CN114269781A - 双特异性融合蛋白与抗Her2抗体的组合用于肿瘤治疗 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了与Her2抑制剂组合的免疫检查点抑制剂在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，并且还提供了包含有效量的所述免疫检查点抑制剂和有效量的所述Her2抑制剂并且任选地包含药学可接受的赋形剂的药物组合物，以及该药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途。

Description

双特异性融合蛋白与抗Her2抗体的组合用于肿瘤治疗
发明背景
免疫***在抗Her2抗体的抗肿瘤作用(如抗Her2抗体的ADCC作用)中起重要作用，并且与T细胞功能相关。具有较高TIL水平的患者对抗Her2抗体有较好应答。反之，不能实现病理完全缓解(pCR)的患者具有升高的Treg水平，并且表现出免疫抑制。
动物实验也显示曲妥珠单抗能引起IFN-γ分泌增加，从而诱导PDL1表达。而且，该途径可能成为曲妥珠单抗耐药性的机理之一。
临床前实验已经证实，Her2靶点的治疗作用取决于身体的获得性免疫反应。因此，与肿瘤免疫相关靶点(如PD1/PDL1、CTLA4或4-1BB)组合能协同地增强药物的抗肿瘤作用。
发明内容
本公开提供了与Her2抑制剂组合的免疫检查点抑制剂在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，其中所述免疫检查点抑制剂能够特异性地结合PD-L1和CTLA4，并且还提供了包含有效量的所述免疫检查点抑制剂和有效量的所述Her2抑制剂并且任选地包含药学可接受的赋形剂的药物组合物，以及该药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途。
在一个方面，本公开提供了与Her2抑制剂组合的免疫检查点抑制剂在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，其中所述免疫检查点抑制剂能够特异性地结合PD-L1和CTLA4。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂为双特异性抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂为双特异性抗体，并且所述双特异性抗体为全人抗体。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂为抗原结合片段，并且所述抗原结合片段包括Fab、Fab’、F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2、scFv、di-scFv和/或dAb。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂为二聚体，并且所述二聚体由两条多肽链形成，所述两条多肽链中的每一条包含抗体Fc亚单位，其中所述二聚体包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)，所述ISVD中的至少一个特异于PD-L1，并且所述ISVD中的至少一个特异于CTLA4。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的至少一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的每一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者，所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；并且所述特异于CTLA4的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD的N末端融合；并且所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；并且所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
在一些实施方式中，对于所述两条多肽链中的一条或二者：所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于PD-L1的ISVD的N末端融合；并且所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
在一些实施方式中，所述抗体Fc亚单位来源于IgG Fc亚单位。
在一些实施方式中，所述IgG为人IgG1。
在一些实施方式中，所述抗体Fc亚单位包含如SEQ ID NO:35、38和39中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD还能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和R113，并且其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125，并且其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQID NO:2所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体为特异于PD-L1的ISVD。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
T在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD与参考抗CTLA4抗体交叉竞争结合CTLA4，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，参考抗CTLA4抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQID NO:16所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体为特异于CTLA4的ISVD。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述二聚体为均二聚体。
在一些实施方式中，所述连接子包含如SEQ ID NO:33-34中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
在一些实施方式中，所述二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂能够抑制人Her2。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂为Her2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
在一些实施方式中，Her2抗体选自由以下组成的组：帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和马格妥昔单抗。
在一些实施方式中，所述缀合物选自由以下组成的组：DS8201a和T-DM1。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂为双特异性抗体或其抗原结合部分，并且能够结合人Her2的不同表位。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂为双特异性抗体或其抗原结合部分，并且所述双特异性抗体或其抗原结合部分具有共同轻链，并且其中所述共同轻链是指具有相同序列的两条轻链。
在一些实施方式中，其重链能够在生理条件下或在体外蛋白质表达过程中分别与所述轻链正确地组装。
在一些实施方式中，共同轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
在一些实施方式中，共同轻链选自帕妥珠单抗的轻链，曲妥珠单抗的轻链，或其突变体。
在一些实施方式中，共同轻链的可变区的序列包含选自如SEQ ID NO:65至SEQ IDNO:70所示那些的序列。
在一些实施方式中，其重链可变区分别为帕妥珠单抗的重链可变区和曲妥珠单抗的重链可变区，例如，该重链可变区分别包如SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:88所示那些的序列。
在一些实施方式中，重链的Fc片段序列包含如SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90所示那些的序列。
在一些实施方式中，其两条重链分别包含如SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示那些的序列。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂以如下剂量施用：0.01mg/kg至100mg/kg。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂以如下剂量施用：20mg/kg至30mg/kg。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂以如下剂量施用：0.01mg/kg至100mg/kg。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂以如下剂量施用：3mg/kg至5mg/kg。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂以如下给药频率施用：每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂每两周一次或每三周一次施用，或者以负荷剂量施用。
在一些实施方式中，以如下给药频率施用：每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂每两周一次或每三周一次施用。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。
在一些实施方式中，所述Her2抑制剂通过静脉内施用来施用。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。
在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂通过静脉内施用来施用.
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由以下组成的组：实体肿瘤和血液肿瘤。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由以下组成的组：NSCLC、乳腺癌、胃癌、胃食管结合部腺癌、食管腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胆管癌、结直肠癌和尿路上皮癌。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由以下组成的组：Her2异常的实体肿瘤和Her2阳性的癌症。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过抗Her2抗体和/或抗PD1剂。在一些实施方式中，所述抗Her2抗体包含曲妥珠单抗。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过化疗。
在一些实施方式中，所述化疗包含一线化疗和/或二线化疗。在一些实施方式中，所述二线化疗包括紫杉醇加雷莫芦单抗、紫杉醇、多西他赛和/或伊立替康单药治疗。
在另一方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含有效量的本公开的所述免疫检查点抑制剂和有效量的所述Her2抑制剂，并且任选地包含药学可接受的赋形剂。
在另一方面，本公开提供了该药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途。
在一些实施方式中，所述药物组合物以如下给药频率施用：每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次。
在一些实施方式中，所述药物组合物以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。
在一些实施方式中，所述药物组合物以如下剂量施用：0.01mg/kg至100mg/kg。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由以下组成的组：实体肿瘤和血液肿瘤。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由以下组成的组：NSCLC、乳腺癌、胃癌、胃食管结合部腺癌、食管腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胆管癌、结直肠癌和尿路上皮癌。
在一些实施方式中，所述肿瘤选自由以下组成的组：Her2异常的实体肿瘤和Her2阳性的癌症。
在一些实施方式中，已对患有所述肿瘤的受试者施用过抗Her2抗体和/或抗PD1剂。在一些实施方式中，所述抗Her2抗体包含曲妥珠单抗。
在一些实施方式中，已对所述受试者施用过化疗。
在一些实施方式中，所述化疗包含一线化疗和/或二线化疗。在一些实施方式中，所述二线化疗包括紫杉醇加雷莫芦单抗、紫杉醇、多西他赛和/或伊立替康单药治疗。
通过以下详细描述，本公开的其他方面和优点对于本领域技术人员来说将容易变得显而易见，其中仅示出和描述了本公开的示例性实施方式。如将要实现的，本公开能够实现其他和不同的实施方式，并且其若干细节能够在各种明显方面进行修改，所有这些都不脱离本公开。因此，附图和描述应被视为说明性的，而不是限制性的。
通过引用并入
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度与每个单独的出版物、专利或专利申请通过引用被具体和单独地指示为并入的程度相同。
附图简单说明
本发明的新特征在所附权利要求书中具体阐述。通过参考阐述采用发明原理的示例性实施方式的以下详细描述和附图(以及本文中的“图”(“figure”和“FIG.”)，将获得对本发明的特征和优点的更好理解，其中：
图1说明了本公开的二聚体的示例。
图2说明了杂二聚体蛋白融合的示意性框图。图片a说明了杂二聚体Fc融合技术，图片b说明了“Fab”技术。
具体实施方式
对本领域技术人员来说显而易见的是，此类实施方式仅通过示例的方式提供。在不背离发明的情况下，本领域技术人员可做出许多变化、改变和替换。应理解，可采用本文描述的发明实施方式的各种替代方案。
如本文所用的，术语“抗体”通常是指免疫球蛋白或者其片段或衍生物，并且涵盖任何包含抗原结合部位的多肽，无论其是在体外还是在体内产生的。该术语包括但不限于多克隆、单克隆、单特异性、多特异性、非特异性、人源化、单链、嵌合、合成、重组、杂交、突变和移植抗体。除非被术语“完整”所修饰，如在“完整抗体”中那样，否则对本公开而言，术语“抗体”也包括抗体片段，如Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、Fd、dAb和其他保留抗原结合功能(即，特异性地结合例如CTLA-4或PD-Ll的能力)的抗体片段。通常，此类片段将包含抗原结合结构域。
如本文所用的，术语抗体的“可变区”或“可变结构域”通常是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常为可变性最大的抗体部分(相对于同类的其他抗体)，并且包含抗原结合部位。
如本文所用的，术语“可变”通常是指以下事实：可变结构域的某些链段在抗体之间有很大的序列差别。V结构域介导抗原结合并且定义特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性在可变结构域的整个跨度上并不是均匀分布的。相反，在轻链和重链可变结构域二者中，其均集中在被称为高变区(CDR或HVR)的三个链段中。可变结构域的更高度保守的部分被称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，主要采用β片层构造，由三个CDR连接，这三个CDR形成连接β片层结构的环，并且在某些情形下形成β片层结构的一部分。每条链中的CDR通过FR区紧密保持在一起，并且与来自其他链的CDR一起有利于形成抗体的抗原结合部位(参见Kabat等人，Sequences of Immunological Interest，Fifth Edition，National Institute of Health，Bethesda，Md.(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但是显示出各种效应功能，如抗体对抗体依赖性细胞毒性的参与。
如本文所用的，术语“CDR”、“HVR”或“HV”通常是指在序列上高度可变和/或形成结构定义的环的抗体可变结构域区域。通常，抗体包含六个CDR；三个在VH中(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，三个在VL中(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。本公开的ISVD可仅包含3个CDR(例如，在VH中，HCDR1、HCDR2和HCDR3)。在天然抗体中，HCDR3和LCDR3在六个CDR中显示出最大的多样性，尤其是HCDR3被认为在赋予抗体良好特异性方面起到独特的作用。参见，例如，Xu等人，Immunity 13:37-45(2000)；Johnson and Wu，in Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo，ed.，Human Press，Totowa，N.J.，2003)。相反，仅由重链组成的天然骆驼抗体在缺失轻链的情况下是有功能和稳定的。参见，例如，Hamers-Casterman等人，Nature 363:446-448(1993)；Sheriff等人，Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。
许多CDR描绘正在使用并且涵盖在本文中。Kabat互补决定区(CDR)是基于序列可变性，并且是最常用的(Kabat等人，序列of Proteins of Immunological Interest，5thEd.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991))。Chothia则参考结构环的位置(Chothia and Lesk，J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbMCDR代表了Kabat HVR和Chothia结构环之间的折衷，并且由牛津分子AbM抗体建模软件使用。
“contact”CDR是基于对现有复杂晶体结构的分析。这些CDR中每个的残基在表1中标出:
表1
Figure BDA0003445728380000121
CDR可包含如下的“扩展CDR(extended CDR)”：VL中的24-36或24-34(LCDR1)、46-56或50-56(LCDR2)和89-97或89-96(LCDR3)，以及VH中的26-35(HCDR1)、50-65或49-65(HCDR2)和93-102、94-102或95-102(HCDR3)。可变结构域残基根据上述Kabat等人的定义进行编号。
表达方式“如Kabat中的可变结构域残基编号”或“如Kabat中的氨基酸位置编号”及其变体通常是指前文所述的Kabat等人的用于二聚体/多肽链编辑的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号***。对于给定的多肽，残基的Kabat编号可通过在多肽序列与“标准”Kabat编号序列的同源区域进行比对来确定。
“框架”或“FR”残基是与本文中定义的CDR残基不同的那些可变结构域残基。“人共有框架”或“受体人框架(受体人框架)”是代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选择中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如以下文献中的亚组：Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，5th Ed.Public Health Service，National Institutes ofHealth，Bethesda，Md.(1991)。例如，对于VL，亚组可为如前文所述的Kabat等人的亚组κI、κII、κIII或κIV。另外地，对于VH，亚组可为如前文所述的Kabat等人的亚组I、亚组II或亚组III。可替代地，人共有框架可来源于上面那些，其中特定残基，例如当通过将供体框架序列与各种人框架序列的集合进行比对而基于人框架残基与供体框架的同源性来选择人框架残基时。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含其相同的氨基酸序列，或者其可包含先前存在的氨基酸序列变化。在一些实施方式中，先前存在的氨基酸变化的数量为10个或更少、9个或更少、8个或更少、7个或更少、6个或更少、5个或更少、4个或更少、3个或更少或2个或更少。
如本文所用的，术语“同源性”、“同源”或“序列同一性”通常是指两个或更多个多核苷酸序列之间或者两个或更多条多肽序列之间的序列相似性或可互换性。当使用程序(例如Emboss Needle或BestFit)确定两个不同氨基酸序列的序列同一性、相似性或同源性时，可使用默认设置，或者可选择合适的打分矩阵(如blosum45或blosum80)以优化同一性、相似性或同源性分数。在一些实施方式中，同源的多核苷酸是在严格条件下杂交的那些，并且与参考序列具有至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、甚至100％的序列同一性。当对具有可比较长度的序列进行最佳比对时，同源的多肽可彼此具有至少80％或至少90％或至少95％或至少97％或至少98％或至少99％的序列同一性。
如在本文所识别的多肽序列的上下文中所使用的，术语“百分比(％)序列同一性”通常是指，在比对序列并且在必要情况下引入间隙以实现最大百分比序列同一性并且不考虑任何保守性替换作为序列同一性的一部分之后，查询序列中与第二参考多肽序列或其一部分的氨基酸残基或核苷酸相同的氨基酸残基或核苷酸的百分比。为确定氨基酸/核苷酸序列同一性百分比进行的比对可通过本领域技术范围内的各种途径实现，例如，使用公众可得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN、NEEDLE或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员能够确定用于测量比对的合适参数，包括在所比对的序列的全长上实现最大比对所需的任何算法。同一性百分比可在整个的定义的多肽/多核苷酸序列的长度上测量，或者可在较短的长度上(例如在取自较大的、定义的多肽/多核苷酸序列的片段的长度上)测量。应理解，表格、附图或序列表中的本文所示序列所支持的任何片段长度可用于描述可在其上测量同一性百分数的长度。
在本申请中，术语“双特异性抗体”是指能分别与两种抗原或抗原表位结合额抗体，包括能够特异性地结合第一抗原或抗原表位的抗体的轻链和重链，以及能够特异性地结合第二抗原或抗原表位的抗体的轻链和重链。在一个实施方式中，在双特异性抗体中能够特异性地结合第一抗原或抗原表位的抗体轻链和能够特异性地结合第二抗原或抗原表位的抗体轻链具有相同的序列。在一个实施方式中，在双特异性抗体中，能够特异性地结合第一抗原或抗原表位的抗体重链和能够特异性地结合第二抗原或抗原表位的抗体重链具有不同的序列。
如本文所用的，术语“PD-L1”通常是指程序性死亡配体1蛋白、其功能变体和/或其功能片段。PD-L1也被称为分化簇274(CD274)或B7同源物1(B7-H1)，是一种由CD274基因编码的蛋白质(在人类中)。PD-L1结合其受体，程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)，该蛋白在活化T细胞、B细胞和巨噬细胞中表达(Ishida等人，1992EMBO J，11:3887-3395；Okazaki等人，Autoimmune dilated cardiomyopathy in PD-1receptor-deficient mice.Science，2001；291：319-22)。PD-L1和PD-1的复合通过抑制T细胞增殖以及IL-2和IFN-γ的细胞因子产生来发挥免疫抑制作用(Freeman等人，Engagement of PD-1immunoinhibitoryreceptor by a novel B7 family member leads to negative regulation oflymphocyte activation，J.Exp.Med.2000，192:1027-1034；Carter等人，PD-1：PD-Linhibitory pathway affects both CD4(+)and CD8(+)T cells and is overcome byIL-2.Eur.J.Immunol.2002，32:634–643)。例如，术语“PD-L1”可包括与NCBI登录号Q9NZQ7具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合PD1的多肽或其片段。术语PD-L1包括整个PD-L1配体、可溶性PD-L1配体和包含共价连接到例如蛋白质结构域的第二部分的PD-L1配体的功能活性部分的融合蛋白。PD-L1的定义中还包含的是氨基酸序列相对于天然PD-L1发生变化但保留了特异性地结合受体PD1的能力的变体。PD-L1的定义中进一步包括的是增强PD1的生物活性的变体。PD-L1序列是本领域中已知的，并且以例如GenBank登录号29126提供。如本文所用的，术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1)，hPD-L1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“PD-L1”还包括来自其他物种的PD-L1，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔子、非人灵长类动物、猪或牛。完整hPD-L1序列可在GenBank登录号29126下找到。
如本文所用的，术语“人PD-L1的N-末端IgV结构域”通常是指人PD-L1中位于其N-末端的细胞外结构域。术语“人PD-L1的N-末端IgV结构域”也可指所述结构域内的表位。人PD-L1蛋白(包括信号肽)的N-末端IgV结构域可包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
如本文所用的，术语“CTLA4”通常是指细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4、其功能变体和/或其功能片段。CTLA4是属于CD28家族的免疫抑制受体。CTLA4在体内仅在T细胞(CD4+和CD8+细胞)上表达，并且结合两种配体CD80和CD86(分别称为B7-1和B7-2)结合。例如，术语“CTLA4”可包括与NCBI登录号AAL07473.1具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合CD80和/或CD86的多肽或其片段。术语“CTLA4”包括整个CTLA4受体、其细胞外结构域和包含共价连接到例如蛋白质结构域的第二部分的CTLA4的功能活性部分的融合蛋白。CTLA4的定义中还包含的是氨基酸序列相对于天然CTLA4发生变化但保留了特异性地结合配体CD80和/或CD86的能力的变体。CTLA4序列是本领域中已知的，并且以例如GenBank登录号1493提供。如本文所用的，术语“CTLA4”包括人CTLA4(hCTLA4)，hCTLA4的变体、同种型和物种同源物，以及与hCTLA4具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“CTLA4”还包括来自其他物种的CTLA4，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔子、非人灵长类动物、猪或牛。完整hCTLA4序列可在GenBank登录号1493下找到。
如本文所用的，术语“抗体Fc亚单位”通常是指抗体Fc结构域的组成部分。例如，抗体Fc结构域可由两个或更多个成员形成，每个成员可视为一个Fc亚单位。如本文所用的，术语“Fc结构域”通常是指抗体重链的Fc部分或Fc片段。例如，其可指免疫球蛋白重链恒定区的羧基末端部分或者其能够结合Fc受体的类似物或部分。如所知的，每个免疫球蛋白重链恒定区包含四个或五个结构域。这些结构域通常依次命名：CH1-铰链-CH2-CH3(-CH4)。CH4存在于IgM中，其没有铰链区。可用于本公开中的Fc结构域或Fc亚单位可包含CH3结构域。例如，Fc结构域或Fc亚单位可包含CH2结构域和CH3结构域。在一些实施方式中，Fc结构域或Fc亚单位还可包含免疫球蛋白铰链区。例如，Fc结构域或Fc亚单位从N末端到C末端可包含CH2结构域和CH3结构域或由CH2结构域和CH3结构域组成。在另一个示例中，Fc结构域或Fc亚单位从N末端到C末端可包含免疫球蛋白铰链区、CH2结构域和CH3结构域或由免疫球蛋白铰链区、CH2结构域和CH3结构域组成。Fc结构域或Fc亚单位内的氨基酸残基位置可根据以下确定：Kabat，E.A.等人，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，5thed.，NIH Publication No.91-3242。
如本文所用的，术语“Fc结构域”通常是指免疫球蛋白重链的C-末端区域，包括天然序列Fc区域和变体Fc区域。尽管免疫球蛋白重链的Fc区域的边界可能发生变化，但人IgG重链Fc区域通常被定义为从位置Cys226处的氨基酸残基或者从Pro239延伸到羧基末端。Fc区域的C-末端赖氨酸(根据EU编号***为残基447)可被去除，例如，在抗体的生产或纯化过程中，或者通过对编码抗体重链的核酸进行重组工程化。因此，完整抗体的组成可包括所有去除了K447残基的抗体群、未去除K447残基的抗体群和带有或不带有K447残基的抗体的混合物的抗体群。适合用于本发明抗体中的天然序列Fc区域包括人IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3和IgG4。
除非本文另有说明，否则免疫球蛋白链中残基的编号为如以下中所述的EU指数编号：Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，5th Ed.PublicHealth Service，National Institutes of Health，Bethesda，Md.(1991)。“如Kabat的EU指数”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。
如本文所用的，术语“二聚体”通常是指由两个、通常非共价结合的单体单元形成的大分子复合物。每个单体单元均可为大分子，如多肽链或多核苷酸。如本文所用的，术语“均二聚体”通常是指由两个基本相同的单体(如两个基本相同的多肽链)组成或形成的二聚体。在一些情形下，均二聚体的两个单体可在一个或多个区域或位置处有所不同，但是此类差别不会导致单体功能或结构的显著改变。例如，在本公开中考虑的生物学特性的上下文中，本领域普通技术人员将会认为两个单体之间的差别几乎没有或没有生物学和/或统计学显著性。所述两个单体之间的结构/组成差别可例如小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％、小于约10％、小于约5％或更少。
如本文所用的，术语“融合的”或“融合”通常是指两条多肽之间的共价连接。多肽通常经由肽键而直接彼此接合或经由氨基酸连接子接合。任选地，肽可经由本领域技术人员已知的非肽共价连接来接合。
如本文所用的，术语“融合蛋白”通常是指如下的多肽：其包含直接或间接地(例如，经由连接子)与异源多肽(即，与后一多肽或其结构域无关的多肽)的氨基酸序列融合的多肽的氨基酸序列，或者可替代地，其由直接或间接地(例如，经由连接子)与异源多肽(即，与后一多肽或其结构域无关的多肽)的氨基酸序列融合的多肽的氨基酸序列组成。
本文使用的术语“免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)”通常分别指抗原结合结构域或片段，如VHH结构域或VH或VL结构域。术语抗原结合分子或抗原结合蛋白可互换使用，并且还包括术语纳米抗体。免疫球蛋白单一可变结构域进一步可为轻链可变结构域序列(例如，VL序列)，或者重链可变结构域序列(例如，VH序列)；更具体地，它们可为来源于常规四链抗体的重链可变结构域序列或者来源于重链抗体的重链可变结构域序列。因此，免疫球蛋白单一可变结构域可为结构域抗体或者适合用作结构域抗体的免疫球蛋白序列，单一结构域抗体或适合用作单一结构域抗体的免疫球蛋白序列，“dAb”或适合用作dAb的免疫球蛋白序列或纳米抗体，包括但不限于VHH序列。免疫球蛋白单一可变结构域包括全人的、人源化的、其他序列优化的嵌合的免疫球蛋白序列。免疫球蛋白单一可变结构域和免疫球蛋白单一可变结构域的结构可被认为——然而并不限于此——是由四个框架区或“FR”构成，它们在本领域和本文中分别被称为“框架区1”或“FR1”；“框架区2”或“FR2”；“框架区3”或“FR3”；以及“框架区4”或“FR4”，这些框架区由三个互补决定区或“CDR”中断，它们在本领域中分别被称为“互补决定区1”或“CDR1”；“互补决定区2”或“CDR2”；和“互补决定区3”或“CDR3”。
如本文所用的，术语“人源化”通常是指其中非人抗体的CDR结构域之外的一些、大部分或全部氨基酸被替换为来源于人免疫球蛋白的相应氨基酸的抗体或其片段。例如，在抗体的人源化形式中，CDR结构域之外的一些、大部分或全部氨基酸已被替换为来自人免疫球蛋白的氨基酸，但一个或多个CDR区域内的一些、大多数或全部氨基酸不变。氨基酸的少量添加、缺失、***、替换或修饰是允许的，只要它们不会废除抗体与其特异性抗原/表位结合的能力即可。人源化抗体可保留与原始抗体相似的抗原特异性。
如本文所用的，术语“表位”或“抗原决定簇”通常是指抗原上与抗体结合的位点。表位可由连续氨基酸形成(线性表位)或通过蛋白的三次折叠并列的非连续氨基酸形成(构象表位)。由连续氨基酸形成的表位在暴露于变性溶剂时通常得以保持，但通过三次折叠形成的表位在用变性溶剂处理时通常会丧失。表位通常包括具有独特空间构象的至少3个、更通常为至少5个或8-10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括，例如，x-射线晶体学和2维核磁共振。参见，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in MolecularBiology，第66卷，Glenn E.Morris编(1996)。
如本文所用的，术语“构象表位”通常是指通过蛋白质的三次折叠并列的抗原(如PD-L1抗原)的非连续的氨基酸残基。当多肽链折叠形成天然蛋白质时，这些非连续的氨基酸残基可在表面上集合在一起。构象表位包括但不限于功能性表位。
在本申请中，20个常规氨基酸及其简写符合常规规则。可参考Immunology-ASynthesis(Edition II，E.S.Golub和D.R.Gren编，Sinauer Associates，Sunderland，Mass.(1991))，其通过引用并入本文。
如本文所用的，术语“功能性表位”通常是指积极地有利于抗体结合(即，形成“活性表位”)的氨基酸残基。使抗原的任何一个积极有利的残基突变为丙氨酸将会破坏抗体的结合，从而使抗体的相对KD比率(KD突变体/KD野生型)可能例如大于2倍，如大于3倍、大于4倍、大于6倍、大于10倍、大于20倍、大于30倍、大于40倍、大于50倍、大于60倍、大于70倍、大于80倍、大于90倍、大于100倍、大于150倍、大于200倍或更多倍。
如本文所用的，术语“细胞外结构域”通常是指从细胞器和/或细胞的外膜突出的蛋白(例如，膜蛋白，如受体)的一部分。如果多肽链多次跨越双分子层，则细胞外结构域包含通过膜盘绕的环。细胞外结构域可识别和应答于特异性配体。
如本文所用的，术语“连接子”通常是指连接或链接两条多肽序列、例如连接两条多肽结构域的合成氨基酸序列。连接子可经由肽键连接两个氨基酸序列。在一些实施方式中，本公开的连接子以线性序列将生物学活性部分连接到第二部分。例如，肽连接子可为非免疫原性和柔性的，如包含丝氨酸和甘氨酸序列或者Ala-Ala-Ala重复序列的那些。取决于二聚体的特定构建体，肽连接子可包含，例如，3-30个(如至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个、至少26个、至少27个、至少28个、至少29个、至少30个)氨基酸残基。
术语“N末端(N-terminal)”可与“N-末端(N-terminus)”互换使用，并且如本文所用的，它们通常是指多肽链的氨基末端/终端。
术语“C末端(C-terminal)”可与“C-末端(C-terminus)”互换使用，并且如本文所用的，它们通常是指多肽链的羧基末端/终端。
如本文所用的，术语“约”通常是指在本领域通常容忍的范围内变化，并且通常表示在±10％以内，如在所述值的±9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％以内。除非上下文另有明确说明，本文提供的所有数值范围均被术语约修饰。
如本文所用的，术语“共同施用(co-administration、co-administered或co-administering)”通常是指一种活性成分(例如二聚体)与另一种活性成分(例如免疫检查点抑制剂)一起施用。一种活性成分的施用可作为单一制剂或作为两种单独的制剂(例如，一种是二聚体，一种是免疫检查点抑制剂)。共同施用可为同时或以任何顺序依次进行的。
如本文所用的，术语“特异性地结合”或“特异于……”通常是指可测量和可再现的相互作用，如靶点和抗体之间的相互作用，其在异质分子群(包括生物分子)的存在下确定靶点的存在。例如，特异性地结合靶点(其可为表位)的抗体是与结合其他靶点相比以较大亲和力、亲和性、更容易和/或以更长时间结合该靶点的抗体。在一个实施方式中，抗体与不相关抗体的结合程度小于抗体与所测量(例如通过放射免疫测定法(RIA)测量)的靶点的结合程度的约10％。在某些实施方式中，特异性地结合靶点的抗体具有<1×10-6M、<1×10-7M、<1×10-8M、<1×10-9M或<1×10-10M的解离常数(KD)。在某些实施方式中，抗体特异性地结合蛋白上的表位，该表位在来自不同物种的蛋白之间保守。在另一实施方式中，特异性结合可包括但并非必须专一结合。
基本的4-链抗体单元是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元和额外的被称为J链的多肽组成，并且包含10个抗原结合位点，而IgA抗体由2-5个基本的4链单元组成，这些单元可聚合形成与J链结合的多价集合物(assemblages)。在IgG的情况下，4-链单元通常为约150,000道尔顿。每条L链通过一个共价二硫键连接到H链，而取决于H链同种型，两条H链通过一个或多个二硫键彼此连接。每条H和L链还具有规矩间隔的链内二硫键桥。每条H链在N-末端具有可变结构域(VH)，对于α和γ链中的每一条来说，后面是三个恒定结构域(CH)，对于μ和ε同种型来说，后面是四个CH结构域。每条L链在N-末端具有可变结构域(VL)，在其末端是恒定结构域。VL与VH对齐，并且CL与重链的第一恒定结构域(CH1)对齐。特定氨基酸残基被认为在轻链和重链可变结构域之间形成接口(interface)。VH和VL的配对共同形成单一抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和性质，参见例如以下文献：Basic and Clinical Immunology，8thEdition，Daniel P.Sties，Abba I.Terr and Tristram G.Parsolw(eds)，Appleton&Lange，Norwalk，Conn.，1994，page 71and Chapter 6。根据恒定结构域的氨基酸序列，可将任何脊椎动物物种的L链分为两种明显不同的类型(称为κ和λ)中的一个。取决于重链的恒定结构域(CH)的氨基酸序列，可将免疫球蛋白分为不同的类别或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有名为α、δ、ε、γ和μ的重链。基于CH序列和功能中的相对小的差异，γ和α类进一步分为子类，例如，人类表达以下子类：IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1和IgK1。
在本申请中，术语抗体的“抗原结合部分”是指全长抗体的一个或多个部分，抗原结合部分保持与抗原(如Her2)(该抗原与抗体所结合的抗原相同)结合的能力，并且与全长抗体竞争特异性结合抗原。一般参考Fundamental Immunology，Ch.7(Paul，W.，ed.，edition II，Raven Press，N.Y.(1989)，其通过引用整体并入本文用于所有目的。抗原结合部分可使用重组DNA技术或通过全长抗体的酶法或化学法破坏来制备。在一些情形下，抗原结合部分包含多肽，如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(如scFv)、嵌合抗体和双链抗体，其至少包括充分赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体部分。抗体的抗原结合部分(如以上抗体片段)可由指定抗体(如单克隆抗体2E12)使用本领域技术人员已知的常规技术(如重组DNA技术或酶法或化学法破坏过程)来获得，并且在与筛选全长抗体相同的过程中对其特异性进行筛选。
如本文所用的，术语“多肽链”通常是指包含两个或更多个共价连接的肽的大分子。多肽链内的肽可经由肽键彼此连接。每条多肽链可包含一个N-末端或氨基末端和一个C-末端或羧基末端。
如本文所用的术语“CD80”通常是指CD28/CTLA4的配体(也称为B7.1)、其功能变体和/或其功能片段。CD80通常在专业的抗原呈递细胞(APC)表面上表达。例如，术语“CD80”可包含与NCBI登录号P33681具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合CTLA4的多肽或其片段。CD80的定义中还包含氨基酸序列与天然CD80不同但保持了特异性结合CTLA4的能力的变体。CD80的定义中还包含增强CTLA4的生物学活性的变体。CD80序列在本领域是已知的，并且，例如，以GenBank登录号P33681提供。如本文所用的，术语“CD80”包括人CD80(hCD80)，hCD80的变体、同种型和物种同源物，以及与hCD80具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“CD80”还包括来自其他物种的CD80，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔子、非人灵长类动物、猪或牛。完整hCD80序列可在GenBank登录号P33681下找到。
如本文所用的术语“CD86”通常是指CD28/CTLA4的配体(也称为B7.2)、其功能变体和/或其功能片段。CD86通常在专业的抗原呈递细胞(APC)表面上表达。例如，术语“CD86”可包括与NCBI登录号P42081具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合CTLA4的多肽或其片段。CD86的定义中还包含氨基酸序列与天然CD86不同但保持了特异性结合CTLA4的能力的变体。CD86的定义中还包含增强CTLA4的生物学活性的变体。CD86序列在本领域是已知的，并且，例如，以GenBank登录号U04343提供。如本文所用的，术语“CD86”包括人CD86(hCD86)，hCD86的变体、同种型和物种同源物，以及与hCD86具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“CD86”还包括来自其他物种的CD86，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔子、非人灵长类动物、猪或牛。完整hCD86序列可在GenBank登录号U04343下找到。
如本文所用的术语“PD1”通常是指编程性死亡-1受体(也称为CD279)、其功能变体和/或其功能片段。Pd1通常在T细胞、B细胞、自然杀伤T细胞、活化单核细胞和树突细胞(DC)上表达。PD1可结合其配体PD-L1和PD-L2。例如，术语“PD1”可包含与NCBI登录号P42081具有至少约85％氨基酸序列同一性并且特异性地结合PD-L1的多肽或其片段。PD1的定义中还包含氨基酸序列与天然PD1不同但保持了特异性结合PD-L1的能力的变体。PD1的定义中还包含增强PD-L1的生物学活性的变体。PD1序列在本领域是已知的，并且，例如，以GenBank登录号Q15116.3提供。如本文所用的，术语“PD1”包括人PD1(hPD1)，hPD1的变体、同种型和物种同源物，以及与hPD1具有至少一个共同表位的类似物。例如，术语“PD1”还包括来自其他物种的PD1，如其他哺乳动物，例如，大鼠、小鼠、兔子、非人灵长类动物、猪或牛。完整hPD1序列可在GenBank登录号Q15116.3下找到。
如本文所用的术语“阻断”通常是指抑制或降低分子及其特异性结合伴侣之间(如配体及其特异性受体之间)的结合能力。
术语“阻断抗体”和“拮抗抗体”在本文中可互换使用，并且通常是指抑制或降低其所结合的抗原的生物学活性的抗体。在一些实施方式中，阻断抗体或拮抗抗体基本上或完全抑制抗原的生物学活性。本公开的PD-L1特异性ISVD或CTLA4特异性ISVD可为阻断或拮抗性ISVD。例如，本公开的PD-L1特异性ISVD可阻断PD-L1与其受体PD-1之间的相互作用，从而阻断通过PD-1的信号传递，进而使T细胞从功能障碍状态恢复对抗原刺激的功能性应答。本公开的CTLA4特异性ISVD可阻断CTLA4和CD80/CD86之间的相互租用，从而阻断通过CTLA4的信号传递，进而使T细胞从功能障碍状态恢复对抗原刺激的功能性应答。
术语“交叉竞争结合(cross-competes for binding”、“交叉竞争(cross-competition)”、“交叉阻断(cross-block、cross-blocked和cross-blocking)”在本文中可互换使用，并且通常是指抗体或其片段通过本发明的另一抗体(例如，本公开的PD-L1特异性ISVD或CTLA4特异性ISVD)对靶点/抗原(例如，分别为PD-L1或CTLA4)的变构调节来直接或间接干扰结合的能力。可使用竞争结合分析来确定抗体或其片段能够干扰另一抗体与靶点结合的程度，以及因此确定根据本发明是否可称之为交叉阻断或交叉竞争。一种特别合适的定量交叉竞争试验使用基于FACS或基于AlphaScreen的方法来测量标记(例如His标签、生物素化或放射性标记)的抗体或其片段与另一种抗体或其片段之间的其与靶的结合方面的竞争。一般而言，交叉竞争抗体或其片段是例如以下的抗体或其片段：其将会在交叉竞争测定中结合靶点，使得在测定过程中以及在第二抗体或其片段存在下，根据本发明的免疫球蛋白单一可变结构域或多肽的记录位移高达待测抗体的最大理论位移的100％(例如，在基于FACS的竞争测定中)(例如，通过需要被交叉阻断的冷(例如，未标记的)抗体或其片段的位移)，该待测抗体可能会交叉阻断以指定量存在的抗体或其片段。优选地，交叉竞争抗体或其片段具有10％至100％之间、如50％至100％之间的记录位移。
如本文所用的，术语“显著减少”或“显著不同”通常是指在两个数值(通常一个与分子相关并且另一个与参考/对比分子相关)之间存在显著高度的差异，使得本领域技术人员将认为在通过所述值(例如，KD值)测量的生物学特性的背景下，这两个值之间的差异具有统计学显著性。所述两个值之间的差异为，例如，大于约10％、大于约20％、大于约30％、大于约40％和/或大于约50％，其是参考/对比分子的值的函数。
如本文所用的，术语“显著相似”或“显著相同”通常是指在两个数值(例如，一个与本公开的分子相关并且另一个与参考/对比分子相关)之间的显著高度的相似性，使得本领域技术人员将认为在通过所述值{例如，KD值}测量的生物学特性的背景下，这两个值之间的差异几乎不具有或没有生物学和/或统计学显著性。所述两个值之间的差异为，例如，小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％和/或少于约10％，其是参考/对比值的函数。
在本公开中，在特定SEQ ID NO.所示的氨基酸序列或核苷酸序列也包含具有与其基本相同的功能/性质的其同源物或变体。例如，与其具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更高的序列同一性的序列；和/或具有一个或多个(例如，数个，如1-10个、1-9个、1-8个、1-7个、1-6个、1-5个、1-4个、1-3个、1-2个)氨基酸或核苷酸添加、缺失或置换的序列。
如本文所用的，术语“肿瘤”通常是指任何临床可测量程度的肿瘤生长或转移。肿瘤可为实体肿瘤、血液肿瘤或淋巴瘤。例如，肿瘤可选自肺癌(如小细胞肺癌)、乳腺癌(如三阴性乳腺癌)、肾癌(如肾细胞癌)、黑素瘤、***、子宫癌、胰腺癌、腹膜癌、卵巢癌、胃癌、胃食管结合部腺癌、食管腺癌、胆道癌、尿路上皮癌和结肠癌。肿瘤可为晚期肿瘤或转移肿瘤。
如本文所用的，术语“受试者”通常是指人或非人动物，包括但不限于，猫、狗、马、猪、牛、绵羊、山羊、兔子、小鼠、大鼠或猴子。
如本文所用的，术语"治疗"通常是指在生物体中具有治疗效果并且至少部分改善或消除异常状况。术语"治疗"是指相对于不接受药物的对照组，在对其施用药物的患者组中改善了医学状况的症状。可通过以下方式监控治疗作用：测量细胞表型的变化或无变化、细胞增殖的变化或无变化、肿瘤大小的变化或无变化、肿瘤大小的变化或无变化、进行性疾病的变化或无变化、稳定疾病的变化或无变化、疾病控制率的变化或无变化、部分应答的变化或无变化。术语“治疗(treating或treatment)”并非必然表示彻底治愈。疾病的任何不理想症状的任何程度的任何减轻或者疾病进展的延缓可被视为治疗。此外，治疗可能会包括可能会使患者的整体幸福感或外表变差的行为。
如本文所用的，术语"药学可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、表面活性剂、抗氧剂、防腐剂(例如，抗细菌剂、抗真菌剂)、等渗剂、延迟吸收剂、盐、防腐剂、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩解剂、润滑剂、增甜剂、增香剂、染料等及其组合，如本领域技术人员所知(参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，18th Ed.MackPrinting Company，1990，pp.1289-1329)。除非任何常规载体与活性成分不相容，否则可设想其在治疗组合物或药物组合物中的用途。
术语本公开化合物的“有效量”通常是指将会消除受试者的生物学应答或医学应答(例如，减少或抑制酶或蛋白质活性或者改善症状、减轻状况、减缓或延迟疾病进展或预防疾病等)的本发明化合物的量。
如本文所用的，术语“抗原结合片段”通常是指抗体分子的一部分，其包含负责抗体与抗原中的特异性结合的氨基酸。抗体特异性识别和结合的抗原部分被称为“表位”，如本文中上面所述。如上所述，抗原结合结构域通常可包含抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)；然而，其并非必须包含二者。Fd片段，例如，具有两个VH区域，并且通常保留一些完整抗原结合结构域的抗原结合功能。抗体的抗原结合片段的示例包括：(1)Fab片段，一种具有VL、VH、恒定轻链(CL)和CH1结构域的一价片段；(2)F(ab′)2片段，一种具有通过二硫键桥在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段；(3)具有两个VH和CH1结构域的Fd片段；(4)具有抗体的单个臂的VL和VH结构域的Fv片段，(5)dAb片段(Ward等人，“BindingActivities of a Repertoire of Single Immunoglobulin Variable Domains SecretedFrom Escherichia coli，”Nature 341:544-546(1989)，其通过引用在此并入)，其具有VH结构域；(6)分离的互补决定区(CDR)，和(7)例如来源于scFV-文库的单链Fv(scFv)。尽管Fv片段的两个结构域VL和VH均通过单独的基因编码，但可使用重组法通过能够使它们制备为单一蛋白链的合成连接子接合，其中VL和VH区域配对形成一价分子(称为单链Fv(scFv)(参见例如，Huston等人，“Protein Engineering of Antibody Binding Site：Recovery ofSpecific Activity in an Anti-Digoxin Single-Chain Fv Analogue Produced inEscherichia coli，”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)，其通过引用整体在此并入)。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且以与完整抗体相同的方式评价片段的功能。
如本文所用的，术语“与”第二药剂“组合”的第一药剂通常是指第一药剂与第二药剂的共同施用，它们例如可溶解或混合在相同的药学可接受额载体中，或者可施用第一药剂随后施用第二药剂，或者可施用第二药剂随后施用第一药剂。因此本公开包括组合治疗的方法和组合药物组合物。
如本文所用的，术语“Her2”通常是指I型跨膜蛋白(也称为c-erbB2、ErbB2或Neu)，其属于表皮生长因子受体家族。在本公开的上下文中，术语“Her2”还涵盖Her2的同源物、变体和同种型，包括拼接同种型。术语“Her2”还涵盖具有一个或多个Her2同源物、变体和同种型的序列以及序列片段的蛋白质，条件是变体蛋白(包括同种型)、同源蛋白和/或片段由一个或多个Her2特异性抗体(如作为帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和马格妥昔单抗提供)识别。Her2可为人Her2。人Her2基因定位于染色***置17q12，Her2基因的基因组序列可在GenBank中NG_007503.1下找到。在人类中，存在五种Her2同种型：A、B、C、D和E；术语“Her2”在本文中用于统称所有Her2同种型。
二聚体
在一个方面，本公开提供了与Her2抑制剂组合的免疫检查点抑制剂在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，其中所述免疫检查点抑制剂能够特异性地结合PD-L1和CTLA4。
在一些实施方式中，免疫检查点抑制剂可为二聚体。二聚体可由两条多肽链形成，者两条多肽链中的每条均包含抗体Fc亚单位。例如，二聚体可由两条多肽链组成，每条多肽链均包含抗体Fc亚单位，一条多肽链的抗体Fc亚单位可与另一条多肽链的抗体Fc亚单位相关联以形成二聚体。在示例中，二聚体的两条多肽链不彼此融合(例如，经由肽连接子或通过肽键)成为一条单条多肽链。
二聚体可包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)。例如，二聚体的一条多肽链可包含两个或更多个ISVD，二聚体的另一条多肽链则不含任何ISVD。在另一个示例中，两条多肽链中的每条可包含一个或多个ISVD。在仍然另一个示例中，两条多肽链中的每一条可包含两个或更多个ISVD。
至少一个ISVD可特异于PD-L1，并且至少一个ISVD可特异于CTLA4。例如，二聚体的一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD，二聚体的另一条多肽链则不含任何ISVD。在另一个示例中，二聚体的一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD，二聚体的另一条多肽链可包含一个或多个特异于CTLA4的ISVD。在另一个示例中，二聚体的一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD，二聚体的另一条多肽链可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和/或一个或多个特异于CTLA4的ISVD。
一个或多个特异于PD-L1的ISVD可相同或不同。一个或多个特异于CTLA4的ISVD可相同或不同。
在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链CDR。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链可变区。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD不包含任何抗体轻链或其任何片段。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD至少包含重链CDR3。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR2。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链可变区。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD是抗PD-L1 VHH。特异于PD-L1的ISVD可为人源化的。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链CDR。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链可变区。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD不包含任何抗体轻链或其任何片段。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD至少包含重链CDR3。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR1。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链可变区。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD是抗CTLA4 VHH。特异于CTLA4的ISVD可为人源化的。
在一些情形下，两条多肽链中的至少一条可包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。例如，两条多肽链中的一条可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD。在另一个示例中，两条多肽链中的每一条可包含一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD。
对于两条多肽链中的一条或二者，特异于PD-L1的ISVD可任选地经由连接子与特异于CTLA4的ISVD融合。例如，在两条多肽链中的一条或二者中，可存在一个或多个特异于PD-L1的ISVD和一个或多个特异于CTLA4的ISVD。当两个或更多个特异于PD-L1的ISVD存在于单条多肽链中时，它们可彼此融合(例如，直接地或经由肽连接子)，并且其中的一个或多个可进一步与一个或多个特异于CTLA4的ISVD融合。当两个或更多个特异于CTLA4的ISVD存在于单条多肽链中时，它们可彼此融合(例如，直接地或经由肽连接子)，并且其中的一个或多个可进一步与一个或多个特异于PD-L1的ISVD融合。一个或多个连接子(例如，肽连接子)可存在于任何两个ISVD之间，例如，存在于两个特异于PD-L1的ISVD之间，存在于两个特异于CTLA4的ISVD之间，或者存在于一个特异于PD-L1的ISVD与一个特异于CTLA4的ISVD之间。
对于两条多肽链中的一条或二者，特异于PD-L1的ISVD可任选地与特异于CTLA4的ISVD融合；并且特异于CTLA4的ISVD又可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，在单一多肽链中，特异于PD-L1的ISVD可直接地(例如，在框架中)或经由连接子与特异于CTLA4的ISVD融合，并且特异于CTLA4的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。当在单条多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，并且至少一个特异于CTLA4的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，对于两条多肽链中的一条或二者，特异于PD-L1的ISVD的C末端可任选地经由连接子与特异于CTLA4的ISVD的N末端融合；特异于CTLA4的ISVD的C末端可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。例如，在单条多肽链中，特异于PD-L1的ISVD之一的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与特异于CTLA4的ISVD之一的的N末端融合，特异于CTLA4的ISVD之一的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。在示例中，当在单条多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，然而，至少一个特异于PD-L1的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与特异于CTLA4的ISVD的N末端融合，并且至少一个特异于CTLA4的ISVD的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。
对于两条多肽链中的一条或二者，特异于CTLA4的ISVD可任选地与特异于PD-L1的ISVD融合；并且特异于PD-L1的ISVD又可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，在单一多肽链中，特异于CTLA4的ISVD可直接地(例如，在框架中)或经由连接子与特异于PD-L1的ISVD融合，并且特异于PD-L1的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。当在单条多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，并且至少一个特异于PD-L1的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位融合。例如，对于两条多肽链中的一条或二者，特异于CTLA4的ISVD的C末端可任选地经由连接子与特异于PD-L1的ISVD的N末端融合；特异于PD-L1的ISVD的C末端可任选地经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。例如，在单条多肽链中，特异于CTLA4的ISVD之一的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与特异于PD-L1的ISVD之一的的N末端融合，特异于PD-L1的ISVD之一的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。在示例中，当在单条多肽链中存在一个以上特异于PD-L1的ISVD和/或一个以上特异于CTLA4的ISVD时，特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD可根据任何顺序直接地或经由连接子彼此融合，然而，至少一个特异于CTLA4的ISVD可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与特异于PD-L1的ISVD的N末端融合，并且至少一个特异于PD-L1的ISVD的C末端可直接地(例如，在框架里)或经由连接子与抗体Fc亚单位的N末端融合。
本申请中采用的连接子(例如，肽连接子)(例如，如本申请的二聚体所采用的)可为合成氨基酸序列，其例如经由肽键连接或链接两条多肽序列。例如，肽连接子可包含1-10个氨基酸(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10或更多个氨基酸)，1-15个氨基酸(例如，1至10个、11个、12个、13个、14或15个氨基酸)，1-20个氨基酸(例如，1至15个、16个、17个、18个、19或20个氨基酸)，1-30个氨基酸或更多(例如，1至20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30或更多个氨基酸)。例如，肽连接子可包含如SEQ IDNO:33-34中任一项所示的氨基酸序列。
抗体Fc亚单位可来源于IgG Fc亚单位。例如，IgG可选自由以下组成的组：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。在一些实施方式中，IgG是人IgG1，IgG Fc亚单位是人IgG1 Fc亚单位。在一些实施方式中，Fc亚单位包含与SEQ ID NO:35、38和39中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。例如，Fc亚单位可包含具有在SEQ ID NO:35、38和39中任一项所述的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在一些实施方式中，Fc亚单位可为IgG Fc亚单位的变体(例如，人IgG1 Fc亚单位的变体)。例如，变体可包含增强或降低ADCC活性或CDC活性的一个或多个氨基酸突变。作为另一个示例，变体可包含一个或多个氨基酸突变，其影响包含该变体的分子的FcRn结合活性和/或半衰期。作为仍然另一个示例，变体可包含一个或多个氨基酸突变，其影响两个或更多个Fc亚单位(或Fc单体)之间的相互作用(例如，关联)和/或增加或降低Fc杂二聚体形成的效率，例如，变体可包含如以下中所述的一个或多个氨基酸置换：CN102558355A、CN103388013A、CN105820251A或CN106883297A，其中的每一篇均通过引用并入本文。
特异于PD-L1的ISVD能够特异性地结合人PD-L1。例如，特异于PD-L1的ISVD能够特异性地结合人PD-L1细胞外结构域中的表位。此类表位是本领域中已知的，例如，如以下中所示：Gang Hao等人，J.Mol.Recognit.2015；28:269–276，Zhang等人，Oncotarget.2017Oct；08(52):90215-90224，和Zhang等人，Cell Discov.2017Mar 7；3:17004。
例如，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。人PD-L1的N-末端IgV结构域(包括信号肽)可包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。在本公开中，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113。在特定实施方式中，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和R113(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113)。特异于PD-L1的ISVD能够进一步结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如SEQ ID NO:64中的氨基酸残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，该构象表位可包含人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113)。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1N-末端IgV结构域的构象表位，该构象表位可包含人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125(例如，SEQ ID NO:64中的氨基酸残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125)。
本公开的特异于PD-L1的ISVD(例如，PD-L1 ISVD-9及其人源化变体)结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。以PD-L1 ISVD-9为例，PD-L1 ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Phe101与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Tyr56相互作用，当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Tyr56被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9和PD-L1之间的结合亲和性降低逾200倍。当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Ile54被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9和PD-L1之间的结合亲和性降低约40倍。PD-L1ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Asp99与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Arg113相互作用，当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Arg113被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9和PD-L1之间的结合亲和性降低约90倍。PD-L1 ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基Ser100与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Glu58相互作用，当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Glu58被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9和PD-L1之间的结合亲和性降低约25倍。PD-L1 ISVD-9(SEQ ID NO:6)的残基残基Thr105与人PD-L1 N-末端IgV结构域的Gln66相互作用，当人PD-L1 N-末端IgV结构域的Gln66被置换为Ala时，PD-L1 ISVD-9和PD-L1之间的结合亲和性降低约82倍。此外，人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125可参与PD-L1 ISVD-9和人PD-L1之间的相互作用，用Ala置换这些残基导致结合亲和性降低约2-10倍。这些结果总结在下表2中。
表2人PD-L1中的置换对于PD-L1 ISVD-9的结合的作用
Figure BDA0003445728380000321
Figure BDA0003445728380000331
特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
特异于PD-L1的ISVD可与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1。
参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如DSFX1X2PTCX3X4X5X6SSGAFQY(SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列，其中X1可为E或G；X2可为D或Y；X3可为T或P；X4可为L或G；X5可为V或P；X6可为T或A。在一些情形下，参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。参考抗PD-L1抗体还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如GX1X2X3X4X5RCMA(SEQ ID NO:2)所示的氨基酸序列，其中X1可为K或N；X2可为M或I；X3可为S或I；X4可为S或R；X5可为R或V。例如，参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗PD-L1抗体可包含重链CDR2。重链CDR2可包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗PD-L1抗体为特异于PD-L1的ISVD，如抗PD-L1 VHH。参考抗PD-L1抗体可包含重链可变结构域。参考抗PD-L1抗体可包含重链可变结构域，该重链可变结构域如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的)可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如DSFX1X2PTCX3X4X5X6SSGAFQY(SEQ ID NO:1)所示的氨基酸序列，其中X1可为E或G；X2可为D或Y；X3可为T或P；X4可为L或G；X5可为V或P；X6可为T或A。例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR3，该重链CDR3包含与如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR3可包含具有SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的)还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如GX1X2X3X4X5RCMA(SEQ ID NO:2)所示的氨基酸序列，其中X1可为K或N；X2可为M或I；X3可为S或I；X4可为S或R；X5可为R或V。例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR1，该重链CDR1包含与如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR1可包含具有SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的)还可包含重链CDR2。重链CDR2可包含任何合适的氨基酸序列。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含与如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR2可包含具有SEQ ID NO:4、8和11中任一项所述的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的)可包含重链可变结构域。特异于PD-L1的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ IDNO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQID NO:6所示的氨基酸序列。
例如，特异于PD-L1的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含与如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含具有SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于PD-L1的ISVD可包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。例如，特异于PD-L1的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的)可包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。例如，特异于PD-L1的ISVD可包含与如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD可包含具有SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域(VH或VHH)或由重链可变结构域(VH或VHH)组成。
例如，特异于PD-L1的ISVD可选自：PD-L1 ISVD-9、PD-L1 ISVD-6、PD-L1 ISVD-m3、PD-L1 ISVD-4、PD-L1 ISVD-11和PD-L1 ISVD-13。
特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4。例如，特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4细胞外结构域中的表位，此类表位可包括在CN107400166A中描述的那些，以及由Udupi A.Ramagopal，et.al.，PNAS 2017May，114(21)描述的那些。
特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可为人源化的。
特异于CTLA4的ISVD可与参考抗CTLA4抗体交叉竞争结合CTLA4。
参考抗CTLA4抗体可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。参考抗CTLA4抗体还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗CTLA4抗体可包含重链CDR2。重链CDR2可包含如AIX1X2GGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:16)所示的氨基酸序列，其中X1可为Y或S；X2可为I或L。例如，重链CDR2可包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。在一些情形下，参考抗CTLA4抗体为特异于CTLA4的ISVD，如抗CTLA4 VHH。参考抗CTLA4抗体可包含重链可变结构域。参考抗CTLA4抗体可包含重链可变结构域，该重链可变结构域如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的)可包含重链CDR3。重链CDR3可包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR3，该重链CDR3包含与如SEQ IDNO:19所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR3可包含具有SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的)还可包含重链CDR1。重链CDR1可包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR1，该重链CDR1包含与如SEQ IDNO:17所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR1可包含具有SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(例如，如本公开的二聚体中所包含的)还可包含重链CDR2。重链CDR2可包含如AIX1X2GGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:16)所示的氨基酸序列，其中X1可为Y或S；X2可为I或L。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包含重链CDR2，该重链CDR2包含与SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，重链CDR2可包含具有SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的)可包含重链可变结构域。特异于CTLA4的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。例如，重链可变结构域可包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含与SEQID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含具有SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在本公开中，特异于CTLA4的ISVD可包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。例如，特异于CTLA4的ISVD(如本公开的二聚体中所包含的)可包含如SEQID NO:20所示的氨基酸序列。
例如，特异于CTLA4的ISVD可包含与SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD可包含具有SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在一些情形下，特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域(VH或VHH)或由重链可变结构域(VH或VHH)组成。
例如，特异于CTLA4的ISVD可选自CTLA4 ISVD-34、CTLA4 ISVD-C1、CTLA4 ISVD-13、CTLA4 ISVD-26、CTLA4 ISVD-27、CTLA4 ISVD-28、CTLA4 ISVD-29、CTLA4 ISVD-30、CTLA4 ISVD-31、CTLA4 ISVD-32和CTLA4 ISVD-33。
例如，本申请的二聚体可包含两条多肽链或由两条多肽链组成。两条多肽链的氨基酸序列可相同或不同。在一些情形下，本公开的二聚体可为均二聚体。
在本公开中，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含如权利要求40-43、46、48和50中任一项所述的氨基酸序列。例如，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含如SEQ ID NO:40所示的氨基酸序列。
在具体示例中，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含与如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列具有至少80％(例如，至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％)同一性的氨基酸序列。在一些情形下，二聚体的两条多肽链中的一条或二者可包含具有SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，1-2个、1-3个、1-4个、1-5个、1-6个、1-7个、1-8个、1-9个、1-10个或更多个)氨基酸缺失、***和/或置换的氨基酸序列。
在示例中，特异于PD-L1的ISVD可(直接地或间接地，例如，经由连接子，如肽连接子)与特异于CTLA4的ISVD的N-末端氨基酸融合以形成双特异性结合部分。随后，一个此类双特异性结合部分可(直接地或间接地，例如，经由连接子，如肽连接子)与一个本公开的Fc亚单位的N-末端氨基酸融合以提供二聚体的一条多肽链。随后，另一个此类双特异性结合部分可(直接地或间接地，例如，经由连接子，如肽连接子)与另一个本公开的Fc亚单位的N-末端氨基酸融合以提供二聚体的另一条多肽链。两条多肽链的两个Fc亚单位可彼此相关联(例如，经由非共价相互作用和/或二硫键或其他共价键，在一些情形下，此类共价键不是肽键)以形成二聚体。两个双特异性结合部分可相同或不同。两个Fc亚单位可相同或不同。
在一些实施方式中，二聚体是包含两条相同的多肽链的蛋白质均二聚体，每条多肽链包含与一个Fc亚单位融合的一个双特异性结合部分，两个Fc亚单位彼此相关联以形成蛋白质均二聚体。两个Fc亚单位可经由非共价相互作用和/或二硫键或其他共价键彼此相关联，在一些情形下，此类共价键不是肽键。
图1A-1B提供了本公开的二聚体的示例，其中1表示特异于PD-L1的ISVD，2表示特异于CTLA4的ISVD，3表示包含Fc亚单位的Fc结构域，4表示双特异性结合部分。
本公开的二聚体能够与CD80和/或CD86竞争结合CTLA4。例如，可在体外实验中使用表达CTLA4的细胞系(如表达CTLA4的HEK293细胞系)检验竞争。作为另一个示例，可在ELISA测定(如竞争ELISA测定)中检验竞争。
本公开的二聚体能够与PD1和/或CD80竞争结合PD-L1。例如，可在体外实验中使用表达PD-L1的细胞系(如表达PD-L1的A375细胞系)检验竞争。作为另一个示例，可在ELISA测定(如竞争ELISA测定)中检验竞争。
本公开的二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。在一些情形下，本公开的二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。在一些情形下，本公开的二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。在一些情形下，本公开的二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
本公开的二聚体可以不多于约1×10-6M，例如，不多于约1×10-7M，不多于约1×10-8M，不多于约0.5×10-8M，不多于约1×10-9M，不多于约1×10-10M或更低的KD值来结合CTLA4。
本公开的二聚体可以不多于约1×10-6M，例如，不多于约1×10-7M，不多于约1×10-8M，不多于约0.5×10-8M，不多于约1×10-9M，不多于约1×10-10M或更低的KD值来结合PD-L1。
本公开的二聚体能够刺激免疫细胞(例如，PBMC细胞)的免疫调节因子(例如，IL-2)的分泌。
例如，本公开的二聚体可选自：aPDL1.9-aCTLA4.34-Fc、aPDL1.9-L-aCTLA4.34-Fc、aCTLA4.34-aPDL1.9-Fc、aCTLA4.34-L-aPDL1.9-Fc，aPDL1.6-aCTLA4.34-Fc，aPDL1.m3-aCTLA4.34-Fc和aPDL1.9-aCTLA4.13-Fc。
例如，本公开的二聚体可包含特异于CTLA4的ISVD和特异于PDL1的ISVD。特异于PD-L1的ISVD可包括包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的CDR3、包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列的CDR2和包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的CDR1。并且特异于CTLA4的ISVD可包括包含如SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列的CDR3、包含如SEQ IDNO.18所示的氨基酸序列的CDR2和包含如SEQ ID NO.17所示的氨基酸序列的CDR1。并且本公开的二聚体可包括包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列的特异于PD-L1的ISVD，并且包括包含如SEQID NO.20中所示氨基酸序列的特异于CTLA4的ISVD。例如，本公开的二聚体可包含SEQ IDNO.40的氨基酸序列。
并且本公开的二聚体被命名为KN046。
Her2抑制剂
在本公开中，Her2抑制剂可为Her2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
在一些实施方式中，Her2抑制剂可为双特异性抗体或其抗原结合部分，其中双特异性抗体或其抗原结合部分可具有共同轻链，并且其中所述共同轻链是指具有相同序列的两条轻链。
在一些实施方式中，双特异性抗体或其抗原结合部分的重链能够在生理条件下或在体外蛋白质表达器件分别与所述轻链正确地组装。
共同轻链可从两个原始单克隆抗体(已知的单克隆抗体)经工程化得到，其至少与两个原始单克隆抗体中的一个的轻链序列不同。在一些实施方式中，共同轻链可与两个原始单克隆抗体中的一个相同或者在两个原始单克隆抗体中的一个的基础上进行修饰(例如，氨基酸序列修饰)，修饰的目的在于保持与各抗原或表位的亲和性。在一些实施方式中，氨基酸序列修饰可包含氨基酸的突变、缺失或添加，如不多于3个氨基酸、优选不多于2个氨基酸、更优选不多于1个氨基酸的缺失或添加。
在本申请中，可分析和验证针对不同抗原或抗原表位的两种单克隆抗体(即原始抗体)的轻链序列(尤其是可变区序列)，以获得能够与两种单克隆抗体的重链组装的共同轻链。在与重链组装之后，共同轻链仍然能特异性地结合原始单克隆抗体所针对的抗原或抗原表位。
在本申请中，可分析和验证针对不同抗原或抗原表位的两种单克隆抗体(即原始抗体)的轻链序列(尤其是可变区序列)，以获得能够与两种单克隆抗体的重链组装的共同轻链。在与重链组装之后，共同轻链仍然能特异性地结合原始单克隆抗体所针对的抗原或抗原表位。
在本申请中，共同轻链可用于表达双特异性抗体，并且也可用于表达包含两种抗体的混合物；当表达双特异性抗体时，该抗体包含能够结合第一抗原的轻链和重链的抗体，以及能够结合第二抗原的轻链，其中两条轻链的序列完全相同，即，是共同轻链。
在本申请中，两种原始抗体的轻链恒定区可为κ型或λ型；κ型轻链恒定区包含各种同种异型，如Km1、Km2和Km3；λ型轻链恒定区包括各种同种异型，如CL1、CL2、CL3、CL6和CL7。
本领域中已知，可变区对于抗体与抗原之间的结合可能是至关重要的，因此，在修饰或获得抗体的过程中，可变区序列的选择和修饰很重要。因此，在本申请中，为获得具有共同轻链的双特异性抗体中或抗体混合物，可能首先需要获得共同轻链的可变区。在根据上文讨论的方法选择一个原始单克隆抗体或其变体的轻链可变区作为共同轻链的可变区之后，确定共同轻链的恒定区。通常，共同轻链恒定区可确定为共同轻链可变区来源的单克隆抗体的轻链恒定区。在一些情形下，可将另一种单克隆轻链恒定区确定为共同轻链恒定区。在必要时，可根据本领域已知的指示对原始轻链恒定区进行修饰(例如，通过氨基酸的添加、缺失或突变等)以获得更合适的共同轻链恒定区，例如，在修饰之后，共同轻链恒定区具有更好的ADCC、CDC、内吞作用、稳定性、免疫原性或半衰期等。
在本申请中，两种原始抗体的重链类型可相同或不同，优选地，重链是相同的类型。在一个实施方式中，当制备双特异性抗体和抗体混合物时，与原始抗体相比，重链的可变区和CH1结构域的序列不变。
在本申请中，双特异性抗体或包含两种抗体的混合物的抗体的两个臂可均来源于两种原始单克隆抗体。当制备双特异性抗体或抗体混合物时，将仅改变轻链可变区的序列以获得共同轻链，而重链可变区的可不需要改变。换言之，在所制备的双特异性抗体中或抗体混合物中，抗体重链可变区的序列可与原始抗体相同，但是至少一条轻链可变区的序列应不同于原始抗体。
在本申请中，两种原始单克隆抗体可根据不同需要或目的来选择，例如，选择的两种单克隆抗体可针对相同抗原的不同抗原表位；可替代地，选择抗体中的一个可结合肿瘤细胞表面上的相关抗原，而另一种抗体可触发免疫效应细胞仪进一步杀死细胞。
在本申请中，当制备双特异性抗体时，可根据本领域已知的技术对重链(如Fc片段)进行修饰以在抗体表达过程中促进杂二聚体蛋白形成。
在本申请中，当制备抗体混合物时，可根据本领域已知的技术对重链(如Fc片段)进行修饰以在抗体表达过程中促进均二聚体蛋白的形成。
在本申请中，对抗体重链的Fc片段进行修饰以促进均二聚体蛋白或杂二聚体蛋白形成的技术是本领域中已知的，例如，可参考，Ridgway，Presta等人，1996，Carter 2001，专利CN102558355A，和专利CN 103388013A。
在本申请中，使识别不同抗原表位的多肽融合的技术可包括但不限于，例如，如实施例中所示的杂二聚体Fc融合技术，其也可为“Fab”技术，参见图2。
在本申请中，在本申请中使用的杂二聚体Fc融合技术可基于“旋钮(knob)”-“孔(hole)”模型，也可基于“电荷排斥模型”，但不限于这两种模型。
在一些实施方式中，双特异性抗体或其抗原结合部分的重链Fc链段可被工程化改造为更有利于形成杂二聚体蛋白。
在一些实施方式中，两种原始单克隆抗体可为帕妥珠单抗和曲妥珠单抗。
在一些实施方式中，共同轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
在一些实施方式中，共同轻链可选自帕妥珠单抗的轻链或曲妥珠单抗的轻链或其突变体。在一些实施方式中，双特异性抗体或其抗原结合部分的重链(包括可变区和恒定区)可与两个原始单克隆抗体相同，或者可进行修饰以促进形成。杂二聚体蛋白被修饰为例如对重链Fc链段进行工程化改造以促进杂二聚体蛋白形成。
在一些实施方式中，共同轻链的可变区的序列可包含选自SEQ ID NO:65至SEQ IDNO:70的氨基酸1-107的序列。在一些实施方式中，轻链恒定区的序列可包含SEQ ID NO:65的氨基酸108-214的序列。例如，Her2抑制剂的共同轻链的可变区可为曲妥珠单抗的轻链可变区。
在一些实施方式中，抗体或其抗原结合部分的重链可变区可分别是帕妥珠单抗的重链可变区和曲妥珠单抗的重链可变区；例如，重链可变区可包含如SEQ ID NO:87和SEQID NO:88所示的序列。
在一些实施方式中，两条重链的可变区的序列可包含如SEQ ID NO:89和SEQ IDNO:90所示的序列。
在一些实施方式中，其两条重链包含如SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的序列。
例如，Her2抑制剂的共同轻链可包含如SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列；重链可变区可分别包含如SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:88所示的序列，两条重链的可变区可包含如SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90所示的氨基酸序列的序列。其两条重链可包含如SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的序列。
并且本公开的Her2抑制剂可被命名为KN026。
药物组合物和用途
在本公开中，提供了一种药物组合物，其包含有效量的所述免疫检查点抑制剂和有效量的本公开的Her2抑制剂，并且任选地包含药学可接受的赋形剂。
在一些实施方式中，术语“有效量”是指当施用给受试者时，可有效地至少部分减轻、抑制、预防和/或缓解状况、病症或疾病的本公开的免疫检查点抑制剂或Her2抑制剂的量。有效量的药物组合物可被施用以用于预防或治疗疾病。可根据要治疗的疾病类型、药物组合物类型、疾病的严重程度和病程、个体的病史、个体的临床史和对治疗的应答以及主管医生的判断来确定药物组合物的合适量。
在另一方面，本公开提供了本公开的药物组合物在制备治疗受试者的肿瘤的药物中的用途。
在另一方面，本公开提供了用于治疗受试者的肿瘤的本公开的药物组合物。
在另一方面，本公开提供了一种治疗受试者的肿瘤的方法，包括本公开的药物组合物。
在一些实施方式中，治疗导致个体在治疗停止后有持续应答。本文所述的药物可用于治疗需要增强免疫原性(如增加肿瘤免疫原性以***)的状况。药物组合物还可通过对个体施用有效量的免疫检查点抑制剂和Her2抑制剂来增强患有肿瘤的个体的免疫功能。
在本公开中，所述肿瘤可选自由以下组成的组：实体肿瘤和血液肿瘤。
在本公开中，所述肿瘤可选自由以下组成的组：NSCLC、乳腺癌、胃癌、胃食管结合部腺癌、食管腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胆管癌、结直肠癌和尿路上皮癌。
在本公开中，所述肿瘤可选自由以下组成的组：Her2异常的实体肿瘤和Her2阳性的癌症。
在本公开中，可已经对所述受试者施用过抗Her2抗体和/或抗PD1剂。
例如，所述抗Her2抗体可包含曲妥珠单抗。
例如，可已经对所述受试者施用过化疗。
在一些实施方式中，所述化疗可包括一线化疗和/或二线化疗。例如，所述二线化疗包括紫杉醇加雷莫芦单抗、紫杉醇、多西他赛和/或伊立替康单药治疗。
在本公开中，所述化疗可指通过化学药剂进行的针对所述肿瘤的任何治疗。所述化学药剂可杀死肿瘤细胞、缩小肿瘤和/或缓解癌症的体征和症状。例如，所述化疗可包括一线化疗和/或二线化疗。
在本公开中，所述一线化疗可指医疗机构普遍接受的用于指定类型和阶段的癌症的原始治疗的一种或多种化疗方案。例如，所述一线化疗可包含基于铂的化疗。在一些实施方式中，所述一线基于铂的化疗可包含用铂(P)化合物(顺铂或卡铂)进行的化疗。
在本公开中，所述二线化疗可指当一线化疗不能充分生效时所尝试的那些。例如，所述二线化疗包括紫杉醇加雷莫芦单抗、紫杉醇、多西他赛和/或伊立替康单药治疗。
在本公开中，所述Her2阳性的癌症可指具有Her2表达水平高于正常的肿瘤细胞的癌症。
在本公开中，所述Her2异常的实体肿瘤可指具有Her2异常的实体肿瘤，例如，所述实体肿瘤可具有异常的Her2基因扩增、Her2基因突变和Her2蛋白过表达。
在本公开中，所述抗PD1剂可指结合PD1和/或阻断PD1和PD-L1之间的结合的任何药剂。例如，所述抗PD1剂可包含抗PD1抗体。
在本公开中，所述肿瘤可包含所述Her2异常的实体肿瘤，患有该肿瘤的受试者在先前的曲妥珠单抗疗法中失败。
在本公开中，所述肿瘤可包含Her2阳性的GC(胃癌)和Her2阳性的GEJ(胃食管结合部腺癌)，患有该肿瘤的受试者在至少一项先前的***疗法中失败(例如，在先前的曲妥珠单抗疗法中失败或在曲妥珠单抗和抗PD-1药剂双项疗法中失败)。
药物组合物可通过相同的施用途径施用，或者可通过不同的施用途径施用。在一些实施方式中，药物组合物可以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。在一些实施方式中，所述Her2抑制剂可以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂可以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。
在本公开中，所述Her2抑制剂可通过静脉内施用来施用。
在本公开中，所述免疫检查点抑制剂可通过静脉内施用来施用.
一般而言，无论是通过一次或多次施用，施用给受试者的免疫检查点抑制剂的有效量和Her2抑制剂的有效量均可在约0.01至约100mg/kg受试者体重的范围内。
在一些实施方式中，Her2抑制剂可以例如如下剂量使用：约0.01mg/kg至约100mg/kg、约1mg/kg至约80mg/kg、约1mg/kg至约70mg/kg，约1mg/kg至约60mg/kg、约1mg/kg至约50mg/kg、约1mg/kg至约40mg/kg、约1mg/kg至约30mg/kg、约1mg/kg至约100mg/kg、约5mg/kg至约100mg/kg、约10mg/kg至约100mg/kg或者以约20mg/kg至约100mg/kg使用。在一些实施方式中，所述Her2抑制剂可以约20mg/kg至约30mg/kg施用。
在一些实施方式中，免疫检查点抑制剂可以如下剂量使用：约0.01mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约80mg/kg、约0.01mg/kg至约60mg/kg、约0.01mg/kg至约40mg/kg、约0.01mg/kg至约20mg/kg、约0.01mg/kg至约15mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约4mg/kg，或者以或约0.01mg/kg至约3mg/kg施用。在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂可以如下剂量施用：0.01mg/kg至5mg/kg。例如，所述免疫检查点抑制剂可以如下剂量施用：3mg/kg至5mg/kg。
例如，所述免疫检查点抑制剂可以约3mg/kg的剂量施用，所述Her2抑制剂可以约20mg/kg或30mg/kg的剂量施用。例如，所述免疫检查点抑制剂可以约5mg/kg的剂量施用，所述Her2抑制剂可以约20mg/kg的剂量施用。
剂量可作为单剂量施用，或者可作为多次剂量(例如，2或3次剂量)使用，如输液。与单一治疗相比，在组合治疗中施用的抗体的剂量可有所降低。可通过常规技术容易地监控该疗法的进程。
药物组合物可以如下剂量使用：约0.01mg/kg至约100mg/kg、约0.01mg/kg至约80mg/kg、约0.01mg/kg至约60mg/kg、约0.01mg/kg至约40mg/kg、约0.01mg/kg至约20mg/kg、约0.01mg/kg至约15mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约4mg/kg，或者可以约0.01mg/kg至约3mg/kg施用。
药物组合物可以如下给药频率施用给受试者：约每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次、每十二周一次或者更低频率，只要能实现治疗应答即可。在某些实施方式中，Her2抑制剂可以如下给药频率施用给受试者：约每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次、每十二周一次或者更低频率，只要能实现治疗应答即可。在某些实施方式中，免疫检查点可以如下给药频率施用给受试者：约每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次、每九周一次、每十二周一次或者更低频率，只要能实现治疗应答即可。
在本公开中，所述Her2抑制剂可每两周一次或每三周一次施用，或者以负荷剂量施用。在本公开中，所述免疫检查点抑制剂可每两周一次或每三周一次施用。
例如，所述免疫检查点抑制剂可每两周一次施用，所述Her2抑制剂可每两周一次施用。例如，所述免疫检查点抑制剂可每三周一次施用，所述Her2抑制剂可每两周一次施用。例如，所述免疫检查点抑制剂可每三周一次施用，所述Her2抑制剂可每三周一次施用。
在本公开中，提供了与Her2抑制剂组合的免疫检查点抑制剂在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途。术语”与……的组合”的使用并非限制对有需要的受试者施用疗法的顺序。免疫检查点抑制剂可在以下时间施用：在将Her2抑制剂施用给有需要的受试者之前(例如，1分钟、5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)，与将Her2抑制剂施用给有需要的受试者同期或同时，或者在将Her2抑制剂施用给有需要的受试者之后(例如，1分钟、5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)。
实施例
以下实施例阐述用于向本领域技术人员提供完整的公开和说明如何制作和使用本发明，并非旨在限制发明人视为其发明的范围，也并非旨在表示以下实验是进行的全部或仅有的实验。已经努力确保所用数字的准确性(例如数量、温度等)，但应当考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，份数为重量份，分子量为重均分子量，温度以摄氏度计，压力为大气压或接近大气压。可使用标准缩写，例如：bp，碱基对；kb，千碱基；pl，微微升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；nt，核苷酸；i.m.，肌肉内；i.p.，腹腔内；s.c.，皮下；诸如此类。
实施例1与本公开的二聚体组合的Her2抑制剂在患有Her2阳性肿瘤的受试者中的临床研究
这是一项开放性、lb期、多中心的临床研究。本研究的目的是评价与本公开的二聚体组合的Her2抑制剂在患有Her2阳性肿瘤的受试者中的安全性和有效性。
研究将包括剂量递增期和剂量扩展期。剂量递增期内Her2抑制剂的剂量将为20mg/kg Q2W和30mg/kg Q2W；剂量递增期内二聚体的剂量将为3mg/kg Q2W。mTPI(修正毒性概率区间)将在此阶段执行。mTPI-2组经历增加或减少剂量，以根据计算设计来确定最大耐受剂量(MTD)。将mTPI-2的等渗回归应用于观察到的DLT(剂量限制毒性)，以估算最接在剂量递增期之后的目标DLT的剂量的MTD。
第一剂量组(Her2抑制剂6 20mg/kg Q2W+二聚体3mg/kg Q2W)将涉及3-6名受试者。在DLT观察之后将进行SMC，如果根据mTPI-2设计表符合“上升到更高剂量”的标准，则将第一剂量组的受试者分组到第二组(Her2抑制剂6 30mg/kg Q2W+二聚体3mg/kg Q2W)。第二组将涉及3-6名受试者，同时第一剂量组将扩充到12名受试者。当受试者符合“上升到更高剂量”标准或“保持原始剂量”标准时，第二剂量组将扩充到12名受试者，并且剂量上升期的整个DLT观察将终止。
在剂量递增期之后，将通过SMC来确定RP2D(推荐II期剂量)，研究将进入剂量扩展期。SMC将根据Her2抑制剂和二聚体的安全性、PK数据和/或其他数据，在相同剂量水平上确定原始剂量、增加中间剂量组或增加其他组(例如，固定剂量施用、不同给药间隔，如Q3W)；或者，进行更高剂量的研究(例如，二聚体5mg/kg)。
初步研究终点：
剂量递增期：DLT(剂量限制毒性)；
剂量扩展期：通过RECIST 1.1确定的ORR(客观应答率)；和DOR(应答持续时间)。
结果显示，与本公开的二聚体组合的Her2抑制剂将有效地治疗受试者的Her2阳性的肿瘤。
实施例2KN026(靶向Her2的双特异性抗体)与KN046(抗PD-L1/CTLA-4双特异性抗体)在患有Her2异常的实体肿瘤的患者(pts)中的基本安全性、耐受性和有效性结果
背景：
Her2通过cGAS-STING信号传导有效地抑制先天免疫，同时Her2抗体诱导的ADCP也会导致巨噬细胞介导的免疫抑制。临床前研究和临床研究均表明，先天性免疫和获得性免疫与抗Her2抗体和免疫检查点阻断的结合是相互协调的。KN026是同时结合两个不同的Her表位的新型双特异性抗体。KN046是阻断PD-L1与PD-1/CD80的相互作用和CTLA-4与CD80/CD86的相互作用的新型双特异性抗体。在此，我们报告了正在进行的Ib期剂量递增和剂量扩展研究的中期结果，该研究评估了KN026联合KN046治疗Her2异常的实体肿瘤的安全性、耐受性和初步有效性。
方法：
本研究纳入了实体肿瘤患者，这些患者在标准治疗中失败，Her2异常状态在局部得到证实(Her2突变、Her2扩增和/或Her2过表达)。合格的患者接受三种剂量水平的KN026和KN046联合用药，直到疾病进展、不可接受的毒性或撤回知情同意(DL1：KN026 20mg/kgQ2W+KN046 3mg/kg Q2W；DL2：KN026 20mg/kg Q2W，在周期1的第1天、第8天加载+KN0465mg/kg Q3W；DL3：KN026 30mg/kg Q3W，在周期1的第1天、第8天加载+KN046 5mg/kg Q3W)。根据RECIST 1.1，在Q8W时评估肿瘤应答。初步终点为DLT，关键次要终点为有效性参数(ORR、DOR、PFS)。
结果：
截至2020年9月8日，有25例患者纳入DL1(n＝20，3名用于剂量递增)、DL2(n＝3)和DL3(n＝2)(mGC/GEJ 15例患者；mCRC 8例患者；其他实体肿瘤2例患者)。15例患者保持接受研究治疗，10例患者因疾病进展(n＝5)、死亡(n＝2)和其他原因(n＝3)停止治疗。18例患者为Her2阳性情况(18例中有12例先前的曲妥珠单抗治疗失败)，2例患者具有Her2突变，5例患者具有Her2低表达(无FISH扩增)。未观察到DLT。没有患者经历LVEF下降或其他临床上有意义的心脏AE。在23例(92％)患者中发生治疗相关TEAE，其中6例(24％)患者经历3级或以上的治疗相关TEAE。11例(44％)患者经历irAE，主要为1级或2级，仅有1例患者经历3级免疫介导的内分泌病。最常见(频率≥15％)的KN026或KN046相关TEAE是输液相关反应(n＝11，44.0％)、贫血(n＝9，36.0％)、白细胞计数下降(n＝6，24.0％)、腹泻(n＝5，20.0％)、AST增加(n＝5，20.0％)、血小板计数下降(n＝5，20.0％)、皮疹(n＝5，20.0％)和ALT增加(n＝4，16.0％)。Her2阳性肿瘤患者的客观应答率(n＝14例有效性可评价患者)为9/14(64.3％，95％置信区间为35.1％至87.2％)，疾病控制率为13/14(92.9％，95％置信区间为66.1％至99.8％)。5例Her2突变患者或Her低表达患者中有4例实现了SD，包括1例患者的SD超过24周。报告了2例因疾病进展所知的死亡病例，二者均因COVID-19限制仅接受一个周期的KN026+KN046。
结论：KN026与KN046组合的耐受性良好，并在Her2阳性实体肿瘤中初步显示出强烈的抗肿瘤活性。
临床试验信息：NCT04040699
实施例3初步突破性治疗指定请求(BTDR)建议
本文件将作为部门评论突破性治疗指定(BTD)请求是否合适的依据，此时其可能过于初步，或者目前不符合BTD标准。
1.提供与适应症是否严重且危及生命相关的信息。简要描述意图使用该产品的适应症和疾病：
意图使用该产品的适应症是Her2阳性(Her2 IHC3+或Her2IHC2+/FISH+)的胃癌/胃食管结合部腺癌和食管腺癌(GC/GEJ/EAC)。
2.简要描述药物、药物的作用机理(如果已知)、药物与现有疗法的关系：
KN026是同时靶向Her2结构域II和IV的Her2双特异性抗体；KN046是阻断PD1/PD-L1和CTLA-4途径的PD-L1/CTLA-4双特异性抗体。
3.简要描述可用疗法，如果有的话：
基于氟嘧啶、铂和曲妥珠单抗的方案通常用作一线疗法。可用的二线疗法或晚期疗法(later therapy)包括紫杉醇加雷莫昔单抗、紫杉醇、多西紫杉醇或伊立替康单药疗法，以及最佳支持治疗，诱导约15-25％的客观应答率。二线疗法的中位总生存期约为8-9个月，晚期疗法的中位总生存期约为4-6个月，有大量未满足的医疗需求。
4.提供与初步临床证据相关的信息*，包括试验设计、试验终点、治疗组和纳入的受试者人数：
KN046-IST-02(NCT04040699)是一项正在进行的剂量递增和扩展研究，旨在评估KN046+KN026在Her2阳性实体肿瘤中的有效性和安全性。截至2020年9月3日，纳入了14例Her2阳性实体肿瘤患者，并对其进行了有效性评估，包括9例Her2阳性GC/GEJ患者。在Her2阳性实体肿瘤中观察到64.3％(9/14)应答率，在Her2阳性GC/GEJ中观察到66.7％(6/9)的应答率。所有14例患者均至少有一次***性治疗失败；10例患者在先前的曲妥珠单抗治疗中失败，其中观察到60％(6/10)的客观应答率；2例患者在曲妥珠单抗和抗PD-1药剂治疗中均失败，其中1例部分应答，1例病情稳定。
例如，对于肿瘤学/血液学产品，初步临床证据可能包括应答率、应答持续时间和先前治疗的程度。
虽然在本文中已经显示和描述了本发明的优选实施方式，但对于本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施方式仅通过示例的方式提供。这并不意味着发明受说明书中提供的具体实施例的限制。虽然已经参考前述说明书描述了发明，但是本文实施方式的描述和图示并不意味着以限制意义进行解释。在不背离发明的情况下，本领域技术人员现在将进行许多变化、改变和替换。此外，应理解，发明的所有方面不限于本文所述的取决于各种条件和变量的特定描述、构造或相对比例。应理解，在实施发明时可采用本文所述的发明实施方式的各种替代方案。因此，预期发明还应涵盖任何此类替代、修改、变化或等效物。以下权利要求旨在定义发明的范围，并由此涵盖这些权利要求及其等效物范围内的方法和结构。
序列表
<110> 江苏康宁杰瑞生物制药有限公司
<120> 双特异性融合蛋白与抗Her2抗体的组合用于肿瘤治疗
<130> 0096-PA-016CN
<160> 90
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CDR3 of 抗PD-L1
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X1=E/G
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=D/Y
<220>
<221> X
<222> (9)..(9)
<223> ,X=T/P
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> ,X=L/G
<220>
<221> X
<222> (11)..(11)
<223> ,X=V/P
<220>
<221> X
<222> (12)..(12)
<223> X=T/A
<400> 1
Asp Ser Phe Xaa Xaa Pro Thr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CDR1 of 抗PD-L1
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X=K/N
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=M/I
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=S/I
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=S/R
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=R/V
<400> 2
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR1
<400> 3
Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR2
<400> 4
Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9 CDR3
<400> 5
Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 6
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-9
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR1
<400> 7
Gly Asn Ile Ile Arg Val Arg Cys Met Ala
1 5 10
<210> 8
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR2
<400> 8
Asn Ile Leu Thr Thr Thr Ile Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 9
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6 CDR3
<400> 9
Asp Ser Phe Gly Tyr Pro Thr Cys Pro Gly Pro Ala Ser Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe Gln Tyr
<210> 10
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-6
<400> 10
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Asn Ile Ile Arg Val Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Gly
35 40 45
Pro Asn Ile Leu Thr Thr Thr Ile Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Gly Tyr Pro Thr Cys Pro Gly Pro Ala Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-m3 CDR2
<400> 11
Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 12
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-m3
<400> 12
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 13
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-4
<400> 13
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asn Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-11
<400> 14
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1 ISVD-13
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CDR2 of CTLA4
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=Y/S
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=I/L
<400> 16
Ala Ile Xaa Xaa Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR1
<400> 17
Ala Tyr Cys Met Gly
1 5
<210> 18
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR2
<400> 18
Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34 CDR3
<400> 19
Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser Gly Pro
1 5 10 15
Phe Gly Tyr
<210> 20
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-34
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 21
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-C1 CDR2
<400> 21
Ala Ile Tyr Leu Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 22
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-C1
<400> 22
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Gly Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Leu Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Ile Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-13 CDR2
<400> 23
Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 24
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-13
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 25
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-26
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 26
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-27
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 27
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-28
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 28
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-29
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 29
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-30
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Ser Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 30
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-31
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 31
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-32
<400> 31
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 32
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4 ISVD-33
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Val Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 33
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 短连接子
<400> 33
Gly Ala Pro
1
<210> 34
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 长连接子
<400> 34
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 35
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgGl-Fc 域带铰链区
<400> 35
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 36
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人 IgGl 恒定区
<400> 36
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 37
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 对照dAb
<400> 37
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr Cys Met Gly
20 25 30
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ala Leu Ala
35 40 45
Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
50 55 60
Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
65 70 75 80
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser
85 90 95
Thr Ile Arg Tyr Val Cys Pro Gly Leu Asn Arg Gly Asp Gln Phe Lys
100 105 110
Asn Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IgGl-Fc区带铰链区 (C-S)
<400> 38
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 39
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IgG1-Fc区无铰链区
<400> 39
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 40
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-aCTLA4.34-Fc
<400> 40
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr
145 150 155 160
Ser Ala Tyr Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Gly Val Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
195 200 205
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly
225 230 235 240
Ser Trp Ser Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
275 280 285
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
290 295 300
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
305 310 315 320
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
325 330 335
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
340 345 350
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
355 360 365
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
370 375 380
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
385 390 395 400
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
405 410 415
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
420 425 430
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
435 440 445
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
450 455 460
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
465 470 475 480
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485 490
<210> 41
<211> 505
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-L-aCTLA4.34-Fc
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr Cys
165 170 175
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val Ala
180 185 190
Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser Gly
245 250 255
Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 42
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aCTLA4.34-aPDL1.9-Fc
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser
145 150 155 160
Ser Arg Arg Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg
165 170 175
Glu Arg Val Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
195 200 205
Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Ser Ser Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys
260 265 270
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
275 280 285
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
290 295 300
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
305 310 315 320
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
325 330 335
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
340 345 350
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
355 360 365
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
370 375 380
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
385 390 395 400
Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
405 410 415
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
420 425 430
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
435 440 445
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
450 455 460
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
465 470 475 480
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485 490
<210> 43
<211> 505
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aCTLA4.34-L-aPDL1.9-FC
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ile Tyr Ser Ala Tyr
20 25 30
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val
35 40 45
Ala Ala Ile Tyr Ile Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Val Ile Pro Thr Glu Thr Cys Leu Gly Gly Ser Trp Ser
100 105 110
Gly Pro Phe Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg Cys
165 170 175
Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val Ala
180 185 190
Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser Gly
245 250 255
Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
260 265 270
Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
275 280 285
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
290 295 300
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
305 310 315 320
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
325 330 335
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
340 345 350
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
355 360 365
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
370 375 380
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
385 390 395 400
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
405 410 415
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
420 425 430
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
435 440 445
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
450 455 460
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
465 470 475 480
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
485 490 495
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
500 505
<210> 44
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> aPDL1.9-dAb-Fc
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Lys Met Ser Ser Arg Arg
20 25 30
Cys Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Arg Val
35 40 45
Ala Lys Leu Leu Thr Thr Ser Gly Ser Thr Tyr Leu Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Ser Phe Glu Asp Pro Thr Cys Thr Leu Val Thr Ser Ser
100 105 110
Gly Ala Phe Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Ala Pro Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln
130 135 140
Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr
145 150 155 160
Cys Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
165 170 175
Ala Leu Ala Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Ala Ser Thr Ile Arg Tyr Val Cys Pro Gly Leu Asn Arg Gly Asp
225 230 235 240
Gln Phe Lys Asn Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu
245 250 255
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
260 265 270
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
275 280 285
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
290 295 300
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
305 310 315 320
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
325 330 335
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
340 345 350
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
355 360 365
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
370 375 380
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys
385 390 395 400
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
405 410 415
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
420 425 430
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
435 440 445
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
450 455 460
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
465 470 475 480
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
485
<210> 45
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> dAb-aCTLA4.34-Fc
<400> 45
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Tyr Thr Tyr Cys Met Gly
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Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ala Leu Ala
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Val Thr Gly Ile Ser Ile Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
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Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
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Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser
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435 440 445
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435 440 445
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile
165 170 175
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180 185 190
Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
195 200 205
Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro
245 250 255
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260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr
275 280 285
Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr
290 295 300
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340 345 350
His Ser Pro Gly Lys
355
<210> 53
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1-muFc
<400> 53
Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn
1 5 10 15
Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe
35 40 45
Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln
50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
85 90 95
Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val
115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
130 135 140
Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr
145 150 155 160
Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Asn Leu Phe Asn Val Thr Ser
165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
180 185 190
Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro
195 200 205
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210 215 220
Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
245 250 255
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
260 265 270
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
275 280 285
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
290 295 300
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
385 390 395 400
Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
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Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
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<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD-L1-huFc
<400> 54
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1 5 10 15
Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe
35 40 45
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50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
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Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
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115 120 125
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165 170 175
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225 230 235 240
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245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
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Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
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340 345 350
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Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
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Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
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435 440 445
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<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD80-muFc
<400> 55
Val Ile His Val Thr Lys Glu Val Lys Glu Val Ala Thr Leu Ser Cys
1 5 10 15
Gly His Asn Val Ser Val Glu Glu Leu Ala Gln Thr Arg Ile Tyr Trp
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Leu Ser Ile Val Ile Leu Ala Leu Arg Pro Ser Asp Glu Gly Thr Tyr
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CTLA4-huFc
<400> 56
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1 5 10 15
Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Ala Ser Pro Gly Lys Ala Thr Glu Val
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Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
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Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
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Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
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Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
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195 200 205
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225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
340 345 350
Leu Ser Pro Gly Lys
355
<210> 57
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD86-muFc
<400> 57
Tyr Phe Asn Glu Thr Ala Asp Leu Pro Cys Gln Phe Ala Asn Ser Gln
1 5 10 15
Asn Gln Ser Leu Ser Glu Leu Val Val Phe Trp Gln Asp Gln Glu Asn
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Leu Val Leu Asn Glu Val Tyr Leu Gly Lys Glu Lys Phe Asp Ser Val
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50 55 60
Leu Arg Leu His Asn Leu Gln Ile Lys Asp Lys Gly Leu Tyr Gln Cys
65 70 75 80
Ile Ile His His Lys Lys Pro Thr Gly Met Ile Arg Ile His Gln Met
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Asn Ser Glu Leu Ser Val Leu Ala Asn Phe Ser Gln Pro Glu Ile Val
100 105 110
Pro Ile Ser Asn Ile Thr Glu Asn Val Tyr Ile Asn Leu Thr Cys Ser
115 120 125
Ser Ile His Gly Tyr Pro Glu Pro Lys Lys Met Ser Val Leu Leu Arg
130 135 140
Thr Lys Asn Ser Thr Ile Glu Tyr Asp Gly Ile Met Gln Lys Ser Gln
145 150 155 160
Asp Asn Val Thr Glu Leu Tyr Asp Val Ser Ile Ser Leu Ser Val Ser
165 170 175
Phe Pro Asp Val Thr Ser Asn Met Thr Ile Phe Cys Ile Leu Glu Thr
180 185 190
Asp Lys Thr Arg Leu Leu Ser Ser Pro Phe Ser Ile Glu Leu Glu Asp
195 200 205
Pro Gln Pro Pro Pro Asp His Ile Pro Gly Ser Met Asp Pro Lys Ser
210 215 220
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Val Ser
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr
245 250 255
Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser
290 295 300
Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln
370 375 380
Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met
385 390 395 400
Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys
405 410 415
Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 58
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PD1-muFc
<400> 58
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Ile Glu Gly Arg Met Asp Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
145 150 155 160
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile
165 170 175
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys
180 185 190
Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln
195 200 205
Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln
210 215 220
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu
225 230 235 240
Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
245 250 255
Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
260 265 270
Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro
275 280 285
Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr
290 295 300
Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln
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Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly
325 330 335
Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu
340 345 350
Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn
355 360 365
His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
370 375 380
<210> 59
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Ipilimumab HC
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Phe Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Gly Trp Leu Gly Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 60
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Ipilimumab LC
<400> 60
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Phe Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
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Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
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115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 61
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Durvalumab HC
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 62
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Durvalumab LC
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
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Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
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Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人 PD-L1
<400> 63
Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser Asn
1 5 10 15
Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu Ala
20 25 30
Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln Phe
35 40 45
Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg Gln
50 55 60
Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala Leu
65 70 75 80
Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys Met
85 90 95
Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val Asn
100 105 110
Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro Val
115 120 125
Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys Ala
130 135 140
Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys Thr
145 150 155 160
Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Asn Leu Phe Asn Val Thr Ser
165 170 175
Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr Phe
180 185 190
Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile Pro
195 200 205
Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr
210 215 220
<210> 64
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人PD-L1 N-端 IgV 区
<400> 64
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr
115 120 125
<210> 65
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 66
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 66
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Ile Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 67
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 67
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Tyr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 68
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 68
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Ile Ala
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Tyr Pro Pro
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 69
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 69
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 70
　　<211> 214
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 70
　　Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
　　1 5 10 15
　　Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
　　 20 25 30
　　Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
　　 35 40 45
　　Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
　　 50 55 60
　　Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
　　65 70 75 80
　　Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Thr Pro Tyr
　　 85 90 95
　　Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
　　 100 105 110
　　Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
　　 115 120 125
　　Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
　　 130 135 140
　　Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
　　145 150 155 160
　　Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
　　 165 170 175
　　Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
　　 180 185 190
　　Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
　　 195 200 205
　　Phe Asn Arg Gly Glu Cys
　　 210
　　<210> 71
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 71
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac actgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatacta ctcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 72
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 72
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac attgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatacta ctcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 73
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 73
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac actgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatactt atcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 74
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
　<400> 74
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgcc gcgccagcca ggacgtgaac attgccgttg catggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagccgcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactatactt atcctccaac attcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 75
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
　<400> 75
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc atcggcgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tactacatct acccctacac cttcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 76
　　<211> 642
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 共同轻链的可变区
<400> 76
　　gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
　　atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc atcggcgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
　　ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgcccagc 180
　　cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
　　gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tactacatca ccccctacac cttcggccag 300
　　ggcaccaagg tggagatcaa gcgcaccgtg gccgccccca gcgtgttcat cttccccccc 360
　　agcgacgagc agctcaagag cggcaccgcc agcgtggtgt gcctgctgaa caacttctac 420
　　ccccgcgagg ccaaggtgca gtggaaggtg gacaacgccc tgcagagcgg caacagccag 480
　　gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctgagcag caccctgacc 540
　　ctgagcaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac ccaccagggc 600
　　ctgagcagcc ccgtgaccaa gagcttcaac cgcggcgagt gc 642
　　<210> 77
　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HER2变体蛋白
<400> 77
　　Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser
　　1 5 10 15
　　Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln
　　 20 25 30
　　Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser
　　 35 40 45
　　Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile
　　 50 55 60
　　Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val
　　65 70 75 80
　　Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp
　　 85 90 95
　　Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro
　　 100 105 110
　　Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys
　　 115 120 125
　　Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr
　　 130 135 140
　　Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr
　　145 150 155 160
　　Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
　　 165 170 175
　　Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
　　 180 185 190
　　Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro
　　 195 200 205
　　Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly
　　 210 215 220
　　Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly
　　225 230 235 240
　　Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr
　　 245 250 255
　　Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser
　　 260 265 270
　　Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ala
　　 275 280 285
　　Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu Ala Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp
　　 290 295 300
　　Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys
　　305 310 315 320
　　Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser
　　 325 330 335
　　Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu
　　 340 345 350
　　Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala
　　 355 360 365
　　Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile
　　 370 375 380
　　Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu
　　385 390 395 400
　　Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn
　　 405 410 415
　　Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly
　　 420 425 430
　　Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His
　　 435 440 445
　　Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe
　　 450 455 460
　　Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
　　465 470 475 480
　　Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
　　 485 490 495
　　His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
　　 500 505 510
　　Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
　　 515 520 525
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　　 530 535 540
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　　Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala
　　 565 570 575
　　Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
　　 580 585 590
　　Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
　　 595 600 605
　　Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
　　 610 615 620
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　　625 630
　　<210> 78
　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HER2变体蛋白
<400> 78
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　　 35 40 45
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　　 50 55 60
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　　65 70 75 80
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　　 85 90 95
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　　 100 105 110
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　　 115 120 125
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　　 130 135 140
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　　145 150 155 160
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　　 165 170 175
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　　 180 185 190
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　　 195 200 205
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　　 260 265 270
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　　 275 280 285
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　　 325 330 335
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　　 530 535 540
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　　545 550 555 560
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　　 565 570 575
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　　 595 600 605
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　　625 630
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　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HER2变体蛋白
<400> 79
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　　1 5 10 15
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　　 165 170 175
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　　 355 360 365
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　　 370 375 380
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　　Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
　　 515 520 525
　　Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
　　 530 535 540
　　Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp
　　545 550 555 560
　　Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Ala Ala Phe Cys Val Ala
　　 565 570 575
　　Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
　　 580 585 590
　　Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
　　 595 600 605
　　Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
　　 610 615 620
　　Arg Ala Ser Pro Leu Thr
　　625 630
　　<210> 80
　　<211> 1350
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TmabHC-knob
<400> 80
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　　agctgcgccg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcgccaggcc 120
　　cccggcaagg gcctggagtg ggtggcccgc atctacccca ccaacggcta cacccgctac 180
　　gccgacagcg tgaagggccg cttcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa caccgcctac 240
　　ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgccgtgt actactgcag ccgctggggc 300
　　ggcgacggct tctacgccat ggactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360
　　gccagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggccccca gcagcaagag caccagcggc 420
　　ggcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgagc 480
　　tggaacagcg gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc ccgccgtgct gcagagcagc 540
　　ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgacc gtgcccagca gcagcctggg cacccagacc 600
　　tacatctgca acgtgaacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagccc 660
　　aagagctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccccg cccccgagct gctgggcggc 720
　　cccagcgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccgcaccccc 780
　　gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
　　tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgcgagga gcagtacaac 900
　　agcacctacc gcgtggtgag cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
　　gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgcccgccc ccatcgagaa gaccatcagc 1020
　　aaggccaagg gccagccccg cgagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgcgaggag 1080
　　atgaccaaga accaggtgag cctgacctgc ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 1140
　　gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccccgtg 1200
　　ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctga ccgtggacaa gagccgctgg 1260
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　　<210> 81
　　<211> 1347
　　<212> DNA
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PmabHC-hole
<400> 81
　　gaggtgcagc tcgtggagag cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggcag cctgcgcctg 60
　　agctgcgccg ccagcggctt caccttcacc gactacacca tggactgggt gcgccaggcc 120
　　cccggcaagg gcctggagtg ggtggccgac gtgaacccca acagcggcgg cagcatctac 180
　　aaccagcgct tcaagggccg cttcaccctg agcgtggacc gcagcaagaa caccctgtac 240
　　ctgcagatga acagcctgcg cgccgaggac accgccgtgt actactgcgc ccgcaacctg 300
　　ggccccagct tctacttcga ctactggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcagcgcc 360
　　agcaccaagg gccccagcgt gttccccctg gcccccagca gcaagagcac cagcggcggc 420
　　accgccgccc tgggctgcct ggtgaaggac tacttccccg agcccgtgac cgtgagctgg 480
　　aacagcggcg ccctgaccag cggcgtgcac accttccccg ccgtgctgca gagcagcggc 540
　　ctgtacagcc tgagcagcgt ggtgaccgtg cccagcagca gcctgggcac ccagacctac 600
　　atctgcaacg tgaaccacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagaaggt ggagcccaag 660
　　agctgcgaca agacccacac ctgccccccc tgccccgccc ccgagctgct gggcggcccc 720
　　agcgtgttcc tgttcccccc caagcccaag gacaccctga tgatcagccg cacccccgag 780
　　gtgacctgcg tggtggtgga cgtgagccac gaggaccccg aggtgaagtt caactggtac 840
　　gtggacggcg tggaggtgca caacgccaag accaagcccc gcgaggagca gtacaacagc 900
　　acctaccgcg tggtgagcgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960
　　tacaagtgca aggtgagcaa caaggccctg cccgccccca tcgagaagac catcagcaag 1020
　　gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc cccccagccg cgaggagatg 1080
　　accaagaacc aggtgagcct gacctgcctg gtgaagggct tctaccccag cgacatcgcc 1140
　　gtggagtggg agagcaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccccgtgctg 1200
　　gacagcgacg gcagcttctt cctgtacagc aagctgaccg tggacaagag ccgctggcag 1260
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　　aagagcctga gcctgagccc cggcaag 1347
　　<210> 82
　　<211> 630
　　<212> PRT
　　<213> HER2-ECD
　　<400> 82
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　　 100 105 110
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　　 115 120 125
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　　 130 135 140
　　Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr
　　145 150 155 160
　　Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met
　　 165 170 175
　　Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser
　　 180 185 190
　　Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro
　　 195 200 205
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　　 210 215 220
　　Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly
　　225 230 235 240
　　Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr
　　 245 250 255
　　Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser
　　 260 265 270
　　Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser
　　 275 280 285
　　Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp
　　 290 295 300
　　Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys
　　305 310 315 320
　　Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser
　　 325 330 335
　　Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu
　　 340 345 350
　　Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala
　　 355 360 365
　　Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile
　　 370 375 380
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　　385 390 395 400
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　　 405 410 415
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　　 435 440 445
　　Asn Thr His Leu Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe
　　 450 455 460
　　Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp
　　465 470 475 480
　　Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly
　　 485 490 495
　　His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe
　　 500 505 510
　　Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu
　　 515 520 525
　　Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu
　　 530 535 540
　　Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp
　　545 550 555 560
　　Gln Cys Val Ala Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala
　　 565 570 575
　　Arg Cys Pro Ser Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp
　　 580 585 590
　　Lys Phe Pro Asp Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys
　　 595 600 605
　　Thr His Ser Cys Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln
　　 610 615 620
　　Arg Ala Ser Pro Leu Thr
　　625 630
　　<210> 83
　　<211> 450
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TmabHC-knob重链
<400> 83
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
　　 20 25 30
　　Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
　　 100 105 110
　　Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
　　 115 120 125
　　Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
　　 130 135 140
　　Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
　　145 150 155 160
　　Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
　　 165 170 175
　　Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
　　 180 185 190
　　Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
　　 195 200 205
　　Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
　　 210 215 220
　　Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
　　225 230 235 240
　　Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
　　 245 250 255
　　Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
　　 260 265 270
　　Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
　　 275 280 285
　　Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
　　 290 295 300
　　Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
　　305 310 315 320
　　Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
　　 325 330 335
　　Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
　　 340 345 350
　　Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
　　 355 360 365
　　Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
　　 370 375 380
　　Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
　　385 390 395 400
　　Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
　　 405 410 415
　　Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
　　 420 425 430
　　Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
　　 435 440 445
　　Gly Lys
　　 450
　　<210> 84
　　<211> 449
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> PmabHC-hole重链
<400> 84
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
　　 20 25 30
　　Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
　　 100 105 110
　　Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
　　 115 120 125
　　Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
　　 130 135 140
　　Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
　　145 150 155 160
　　Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
　　 165 170 175
　　Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
　　 180 185 190
　　Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
　　 195 200 205
　　Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
　　 210 215 220
　　Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
　　225 230 235 240
　　Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
　　 245 250 255
　　Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
　　 260 265 270
　　Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
　　 275 280 285
　　Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
　　 290 295 300
　　Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
　　305 310 315 320
　　Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
　　 325 330 335
　　Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr
　　 340 345 350
　　Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser
　　 355 360 365
　　Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
　　 370 375 380
　　Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
　　385 390 395 400
　　Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
　　 405 410 415
　　Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
　　 420 425 430
　　Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
　　 435 440 445
　　Lys
　　<210> 85
　　<211> 450
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列
<400> 85
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
　　 20 25 30
　　Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
　　 100 105 110
　　Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
　　 115 120 125
　　Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
　　 130 135 140
　　Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
　　145 150 155 160
　　Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
　　 165 170 175
　　Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
　　 180 185 190
　　Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
　　 195 200 205
　　Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
　　 210 215 220
　　Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
　　225 230 235 240
　　Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
　　 245 250 255
　　Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
　　 260 265 270
　　Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
　　 275 280 285
　　Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
　　 290 295 300
　　Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
　　305 310 315 320
　　Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
　　 325 330 335
　　Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
　　 340 345 350
　　Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
　　 355 360 365
　　Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
　　 370 375 380
　　Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
　　385 390 395 400
　　Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
　　 405 410 415
　　Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
　　 420 425 430
　　Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
　　 435 440 445
　　Gly Lys
　　 450
　　<210> 86
　　<211> 449
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链序列
<400> 86
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
　　 20 25 30
　　Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
　　 100 105 110
　　Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
　　 115 120 125
　　Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
　　 130 135 140
　　Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
　　145 150 155 160
　　Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
　　 165 170 175
　　Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
　　 180 185 190
　　Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
　　 195 200 205
　　Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
　　 210 215 220
　　Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
　　225 230 235 240
　　Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
　　 245 250 255
　　Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
　　 260 265 270
　　Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
　　 275 280 285
　　Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
　　 290 295 300
　　Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
　　305 310 315 320
　　Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
　　 325 330 335
　　Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
　　 340 345 350
　　Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
　　 355 360 365
　　Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
　　 370 375 380
　　Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu
　　385 390 395 400
　　Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys
　　 405 410 415
　　Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
　　 420 425 430
　　Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
　　 435 440 445
　　Lys
　　<210> 87
　　<211> 120
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变区序列
<400> 87
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
　　 20 25 30
　　Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
　　 100 105 110
　　Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
　　 115 120
　　<210> 88
　　<211> 119
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链可变区序列
<400> 88
　　Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
　　1 5 10 15
　　Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr
　　 20 25 30
　　Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
　　 35 40 45
　　Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe
　　 50 55 60
　　Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
　　65 70 75 80
　　Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
　　 85 90 95
　　Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
　　 100 105 110
　　Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
　　 115
　　<210> 89
　　<211> 227
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链Fc序列
　<400> 89
　　Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
　　1 5 10 15
　　Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
　　 20 25 30
　　Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
　　 35 40 45
　　Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
　　 50 55 60
　　His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
　　65 70 75 80
　　Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
　　 85 90 95
　　Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
　　 100 105 110
　　Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
　　 115 120 125
　　Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
　　 130 135 140
　　Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
　　145 150 155 160
　　Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
　　 165 170 175
　　Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
　　 180 185 190
　　Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
　　 195 200 205
　　His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
　　 210 215 220
　　Pro Gly Lys
　　225
　　<210> 90
　　<211> 227
　　<212> PRT
　　<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 重链Fc序列
　<400> 90
　　Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
　　1 5 10 15
　　Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
　　 20 25 30
　　Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
　　 35 40 45
　　Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
　　 50 55 60
　　His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
　　65 70 75 80
　　Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
　　 85 90 95
　　Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
　　 100 105 110
　　Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
　　 115 120 125
　　Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
　　 130 135 140
　　Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
　　145 150 155 160
　　Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
　　 165 170 175
　　Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val
　　 180 185 190
　　Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
　　 195 200 205
　　His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
　　 210 215 220
　　Pro Gly Lys
　　225

Claims (107)

1.与Her2抑制剂组合的免疫检查点抑制剂在制备用于治疗有需要的受试者的肿瘤的药物中的用途，
其中所述免疫检查点抑制剂能够特异性地结合PD-L1和CTLA4。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合片段。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是抗原结合片段，并且所述抗原结合片段包括Fab、Fab’、F(ab)2、Fv片段、F(ab’)2、scFv、di-scFv和/或dAb。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是双特异性抗体，并且所述双特异性抗体为全人抗体。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂是二聚体，并且所述二聚体由两条多肽链形成，所述两条多肽链中的每一条包含抗体Fc亚单位，其中所述二聚体包含两个或更多个免疫球蛋白单一可变结构域(ISVD)，所述ISVD中的至少一个特异于PD-L1，并且所述ISVD中的至少一个特异于CTLA4。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述两条多肽链中的至少一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
7.根据权利要求5-6中任一项所述的用途，其中所述两条多肽链中的每一条包含特异于PD-L1的ISVD和特异于CTLA4的ISVD。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者，所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合。
9.根据权利要求5-8中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；并且所述特异于CTLA4的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
10.根据权利要求5-9中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD的N末端融合；和
所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
11.根据权利要求5-10中任一项所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述特异于CTLA4的ISVD融合；和
所述特异于PD-L1的ISVD任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位融合。
12.根据权利要求11所述的用途，其中对于所述两条多肽链中的一条或二者：
所述特异于CTLA4的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述特异于PD-L1的ISVD的N末端融合；和
所述特异于PD-L1的ISVD的C末端任选地经由连接子与所述抗体Fc亚单位的N末端融合。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的用途，其中所述抗体Fc亚单位来源于IgG Fc亚单位。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述IgG为人IgG1。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的用途，其中所述抗体Fc亚单位包含如SEQ IDNO:35、38和39中任一项所示的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1的N-末端IgV结构域。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和/或R113，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
18.根据权利要求17所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD还能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基D61、N63、V68、M115、S117、Y123和/或R125，其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66和R113，并且其中所述人PD-L1 N-末端IgV结构域包含如SEQ IDNO:64所示的氨基酸序列。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够结合人PD-L1 N-末端IgV结构域的构象表位，其中所述构象表位包含所述人PD-L1 N-末端IgV结构域的残基I54、Y56、E58、Q66、R113、D61、N63、V68、M115、S117、Y123和R125，并且其中所述人PD-L1N-末端IgV结构域包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与PD1的结合。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD能够阻断PD-L1与CD80的结合。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD与参考抗PD-L1抗体交叉竞争结合PD-L1，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
24.根据权利要求23所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
26.根据权利要求1-25所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体为特异于PD-L1的ISVD。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的用途，其中所述参考抗PD-L1抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:5和9中任一项所示的氨基酸序列。
33.根据权利要求1-32中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:3和7中任一项所示的氨基酸序列。
35.根据权利要求1-34中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:4、8和11中任一项所示的氨基酸序列。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6、10、12、13、14和15中任一项所示的氨基酸序列。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的用途，其中所述特异于PD-L1的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD能够特异性地结合人CTLA4。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD80的结合。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD能够阻断CTLA4与CD86的结合。
41.根据权利要求1-40中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD与参考抗CTLA4抗体交叉竞争结合CTLA4，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
42.根据权利要求41所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
45.根据权利要求1-44中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体为特异于CTLA4的ISVD。
46.根据权利要求1-45中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的用途，其中所述参考抗CTLA4抗体包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR3，该重链CDR3包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列。
49.根据权利要求1-48中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR1，该重链CDR1包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
50.根据权利要求1-49中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列。
51.根据权利要求1-50中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链CDR2，该重链CDR2包含如SEQ ID NO:18、21和23中任一项所示的氨基酸序列。
52.根据权利要求1-51中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20、22和24-32中任一项所示的氨基酸序列。
53.根据权利要求1-52中任一项所述的用途，其中所述特异于CTLA4的ISVD包含重链可变结构域，该重链可变结构域包含如SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
54.根据权利要求1-53中任一项所述的用途，其中所述二聚体为同二聚体。
55.根据权利要求1-54中任一项所述的用途，其中所述连接子包含如SEQ ID NO:33-34中任一项所示的氨基酸序列。
56.根据权利要求1-55中任一项所述的用途，其中所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO:40-43、46、48和50中任一项所示的氨基酸序列。
57.根据权利要求1-56中任一项所述的用途，其中所述两条多肽链中的一条或二者包含如SEQ ID NO 40所示的氨基酸序列。
58.根据权利要求1-57中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与PD-1的结合。
59.根据权利要求1-58中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断PD-L1与CD80的结合。
60.根据权利要求1-59中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD80的结合。
61.根据权利要求1-60中任一项所述的用途，其中所述二聚体能够阻断CTLA4与CD86的结合。
62.根据权利要求1-61中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂能够抑制人Her2。
63.根据权利要求1-62中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂是Her2抗体或其抗原结合部分和/或其缀合物。
64.根据权利要求63所述的用途，其中Her2抗体选自由以下组成的组：帕妥珠单抗、曲妥珠单抗和马格妥昔单抗。
65.根据权利要求1-64中任一项所述的用途，其中所述缀合物选自由以下组成的组：DS8201a和T-DM1。
66.根据权利要求1-65中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，并且能够结合人Her2的不同表位。
67.根据权利要求1-66中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂是双特异性抗体或其抗原结合部分，并且所述双特异性抗体或其抗原结合部分具有共同轻链，并且其中所述共同轻链是指具有相同序列的两个轻链。
68.根据权利要求67所述的用途，其中，其重链能够在生理条件下或在体外蛋白质表达期间分别与所述轻链正确地组装。
69.根据权利要求1-68中任一项所述的用途，其中所述共同轻链能够分别与帕妥珠单抗的重链和曲妥珠单抗的重链组装。
70.根据权利要求1-69中任一项所述的用途，其中所述共同轻链选自帕妥珠单抗的轻链，曲妥珠单抗的轻链，或其突变体。
71.根据权利要求70所述的用途，其中该共同轻链的可变区的序列包含选自如SEQ IDNO:65至SEQ ID NO:70中第1至107位氨基酸所示的序列。
72.根据权利要求1-71中任一项所述的用途，其中，其重链可变区分别是帕妥珠单抗的重链可变区和曲妥珠单抗的重链可变区，例如，该重链可变区分别包含如SEQ ID NO:87和SEQ ID NO:88所示的序列。
73.根据权利要求1-72中任一项所述的用途，其中该重链的Fc片段序列包含如SEQ IDNO:89和SEQ ID NO:90所示的序列。
74.根据权利要求1-73中任一项所述的用途，其中，其两个重链包含如SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示的序列。
75.根据权利要求1-74中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂以如下剂量施用：0.01mg/kg至100mg/kg。
76.根据权利要求1-75中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂以如下剂量施用：20mg/kg至30mg/kg。
77.根据权利要求1-76中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以如下剂量施用：0.01mg/kg至100mg/kg。
78.根据权利要求1-77中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以如下剂量施用：3mg/kg至5mg/kg。
79.根据权利要求中任一项所述的用途1-78，其中所述Her2抑制剂以如下给药频率施用：每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次。
80.根据权利要求1-79中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂每两周一次或每三周一次施用，或者以负荷剂量施用。
81.根据权利要求1-80中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以如下给药频率施用：约每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次、每九周一次或每十二周一次。
82.根据权利要求1-81中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂每两周一次或每三周一次施用。
83.根据权利要求1-82中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。
84.根据权利要求1-83中任一项所述的用途，其中所述Her2抑制剂通过静脉内施用来施用。
85.根据权利要求1-84中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。
86.根据权利要求1-85中任一项所述的用途，其中所述免疫检查点抑制剂通过静脉内施用来施用。
87.根据权利要求1-86中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：实体肿瘤和血液肿瘤。
88.根据权利要求1-87中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：NSCLC、乳腺癌、胃癌、胃食管结合部腺癌、食管腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胆管癌、结直肠癌和尿路上皮癌。
89.根据权利要求1-88中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：Her2异常的实体肿瘤和Her2阳性的癌症。
90.根据权利要求1-89中任一项所述的用途，其中已对所述受试者施用过抗Her2抗体和/或抗PD1剂。
91.根据权利要求90所述的用途，其中所述抗Her2抗体包含曲妥珠单抗。
92.根据权利要求1-91中任一项所述的用途，其中已对所述受试者施用过化疗。
93.根据权利要求92所述的用途，其中所述化疗包括一线化疗和/或二线化疗。
94.根据权利要求93所述的用途，其中所述二线化疗包括紫杉醇加雷莫芦单抗、紫杉醇、多西他赛和/或伊立替康单药治疗。
95.一种药物组合物，包含有效量的根据权利要求1-94中任一项的所述免疫检查点抑制剂和有效量的根据权利要求1-94中任一项的所述Her2抑制剂，并且任选地包含药学可接受的赋形剂。
96.根据权利要求95所述的药物组合物在制备用于***的药物中的用途。
97.根据权利要求96所述的用途，其中所述药物组合物以如下给药频率施用：每周四次、每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每八周一次或每十二周一次。
98.根据权利要求96-97中任一项所述的用途，其中所述药物组合物以如下方式施用：静脉内、肌肉内、皮下、局部、口服、透皮、腹腔内、眼眶内、通过植入、通过吸入、鞘内、心室内或鼻内。
99.根据权利要求96-98中任一项所述的用途，其中所述药物组合物以如下剂量施用：0.01mg/kg至100mg/kg。
100.根据权利要求96-99中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：实体肿瘤和血液肿瘤。
101.根据权利要求96-100中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：NSCLC、乳腺癌、胃癌、胃食管结合部腺癌、食管腺癌、子宫癌、卵巢癌、子宫内膜癌、胆管癌、结直肠癌和尿路上皮癌。
102.根据权利要求96-101中任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自由以下组成的组：Her2异常的实体肿瘤和Her2阳性的癌症。
103.根据权利要求96-102中任一项所述的用途，其中已对患有所述肿瘤的受试者施用过抗Her2抗体和/或抗PD1剂。
104.根据权利要求103所述的用途，其中所述抗Her2抗体包含曲妥珠单抗。
105.根据权利要求103-104中任一项所述的用途，其中已对所述受试者施用过化疗。
106.根据权利要求105所述的用途，其中所述化疗包括一线化疗和/或二线化疗。
107.根据权利要求106所述的用途，其中所述二线化疗包括紫杉醇加雷莫芦单抗、紫杉醇、多西他赛和/或伊立替康单药治疗。
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