CN114213539B - 可结合cd4的纳米抗体4nb357及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种可结合CD4的纳米抗体4NB357，包括3个互补决定区CDR1‑3，序列如SEQ ID NO:1‑3所示。本发明通过制备CD4蛋白、利用噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等，筛选到特异性结合CD4的纳米抗体VHH，鉴定了其CDR序列，并构建了人源化抗体；并利用评估抗体在治疗HIV感染的疗效。本发明利用CD4结合的纳米抗体为HIV感染的临床治疗以及CD4淋巴瘤的临床治疗提供潜在的纳米抗体新药，双靶向抗体新药，基因治疗新药以及CAR细胞治疗等。

Description

可结合CD4的纳米抗体4NB357及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域。更特别地，涉及一种可结合CD4的纳米抗体，还涉及所述纳米抗体在制备HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物和诊断剂中的应用。
背景技术
CD4是T细胞表面上表达的重要受体分子，但同时也是病毒例如HIV等攻击T细胞的靶点。报道，HIV主要通过包膜表面的糖蛋白gp120与宿主细胞表面的特定受体（例如CD4）接触而影响病毒进入细胞的过程。抑制gp120和CD4的结合，可以有效地抑制HIV-1对宿主细胞的感染。另外，由于T细胞肿瘤也表达CD4。因此，可考虑以CD4为靶点，利用抗CD4抗体来治疗HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤。
1993年，一种来源于骆驼科的新型天然抗体被发现。该抗体天然缺失轻链而只由重链组成，其重链包含两个恒定区（CH2和CH3）、一个铰链区和一个重链可变区（Variableheavy chain domain，VHH，即抗原结合位点），该重链可变区的相对分子质量约为13 KDa，仅为常规抗体的1/10，且分子高度和直径均在纳米级别，是目前可获得的最小的功能性抗体片段，因此又被称为纳米单抗（Nanobody，Nb）。因纳米单抗稳定性高（90℃条件下仍不会降解）、亲和力高、与人源抗体同源性超过80%、毒性和免疫原性均较低等特点，最近纳米单抗被广泛用于免疫诊断试剂盒研发、影像学研发以及针对肿瘤、炎症、传染病和神经***疾病等领域的抗体药物研发。
我们期望通过新的技术手段，筛选出获得能够结合CD4的抗体，为预防和治疗CD4相关疾病例如HIV感染或CD4阳性T细胞肿瘤等提供潜在新药。
发明内容
本发明通过用抗原免疫骆驼，获取骆驼源纳米单抗及其VHH，用于治疗HIV感染的病人。基于这些研究，本发明提供了一种可结合CD4的纳米抗体，其特征在于，包括3个互补决定区CDR1-3，序列如SEQ ID NO:1-3所示。
在一个具体实施方案中，所述纳米抗体还包括4个框架区FR1-4，所述FR1-4与所述CDR1-3按顺序交错排列。例如，可将FR1-4序列设计为如SEQ ID NO:4-7所示（羊驼源），但本发明的范围不限于此。抗体的特异性识别和结合能力主要由CDR区序列决定，FR序列影响不大，可根据物种来设计，这是本领域公知的。可设计人源、鼠源或骆驼源的FR区序列来连接上述CDR，从而得到一个可结合CD4的纳米抗体。
在一个具体实施方案中，所述纳米抗体为骆驼源的VHH或人源化的VHH。
本发明还提供了上述纳米抗体在制备CD4检测剂中的应用。
本发明还提供了上述纳米抗体在制备HIV或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物中的应用。
本发明还提供了上述纳米抗体在制备针对HIV或CD4阳性的T细胞肿瘤的CAR-T治疗剂中的应用。
本发明还提供了编码上述纳米抗体的核酸。
本发明还提供了上述核酸在制备HIV感染或CD4阳性的T细胞肿瘤的治疗药物中的应用。
本发明针对HIV进行纳米抗体药物开发，通过制备CD4蛋白、免疫双峰骆驼、利用噬菌体库展示纳米单抗的平台技术等，筛选到特异性结合CD4的纳米抗体VHH，鉴定了其CDR序列，并构建了人源化的VHH-huFc1；同时利用假病毒中和实验评估4NB在治疗HIV感染的疗效。本发明利用CD4结合的纳米抗体为HIV感染的临床治疗以及CD4淋巴瘤的临床治疗提供潜在的纳米抗体新药，双靶向抗体新药，基因治疗新药以及CAR细胞治疗等。
附图说明
图1为CD4第3和4次免疫羊驼一周后的抗血清效价检测曲线；
图2为不同稀释度的第4次免疫骆驼一周后的抗血清抑制HIV假病毒体外感染ghost细胞的曲线，以免疫前的血清为对照；
图3为CD4-VHH噬菌体抗体文库为模板扩增的PCR产物的电泳图；
图4为CD4-VHH噬菌体抗体文库的淘选鉴定，其中，A为噬菌体文库针对CD4蛋白淘选后ELISA检测统计图；B为从第二轮(2nd)和第三轮(3rd)淘选后的噬菌体抗体文库各挑选40个和46个克隆进行噬菌体ELISA检测统计图；
图5为抗体4NB357中和HIV假病毒感染实验统计图，JRFL为HIV假病毒，MuLv为无关对照病毒，X轴为抗体浓度，Y轴为病毒的相对抑制率。
具体实施方式
1. 免疫原的制备
我们依据CD4蛋白序列和基因序列信息，分析并设计了可有效诱导骆驼产生针对CD4蛋白的特异性抗体的多肽CD4，在C端连接His-tag（CD4-his）或兔Fc（CD4-rFc）用于后续纯化及检测。
2. 羊驼免疫与抗血清的获得
用250 μg CD4-rFc蛋白与250 μl弗氏完全佐剂的乳化混合物对羊驼进行初免，在第14天、28天、42天用CD4-rFc蛋白与250 μl弗氏不完全佐剂加强免疫3次，第2次和第3次免疫1周后，采血检测抗血清滴度；第4次免疫1周后，采血200 ml用于噬菌体抗体库的构建。
抗血清效价通过ELISA检测，用浓度为0.5 μg/ml的CD4-his蛋白包被检测板，每孔加入梯度稀释的抗血清或者纯化的抗体100 μl（对照为免疫前骆驼血清)，37℃孵育1.5 h，洗涤2次，每孔加入1：10000稀释的辣根过氧化物酶标记的Goat anti-Llamma IgG (H+L)二抗，37℃孵育1 h，洗涤4-6次后，加100 μl TMB底物，37℃孵育10 min，50 μl 0.2 M的H2SO4中止反应，测定OD 450nm。ELISA检测血清效价规定为在OD450是空白对照的2.1倍以上并且大于0.2的最高稀释倍数。
结果如图1所示，3免和4免的抗血清效价分别为3.28×106和9.84×106。由此可见，该抗原可诱导骆驼产生特异性针对CD4蛋白的高滴度抗血清。
为了进一步验证该高滴度的骆驼抗血清是否能有效阻止HIV病毒感染，进行病毒感染的中和实验。将不同稀释浓度的抗血清和免疫前血清分别与HIV病毒共同孵育60 min，随后转移到ghost细胞，48 h后通过Glo Max化学发光酶标仪（Promega）检测病毒载量并计算中和效果。中和实验结果显示，CD4诱导的抗血清抑制90% HIV感染的ID90为540倍稀释度以上（图2）。综上所述，CD4诱导了高滴度抗血清，同时该抗血清具有高效抑制HIV假病毒感染的能力。
3. VHH噬菌体库构建及淘选
收集200 ml免疫后骆驼的外周血，利用淋巴细胞分离液（GE Ficoll-Paque Plus）分离获得骆驼的PBMC，根据TRIzol操作手册，提取RNA，并利用oligo(dT)反转为cDNA,通过引物扩增，以及分子克隆等技术，将骆驼的VHH基因克隆至phagemid质粒，转化TG1细菌，得到VHH噬菌体库。
为了进一步鉴定CD4-VHH噬菌体库是否构建成功，通过PCR扩增免疫CD4骆驼的VHH目的基因，可以看出目的条带为500 bp，大小符合预期（图3），说明该CD4-VHH噬菌体抗体文库里含有VHH基因。挑选50个克隆进行测序，测序结果显示，所测序列没有完全一致的重复序列；比对结果显示，差异序列大多在CDR结合区。经检测，该构建了一个CD4-VHH噬菌体抗体文库的库容为1.6×109，阳性率为100%，序列多样性（Diversity）为100%，有效***率（Inframe rate）大于95%。
在M13KO7辅助噬菌体的帮助下，用VHH-phagemid转化的细菌，进行噬菌体抗体库的复苏，并用PEG/NaCl进行沉淀。将包被有50 μg/ml的CD4-His蛋白进行三次富集噬菌体抗体库。将富集的噬菌体，洗脱、转化、涂板、挑取单克隆进行噬菌体与CD4蛋白ELISA的结合鉴定，将结合读值>1.0的克隆进行测序，并克隆至表达载体phv3，转染293tt细胞表达生产纳米单抗。
淘选后的文库与CD4蛋白进行结合检测。噬菌体ELISA结果显示，没有富集前的CD4-VHH噬菌体文库与CD4蛋白的结合读值为1.71，经过一轮、二轮、三轮富集后的噬菌体文库读值分别为2.5、3.1、3.1（图4A）。为了进一步验证富集后的文库中结合CD4-VHH蛋白的阳性噬菌体率，从第2轮和第3轮富集后的文库里各挑选了40、46个克隆进行单个噬菌体ELISA检测。结果显示，第2轮文库里，57.5%的单个噬菌体克隆为阳性，第3轮文库里82.6%的噬菌体克隆克隆为阳性，而且结合的平均读值在3.0左右（图4B），通过CD4蛋白淘选成功的富集了高结合力的CD4-VHH噬菌体文库。其中,筛选出抗体4NB357,CDR1-3的序列如SEQ ID NO:1-3所示,FR1-4的序列如SEQID NO:4-7所示。
4. VHH-huFc真核表达
通过分子克隆技术，将文库筛选的阳性克隆VHH基因融合人的Fc基因并***在pCDNA3.4真核表达载体，构建形成Nb-huFc-pCDNA3.4表达质粒。将构建好的Nb-huFc-pCDNA3.4，转染293tt细胞，表达生产Nb-huFc(4NB)。收集细胞上清进行ELISA测定。
对抗体4NB357与CD4蛋白的亲和力测定试验。应用Fortebio生物分子相互作用平台检测亲和力。将抗体4NB357固化至Anti-human IgG Fc Capture Biosensors(AHC)探头上，固化时间400s,再结合抗原CD4-his蛋白，结合时间180s,解离时间180s，观察抗体-抗原的结合解离情况，由仪器拟合曲线，导出数据。亲和力测定结果如表1所示，大部分的抗体的亲和力能达到10-8或10-9（Nano mole级）。由此可见，我们获得了具有高亲和力的VHH-huFc1（C9NB）抗体，可用于检测CD4。
表1 4NB357的亲和力数据
Clone ID Ka(1/MS) Kd(1/S) KD(M) Response(nm)
4NB357 9.05E+04 <1.0E-07 <1.0E-12 0.35
5. 4NB357阻断HIV感染ghost细胞
将抗体4NB357稀释至1 μg/ml作为起始浓度，3倍比梯度稀释，共设8个梯度，分别与JRFL病毒一起，于5% CO237℃下共孵育1个小时，添加1.0 x 104个ghost细胞，5% CO237℃温箱培养48小时后，移除细胞上清，加入100 μl/孔的Glolysis buffer（提前恢复至室温），轻晃培养板使细胞充***解,接着转移50 μl/孔细胞裂解物于96孔白色荧光酶标板中（Costar），再加入50 μl/孔 Brite-Glo luciferase底物（提前恢复至室温），涡旋震荡混匀，立即放入Glo Max化学发光酶标仪（Promega）进行检测。中和滴度（IC50）表述为50%抑制率时的抗体浓度。
结果如图5所示，抗体4NB357的IC50为14.7046 ng/ml。
由以上实验结果可知，抗体4NB357及其人源化形式均可对特异性地识别、结合CD4，阻断CD4的配体与CD4的结合，从而抑制与CD4通路相关的疾病，例如HIV感染、CD4阳性的T细胞肿瘤等。因为抗体4NB357能够识别细胞表面的CD4分子，因此其序列也可以应用于CAR（Chimeric Antigen Receptor,抗原嵌合受体,由VHH序列融合第三代或者***CD28-4-1BB-CD3zeta分子序列构成）细胞***或HIV感染。
另外因为抗体4NB357能识别细胞表面的CD4分子，因此也可以通过偶联药物用于ADC（Antibody-drug conjugate,抗体偶联药物）治疗或者偶联同位素用于依赖抗体的分子影像诊断等。也可将编码抗体4NB357的核酸搭载在AAV***中，用于治疗作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 源道隆（苏州）医学科技有限公司
<120> 可结合CD4的纳米抗体4NB357及其应用
<160> 7
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Tyr
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Ala
<210> 6
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Asn Val Ala Asp Ser Met Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
1               5                   10                  15
Ala Arg Lys Thr Val Ser Leu Gln Leu Thr Asn Leu Lys Pro Glu Asp
            20                  25                  30
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
        35
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ala
1               5                   10

Claims (8)

1.一种可结合CD4的纳米抗体，其特征在于，包括3个互补决定区CDR1-3，序列分别如SEQ ID NO:1-3所示。
2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体还包括4个框架区FR1-4，所述FR1-4与所述CDR1-3按顺序交错排列。
3.根据权利要求2所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体为骆驼源的VHH或人源化的VHH。
4.权利要求1-3中任一项所述的纳米抗体在制备CD4检测剂中的应用。
5.权利要求1-3中任一项所述的纳米抗体在制备HIV的治疗药物中的应用。
6.权利要求1-3中任一项所述的纳米抗体在制备针对HIV的CAR-T治疗剂中的应用。
7.一种核酸，其特征在于，编码权利要求1-3中任一项所述的纳米抗体。
8.权利要求7所述的核酸在制备HIV感染的治疗药物中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Identification of a CD4-binding site-directed antibody with ADCC activity from a chronic HIV-1B′-infected Chinese donor;Yuanyuan Hu;《Virus Research》;第302卷;第1-10页 *
人CD4 分子及其治疗性抗体的研究进展;胡迪超;《中国生物制品学杂志》;第23卷(第8期);第896-900页 *

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