CN114225099A - 一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种中药复合多糖‑银纳米液体创可贴及其制备方法,涉及医药用品技术领域。该中药复合多糖‑银纳米液体创可贴,包括以下重量份原料:景天三七40~60份、紫锥菊30~50份、无水乙醇30~40份、蒸馏水20~40份、AgNO3溶液15~25份、PVA20~30份、壳聚糖40~60份,壳聚糖季铵盐40~60份和乙酸乙酯10~15份。通过天然中药提取物和绿色合成银纳米粒的合理复配,具有安全无毒、杀菌消肿等优点,且由该混合药物制作成的创可贴,具有成膜均匀、封闭创口、降低外界病原微生物的进入、减少创口组织液的积聚、不易脱落等优点,可弥补市面上同类型产品的不足,更好的适用于人体或动物体创口的愈合。
Description
技术领域
本发明涉及医药用品技术领域,具体为一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴及其制备方法。
背景技术
液体创可贴为液体高分子材料组成的涂抹敷料,运用于体表浅层创面。具有透气、阻菌、保护创面、促进伤口愈合、淡化疤痕等特点,液体创可贴可以在创面快速形成有一定韧性的保护膜,减少水分挥发,增强创伤组织的水合作用,营造一种湿性愈合环境。
目前市场上已开发出的液体创可贴成膜性差、促愈合和、防感染效果不佳等。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明提供了一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴及其制备方法,解决了现有的液体创可贴成膜性差、促愈合和、防感染效果不佳的问题。
为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴,包括以下重量份原料:景天三七40~60份、紫锥菊30~50份、无水乙醇30~40份、蒸馏水20~40份、AgNO3溶液15~25份、PVA20~30份、壳聚糖40~60份,壳聚糖季铵盐40~60份和乙酸乙酯10~15份;其制备方法包括:景天三七提取物和紫锥菊提取物制备,景天三七多糖的提取分离,多糖-银纳米粒的制备,液体创可贴的制备。
优选的,一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的制备方法,包括以下步骤:
S1.景天三七提取物和紫锥菊提取物制备
称取500~550g景天三七药材放入粉碎机内进行粉碎处理,使用80目的筛网对粉碎后的景天三七粉碎进行筛分,将筛分后的粉末放入烧杯中,向烧杯内加入蒸馏水浸泡8~10h,再将烧杯内溶液放入煎煮锅内煎煮2.5h,重复三次后将溶液放入离心机内,以1500~2000r/min的转速离心去除沉淀,离心后合并滤液并将滤液放入旋转蒸发仪内,浓缩至500~550mL,将浓缩液放入冷冻干燥机内制得景天三七提取物;称取500~550g紫锥菊并按上述方法制备紫锥菊提取物;
S2.景天三七多糖的提取分离
称取50~60g景天三七提取物放入烧杯内,并向烧杯内加入100~120mL的蒸馏水,再加入适量的无水乙醇,同时以50~80r/min的转速对烧杯内进行搅拌,无水乙醇添加完成后停止搅拌,将烧杯静置8~10h后取出上层清液,收集沉淀放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖,其中景天三七提取物和蒸馏水的总体积与无水乙醇的体积比为1:4;
S3.多糖-银纳米粒的制备
取12.5mg的景天三七多糖放入烧杯内,再向烧杯内加入5mL蒸馏水,配制浓度为2.5mg/mL的景天三七多糖水溶液,向另一个烧杯内加入9mM的AgNO3溶液5mL,将景天三七多糖水溶液逐滴加入至AgNO3溶液中,同时以100~120r/min的转速对烧杯内进行搅拌,滴加完成后继续对烧杯内避光搅拌6~7h,待溶液颜色变深后将溶液放入离心管中,以12000~13000r/min的转速进行离心处理,离心后沉淀物放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖-银纳米粒;
S4.液体创可贴的制备
首先向烧杯内加入去离子水,然后向烧杯内加入PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐,其中PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐的质量比为1:2:2,将烧杯放入水浴机内以40~50℃的温度水浴加热,同时以200~300r/min的转速对烧杯内进行搅拌溶解,随后向烧杯内加入混合药物,搅拌混匀后水浴机内持续升温,同时向烧杯内滴加无水乙醇,升温至97℃完全溶解后停止加热,再加入乙酸乙酯1~5mL,混匀制成液体创可贴。
优选的,所述S1步骤景天三七提取物和紫锥菊提取物制备中,景天三七粉末与蒸馏水的体积比为1:15,紫锥菊粉末与蒸馏水的体积比为1:15。
优选的,所述S4步骤液体创可贴的制备中,混合药物包括有景天三七提取物、紫锥菊提取物和景天三七多糖-银纳米粒,且三种药物的质量比例为10:10:0.32。
优选的,一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的实验方法,其特征在于:包括以下实验:
A).接触角实验
取液体创可贴2mL流延平铺于固定样品台上,待干燥30s后,使用接触角测量仪开始测量,待完全干燥后再次测量;
B).成膜时间
取液体创可贴1mL流延平铺于玻璃板上,用玻璃棒抹匀,面积约8~10cm2,将玻璃棒静止于膜上放置,计时能揭起创可贴的时间;
C).拉伸实验
将液体创可贴制作成长宽厚度为100mm*10mm*2mm的膜,在创可贴中间部分做两个间距为30mm的平行记号,将两侧标记以外的部分固定于夹头中,以300±10mm/min的拉伸速度拉伸,使样品伸长20%,且最大载荷为3N,在此拉伸位置保持60s,然后测量两平行记号之间的距离,在夹头上取下样品,自然松弛300s后,再次记录两平行记号间距离;
D).细胞实验
a.细胞增殖活性实验
取5000个RAW264.7细胞(100μL)分别放入到96孔板细胞培养板中,培养12h,加入62.5~1000μg/mL的混合药液到细胞中,每孔100μL,将细胞培养板放入细胞培养箱中培养24h,培养温度为37℃,箱内CO2浓度为5%,然后向每孔内加入20μL的MTT溶液(5mg/mL),培养4h后弃去孔中溶液,加入150μL的DMSO溶液,再将细胞培养板放入震荡机内震荡混匀10min,再使用酶标仪检测OD570;
b.抗炎活性实验
取5000个RAW264.7细胞(100μL)分别加入96孔板细胞培养板中,培养12h,每孔加入100μL的LPS溶液(0.2μmg/mL),继续培养12h,加入62.5~1000µg/mL的混合药液,100μL/孔,将细胞培养板放入细胞培养箱中培养24h,培养温度为37℃,箱内CO2浓度为5%,每孔加入20μL的MTT溶液(5mg/mL),培养4h后弃去孔中溶液,加入150μL的DMSO溶液,再将细胞培养板放入震荡机内震荡混匀10min,再使用酶标仪检测OD570;
c.牛津杯法测定药物对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌抑制作用
将保存的金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)和大肠杆菌(ATCC 25922)分别划线接种于MHA平板培养基,在37 ℃温度下培养18~24 h;挑单菌落接种至100mL的MHB液体培养基,将培养基放入摇床培养箱内,以37 ℃,200 r/min的转速摇床培养过夜,菌液备用。用灭菌棉签将稀释好的金黄色葡萄球菌菌液均匀地涂抹在无菌MHA琼脂平板上,将大肠杆菌菌液涂抹于无菌麦康凯琼脂平板上,在室温下干燥 5 min 后,分别取牛津杯3个,依次滴入灭菌水、0.5mg/mL混合药液和1.0mg/mL混合药液,每孔50μL,重复 3个样本,放置30 min后,在37℃的培养箱中培养18~24 h后,采用十字交叉法用游标卡尺测量抑菌圈直径,以直径表示抑菌圈的大小;
d.表皮创口实验
去SD大鼠8只,随机分为实验组和空白对照组,使用无菌5%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉大鼠,置俯卧位,臀背部剃毛约3cm*3cm大小区域,常规消毒,于臀背部脊柱一侧,旁开1cm处做面积为1cm2的皮肤创口,实验组大鼠创口创面每天涂抹无菌环境下配制的无菌液体创可贴,空白对照组创口创面每天涂抹不含药物的液体创可贴,分笼饲养,给予消毒饲料及饮水,连续观察直至愈合。
本发明提供了一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴及其制备方法。具备以下有益效果:
本发明通过天然中药提取物和绿色合成银纳米粒的合理复配,景天三七具有散瘀止血,宁心安神的功效,紫锥菊可刺激人体内的白细胞等免疫细胞的活力,具有良好的免疫刺激作用,减缓机体发炎,增强免疫力,提高人体抗细菌和抗病毒的能力,银纳米粒对大肠杆菌、***、沙眼衣原体等数十种致病微生物都有强烈的抑制和杀灭作用,而且不会产生耐药性。银纳米粒除杀菌以外,大多还具有抗氧化的效果,适合用于治疗预防外伤感染,该液体创可贴具有安全无毒、杀菌消肿、抗炎、促增殖、止血、止痒、祛疤、促伤口愈合等优点,且由该混合药物制作成的创可贴,具有成膜均匀、封闭创口、降低外界病原微生物的进入、减少创口组织液的积聚、不易脱落等优点,亦可适用于不规则伤口和活动关节等部位伤口,具有安全无毒、止血、止痒、祛疤、促伤口愈合等优点,可弥补市面上同类型产品的不足,更好的适用于人体或动物体创口的愈合。
附图说明
图1为本发明的液体创可贴接触角实验示意图;
图2为本发明的细胞增殖活性实验示意图;
图3为本发明的抗炎活性实验示意图;
图4为本发明的抑菌活性实验示意图;
图5为本发明的大鼠皮肤创口愈合实验示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例一:
本发明实施例提供一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴,包括以下重量份原料:景天三七60份、紫锥菊50份、无水乙醇40份、蒸馏水40份、AgNO3溶液25份、PVA30份、壳聚糖60份,壳聚糖季铵盐60份和乙酸乙酯15份;其制备方法包括:景天三七提取物和紫锥菊提取物制备,景天三七多糖的提取分离,多糖-银纳米粒的制备,液体创可贴的制备。
一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的制备方法,包括以下步骤:
S1.景天三七提取物和紫锥菊提取物制备
称取550g景天三七药材放入粉碎机内进行粉碎处理,使用80目的筛网对粉碎后的景天三七粉碎进行筛分,将筛分后的粉末放入烧杯中,向烧杯内加入蒸馏水浸泡10h,再将烧杯内溶液放入煎煮锅内煎煮2.5h,重复三次后将溶液放入离心机内,以2000r/min的转速离心去除沉淀,离心后合并滤液并将滤液放入旋转蒸发仪内,浓缩至550mL,将浓缩液放入冷冻干燥机内制得景天三七提取物;称取550g紫锥菊并按上述方法制备紫锥菊提取物;
S2.景天三七多糖的提取分离
称取60g景天三七提取物放入烧杯内,并向烧杯内加入120mL的蒸馏水,再加入适量的无水乙醇,同时以80r/min的转速对烧杯内进行搅拌,无水乙醇添加完成后停止搅拌,将烧杯静置10h后取出上层清液,收集沉淀放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖,其中景天三七提取物和蒸馏水的总体积与无水乙醇的体积比为1:4;
S3.多糖-银纳米粒的制备
取12.5mg的景天三七多糖放入烧杯内,再向烧杯内加入5mL蒸馏水,配制浓度为2.5mg/mL的景天三七多糖水溶液,向另一个烧杯内加入9mM的AgNO3溶液5mL,将景天三七多糖水溶液逐滴加入至AgNO3溶液中,同时以120r/min的转速对烧杯内进行搅拌,滴加完成后继续对烧杯内避光搅拌7h,待溶液颜色变深后将溶液放入离心管中,以13000r/min的转速进行离心处理,离心后沉淀物放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖-银纳米粒;
S4.液体创可贴的制备
首先向烧杯内加入去离子水,然后向烧杯内加入PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐,其中PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐的质量比为1:2:2,将烧杯放入水浴机内以50℃的温度水浴加热,同时以300r/min的转速对烧杯内进行搅拌溶解,随后向烧杯内加入混合药物,搅拌混匀后水浴机内持续升温,同时向烧杯内滴加无水乙醇,升温至97℃完全溶解后停止加热,再加入乙酸乙酯5mL,混匀制成液体创可贴。
S1步骤景天三七提取物和紫锥菊提取物制备中,景天三七粉末与蒸馏水的体积比为1:15,紫锥菊粉末与蒸馏水的体积比为1:15。
S4步骤液体创可贴的制备中,混合药物包括有景天三七提取物、紫锥菊提取物和景天三七多糖-银纳米粒,且三种药物的质量比例为10:10:0.32。
通过天然中药提取物和绿色合成银纳米粒的合理复配,景天三七具有散瘀止血,宁心安神的功效,紫锥菊可刺激人体内的白细胞等免疫细胞的活力,具有良好的免疫刺激作用,减缓机体发炎,增强免疫力,提高人体抗细菌和抗病毒的能力,银纳米粒对大肠杆菌、***、沙眼衣原体等数十种致病微生物都有强烈的抑制和杀灭作用,而且不会产生耐药性。银纳米粒除杀菌以外,大多还具有抗氧化的效果,适合用于治疗预防外伤感染,该液体创可贴具有安全无毒、杀菌消肿、抗炎、促增殖、止血、止痒、祛疤、促伤口愈合等优点,且由该混合药物制作成的创可贴,具有成膜均匀、封闭创口、降低外界病原微生物的进入、减少创口组织液的积聚、不易脱落等优点,亦可适用于不规则伤口和活动关节等部位伤口,具有安全无毒、止血、止痒、祛疤、促伤口愈合等优点,可弥补市面上同类型产品的不足,更好的适用于人体或动物体创口的愈合。
实施例二:
本发明实施例提供一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴,包括以下重量份原料:景天三七40份、紫锥菊30份、无水乙醇30份、蒸馏水20份、AgNO3溶液15份、PVA20份、壳聚糖40份,壳聚糖季铵盐40份和乙酸乙酯10份;其制备方法包括:景天三七提取物和紫锥菊提取物制备,景天三七多糖的提取分离,多糖-银纳米粒的制备,液体创可贴的制备。
一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的制备方法,包括以下步骤:
S1.景天三七提取物和紫锥菊提取物制备
称取500g景天三七药材放入粉碎机内进行粉碎处理,使用80目的筛网对粉碎后的景天三七粉碎进行筛分,将筛分后的粉末放入烧杯中,向烧杯内加入蒸馏水浸泡8h,再将烧杯内溶液放入煎煮锅内煎煮2.5h,重复三次后将溶液放入离心机内,以1500r/min的转速离心去除沉淀,离心后合并滤液并将滤液放入旋转蒸发仪内,浓缩至500mL,将浓缩液放入冷冻干燥机内制得景天三七提取物;称取500g紫锥菊并按上述方法制备紫锥菊提取物;
S2.景天三七多糖的提取分离
称取50g景天三七提取物放入烧杯内,并向烧杯内加入100mL的蒸馏水,再加入适量的无水乙醇,同时以50r/min的转速对烧杯内进行搅拌,无水乙醇添加完成后停止搅拌,将烧杯静置8h后取出上层清液,收集沉淀放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖,其中景天三七提取物和蒸馏水的总体积与无水乙醇的体积比为1:4;
S3.多糖-银纳米粒的制备
取12.5mg的景天三七多糖放入烧杯内,再向烧杯内加入5mL蒸馏水,配制浓度为2.5mg/mL的景天三七多糖水溶液,向另一个烧杯内加入9mM的AgNO3溶液5mL,将景天三七多糖水溶液逐滴加入至AgNO3溶液中,同时以100r/min的转速对烧杯内进行搅拌,滴加完成后继续对烧杯内避光搅拌6h,待溶液颜色变深后将溶液放入离心管中,以12000r/min的转速进行离心处理,去离心后沉淀物放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖-银纳米粒;
S4.液体创可贴的制备
首先向烧杯内加入去离子水,然后向烧杯内加入PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐,其中PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐的质量比为1:2:2,将烧杯放入水浴机内以40℃的温度水浴加热,同时以200r/min的转速对烧杯内进行搅拌溶解,随后向烧杯内加入混合药物,搅拌混匀后水浴机内持续升温,同时向烧杯内滴加无水乙醇,升温至97℃完全溶解后停止加热,再加入乙酸乙酯1mL,混匀制成液体创可贴。
S1步骤景天三七提取物和紫锥菊提取物制备中,景天三七粉末与蒸馏水的体积比为1:15,紫锥菊粉末与蒸馏水的体积比为1:15。
S4步骤液体创可贴的制备中,混合药物包括有景天三七提取物、紫锥菊提取物和景天三七多糖-银纳米粒,且三种药物的质量比例为10:10:0.32。
通过天然中药提取物和绿色合成银纳米粒的合理复配,景天三七具有散瘀止血,宁心安神的功效,紫锥菊可刺激人体内的白细胞等免疫细胞的活力,具有良好的免疫刺激作用,减缓机体发炎,增强免疫力,提高人体抗细菌和抗病毒的能力,银纳米粒对大肠杆菌、***、沙眼衣原体等数十种致病微生物都有强烈的抑制和杀灭作用,而且不会产生耐药性。银纳米粒除杀菌以外,大多还具有抗氧化的效果,适合用于治疗预防外伤感染,该液体创可贴具有安全无毒、杀菌消肿、抗炎、促增殖、止血、止痒、祛疤、促伤口愈合等优点,且由该混合药物制作成的创可贴,具有成膜均匀、封闭创口、降低外界病原微生物的进入、减少创口组织液的积聚、不易脱落等优点,亦可适用于不规则伤口和活动关节等部位伤口,具有安全无毒、止血、止痒、祛疤、促伤口愈合等优点,可弥补市面上同类型产品的不足,更好的适用于人体或动物体创口的愈合。
实施例三:
如图1-5所示,一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的实验方法,包括以下实验:
A).接触角实验
取液体创可贴2mL流延平铺于固定样品台上,待干燥30S后,使用接触角测量仪开始测量,待完全干燥后再次测量;图1a和b中,水滴可瞬间被混合药物粉末吸收,表明混合药物粉末吸水性好;图1c中,液体创可贴成膜30s时,其未完全干燥,此时测量固液接触角为35.0°,表明此时的创可贴有亲水性、浸润性;而图1d中,当液体创可贴干燥后,测定的固液接触角为64.5°,其接触角较成膜30s时有所增加,但均小于90°,表明此时的创可贴也有一定的亲水性、浸润性。该特性有利于创面组织渗出液的吸附,减少渗出液在创口的聚集,避免外界病原菌的滋生,降低感染的可能性。
B).成膜时间
取液体创可贴1mL流延平铺于玻璃板上,用玻璃棒抹匀,面积约8~10cm2,将玻璃棒静止于膜上放置,计时能揭起创可贴的时间;如下表所示,液体创可贴中,随乙酸乙酯用量的增加,液体创可贴平均成膜时间减少,成膜时间在1-2min以内,且不会出现脱落的情况。结果表明,实验中液体创可贴成膜时间短且不易自然脱落,该特性有利于快速、持久封闭创口创面,隔断外界环境,降低感染发生的概率,促进局部稳态的恢复,为创口愈合提供有利环境。
C).拉伸实验
将液体创可贴制作成长宽厚度为100mm*10mm*2mm的膜,在创可贴中间部分做两个间距为30mm的平行记号,将两侧标记以外的部分固定于夹头中,以300±10mm/min的拉伸速度拉伸,使样品伸长20%,且最大载荷为3N,在此拉伸位置保持60s,然后测量两平行记号之间的距离,在夹头上取下样品,自然松弛300s后,再次记录两平行记号间距离;如下表所示,当创可贴被拉长后,随乙酸乙酯用量的减少,其恢复到初始长度的能力减少,也就是弹性变小。
D).细胞实验
a.细胞增殖活性实验
取5000个RAW264.7细胞(100μL)分别放入到96孔板细胞培养板中,培养12h,加入62.5~1000μg/mL的混合药液到细胞中,每孔100μL,将细胞培养板放入细胞培养箱中培养24h,培养温度为37℃,箱内CO2浓度为5%,然后向每孔内加入20μL的MTT溶液(5mg/mL),培养4h后弃去孔中溶液,加入150μL的DMSO溶液,再将细胞培养板放入震荡机内震荡混匀10min,再使用酶标仪检测OD570;药物对RAW264.7细胞增殖活性效果见图2。结果表明,当药物浓度在62.5~1000µg/mL浓度范围内,随混合药物浓度的升高,其促进RAW264.7增殖的效果越好;与空白对照组相比,当药物浓度在500~1000µg/mL浓度范围内时,药物可以显著促进RAW264.7细胞的增殖;其余浓度范围内,药物促RAW264.7细胞增殖的效果不显著。
b.抗炎活性实验
取5000个RAW264.7细胞(100μL)分别加入96孔板细胞培养板中,培养12h,每孔加入100μL的LPS溶液(0.2μmg/mL),继续培养12h,加入62.5~1000µg/mL的混合药液,100μL/孔,将细胞培养板放入细胞培养箱中培养24h,培养温度为37℃,箱内CO2浓度为5%,每孔加入20μL的MTT溶液(5mg/mL),培养4h后弃去孔中溶液,加入150μL的DMSO溶液,再将细胞培养板放入震荡机内震荡混匀10min,再使用酶标仪检测OD570;药物体外抗炎活性评价见图3。结果显示,与LPS组相比较,药液浓度在125~1000µg/mL范围内时,其可以显著缓解LPS对RAW264.7细胞的炎性损伤,在药液浓度高于500µg/mL时,可以使RAW264.7细胞恢复至正常水平。
c.牛津杯法测定药物对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌抑制作用
将保存的金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)和大肠杆菌(ATCC 25922)分别划线接种于MHA平板培养基,在37 ℃温度下培养18~24 h;挑单菌落接种至100mL的MHB液体培养基,将培养基放入摇床培养箱内,以37 ℃,200 r/min的转速摇床培养过夜,菌液备用。用灭菌棉签将稀释好的菌液均匀地涂抹在无菌MHA琼脂平板上,在室温下干燥 5 min 后,分别取牛津杯3个,依次滴入灭菌水、0.5mg/mL混合药液和1.0mg/mL混合药液,每孔50μL,重复 3个样本,放置30 min后,在37 ℃的培养箱中培养18~24 h后,采用十字交叉法用游标卡尺测量抑菌圈直径,以直径表示抑菌圈的大小;如图 4所示,其中A为金黄色葡萄球菌; B为大肠杆菌;a为灭菌水;b为0.5mg/mL混合药液; c为1.0mg/mL混合药液药物抑制金黄色葡萄球菌(29213)结果显示,当药物浓度0.5 mg/mL,其抑菌直径为32.8mm;当药物浓度1.0mg/mL,其抑菌直径为34.0mm。药物抑制大肠杆菌(25922)结果显示,当药物浓度0.5 mg/mL,其抑菌直径为25.1mm;当1.0mg/mL,其抑菌直径为31.0mm。综上,与空白组相比,混合药液均有明显的抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的活性,且随着药物浓度的增加,其对金葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果逐渐增强。
d.表皮创口实验
去SD大鼠8只,随机分为实验组和空白对照组,使用无菌5%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉大鼠,置俯卧位,臀背部剃毛约3cm*3cm大小区域,常规消毒,于臀背部脊柱一侧,旁开1cm处做面积为1cm2的皮肤创口,实验组大鼠创口创面每天涂抹无菌环境下配制的无菌液体创可贴,空白对照组创口创面每天涂抹不含药物的液体创可贴,分笼饲养,给予消毒饲料及饮水,连续观察直至愈合。大鼠皮肤创口实验见图5。空白对照在和给药实验组同时做同样大小皮肤开放性创口,空白对照组涂抹不含药物的创可贴基质,实验组涂抹创可贴,第三天可见实验组肉芽组织开始填平创口,创面变小,而空白对照组肉芽组织开始出现,创口创面未见变小。第五天,实验组创口进入组织改建期,组织结构基本恢复正常,而对照组在第七天才出现同样的改善。由上可见,液体创可贴可显著改善促进组织修复和创伤愈合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (6)
1.一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴,其特征在于:包括以下重量份原料:景天三七40~60份、紫锥菊30~50份、无水乙醇30~40份、蒸馏水20~40份、AgNO3溶液15~25份、PVA20~30份、壳聚糖40~60份,壳聚糖季铵盐40~60份和乙酸乙酯10~15份;其制备方法包括:景天三七提取物和紫锥菊提取物制备,景天三七多糖的提取分离,多糖-银纳米粒的制备,液体创可贴的制备。
2.根据权利要求1所述的一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1.景天三七提取物和紫锥菊提取物制备
称取500~550g景天三七药材放入粉碎机内进行粉碎处理,使用80目的筛网对粉碎后的景天三七粉碎进行筛分,将筛分后的粉末放入烧杯中,向烧杯内加入蒸馏水浸泡8~10h,再将烧杯内溶液放入煎煮锅内煎煮2.5h,重复三次后将溶液放入离心机内,以1500~2000r/min的转速离心去除沉淀,离心后合并滤液并将滤液放入旋转蒸发仪内,浓缩至500~550mL,将浓缩液放入冷冻干燥机内制得景天三七提取物;称取500~550g紫锥菊并按上述方法制备紫锥菊提取物;
S2.景天三七多糖的提取分离
称取50~60g景天三七提取物放入烧杯内,并向烧杯内加入100~120mL的蒸馏水,再加入适量的无水乙醇,同时以50~80r/min的转速对烧杯内进行搅拌,无水乙醇添加完成后停止搅拌,将烧杯静置8~10h后取出上层清液,收集沉淀放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖,其中景天三七提取物和蒸馏水的总体积与无水乙醇的体积比为1:4;
S3.多糖-银纳米粒的制备
取12.5mg的景天三七多糖放入烧杯内,再向烧杯内加入5mL蒸馏水,配制浓度为2.5mg/mL的景天三七多糖水溶液,向另一个烧杯内加入9mM的AgNO3溶液5mL,将景天三七多糖水溶液逐滴加入至AgNO3溶液中,同时以100~120r/min的转速对烧杯内进行搅拌,滴加完成后继续对烧杯内避光搅拌6~7h,待溶液颜色变深后将溶液放入离心管中,以12000~13000r/min的转速进行离心处理,离心后沉淀物放入冷冻干燥机内进行冷冻干燥处理,制得景天三七多糖-银纳米粒;
S4.液体创可贴的制备
首先向烧杯内加入去离子水,然后向烧杯内加入PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐,其中PVA、壳聚糖和壳聚糖季铵盐的质量比为1:2:2,将烧杯放入水浴机内以40~50℃的温度水浴加热,同时以200~300r/min的转速对烧杯内进行搅拌溶解,随后向烧杯内加入混合药物,搅拌混匀后水浴机内持续升温,同时向烧杯内滴加无水乙醇,升温至97℃完全溶解后停止加热,再加入乙酸乙酯1~5mL,混匀制成液体创可贴。
3.根据权利要求2所述的一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的制备方法,其特征在于:所述S1步骤景天三七提取物和紫锥菊提取物制备中,景天三七粉末与蒸馏水的体积比为1:15,紫锥菊粉末与蒸馏水的体积比为1:15。
4.根据权利要求2所述的一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的制备方法,其特征在于:所述S4步骤液体创可贴的制备中,混合药物包括有景天三七提取物、紫锥菊提取物和景天三七多糖-银纳米粒,且三种药物的质量比例为10:10:0.32。
5.根据权利要求1所述的一种中药复合多糖-银纳米液体创可贴的实验方法,其特征在于:包括以下实验:
A).接触角实验
取液体创可贴2mL流延平铺于固定样品台上,待干燥30s后,使用接触角测量仪开始测量,待完全干燥后再次测量;
.成膜时间
取液体创可贴1mL流延平铺于玻璃板上,用玻璃棒抹匀,面积约8~10cm2,将玻璃棒静止于膜上放置,计时能揭起创可贴的时间;
.拉伸实验
将液体创可贴制作成长宽厚度为100mm*10mm*2mm的膜,在创可贴中间部分做两个间距为30mm的平行记号,将两侧标记以外的部分固定于夹头中,以300±10mm/min的拉伸速度拉伸,使样品伸长20%,且最大载荷为3N,在此拉伸位置保持60s,然后测量两平行记号之间的距离,在夹头上取下样品,自然松弛300s后,再次记录两平行记号间距离;
D).细胞实验
a.细胞增殖活性实验
取5000个RAW264.7细胞(100μL)分别放入到96孔板细胞培养板中,培养12h,加入62.5~1000μg/mL的混合药液到细胞中,每孔100μL,将细胞培养板放入细胞培养箱中培养24h,培养温度为37℃,箱内CO2浓度为5%,然后向每孔内加入20μL的MTT溶液(5mg/mL),培养4h后弃去孔中溶液,加入150μL的DMSO溶液,再将细胞培养板放入震荡机内震荡混匀10min,再使用酶标仪检测OD570;
b.抗炎活性实验
取5000个RAW264.7细胞(100μL)分别加入96孔板细胞培养板中,培养12h,每孔加入100μL的LPS溶液(0.2μmg/mL),继续培养12h,加入62.5~1000µg/mL的混合药液,100μL/孔,将细胞培养板放入细胞培养箱中培养24h,培养温度为37℃,箱内CO2浓度为5%,每孔加入20μL的MTT溶液(5mg/mL),培养4h后弃去孔中溶液,加入150μL的DMSO溶液,再将细胞培养板放入震荡机内震荡混匀10min,再使用酶标仪检测OD570;
c.牛津杯法测定药物对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌抑制作用
将保存的金黄色葡萄球菌(ATCC 29213)和大肠杆菌(ATCC 25922)分别划线接种于MHA平板培养基,在37 ℃温度下培养18~24 h;挑单菌落接种至100mL的MHB液体培养基,将培养基放入摇床培养箱内,以37 ℃,200 r/min的转速摇床培养过夜,菌液备用。
6.用灭菌棉签将稀释好的金黄色葡萄球菌菌液均匀地涂抹在无菌MHA琼脂平板上,将大肠杆菌菌液涂抹于无菌麦康凯琼脂平板上,在室温下干燥 5 min 后,分别取牛津杯3个,依次滴入灭菌水、0.5mg/mL混合药液和1.0mg/mL混合药液,每孔50μL,重复 3个样本,放置30 min后,在37 ℃的培养箱中培养18~24 h后,采用十字交叉法用游标卡尺测量抑菌圈直径,以直径表示抑菌圈的大小;
d.表皮创口实验
去SD大鼠8只,随机分为实验组和空白对照组,使用无菌5%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉大鼠,置俯卧位,臀背部剃毛约3cm*3cm大小区域,常规消毒,于臀背部脊柱一侧,旁开1cm处做面积为1cm2的皮肤创口,实验组大鼠创口创面每天涂抹无菌环境下配制的无菌液体创可贴,空白对照组创口创面每天涂抹不含药物的液体创可贴,分笼饲养,给予消毒饲料及饮水,连续观察直至愈合。
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