多血管炎的肉芽肿病(韦格纳(Wegener)病)，
格雷夫斯(Graves)病，
格-巴(Guillain-Barre)综合征，
桥本(Hashimoto)甲状腺炎，
溶血性贫血(某些类型)，
噬血细胞吞噬性淋巴组织细胞增生症，
亨诺-许兰(Henoch-Schonlein)紫癜，
嗜酸性细胞增多综合征,
超敏反应，
低丙球蛋白血症，
低增殖性贫血，
IgA肾病，
包涵体肌炎，
间质性膀胱炎，
炎性肠病，
青少年关节炎，
青少年/1型糖尿病，
青少年肌炎，
川崎(Kawasaki)综合征，
扁平苔癣，
硬化性苔癣，
肥大细胞增多症，
梅尼埃(Meniere)病，
多发性硬化，
重症肌无力，
肌病(某些类型)，
显微镜下多血管炎，
视神经炎，
发作性睡眠性血红蛋白尿，
天疱疮，
常年性过敏，
恶性贫血，
***性疾病，
结节性多动脉炎，
风湿性多肌痛，
多肌炎，
原发性胆汁性肝硬变，
原发性硬化性胆管炎，
银屑病，
牛皮癣性关节炎，
反应性关节炎，
再灌注损伤，
风湿热，
类风湿性关节炎，
结节病，
硬皮病，
季节性***反应，
选择性IgA缺乏症，
镰刀形细胞病，
干燥(Sjogren)综合征，
斯蒂尔(Still)病，
***性红斑狼疮(SLE)，
***性青少年特发性关节炎，
***性硬化症，
高安(Takayasu)关节炎，
颞动脉炎/巨细胞动脉炎，
移植排斥，
横贯性脊髓炎，
溃疡性结肠炎，
葡萄膜炎，
脉管炎，
白癜风，
病毒性心肌炎，以及
韦格纳肉芽肿(伴有多血管炎的肉芽肿病(GPA))。
在某些实施方案中，所述组合物经口施用。在其他实施方案中，所述组合物通过直接注射、经局部和/或通过静脉内施用。
在一些实施方案中，所述的受试者选自灵长类、人、马科动物、马、牛、奶牛、猪、羊、啮齿动物、大鼠、宠物、狗和豚鼠。在某些优选的实施方案中，所述的受试者为人。在其他实施方案中，所述的受试者为啮齿动物。在另外其他实施方案中，所述的受试者选自灵长类、马科动物、马、牛、奶牛、羊、大鼠、宠物、狗和豚鼠。在一些实施方案中，所述的受试者为雌性动物。在其他实施方案中，所述的受试者为雄性动物。在一些实施方案中，所述的受试者为婴儿、儿童或成年人。在某些实施方案中，所述的受试者具有升高水平的IL-6、IL-1β和TNFα。
在一些实施方案中，所述的方法减少受试者的粘液产生。
在一些实施方案中，所述的方法为一种减少受试者的嗜酸粒细胞的增殖或活化的方法。在一些实施方案中，所述的方法为一种减少受试者的淋巴细胞的增殖或活化的方法。在一些实施方案中，所述的方法为一种减少细受试者的巨噬细胞的增殖或活化的方法。在一些实施方案中，所述的方法为一种减少受试者的T细胞的增殖或活化的方法。在一些实施方案中，所述的方法为一种减少受试者的B细胞的增殖或活化的方法。在一些实施方案中，所述的方法为一种减少受试者的中性粒细胞的增殖或活化的方法。在一些实施方案中，所述的方法为一种减少受试者的嗜碱粒细胞的增殖或活化的方法。在一些实施方案中，所述的方法为一种减少受试者的巨噬细胞、T细胞、B细胞、中性粒细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞或淋巴细胞的组合的增殖或活化的方法。
在另一方面，本申请中提供的是具有式(I)的结构的化合物在制备用于治疗自身免疫疾病和/或炎性疾病，例如IL-6、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病的药物中的用途。在该用途的一些实施方案中，化合物为化合物1。在该用途的一些实施方案中，化合物为化合物10。
已经在患有不同疾病的患者中发现了升高水平的IL-6、IL-1β和/或TNFα。且研究证实，IL-6、IL-1β和或TNFα促成这些疾病的发病机制。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响心脏***的疾病，例如巨细胞心肌炎、淀粉样变性病、病毒性心肌炎和/或风湿热。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响听觉***的疾病，例如自身免疫性内耳病和/或梅尼埃病。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响内分泌***的疾病，如格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、青少年/1型糖尿病和/或淀粉样变性病。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响胃肠***的疾病，例如克罗恩病、嗜酸细胞性食管炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎和/或乳糜泻。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响血液***的疾病，例如冷凝集素病、埃文综合征、溶血性贫血、低增殖性贫血、恶性贫血、抗磷脂综合征、丙种球蛋白缺乏血症、低丙种球蛋白血症、噬血细胞吞噬性淋巴组织细胞增多症、发作性睡眠性血红蛋白尿、镰刀形细胞病和/或再灌注损伤。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响肝脏***的疾病，例如原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬变和/或自身免疫性肝炎。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响免疫***的疾病，例如过敏性鼻炎、过敏反应、超敏反应、狼疮(SLE)、肥大细胞增多症、常年性过敏、季节性过敏、干燥综合征、移植排斥、食物过敏、乳糜泻、丙种球蛋白缺乏血症、低丙种球蛋白血症、硬皮病、选择性IgA缺乏症、和/或显微镜下多血管炎。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响感染性***反应的疾病，例如查加斯病。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响淋巴***的疾病，如Castleman病和/或结节病。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响肌肉***的疾病，例如皮肌炎、包涵体肌炎、某些类型的肌病、多肌炎、病毒性心肌炎、格-巴综合征、纤维肌痛、重症肌无力、硬皮病和/或青少年肌炎。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响神经***的疾病，例如格-巴综合征、Devic病(视神经脊髓炎)、多发性硬化、横贯性脊髓炎、视神经炎和/或重症肌无力。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响视觉***的疾病，如葡萄膜炎和/或视神经炎。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响精神***的疾病，如孤独症。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响肾脏***的疾病，例如肾小球肾炎和/或IgA肾病。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响呼吸***的疾病，例如哮喘和/或结节病。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响风湿***的疾病，如强直性脊柱炎、抗GBM/抗TBM肾炎、慢性复发性多病灶性骨髓炎、科根综合征、古德帕斯丘综合征(抗GBM)、青少年关节炎、风湿性多肌痛、类风湿性关节炎、CREST综合征、嗜酸细胞性筋膜炎、牛皮癣性关节炎、抗磷脂综合征、淀粉样变和/或风湿热。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响皮肤和******的疾病，例如CREST综合征、嗜酸细胞性筋膜炎、寻常痤疮、特应性皮炎、盘状狼疮、亨诺-许兰紫癜、扁平苔藓、硬化性苔藓、天疱疮、银屑病、白癜风、青少年肌炎、结节病、牛皮癣性关节炎、硬皮病和/或风湿热。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响泌尿***的疾病，例如慢性***炎和/或间质性膀胱炎。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响生殖***的疾病，例如子宫内膜异位症和/或***性疾病。
这些IL-6-、IL-1β和/或TNFα-介导的疾病可以包括影响血管***的疾病，如巨细胞动脉炎、伴有多血管炎的肉芽肿病(韦格纳病)、川崎综合征、结节性多动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血管炎、硬皮病、显微镜下多血管炎和/或再灌注损伤。
在一些实施方案中，所述的疾病或病症为嗜酸细胞性病症，其选自嗜酸细胞性哮喘、嗜酸细胞性心肌病、嗜酸细胞性结肠炎、嗜酸细胞性膀胱炎、嗜酸细胞性肠炎、嗜酸细胞性食管炎(EoE)、嗜酸细胞性筋膜炎、嗜酸细胞性胃炎、嗜酸细胞性胃肠炎、伴有多血管炎的嗜酸细胞性肉芽肿、嗜酸细胞性肺炎和嗜酸性细胞增多综合征。
在一些实施方案中，所述的疾病或病症选自EoE、哮喘、炎性肠病、类风湿性关节炎或多发性硬化。在某些实施方案中，所述的疾病或病症为哮喘、炎性肠病或1型糖尿病。在某些优选实施方案中，所述的疾病或病症为EoE。EoE为慢性免疫和抗原介导的疾病，其特征在于嗜酸性粒细胞浸润到食管组织中，导致吞咽困难、食物嵌塞、反流或呕吐和食欲下降。通过症状以及通过内窥镜活组织检查在食管组织中发现的大量嗜酸性粒细胞的发现(通常在食管中不发现嗜酸性粒细胞)定义它。目前，在美国没有批准用于治疗EoE的药物。但是，存在对不同类别的治疗进行试错的方法，包括食物消除、超说明书使用类固醇和外科手术干预。40-50％之间的患者对一线治疗无应答。
在一些实施方案中，本申请中提供的是减少IL-6-、IL-1β和/或TNFα从细胞中产生的方法，该方法包括使所述的细胞接触包含具有式(I)或(II)的结构的化合物的组合物。在该方法的一些实施方案中，化合物为化合物1。在该方法的一些实施方案中，化合物为化合物10。
在本申请中公开的任一方法的一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在本申请中公开的任一方法的一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在任一方法的一些实施方案中，式(II)的化合物选自
这类方法可以在体内或体外进行。
在一些实施方案中，与其他蛔苷化合物或衍生物例如ascr#7相比，施用具有式(I)的结构的化合物调节药物代谢和药物动力学。在一些实施方案中，施用具有式(I)或(II)的结构的化合物调节如下的一种或多种：从细胞产生IL-6，从细胞产生IL-1β，从细胞产生TNFα，从细胞产生CCL26、肝细胞中的稳定性、血浆中的稳定性、各种细胞或***(例如，肠屏障)中的双向通透性、血浆蛋白结合、CYP抑制、代谢物(例如，肝脏中产生的)和/或化合物吸收(例如，基于亲脂性)。
药物组合物
在另一方面，本申请中提供的是包含药学上可接受的载体和具有式(I)的结构的化合物的药物制剂：
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3；
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。
在药物制剂的一些实施方案中，X为-C(R5)2-C(R5)2-。在一些实施方案中，X为E或Z-CH＝CH-。在一些实施方案中，X为-C(H)2-C(H)2-。在一些实施方案中，X为-C(H)(OH)-C(H)2-。
在一些实施方案中，X-C(R5)2-C(R5)2，两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环。在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在一些实施方案中，X为
在药物制剂的一些实施方案中，Y为NR6。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为H。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为C1-C6烷基。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R6为CH2CH3。在一些实施方案中，Y为NR6，其中R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，Y为O。
在药物制剂的一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R和R1各自为CH3。在一些实施方案中，R为CH3；且R1为H。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丙基。在一些实施方案中，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成环丁基。
在药物制剂的一些实施方案中，R2为H；R3为H或CH3；且R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基，或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。在一些实施方案中，R2、R3和R4各自为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为CH3；且R4为CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH2CH3。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为CH(CH2CH3)2。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为环己基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为苯基。在一些实施方案中，R2为H；R3为H；且R4为吡啶基。
在药物制剂的一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在药物制剂的一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在药物制剂的一些实施方案中，式(I)的化合物选自
在另一方面，本申请中提供的是药物组合物，其包含药学上可接受的载体；以及具有式(II)的结构的化合物：
其中
环D选自
在药物制剂的一些实施方案中，式(II)的化合物为具有如下结构式的化合物：
在药物制剂的一些实施方案中，式(II)的化合物为具有如下结构式的化合物：
在药物制剂的一些实施方案中，式(II)的化合物选自
本申请中所述的化合物、组合物和方法可以用于治疗有此需要的受试者。在某些实施方案中，所述的受试者为哺乳动物，例如人或非人的哺乳动物。当施用于动物，例如人时，所述组合物或化合物优选作为药物组合物施用，所述药物组合物包含，例如本发明的化合物和药学上可接受的载体。药学上可接受的载体为本领域中所周知的，并且包括，例如，水溶液，例如水或生理缓冲盐水或其他溶剂或介质，例如二醇、甘油、油例如橄榄油或可注射有机酯。在一个优选的实施方案中，当这类药物组合物用于人体施用时，特别是用于侵入性施用途径(即，绕过通过上皮屏障转运或扩散的途径，例如注射或植入)，水溶液为无热原或基本上无热原的。可以选择赋形剂例如以便延迟释放活性剂或选择性地靶向一种或多种细胞、组织或器官。药物组合物可以为剂量单位形式，例如片剂、胶囊(包括撒胶囊和明胶胶囊)、颗粒剂、重组用冻干剂、粉末、溶液、糖浆、栓剂、注射剂等。组合物还可以以透皮递送***形式存在，例如皮肤贴剂。组合物还可以以适合于局部施用的溶液形式存在，例如滴眼液。
药物组合物(制剂、配方)可通过多种施用途径中的任何一种施用于受试者，包括：例如，经口(例如，作为在含水或不含水的溶液或混悬剂中的兽用顿服药、片剂、胶囊(包括粉末胶囊和明胶胶囊)、大丸剂、粉末、颗粒、应用于舌的糊剂)；通过口腔粘膜吸收(例如，通过舌下)；通过***；通过直肠或通过***(例如，作为***栓、霜剂或泡沫体)；通过肠胃外(包括肌内、静脉内、皮下或通过鞘内，作为，例如，无菌溶液或混悬剂液)；通过鼻内；通过腹膜内；通过皮下；经皮(例如作为应用于皮肤上的贴剂)；以及通过局部(例如，作为应用于皮肤的霜剂、软膏或喷雾剂，或作为滴眼液)。也可以将化合物配制用于吸入。在某些实施方案中，可以将化合物简单地溶于或混悬于无菌水中。适合的施用途径和适合于该途径的组合物的详细信息可以在例如下列专利中找到：美国专利Nos.6,110,973、5,731,000、5,541,231、5,427,798、5,358,970和4,172,896，以及其中引用的专利。
本领域技术人员可以理解，施用本公开的制剂或组合物的方法取决于多种因素，例如被治疗的受试者的年龄、体重等因素和身体状况和被治疗的疾病或病症。因此，本领域技术人员能够以个案为基础为受试者选择最佳的施用方法。
药学上可接受的载体可以包含生理学上可接受的物质，该物质例如起到稳定化合物例如本发明化合物、增加其溶解性或增加其吸收的作用。这类生理学上可接受的试剂包括，例如，碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，例如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质或其他稳定剂或赋形剂。药学上可接受的载体包括生理学上可接受的物质的选择取决于例如组合物的施用途径。制剂或药物组合物可以为自乳化递药***或自微乳化递药***。药物组合物(制剂)还可以为脂质体或其他聚合物基质，其中可以掺入例如本发明化合物。脂质体，例如，其包含磷脂或其他脂质，为无毒性的、生理学上可接受的和可代谢的载体，其可以相对便利地制备和施用。
如本申请中所用，措词“药学上可接受的”是指在合理医学判断的范围内适用于接触受试者组织而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症、与合理的收益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
如本申请中所用，措词“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或介质，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。每种载体必须是“可接受的”，即与制剂的其他成分相容，且不会对受试者造成伤害。可用作药学上可接受的材料的一些实例包括：(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉状西黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)用于药物制剂的其他无毒性相容性物质。
这些制剂可以便利地以剂量单位形式呈现，并且可以通过制药领域中众所周知的任何方法制备。可与载体材料合并以产生单剂量形式的活性成分的量可以根据所治疗的受试者、特定施用方式的不同而改变。可与载体材料合并以产生单剂量形式的活性成分的量通常为该化合物产生治疗效果的量。通常，在100％中，该量将在活性成分的约1％到约99％，优选在约5％到约70％，最优选在约10％到约30％。
制备这些制剂或组合物的方法包括使活性化合物，例如本发明的化合物与载体和任选地一种或多种辅助成分合并的步骤。通常，通过均匀和紧密地使本发明的化合物与液体载体或固体细粉载体或它们二者结合，然后如有必要使产品成形来制备制剂。
适合于经口施用的本发明制剂可以为胶囊(包括粉末胶囊和明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用基于矫味的基质，通常为蔗糖和***胶或黄蓍胶)、冻干物、粉末、颗粒或作为在含水或不含水的液体中的溶液或混悬剂或作为软锭剂(使用惰性基质，例如明胶和甘油或蔗糖和***胶)和/或作为漱口液等的形式，它们各自包含预定量的本发明化合物作为活性成分。组合物或化合物还可以作为大丸剂、药糖浆或糊剂施用。
为了制备经口施用的固体剂型(胶囊(包括粉末胶囊和明胶胶囊)、片剂、丸剂、糖锭、粉剂、颗粒剂等)，将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体，例如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或如下物质的任一一种混合：(1)填充剂或增充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘合剂，例如，羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或***胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；(5)溶解阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物；(7)湿润剂，例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物；(10)配合剂，例如改性和未改性环糊精；以及(11)着色剂。在胶囊(包括粉末胶囊和明胶胶囊)、片剂和丸剂的情况下，药物组合物还可以包含缓冲剂。相似类型的固体组合物也可以用作软明胶胶囊和硬明胶胶囊的填充剂，其中使用例如乳糖或奶糖这样的赋形剂以及高分子量聚乙二醇等。
可以通过任选地与一种或多种辅助成分一起压制或模制来制备片剂。可使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠或交联羧甲基纤维素钠)，表面活性或分散剂制备压制片。模制片可通过在适合的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物制备。
可以任选地给药物组合物的片剂和其他固体剂型例如糖锭剂、胶囊(包括粉末胶囊和明胶胶囊)、丸剂和颗粒剂刻痕或用包衣和外壳，例如肠溶包衣和本领域中众所周知的其他制药包衣制备。也可以配制它们，以提供其中活性成分的缓释或控释，例如，使用不同比例的羟丙基甲基纤维素，以提供期望的释放特性，其他聚合物基质，脂质体和/或微球。可以将它们灭菌，例如，在使用前即刻通过截留细菌的过滤器过滤，或通过以可溶于无菌水中的无菌固体组合物的形式掺入灭菌剂，或其他一些无菌可注射介质。这些组合物还可以任选地包含遮光剂，并且可以具有仅在或优先在胃肠道的某一部分，任选的以延迟的方式释放活性成分的组成。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。如果适合，活性成分也可以是微囊化形式，其中使用上述赋形剂的一种或多种。
可用于口服的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、重组用冻干物、微乳、溶液、混悬剂、糖浆剂和酏剂。除活性成分外，液体剂型还可以包含本领域中常用的惰性稀释剂，例如，水或其他溶剂、环糊精及其衍生物、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。
除惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括助剂，例如润湿剂、乳化剂和助悬剂、甜味剂、矫味剂、着色剂、增香剂和防腐剂。
除了活性化合物外，混悬剂还可以包含助悬剂，例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨坦酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶及其混合物。
用于口腔施用的药物组合物的制剂可以呈现为漱口液或口腔喷雾剂或口腔用软膏剂。
可替代地，或另外地，可配制组合物以通过导管、支架、丝线或其他腔内装置递送。通过这类装置递送对于递送至膀胱、尿道、输尿管、直肠或肠尤其有用。
适合于***施用的制剂还包括***栓、棉塞、霜剂、凝胶、糊剂、泡沫体或包含作为本领域已知的适合载体的喷雾剂。
局部或经皮施用的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏剂、糊剂、霜剂、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。可以将活性化合物在无菌条件下与药学上可接受的载体和和任何防腐剂，缓冲液或可能需要的推进剂混合。
除活性化合物外，软膏剂、糊剂、霜剂和凝胶剂还可以包含赋形剂，例如动植物脂肪、油、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石粉和氧化锌或其混合物。
除活性化合物外，散剂和喷雾剂还可以包含赋形剂，例如乳糖、滑石粉、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或这些物质的混合物。喷雾剂还可以包含常规推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代烃，例如丁烷和丙烷。
透皮贴剂还具有提供受控递送本发明化合物至身体的额外优点。这种剂型可以通过将活性化合物溶于或分散于适当的介质中来制备。吸收促进剂也可用于增加化合物通过皮肤的流量。这种流量的速率可以通过提供速率控制膜来控制或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制。
还考虑眼用制剂、眼膏剂、散剂、溶液等在本发明的范围内。实例眼用制剂描述在美国公开号2005/0080056、2005/0059744、2005/0031697和2005/004074以及美国专利No.6,583,124中，通过引用将它们的内容并入本申请。如果期望，液体眼用制剂具有类似于泪液、眼房水的性质或玻璃体液的特性或与此类流体相容。优选的施用途径为局部施用(例如，局部施用，例如滴眼液，或通过植入物施用)。
如本申请中所用，措词“肠胃外施用”和“通过肠胃外施用”意指通常通过注射的非肠内和局部施用的施用方式，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、包囊下、蛛网膜下腔、椎管内和胸骨内注射和输注。
适合于肠胃外施用的药物组合物包含一种或多种活性化合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水或非水溶液、分散液、混悬剂或乳剂的组合，或无菌粉末，其可恰在使用前重构成无菌可注射溶液的分散液，其可以包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或助悬剂或增稠剂。
可用于本发明药物组合物中的适合含水和不含水的载体包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适合的混合物、植物油例如橄榄油和可注射的有机酯，例如油酸乙酯。可以例如通过使用包衣材料例如卵磷脂，在分散液情况下维持所需粒径和通过使用表面活性剂，维持适当的流动性。
这些组合物还可以包含助剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可通过加入各种抗菌剂和抗真菌剂来防止微生物的作用，例如，对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等。还期望在组合物中包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，可注射药物形式的延长吸收可通过包含延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来实现。
在某些情况下，为了延长药物的效果，期望减缓药物从皮下或肌注射的吸收。这可以通过使用晶体的液体混悬剂或水溶性差的无定形材料来实现。药物的吸收速率取决于其溶出速率，而溶解速率又可能取决于晶体尺寸和晶型。或者，肠胃外施用的药物形式的延迟吸收通过将药物溶于或混悬于油性介质中来实现。
通过形成主题化合物在生物可降解聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯的微囊化基质制备可注射储库。根据药物与聚合物之比和所用具体聚合物性质的不同。可以控制药物释放速率。其他生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还通过将药物俘获在与身体组织相容的脂质体或微乳中制备储库型可注射制剂。
为了用于本发明方法中，可以给予活性化合物本身或以药物组合物的形式给予，所述药物组合物包含与药学上可接受的载体组合的例如0.1-99.5％(更优选0.5-90％)的活性成分。
也可通过可再充电的或生物可降解的装置来提供引入方法。近年来，开发了各种缓释聚合物装置并在体内测试，用于药物的受控递送，包括蛋白质生物制药学。多种生物相容性聚合物(包括水凝胶)，包括生物可降解和不可降解聚合物可用于形成用于化合物在特定的目标部位缓释的植入物。
可以改变药物组合物中活性成分的实际剂量水平，以获得对特定患者、组合物和施用方式期望的治疗反应有效的活性成分的量，其对患者无毒性。
选择的剂量水平取决于多种因素，包括特定化合物或所用化合物或其酯、盐或酰胺的组合的活性、施用途径、施用时间、所用特定化合物的***率、治疗期限、其他药物，化合物和/或与所用特定化合物组合使用的化合物和/或材料、所治疗受试者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和既往病史等医学领域众所周知的因素。
具有本领域普通技能的医师或兽医可以容易地确定并开出所需药物组合物的治疗有效量。例如，临床医师或兽医可以启动低于所需水平的药物组合物或化合物的剂量，以达到预期的治疗效果，并逐渐增加剂量，直到实现预期效果为止。所谓“治疗有效量”是指足以引起预期的治疗效果的化合物浓度。通常可以理解，化合物的有效量将根据受试者的体重、性别、年龄和病史而改变。影响有效量的其他因素可以包括但不限于受试者病情的严重程度、正在治疗的疾病、化合物的稳定性和如果期望与本发明化合物一起施用的另一种治疗剂的类型。通过多次施用活性剂可以提供更大的总剂量。本领域技术人员已知确定功效和剂量的方法(Isselbacher等人(1996)Harrison’s Principles of Internal Medicine第13版，1814-1882，通过引用将其并入本申请)。
通常，在本发明的组合物和方法中使用的活性化合物的适合的每日剂量为有效产生治疗效果的最低剂量的化合物的量。这种有效剂量通常取决于上述因素。
如果期望，活性化合物的有效每日剂量可以作为一、二、三、四、五、六个或更多个亚剂量施用，所述的亚剂量在当天中以适当时间间隔，任选地，以单位剂量形式单独施用。在本发明的某些实施方案中，活性化合物可以每日施用两次或三次。在优选实施方案中，将活性化合物每日施用一次。
接受这种治疗的受试者一般为需要的任何动物，包括灵长类，尤其是人类和其他哺乳动物，例如马、牛、猪和羊；以及家禽和宠物。
在某些实施方案中，本发明的化合物可以单独使用或与另一种类型的治疗剂联合施用。如本申请中所用，措词“联合施用”是指两种或更多种不同的治疗化合物的任何施用形式，使得在先前施用的治疗化合物在体内仍然有效的同时施用第二种化合物(例如，两种化合物在受试者中同时有效，这可以包括两种化合物的协同作用)。例如，不同的治疗化合物彼此可以以同时或依次在同一制剂中施用或在单独的制剂中施用。在某些实施方案中，不同的治疗化合物可以在1小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时内或一周内施用。因此，接受这种治疗的受试者可以得益于不同治疗化合物的联合作用。
在一些实施方案中，所述不同的治疗化合物为类固醇。在一些实施方案中，所述不同的治疗化合物为选自如下的类固醇：氢化可的松类、奈德类、倍他米松类、酯类、卤代类固醇和不稳定的前药酯。在一些实施方案中，类固醇选自二丙酸别氯地米松、醛固酮、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、二丙酸倍他米松、倍他米松戊酸酯、布***、环索奈德、丙酸氯倍他索、丁酸氯氟美松酮、皮质酮、皮质醇、可的松、醋酸可的松、***、***(DEX)、氟轻松、醋酸氟轻松、氟可龙、醋酸氟甲叉龙、哈西缩松、卤米松、氢化可的松、醋丙氢可的松、醋酸氢化可的松、氢化可的松丁丙酸酯、丁酸氢化可的松、戊酸氢化可的松、甲基强的松，莫米松、糠酸莫米松、泼尼卡、强的松龙、***、曲安西龙和替可的松匹伐酯。在一些实施方案中，类固醇为DEX。在一些实施方案中，式(I)的化合物与类固醇联合施用。在一些实施方案中，式(I)的化合物与DEX联合施用。
润湿剂、乳化剂和润滑剂例如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、脱模剂、包衣、甜味剂、矫味剂和增香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。
药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：(1)水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸、硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，例如棕榈酸抗坏血酸酯、丁羟茴醚(BHA)、丁羟甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α生育酚等；以及(3)金属螯合剂，例如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
实施例
提供下列实施例以更好地说明所要求保护的发明，且该实施例不应被解释为限制本发明的范围。在提及特定材料的程度上，仅为示例目的，并不想限制本发明。本领域技术人员可以在未行使创造能力且不偏离本发明范围的情况下开发等效的方式或反应物。
实施例1
化合物1的合成：
根据下列方案合成了该化合物。
化合物10的合成：
根据下列方案合成了该化合物。
实施例2
I.一般合成
使用一般合成方案中所示例的方法和下文详述的实验程序，制备本发明的化合物。提供这些一般合成方案和实验方法仅为示例目的，并非想限制。用于制备本发明的化合物的原料为商购的或可以使用本领域已知的常规方法制备。如果存在，则使用Desktop的ChemAxon's Instant JChem v6.1和IUPAC Naming Plugin或ChemDraw Professional16.0.1.4(61)生成化合物的名称。
蛔苷信息素及其相关化合物合成的一般方法先前已被描述在文献中，例如JeongP.Y.等人Chemical structure and biological activity of the Caenorhabditiselegans dauer-inducing pheromone.Nature 2005，433(7025)，541-545；Martin，R.等人Improved Synthesis of an Ascaroside Pheromone Controlling Dauer LarvaDevelopment in Caenorhabditis elegans.Synthesis 2009，20，3488–3492；以及Zhang，Y.K.等人Improved Synthesis for Modular Ascarosides Uncovers BiologicalActivity.Org.Lett.2017，19，2837-2840，通过引用将这些文献各自并入本申请。
被保护的包含游离异头羟基基团的碳水化合物(I)通过制备O-糖基三氯乙酰亚氨酸酯(II)来活化，O-糖基三氯乙酰亚氨酸酯(II)在碱性条件下(例如DBU、DIPEA等)使用三氯乙腈(Cl3CCN)制备。方案示例了O-糖基三氯乙酰亚氨基酯(II)与路易斯酸例如BF3·OEt2或TMSOTf在醇存在下的反应，得到O-糖基化产物(III)。
方案1.O-糖基化产物(III)从O-糖基三氯乙酰亚氨酸酯(II)的一般合成。
方案2示例使用Grubb烯烃转移催化(例如二氯[1,3-双(2,6-异丙基苯基)-2-亚咪唑烷基](亚苄基)(三环己膦)钌(II)、(1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)-2-亚咪唑烷基)二氯(苯基亚甲基)(三环己膦)钌、亚苄基-双(三环己膦)二氯钌、双(三环己膦)亚苄基钌(IV)二氯化物等)，O-糖基化末端烯烃(IV)与适合的α,β-不饱和酯或酰胺反应，得到O-糖基化(E)-异构体α,β-不饱和酯或酰胺(V)。
方案2.O-糖基化(E)-异构体α,β-不饱和酯或酰胺(V)从O-糖基化物末端烯烃(IV)的一般合成
方案3示例使用Lemieux氧化(OsO4和NaIO4)或臭氧解(O3)条件的O-糖基化末端烯烃(IV)氧化，得到O-糖基化醛(VI)。
方案3.O-糖基化醛(VI)从O-糖基化物末端烯烃(IV)的一般合成。
方案4示例O-糖基化醛(IV)的Still-Gennari烯烃化反应，得到O-糖基化(Z)-异构体α,β-不饱和酯或酰胺(VII)。(Z)-立体特异性Still-Gennari烯烃化条件使用膦酸双三氟乙酯(例如(甲氧基羰基甲基)膦酸双(2,2,2-三氟乙基)酯)、((乙氧基羰基甲基)膦酸双(2,2,2-三氟乙基)酯)等)，强碱例如KHMDS，和阳离子清除剂，例如18-冠-6。
方案4.O-糖基化(Z)-异构体α,β-不饱和酯或酰胺(VII)从O-糖基化醛(VI)的一般合成。
方案5示例O-糖基化羧酸(VIII)与醇偶联，形成O-糖基化酯(IX)。O-糖基化羧酸(VIII)通过衍生自Grubb烯烃转移方法(方案2)的简单酯(例如甲基、乙基、叔丁基)的碱或酸水解进行制备。从VIII至IX酮氨基甲酸酯IV几种酯化方法是可能的：1)IIIV与醇(HO-C(R2)(R3)(R4))使用偶联试剂(例如N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、EDC、HBTU、HATU、TBTU、PyBOP等)在碱性条件下(例如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、N,N-4-二甲基氨基吡啶等)偶联；2)用活化的烷烃(X-C(R2)(R3)(R4))，其中X＝Otf、Ots、Oms、I、Br和Cl)在碱性条件下(例如NaOH、NaH、NaCO3、K2CO3、Cs2CO3、NaHCO3等)使IIIV烷基化；以及3)用醇(HO-C(R2)(R3)(R4))，使用Mitsunobu条件(例如偶氮二甲酸二乙酯和三苯膦或类似试剂)酯化IIIV。
方案5.O-糖基化酯(IX)从O-糖基化羧酸(VIII)的一般合成。
方案6示例O-糖基化羧酸(VIII)与胺偶联，形成O-糖基化酰胺(X)。在碱性条件下(例如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、N,N-4-二甲基氨基吡啶)在胺(N(C-(R2)(R3)(R4))R6)与偶联试剂(例如N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)、EDC、HBTU、HATU、TBTU、PyBOP等)之间的标准酰胺偶联条件。
方案6.O-糖基化酰胺(X)从O-糖基化羧酸(VIII)的一般合成。
方案7示例在标准重氮基环丙烷化条件下，使用四羧酸铑催化剂(例如乙酸铑(II)二聚体、三氟乙酸铑(II)二聚体、四[N-邻苯二甲酰基-(S)-叔-亮氨酸]二铑、四[2-吡咯烷酮-5(S)-甲酸甲酯]二铑(II)，等)，O-糖基化末端烯烃(IV)的环丙烷化，形成O-糖基化反式-环丙基酯或酰胺(XI)。
方案7.O-糖基化反式-环丙基酯或酰胺(XI)从O-糖基化物末端烯烃(IV)的一般合成。
方案8示例O-糖基化(Z)-异构体α,β-不饱和酯或酰胺(VII)的环丙烷化，形成O-糖基化顺式-环丙基酯或酰胺(XII)。几种方法是可能的，使用Corey-Chaykovsky环丙烷化条件(例如二甲基氧代锍甲基叶立德，其使用碘化三甲基氧化锍在DMSO和氢化钠中进行制备)或Simmons–Smith条件(例如碘化碘甲基锌，其使用二碘代甲烷和锌-铜偶进行制备)。
方案8.O-糖基化顺式-环丙基酯或酰胺(XII)从O-糖基化(Z)-异构体α,β-不饱和酯或酰胺(VII)从O-糖基化醛(VI)的一般合成。
II.实验部分
一般信息：
所有化学试剂均通过商业采购，且除非另有说明，否则在没有进一步纯化的情况下使用。使用硅胶60(230-400目)进行了柱色谱法，用涂覆硅胶的板进行了分析型TLC。用钼酸铈铵(CAM)、对茴香醛(Anis)、高锰酸钾(KMnO4)或茚三酮染色液染色TLC板。使用自动化Varian Inova 500MHz(MestReNova软件：14.1.2-25024版)或Bruker 400MHz使用常规氘代溶剂例如氧化氘、氯仿-d或甲醇-d4，记录了1H NMR谱。使用Shimadzu LC-20AD泵和LCMS-2020单四极液相色谱质谱仪进行了LCMS。使用配备G4212 DAD和G6140 MS检测器(ESI：正或负离子模式)的Agilent 1290 UHPLC***进行了质谱分析。使用Agilent Eclipse-Plus C18柱(2.1mm x 50mm)与梯度洗脱(流动相A：0.05％TFA水溶液；流动相B：含有0.1％AcOH或0.025％TFA的乙腈)，以0.5-1.0mL/min的流速分析了样品。使用配备火焰电离检测器的Agilent GC，应用Agilent J&W CYCLOSIL-B(30m x 250μm x 0.25μm)柱(条件：入口温度：200℃；运行时间：60min；流速：1mL/min；载气：氦气；检测器温度：240℃)进行了气相色谱法分析。
苯甲酸(2S,3R,5R,6S)-5-(苯甲酰氧基)-2-甲基-6-[(三氯乙酰亚氨基)氧基]噁烷-3-基酯(C-01)的制备：
将苯甲酸(2S,3R,5R)-5-(苯甲酰氧基)-6-羟基-2-甲基噁烷-3-基酯(40.0g，112mmol，1.00eq.)溶于DCM(200mL)，向该反应体系中加入三氯乙腈(81.0g，561mmol，56.2mL，5.00eq.)。用氮气给该混合物脱气3次，冷却至0℃。在0℃向该反应体系中滴加DBU(8.54g，56.1mmol，8.46mL，0.50eq.)，在0℃搅拌1.5h。TLC显示反应完成(3：1石油醚-乙酸乙酯，SM Rf＝0.45，Rf(C-01)＝0.80)。将得到的黑色液体C-01在未经进一步纯化的情况下直接使用。
苯甲酸(2S,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-2-(2,2,2-三氯-1-亚氨基乙氧基)四氢-2H-吡喃-3-基酯(C-02)的制备：
向搅拌的苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基酯(7.30g，14.90mmol)在DCM(50mL)中的溶液中加入CCl3CN(3.10mL，29.80mmol)和DBU(0.210mL，1.50mmol)。将得到的混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。真空浓缩该反应体系，然后通过柱色谱法纯化(220g硅胶，0％-30％在己烷中的丙酮)，得到C-02(4.5g，48％收率)，为白色泡沫体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.65(s，1H)，7.81–7.76(m，2H)，7.71–7.65(m，4H)，7.61(ddt，J＝8.8，7.4，1.3Hz，1H)，7.46–7.41(m，2H)，7.40–7.37(m，1H)，7.37–7.32(m，3H)，7.32–7.29(m，2H)，6.14(s，1H)，5.16(dt，J＝4.5，2.1Hz，1H)，4.09–4.01(m，1H)，3.76(ddd，J＝11.1，9.3，4.4Hz，1H)，2.12(ddd，J＝14.1，11.2，3.0Hz，1H)，2.07–2.00(m，1H)，1.35(d，J＝6.2Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝634.2[M+H]。
使用上述方案，表1概括了另外的碳水化合物原料，其在组装适合的保护基后由商购试剂制备。
表1.三氯乙烷亚氨酰基碳水化合物
(2R)-己-5-烯-2-醇(I-01)的制备：
将(R)-(+)-氧化丙烯(99.0g，1.70mol，119mL，1.00eq.)溶于THF(534mL)。向该反应混合物中加入固体形式的溴化亚铜(I)(24.4g，170mmol，5.19mL，0.10eq.)。将该反应体系在氮气气氛中冷却至-70℃，向该反应体系中滴加溴化烯丙基镁(1M，2.22L，1.30eq.)，历时4h。将该反应体系温热至15℃，在15℃搅拌4h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯，Rf(I-01)＝0.39)。在0℃用氯化铵水溶液(1.0L)猝灭反应，然后用MTBE(3x 5.0L)萃取。分离各层，用盐水(2x 2.0L)洗涤有机层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，在30℃真空浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，5：1石油醚-乙酸乙酯)，得到I-01(43.3g，25％收率)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.87-5.80(m，1H)，5.06-4.95(m，1H)，3.84-3.82(m，1H)，3.81-3.79(m，1H)，2.18-2.11(m，1H)，1.61-1.52(m，2H)，1.19(d，J＝6.0Hz，3H)。手性GC：99.9％ee。
苯甲酸(2S,3R,5R,6R)-5-(苯甲酰氧基)-6-[(2R)-己-5-烯-2-基氧基]-2-甲基噁烷-3-基酯(T-01)的制备：
向粗制的C-01溶液中加入
分子筛，用氮气给该反应体系脱气3次。在25℃将化合物I-01(12.3g，123mmol，1.10eq.)加到该反应体系中，将该混合物冷却至-20℃。在-20℃向该反应体系中滴加TMSOTf(12.4g，55.9mmol，10.1mL，0.50eq.)。将该混合物在-20℃搅拌1.5h。TLC显示反应完成(3：1石油醚-乙酸乙酯，SM Rf(C-01)＝0.80，Rf(T-01)＝0.88)。加入水(500mL)以猝灭反应，用DCM(3x 300mL)萃取该混合物。分离各层，用盐水(2x 50mL)洗涤有机层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，2：1石油醚-乙酸乙酯)，得到T-01(29.0g，59％收率)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.14-8.05(m，4H)，7.59-7.27(m，6H)，5.94-5.86(m，1H)，5.17-4.98(m，5H)，4.17-4.13(m，1H)，3.92-3.87(m，1H)，2.46-2.42(m，1H)，2.27-2.20(m，3H)，1.79-1.63(m，2H)，1.32(d，J＝4.2Hz，3H)，1.23(d，J＝4.2Hz，3H)。
(2R,3R,5R,6S)-2-[(2R)-己-5-烯-2-基氧基]-6-甲基噁烷-3,5-二醇(T-02)的制备：
将化合物T-01(23.0g，52.4mmol，1.00eq.)溶于THF(160mL)，然后在25℃加入水(230mL)。向该反应混合物中加入固体形式的LiOH·H2O(22.0g，524mmol，10.0eq.)，将该反应体系加热至70℃。搅拌16h后，TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯，SM Rf(T-01)＝0.24，Rf(T-02)＝0.00)。在40℃真空浓缩该混合物以除去THF。加入水(400mL)，用乙酸乙酯(3x 400mL)萃取该混合物。分离各层，用盐水(2x 400mL)洗涤有机层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩，得到T-02(12g，粗品)，为无色油状物，在未经进一步纯化的情况下直接使用它。
叔丁基({[(2S,3R,5R,6R)-5-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-[(2R)-己-5-烯-2-基氧基]-2-甲基噁烷-3-基]氧基})二甲基硅烷(T-03)的制备：
将化合物T-02(11.0g，47.7mmol，1.00eq.)溶于THF(70mL)，加入固体形式的硝酸银(20.2g，119mmol，2.50eq.)和咪唑(13.0g，191mmol，4.00eq.)。在氮气气氛中将该反应体系冷却至0℃。向该反应体系中加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(21.6g，143mmol，3.00eq.)，在25℃搅拌16h。TLC显示反应完成。加入水(200mL)，用乙酸乙酯(3x 150mL)萃取该混合物。分离各层，用盐水(2x 100mL)洗涤有机层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，20：1-10：1石油醚-乙酸乙酯)，得到T-03(14.0g，64％收率)，为黄色油状物。
二苯甲酸(3R,5R,6R)-2-甲基-6-(戊-4-烯-1-基氧基)四氢-2H-吡喃-3,5-二基酯(T-04)的制备：
向二苯甲酸(2R,3R,5R)-2-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-3,5-二基酯(0.300g，0.842mmol)在DCM(15mL)中的溶液中加入4-戊烯-1-醇(0.260mL，2.52mmol)和
分子筛(0.100g)。将该反应混合物冷却至0℃，随后通过注射器滴加BF3·Et2O(0.420mL，3.37mmol)。将得到的混合物温热至室温，搅拌4h，然后用三乙胺(2mL)将其猝灭。真空浓缩溶剂，通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-30％在己烷中的丙酮)，得到T-04(0.200g，56％)，为无色油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.16–8.11(m，2H)，8.08–8.03(m，2H)，7.64–7.57(m，2H)，7.52–7.45(m，4H)，5.88(ddt，J＝16.9，10.2，6.6Hz，1H)，5.26–5.17(m，2H)，5.14–5.00(m，2H)，4.85(s，1H)，4.10(dd，J＝9.7，6.2Hz，1H)，3.81(dt，J＝9.7，6.6Hz，1H)，3.55(dt，J＝9.6，6.4Hz，1H)，2.44(dt，J＝13.4，3.9Hz，1H)，2.28–2.20(m，3H)，1.84–1.75(m，2H)，1.32(d，J＝6.2Hz，3H)。质量分析(ESI，+ve)＝425.2[M+H]。
苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-(((R)-己-5-烯-2-基)氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基酯(T-05)的制备：
向搅拌的C-02(0.570g，0.900mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入(2R)-(-)-己-5-烯-2-醇(0.165mL，1.35mmol)。将得到的混合物冷却至0℃，随后用TMSOTf(0.080mL，0.450mmol)处理。将该反应混合物温热至室温，在氮气气氛中搅拌2h。使得到的混合物分配在水(5mL)与DCM(10mL)之间。用饱和NaHCO3水溶液(5mL)、盐水(5mL)洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(40g硅胶，0％-30％在己烷中的丙酮)，得到T-05(0.420g，82％收率)，为浅棕色油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.77–7.73(m，2H)，7.72–7.66(m，4H)，7.58(ddt，J＝8.8，7.2，1.3Hz，1H)，7.43–7.38(m，3H)，7.37–7.29(m，5H)，5.91(ddt，J＝16.9，10.2，6.5Hz，1H)，5.12(dq，J＝17.1，1.7Hz，1H)，5.07–5.02(m，1H)，4.90(td，J＝3.1，1.4Hz，1H)，4.78(s，1H)，3.96–3.89(m，1H)，3.87–3.79(m，1H)，3.68(ddd，J＝11.2，9.2，4.3Hz，1H)，2.31–2.16(m，2H)，2.06(ddd，J＝14.0，11.3，3.0Hz，1H)，1.93–1.86(m，1H)，1.76(dddd，J＝13.4，9.3，7.4，5.9Hz，1H)，1.65–1.58(m，1H)，1.29(d，J＝6.2Hz，3H)，1.17(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝573.2[M+H]。
使用上述方案，由表2中的化合物和末端烯醇制备下列碳水化合物烷烃原料。通过与溴化3-丁烯基镁反应由酮(例如丙酮、环丙酮、环丁酮)制备二取代的烯醇。
表2.碳水化合物末端烯烃
叔丁基({[(2S,3R,5R,6R)-5-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-2-甲基-6-{[(2R)-4-(环氧乙烷-2-基)丁-2-基]氧基}噁烷-3-基]氧基})二甲基硅烷(I-02)的制备：
将化合物T-03(6.00g，13.0mmol，1.00eq.)溶于DCM(42mL)。在0℃将m-CPBA(3.95g，18.3mmol，80％纯度，1.40eq.)作为固体加到该反应混合物中。将该反应混合物在25℃搅拌16h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯，SM Rf(T-03)＝0.61，Rf(I-02)＝0.43)。过滤该混合物，用DCM洗涤固体，采集滤液。用NaHSO3水溶液(3x70mL)和NaHCO3水溶液(3x 70mL)洗涤有机滤液。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，10：1石油醚-乙酸乙酯)，得到I-02(5.78g，81％收率)，为无色油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.53(s，1H)，3.89-3.49(m，4H)，2.93(brs，1H)，2.79-2.75(m，1H)，2.50-2.43(m，1H)，1.80-1.41(m，6H)，1.19-1.11(m，6H)，0.90-0.87(m，18H)，0.00(s，12H)。
(4R)-4-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基氧噁烷-2-基]氧基}戊醛(I-03)的制备：
将化合物T-03(3.00g，6.54mmol，1.00eq.)溶于DCM(100mL)。使臭氧在-70℃进入该混合物起泡10min，直至溶液变成蓝色。使氧气在-70℃进入该反应混合物起泡20min，直至蓝色溶液变成无色。向该反应混合物中加入固体形式的三苯膦(5.14g，19.6mmol，3.00eq.)。将该反应体系在25℃搅拌16h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯)。真空浓缩溶剂，通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，5：1石油醚-乙酸乙酯)，得到I-03(2.02g，67％收率)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.81(s，1H)，4.54(s，1H)，3.88-3.50(m，4H)，2.60-2.50(m，2H)，1.86-1.76(m，4H)，1.18-1.13(m，6H)，0.90-0.74(m，18H)，0.06(s，12H)。
苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-(((2R)-5,6-二羟基己-2-基)氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基酯(I-04)的制备：
向T-05(0.300g，0.524mmol)在THF(3mL)和水(1mL)中的溶液中加入4-甲基吗啉N-氧化物(0.25mL，1.05mmol)和四氧化锇(0.34mL，0.0524mmol，4％重量的水溶液)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。用饱和NaHCO3水溶液(2mL)使得到的混合物猝灭，然后分配在乙酸乙酯(10mL)与水(5mL)之间。用乙酸乙酯萃取水层(2x 10mL)。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-40％在己烷中的丙酮)，得到I-04(0.280g，88％收率)，为无色糊状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.76–7.73(m，2H)，7.72–7.65(m，4H)，7.58(ddt，J＝8.7，7.4，1.3Hz，1H)，7.43–7.38(m，3H)，7.38–7.29(m，6H)，4.90(s，1H)，4.79(s，1H)，3.93–3.85(m，2H)，3.84–3.78(m，1H)，3.75(ddt，J＝10.1，6.8，3.6Hz，1H)，3.71–3.64(m，1H)，3.58–3.51(m，1H)，2.35(dd，J＝13.0，4.3Hz，1H)，2.10–2.00(m，2H)，1.95–1.87(m，2H)，1.83–1.69(m，2H)，1.69–1.61(m，2H)，1.31–1.27(m，3H)，1.19(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝607.2[M+H]。
苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-2-(((R)-5-氧代戊-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3-基酯(I-05)的制备：
向I-04(0.280g，0.462mmol)在THF(2mL)和水(2mL)中的溶液中加入NaIO4(0.224g，1.05mmol)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。用饱和NaHCO3水溶液(2mL)使得到的混合物猝灭，然后分配在乙酸乙酯(10mL)与水(5mL)之间。用乙酸乙酯萃取水层(2x 10mL)。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-30％在己烷中的丙酮)，得到I-05(0.150g，57％收率)，为无色糊状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.89(t，J＝1.6Hz，1H)，7.76–7.72(m，2H)，7.72–7.66(m，4H)，7.60–7.56(m，1H)，7.43–7.38(m，3H)，7.38–7.29(m，5H)，4.88(td，J＝3.2，2.0Hz，1H)，4.77(s，1H)，3.91–3.80(m，2H)，3.67(ddd，J＝11.2，9.1，4.3Hz，1H)，2.64(dddd，J＝10.9，8.3，6.8，1.6Hz，2H)，2.01(ddd，J＝14.0，11.2，3.0Hz，1H)，1.96–1.86(m，3H)，1.29(d，J＝6.2Hz，3H)，1.19(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，8H)。质量分析(ESI，+ve)＝575.1[M+H]。
(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸叔丁酯(1)的制备：
将化合物T-02(5.00g，21.7mmol，1.00eq.)溶于DCM(330mL)，在15℃将丙烯酸叔丁酯(13.9g，108mmol，15.7mL，5.00eq.)加到该反应混合物中。在15℃将Grubb M204催化剂(1.84g，2.17mmol，0.10eq.)加到该反应体系中，用氮气给该混合物脱气3次。将该反应体系加热至50℃，在50℃搅拌16h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯，SM Rf(T-02)＝0.50，Rf(1)＝0.00)。真空浓缩溶剂，通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，100％乙酸乙酯)，然后再通过制备型HPLC纯化(柱：Agela DuraShell C18 250x 25mm，10μm；流动相A：0.05％氢氧化铵水溶液(v/v)，流动相B：ACN；梯度B％：12％-46％，运行时间：22min)，得到1(2.00g，6.05mmol，28％收率)，为赤褐色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.94-6.87(m，1H)，5.79-5.75(m，1H)，4.79(s，1H)，3.85-3.81(m，2H)，3.67-3.62(m，2H)，2.32-2.29(m，2H)，1.48(s，9H)，1.28(d，J＝6.0Hz，3H)，1.15(d，J＝6.0Hz，3H)。LCMS分析(正模式)＝353.2[M+Na]。
2-[(3R)-3-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}丁基]环丙烷-1甲酸叔丁酯(I-06)的制备：
将2-二乙氧基磷酰基乙酸叔丁酯(398mg，1.58mmol，1.50eq.)溶于1,4-二噁烷(3.5mL)，冷却至15℃。在氮气气氛中将叔丁醇钠(121mg，1.26mmol，1.20eq.)加到该反应体系中。将该反应混合物在15℃搅拌1h。加入化合物I-03(500mg，1.05mmol，1.00eq.)，将该混合物在130℃加热16h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯)。将乙酸加到该混合物中，猝灭反应，使pH达到7。向该混合物中加入盐水(2.0mL)和水(5.0mL)，用乙酸乙酯(3x3.0mL)萃取该反应体系。分离各层，用NaHCO3水溶液(2x 10mL)洗涤有机层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。通过制备型TLC(硅胶，5：1石油醚-乙酸乙酯)纯化残余物，得到I-06(100mg，17％收率)，为无色油状物。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.54(s，1H)，3.86-3.74(m，2H)，3.66-3.56(m，2H)，1.80-1.78(5H)，1.28(s，9H)，1.30-1.26(m，2H)，1.19-1.09(m，6H)，0.90-0.89(m，18H)，0.68-0.05(m，12H)。
2-[(3R)-3-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}丁基]环丙烷-1甲酸叔丁酯(2)的制备：
将化合物I-06(500mg，872μmol，1.00eq.)溶于THF(3.5mL)，在15℃将Et3N·3HF(1.41g，8.73mmol，1.42mL，10.0eq.)加到该反应混合物中。将该反应体系在50℃搅拌16h。LCMS显示反应完成。加入NaHCO3水溶液使pH达到8，真空浓缩该混合物。通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，5：1石油醚-乙酸乙酯)，得到2(130mg，43％收率)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.70(s，1H)，3.84-3.80(m，2H)，3.66-3.58(m，2H)，2.10-2.01(m，1H)，1.87-1.76(m，2H)，1.71-1.51(m，4H)，1.44(s，9H)，1.35-1.19(m，6H)，1.15-1.03(m，4H)，0.66-0.56(m，1H)。LCMS分析(正模式)＝367.2[M+Na]。
(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸甲酯(I-07)的制备：
将化合物T-03(10.0g，21.8mmol，1.00eq.)溶于DCM(300mL)，在25℃将丙烯酸甲酯(9.38g，108mmol，9.81mL，5.00eq.)加到该反应混合物中。在25℃将Grubb M204催化剂(1.85g，2.18mmol，0.10eq.)加到该反应混合物中，然后将该混合物加热至50℃。将该反应混合物在50℃搅拌16h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯，SM Rf(T-03)＝0.61，Rf(I-07)＝0.44)。真空浓缩溶剂，通过柱色谱法纯化残余物(硅胶，5：1石油醚-乙酸乙酯)，得到I-07(8.3g，74％收率)，为无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.97-6.80(m，1H)，5.79(d，J＝15.6Hz，1H)，4.48(s，1H)，4.07-4.03(m，2H)，3.71(s，3H)，3.59-3.45(m，2H)，2.31-2.22(m，2H)，1.74-1.69(m，4H)，1.19(d，J＝7.2Hz，3H)，1.12(d，J＝6.0Hz，3H)，0.84-0.83(m，18H)，0.01-0.00(m，12H)。LCMS分析(正模式)＝539.3[M+Na]。
(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸(I-08)的制备：
将化合物I-07(8.30g，16.0mmol，1.00eq.)溶于甲醇(83mL)、水(41.5mL)和THF(58mL)的混合物。在25℃将LiOH·H2O(1.35g，32.1mmol，2.00eq.)在水(41.5mL)中的溶液加到该混合物中。将该反应体系在50℃搅拌3h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯，SMRf(I-07)＝0.8，Rf(I-08)＝0.17)。向该反应混合物中加入1N HCl，使得pH＝2。用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取该混合物。分离各层，用盐水(40mL)洗涤有机层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩，得到I-08(7.3g，粗品)，为棕色油状物，在未经进一步纯化的情况下直接使用它。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸环己基甲酯(I-09)：
将化合物I-08(1.00eq.)和醇(3.00eq.)溶于DCM(3.5mL)。向该溶液中加入固体形式的DCC(1.10eq.)和DMAP(0.80eq.)，将该反应混合物在25℃搅拌16h。TLC显示反应完成(5：1石油醚-乙酸乙酯)。真空浓缩溶剂，通过柱色谱法纯化残余物(硅胶,石油醚-乙酸乙酯)，得到I-09，为黄色油状物，直接用于最终的脱保护步骤。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.97-6.91(m，1H)，5.82(d，J＝15.6Hz，1H)，4.48(s，1H)，3.88-3.47(m，6H)，2.29-2.11(m，2H)，1.74-1.65(m，9H)，1.25-0.80(m，14H)，0.84-0.83(m，18H)，0.00(s，12H)。
使用上述方法制备了下列化合物：
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸苄酯(I-10)：
黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.31-7.28(m，5H)，7.02-6.96(m，1H)，5.84(d，J＝15.6Hz，1H)，5.11(s，2H)，4.48-4.47(m，1H)，3.75-3.70(m，2H)，3.59-3.46(m，2H)，2.30-2.22(m，2H)，1.74-1.65(m，4H)，1.20-1.02(m，8H)，0.84-0.82(m，18H)，0.00(s，12H)。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸吡啶-3-基甲酯(I-11)：
黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.58-8.51(m，2H)，7.66-7.64(m，1H)，7.26-7.22(m，1H)，7.01-6.95(m，1H)，5.83(d，J＝16.0Hz，1H)，5.11(s，2H)，4.48-4.47(m，1H)，3.75-3.70(m，2H)，3.59-3.48(m，2H)，2.31-2.23(m，1H)，1.74-1.68(m，4H)，1.20-1.02(m，9H)，0.84-0.68(m，18H)，0.00(s，12H)。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸吡啶-4-基甲酯(I-12)：
黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.55-8.53(m，2H)，7.15-7.10(m，2H)，7.03-7.69(m，1H)，5.88(d，15.6Hz，1H)，5.11(s，2H)，4.48-4.47(m，1H)，3.76-3.70(m，2H)，3.60-3.49(m，2H)，2.35-2.26(m，2H)，1.74-1.69(m，4H)，1.19-1.03(m，8H)，0.84-0.68(m，18H)，0.00(s，12H)。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸2-苯乙酯(I-13)：
黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.26-7.20(m，2H)，7.18-7.14(m，3H)，6.93-6.89(m，1H)，5.77(d，J＝15.6Hz，1H)，4.48-4.47(m，1H)，4.29-4.22(m，2H)，3.73-3.70(m，2H)，3.58-3.49(m，2H)，2.92-2.86(m，3H)，2.31-2.11(m，2H)，1.75-1.51(m，4H)，1.15-1.01(m，8H)，0.84-0.68(m，18H)，0.00(s，12H)。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸环己基甲酯(3)：
将化合物I-09(1.00eq.)溶于THF(7V)，加入Et3N·3HF(10eq.)。将该反应体系在50℃搅拌4h。LCMS显示反应完成。真空浓缩溶剂，通过制备型HPLC纯化残余物(柱：Phenomena Luna C18 200mm x 40mm，10μm；流动相A：水w/0.2％甲酸，流动相B：ACN；梯度B％：30％-70％；运行时间：8min)，得到粗产物。通过SFC纯化粗产物，通过SFC纯化粗产物(仪器：Thar SFC80制备型SFC；柱：REGIS(S,S)WHELK-O1(250mm x 30mm，10μm)；流动相A：超临界CO2，流动相B：乙醇；等度：B％＝30％；流速：55mL/min；波长：220nm；柱温：40℃。***背压：100巴；运行时间：10min)，得到26.0mg的3，为无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.00(dt，J＝15.6，7.0Hz，1H)，5.85(d，J＝15.6Hz，1H)，4.70(s，1H)，3.94(d，J＝6.4Hz，2H)，3.87-3.77(m，4H)，3.67-3.52(m，2H)，2.42-2.27(m，2H)，2.17-2.02(m，1H)，1.82-1.57(m，10H)，1.28(d，J＝6.4Hz，3H)，1.26-1.17(m，2H)，1.16(d，J＝6.4Hz，3H)，1.07-0.92(m，2H)。LCMS分析(正模式)＝393.2[M+Na]；98.9％LCMS纯度。
使用上述方法制备了下列化合物：
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸苄酯(4)：
化合物4：6.5mg无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.38-7.32(m，5H)，7.05(dt，J＝15.6，7.5Hz，1H)，5.90(d，J＝15.6Hz，1H)，5.18(s，2H)，4.69(s，1H)，3.86-3.80(m，2H)，3.63-3.54(m，2H)，2.35-2.31(m，2H)，2.06(d，J＝13.2Hz，1H)，1.81-1.56(m，5H)，1.26(d，J＝6.0Hz，3H)，1.15(d，J＝6.0Hz，3H)。LCMS分析(正模式)＝387.2[M+Na]；92.7％LCMS纯度。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸吡啶-3-基甲酯(5)：
化合物5：26.1mg无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.64(d，J＝1.6Hz，1H)，8.59-8.57(m，1H)，7.71(dd，J＝6.0，2.0Hz，1H)，7.30(dd，J＝7.6，4.3Hz，1H)，7.07(dm，J＝15.6Hz，1H)，5.88(dd，J＝15.6，1.6Hz，1H)，5.19(s，2H)，4.70(s，1H)，3.85-3.80(m，2H)，3.63-3.59(m，2H)，2.36-2.32(m，2H)，2.00-2.10(m，1H)，1.82-1.59(m，5H)，1.26(d，J＝6.0Hz，3H)，1.15(d，J＝6.0Hz，3H)。LCMS分析(正模式)＝366.2[M+H]；98.3％LCMS纯度。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸吡啶-4-基甲酯(6)：
化合物6：26.4mg无色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.604(d，J＝4.8Hz，2H)，7.268(d，J＝4.0Hz，2H)，7.11(dt，J＝15.6，7.0Hz，1H)，5.943(d，J＝14.4Hz，1H)，5.192(s，2H)，4.709(s，1H)，3.89-3.81(m，2H)，3.66-3.59(m，2H)，2.47-2.32(m，2H)，2.12-2.04(m，1H)，1.87-1.64(m，5H)，1.27(d，J＝6.0Hz，3H)，1.16(d，J＝6.0Hz，3H)。LCMS分析(正模式)＝366.2[M+H]；99.7％LCMS纯度。
化合物(2E,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸2-苯乙酯(7)：
化合物7：26.1mg无色油状物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.33-7.22(m，5H)，7.00(dd，J＝15.6，7.8Hz，1H)，5.84(d，J＝15.6Hz，1H)，4.70(s，1H)，4.35(t，J＝7.2Hz，2H)，3.84-3.84(m，2H)，3.63-3.57(m，2H)，2.97(t，J＝7.2Hz，2H)，2.30-2.20(m，2H)，2.08(d，J＝12.8Hz，1H)，1.83-1.45(m，5H)，1.27(d，J＝6.0Hz，3H)，1.16(d，J＝6.0Hz，3H)。LCMS分析(正模式)＝401.2[M+Na]；87.1％LCMS纯度。
苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-(((R,E)-7-异丙氧基-7-氧代庚-5-烯-2-基)氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基酯(I-14)的制备：
使用与制备I-07相同的方法，向T-05(0.200g，0.349mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入丙烯酸异丙酯(0.090mL，0.699mmol)和Grubb M204催化剂(0.015g，0.0174mmol)，分离、纯化后，得到I-14(0.130g，57％收率)，为无色糊状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.76–7.73(m，2H)，7.72–7.66(m，4H)，7.58(ddt，J＝8.7，7.1，1.3Hz，1H)，7.44–7.38(m，3H)，7.38–7.29(m，5H)，7.04(dt，J＝15.7，6.8Hz，1H)，5.90(dt，J＝15.7，1.6Hz，1H)，5.10(p，J＝6.3Hz，2H)，4.89(dt，J＝4.5，2.1Hz，1H)，4.77(s，1H)，3.91–3.80(m，2H)，3.68(ddd，J＝11.2，9.2，4.3Hz，1H)，2.51–2.25(m，3H)，2.04(ddd，J＝14.0，11.2，3.0Hz，2H)，1.90(dt，J＝14.0，3.8Hz，1H)，1.79(dddd，J＝13.4，9.4，5.7，3.8Hz，1H)，1.72–1.63(m，1H)，1.29(dd，J＝6.3，5.1Hz，9H)，1.17(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝660.2[M+H]。
(R,E)-6-(((2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)庚-2-烯酸异丙酯(I-15)的制备：
向I-14(0.130g，0.197mmol)在异丙醇(5mL)中的溶液中加入1％NaOH水溶液(2.3mL，0.591mmol)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。使得到的混合物分配在乙酸乙酯(10mL)与水(5mL)之间。用乙酸乙酯萃取水层(2x 10mL)。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-30％在己烷中的丙酮)，得到I-15(0.060g，55％收率)，为无色油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.75–7.66(m，4H)，7.48–7.43(m，2H)，7.43–7.37(m，4H)，7.02(dt，J＝15.6，6.8Hz，1H)，5.89(dt，J＝15.6，1.6Hz，1H)，5.10(p，J＝6.3Hz，1H)，4.63–4.58(m，1H)，3.82(ddd，J＝7.8，6.3，5.1Hz，1H)，3.77(dd，J＝8.9，6.2Hz，1H)，2.45–2.27(m，3H)，1.90–1.71(m，4H)，1.69–1.61(m，2H)，1.29(d，J＝6.3Hz，6H)，1.19(d，J＝6.2Hz，3H)，1.14(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝555.1[M+H]。
(R,E)-6-(((2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)庚-2-烯酸异丙酯(8)的制备：
向I-15(0.055g，0.099mmol)在THF(3mL)中的溶液中加入1.0MTBAF在THF中的溶液(0.500mmol，0.500mL)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物，通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-15％在DCM中的MeOH)，得到8(0.013g，42％收率)，为无色油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.01(dt，J＝15.7，6.8Hz，1H)，5.84(dt，J＝15.6，1.6Hz，1H)，5.08(p，J＝6.2Hz，1H)，4.77–4.69(m，1H)，3.90–3.85(m，1H)，3.83(q，J＝2.9Hz，1H)，3.70–3.65(m，1H)，3.60(ddd，J＝11.0，9.1，4.4Hz，1H)，2.34(ttd，J＝8.5，6.8，1.7Hz，2H)，2.10(dddd，J＝13.0，4.5，3.5，1.0Hz，1H)，1.85(ddd，J＝13.2，10.9，3.0Hz，2H)，1.78–1.69(m，3H)，1.30(d，J＝6.1Hz，3H)，1.28(d，J＝6.3Hz，6H)，1.18(d，J＝6.1Hz，3H)。质量分析(ESI，+ve)＝317.2.1[M+H]。
苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-2-(((2R)-7-(叔丁氧基)-5-羟基-7-氧代庚-2-基)氧基)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基酯(I-16)的制备：
向烘干的配备低温温度计和氮气入口的25-mL 3-颈圆底烧瓶中加入乙酸叔丁酯(0.140mL，1.044mmol)和THF(5mL)。将得到的混合物冷却至-75℃，然后通过注射器滴加1.96M LDA(0.400mL，0.783mmol)。将该反应混合物在-75℃搅拌2h，然后通过注射器滴加在THF(3mL)中苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-甲基-2-(((R)-5-氧代戊-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃-3-基酯(0.150g，0.261mmol)。将该反应混合物再搅拌1小时，然后用饱和氯化铵水溶液(1mL)猝灭，温热至室温，使其分配在乙酸乙酯(10mL)与水(5mL)之间。用乙酸乙酯(2x 10mL)萃取水层。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-30％在己烷中的丙酮)，得到I-16(0.090g，50％收率)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.76–7.72(m，2H)，7.72–7.66(m，4H)，7.60–7.55(m，1H)，7.43–7.38(m，3H)，7.37–7.29(m，5H)，4.89(d，J＝3.6Hz，1H)，4.77(s，1H)，4.10–3.99(m，2H)，3.93–3.79(m，3H)，3.67(tdd，J＝9.1，4.2，2.3Hz，1H)，3.27(s，1H)，2.52(ddd，J＝16.4，4.7，3.0Hz，1H)，2.42(ddd，J＝16.4，9.1，0.8Hz，1H)，2.03(dt，J＝11.3，3.0Hz，1H)，1.89(dt，J＝13.7，3.7Hz，1H)，1.80–1.63(m，4H)，1.51(d，J＝1.5Hz，9H)，1.28(dd，J＝6.3，3.2Hz，3H)，1.17(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝691.2[M+H]。
(6R)-6-(((2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-羟基庚酸叔丁酯(I-17)的制备：
使用与制备I-15相同的方法，向I-16(0.090g，0.130mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中加入1％NaOH水溶液(0.520mL，0.520mmol)，分离、纯化后，得到I-17(0.035g，46％收率)，为无色糊状物。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.13–8.07(m，1H)，7.71–7.59(m，5H)，7.48(dd，J＝8.4，6.9Hz，2H)，7.39(dp，J＝9.3，6.1，4.9Hz，5H)，4.59(s，1H)，4.01(s，1H)，3.76(dd，J＝14.1，7.1Hz，2H)，3.64(d，J＝13.4Hz，2H)，2.49–2.32(m，2H)，2.17(d，J＝0.6Hz，2H)，1.88–1.73(m，2H)，1.62(ddd，J＝21.8，11.3，5.7Hz，5H)，1.47(t，J＝0.9Hz，9H)，1.15(d，J＝6.2Hz，3H)，1.11(d，J＝6.1Hz，3H)，1.05(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝587.1[M+H]。
(6R)-6-(((2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-3-羟基庚酸叔丁酯(9)的制备：
向I-17(0.035g，0.060mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入THF中的1.0M TBAF(0.30mmol，0.300mL)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物，通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-15％在DCM中的MeOH)，得到9(0.015g，75％)，为无色油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ4.76–4.70(m，1H)，4.07–3.99(m，1H)，3.91–3.80(m，2H)，3.72–3.65(m，1H)，3.60(dddd，J＝11.4，9.1，4.6，2.4Hz，1H)，3.36–3.30(m，1H)，2.44(t，J＝3.3Hz，1H)，2.39(dd，J＝8.9，3.6Hz，1H)，2.13–2.07(m，1H)，1.85(dddd，J＝13.2，11.1，3.0，2.1Hz，2H)，1.73–1.64(m，3H)，1.63–1.55(m，2H)，1.49(s，9H)，1.30(dd，J＝6.2，3.6Hz，3H)，1.17(dd，J＝6.1，1.8Hz，3H)。质量分析(ESI，+ve)＝349.1[M+H]。
苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-2-(((R,E)-7-(叔丁氧基)-7-氧代庚-5-烯-2-基)氧基)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基酯(I-18)的制备：
使用与制备I-09相同的方法，向T-05(0.300g，0.524mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入丙烯酸叔丁酯(0.230mL，1.572mmol)和Grubb M204催化剂(0.025g，0.0262mmol)，分离、纯化后，得到I-18(0.300g，85％收率)，为无色糊状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.79–7.76(m，2H)，7.75–7.69(m，4H)，7.61(ddt，J＝8.7，7.1，1.3Hz，1H)，7.46–7.41(m，3H)，7.40–7.33(m，5H)，6.98(dt，J＝15.6，6.8Hz，1H)，5.88(dt，J＝15.6，1.6Hz，1H)，4.92(s，1H)，4.80(s，1H)，3.94–3.84(m，2H)，3.71(ddd，J＝11.1，9.1，4.3Hz，1H)，2.49–2.31(m，3H)，2.08(ddd，J＝14.0，11.2，2.9Hz，1H)，1.94(dt，J＝13.4，3.8Hz，1H)，1.87–1.78(m，1H)，1.71(ddd，J＝13.3，9.2，5.0Hz，1H)，1.56(s，9H)，1.33(d，J＝6.2Hz，3H)，1.21(d，J＝6.1Hz，3H)，1.12(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝673.1[M+H]。
(R,E)-6-(((2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)庚-2-烯酸叔丁酯(I-19)的制备：
使用与制备I-15相同的方法，向I-18(0.300g，0.446mmol)在MeOH(5mL)中的溶液中加入1％NaOH水溶液(3.5mL，0.892mmol)，分离和纯化后，得到I-19(0.170g，67％收率)，为无色油状物。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.74–7.67(m，4H)，7.48–7.37(m，6H)，6.93(dt，J＝15.6，6.8Hz，1H)，5.83(dt，J＝15.6，1.6Hz，1H)，4.61(d，J＝1.6Hz，1H)，3.84–3.75(m，2H)，3.69–3.62(m，2H)，2.43–2.26(m，3H)，1.89–1.80(m，2H)，1.78–1.71(m，1H)，1.68–1.62(m，1H)，1.51(s，9H)，1.19(d，J＝6.2Hz，3H)，1.14(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝569.2[M+H]。
(R)-6-(((2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酸叔丁酯(I-20)的制备：
向连接3通阀的I-19(0.060mL)在甲醇(3mL)中的溶液中加入Pd/C(0.015g，0.0105mmol，10％wt湿的形式)。首先将该反应混合物抽真空，然后用氮气吹扫–将这种抽真空-然后-氮气吹扫程序重复3次，以确保烧瓶中仅有氮气。最后抽真空后，使氢气气囊连接至3通阀。将该反应混合物在室温在氢气气氛中搅拌18h。通过
垫过滤得到的混合物。真空浓缩滤液，得到I-20(0.045g，74％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.73–7.66(m，4H)，7.46–7.42(m，2H)，7.42–7.37(m，4H)，4.60(s，1H)，3.83–3.76(m，2H)，3.65(dq，J＝9.0，4.8Hz，2H)，3.52(s，2H)，2.32–2.25(m，2H)，1.87(ddd，J＝13.6，10.7，3.0Hz，1H)，1.83–1.77(m，1H)，1.71–1.61(m，3H)，1.50(d，J＝0.5Hz，2H)，1.48(s，9H)，1.19(d，J＝6.2Hz，3H)，1.12(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(d，J＝1.9Hz，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝571.2[M+H]。
(R)-6-(((2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)庚酸叔丁酯(10)的制备：
向I-20(0.045g，0.079mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入1.0MTBAF在THF中的溶液(0.35mmol，0.350mL)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物，通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-15％在DCM中的MeOH)，得到10(0.012g，46％收率)，为浅棕色糊状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ4.75–4.71(m，1H)，3.89–3.79(m，3H)，3.72(dd，J＝9.2，6.2Hz，1H)，3.59(ddd，J＝11.4，9.2，4.7Hz，1H)，3.38(d，J＝3.5Hz，1H)，2.25(t，J＝7.3Hz，2H)，2.15–2.07(m，1H)，1.86(ddd，J＝13.1，11.3，3.0Hz，2H)，1.67–1.61(m，3H)，1.60–1.54(m，2H)，1.46(s，9H)，1.32–1.29(m，3H)，1.15(d，J＝6.1Hz，3H)。质量分析(ESI，+ve)＝333.2[M+H]。
二苯甲酸(2R,3R,5R)-2-(((E)-6-(叔丁氧基)-6-氧代己-4-烯-1-基)氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3,5-二基酯(I-21)的制备：
使用与制备I-07相同的方法，向T-04(0.200g，0.471mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入丙烯酸叔丁酯(0.205mL，1.41mmol)和Grubb M204催化剂(0.020g，0.0235mmol)，分离、纯化后，得到I-21(0.180g，73％收率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.17–8.10(m，2H)，8.09–8.02(m，2H)，7.61(td，J＝7.3，1.7Hz，2H)，7.54–7.41(m，4H)，6.92(dt，J＝14.6，6.9Hz，1H)，5.83(d，J＝16.0Hz，1H)，5.27–5.13(m，2H)，4.84(s，1H)，4.07(dd，J＝9.9，6.1Hz，1H)，3.81(dt，J＝9.9，6.5Hz，1H)，3.55(dt，J＝9.9，6.1Hz，1H)，2.44(d，J＝13.9Hz，1H)，2.35(q，J＝7.2Hz，2H)，2.28–2.14(m，1H)，1.91–1.78(m，2H)，1.50(s，8H)，1.32(d，J＝6.2Hz，3H)。质量分析(ESI，+ve)＝525.1[M+H]。
(E)-6-(((2R,3R,5R)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)己-2-烯酸叔丁酯(11)的制备：
向I-21(0.180g，0.344mmol)在甲醇(2mL)中的溶液中加入K2CO3(0.014g，0.103mmol)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物，通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-15％在DCM中的MeOH)，得到11(0.070g，70％收率)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.90(dt，J＝15.6，7.0Hz，1H)，5.79(dt，J＝15.6，1.6Hz，1H)，4.59(d，J＝1.7Hz，1H)，3.88(s，1H)，3.79–3.71(m，1H)，3.68–3.57(m，2H)，3.48(dt，J＝9.8，5.9Hz，1H)，2.31(qd，J＝7.2，1.6Hz，2H)，2.14–2.07(m，1H)，1.92–1.75(m，4H)，1.51(s，8H)，1.32(d，J＝5.9Hz，3H)。质量分析(ESI，+ve)＝317.2[M+H]。
(2E)-6-{[(2S,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}-6-甲基庚-2-烯酸叔丁酯(I-22)的制备：
向搅拌的T-07(0.75mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入丙烯酸叔丁酯(1.50mmol)和Grubb M204催化剂(0.035mmol)。将该混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。用水(1mL)猝灭反应，然后分配在水(5mL)与DCM(10mL)之间。用(5mL)、盐水(5mL)水洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(乙酸乙酯-己烷)，得到I-22。
(2E)-6-{[(2S,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}-6-甲基庚-2-烯酸叔丁酯(12)的制备：
向I-22(0.2mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入1.0M TBAF在THF中的溶液(0.500mmol，0.500mL)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物，通过柱色谱法纯化粗产物(0％-15％在DCM中的MeOH)，得到12。
苯甲酸(2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-2-(((R,E)-7-乙氧基-7-氧代庚-5-烯-2-基)氧基)-6-甲基四氢-2H-吡喃-3-基酯(I-23)的制备：
向搅拌的T-05(0.420g，0.734mmol)在DCM(5mL)中的溶液中加入丙烯酸乙酯(0.160mL，1.470mmol)和Grubb M204催化剂(0.031g，0.0367mmol)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。用水(1mL)使该反应混合物猝灭，然后分配在水(5mL)与DCM(10mL)之间。用水(5mL)、盐水(5mL)洗涤有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(40g硅胶，0％-25％在己烷中的乙酸乙酯)，得到I-23(0.340g，72％收率)，为澄清油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.76–7.72(m，2H)，7.71–7.66(m，4H)，7.60–7.55(m，1H)，7.43–7.38(m，4H)，7.37–7.30(m，6H)，7.05(dt，J＝15.7，6.8Hz，1H)，5.92(dt，J＝15.6，1.6Hz，1H)，4.93–4.86(m，1H)，4.77(s，1H)，4.23(q，J＝7.1Hz，2H)，3.92–3.80(m，2H)，3.68(ddd，J＝11.1，9.1，4.3Hz，1H)，2.48–2.30(m，3H)，2.04(ddd，J＝14.0，11.2，3.0Hz，1H)，1.93–1.87(m，2H)，1.84–1.76(m，1H)，1.72–1.64(m，1H)，1.33(t，J＝7.1Hz，3H)，1.29(d，J＝6.2Hz，3H)，1.18(d，J＝6.1Hz，3H)，1.09(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝645.1[M+H]。
(R,E)-6-(((2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)庚-2-烯酸(I-24)的制备：
向搅拌的I-23(0.340g，0.527mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的溶液中加入氢氧化锂(0.050g，2.11mmol)和水(2mL)。将该反应混合物在60℃在氮气气氛中加热18h。将该反应混合物冷却至室温，用1MHCl酸化至pH＝5-6。用20％异丙醇的氯仿溶液(3x 10mL)萃取得到的混合物。用盐水(5mL)洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，含有AcOH的5％-40％在己烷中的乙酸乙酯)，得到I-24(0.220g，81％收率)，为白色泡沫体。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.74–7.67(m，4H)，7.49–7.43(m，2H)，7.40(tdd，J＝8.1，6.6，1.1Hz，4H)，7.16(dt，J＝15.7，6.8Hz，1H)，5.93(dt，J＝15.7，1.6Hz，1H)，4.62(d，J＝1.8Hz，1H)，3.87–3.80(m，1H)，3.79–3.73(m，1H)，3.71–3.62(m，2H)，2.41(ddq，J＝31.7，15.7，8.4Hz，3H)，1.90–1.81(m，2H)，1.80–1.73(m，2H)，1.72–1.63(m，2H)，1.19(d，J＝6.3Hz，3H)，1.15(d，J＝6.1Hz，3H)，1.08(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝513.2[M+H]。
(R,E)-6-(((2R,3R,5R,6S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-3-羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-1-(吡咯烷-1-基)庚-2-烯-1-酮(I-25)的制备：
向搅拌的I-24(0.075g，0.146mmol)在DCM(3mL)中的溶液中加入DIPEA(0.130mL，0.732mmol)、吡咯烷(0.040mL，0.439mmol)、EDCI(0.065mL，0.293mmol)和HOBT(0.056g，0.366mmol)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。用饱和氯化铵水溶液使该反应混合物猝灭(1mL)，然后分配在水(5mL)与DCM(10mL)之间。用20％异丙醇的氯仿溶液(2x5mL)萃取水层。用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，10％-40％在己烷中的丙酮)，得到I-25(0.035g，40％收率)，为澄清油状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.73–7.67(m，4H)，7.47–7.42(m，2H)，7.42–7.37(m，4H)，7.00(dt，J＝15.1，6.9Hz，1H)，6.18(dt，J＝15.1，1.6Hz，1H)，4.60(d，J＝1.8Hz，1H)，3.85–3.76(m，2H)，3.69–3.62(m，2H)，3.55(t，J＝6.6Hz，3H)，2.47–2.37(m，1H)，2.36–2.27(m，1H)，1.93(s，3H)，1.87(ddd，J＝13.5，10.6，3.1Hz，2H)，1.83–1.74(m，3H)，1.65(dq，J＝8.8，4.7，3.7Hz，1H)，1.32–1.26(m，1H)，1.19(d，J＝6.3Hz，3H)，1.14(d，J＝6.1Hz，3H)，1.07(s，9H)。质量分析(ESI，+ve)＝588.2[M+Na]。
(R,E)-6-(((2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)-1-(吡咯烷-1-基)庚-2-烯-1-酮(13)的制备：
向搅拌的I-25(0.030g，0.053mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入1.0M TBAF在THF中的溶液(0.27mmol，0.270mL)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物。通过柱色谱法纯化粗产物(24g硅胶，0％-15％在DCM中的MeOH)，得到13(0.010g，60％收率)，为无色糊状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.06(dt，J＝15.2，7.0Hz，1H)，6.14(dt，J＝15.2，1.6Hz，1H)，4.74–4.69(m，1H)，3.93–3.86(m，1H)，3.82(td，J＝3.2，1.7Hz，1H)，3.73–3.65(m，1H)，3.53(t，J＝6.8Hz，5H)，2.37(qt，J＝7.1，1.6Hz，2H)，2.12(dddd，J＝13.0，4.5，3.3，1.0Hz，1H)，2.01–1.95(m，4H)，1.94–1.90(m，1H)，1.90–1.85(m，2H)，1.78–1.68(m，2H)，1.28(d，J＝6.2Hz，3H)，1.18(d，J＝6.1Hz，3H)。质量分析(ESI，+ve)＝328.1[M+H]。
(2Z,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸乙酯(I-26)的制备：
将双(2,2,2-三氟乙基)膦酰基乙酸乙酯(0.25mmol)和18-冠-6(0.25mmol)溶于THF(1.0mL)，冷却至-78℃。加入1.0M KHMDS(0.25mmol)在THF中的溶液，将该反应体系在-78℃搅拌30min。加入作为在THF(1.0mL)中的溶液的醛I-03(0.15mmol)，将该反应体系在-78℃搅拌2h，然后温热至室温。用氯化铵水溶液(50mL)使该混合物猝灭，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。分离各层，用水(2x 40mL)、盐水(30mL)洗涤有机层，用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(石油醚-乙酸乙酯)，得到I-26。
(2Z,6R)-6-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}庚-2-烯酸乙酯(14)的制备：
向I-26(0.2mmol)在THF(3mL)中的溶液中加入1.0M TBAF在THF中的溶液(0.250mmol，0.250mL)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物，通过柱色谱法纯化粗产物(0％-15％在DCM中的MeOH)，得到14。
2-[(3R)-3-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-双[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-6-甲基噁烷-2-基]氧基}丁基]环丙烷-1-羧酸乙酯(I-27)的制备：
将二碘甲烷(1.0mmol)和锌-铜偶合粉(15mg)在***(15mL)中的溶液搅拌30min，然后向该溶液中加入I-26(0.5mmol)。将该反应体系回流60hr后，将该混合物倾入氯化铵水溶液(50mL)。用乙酸乙酯(2x 50mL)萃取该混合物。分离各层，用水(2x 40mL)、硫代硫酸盐水溶液(30mL)洗涤有机层，用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤，真空浓缩。通过柱色谱法纯化粗产物(乙酸乙酯-己烷)，得到I-27。
2-[(3R)-3-{[(2R,3R,5R,6S)-3,5-二羟基-6-甲基噁烷-2-基]氧基}丁基]环丙烷-1-羧酸乙酯(15)的制备：
向I-27(0.1mmol)在THF(3mL)中的溶液中加入1.0M在THF中的TBAF(0.150mmol，0.150mL)。将该反应混合物在室温在氮气气氛中搅拌18h。浓缩得到的混合物，通过柱色谱法纯化粗产物(0％-15％在DCM中的MeOH)，得到15。
使用上述方案，制备表3中示例的化合物16-56。
表3.蛔苷衍生物
实施例3
THP-1细胞的刺激：测试化合物1和化合物10的作用
化合物1和化合物10显著地减少体外人细胞中IL-6和TNFα分泌。特别地，化合物1和化合物10二者在无限增殖的单核THP-1细胞的刺激的培养物中都减少IL-6和TNFα。
在37℃和5％(v/v)CO2下将人无限增殖的单核细胞THP-1细胞维持在不含酚红的RPMI 1640培养基中，该培养基包含10％(v/v)胎牛血清(FBS)、2mM L-谷氨酰胺、青霉素(100单位/mL)、链霉素(100μg/mL))、两性霉素B(2.5μg/mL)和50μMβ-巯基乙醇(BME)。在6孔板中将THP-1细胞接种在1mL THP-1培养基中(细胞培养基含有10％(v/v)FBS、2mM-谷氨酰胺、青霉素(100单位/mL)、链霉素(100μg/mL)、两性霉素B(2.5μg/mL)和50μM BME)/孔，密度为1百万个细胞/毫升。通过向每孔中加入100nM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)然后在37℃与5％(v/v)CO2下温育细胞5.5h来分化细胞。在未去除培养基的情况下，将不同浓度(0、0.1、1、10、100或200μM)的化合物1和化合物10添加到每孔中。在30min内通过向每孔中添加20ng/mL干扰素γ(IFN-γ)和100ng/mL脂多糖(LPS)来刺激细胞。刺激后，将THP-1细胞在37℃与5％(v/v)CO2下培养72h。收集上清液并储存在-80℃直至使用。
使用AlphaLISA人IL-6检测试剂盒测定了从刺激后72小时收集的上清液中的IL-6释放。72h后的结果如图1A、1B、2A和2B中所示。图1A显示了与由不含化合物1的THP1衍生的巨噬细胞分泌的最高水平的IL-6，(其由标记为“0μM”的棒条表示)相比，在应用不同浓度的化合物1(用标记“0.1、1、10、100或200μM”的棒条表示浓度)时THP1衍生的巨噬细胞分泌的IL-6水平的倍数变化。几种浓度的化合物1的施用显著降低了这些水平。图1B显示了与由不含化合物10的THP1衍生的巨噬细胞分泌的最高水平的IL-6(其由标记为“0μM”的棒条表示)相比，在应用不同浓度的化合物10(用标记“0.1、1、10、100或200μM”的棒条表示)时THP1衍生的巨噬细胞分泌的IL-6水平的倍数变。几种浓度的化合物10的施用显著降低了这些水平。
图2A显示了与由不含化合物1或ascr#7的THP1衍生的巨噬细胞分泌的最高水平的IL-6(其由标记为“0μM”的棒条指示)相比，在应用不同浓度的ascr#7(用标记“0.1、1、10、100或200μM”的灰色棒条表示)或化合物1(其用标记为“0.1、1、10、100或200μM”的黑色棒条表示)时THP1衍生的巨噬细胞分泌的IL-6水平的倍数变化。施用不同浓度的ascr#7显著降低了IL-6的水平，并且使用几个浓度的化合物1甚至更显著地降低了IL-6的水平。图2B显示了与由不含化合物10或ascr#7的THP1衍生的巨噬细胞分泌的最高水平的IL-6(其由标记为“0μM”的棒条指示)相比，在应用不同浓度的ascr#7(其用标记“0.1、1、10、100或200μM”的灰色棒条表示)或化合物10(其用标记为“0.1、1、10、100或200μM”的黑色棒条表示)时THP1衍生的巨噬细胞分泌的IL-6水平的倍数变化。施用不同浓度的ascr#7显著降低了IL-6的水平，并且在使用几个浓度的化合物10甚至更显著地降低了IL-6的水平。
使用AlphaLISA人TNFα检测试剂盒测定了从刺激后72小时收集的上清液中的TNFα释放。72h后的结果如图3A和3B中所示。图3A显示了与由不含化合物1的THP1衍生的巨噬细胞分泌的最高水平的TNFα(其由标记为“0μM”的棒条指示)相比，在应用不同浓度的化合物1(其用标记“0.1、1、10、100或200μM”的灰色棒条表示)时THP1衍生的巨噬细胞分泌的TNFα水平的倍数变化。几种浓度的化合物1的施用显著降低了这些水平。图3B显示了与由不含化合物10的THP1衍生的巨噬细胞分泌的最高水平的TNFα(其由标记为“0μM”的棒条指示)相比，在应用不同浓度的化合物10(其用标记“0.1、1、10、100或200μM”的灰色棒条表示)时THP1衍生的巨噬细胞分泌的IL-6水平的倍数变化。几种浓度的化合物10的施用显著降低了这些水平。
实施例4
化合物1在肝细胞中的稳定性
以二甲亚砜(DMSO)中的1000x储备溶液提供10mM的化合物1，并将该储备溶液在96孔板中用DMSO稀释至1mM。以在DMSO中的1000x储备溶液提供30mM阳性化合物(7-乙氧基香豆素和7-羟基香豆素)，在96孔板中用DMSO将该储备溶液稀释至3mM。将20μL每种化合物的1000x储备溶液移液并与380μL 45％MeOH/H2O混合，以获得50μM化合物1和150μM的阳性对照化合物溶液，形成50x中间溶液。将20μL每种化合物的50x中间溶液移液并与450μL预温热的培养基混合，以获得5μM的化合物1和15μM阳性对照化合物溶液，形成5x工作溶液。温育培养基为包含2mM L-谷氨酰胺和25mM HEPES的Williams培养基E(不含酚红)。将10μL每种化合物的5x工作溶液移入96孔板中的适当孔中，时间点为0分钟、15分钟、30分钟、60分钟和90分钟，一式两份。将含有化合物的板在37℃在温育箱中保温。
通过解冻冷冻保存的细胞、分离细胞并将细胞悬浮在解冻培养基中制备了细胞混悬液。解冻培养基为Williams培养基E，其包含5％胎牛血清和30％Percoll溶液和其他补充剂。使用预温热的温育培养基以0.625x 106个细胞/毫升的密度稀释细胞混悬液。解冻后使用锥虫蓝排除法测试了细胞活力。
通过将40μL的0.625x106个细胞/毫升混悬液等分到含有10μL化合物溶液的96孔板中的每孔中启动反应。将包含15分钟、30分钟、60分钟和90分钟的样品板在37℃与5％CO2下在温育箱中立即温育。
表4.温育培养基中每种成分的终浓度。
将0分钟样品在加入细胞之前加入终止溶液。终止溶液为包含200ng/mL甲苯磺丁脲和拉贝洛尔作为内标的乙腈。将0分钟和90分钟的培养基对照(MC)样品板(T0-MC和T90-MC)使用与上述时间点相同的条件在仅无细胞的温育培养基中与化合物一起温育。
在每个相应的时间点，通过猝灭停止反应。将样品板立即涡旋，置于500rpm的振荡器上10min，然后以3220×g将板离心20min。将样品板中阳性对照的50微升/孔上清液转移至另一组96深孔板，该板根据板图包含150微升/孔超纯水，并且将包含化合物1的孔的100微升/孔上清液转移用于LC/MS/MS分析。
根据以下公式计算了温育后化合物1的剩余百分比。
使用下列一级动力学方程计算t1/2和CLint。
Ct＝C0·e-k·t,
当
时
CLint(hep)＝k/百万细胞/毫升
CLint(liver)＝CLint(hep)*肝脏重量(g/kg体重)*肝细胞浓度(hepatocellularity)。
结果如图4中所示。Ascr#7在小鼠、大鼠和人肝细胞中的半衰期大于216.8分钟。化合物1在大鼠肝细胞中的半衰期为23.1分钟，在人肝细胞中的半衰期为106分钟。
实施例5
化合物1在血浆中的稳定性
如果需要，将血浆的pH调至7.4±0.1。通过用90μL DMSO稀释10μL化合物1的10mM储备溶液制备了1mM中间溶液；通过用90μL超纯水稀释10μL的储备溶液制备了阳性对照溴丙胺太林的1mM中间溶液。通过用90μL 45％MeOH/H2O稀释10μL 1mM中间溶液制备了100μM给药溶液。在98μL空白血浆中掺入2μL 100μM给药溶液，以达到2μM化合物的终浓度，一式两份。将样品在37℃在水浴中温育。在每个时间点(0、10、30、60和120min)，加入400μL终止溶液(50％ACN/MeOH中的200ng/mL甲苯磺丁脲加200ng/mL拉贝洛尔)并充分混合以沉淀蛋白质。将样品板以4,000rpm离心10min。从每孔中移取等份上清液(100μL)，并与200μL超纯水混合。在LC/MS/MS分析之前，将样品以800rpm振荡约10min。
根据下列方程计算了温育后化合物1(测试品)的剩余百分百。
结果如图5A和5B中所示。120分钟后，在小鼠、大鼠和人血浆中ascr#7分别剩余103.4％、99.8％和89.8％。120分钟后，在大鼠和人血浆中化合物1分别剩余19.2％和86.5％的1的化合物。
实施例6
化合物1在Caco-2细胞中的双向通透性
将购自ATCC的Caco-2细胞以1x 105细胞/cm2接种到96孔BD***板中的聚乙烯膜(PET)上，每4～5天更新一次培养基，直到第21～28天形成汇合细胞单层。
本研究中的转运缓冲液为pH 7.40±0.05的含有10mM HEPES的Hank平衡盐溶液(HBSS)。化合物1在2μM进行双向测试，一式两份。地高辛在10μM双向测试，一式两份，而纳多洛尔和美托洛尔在2μM以A至B方向测试，一式两份。将最终二甲亚砜浓度调整到小于1％。将板在37±1℃、5％CO2和饱和湿度下在温育箱中温育2小时，不振荡。将与含内标的乙腈混合后的所有样品以4000rpm离心10min。随后，用100μL蒸馏水稀释100μL上清液，以进行LC/MS/MS分析。化合物1和华法林在起始溶液、供体溶液和接收体溶液中的浓度通过LC/MS/MS方法、使用分析物/内标的峰面积比进行定量。
转运试验后，进行萤光黄排斥试验以确定Caco-2细胞单层的完整性。
使用以下公式计算了表观通透系数Papp(cm/s)：
Papp＝(dCr/dt)x Vr/(A x C0)
其中dCr/dt为作为时间函数的接收室中化合物的累积浓度(μM/s)；Vr为接收室中的溶液体积(顶侧为0.075mL，基底外侧为0.25mL)；A为转运的表面积，即对于单层面积为0.0804cm2；C0为供体室中的初始浓度(μM)。
使用以下公式计算了外向通量比：
外向通量比＝Papp(BA)/Papp(AB)
使用以下公式计算了收率百分比：
％收率＝100x[(Vr x Cr)+(Vd x Cd)]/(Vd x C0)
其中Vd为供体室中的体积(顶侧为0.075mL，基底外侧为0.25mL)；Cd和Cr分别为供体室和接收室中转运的化合物最终浓度。
结果如图6中所示。Ascr#7在CaCo-2细胞中显示出低双向通透性。化合物1在CaCo-2细胞中显示出高双向通透性。
实施例7
化合物1-HTD的血浆蛋白结合
HT-透析板(型号HTD 96b，目录号1006)和透析膜(分子量截止值12-14KDa，目录号1101)可以购自HT Dialysis LLC(Gales Ferry，CT)。
将血浆在流动的冷自来水中解冻，并以3220×g离心5min以去除任何凝块。检查并记录pH值。仅使用pH 7.0至pH 8.0范围内的血浆。根据制造商的说明对透析膜进行预处理。简言之，将透析膜条在室温下在超纯水中浸泡约1hr。此后，分离每个包含2个膜的膜条，并在乙醇:水(20:80v:v)中浸泡约20min。冲洗膜并在超纯水中浸泡20min。
将50μL包含化合物1或华法林的荷载血浆(基质)的等分试样一式三份转移到样品收集板的适当孔中。使样品与透析缓冲液相匹配，以获得每孔中具有血浆(基质):透析缓冲液(1:1，v:v)体积比的100μL最终体积。透析缓冲液为100mM磷酸钠和150mN NaCl，pH为7.4。将终止溶液添加到化合物1和华法林的时间0(T0)样品中。将板密封并以800rpm振荡10min。然后将T0样品储存在2-8℃下。
将含有化合物1或华法林的150μL的荷载血浆(基质)的等分试样转移到每个透析孔的供体侧，一式三份，并且将150μL透析缓冲液加载到该孔的接收侧。然后在37±1℃、含5％CO2的加湿温育箱中以约100 rpm使板旋转4小时。
透析结束时，将来自透析装置的缓冲液侧和血浆(基质)侧的50μL样品的等分试样转移至新的96孔板(样品收集板)。将等体积的缓冲液或血浆添加到每个样品孔中，每孔中的最终体积为100μL，血浆(基质):透析缓冲液的体积比为1:1(v:v)。通过蛋白质沉淀进一步处理了所有样品，用于LC/MS/MS分析。
使用以下公式计算了％未结合、％结合、％收率和％剩余：
％未结合＝100×F/T
％结合＝100-％未结合
％收率＝100×(F+T)/T0
F＝膜接收侧上的化合物1浓度/校正因子。
T＝膜供体侧上的化合物1浓度/校正因子。
T0＝时间0时的化合物1浓度/校正因子。
校正因子＝等分试样体积/总体积。
结果如图7中所示。Ascr#7在人和大鼠血浆中分别具有86.8％和94.6％的未结合百分比值。化合物1在人血浆中具有32.9％的未结合百分比值。
实施例8
化合物1的5合1CYP抑制测定法(1浓度，n＝2)
使用标记物底物混合物测定了CYP450依赖性活性。对于每个反应，一式两份测定了在存在和不存在测试化合物(10μM)情况下的酶活性。包括在单一浓度(3μM，n＝2)下测试的每种同种型的已知抑制剂作为阳性对照。
将包含微粒体、底物和标准抑制剂或测试化合物的温育混合物在37℃下温热10分钟。通过添加NADPH启动反应，并温育10min。
表5.
温育后，加入冰冷乙腈以终止反应。
通过LC-MS/MS测定了从底物反应中的代谢物生成。
结果如图8中所示。Ascr#7分别以2.3％、0.0％、4.0％、4.6％和0.0％抑制细胞色素P450同种型1A2、2C9、2C19、2D6和3A4。化合物1分别以10.9％、4.3％、16.2％、10.1％和1.0％抑制细胞色素P450同种型1A2、2C9、2C19、2D6和3A4。
实施例9
化合物1在肝脏肝细胞中的代谢物鉴定
化合物1的浓度为10μM，浓度为30μM的7-乙氧基香豆素用作阳性对照。温育培养基为含有2mM L-谷氨酰胺和25mM HEPES的Williams培养基E(不含酚红)，并且使用1.0×106细胞/毫升的密度的冷冻保存的小鼠肝细胞接种96孔板。96孔板中的总温育体积为200μL，在37℃，在5％CO2/95％湿度温育0分钟和120分钟的时间点，至少一式两份。用含有0.1％甲酸的800μL乙腈沉淀蛋白质，并进一步离心。用N2干燥上清液。用含有0.1％甲酸的200μL10％乙腈重构残余物，并且将15μL注入LCMS，使用以下参数进行分析。
表6.样品中代谢物鉴定的LC-MS参数
表7.阳性对照7-乙氧基香豆素的LC-MS参数
MSE：QTOF MS中从低至高的碰撞能量(CE)的交替转换，提供数据独立(数据丰富)性文件。对于低CE，(1：TOF MS)；对于升高的CE，(2：TOF MS)。
实施例10
化合物1在尘螨性哮喘动物模型中的功效
使用气源性致敏原屋尘螨(HDM)(屋尘螨(D.pteronyssinus))的反复鼻内攻击(急性模型，9次暴露)的C57bl/6野生型小鼠气道炎症模型研究化合物1的功效。使小鼠每周连续3天暴露于35μL 1X DPBS中的60μg HDM(或单独的PBS作为对照)，持续3周。通过经流式细胞术测定支气管肺泡灌洗液(BAL)中嗜酸粒细胞的百分比，在最后一次HDM(或PBS)攻击后24小时评估了嗜酸粒细胞性气道炎症的水平。
HDM鼻内方法包括将小鼠置于异氟烷/O2室内，直到深呼吸为止，氧气罐设置为1L/min且异氟烷罐设置为3L/min。将35μL HDM(或PBS)施用入小鼠鼻孔，同时轻轻闭合小鼠的嘴，以鼓励通过鼻呼吸，从而辅助HDM递送至肺部。将小鼠直立保持10秒钟，且将小鼠放回ISO/O2室约2分钟或直到深呼吸恢复为止。将小鼠保持直立10秒，并且放在恢复笼中。
处死后从小鼠中采集支气管肺泡灌洗液(BAL)。简言之，将FACS缓冲液通过气管腔内的导管注入肺部，以提取支气管肺泡细胞。还收集肺组织，作为采用石蜡包埋和用10％***固定的组织盒。用苏木精和伊红染色肺组织，且分析组织学。
使用Turks中的1：10稀释的BAL样品对BAL细胞进行计数。BAL样品用包括PE-Cy7CD45、PE-Siglec-F、PE-IgG2a、APC Cd11c和APC-IgG的抗体混合物进行染色用于流式细胞术。所有样品在300xg 4℃下离心5分钟，并且弃去上清液。将细胞沉淀重新混悬于40μLFACS缓冲液中，并且将10μL每种染料添加到0.4x 106细胞的等分试样中。将样品于黑暗中置25分钟。向每个样品中添加400μL FACS缓冲液，并且将样品在300xg 4°下离心5分钟。弃去上清液，且将在FACS缓冲液中稀释的100μL 2％多聚甲醛添加到每个试管中的细胞沉淀粒中。通过将试管在室温下黑暗中温育5分钟固定细胞。向每个样品中添加400μL FACS缓冲液以稀释固定剂，并且将样品在300xg 4℃下离心5分钟。弃去上清液，并且将细胞沉淀重新混悬于400μL FACS缓冲液中。
通过流式细胞仪分析BAL样品。可以使用Beckman Gallios流式细胞仪，应用Kaluza软件获取数据，且可以使用FlowJo量化每个样品中嗜酸粒细胞的百分比。将HDM攻击的小鼠中嗜酸粒细胞的百分比与PBS处理的小鼠中嗜酸粒细胞的百分比比较。通过苏木精和伊红染色定量肺组织学中的嗜酸性粒细胞。
实施例11
THP-1细胞的刺激：测试刺激后6或36小时的作用
在37℃与5％(v/v)CO2下将人无限增殖的单核细胞THP-1细胞维持在包含10％(v/v)胎牛血清(FBS)、2mM L-谷氨酰胺、青霉素(100单位/mL)、链霉素(100单位/mL)、两性霉素B(2.5μg/mL)和50μMβ-巯基乙醇(BME)的不含酚红的RPMI 1640培养基中。将THP-1细胞接种于在6孔板中的1mL THP-1培养基(含有10％(v/v)FBS、2mM L-谷氨酰胺、青霉素(100单位/mL)、链霉素(100单位/mL)、两性霉素B(2.5μg/mL)和50μM BME)/孔的细胞培养基)中，密度为1x106个细胞/毫升。通过向每孔中添加10、50或100nM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)，然后在37℃与5％(v/v)CO2下温育细胞5.5h，使细胞分化。在不移除培养基的情况下，将不同浓度(0、0.1、1.0、10、100、200或500μM)的化合物添加至每孔中。在30min内，通过向每孔中添加20ng/mLγ干扰素(IFNγ)和100ng/mL脂多糖(LPS)刺激细胞。刺激后，将THP-1细胞在37℃和5％(v/v)CO2温育6小时或36小时。收集上清液并在-80℃下储存，直至使用。
使用AlphaLISA人IL-6检测试剂盒测定了从用IFNγ和LPS刺激后6小时或36小时采集的上清液中释放的IL-6。图9显示，使用表示0百分比抑制的对照(用IFNγ和LPS刺激，但不施用化合物)，当应用从0.1至500μM的不同浓度的化合物时的百分比抑制，相对于THP1衍生的巨噬细胞分泌的IL-6水平的对照。用递增浓度的代表性的化合物1、2、3、5、6、8、9、10、11和13预处理在THP1人巨噬细胞中以统计学显著的、剂量依赖性方式抑制了IL-6表达。图9中所示的类似物证实了在THP1细胞中IL-6表达的抑制作用远优于使用NDM-X观察到的阻断。
实施例12
BEAS-2B人肺上皮病毒转化细胞的刺激：测试化合物的作用
将BEAS-2B细胞维持在支气管上皮细胞生长基础培养基(BEBM)中，该培养基包含所有推荐的用于支气管上皮细胞生长培养基(BEGM；Lonza#CC-4175)的补充剂，并在37℃、5％(v/v)CO2下允许达到约70％汇合，每2-3天更换培养基。组织培养烧瓶/容器预涂有溶于BEBM中的0.01mg/mL纤维连接蛋白(Sigma)、0.03mg/mL I型牛胶原蛋白(Sigma)和0.01mg/mL牛血清白蛋白的混合物。将BEAS-2B细胞在24孔板上以每孔0.5ml 1x106细胞/毫升接种在BEGM中，并在37℃与5％(v/v)CO2温育过夜。用不同浓度的化合物(0、1.0、10、100、1000μM)预处理细胞1小时，然后刺激。为了刺激细胞，将10ng/mL白细胞介素-1β(IL-1β)、10ng/mL脂多糖(LPS)或20ng/mL IL-1β在不移除培养基的情况下添加到孔中，并在37℃与5％(v/v)CO2下温育48小时。收集上清液并在-80℃下储存，直到进行定量检测分析为止。
使用人Magnetic
测定试剂盒测定了从刺激后采集的上清液中释放的人嗜酸性粒细胞趋化因子、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-25(IL-25)、白细胞介素-33(IL-33)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。使用基于酶联免疫吸附测定法(ELISA)的分析测定了人CCL5/RANTES。
图10A和10B，刺激组(Stimulated)(用10ng/mL IL-1β诱导，但未用化合物处理)代表0％抑制，显示了当用10ng/mL IL-1β诱导时在EPC2人原代食管角质形成细胞中相对于IL-6、IL-8、IL-25、IL-33、嗜酸性粒细胞趋化因子、GMCSF、MCP-1和TSLP表达的刺激组的百分比抑制。
在图10A中，NDM-X在BEAS-2B人肺上皮细胞中未显示出对10ng/mL IL-1β诱导的IL-6、IL-8和IL-33表达的令人信服的抑制作用，对IL-25表达除外。然而，在同一图10A中，100μM的化合物1在BEAS-2B人肺上皮细胞中证实了对10ng/mL IL-1β诱导的IL-6、IL-8、IL-25和IL-33表达的统计学显著的、完全抑制作用。关于IL-1β诱导的IL-25表达，NDM-X和化合物1表现出极为类似的特性，具有统计学显著的、剂量依赖性抑制作用。
在图10B中，NDM-X在BEAS-2B人肺上皮细胞中未显示对10ng/mL IL-1β刺激的GM-CSF、MCP-1和TSLP表达的令人信服的抑制作用，对嗜酸性粒细胞趋化因子表达除外。然而，在同一图10B中，100μM的化合物1显示对GM-CSF、MCP-1和TSLP表达具有统计学显著的、完全抑制作用。当使用10ng/mL IL-1β刺激时，NDM-X和化合物1在BEAS-2B人肺上皮细胞中表现出极为类似的特性，对嗜酸性粒细胞趋化因子具有统计学显著的、剂量依赖性抑制作用。
刺激组(使用10ng/mL LPS诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制。图11A和11B显示了当用10ng/mL LPS刺激时在BEAS-2B人肺上皮细胞中相对于IL-6、IL-8、IL-25、IL-33、嗜酸性粒细胞趋化因子、GMCSF、MCP-1和TSLP表达的刺激组的抑制百分比。在图11A中，NDM-X在BEAS-2B人肺上皮细胞中未显示出对10ng/mL LPS诱导的IL-6、IL-8、IL25和IL-33表达的令人信服的抑制作用。然而，100μM的化合物1显示出对多种炎性细胞因子的表达具有完全的、统计学显著的抑制作用。在图11B中，尽管NDM-X在BEAS-2B人肺上皮细胞中未显示出对10ng/mL LPS诱导的GM-CSF、MCP-1和TSLP表达的令人信服的抑制作用，但使用100μM的化合物1观察到了对多种炎性细胞因子的表达具有统计学显著的、完全抑制作用。
在相同BEAS-2B测定法中，刺激组(用20ng/mL IL-1β诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，图12显示了当被20ng/mL IL-1β刺激时在BEAS-2B人肺上皮细胞中相对于IL-25、IL-33、嗜酸性粒细胞趋化因子和TSLP表达的刺激组的百分比抑制。化合物6，在图12中，在BEAS-2B人肺上皮细胞中显示出对20ng/mL IL-1β诱导的IL-33、嗜酸性粒细胞趋化因子和TSLP表达的统计学显著的抑制且这种阻断作用优于使用NDM-X观察到的减弱作用。然而，在同一图12中，化合物6在1mM浓度下显示出对IL-25表达的强烈抑制，其甚至在100μM在60％达到顶峰，但NDM-X在使用20ng/mL IL-1β诱导的BEAS-2B人肺上皮细胞中显示出统计学显著的、剂量依赖性阻断作用。
图13，刺激组(用20ng/mL IL-1β诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，当被20ng/mL IL-1β刺激时在BEAS-2B人肺上皮细胞中相对于嗜酸性粒细胞趋化因子表达的刺激组的百分比抑制。化合物2，一个代表性的化合物，显示出在BEAS-2B人肺上皮细胞中对20ng/mL IL-1β诱导的嗜酸性粒细胞趋化因子具有统计学显著的、完全抑制作用，而NDM-X在10和100μM浓度下达到了统计学显著的、几乎完全的阻断。
实施例13
用屋尘螨(Dermatophagoides Pteronyssinus)(房尘螨)抗原刺激血源性幼稚T细胞：测试化合物的作用
根据制造商的方案，收集来自外周血样品中的幼稚T细胞且使用
Whole Blood Pan T细胞分离试剂盒(Miltenyi Biotec)处理。将分离的幼稚T细胞在37 ℃与5％(v/v)CO2下在补充有5％胎牛血清(FBS)的RPMI培养基中培养。将T细胞以每孔0.5x106个细胞的密度接种在24孔培养板中。这些细胞在刺激前经过用化合物(0、0.1、1.0、10、100μM)预处理1小时。用10mg/mL的屋尘螨(Der p1)抗原刺激细胞。48小时后，添加新鲜的10mg/mL Der p1，并在37℃与5％(v/v)CO2继续温育再经过72小时。用10mg/mL的Der p1抗原刺激全部T细胞5天，然后采集上清液并在-80℃下储存，直到进行定量检测分析。
使用人Magnetic
测定试剂盒测定了从刺激后采集的上清液中释放的人白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素13(IL-13)、白细胞介素23(IL-23)和γ干扰素(IFNγ)。使用基于酶联免疫吸附测定法(ELISA)的分析测定了人转化生长因子β(TGFβ)。
图14刺激组(用Der p1抗原诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，显示了在已用Der p1抗原攻击5天的分离的人幼稚T细胞中相对于IL-5、IFNγ和TGFβ表达的刺激组的百分比抑制。在图14中，化合物1，一种代表性化合物，证实了对多种炎性细胞因子例如IL-5、IFNγ和TGFβ以统计学显著的、剂量依赖性方式的抑制作用。在同一图14中，NDM-X对IL-5表达表现出剂量依赖性抑制作用，对IFNγ表达表现出统计学显著的、强烈阻断作用，对TGFβ表达表现出轻度的减弱作用。总之，图14显示了化合物1以统计学显著的、剂量依赖性方式抑制多种炎性细胞因子的表达，其优于在用Der p1抗原攻击的人T细胞中使用NDM-X观察到的阻断作用。
在相同的T细胞测定法中，图15刺激组(用Der p1抗原诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，显示了相对于IL-6、IL-8和TNFα表达的刺激组的百分比抑制。代表性化合物，化合物3和化合物4，显示了在用Der p1抗原攻击的人T细胞中在100μM浓度下对IL-6、IL-8和TNFα表达具有统计学显著的抑制作用。
实施例14
A549人肺癌细胞系的刺激：测试化合物的作用
将A549细胞在37℃与5％(v/v)CO2在补充有2mM谷氨酰胺和10％胎牛血清(FBS)的DMEM中培养。使细胞在传代之前生长至约80％汇合，并且每2-3天更换培养基。将A549细胞在37℃与5％(v/v)CO2以0.5x106细胞/孔的密度接种在24孔板中。在37℃与5％(v/v)CO2下在添加10ng/mL TNFα和人10ng/mL IL-1β48小时之前将这些细胞用化合物(0、1.0、10、100μM)预处理1小时。收集上清液并在-80℃下储存，直至进行定量检测分析为止。
使用人Magnetic
测定试剂盒测定了从刺激后采集的上清液中释放的人嗜酸性粒细胞趋化因子、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-25(IL-25)、白细胞介素-33(IL-33)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。使用基于酶联免疫吸附测定法(ELISA)的分析测定了人CCL5/RANTES。
图16刺激组(用TNFα和IL-1β诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，显示了在A549人肺癌细胞系中当用10ng/mL TNFα和10ng/mL IL-1β诱导48小时时，相对于IL-8、IL-25、IL-33、MCP-1和GM-CSF表达的刺激组的百分比抑制。在图16中，化合物1，一种代表性化合物，证实了在A549人肺泡上皮细胞中对由TNFα和IL-1β诱导的IL-33、MCP-1和GM-CSF表达具有统计学显著的、剂量依赖性抑制作用。在同一图16中，化合物1所展示的百分比抑制特性远优于NDM-X所展示的特性。尽管NDM-X不影响A549人肺泡上皮细胞中由TNFα和IL-1β诱导的IL-8和IL25表达，但是在图16中化合物1显示出剂量依赖性抑制作用。
刺激组(用TNFα和IL-1β诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，图17显示了当使用10ng/mL TNFα和10ng/mL IL-1β诱导48小时时，在人肺癌细胞系中相对于IL-25、IL-33、MCP-1和GM-CSF表达的刺激组的百分比抑制。在图17中，另一种代表性化合物，化合物10，证实了当用TNFα和IL-1β诱导时在A549人肺癌细胞系中对多种炎性细胞因子包括IL-25、IL-33、MCP-1和GM-CSF表达的总体上统计学显著的、剂量依赖性抑制作用优于NDM-X阻断。然而，NDM-X显示出对TNFα和IL-1β诱导的MCP-1和GM-CSF表达具有统计学显著的但非剂量依赖性的抑制作用。
图18刺激组(用TNFα和IL-1β诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，显示了当使用10ng/mL TNFα和10ng/mL IL-1β诱导48小时时，在人A549肺癌细胞系中相对于嗜酸性粒细胞趋化因子、IL-6、RANTES和TSLP表达的刺激组的百分比抑制。在图18中，代表性化合物，化合物1和化合物10二者，都证实了在A549人肺泡上皮细胞中对TNFα和IL-1β诱导的嗜酸性粒细胞趋化因子、IL-6、RANTES和TSLP表达的强烈、统计学显著的抑制作用。
实施例15
EPC2-hTERT无限增殖的人食管角质形成细胞的刺激：
测试化合物的作用
在37℃与5％(v/v)CO2下将EPC2-hTERT(EPC2)细胞维持在补充角质形成细胞的不含血清的培养基(KSFM)中，该培养基含有0.09mM氯化钙，包含表皮生长因子(5ng/mL)、牛垂体提取物(50mg/mL)、青霉素(100单位/mL)和链霉素(100mg/mL)(ThermoFisher#17005042)。将EPC2细胞在37℃与5％(v/v)CO2下以每孔0.55x106个细胞接种在12孔板中，6小时后除去旧培养基并且更换以新鲜培养基。过夜温育后，将旧培养基更换为补充的包含1.8mM氯化钙的KSFM，并在37℃与5％(v/v)CO2下温育72小时。去除旧培养基并且添加新鲜补充的含有1.8mM氯化钙的KSFM后，刺激前用不同浓度的化合物(0、1、10、100、500、1000μM)预处理细胞1小时。为了刺激细胞，在不去除培养基的情况下将聚(I:C)(Tocris#4287)以10mg/mL的浓度加入孔中，并在37℃与5％(v/v)CO2下温育24小时。将上清液收集在Ependorf管中，在4℃下以最大速度在微型离心机中离心10分钟，并且将离心的上清液储存在-80℃下，直至进行定量检测分析为止。
使用人IL-6、MCP-1和TSLP的AlphaLISA检测试剂盒分别测定了从刺激后上清液中释放的人白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)。
使用AlphaLISA人TSLP检测试剂盒测定了从用聚(I:C)刺激后24小时采集的上清液中释放的人TSLP。刺激组(用聚(I:C)诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，图19A显示了在EPC2人原代食管角质形成细胞中相对于TSLP表达的刺激组的百分比抑制。用递增浓度的代表性化合物1、3、4和10的预处理显示了在由聚(I:C)诱导的EPC2人原代食管角质形成细胞中对TSLP表达抑制具有统计学显著的抑制作用。在图19A中，在EPC2人原代食管角质形成细胞中尽管化合物1、10和13表现出强烈的阻断，但是化合物3和4完全抑制由聚(I:C)诱导的TSLP表达。
使用AlphaLISA人IL-6检测试剂盒测定了从用聚(I:C)刺激后24小时采集的上清液中释放的人IL-6。图19B，刺激组(用聚(I:C)诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，显示了在EPC2人原代食管角质形成细胞中相对于IL-6表达的刺激组的百分比抑制。当用聚(I:C)刺激时，在人原代食管角质形成细胞(EPC2)中用递增浓度的代表性化合物化合物1、3、4和10的预处理以统计学显著的、剂量依赖性方式抑制了IL-6表达。在图19B中，化合物2在100μM的浓度显示出对IL-6表达的强烈抑制作用。
使用AlphaLISA人MCP-1检测试剂盒测定了从用聚(I:C)刺激后24小时采集的上清液中释放的人MCP-1。刺激组(用聚(I:C)诱导，但未用化合物处理)代表零百分比抑制，图19C显示了在EPC2人原代食管角质形成细胞中相对于MCP-1表达的刺激组的百分比抑制。当用聚(I:C)刺激时，在人原代食管角质形成细胞(EPC2)中用递增浓度的代表性化合物化合物1、3、10和11的预处理以统计学显著的、剂量依赖性方式抑制了MCP-1表达。在图19C中，尽管化合物13从1mM开始显示对MCP-1表达的强烈阻断，但是化合物2和化合物4仅在最高100μM浓度时表现出抑制作用。
实施例16
小鼠模型中嗜酸细胞性食管炎(EoE)的诱导：测试化合物的作用
嗜酸细胞性食管炎(EoE)为由食管粘膜的超敏反应导致的慢性过敏性胃肠道疾病，并且表现为成人吞咽困难和食物嵌塞以及先前与儿童胃食管反流病相关的症状。
根据观察EoE中白细胞介素-5(IL-5)的局部表达增加，生成了使用EB(Epstein-Barr)病毒ED-L2(EBV-ED-L2)基因启动子具有靶向IL-5表达至食管鳞状上皮的转基因小鼠。该转基因小鼠显示IL-的组成型鳞状食管上皮特异性过表达5(L2-IL5转基因小鼠)并导致基线食管嗜酸细胞增多症。即使单独的鳞状上皮特异性IL-5表达诱导包含食管长度的显著食管嗜酸细胞增多症，这种嗜酸细胞增多症并不伴有组织病理学密度的变化，例如EoE特征性的嗜酸性微脓肿。然而，L2-IL5转基因小鼠在致敏时和随后用一种已知诱导T辅助细胞(Th)2型反应的分子4-乙氧基亚甲基-2-苯基-2-噁唑啉-5-酮(OXA)局限局部食管攻击发生关键的组织病理学特征，包括上皮细胞增生和嗜酸性微脓肿，其通过上皮细胞突出进入食管腔。嗜酸性粒细胞二级颗粒主要碱性蛋白(MBP-1)的免疫组织化学染色用于评估诱导的食管嗜酸细胞增多症和嗜酸性粒细胞脱粒。在野生型小鼠中的免疫组织化学评估显示，尽管用OXA处理显示轻度组织嗜酸细胞增多症，但介质没有显示组织嗜酸细胞增多症。在L2-IL5转基因小鼠中，介质处理的小鼠显示出比野生型动物中观察到的统计学上更高的嗜酸细胞增多症。然而，与OXA处理的L2-IL5转基因小鼠中出现的诱导的嗜酸细胞增多症和和相关脱粒相比，这种响应小(Masterson等人Gut.2014，63，1-25，通过引用将其全部内容并入本申请)。
在迟发性接触性过敏的OXA致敏和局部局限性攻击模型之前，第0天致敏前8、4和2天给L2-IL5转基因小鼠腹膜内(IP)注射化合物或介质(图20A中的方案时间线)。通过溶于二甲亚砜(DMSO)将化合物制备成母贮备液。每个注射天制备新鲜的工作化合物储备水溶液，并且每只小鼠IP注射100μL工作贮备液或介质。在OXA致敏/局部攻击的第0天时，剃光经麻醉的实验动物的2cm×2cm腹部皮肤区域并且将OXA施用于皮肤表面(150μl的3％(w/v)OXA在4：1丙酮-橄榄油介质中的溶液)，以启动该方案的致敏期。然后在用100μL 1％(w/v)OXA在30％乙醇/橄榄油介质中的溶液进入近端食管OXA致敏后方案第5、8和12天时通过管饲法使致敏的小鼠接受食管的局部OXA攻击。此外，在OXA致敏后第5、8和12天时IP注射化合物或介质。在第12天最后OXA攻击后24小时，处死全部小鼠并且采集食管用于组织学(图20A)。进行使用大鼠单克隆抗小鼠MBP-1抗体的免疫组织学染色，以突出显示食管嗜酸性粒细胞浸润和局限性脱粒。在九个大功率视野(hpf)、三个远端(位置更靠近嘴(Dis))、三个中部(Mid)和三个近端(位置更靠近胃(Prox))区域中测定了每组小鼠中食管嗜酸性粒细胞浸润的定量评估，并且将其表示为嗜酸性粒细胞密度的组平均数据(即，嗜酸性粒细胞/400×hpf)(图20B)。此外，根据食管的不同(上皮、固有层和肌)细胞层记录嗜酸细胞增多症(图20C)。这些数据代表每组3至9只个体小鼠的单独实验(*p≤0.05，**p≤0.001.***p≤0.0001)(Masterson等人Gut.2014，63，1-25)。
在迟发性接触性过敏的OXA致敏和局部局限性攻击模型之前，在第0天致敏前8、4和2天给L2-IL5转基因小鼠腹膜内(IP)注射19.2微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.77mg/kg)高剂量的NDM-X、23.1微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.92mg/kg)高剂量的化合物1或介质(图20A中的方案时间线)。通过溶于二甲亚砜(DMSO)以NMD-X的浓度9.6μg/μL和化合物1的浓度11.54μg/μL制备高剂量母贮备液，配制化合物。对于每个注射队列，其用于每只小鼠IP注射100μL工作贮备液NDM-X高剂量和化合物1高剂量，分别制备0.192μg/μL NDM-X在水中的新鲜高剂量工作贮备液(20μL母贮备液在980μL水中)和0.231μg/μL化合物1的水溶液(22μL母贮备液在1078μL水中)。在OXA致敏/局部攻击的第0天，剃光经麻醉的实验动物的2cm×2cm腹部皮肤区域，并且将OXA施用于皮肤表面以启动该方案的致敏期。然后在近端食管中在OXA致敏后方案第5、8和12天，通过管饲法使致敏的小鼠接受食管的局部OXA攻击。此外，在OXA致敏后第5、8和12天，IP注射化合物或介质。
图21中显示的是使用小鼠食管的MBP-1免疫组化染色的大功率放大显微镜图像，在IL2-IL5转基因小鼠模型中在致敏和用OXA局部局限性攻击后第13天嗜酸细胞性食管炎的定量评估。图21显示了0.92mg/kg化合物1高剂量展示出对食管的远端、中部和近端细胞层的上皮、固有层和肌层中的嗜酸细胞性食管炎的统计学显著的抑制作用，其导致食管的远端、中部和近端区的所有细胞层中嗜酸细胞增多症的统计学显著减弱。在同一图21中，0.77mg/kg NDM-X高剂量显示了食管的远端、中部和近端区的固有层和肌细胞层中的嗜酸细胞增多症的统计学显著的减轻，其导致食管的远端和中部区的所有细胞层中嗜酸细胞增多症的统计学显著减弱。总体而言，与0.77mg/kg NDM-X高剂量组相比，0.92mg/kg化合物1高剂量在小鼠模型中表现出对嗜酸细胞性食管炎更强的阻断作用。这种比较趋势保持真实，除了食管远端区的肌细胞层的嗜酸细胞增多症以外，其中0.77mg/kg NDM-X高剂量表现出比0.92mg/kg化合物1高剂量稍微更好的对嗜酸细胞增多症的阻断，但两者均是统计学显著的。这些数据代表每组6至7只个体小鼠的实验(*p≤0.05，**p≤0.001.***p≤0.0001)。
在迟发性接触性过敏的OXA致敏和局部局限性攻击模型之前，第0天致敏前8、4和2天给L2-IL5转基因小鼠腹膜内(IP)注射0.30微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.012mg/kg)低剂量的NDM-X、0.36微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.014mg/kg)低剂量的化合物1或介质(图20A中的方案时间线)。通过将NDM-X和化合物1溶于二甲亚砜(DMSO)制成0.50μg/μL NDM-X和0.58μg/μL化合物1，制备低剂量母贮备液。为了制备新鲜的工作贮备液，用水稀释母贮备液，制成0.003μg/μLNDM-X工作贮备液和0.0036μg/μL化合物1工作贮备液，其分别用于IP注射100微升/小鼠NDM-X低剂量和化合物1低剂量。
图22中显示的是使用小鼠食管的MBP-1免疫组化染色的大功率放大显微镜图像，在IL2-IL5转基因小鼠模型中在致敏和局部OXA攻击后第13天时的嗜酸细胞性食管炎定量评估。与0.92mg/kg化合物1高剂量比0.77mg/kg NDM-X高剂量更好地抑制嗜酸细胞增多症相反，在L2-IL5转基因小鼠中在迟发性接触性过敏的OXA致敏和局部局限性攻击模型中，使用0.014mg/kg化合物1低剂量和0.012mg/kg NDM-X低剂量证明了嗜酸细胞增多症的相差无几的阻断。在图22中，0.014mg/kg低剂量化合物1显示了对食管的近端区的所有细胞层、远端区的上皮细胞层和中间部分的固有层细胞层中的嗜酸细胞增多症具有统计学显著的抑制作用，其导致对食管的中段、近段和整个组织的所有细胞层中嗜酸细胞增多症的统计学显著的阻断。另一方面，低剂量0.012mg/kg NDM-X显示对近端区的所有细胞层、所有区域中的肌细胞层以及远端和近端区的上皮细胞层中的嗜酸细胞增多症具有统计学显著的抑制作用，其导致在L2-IL5转基因小鼠模型中在延迟接触性过敏的食管OXA致敏和局部局限性攻击模型的所有区的所有细胞层中嗜酸细胞增多症的统计学显著减弱。
在迟发性接触性过敏的OXA致敏和局部局限性攻击模型之前，第0天致敏前8、4和2天给L2-IL5转基因小鼠腹膜内(IP)注射2.31微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.092mg/kg)中剂量、23.1微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.92mg/kg)高剂量或介质(图20A中的方案时间线)。通过将24.8mg的化合物1溶于214.6μL二甲亚砜(DMSO)制成化合物1的115.6μg/μL母贮备液，制备母贮备液。用270μL DMSO将30μL化合物1的母贮备液进一步稀释制成11.56μg/μL母贮备液化合物1高剂量，并且用180μL DMSO将20μL母贮备液化合物1高剂量进一步稀释制成1.16μg/μL母贮备液化合物1中剂量。为了制备新鲜工作贮备液，将25μL母贮备液化合物1低剂量和母贮备液化合物1高剂量与1225μL水混合，分别制成工作贮备液化合物1中剂量(0.0231μg/μL)和工作贮备液化合物1高剂量(0.231μg/μL)，其分别用于IP注射100微升/小鼠化合物1的中剂量和高剂量。
图23中显示的是使用小鼠食管的MBP-1免疫组化染色的大功率放大显微镜图像，在IL2-IL5转基因小鼠模型中，在用OXA致敏和局部局限性攻击后第13天嗜酸细胞性食管炎的定量评估。
在图23中，用IP注射0.92mg/kg高剂量的化合物1的预处理导致食管的远端、中部和近端区的上皮细胞层中观察到的嗜酸细胞性食管炎的统计学显著的抑制。此外，0.92mg/kg高剂量的化合物1显示出对食管中段的固有层和肌细胞层中观察到的嗜酸细胞增多症具有统计学显著的抑制作用。同样高剂量的化合物1证实了在中段和近段以及整个食管的所有细胞层中观察到的嗜酸细胞增多症的统计学显著减轻。
总体而言，图23表明IP注射0.092mg/kg中剂量和0.92mg/kg高剂量的化合物1的预处理以剂量依赖性方式抑制了食管的远端、中部和近端区的上皮、固有层和肌细胞层中的嗜酸细胞增多症。这些数据代表每组8到9只个体小鼠的实验(*p≤0.05，**p≤0.001.***p≤0.0001)。
在迟发性接触性过敏的OXA致敏和局部局限性攻击模型之前，第0天致敏前8、4和2天给L2-IL5转基因小鼠腹膜内(IP)注射0.3微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.012mg/kg)低剂量、19.2微克/小鼠(假设25.0克小鼠＝0.77mg/kg)高剂量NDM-X或介质(图20A中的方案时间线)。通过将NDM-X溶于二甲亚砜(DMSO)制成0.5μg/μL母贮备液NDM-X低剂量和9.9μg/μL母贮备液NDM-X高剂量，制备母贮备液。为制备新鲜工作贮备液，将母贮备液NDM-X低剂量用水稀释至以制备0.003μg/μL工作贮备液NDM-X低剂量，并且将母贮备液NDM-X高剂量用水稀释以制备0.192μg/μL工作贮备液NDM-X高剂量，其分别用于IP注射100微升/小鼠低剂量和高剂量的NDM-X。
图24中显示的是使用小鼠食管的MBP免疫组化染色的大功率放大显微镜图像，在IL2-IL5转基因小鼠模型中，在用OXA致敏和局部局限性攻击后第13天嗜酸细胞性食管炎的定量评估。在食管的所有区的所有细胞层中，图24显示与没有使用OXA致敏和局部、局限性攻击(无OXA对照)的IL2-IL5转基因小鼠相比，使用OXA致敏和局部、局限性攻击(OXA对照)的IL2-IL5转基因小鼠观察到的嗜酸细胞增多症存在巨大增加。总体趋势显示，0.012mg/kg低剂量NDM-X在抑制食管的远端、中部和近端区的上皮、固有层和肌细胞层中观察到的嗜酸细胞增多症方面略好于0.77mg/kg高剂量的NDM-X。然而，在食管的远端区的上皮、固有层和全部细胞层(肌层除外)中，0.77mg/kg高剂量显示以稍好于0.012mg/kg低剂量的NDM-X的方式统计学显著减轻嗜酸细胞增多症。
图24中0.012mg/kg低剂量的NDM-X显示了在食管的远端、中部和近端区的上皮、固有层和肌细胞层中观察到的嗜酸细胞增多症的统计学显著抑制，其导致从食管远端到近端区的所有细胞层中嗜酸细胞增多症的统计学显著减弱。0.77mg/kg高剂量的NDM-X显示在食管的远端、中部和近端区的上皮和固有层细胞层中嗜酸细胞增多症的统计学显著减轻，其导致从食管的远端到近端区的所有细胞层中嗜酸细胞增多症的统计学显著减弱。这些数据代表每组3至9只个体小鼠的两到三个实验(*p≤0.05，**p≤0.001.***p≤0.0001)。
使用实施例3-16中所述的方案，测试表3的任意其他化合物并且这些化合物具有与上述测试的化合物类似的活性。
实施例17
在IBD动物模型中的功效
使用将500,000个CD4+CD45RBhi细胞转移到成年Rag1-/-小鼠的结肠炎的T细胞转移模型。每周中在多个时间点通过腹膜内注射施用介质或300ng化合物1-56中的任意一种，持续30天。在第30天，对小鼠实施安乐死并进行结肠分析。还分析T细胞活化与表型。正常小鼠结肠为长、皮状并且具有离散的粪便颗粒。患有IBD的患病小鼠结肠具有缩短、膨胀的结肠，伴有腹泻而不是离散的粪便颗粒。
实施例18
在EoE动物模型中的功效
EoE小鼠模型诱导噁唑酮致敏和攻击的L2-IL5小鼠中的嗜酸细胞增多症。
在几个时间点将用介质或不同浓度的化合物1-56中的任意一种腹膜内注射施用于PL2+小鼠，然后用噁唑酮皮肤致敏，并腹膜内注射介质或不同浓度的化合物)。剃光经麻醉的小鼠腹部皮肤的2cm X 2cm区域，并且将噁唑酮涂布于皮肤表面(150μL 3％(w/v)噁唑酮在4:1丙酮-橄榄油介质中的溶液，以启动致敏期)。用2％(w/v)噁唑酮在30％乙醇/橄榄油介质中的溶液通过管饲(即)到近端食管中且在随后的数天腹膜内注射介质(100μL)或不同浓度的化合物，攻击食管，并用任一溶剂(100μL)腹腔注射或不同浓度的化合物在随后的几天里。实验完成时，对小鼠实施安乐死，并分析食管。将食管包埋在石蜡中并且固定在载玻片上。按照MBP IHC方案对食管样品进行染色，并且分析远端、中端和近端食管。对MBP染色的食管切片上的嗜酸性粒细胞进行计数。
实施例19
体外人食管细胞中的作用
可以研究化合物1-56中的任意一种对来自上皮人端粒酶逆转录酶(EPC-hTERT)细胞的CCL26分泌的影响。
在37℃与5％(v/v)CO2在包含青霉素(100单位/毫升)和链霉素(100μg/mL)的角质形成细胞SFM(KSFM)培养基中培养上皮人端粒酶逆转录酶EPC2 hTERT细胞。将350μL培养基/孔中的EPC2-hTERT细胞以0.09x 106细胞/孔的密度接种在三个24孔板中。接种后约4小时改换培养基。接种后24小时，改换培养基以包括DI介质和几种浓度的化合物)，含有IL-13和不含IL-13。采集上清液，并且在处理后的几个时间点，通过在每孔中添加350μL RLT+BME(每1mL RLT 10μLBME)收获细胞。按照制造商的说明，使用Qiagen的Qiashredder和RNeasy试剂盒，提取RNA。使用高容量cDNA逆转录试剂盒制备cDNA。使用TaqMan引物和TaqMan FastAdvanced Master Mix运行qPCR。
等效方案
上述各种方法和技术提供了实施本发明的多种方式。当然，应当理解，根据本申请中所述的任何特定实施方案不一定可以实现所描述的所有目的或优点。因此，例如，本领域技术人员将认识到，可以以实现或优化本申请所教导的一个或一组优点的方式来实施所述方法，而不必实现本申请所教导或表明其他目标或优点。本申请提及了不同的有利和不利替代方案。应当理解，一些优选实施方案具体地包括一个、另一个或几个有利特征，而其他的具体地排除一个、另一个或几个不利特征，而还有一些具体地通过包括一个、另一个或几个有利特征来减少当前不利特征。
此外，本领域技术人员将认识到来自不同实施方案的各种特征的适用性。类似地，以上讨论的各种要素、特征和步骤，以及每个这样的要素、特征或步骤的其他已知等效物可以由本领域技术人员混合和匹配，以便本领域技术人员根据本申请中所述的原理实施方法。在各种要素、特征和步骤中，一些将被具体包括，而另一些将被具体排除在不同的实施方案中。
尽管在某些实施方案和实施例的上下文中公开了本发明，但本领域技术人员将理解，本发明的实施方案将超出具体公开的实施方案扩展到其他替代实施方案和/或用途及其变型和等效方案。
在本发明的实施方案中已经公开了许多变化和替代要素。对于本领域技术人员而言，进一步的变化和替代要素将是显而易见的。在这些变化中，但不限于，本发明组合物的组成模块的选择和可用其诊断、预测或治疗的疾病和其他临床状况。
在一些实施方案中，用于描述和要求保护本发明的某些实施方案的表示成分数量、性质如浓度、反应条件等的数字应理解为在某些情况下被术语“约”修饰。因此，在一些实施方案中，在书面说明书和所附权利要求中举出的数值参数是近似值，其可以根据特定实施方案寻求获得的期望特性而变化。在一些实施方案中，数值参数应根据报告的有效数字的数目并通过应用普通的舍入技术。尽管阐述本发明的一些实施方案的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但在具体实施例中举出的数值被尽可能精确地报告。本发明的一些实施方案中呈现的数值可以包含某些误差，这些误差必然是由在它们各自的测试测量中发现的标准偏差。
在一些实施方案中，在描述本发明的特定实施方案的上下文中(尤其是在以下某些权利要求的上下文中)使用的术语“一个(a)”和“一种(an)”和“该(the)”以及类似的涉及词语可以被解释为涵盖单数和复数。本申请对数值范围的引用仅用作对落入该范围内的每个单独值进行单独引用的速记方法。除非本申请另有指示，否则将每个单独的值都并入本说明书中，就像在本申请中单独引用一样。本申请中所述的所有方法可以按照任意适合的顺序进行，本申请另有说明或与上下文明显矛盾的除外。针对本申请中的某些实施方案提供的任何和所有实施例或实施例语言(例如“例如”)的使用仅旨在更好地示例本发明，而并不对本发明的范围构成限制，否则要求保护。本说明书中的任何语言不应被解释为表明对本发明的实施必不可少的任何未要求保护的要素。
本申请中公开的本发明的备选要素或实施方案的分组不应被解释为限制性的。每个组成员可以单独地或与该组的其他成员或本申请发现的其他要素的任何组合被提及和要求保护。出于便利和/或可专利性的原因，一个或多个组成员可以包括在一个组中或从一个组中删除。当发生任何此类包含或删除时，本申请的说明书被视为包含修改后的组，从而满足对在所附权利要求中所使用的所有马库什基团的书面描述。
通过引用并入
本申请的所有出版物均以引用方式并入本申请，就如同每个单独的出版物或专利申请被具体地和单独地指示为以引用方式并入一样。以下描述包括可能有助于理解本发明的信息。并非承认本申请提供的任何信息为现有技术或与当前要求保护的发明相关，或所涉及的任何出版物明确或隐含地为现有技术。
Claims (35)
1.具有式(I)的结构的化合物：
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3，
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。
2.权利要求1的化合物，其中X为-C(R5)2-C(R5)2-。
3.权利要求1的化合物，其中X为E或Z-CH＝CH-。
4.权利要求1-3任一项的化合物，其中Y为NR6。
5.权利要求1-3任一项的化合物，其中Y为O。
6.权利要求1-5任一项的化合物，其中
R2为H；
R3为H或CH3；且
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基，或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。
7.权利要求1-5任一项的化合物，其中R2、R3和R4各自为CH3。
8.权利要求6的化合物，其中该化合物选自
9.权利要求7的化合物，其中该化合物选自
10.权利要求1的化合物，其中该化合物具有式(II)的结构：
其中
环D选自
11.权利要求10的化合物，其中该化合物具有如下结构：
12.权利要求10的化合物，其中该化合物具有如下结构：
13.权利要求10的化合物，其中该化合物选自
14.药物制剂，其包含药学上可接受的载体；以及具有式(I)的结构的化合物：
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3；
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。
15.权利要求14的药物制剂，其中所述的化合物选自
16.权利要求14的药物制剂，其中所述的化合物选自
17.权利要求14的药物制剂，其中所述的化合物具有式(II)的结构：
其中
环D选自
18.权利要求17的药物制剂，其中所述的化合物具有如下结构：
19.权利要求17的药物制剂，其中所述的化合物具有如下结构：
20.权利要求17的药物制剂，其中所述的化合物选自
21.治疗有此需要的受试者的疾病或病症的方法，该方法包括：
向该受试者施用有效量的具有式(I)的结构的化合物：
其中
环D选自
X为-C(R5)2-C(R5)2-或者为E或Z-CH＝CH-；
Y为O或NR6；
R为H或CH3,
R1为H或CH3；
或者，R和R1与它们所键合的碳原子合一起形成3元或4元碳环；
R2为H或CH3；
R3为H或CH3；
R4为CH3、CH2CH3、直链或支链C3-C6烷基、C5-C7环烷基、6元芳基或杂芳基、芳基取代的C1-C6烷基或杂环基取代的C1-C6烷基；
R5每种情况独立地为H或OH，
或两个R5与它们所键合的碳原子合一起形成3元碳环；且
R6为H或C1-C6烷基，
或者，当Y为NR6时，R4和NR6与它们所键合的碳原子合一起形成5元或6元杂环。
22.权利要求21的方法，其中所述的化合物选自
23.权利要求21的方法，其中所述的化合物选自
24.权利要求21的方法，其中所述的化合物具有式(II)的结构，
其中
环D选自
所述的疾病或病症为炎症性疾病、自身免疫疾病或它们二者。
25.权利要求24的方法，其中所述的化合物具有如下结构：
26.权利要求24的方法，其中所述的化合物具有如下结构：
27.权利要求24的方法，其中所述的化合物选自
28.权利要求21-27任一项的方法，其中所述的疾病或病症选自寻常痤疮，
丙种球蛋白缺乏血症，
变应性鼻炎，
淀粉样变性病，
过敏反应，
强直性脊柱炎，
抗GBM/抗TBM肾炎(抗肾小球基膜抗体病)，
抗磷脂综合征，
孤独症，
自身免疫性肝炎，
自身免疫性内耳病，
特应性皮炎，
哮喘，
Castleman病，
乳糜泻，
查加斯病，
慢性非细菌性骨髓炎，
慢性***炎，
慢性复发性多病灶性骨髓炎，
科根综合征，
冷凝集素疾病，
CREST综合征，
克罗恩病，
皮肌炎，
Devic病(视神经脊髓炎)，
盘状狼疮，
子宫内膜异位症，
嗜酸细胞性哮喘，
嗜酸细胞性心肌病，
嗜酸细胞性结肠炎，
嗜酸细胞性膀胱炎，
嗜酸细胞性病症，
嗜酸细胞性肠炎，
嗜酸细胞性食管炎(EoE)，
嗜酸细胞性筋膜炎，
嗜酸细胞性胃炎，
嗜酸细胞性胃肠炎，
伴有多血管炎的嗜酸细胞性肉芽肿，
嗜酸细胞性肺炎，
埃文斯综合征，
纤维肌痛，
食物过敏，
巨细胞动脉炎，
巨细胞心肌炎，
肾小球肾炎，
古德帕斯丘综合征(抗GBM)，
伴有多血管炎的肉芽肿病(韦格纳肉芽肿)，
格雷夫斯病，
格-巴综合征，
桥本甲状腺炎，
溶血性贫血(某些类型)，
噬血细胞吞噬性淋巴组织细胞增生症，
亨诺-许兰紫癜，
嗜酸性细胞增多综合征，
超敏反应，
低丙球蛋白血症，
低增殖性贫血，
IgA肾病，
包涵体肌炎，
间质性膀胱炎，
炎性肠病，
青少年关节炎，
青少年/1型糖尿病，
青少年肌炎，
川崎综合征，
扁平苔癣，
硬化性苔癣，
肥大细胞增多症，
梅尼埃病，
多发性硬化，
重症肌无力，
肌病(某些类型)，
显微镜下多血管炎，
视神经炎，
发作性睡眠性血红蛋白尿，
天疱疮，
常年性过敏，
恶性贫血，
***性疾病，
结节性多动脉炎，
风湿性多肌痛，
多肌炎，
原发性胆汁性肝硬变，
原发性硬化性胆管炎，
银屑病，
牛皮癣性关节炎，
反应性关节炎，
再灌注损伤，
风湿热，
类风湿性关节炎，
结节病，
硬皮病，
季节性***反应，
选择性IgA缺乏症，
镰刀形细胞病，
干燥综合征，
斯蒂尔病，
***性红斑狼疮(SLE)，
***性青少年特发性关节炎，
***性硬化症，
高安关节炎，
颞动脉炎/巨细胞动脉炎，
移植排斥，
横贯性脊髓炎，
溃疡性结肠炎，
葡萄膜炎，
脉管炎，
白癜风，
病毒性心肌炎，以及
韦格纳肉芽肿(伴有多血管炎的肉芽肿病(GPA))。
29.权利要求21-28任一项的方法，其中所述的疾病或病症为嗜酸细胞性食管炎(EoE)、哮喘、炎性肠病、类风湿性关节炎或多发性硬化。
30.权利要求21-28任一项的方法，其中所述的疾病或病症是嗜酸性粒细胞病症，其选自嗜酸细胞性哮喘、嗜酸细胞性心肌病、嗜酸细胞性结肠炎、嗜酸细胞性膀胱炎、嗜酸细胞性肠炎、嗜酸细胞性食管炎EoE)、嗜酸细胞性筋膜炎、嗜酸细胞性胃炎、嗜酸细胞性胃肠炎、伴有多血管炎的嗜酸细胞性肉芽肿病、嗜酸细胞性肺炎和嗜酸细胞增多综合征。
31.权利要求21-30任一项的方法，其中所述的受试者选自灵长类、人、马科动物、马、牛、奶牛、猪、羊、啮齿动物、大鼠、宠物、狗和豚鼠。
32.权利要求21-31任一项的方法，其中所述的受试者为人。
33.权利要求21-32任一项的方法，其中该方法还包括向所述的受试者联合施用有效量的不同治疗化合物。
34.权利要求33的方法，其中所述不同的治疗化合物为类固醇。
35.权利要求33的方法，其中所述不同的治疗化合物为***。
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