CN114208968A - 一种蛋鸡饲料的添加剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及禽类饲料制备技术领域，具体涉及一种蛋鸡饲料的添加剂及其制备方法与应用。所述添加剂包括松针粉和马尾藻酶解物，所述松针粉和所述马尾藻酶解物的质量比为3:1‑3，包括松针粉和马尾藻酶解物，可以有效提升鸡蛋中的磷脂、β‑胡萝卜素、锌和硒的含量，同时还可以提升蛋壳的硬度、降低蛋壳的脆性。
Description
技术领域
本申请涉及禽类饲料制备技术领域，具体涉及一种蛋鸡饲料的添加剂及其制备方法与应用。
背景技术
鸡蛋是一种营养丰富、食用方便的食品，随着人们生活水平的提高和对健康生活的追求，营养成分更为丰富、营养组成更为合理的鸡蛋产品逐渐成为消费者选择鸡蛋的标准，因此如何通过调配蛋鸡的饲料成分，得到营养价值更高的鸡蛋产品，是鸡蛋行业发展的重要方向，但鸡蛋蛋壳较脆，容易造成鸡蛋破碎，成为鸡蛋行业发展的一大阻碍。
松针是松属类植物的主要副产物之一，马尾藻是一种重要的经济褐藻，其含有丰富的多糖和多酚类物质，但这两种物质都存在着较难吸收利用、功能成分难以释放的问题，目前，如何进行物质的前处理和配合使用，是解决这一问题的关键方向之一。
发明内容
本申请提供了一种蛋鸡饲料的添加剂及其制备方法与应用，以解决鸡蛋蛋壳硬度较低的技术问题。
第一方面，本申请提供了一种蛋鸡饲料的添加剂，所述添加剂包括松针粉和马尾藻酶解物，所述松针粉和所述马尾藻酶解物的质量比为3:1-3。
可选的，所述马尾藻酶解物包括褐藻胶裂解酶，所述褐藻胶裂解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
可选的，所述褐藻胶裂解酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
可选的，所述松针粉的细度为100目以上。
第二方面，本申请提供了一种所述蛋鸡饲料的添加剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：
得到松针粉和马尾藻粉末；
将所述马尾藻粉末和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液；
通过所述马尾藻粗酶液，得到马尾藻酶解物；
将所述松针粉和所述马尾藻酶解物混合，得到蛋鸡饲料的添加剂。
可选的，所述方法还包括，将所述松针粉进行高压蒸汽***处理。
可选的，所述褐藻胶裂解酶的质量浓度为3％-5％。
可选的，所述酶解的温度为38-45℃，所述酶解的时间为8-12h。
可选的，所述将所述马尾藻粉末和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液，具体包括：
将所述马尾藻粉末与水混合，得到料液比为1:4-6的马尾藻悬浮液；
将所述马尾藻悬浮液和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液。
第三方面，本申请提供了一种蛋鸡饲料的添加剂的应用，所述应用包括将第一方面所述的添加剂，或将第二方面所述方法制得的添加剂用于蛋鸡饲料中提升蛋壳的硬度和/或降低蛋壳的脆性。
本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
本申请实施例提供的蛋鸡饲料的添加剂，包括松针粉和马尾藻酶解物，可以有效提升鸡蛋中的磷脂、β-胡萝卜素、锌和硒的含量，同时还可以提升蛋壳的硬度、降低蛋壳的脆性。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本发明的实施例，并与说明书一起用于解释本发明的原理。
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请实施例提供的一种所述蛋鸡饲料的添加剂的制备方法的流程示意图；
图2为本申请实施例提供的褐藻胶裂解酶VH352的电泳图；
图3为本申请实施例提供的褐藻胶裂解酶VH352在不同温度下的酶活性；
图4为本申请实施例提供的褐藻胶裂解酶VH352在不同pH下的酶活性。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
第一方面，本申请提供了一种蛋鸡饲料的添加剂，所述添加剂包括松针粉和马尾藻酶解物，所述松针粉和所述马尾藻酶解物的质量比为3:1-3。
控制所述松针粉和所述马尾藻酶解物的质量比为3:1-3，如果质量比大3:1，会出现鸡蛋中磷脂和锌含量偏低的不利效果；如果质量比小于1:1，会出现鸡蛋中β-胡萝卜素和硒含量偏低的不利效果；且鸡蛋的蛋壳品质都不能达到最好。
作为一种可选的实施方式，所述马尾藻酶解物包括褐藻胶裂解酶，所述褐藻胶裂解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
具体地，选用褐藻胶裂解酶，并用其进行酶解的原因是其可高效水解马尾藻细胞壁中的褐藻胶，实现马尾藻的水解破壁，释放有助于蛋鸡生长和产蛋的功能性成分，使用其他酶会出现马尾藻破壁效率不高、饲喂效果不明显的不利效果。
作为一种可选的实施方式，所述褐藻胶裂解酶的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
作为一种可选的实施方式，所述松针粉的细度为目以上。
控制所述松针粉的细度为100目以上的原因是增加松针粉的比表面积，有利于实施蒸汽***处理和蛋鸡对其的消化吸收。
第二方面，本申请提供了一种所述蛋鸡饲料的添加剂的制备方法，如图1所示，所述方法包括以下步骤：
S1.得到松针粉和马尾藻粉末；
具体地，将松针磨碎或碾碎后，或超微粉碎后，高压蒸汽***处理，处理后烘干备用。
S2.将所述马尾藻粉末和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液；
S3.通过所述马尾藻粗酶液，得到马尾藻酶解物；
S4.将所述松针粉和所述马尾藻酶解物混合，得到蛋鸡饲料的添加剂。
作为一种可选的实施方式，所述方法还包括，将所述松针粉进行高压蒸汽***处理。
具体地，高压蒸汽***处理条件为：3.5MPa、维压时间300s。选用高压蒸汽***处理的原因是高压蒸汽***可细高松针粉中细胞的破壁率，有效释放功能性营养成分，有助于蛋鸡的消化吸收。
作为一种可选的实施方式，所述褐藻胶裂解酶的质量浓度为3％-5％。
控制褐藻胶裂解酶的浓度为3％-5％的原因是在保证酶解效率的前提下，可有效控制酶的使用量，控制酶解成本。如果浓度高于5％，其酶解效果与3％-5％添加量时的酶解效果相似，但酶的用量增加，提高了酶的处理成本，如果浓度低于3％，会导致马尾藻水解破壁率低，不能有效释放马尾藻中的功能性营养成分。
作为一种可选的实施方式，所述酶解的温度为38-45℃，所述酶解的时间为8-12h。
作为一种可选的实施方式，所述将所述马尾藻粉末和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液，具体包括：
将所述马尾藻粉末与水混合，得到料液比为1:4-6的马尾藻悬浮液；
将所述马尾藻悬浮液和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液。
具体地，将马尾藻超微粉碎后，按照料液比1:5(w/v)加水制成悬液，调节pH至6.0，加入5％褐藻胶裂解酶VH352粗酶液，在40℃酶解10h，酶解后将酶解液浓缩烘干制备成马尾藻酶解物。
控制料液比为1:4-6的马尾藻悬浮液的原因是在保证酶解效率的条件下，控制酶解体积，如果浓度高于1:4，会有马尾藻底物浓度过高，酶解效果不好的不利效果，如果浓度低于1:6，虽然马尾藻可以得到较好的酶解破壁效果，但会有酶解体系水分过高，后续干燥过程能耗显著提高的不利效果。
第三方面，本申请提供了一种蛋鸡饲料的添加剂的应用，所述应用包括将第一方面所述的添加剂，或将第二方面所述方法制得的添加剂用于蛋鸡饲料中提升蛋壳的硬度和/或降低蛋壳的脆性。
下面将结合实施例、对比例及实验数据对本发明的方法进行详细说明。
本发明实施例中的一个或多个技术方案，至少还具有如下技术效果或优点：
实施例1
褐藻胶裂解酶VH352的制备：在鲍鱼肠弧菌(Vibriohalioticoli)发现一种褐藻胶裂解酶，其氨基酸序列SEQ ID NO:1，将其进行大肠杆菌宿主表达密码子优化后，得到核苷酸序列SEQ ID NO:2，将该酶命名为褐藻胶裂解酶VH352，该酶的编码基因可由人工合成得到。
使用质粒载体pET-28a装载VH352编码基因，导入大肠杆菌BL21中，得到可异源表达褐藻胶裂解酶VH352的重组菌株。使用该菌株37℃培养24h诱导表达褐藻胶裂解酶VH352酶，表达结束后离心收集菌体。菌体使用pH7.0磷酸缓冲液重悬后，高压匀浆破碎，破碎液离心，收集上清即为VH352粗酶液。粗酶液过镍柱纯化，使用80mM咪唑洗脱，洗脱液进行蛋白电泳，电泳结果如图2所示，电泳显示一条约38kDa分子量的蛋白，与VH352预测分子量相符，说明该酶得到成功纯化。
实施例2
褐藻胶裂解酶VH352的催化性质：以450μL0.3(w/v)的海藻酸钠为底物，加入50μL稀释后的VH352纯酶，分别在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃条件下和不同缓冲液组成的pH3、4、5、6、7、8、9、10条件下进行反应，测定该酶的最适反应温度和最适反应pH。反应时间30min，反应后将反应体系煮沸5min灭活，测定产物中还原糖含量计算酶活性。实验结果如图3和图4所示，可以看出，褐藻胶裂解酶VH352的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6.0。
实施例3
一种蛋鸡饲料的添加剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：
得到松针粉和马尾藻粉末；将所述马尾藻粉末和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液；具体地，将马尾藻超微粉碎后，制备成马尾藻粉碎物。
通过所述马尾藻粗酶液，得到马尾藻酶解物；
将所述松针粉和所述马尾藻酶解物混合，得到蛋鸡饲料的添加剂。具体添加比例视实际情况添加，较优的比例为3:1-3，最优的比例为1:1。
具体地，将马尾藻超微粉碎后，按照料液比1:5(w/v)加水制成悬液，调节pH至6.0，加入5％褐藻胶裂解酶VH352粗酶液，在40℃酶解10h，酶解后将酶解液浓缩烘干制备成马尾藻酶解物。
将松针粉超微粉碎后，在3.5MPa、维压时间300s条件下高压蒸汽***处理，处理后烘干备用，制备成松针粉粉碎物。
基础饲料可以采用山东和美华农牧科技股份有限公司产蛋鸡预混饲料。
动物实验
根据不同配方分成组蛋鸡实验组，马尾藻粉末和马尾藻酶解物均由本申请的实施例制得，如下：
表1蛋鸡饲喂实验分组。
蛋鸡饲喂实验分析：实验选取150只重量约1.0kg的180日龄柴鸡，随机分为6组，每组3个重复，每个重复10只鸡。各实验组都采用封闭式饲喂管理，自由采食与饮水，人工补充每天16h光照，实验第6周，每个实验组随机收取20枚鸡蛋，分别测定鸡蛋的蛋白含量、磷脂含量、β-胡萝卜素、锌含量、硒含量，以及蛋壳的硬度和脆性。相关测定结果如下表2所示和相关检测结果如表3所示。
表2各实验组营养成分测定结果。
注：不同字母上标表示各组之间的数据有显著性差异(p＜0.05)
表3各实验组蛋壳硬度和脆性测定结果。
注：不同字母上标表示各组之间的数据有显著性差异(p＜0.05)
由表2蛋鸡饲喂实验检测结果可以看出，在饲料中添加松针粉或者马尾藻粉，对鸡蛋的蛋白质含量没有影响，各组没有显著性差异；添加松针粉或者马尾藻粉，对鸡蛋中磷脂和β-胡萝卜素含量的提升有促进作用，松针粉和马尾藻粉单独添加的效果相当，两者混合添加时提升作用更明显，其中松针粉与马尾藻酶解物混合组的磷脂与β-胡萝卜素含量最高；在微量元素锌和硒方面，添加松针粉或马尾藻粉对鸡蛋中这两种物质的含量都有提升作用，但添加松针粉和马尾藻酶解物组的提升效果最为明显；其中当松针粉粉碎***物：马尾藻酶解物的质量比为1:1时的效果最好，其鸡蛋中磷脂、β-胡萝卜素、锌、硒的含量都达到最大。由表3可知，在蛋壳硬度和蛋壳脆性方面，可以看出添加松针粉和马尾藻酶解物可以有效提升蛋壳的硬度、降低蛋壳的脆性，其中当松针粉粉碎***物：马尾藻酶解物的质量比为1:1时的效果最好，蛋壳硬度和脆性指标都为最佳。
综上实验结果可以看出，在基础饲料中添加松针粉和马尾藻粉，可以有效提升鸡蛋中的磷脂、β-胡萝卜素、锌和硒的含量，其中马尾藻经酶解处理后，再与松针粉混合喂养的协同增效效果最明显，同时还可以提升蛋壳的硬度、降低蛋壳的脆性。本发明提供的在基础饲料基础上的松针粉与马尾藻酶解物混合饲料，可以有效提升鸡蛋的营养活性成分，并能有效提高鸡蛋的储藏和运输性能，在蛋鸡饲养中具有广阔的应用前景。
需要说明的是，在本文中，诸如“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者任何其他变体意在涵盖非排他性地包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上所述仅是本发明的具体实施方式，使本领域技术人员能够理解或实现本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所申请的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 山东绿松农业科技有限公司
<120> 一种蛋鸡饲料的添加剂及其制备方法与应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 352
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met His Thr Lys Asn Lys Ile Ala Ala Val Val Val Ser Ala Leu Val
1 5 10 15
Ala Gly Leu Ala Gly Cys Ser Thr Ala Ser Ser Pro Asp Thr Ala Ser
20 25 30
Ala Thr Pro Ala Asn Gln Asp Pro Gln Leu Ala Ala Gln Tyr Asn Leu
35 40 45
Asp Val Thr Lys Ala Pro Ala Glu Asn Phe Asp Leu Ser Lys Phe Lys
50 55 60
Leu Asn Leu Pro Met Asp Asp Asp Lys Ala Glu Arg Ala Gly Lys Val
65 70 75 80
Met Glu Ile Tyr Lys Ser Met Leu Asn Asn Lys Glu Lys Pro Phe Ser
85 90 95
Gln Ala Gln Trp Phe Tyr Thr Asp Gln Thr Thr Gly Ala Met Val Phe
100 105 110
Lys Ala Pro Asn Lys Ala Met Thr Thr Pro Asn Ser Lys Asn Ala Arg
115 120 125
Ser Glu Leu Arg Ala Met Leu Ala Asp Asp Tyr Ser Ser Pro Lys Asn
130 135 140
Asn Phe Thr Val Ala Ser Thr Lys Asp Ala Glu Lys Tyr Gly Ala Ile
145 150 155 160
Gly Gly His Met Ser Ala Thr Leu Ala Val Asp Trp Val Ser Thr Ser
165 170 175
Gly Asn Tyr Lys Lys Gly Gly Ala Phe Ala Thr Val Ile Gly Gln Ile
180 185 190
His Gly Ser Lys Asn Glu Pro Leu Lys Ile Glu Tyr Arg Lys Leu Pro
195 200 205
Glu His Glu Tyr Gly Ser Val Tyr Trp Asn Tyr Glu Thr Asn Ala Lys
210 215 220
Gly Asp Glu Tyr Lys Phe Arg His Asp Ile Ser Thr Asp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gln His Asp Leu Arg Lys Gly Ser Ala Glu Pro Val Asp Gly Ile Lys
245 250 255
Leu Gly Asp Ile Phe Ser Tyr Asp Val Asn Val Lys Gly Asp Ile Met
260 265 270
His Leu Thr Phe Thr Lys Asn Pro Gly Gln Pro Asn Gln Glu Val Lys
275 280 285
Glu Phe Asp Val Asn Leu Ala Lys Gly His Leu Lys Gly Asp Lys Tyr
290 295 300
Asp Gln Gly Tyr Ala Asn Asp Trp Met Tyr Phe Lys Ala Gly Asn Tyr
305 310 315 320
Asn Gln Cys Asn Thr Gly Ser Ala Gly Cys Ser Asn Asn Gly Leu Glu
325 330 335
Ala Gly Asp Tyr Ala Gln Val Ser Phe Tyr Lys Leu Asn Leu Asp Gln
340 345 350
<210> 2
<211> 1056
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atgcacacca agaacaaaat cgcagcggtt gttgtttccg cactggtggc gggtctggcg 60
ggctgctcca ccgcgtcctc cccagacact gcttctgcga ccccggcaaa ccaagatccg 120
cagctggccg cgcagtataa cctggatgtg acgaaagcac cggcggaaaa cttcgatctg 180
tctaaattca aactgaacct gccgatggat gacgataagg cggagcgtgc aggcaaagtg 240
atggaaatct ataaatctat gctgaacaac aaagaaaagc cgtttagcca ggcgcagtgg 300
ttttacaccg atcagactac cggcgcgatg gtgttcaaag ccccgaacaa agctatgact 360
actccgaact ctaagaacgc ccgctctgaa ctgcgcgcta tgctggccga tgactacagc 420
tccccgaaaa acaacttcac tgtggcaagc actaaagatg cggaaaaata cggcgctatt 480
ggcggtcaca tgtctgccac cctggccgta gattgggtaa gcacttctgg caactataaa 540
aaaggtggtg cttttgcgac cgtcattggt cagatccacg gctctaaaaa cgagccgctg 600
aaaatcgaat accgtaaact gccggaacat gaatacggct ctgtttattg gaactacgaa 660
actaacgcaa aaggtgacga atacaaattc cgtcacgata tctccaccga tgtatttggt 720
cagcatgatc tgcgtaaagg cagcgccgag ccggtcgatg gtattaaact gggtgacatc 780
tttagctacg acgtaaacgt taaaggcgac attatgcacc tgactttcac caagaacccg 840
ggtcagccta accaggaagt caaagaattc gatgtaaacc tggcgaaagg tcacctgaaa 900
ggcgacaagt acgatcaggg ctacgctaac gactggatgt acttcaaagc gggtaactac 960
aaccagtgta acaccggctc cgcaggctgt tccaacaacg gtctggaagc tggcgattat 1020
gcacaggttt ctttctacaa actgaacctg gatcag 1056
Claims (10)
1.一种蛋鸡饲料的添加剂，其特征在于，所述添加剂包括松针粉和马尾藻酶解物，所述松针粉和所述马尾藻酶解物的质量比为3:1-3。
2.根据权利要求1所述的添加剂，其特征在于，所述马尾藻酶解物包括褐藻胶裂解酶，所述褐藻胶裂解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求2所述的添加剂，其特征在于，所述褐藻胶裂解酶的核苷酸序列如SEQID NO:2所示。
4.根据权利要求1所述的添加剂，其特征在于，所述松针粉的细度为100目以上。
5.一种如权利要求1-4任意一项所述蛋鸡饲料的添加剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
得到松针粉和马尾藻粉末；
将所述马尾藻粉末和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液；
通过所述马尾藻粗酶液，得到马尾藻酶解物；
将所述松针粉和所述马尾藻酶解物混合，得到蛋鸡饲料的添加剂。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法还包括，将所述松针粉进行高压蒸汽***处理。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述褐藻胶裂解酶的质量浓度为3％-5％。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述酶解的温度为38-45℃，所述酶解的时间为8-12h。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述将所述马尾藻粉末和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液，具体包括：
将所述马尾藻粉末与水混合，得到料液比为1:4-6的马尾藻悬浮液；
将所述马尾藻悬浮液和褐藻胶裂解酶混合并进行酶解，得到马尾藻粗酶液。
10.一种蛋鸡饲料的添加剂的应用，其特征在于，所述应用包括将权利要求1-4任意一项所述的添加剂，或将权利要求5-9任意一项所述方法制得的添加剂用于蛋鸡饲料中提升蛋壳的硬度和/或降低蛋壳的脆性。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220322 |