CN114208855A - 一种防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物、制剂及其应用 - Google Patents

一种防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物、制剂及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物、制剂及其应用，属于农药技术领域。所述的防治水稻纹枯病的植物源组合物包括互叶白千层提取物和冰片。本发明的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物中互叶白千层提取物和冰片在质量比49:1复配下具有协同增效作用，对立枯丝核菌导致的植物性病害防治效果明显，不易产生抗药性，同时可以改善作物免疫***能力，并能显著提高其活力。

Description

一种防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物、制剂及其应用
技术领域
本发明涉及农药技术领域，特别涉及一种防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物、制剂及其应用。
背景技术
植物病原菌是一种能够诱发多种植物病害的农业微生物，在几十年内造成超过2000亿美元的损失，给全球的粮食生产带来了极大威胁。例如，由立枯丝核菌导致的水稻纹枯病，被认为是全世界最具有毁灭性的水稻疾病之一。水稻是世界上最重要的谷类栽培作物，也是我国最重要的经济作物和粮食作物，在我国水稻纹枯病的流行面积高达1500万至2000万公顷，每年造成约600万吨的产量损失。目前化学药剂防治是减轻水稻纹枯病发生程度的关键，由于化学农药的长期应用以及过度应用造成了生态平衡的破坏、生活环境的污染、病虫草等有害生物抗性的增强、非靶标生物死亡等负面效应。
植物源农药具有易降解、与环境相容性好、对非靶标生物安全、作用方式独特不易产生抗性等优点，甚至还可促进作物生长、提高作物抗病性，因此成为新农药研发与应用的热点。我国是利用植物资源防治病虫害最早的国家。早在周朝的《周礼秋官》中就有芥草薰杀蠹物的记载。李时珍所著的《本草纲目》记录了不少可以用来杀虫的植物，如苦参、川楝、巴豆等。从植物的提取物中分离和筛选出具有生物活性的代谢产物，探究其活性机理，是创制新农药的重要途径。但已知的这些天然产物中，有些天然产物杀菌活性较低或针对靶标较为狭窄，不具有广谱杀菌活性，分离程序复杂，成本相对较高。因此，市场上急需开发一系列廉价、环保、杀菌活性高、杀菌范围广、可再生的天然产物及其制备方法。
互叶白千层，又名茶树，是桃金娘科白千层属中的一种，广泛分布于澳大利亚北部、中国南部。众多研究发现互叶白千层具有多种生物活性，例如抗菌、抗炎、抗氧化、抗癌、抗组胺、心血管、肝脏保护等药理活性。但目前对互叶白千层的研究都集中在了植物精油层面，其中很大一部分非挥发性物质的功能都被忽略了。因此，互叶白千层中的非挥发性物质值得进一步去研究。冰片是一种天然药物，分子式为C10H18O，主要从龙脑香科(如龙脑香科)、藤科(如迷迭香或丹参)、缬草科(如缬草)或菊科植物(如母菊)的多种药用植物的精油中提取。作为一种传统中药，中华人民共和国药典(2005)表明冰片是63种中草药中的重要成分。现代药理研究发现，冰片具有抗炎、镇痛、抗真菌、抗病毒等药理作用，此外冰片还可能通过生物屏障的作用促进药物的分布和吸收，广泛应用于医药、食品、日化等领域。然而，互叶白千层及冰片在抗植物病原菌方面的活性尚未见报道。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物。
本发明的另一目的在于提供一种包含上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂。
本发明的再一个目的在于提供上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物、制剂的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种防治水稻纹枯病的植物源组合物，包括互叶白千层提取物和冰片。
所述的互叶白千层提取物与冰片优选按质量比20～80:1计算；进一步优选按质量比40～60:1计算；更优选按质量比49:1计算。
所述的互叶白千层提取物通过如下方法制备得到：
将互叶白千层烘干、粉碎，得互叶白千层粉末；将互叶白千层粉末用乙醇浸提，得到浸提液；将浸提液浓缩，得浸膏；浸膏溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得萃取液；将萃取液浓缩后得到正丁醇萃取部分浸膏，即为互叶白千层提取物。
所述的互叶白千层优选为互叶白千层的枝叶。
所述的烘干的温度优选为50～55℃；更优选为52℃。
所述的乙醇的浓度优选为50％～95％；更优选为75％。
所述的互叶白千层粉末与乙醇优选按料液比1:8～15计算；更优选按料液比1:10计算。
所述的浸提优选为超声浸提；所述的超声浸提的条件优选为45～55℃超声浸提4～8h；更优选为50℃超声浸提6h。
所述的将浸提液浓缩的方法优选为真空浓缩。
所述的浸膏的含水量优选为3％～5％。
所述的溶解的试剂优选为水。
一种包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂，包括上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物。
上述包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂中，所述的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的质量优选占包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂质量的1％～20％；更优选占包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂质量的10％。
所述的包含上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂，还包括药学上可接受的辅料。
所述的药学上可接受的辅料包括表面活性剂、有机溶剂、稳定剂、抗冻剂和水中的至少一种。
当含有表面活性剂时，所述的表面活性剂的质量优选占包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂质量的1％～30％；进一步优选占包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂质量的1％～20％；更优选占包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂质量的8％。
当含有有机溶剂时，所述的有机溶剂优选为乙二醇、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚和丙酮中的至少一种。
当含有水时，所述的水优选为蒸馏水、去离子水和自来水中的至少一种。
所述的表面活性剂优选为阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的至少一种。
所述的非离子表面活性剂优选为苯乙烯苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、三苯乙烯基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、蓖麻油环氧乙烷加成物及其衍生物、多元醇脂肪酸酯及其环氧乙烷加成物、吐温-20和脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一种；更优选为吐温-20。
所述的阴离子表面活性剂优选为十二烷基苯磺酸钙、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯和苯乙基酚聚氧乙烯醚磷酸酯中的至少一种；更优选为十二烷基苯磺酸钙。
所述的包含上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂的剂型优选包括但不限于微乳剂。
所述的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物和/或包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂在防治植物纹枯病中的应用。
所述的纹枯病优选为由立枯丝核菌侵染引起的纹枯病。
所述的植物优选包括但不限于水稻、蚕豆、小麦中的至少一种。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物中互叶白千层提取物和冰片在质量比49:1复配下具有协同增效作用，对立枯丝核菌导致的植物性病害防治效果明显，不易产生抗药性，同时可以改善作物免疫***能力，并能显著提高其活力。
(2)本发明的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物和包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂的原料均来自自然界，自然资源极其丰富，加工简单，对设备要求低。
(3)本发明的包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂主要成分互叶白千层提取物来源于天然中药植物，对环境无污染，对非靶标生物安全，是一种无公害植物源农药制剂。
附图说明
图1为不同药剂对立枯丝核菌的体外抑制效果图。
图2为不同药剂对立枯丝核菌菌核形成的抑制防效图。
图3为不同药剂对水稻纹枯病的保护性防效结果图。
图4为不同药剂对水稻纹枯病的治疗性防效结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
冰片购于梯希爱(上海)化成工业发展有限公司；立枯丝核菌由华南农业大学植物保护学院提供，购于ATCC公司。
实施例1：互叶白千层提取物的制备
互叶白千层提取物的制备：将采集于广东省河源市东源县涧头镇东坝村的新鲜互叶白千层茎枝叶剪碎，在鼓风机干燥箱52℃中烘干，粉碎过60目筛，得互叶白千层粉末；按照料液比(g:mL)1:10加入互叶白千层粉末和75％乙醇，于50℃超声浸提6h，得浸提液；将浸提液真空浓缩至含水量为3％～5％的浸膏，浸膏用水溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得萃取液；萃取液经浓缩后得到正丁醇萃取部分浸膏，所述的正丁醇萃取部分浸膏即为互叶白千层提取物。
实施例2：互叶白千层提取物和冰片对立枯丝核菌的离体抑菌活性测定
(1)实验对象：立枯丝核菌
(2)实验方法：按照中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1156.2-2006)，采用菌丝生长速率法进行测定。
(3)供试药剂：实施例1制备得到的互叶白千层提取物，冰片(纯度80％)。
(4)药剂母液配制：将实施例1制备得到的互叶白千层提取物、冰片，分别用二甲基亚砜溶解，配制成不同浓度的母液备用。
(5)药剂处理：先在无菌的条件下将预先融化的PDA培养基加入无菌锥形瓶中，然后吸取步骤(4)制备的不同浓度的母液分别加入上述装有融化的PDA培养基的无菌锥形瓶中至所需浓度；其中，含互叶白千层提取物的PDA培养基中互叶白千层提取物的浓度分别为100mg/L、500mg/L、750mg/L、1000mg/L、1500mg/L、2000mg/L；含冰片的PDA培养基中冰片的浓度分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L、300mg/L、400mg/L；充分摇匀，然后等量倒入直径为9cm的培养皿中，制成含药平板，同时设置只含二甲基亚砜的PDA培养基为空白对照处理，每个处理3个重复。
(6)接种培养：在无菌的条件下，用直径为6mm的灭菌打孔器在水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌菌落边缘打孔，制成直径为6mm的菌饼；用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面朝上，盖上皿盖后置于28±2℃的培养箱中培养。
(7)调查分析：待空白对照菌落的直径达培养皿直径的2/3以上时，用卡尺测量菌落直径，每个菌落用十字交叉法垂直测量直径各一次取其平均值，以此计算各处理的菌丝生长抑制率，用DPS软件对步骤(5)的含药的PDA培养基中各药剂浓度对数值和菌丝生长抑制率值进行回归分析，计算各处理药剂的EC50。
(8)菌落增长直径＝D1-D2，D1为菌落直径，D2为菌饼直径(在本实施例中，菌饼直径为6mm)。
(9)菌丝生长抑制率(％)＝[D0-DT/D0]×100％，D0为空白对照菌落增长直径；DT为药剂处理菌落增长直径。
表1：不同药剂对立枯丝核菌的体外抑制活性
Figure BDA0003410871310000051
注：Y为死亡机率值；X为药剂浓度对数值。
实施例3：互叶白千层提取物与冰片的联合毒力测定方法
根据实施例2的毒力测定结果，设互叶白千层提取物的致死中浓度为a，冰片的致死中浓度为b。用共毒因子法评价实施例1制备的互叶白千层提取物与冰片的增效作用时选择5个配比，这5个配比即为等效线法中相加作用线的六等分点，可表示为a/6b，b/2b，a/b，2a/b，5a/b。这5个配比混剂的浓度为(a+5b)/6，(a+2b)/3，(a+b)/2，(2a+b)/3，(5a+b)/6。
具体配制方法为：将互叶白千层提取物用二甲基亚砜溶解稀释，得到780.23mg/L互叶白千层提取物溶液(即将互叶白千层提取物稀释使其浓度等于致死中浓度EC50)；将冰片用二甲基亚砜溶解稀释，得到79.12mg/L冰片溶液(即将冰片稀释使其浓度等于致死中浓度EC50)；将780.23mg/L互叶白千层提取物溶液与79.12mg/L冰片溶液按不同体积比混合，使得混合液中互叶白千层提取物与冰片质量比分别为49:1、20:1、10:1、5:1、2:1。根据共毒因子法评价互叶白千层提取物与冰片复配对水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌的毒力作用。
按下面公式计算共毒因子：
共毒因子＝(混剂实际抑制率－混剂理论抑制率)/混剂理论抑制率×100；
当共毒因子≥20表示有增效作用，共毒因子≤20表示有拮抗作用，－20＜共毒因子＜20表示相加作用。
根据共毒因子法测定结果(表3)可知，780.23mg/L互叶白千层提取物溶液与79.12mg/L冰片溶液的混合液中，互叶白千层提取物与冰片质量比为49:1时有增效作用，进一步通过共毒系数法验证互叶白千层提取物与冰片质量比为49:1时的增效作用。
表2：共毒因子毒力测定结果
Figure BDA0003410871310000061
采用菌丝生长速率法进行室内毒力测定，计算互叶白千层提取物与冰片按质量比49:1复配后药剂的EC50，并按孙云沛方法计算共毒系数(CTC)来评价混用效果。共毒系数CTC，设混合药剂为M，组成M的各单剂为A、B。毒力指数TI，有效成分(A或B)在混合药剂中的百分含量为P(PA或PB)，共毒系数法计算公式如下：
毒力指数TI＝(标准药剂的EC50÷供试药剂的EC50)×100
混剂的实际毒力指数(ATI)＝(标准药剂的EC50÷M的EC50)×100
混剂的理论毒力指数(TTI)＝TIA×PA+TIB×PB；
共毒系数(CTC)＝ATI/TTI×100
按照联合作用划分标准：共毒系数(CTC)≥120表现为增效作用；共毒系数(CTC)≤80表现为拮抗作用；80<共毒系数(CTC)<120表现为相加作用。
试验结果
表3：共毒系数毒力测定结果：
Figure BDA0003410871310000071
通过表3数据可以看出，经孙云沛共毒系数法进一步验证，互叶白千层提取物与冰片在质量比49:1的复配下可行性高，增效作用显著。
实施例4：包含上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂的制备
(1)防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物，由实施例1制备得到的互叶白千层提取物和冰片组成；其中，互叶白千层提取物和冰片按质量比(g:g)为49:1的比例进行配比。
(2)包含上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂(即10％微乳剂)，按质量份数计，由以下组分组成：实施例1制备得到的互叶白千层提取物9.8份、冰片0.2份、十二烷基苯磺酸钙2.0份、吐温-20 6.0份、乙二醇50.0份、自来水32.0份。
上述包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂(即10％微乳剂)的制备方法，包括如下步骤：将互叶白千层提取物、冰片、十二烷基苯磺酸钙、吐温-20和自来水混合均匀，得到乳状液，然后向上述乳状液中滴加乙二醇，在滴加的过程中乳状液会由浑浊变得澄清，乙二醇滴加完全后，即得包含上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂(即10％微乳剂)。
包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂(即10％微乳剂)主要技术指标：
表4：
Figure BDA0003410871310000072
Figure BDA0003410871310000081
实施例5：10％微乳剂的抑制活性试验
将实施例4制备得到的10％微乳剂用于测定对立枯丝核菌的离体抑菌活性。
(1)实验对象:立枯丝核菌
(2)实验方法：按照中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1156.2-2006)，采用菌丝生长速率法进行测定。
(3)供试药剂：实施例4制备得到的包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂(即10％微乳剂)，井岗霉素(纯度：60％，市售)，8％井岗霉素水剂(市售)。
(4)药剂母液配制：将实施例4制备得到的包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂(即10％微乳剂)、井岗霉素、8％井岗霉素水剂分别用二甲基亚砜溶解，配制成不同浓度的母液备用。
(5)药剂处理：先在无菌的条件下将预先融化的PDA培养基加入无菌锥形瓶中，然后依次吸取步骤(4)制备的不同浓度的母液分别加入上述装有融化的PDA培养基的无菌锥形瓶中至所需浓度；其中，含10％微乳剂的PDA培养基中10％微乳剂的浓度分别为25mg/L、50mg/L、80mg/L、100mg/L、150mg/L；含井岗霉素的PDA培养基、含8％井岗霉素水剂的PDA培养基中井冈霉素的浓度均分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、800mg/L；充分摇匀，然后等量倒入直径为9cm的培养皿中，制成含药平板，同时设置只含二甲基亚砜的PDA培养基为空白对照处理，每个处理3个重复。
(6)接种培养：在无菌的条件下，用直径为6mm的灭菌打孔器在水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌菌落边缘打孔，制成直径为6mm的菌饼；用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面朝上，盖上皿盖后置于28±2℃的培养箱中培养。
(7)调查分析：待空白对照菌落的直径达培养皿直径的2/3以上时，用卡尺测量菌落直径，每个菌落用十字交叉法垂直测量直径各一次取其平均值，以此计算各处理的菌丝生长抑制率，用DPS软件对步骤(5)的含药的PDA培养基中各药剂浓度对数值和菌丝生长抑制率值进行回归分析，计算各处理药剂的EC50。
(8)菌落增长直径＝D1-D2，D1为菌落直径，D2为菌饼直径(在本实施例中，菌饼直径为6mm)。
(9)菌丝生长抑制率(％)＝[D0-DT/D0]×100％，D0为空白对照菌落增长直径；DT为药剂处理菌落增长直径。
实验结果如下表5和图1所示，从表5可以看出：与表3互叶白千层提取物与冰片按质量比49:1复配的杀菌活性(EC50)相比，互叶白千层提取物与冰片的组合物经微乳化后(即制成10％微乳剂)离体杀菌活性提高了约10倍，且与商品化药剂相比，10％微乳剂的离体杀菌活性远高于目前市场上主流杀菌剂井岗霉素和8％井岗霉素水剂。
表5：不同药剂对立枯丝核菌的体外抑制活性
处理名称 毒力回归方程 EC<sub>50</sub>(mg/L)(95％置信区间) r
10％微乳剂 Y＝1.6633+1.9441X 52.03(48.17～56.21) 0.9949
井岗霉素 Y＝1.7904+1.4100X 188.92(155.17～230.01) 0.9856
8％井岗霉素水剂 Y＝3.7626+0.5334X 208.78(176.73～246.64) 0.9905
实施例6：10％微乳剂的抑制活性试验
将实施例4制备得到的10％微乳剂用于测定抑制立枯丝核菌的菌核形成。
(1)实验对象：立枯丝核菌
(2)实验方法：菌核重量差异法
(3)供试药剂：实施例4制备得到的包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的微乳剂(即10％微乳剂)，井岗霉素(纯度：60％，市售)，8％井岗霉素水剂(市售)。
(4)药剂母液配制：将实施例4制备得到的10％微乳剂、井岗霉素、8％井岗霉素水剂分别用二甲基亚砜溶解，配制成不同浓度的母液备用。
(5)药剂处理：先在无菌的条件下将预先融化的PDA培养基加入无菌锥形瓶中，然后依次吸取步骤(4)制备的不同浓度的母液分别加入上述装有融化的PDA培养基的无菌锥形瓶中至所需浓度；其中，含10％微乳剂的PDA培养基中10％微乳剂的浓度分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L；含井岗霉素的PDA培养基、含8％井岗霉素水剂的PDA培养基中井冈霉素的浓度均分别为50mg/L、100mg/L、200mg/L；充分摇匀，然后等量倒入直径为9cm的培养皿中，制成含药平板，同时设置只含二甲基亚砜为空白对照处理，每个处理3个重复。
(6)接种培养：在无菌的条件下，用直径为6mm的灭菌打孔器在水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌菌落边缘打孔，制成直径为6mm的菌饼；用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面朝上，盖上皿盖后置于28±2℃的培养箱中培养14天。
(7)调查分析：在培养的第14天把不同含药平板上的菌核轻轻刮下来，在60℃条件下烘干24h，在万分之一天平依次称重。
(8)立枯丝核菌菌核萌发抑制率(％)＝[(空白对照组立枯丝核菌菌核的重量-处理组立枯丝核菌菌核的重量)/空白对照组立枯丝核菌菌核的重量]×100％。
试验结果如表6和图2所示：
表6：不同药剂对立枯丝核菌菌核形成的抑制防效。
处理名称 浓度(mg/L) 菌核抑制防效(％)
10％微乳剂 50 49.19±2.56
10％微乳剂 100 58.16±1.79
10％微乳剂 200 62.77±2.10
井岗霉素 50 27.96±2.04
井岗霉素 100 32.35±1.25
井岗霉素 200 45.85±1.51
8％井岗霉素水剂 50 40.92±2.20
8％井岗霉素水剂 100 49.91±3.14
8％井岗霉素水剂 200 55.76±1.24
从表5和图2可以看出，10％微乳剂对立枯丝核菌的菌核形成有着明显的抑制效果，抑制效果高于阳性对照井岗霉素与8％井岗霉素水剂。
实施例7：10％微乳剂的盆栽杀菌活性试验
将实施例4制备得到的10％微乳剂用于测定水稻纹枯病的保护性和治疗性效果。
150mg/L 10％微乳剂水溶液、300mg/L 10％微乳剂水溶液均通过将实施例4制备得到的10％微乳剂用自来水稀释得到。
病原菌的接种准备：在无菌的条件下，用直径为6mm的灭菌打孔器在水稻纹枯病病原菌立枯丝核菌菌落边缘打孔，制成直径为6mm的菌饼，用镊子将菌饼放入含有PDB的锥形瓶中，在摇床上避光培养7天后，收集菌丝体并切成直径为0.5cm的菌丝球，备用。
保护性试验：选取播种30天以后处在分蘖期的盆栽水稻，将不同浓度的10％微乳剂均匀喷洒在水稻叶片，以页面上出现一层水膜，药液不下滴为宜。处理24h后进行立枯丝核菌的接种。治疗性试验：将备好的立枯丝核菌菌丝球接种于水稻的叶鞘处，24h后将不同浓度的药剂(150mg/L 10％微乳剂水溶液、300mg/L 10％微乳剂水溶液)均匀喷洒在水稻叶片。接种的叶片在25±2℃，相对湿度80±5％的条件下培养。等体积的自来水为空白对照，300mg/L井岗霉素水溶液和300mg/L 8％井岗霉素水剂水溶液作为阳性对照。
侵染程度根据病原菌的疾病等级进行计算防治效果，计算公式如下：
病情指数＝[Σ(病级数×该级病叶数)/总调查叶片数×最高级]×100；
防治效果(％)＝[(对照组病情指数–处理组病情指数)/对照组病情指数]×100；
保护性防效、治疗性防效的计算方法同防治效果。
分级标准如下：
0级：无病斑；
1级：病斑面积占整个叶面积以下；
3级：病斑面积占整个叶面积的6％～25％
5级：病斑面积占整个叶面积的26％～50％
7级：病斑面积占整个叶面积的51％～75％
9级：病斑面积占整个叶面积的75％以上。
试验结果
表7：不同浓度的药剂对水稻纹枯病的盆栽防治结果
Figure BDA0003410871310000111
Figure BDA0003410871310000121
由表7和图3、图4可以看出，10％微乳剂对立枯丝核菌引起的水稻纹枯病有着很好的保护性和治疗性效果，与商品化药剂井岗霉素和8％井岗霉素水剂效果相当。
图3为300mg/L 10％微乳剂水溶液、300mg/L井岗霉素水溶液和300mg/L8％井岗霉素水剂水溶液对水稻纹枯病的保护性防效结果，图4为300mg/L 10％微乳剂水溶液、300mg/L井岗霉素水溶液和300mg/L 8％井岗霉素水剂水溶液对水稻纹枯病的治疗性防效结果。
由上述实施例可知，本发明所得到的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物和以植物源杀菌组合物为有效成分制得的10％微乳剂在体外条件下对立枯丝核菌和对立枯丝核菌的菌核形成有着较高的杀菌活性和抑制活性，且其杀菌活性和抑制活性均高于商品化药剂井岗霉素和8％井岗霉素水剂。在盆栽实验中本发明实施例4所得到的10％微乳剂的防治效果相近甚至高于商品化药剂井岗霉素和8％井岗霉素水剂。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种防治水稻纹枯病的植物源组合物，其特征在于，包括互叶白千层提取物和冰片。
2.根据权利要求1所述的植物源组合物，其特征在于，所述的互叶白千层提取物与冰片按质量比20～80:1计算；进一步按质量比40～60:1计算；更进一步按质量比49:1计算。
3.根据权利要求1所述的植物源组合物，其特征在于，所述的互叶白千层提取物通过如下方法制备得到：
将互叶白千层烘干、粉碎，得互叶白千层粉末；将互叶白千层粉末用乙醇浸提，得到浸提液；将浸提液浓缩，得浸膏；浸膏溶解后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得萃取液；将萃取液浓缩后得到正丁醇萃取部分浸膏，即为互叶白千层提取物。
4.根据权利要求3所述的植物源组合物，其特征在于，所述的互叶白千层为互叶白千层的枝叶；
所述的烘干的温度为50～55℃；
所述的乙醇的浓度为50％～95％；
所述的互叶白千层粉末与乙醇按料液比1:8～15计算。
5.一种包含权利要求1～4任一所述的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂，其特征在于，包括上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物。
6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，权利要求5所述的包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂中，所述的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的质量占权利要求5所述的包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂质量的1％～20％。
7.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料；
所述的药学上可接受的辅料包括表面活性剂、有机溶剂、稳定剂、抗冻剂和水中的至少一种；
当含有表面活性剂时，所述的表面活性剂的质量占包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂质量的1％～30％；
当含有有机溶剂时，所述的有机溶剂为乙二醇、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、石油醚和丙酮中的至少一种；
当含有水时，所述的水为蒸馏水、去离子水和自来水中的至少一种；
所述的表面活性剂为阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的至少一种；
所述的非离子表面活性剂为苯乙烯苯酚聚氧乙烯聚氧丙烯醚、三苯乙烯基酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、蓖麻油环氧乙烷加成物及其衍生物、多元醇脂肪酸酯及其环氧乙烷加成物、吐温-20和脂肪醇聚氧乙烯醚中的至少一种；
所述的阴离子表面活性剂为十二烷基苯磺酸钙、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯和苯乙基酚聚氧乙烯醚磷酸酯中的至少一种。
8.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，所述的包含上述防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂的剂型包括但不限于微乳剂。
9.权利要求1～4任一所述的防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物和/或权利要求5～8任一所述的包含防治水稻纹枯病的植物源杀菌组合物的制剂在防治植物纹枯病中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的纹枯病为由立枯丝核菌侵染引起的纹枯病；
所述的植物包括但不限于水稻、蚕豆、小麦中的至少一种。
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