CN114404456B - 一种用于家禽腹泻防治的益生组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种益生组合物,该组合物可有效抑制畜禽腹泻、降低病死率、改善肠道菌群环境、促进畜禽生长,其益生效果显著性优于对照组,可作为用于畜禽日常饲喂,提高畜禽免疫力,具有广阔的应用前景。

Description

一种用于家禽腹泻防治的益生组合物及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域,具体涉及一种可有效防治家禽腹泻的益生组合物。
背景技术
畜禽腹泻除了致病菌和病毒等因素外,还有豆粕、棉籽粕、菜籽粕过生或用量过高、饲料发生霉变、饲料中过量钙质、代谢障碍、药物中毒、种蛋与孵化条件等诸多因素。腹泻可导致机体严重缺水,营养物质流失,具体表现出食欲下降、生产性能降低、精神不振等不良状况,一旦全群畜禽被感染,则导致死淘率增加,饲料转化率降低。目前对于畜禽腹泻的治疗大多直接采用抗生素、激素等治疗,不仅引起畜禽菌群失调、耐药株增多、免疫功能下降,而且造成畜产品中药物等有害物质残留,导致动物源性食品安全问题。
添加免疫促进剂是一种非常有效的解决办法,它不仅能提高动物的免疫力,促进动物健康生长,而且避免了使用抗生素药物所带来的副作用。微生态类产品具有天然、低毒、残留少、不产生抗药性等特点,利用独特的靶位定植原理,对致病菌、病毒等病原物有一定的抑制和防御功能,已替代部分抗生素,可保障动物源性食品的安全。但是,现有的生物制剂抑制腹泻效果并不十分理想。
发明内容
为了克服现有技术中的缺陷,本发明旨在提供一种可有效抑制腹泻、降低病死率、改善肠道菌群环境、促进畜禽生长的生物复方益生组合物。更为具体的,本发明提供如下的技术方案:
本发明的第一个方面,提供一种畜禽用益生组合物,所述组合物包括凝结芽孢杆菌发酵培养物,所述凝结芽孢杆菌发酵培养基中添加有地顶孢霉发酵液。
在一种实施方式中,所述地顶孢霉发酵液是通过利用含有薏米和葛根的煎煮液的发酵培养基发酵地顶孢霉获得。
在一种优选的实施方式中,薏米和葛根的比例为质量比2:1。
在一种优选的实施方式中,所述组合物可选自包被颗粒、冻干粉或发酵液。
在一种优选的实施方式中,所述组合物中凝结芽孢杆菌的有效活菌数为1×109-4× 109cfu/g。
本发明的第二个方面,提供上述益生组合物在制备调节畜禽肠道菌群的药物中的应用。
本发明的第三个方面,提供上述益生组合物在制备防治畜禽腹泻的药物中的应用。
本发明的第四个方面,提供上述益生组合物在促进畜禽生长中的应用。
在一种优选的实施方式中,所述畜禽为鸡、鸭、猪。
具体实施方式
实施例1益生组合物的配制方法
1.将薏米、葛根分别用粉碎机粉碎,过80目筛,将两种粉末按照质量比2:1混合,称取500g 粉末组合物,加入1000ml蒸馏水,浸泡半小时后,文火煎煮30min,经纱布过滤后,收集第一次滤液,将滤渣再加入1000ml蒸馏水进行二次煎煮30min后经纱布过滤,按照相同的步骤进行第三次煎煮过滤,将三次煎煮的滤液混合浓缩至1000ml,冷却备用。
2.将活化好的地顶孢霉菌(购自中国菌种保藏管理中心,保藏号为ATCC13215)进行发酵培养,将步骤1获得的薏米葛根浓缩液(后面简称薏葛液)按照体积比30%的比例添加到发酵培养基中,地顶孢霉菌的发酵培养基组分和接种量为:蔗糖5g/L,葡萄糖20g/L,蛋白胨15g/L,酵母粉15g/L,玉米淀粉20g/L,硫酸镁0.3g/L,磷酸二氢钾0.1g/L,磷酸氢二钾1g/L,硫酸铵0.01g/L,蚯蚓粉10g/ml,地顶孢霉菌接种量为3%。按照相同的步骤和接种量,将活化好的地顶孢霉菌加入到相同培养基总量的地顶孢霉菌的发酵培养基中(无添加薏葛液)发酵,作为对照组。
3.每隔3h采用苯酚-硫酸法对步骤2的薏葛液发酵液中总多糖含量进行检测,当发酵液中总多糖含量达到70%以上后停止发酵,将发酵液(薏葛液组)冷却用于后续步骤。对照组按照相同的步骤处理获得对照组发酵液。
4.将活化好的凝结芽孢杆菌(购自中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC No:M2011422) 进行发酵培养,将步骤3获得的发酵液按照体积比20%的比例添加到发酵培养基中,将步骤 1获得的薏葛液按照体积比10%的比例添加到发酵培养基中,凝结芽孢杆菌的发酵培养基组分和接种量为:淀粉0.2%、蛋白胨0.5%、大豆粉1.0%、葡萄糖0.1%、酵母膏0.07%、 MnSO4 0.02%,凝结芽孢杆菌接种量为5%;按照本领域常规方法分别进行发酵,待发酵液中菌浓度达到2×109cfu/ml时结束发酵,获得合生元发酵液(薏葛液组)。对照组则为将步骤 3获得的对照组发酵液按照体积比20%的比例添加到发酵培养基中,将步骤1获得的薏葛液按照体积比10%的比例添加到发酵培养基中,其他步骤与薏葛液组相同。
5.将合生元发酵液经双效真空蒸发器,浓缩处理,浓缩倍数为20倍,得到浓缩发酵液。浓缩参数如下:真空度-0.09MPa,温度55℃,蒸发速度500L/h。浓缩液用高效沸腾干燥机进行包被处理,包被载体为麦芽糊精,工艺如下:浓缩液与麦芽糊精重量比值1:1.2,麦芽糊精单批次投料35㎏,浓缩液进料速度30L/h,进风温度90℃,物料温度48℃,烘干水分7%左右。对照组按相同步骤参数进行浓缩包被,获得包被颗粒。
实施例2复合合生元发酵液对肉鸡防治腹泻和促生长性能的效果验证
1.饲养管理和实验分组:
饲料:全程使用大成集团各段饲料,自由进食饮水。
实验对象:选取1日龄AA健康肉仔鸡450只,随机分为3个组,分别为对照组、薏葛液组、抗生素组三个试验组,每组3个重复,每个重复50只仔鸡。具体分组情况见表1。
表1
Figure BDA0003513420040000031
表1中将上述对照组、薏葛液组、单菌剂组的包被颗粒均与纯净水按照200g/t的量配制后应用于饮水。抗生素组按照20g/t的量配制后应用于饮水。
2.生长性能的测定:
每隔7天分别在每组随机选取仔鸡10只进行称重,记录体重、单日耗料量,用于计算平均日采食量、平均周增重和料重比,42天后记录死亡数,用于计算每组成活率。
3.肠道菌群的测定:
喂养至第42天时,从每组随机选取10只仔鸡称重后放血处死,每只取新鲜盲肠内容物2 g,用0.85%氯化钠溶液99mL稀释并混合均匀,然后按照10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、 10-7等倍数进行梯度稀释。然后吸取10-3、10-4、10-5 3个浓度各100μL置于麦康凯琼脂培养基中进行细菌培养,每个稀释度划3个重复板,在37℃培养箱内恒温培养18h,在麦康凯培养基中大肠杆菌菌落呈鲜桃红色,圆形、扁平,边缘整齐,表面光滑、湿润;沙门氏菌的菌落呈无色至浅橙色、透明或半透明;再吸取10-5、10-6、10-7共3个浓度各100μL,置于MRS 培养基中进行细菌培养,在37℃培养箱内恒温培养48h,在MRS培养基中平皿底为黄色,乳酸杆菌为淡蓝色或白色、中等大小、凸起、湿润、边缘整齐,菌落呈圆形,直径为(3.0±1.0) mm。统计平板菌落个数,结果以肠道内容物中细菌数量(CFU/g)的对数值表示。
4.数据统计与分析:
试验数据用Excel软件进行初步处理,应用SPSS 16.0统计软件进行数据统计与分析。
5.实验结果:
生长性能测试结果如表1所示,结果表明,单菌剂组、对照组、薏葛液组相对于空白组来讲,各周增重均有很大提高,薏葛液组和对照组(无薏葛液发酵的地顶孢霉菌发酵液+凝结芽孢杆菌)相对于单菌剂组(凝结芽孢杆菌)来讲,可显著提升单周增重克数(p<0.05)。在第一周时,薏葛液组和对照组在增重上无显著性差异,而到第6周时,则呈现出显著性差异(p<0.05),并且薏葛液组可显著地提高仔鸡的成活率(p<0.05)。
表1
Figure BDA0003513420040000041
肠道菌群测定结果如表2所示,由表2可知,42日龄时,单菌剂组、对照组、薏葛液组三组大肠杆菌数量均显著低于抗生素组(p<0.05),薏葛液组和对照组相对于单菌剂来讲,都取得了更优的调节肠道菌群的效果,这可能与其菌剂中含有的多糖组分有关。而薏葛液组发酵培养物相对于对照组而言,呈现出更优的调节效果,特别是对乳酸菌的促生作用极其显著,暗示在地顶孢霉发酵中添加薏葛液优化了地顶孢霉发酵液中的多糖比例和组分,在进一步发酵凝结芽孢杆菌时,所获得的发酵培养物具有更佳的肠道调节功能。
表2
Figure BDA0003513420040000042
Figure BDA0003513420040000051
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (7)

1.一种畜禽用益生组合物,其特征在于,所述组合物包括凝结芽孢杆菌发酵培养物,所述凝结芽孢杆菌发酵培养基中添加有地顶孢霉发酵液,其中,所述地顶孢霉发酵液是通过利用含有薏米和葛根的煎煮液的发酵培养基发酵地顶孢霉获得,所述地顶孢霉菌购自中国菌种保藏管理中心,保藏号为ATCC13215,所述凝结芽孢杆菌购自中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC No:M2011422,所述薏米和葛根的比例为质量比2:1。
2.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述组合物选自包被颗粒、冻干粉或发酵液。
3.如权利要求1或2所述的组合物,其特征在于,所述组合物中凝结芽孢杆菌的有效活菌数为1×109-4×109cfu/g。
4.如权利要求3所述的益生组合物在制备调节畜禽肠道菌群的药物中的应用。
5.如权利要求3所述的益生组合物在制备防治畜禽腹泻的药物中的应用。
6.如权利要求3所述的益生组合物在促进畜禽生长中的应用。
7.如权利要求4-6任一所述的应用,其特征在于,所述畜禽为鸡、鸭、猪。
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