CN114397439B - 音猬因子在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了音猬因子在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。音猬因子作为生物标志物在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。定量检测音猬因子的试剂在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。所述的定量检测音猬因子的试剂为检测音猬因子的ELISA试剂。本发明首次发现音猬因子(SHH)能够作为生物标志物用于主动脉夹层的辅助诊断。SHH作为生物标志物能够很好的区分健康人与主动脉夹层患者。SHH作为生物标志物在区分正常对照组和主动脉夹层组时的ROC曲线下面积为0.9445，特异度为74.84％，对主动脉夹层具有很好的诊断价值。

Description

音猬因子在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用
技术领域
本发明属于医药学技术领域，具体涉及音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。
背景技术
主动脉夹层(Aortic dissection,AD)是指多种因素导致的血液经撕裂口流入主动脉壁中层形成夹层血肿，随心脏收缩假腔沿主动脉壁向两侧延伸剥离的致死性血管疾病。AD具有病情危急，死亡率高的特点，严重威胁人类生命安全。因此，早期、准确的诊断是关键。目前对AD的诊断主要依靠影像学手段，但其缺乏及时性，方便性，快速性。血清学检查因其具备灵敏、简单、经济的特点是以成为临床重要检查手段，被广泛应用于多种疾病的诊断。
近年来报道的用于诊断AD的生物标志物，主要有：与高血压相关的分子标志物如前炎症因子；动脉粥样硬化炎症反应相关的分子标志物如白介素-6(IL-6)，白介素-8(IL-8)，血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein,SAA)；与主动脉壁基质降解相关的分子标志物如基质金属蛋白酶(MMPs)，细胞外基质糖蛋白Tenascin-C(TNC)；与免疫相关的分子标志物如可溶性ST-2(soluble ST-2，sST-2)，Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)。但因灵敏度和特异度不理想导致这些分子标志物未能在临床上推广。因而，探寻更为准确灵敏的AD生物标志物迫在眉睫。
音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)是一种分泌蛋白，是Hedgehog(Hh)家族的重要成员，其在血管生成及发生中发挥重要作用,在胰腺癌、肝癌、动脉粥样硬化、缺血性心脏病等病理条件下可见其异常表达。但其在AD发生发展过程中的诊断和预测作用尚未阐明，需进一步探究。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测主动脉夹层的生物标志物及其应用，为AD的临床早期诊断及预后评估提供科学依据。
本发明的目的可通过以下技术方案实现：
音猬因子作为生物标志物在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。
定量检测音猬因子的试剂在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。
作为本发明的一种优选，所述的定量检测音猬因子的试剂为检测音猬因子的ELISA试剂。
定量检测音猬因子的试剂在制备主动脉夹层患者早期预警试剂中的应用。
作为本发明的一种优选，所述的定量检测音猬因子的试剂为检测音猬因子的ELISA试剂。
区分主动脉夹层患者与正常人的方法包括如下步骤：
(1)收集待测患者的血清样品，并以正常人血清样品作为对照；
(2)检测待测患者和正常人的血清样品中生物标志物的含量，并将所得结果进行比对；
(3)根据比对结果指示待测患者是否为主动脉夹层患者；若待测对象血清样品中所用的生物标志物的含量高于对照，则指示所述待测对象为主动脉夹层。
优选的是，采用ELISA方法检测血清样品中生物标志物的含量。
有益效果：
本发明首次发现音猬因子(SHH)能够作为生物标志物用于主动脉夹层的辅助诊断。SHH作为生物标志物能够很好的区分健康人与主动脉夹层患者。SHH作为生物标志物在区分正常对照组和主动脉夹层组时的ROC曲线下面积为0.9445，敏感度为96.23％，特异度为74.84％，对主动脉夹层具有很好的诊断价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需使用附图作简单的介绍。
图1为SHH作为生物标志物在正常对照组与主动脉夹层组中表达水平浓度数值；
图2为SHH作为生物标志物在正常对照组与主动脉夹层组之间进行对比分析的ROC曲线。
敏感度是纵坐标：Sensitivity，真正类率(True positive rate，TPR)，预测为正且实际为正的样本占所有正例样本的比例。特异度是横坐标：Specificity，伪正类率(False positive rate，FPR)，预测为正但实际为负的样本占所有负例样本的比例。
具体实施方式
实施例1主动脉夹层患者血清标志物样本测试
针对我们实验中发现的shh的上调和Hedgehog信号通路的激活可能参与AD的发生，我们进行了血清标志物样本测试根据性别和年龄随机分组，选取160个健康人作为对照，主动脉夹层患者160例，进行ELISA实验验证SHH能否判断患者患有主动脉夹层。实验步骤如下：
(1)检测前准备工作
①提前1h从冰箱中取出试剂盒、样本，平衡至室温。
②20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1:20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
③实验所需试剂及耗材：
a.ELISA试剂盒，如表1：
表1 ELISA试剂盒组成
试剂盒组成 规格(96T)
预包被酶标板 8×12条
标准品 1支
标准品/样品稀释液 15ml
生物素化检测抗体(100×) 120ul
生物素化检测抗体稀释液 12ml
SABC复合物 12ml
TMB显色液 6ml
终止液 12ml
20×浓缩洗涤液 60ml
封板胶纸 4张
产品说明书 1份
b.所需自备实验器材：酶标仪(450nm)；37℃恒温箱。
c.操作步骤
a)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出板条。
b)设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加，37℃恒温箱温育40min。
c)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置2min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。
d)除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入生物素化抗体工作液100μL，37℃恒温箱温育20min。
e)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置2min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。
f)每孔加入SABC复合物工作液体100μL，37℃恒温箱温育20min。
g)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置2min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。
h)每孔加入TMB混合液100μL，37℃避光孵育20min。
i)每孔加入终止液100μL，30min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
d.通过上述ELISA方法，以SHH作为生物标志物对主动脉夹层组和正常组进行分析检测，所得数据采用Prism8.0统计学软件进行分析并绘制受试者工作特征(ROC)曲线，明确新型标志物能否成为新的AD诊断标志物应用于临床，同时探索联合指标对AD诊断价值。
(2)结果分析
如图1所示，该图为SHH作为生物标志物在正常对照组和主动脉夹层组中表达水平浓度数值，结果显示：SHH能够很好的区分健康人与主动脉夹层患者。
ELISA结果用了roc曲线分析，如图2和表2所示，SHH作为生物标志物在区分正常对照组和主动脉夹层组时的ROC曲线，结果显示：曲线下面积均大于0.9，对主动脉夹层具有很好的诊断价值。
表2 SHH用于区分健康人和主动脉夹层患者时的ROC统计结果

Claims (5)

1.音猬因子作为生物标志物在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。
2.定量检测音猬因子的试剂在制备主动脉夹层辅助诊断试剂中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的定量检测音猬因子的试剂为检测音猬因子的ELISA试剂。
4.定量检测音猬因子的试剂在制备主动脉夹层患者早期预警试剂中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的定量检测音猬因子的试剂为检测音猬因子的ELISA试剂。
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