CN114324891B - 一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品及其制备方法 - Google Patents
一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114324891B CN114324891B CN202111561657.1A CN202111561657A CN114324891B CN 114324891 B CN114324891 B CN 114324891B CN 202111561657 A CN202111561657 A CN 202111561657A CN 114324891 B CN114324891 B CN 114324891B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- myo
- ctni
- quality control
- control product
- lactose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 101100537532 Rattus norvegicus Tnni3 gene Proteins 0.000 title claims abstract description 91
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 title claims abstract description 71
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 36
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 36
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 33
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 32
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 32
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 32
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 31
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 27
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 27
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 5
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 abstract description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 2
- 230000036571 hydration Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 8
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 8
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 6
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 6
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 6
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 4
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 4
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 4
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 4
- 102100036859 Troponin I, cardiac muscle Human genes 0.000 description 4
- 101710128251 Troponin I, cardiac muscle Proteins 0.000 description 4
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 3
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 3
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 208000037891 myocardial injury Diseases 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000003699 striated muscle Anatomy 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 201000011244 Acrocallosal syndrome Diseases 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102000004364 Myogenin Human genes 0.000 description 1
- 108010056785 Myogenin Proteins 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000013394 Troponin I Human genes 0.000 description 1
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 208000019905 acrocephalosyndactyly Diseases 0.000 description 1
- 206010051895 acute chest syndrome Diseases 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明属于生物制品技术领域，涉及一种cTnI/MYO/CK‑MB复合质控品及其制备方法。本发明所提供的心肌三项复合质控品性质稳定，能在开瓶后2～8℃下保存4周左右，且在水化复溶后蛋白活性无明显变化；不含有毒物质，安全性高。
Description
技术领域
本发明属于生物制品技术领域。具体而言，本发明涉及一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品及其制备方法。
背景技术
心肌肌钙蛋白I(Cardiac troponin I，cTnI)主要存在于肌肉组织中的蛋白质，由于cTnI在组成上有着独特的氨基酸序列(N-端比横纹肌多31个氨基酸)，骨骼肌肝、肾等细胞破坏均不影响其结果的判断，因此肌钙蛋白I具有良好的特异性。心肌肌钙蛋白是目前诊断心肌损伤或坏死特异性最强和灵敏度较高的生物标志物，是目前诊断急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)最好的确定标志物，在急性冠状动脉综合症(acutecoronary syndrome，ACS)危险分层中也有重要的临床意义。健康人血内不含或含极低量的cTnI，当心肌缺血缺氧、发生变性坏死、细胞膜破损等病理状态时，cTnI弥散进入细胞间质，较早地出现在外周血中。在发病后4～6h，外周血中出现cTnI，12～48h其水平达到高峰。在严重心肌梗死(myocardial infarction，MI)出现后，血浆cTnI可在高水平下持续4～10d，有较长的诊断窗口期。
肌红蛋白(myoglobin，MYO)存在干心脏骨骼的横纹肌中，是目前公认的较好的早期心肌损伤标志物。当肌细胞受损时，MYO能很快释放到血液中，在发病1～3h即可检测到其水平异常增高。MYO虽然心肌特异性不高，但心肌梗死后迅速地从坏死的心肌中释放出来，具有高度的敏感性，MYO阴性特别有助于排除AMI的诊断。由于MYO在血中半衰期短，所以又有助于观察AMI病程中有无再梗死发生以及梗死有无扩展。MYO还是AMI溶栓治疗中评价再灌注与否的较敏感而准确的指标。
肌酸激酶同工酶(Creatine kinase isoenzyme)主要有四种同功酶形式：肌肉型(MM)、脑型(BB)、杂化型(MB)和线粒体型(MiMi)。MB型主要存在于心肌细胞中，即CK-MB(creatine kinase-MB)。当心肌损伤时，CK-MB立刻被释放入血液循环，其水平于3～4h开始升高，48～72h降至正常范围。近年来，***要求有条件的实验室应检测CK-MB质量，质量的测定避免了其它亚型的干扰，特异性较高。
在第三版“心肌梗死全球定义”中建议，CK-MB应作为心肌肌钙蛋白(Cardiactroponin，cTn)的替代，当不能检测心肌肌钙蛋白时使用CK-MB。有些CK-MB正常但心肌肌钙蛋白已升高的患者罹患心脏类疾病的风险较高，所以CK-MB联合cTn检测对临床有更好的指导。心肌梗死的早期(3-6d)，若出现CK-MB水平的再次升高，则提示再发心梗或梗死面积的扩大，而这一时间正好是cTn诊断心梗的“盲区"。
因此，cTnI/MYO/CK-MB联合诊断试剂的开发具有重要意义，而为了心肌三项测定的准确性，每次测定时均采用稳定不变的标准物质进行校准，目前，各医院、实验室广泛采用临床化学用质控血清进行室内质量控制和室间质量评价，以提高检测结果的准确度和精密度。
然而，目前国内临床化学用的质控多为单检项目，且稳定性欠佳。北京乐普医疗科技公司的心肌质控品复溶后仅能在2～16℃条件下稳定4h左右。南京诺尔曼生物公司的心肌三项复合质控品复溶后仅可以在2～8℃条件下保存7天。
有些国内外公司生产的心肌三项质控品含有叠氮钠，为一种有毒试剂，对眼和皮肤有刺激性，如吸入、口服或经皮肤吸收，可引起中毒死亡，且其化学性质不稳定、易发生***。
因此，提供一种无毒、稳定、低成本的cTnI/MYO/CK-MB质控品，对于心肌三项联合诊断试剂的开发及临床应用，具有重要意义。
发明内容
本发明提供一种无毒、稳定的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，以克服现有技术存在的缺陷，满足临床应用的需要。
一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，包括cTnI、MYO、CK-MB，以及乳糖、甘露醇、牛血清白蛋白和Proclin 300。
在一些实施方案中，所述的质控品中，cTnI的浓度选自0.1～100ng/mL，优选0.3～60ng/mL，更优选0.3～30ng/mL；MYO的浓度选自30～300ng/mL，优选50～200ng/mL，更优选70～200ng/mL；CK-MB的浓度选自2～100ng/mL，优选3～50ng/mL，更优选5～20ng/mL。在一些实施方案中，所述的质控品中，cTnI的浓度为0.3ng/mL，MYO的浓度为70ng/mL，CK-MB的浓度为5ng/mL。在一些实施方案中，所述的质控品中，cTnI的浓度为30ng/mL，MYO的浓度为200ng/mL，CK-MB的浓度为20ng/mL。
在一些实施方案中，所述乳糖的浓度选自3～15w/v％，优选5～12w/v％，更优选5w/v％、5.5w/v％、6.0w/v％、6.5w/v％、7.0w/v％、7.5w/v％、8.0w/v％、8.5w/v％、9.0w/v％、9.5w/v％、10.0w/v％、10.5w/v％、11.0w/v％、11.5w/v％、12.0w/v％。
在一些实施方案中，所述甘露醇的浓度选自1～10w/v％，优选2～7w/v％，更优选2.0w/v％、2.5w/v％、3.0w/v％、3.5w/v％、4.0w/v％、4.5w/v％、5.0w/v％、5.5w/v％、6.0w/v％、6.5w/v％、7.0w/v％。
在一些实施方案中，所述牛血清白蛋白的浓度选自1～10w/v％，优选2～7w/v％，更优选2.0w/v％、2.5w/v％、3.0w/v％、3.5w/v％、4.0w/v％、4.5w/v％、5.0w/v％、5.5w/v％、6.0w/v％、6.5w/v％、7.0w/v％。
在一些实施方案中，所述Proclin 300的浓度选自0.1～1.0v/v％，优选0.1～0.5v/v％，更优选0.10v/v％、0.15v/v％、0.20v/v％、0.25v/v％、0.30v/v％、0.35v/v％、0.40v/v％、0.45v/v％、0.50v/v％。
在一些实施方案中，所述质控品还包含缓冲体系。在一些实施方案中，所述的缓冲体系选自磷酸盐缓冲体系、草酸盐缓冲体系、酒石酸盐缓冲体系、硼酸盐缓冲体系。在一些实施方案中，所述的缓冲体系是磷酸盐缓冲体系。在一些实施方案中，所述的磷酸盐缓冲体系是浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液，pH值为7.80～8.00。
本发明提供一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，包括0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB；还包括8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液。
本发明提供一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，包括30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB；还包括8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液。
本发明提供一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，包括2个水平的cTnI/MYO/CK-MB，水平1包括0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液，水平2包括30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液。
本发明还提供一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，该冻干的质控品是由前述质控品经冻干得到的。
本发明还提供一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，该冻干的质控品是由包括0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的质控品冻干得到的。
本发明还提供一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，该冻干的质控品是由包括30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的质控品冻干得到的。
本发明还提供一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，该冻干的质控品包括2个水平的cTnI/MYO/CK-MB，水平1是由包括0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的质控品冻干得到的，水平2是由包括30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的质控品冻干得到的。
本发明还提供一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，该冻干的质控品经复溶后得到液体组合物，液体组合物包括0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液。
本发明还提供一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，该冻干的质控品经复溶后得到液体组合物，液体组合物包括30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液。
本发明还提供一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，该冻干的质控品包括2个水平的cTnI/MYO/CK-MB，经复溶后得到液体组合物，水平1液体组合物包括0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液；水平2液体组合物包括30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液。
本发明还提供一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品的制备方法，包括将包含0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的液体组合物冻干的步骤。
本发明还提供一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品的制备方法，包括将包含30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的液体组合物冻干的步骤。
本发明还提供一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品的制备方法，包括将包含0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的液体组合物冻干得到水平1质控品，将包含30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、5w/v％牛血清白蛋白、0.2v/v％Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液的液体组合物冻干得到水平2质控品。
本发明还提供包含前述复合质控品的试剂盒。
有益效果：
本发明提供一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其性质稳定，能在复溶后2～8℃下保存4周左右，在水化复溶后蛋白活性无明显变化，且其不含有毒物质，安全性高。
具体实施方式
为了使本发明易于理解，下面结合具体实施例对本发明的实施方案进行详细描述。
本领域技术人员可以理解，以下实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，均为按照本领域内常规技术或条件，或按照产品说明书进行。所用材料、试剂或仪器未注明生产厂商者，均为市售产品。
以下提供了本发明实施方式中所使用的具体材料及其来源。但本领域技术人员可以理解，这些仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。
除非另有定义，本文所使用的所有技术、科学术语，均与本发明技术领域技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例目的，并非用于本发明的限定。
材料和仪器
实施例1：
1.称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)6.00g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)0.41g，蒸馏水溶解定容至1000mL后得到浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液，调节pH值为7.80～8.00。
2.按照下列配方，分别将(1)、(2)两组物质加入已配好的磷酸盐缓冲液中，得到溶液R1：
(1)cTnI/MYO/CK-MB水平1：5w/v％BSA，0.2v/v％防腐剂Proclin 300，cTnI0.30ng/mL，MYO 70ng/mL，CK-MB 5ng/mL；
(2)cTnI/MYO/CK-MB水平2：5w/v％BSA，0.2v/v％防腐剂Proclin 300，cTnI 30ng/mL，MYO 200ng/mL，CK-MB 20ng/mL。
3.将R1溶液分成4组，分别添加以下物质：
(1)不添加糖与糖醇保护剂；(2)5w/v％甘露醇；(3)8w/v％乳糖；(4)8w/v％蔗糖。
4.取上述配好的溶液分装棕色西林瓶中，每瓶1mL规格进行冷冻干燥，冷冻干燥条件见表1。
表1冷冻干燥工艺程序
5.将冻干后的产品加入1mL纯化水复溶后测定cTnI/MYO/CK-MB活性蛋白含量。将预留的复溶后产品置于2～8℃恒温冰柜中加速4周，每周测定一次。结果见表2。
6.蛋白含量测定：用南京诺唯赞肌酸激酶同工酶、心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白联合检测试剂盒(批号：V2020090339A)测定质控品中活性蛋白的含量。测试用仪器为南京诺唯赞全自动量子点荧光免疫分析仪QDS-1200。
表2不同保护剂条件下蛋白含量变化情况
由表2结果可以看出，2～8℃条件下，不加糖、糖醇保护剂组的cTnI/MYO/CK-MB蛋白含量急剧下降。
实施例2：
1.称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)6.00g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)0.41g，蒸馏水溶解定容至1000mL后得到浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液，调节pH值为7.80～8.00。
2.按照下列配方，分别将(1)、(2)两组物质加入已配好的磷酸盐缓冲液中，得到溶液R1：
(1)cTnI/MYO/CK-MB水平1：8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、0.2v/v％防腐剂Proclin300、cTnI 0.30ng/mL、MYO 70ng/mL，CK-MB 5ng/mL；
(2)cTnI/MYO/CK-MB水平2：8w/v％乳糖、5w/v％甘露醇、0.2v/v％防腐剂Proclin300、cTnI 30ng/mL，MYO 200ng/mL，CK-MB 20ng/mL。
3.将R1溶液分成4组，分别添加以下物质：
(1)不添加BSA；(2)1w/v％BSA；(3)3w/v％BSA；(4)5w/v％BSA。
4.取上述配好的溶液分装棕色西林瓶中，每瓶1mL规格进行冷冻干燥，冷冻干燥条件见表1。
5.将冻干后的产品加入1mL纯化水复溶后测定cTnI/MYO/CK-MB活性蛋白含量。将预留的复溶后产品置于2～8℃恒温冰柜中加速4周，每周测定一次，测定方法同实施例1。结果见表3：
表3BSA含量不同条件下的蛋白含量变化情况
由表3结果可以看出，无BSA组的cTnI/MYO/CK-MB蛋白稳定性弱于含有BSA组。含BSA组中，5％BSA组的cTnI/MYO/CK-MB蛋白稳定性最佳。
实施例3：
1.称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)6.00g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)0.41g，蒸馏水溶解定容至1000mL后得到浓度为50mmol/L的磷酸盐缓冲液，调节pH值为7.80～8.00。
2.按照下列配方，分别将(1)、(2)两组物质加入已配好的磷酸盐缓冲液中，得到溶液R1：
(1)cTnI/MYO/CK-MB水平1：5w/v％BSA、5w/v％甘露醇、0.2v/v％防腐剂Proclin300、cTnI 0.30ng/mL、MYO 70ng/mL，CK-MB 5ng/mL；
(2)cTnI/MYO/CK-MB水平2：5w/v％BSA、5w/v％甘露醇、0.2v/v％防腐剂Proclin300、cTnI 30ng/mL，MYO 200ng/mL，CK-MB 20ng/mL。
3.将溶液分成4组，分别添加以下物质：
(1)1w/v％乳糖；(2)6w/v％乳糖；(3)12w/v％乳糖；(4)15w/v％乳糖。
4.取上述配好的溶液分装棕色西林瓶中，每瓶1mL规格进行冷冻干燥，冷冻干燥条件见表1。
5.将冻干后的产品加入1mL纯化水复溶后测定cTnI/MYO/CK-MB活性蛋白含量。将预留的复溶后产品置于2～8℃恒温冰柜中加速4周，每周测定一次，测定方法同实施例1。结果见表4：
表4乳糖含量不同条件下的蛋白含量变化情况
由表4结果可以看出，当浓度为6w/v％、12w/v％时，乳糖对cTnI/MYO/CK-MB蛋白具有明显的稳定作用。
对比例1
广州万孚心肌三联cTnI/MYO/CK-MB质控品(货号：C109)的稳定性研究。
蛋白含量测定：用广州万孚肌酸激酶同工酶、心肌肌钙蛋白I、肌红蛋白联合检测试剂卡(货号：W21613109)测定质控品中活性蛋白的含量。将质控品复溶后于2～8℃恒温冰柜中分别放置0h、2h、4h、6h、8h后进行活性蛋白含量检测。测试用仪器为广州万孚飞测全自动FS301。测试结果见表5：
表5万孚质控品中蛋白含量变化情况
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (14)
1.一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，由cTnI、MYO、CK-MB、以及乳糖、甘露醇、牛血清白蛋白、Proclin 300和磷酸盐缓冲液组成，其中cTnI的浓度选自0.3~30ng/mL；MYO的浓度选自70~200ng/mL；CK-MB的浓度选自5~20ng/mL；乳糖的浓度选自6~12w/v%，甘露醇的浓度选自4~6w/v%，牛血清白蛋白的浓度选自3~5w/v%。
2.根据权利要求1所述的复合质控品，其中所述乳糖的浓度选自6.0w/v%、6.5w/v%、7.0w/v%、7.5w/v%、8.0w/v%、8.5w/v%、9.0w/v%、9.5w/v%、10.0w/v%、10.5w/v%、11.0w/v%、11.5w/v%或12.0w/v%。
3.根据权利要求1所述的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，所述的质控品中，甘露醇的浓度选自4.0w/v%、4.5w/v%、5.0w/v%、5.5w/v%、6.0w/v%。
4.根据权利要求1所述的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，所述的质控品中，牛血清白蛋白的浓度选自3.0w/v%、3.5w/v%、4.0w/v%、4.5w/v%、5.0w/v%。
5.根据权利要求1所述的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，所述的质控品中，Proclin 300的浓度选自0.1~0.5v/v%。
6. 根据权利要求1所述的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，所述的质控品中，Proclin 300的浓度选自0.10v/v%、0.15v/v%、0.20v/v%、0.25v/v%、0.30v/v%、0.35v/v%、0.40v/v%、0.45v/v% 或0.50v/v%。
7. 一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，由0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v%乳糖、5w/v%甘露醇、5w/v%牛血清白蛋白、0.2v/v% Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液组成。
8.一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，由30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v%乳糖、5w/v%甘露醇、5w/v%牛血清白蛋白、0.2v/v% Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液组成。
9.一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，该冻干的质控品是由权利要求2~8任一项所述的质控品冻干得到的。
10.一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，该冻干的质控品经复溶后得到的液体组合物由0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v%乳糖、5w/v%甘露醇、5w/v%牛血清白蛋白、0.2v/v% Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液组成。
11.一种冻干的cTnI/MYO/CK-MB复合质控品，其特征在于，该冻干的质控品经复溶后得到的液体组合物由30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v%乳糖、5w/v%甘露醇、5w/v%牛血清白蛋白、0.2v/v% Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液组成。
12.一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品的制备方法，其特征在于，包括将由0.3ng/mL的cTnI、70ng/mL的MYO、5ng/mL的CK-MB、8w/v%乳糖、5w/v%甘露醇、5w/v%牛血清白蛋白、0.2v/v% Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液组成的液体组合物冻干的步骤。
13.一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品的制备方法，其特征在于，包括将由30ng/mL的cTnI、200ng/mL的MYO、20ng/mL的CK-MB、8w/v%乳糖、5w/v%甘露醇、5w/v%牛血清白蛋白、0.2v/v% Proclin 300、50mmol/L且pH值为7.80～8.00的磷酸盐缓冲液组成的液体组合物冻干的步骤。
14.一种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1~11任一项所述的复合质控品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111561657.1A CN114324891B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111561657.1A CN114324891B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114324891A CN114324891A (zh) | 2022-04-12 |
| CN114324891B true CN114324891B (zh) | 2023-11-28 |
Family
ID=81052527
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111561657.1A Active CN114324891B (zh) | 2021-12-20 | 2021-12-20 | 一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114324891B (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101893639A (zh) * | 2010-02-11 | 2010-11-24 | 上海蓝怡科技有限公司 | 稳定质控血清α-羟丁酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性的方法 |
| CN107860930A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-03-30 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 一种心型脂肪酸结合蛋白的免疫比浊检测试剂和方法 |
| CN109298176A (zh) * | 2018-10-29 | 2019-02-01 | 深圳天深医疗器械有限公司 | 心肌类质控品及其制备方法、心肌类检测试剂盒及心肌类检测设备 |
| CN109916682A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-06-21 | 郑州标源生物科技有限公司 | 一种心肌标志物质控品的制备方法 |
| CN110031638A (zh) * | 2019-05-16 | 2019-07-19 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种心肌酶复合质控品 |
| CN110133282A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-08-16 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 炎症类标志物复合质控品及其制备方法与应用 |
| CN111579803A (zh) * | 2020-05-25 | 2020-08-25 | 北京康思润业生物技术有限公司 | 一种多项目炎症标志物质控品及其制备方法 |
| CN113655214A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-16 | 江苏质源生物科技有限公司 | 一种特殊生化复合质控品、制备方法、试剂盒 |
-
2021
- 2021-12-20 CN CN202111561657.1A patent/CN114324891B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101893639A (zh) * | 2010-02-11 | 2010-11-24 | 上海蓝怡科技有限公司 | 稳定质控血清α-羟丁酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性的方法 |
| CN107860930A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-03-30 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 一种心型脂肪酸结合蛋白的免疫比浊检测试剂和方法 |
| CN109298176A (zh) * | 2018-10-29 | 2019-02-01 | 深圳天深医疗器械有限公司 | 心肌类质控品及其制备方法、心肌类检测试剂盒及心肌类检测设备 |
| CN109916682A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-06-21 | 郑州标源生物科技有限公司 | 一种心肌标志物质控品的制备方法 |
| CN110133282A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-08-16 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 炎症类标志物复合质控品及其制备方法与应用 |
| CN110031638A (zh) * | 2019-05-16 | 2019-07-19 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种心肌酶复合质控品 |
| CN111579803A (zh) * | 2020-05-25 | 2020-08-25 | 北京康思润业生物技术有限公司 | 一种多项目炎症标志物质控品及其制备方法 |
| CN113655214A (zh) * | 2021-07-20 | 2021-11-16 | 江苏质源生物科技有限公司 | 一种特殊生化复合质控品、制备方法、试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114324891A (zh) | 2022-04-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11071770B2 (en) | Methods for detecting cardiac damage | |
| Sims et al. | Metabolic processes in Alzheimer's disease: adenine nucleotide content and production of 14CO2 from [U‐14C] glucose in vitro in human neocortex | |
| US4226713A (en) | Diagnostic agents | |
| US3235337A (en) | Diagnostic compositions and test indicators | |
| Klein et al. | A colorimetric assay for chemical heparin in plasma | |
| Ponnappa et al. | Chronic ethanol ingestion increases calcium uptake and resistance to molecular disordering by ethanol in liver microsomes. | |
| Czapek et al. | Platelet dysfunction in glycogen storage disease type I | |
| Roberts | Elevated plasma MB creatine phosphokinase activity: A specific marker for myocardial infarction in perioperative patients | |
| Stewart et al. | Postmortem diagnosis of myocardial disease by enzyme analysis of pericardial fluid | |
| Rao et al. | New manual and automated method for determining activity of creatine kinase isoenzyme MB, by use of dithiothreitol: Clinical applications | |
| US4414326A (en) | Diagnostic agents | |
| US2999052A (en) | Composition for colorimetric test for serum enzymes | |
| CN116410258A (zh) | 因子xi缺乏血浆保护剂及其应用 | |
| EP0188372B1 (en) | Analytical element, composition, kit and method for determination of theophylline by enzyme inhibition | |
| Libby et al. | Reduction of protein degradation and atrophy in cultured fetal mouse hearts by leupeptin. | |
| JPH11316228A (ja) | 組換え組織因子に基づく、即時使用可能なプロトロンビン時間試薬 | |
| Pollock | Intracellular pH of hepatocytes in primary monolayer culture | |
| CN114324891B (zh) | 一种cTnI/MYO/CK-MB复合质控品及其制备方法 | |
| Wildenthal et al. | Age-related alterations in cardiac lysosomes | |
| JPH0630633B2 (ja) | アレルギーの検出法並びに該方法に好適な試薬及び装置、及びアレルギー用薬及び抗炎症剤の測定法 | |
| Meites et al. | Modified glucose oxidase method for determination of glucose in whole blood | |
| US4237044A (en) | Antibodies against creatinekinase-M8 and process for the production thereof | |
| EP0351117B1 (en) | Stable human serum based control | |
| Meyer et al. | Rapid laboratory diagnostic of X-linked ichthyosis | |
| Dalal et al. | Laboratory evaluation of a chromogenic amylase method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |