CN114196599A - 一种用于肠道菌群调和的微生物组合物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于肠道菌群调和的微生物组合物，微生物组合物包含双歧杆菌属菌株、乳杆菌属菌株和/或具有基本相同性质的其他属菌株，其中，双歧杆菌属菌株选自包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌的组。粪菌移植是一种通过调节肠道微生态实现疾病治疗目的的强有力的手段。粪菌移植成分太过复杂，无法实现质量可控和精准干预。因此，本发明通过肠道菌群数据挖掘分析，挑选出几种在生态中发挥重要作用的核心菌株，来实现整个肠道微生态的调控，从而实现疾病的症状的缓解和治疗。

Description

一种用于肠道菌群调和的微生物组合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于肠道菌群调和的微生物组合物。
背景技术
肠易激综合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)是以腹痛、腹部不适、排便习惯改变或大便性状改变为主要表现的肠道应激反应综合征，IBS全球患病率为10％-20％，近年来被认为人类发病率最高的一种全球性功能性疾病。然而，肠易激综合征是一种多因素疾病，其病因和病理生理学机制较为复杂，其发病因素包括肠道菌群失调、小肠细菌过度生长、肠道动力异常、肠道高敏感、肠道分泌吸收功能异常、肠道屏障功能破坏、肠道黏膜免疫异常、脑肠轴异常等，目前尚无有效的治疗方法。由于IBS的多因素致病机制，在治疗过程中药物选用和缓解手段也会因为个体差异而带来差异化效果。因此，积极寻找新的IBS治疗方法具有重大意义。
人体肠道中存在有大量帮助人体消化和吸收营养、抵御有害物质的有益微生物，这类有益微生物被命名为益生菌。益生菌是定植在人体内的，其主要附着于肠道的黏膜和绒毛上。近年来发现IBS的发病与肠道菌群失调相关，临床上采用益生菌治疗IBS己取得了以一定的疗效，其中，枯草杆菌二联活菌制剂和屎肠球菌R-026作为常用的肠道益生菌，可调节人体肠道环境，促进肠道正常菌群的生长繁殖,抑制肠道致病菌的生长，从而有效地保护肠道。伴随医疗手段的进步，“粪菌移植”(Fecal Microbiota Transplantation,FMT)成为肠道及肠道外疾病治疗的新兴手段。FMT的方法主要是将健康人粪便中的功能菌群，移植到患者胃肠道内，重建具有正常功能的肠道菌群，实现肠道及肠道外疾病的治疗。目前，“粪菌移植”己成为治疗复发性难辨梭菌感染(CDI)的一个安全而有效的方法，并已经被写入了美国的临床应用指南门。
具体地，公开号为CN112089736A的中国专利提供了一种全菌胶囊及其制备方法和应用，所述制备方法包括以下步骤：(1)利用高通量测序筛选粪菌供体；(2)收集步骤(1)筛选的粪菌供体的粪便，制备粪菌液；(3)将步骤(2)制备的粪菌液和冻干保护剂混合后进行降温冷冻和真空干燥，得到的粪菌冻干粉装入胶囊壳内，得到所述全菌胶囊。该全菌胶囊同样用于治疗难辨性梭状芽孢杆菌感染、肠易激综合征、炎症性肠病等肠道菌群失调引起的疾病，并贯彻有粪菌移植的概念。该专利中涉及的全菌胶囊的供体筛选复杂，其依赖高通量测序进行筛选，并进行粪便的简单处理。一方面，由于机体的复杂生理反应，仅仅通过高通量测序进行的供体筛选并不能完全排除非健康供体，另一方面，粪便简单处理的全菌胶囊成分复杂，在使用时会出现胶囊之间的个体差异，从而导致患者在使用时产生个体治疗反应的差异。
目前，国内用于治疗IBS的“粪菌移植”技术大多通过筛选过的健康人体的粪菌液对患者进行微生物群体总量的代偿，但用作FMT治疗的粪菌就当前的认知几乎无法为这种微生物群体提供确切的定量数据或定植量化指标，且不同供体提供的样本差异性较大，因此，粪菌在制备、标准型和质量控制方面很难达到符合标准。
现有技术中，如公开号为CN109008958A的中国专利使用过滤等手段进行粪菌筛选和移植，但并未进行粪菌的精确定量和筛选，使目前的粪菌治疗无法达到精准治疗的目的。
肠道微生物是一个复杂的生态***，通过调节肠道微生态实现疾病治疗目的粪菌移植是一个强有力的手段。现有技术中的肠道微生态调节更多的依赖健康个体的微生物环境的移植，但健康个体的筛选较为复杂且不同个体间的差异会导致健康个体的微生态环境在对患者的肠道微生态改造时带来额外的负面影响。同时，粪菌移植成分太过复杂，无法实现质量可控和精准干预。由于菌群种类和数量的不确定性，导致粪菌移植在临床治疗时无法根据个体而进行精准治疗，从而造成治愈率的降低。详细内容可见之前提供的临床试验方案。因此，我们通过肠道菌群数据分析，挑选出几种在生态中发挥重要作用的菌株，来实现整个肠道微生态的调控，从而实现疾病的症状的缓解和治疗。
本发明基于选择性粪菌移植的方法，筛选得到对于IBS患者具有良好治愈或缓解效果的微生物组合物。
此外，一方面由于对本领域技术人员的理解存在差异；另一方面由于申请人做出本发明时研究了大量文献和专利，但篇幅所限并未详细罗列所有的细节与内容，然而这绝非本发明不具备这些现有技术的特征，相反本发明已经具备现有技术的所有特征，而且申请人保留在背景技术中增加相关现有技术之权利。
发明内容
针对现有技术之不足，本发明提供了一种用于肠道菌群调和的微生物组合物，微生物组合物包含双歧杆菌属菌株、乳杆菌属菌株和/或具有基本相同性质的其他属菌株。
根据一种优选实施方式，双歧杆菌属菌株选自包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌的组。
根据一种优选实施方式，乳杆菌属菌株选自包含嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌的组。
根据一种优选实施方式，微生物组合物能够通过与肠道微生态环境互作，以缓解或治疗由肠道蠕动异常、内脏高敏感、肠道细菌感染和/或食物过敏引起的非健康状态。
根据一种优选实施方式，微生物组合物为冻干粉剂型。
根据一种优选实施方式，组合物还能够用于治疗肠易激综合征。
进一步地，本发明提出的微生物组合物能够具有用于制造预防或治疗难辨梭菌感染(伪膜性肠炎)、炎症性肠病、肠易激综合征、多器官功能障碍综合征、药物超敏反应综合征、合并肠道菌群失调的用途。
一种P-fhw胶囊，包含本发明提出的微生物组合物。一方面，本发明提出的微生物组合物的微生物品类定性且定量，其能够出自筛选后的健康人群的粪便中，也能够体外培养筛选得到，因此胶囊中的定量且定性的菌群成分精准；另一方面，为了保证进入肠道的菌群的活性，在未被服用时，菌群的最优处理方法为低活冻干状态的处理方法，并包裹于胶囊中。胶囊能够保证冻干菌群的体外环境的稳定性，并增加服用的舒适度。
一种微生物组合物的施用方法，其包含以下步骤：
提供本发明提出的微生物组合物；以口服或肠道移植的方式植入人体内部。
优选地，包含双歧杆菌属菌株、乳杆菌属菌株和/或具有基本相同性质的其他属或菌株的组合物以冻干粉的形式被包裹为胶囊，其施用方式为口服。
优选地，包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌的组合物以冻干粉的形式被包裹为胶囊，其施用方式为口服。
一种用于肠道菌群调和的微生物组合物的制备方法，包含以下步骤：
提供包含本发明提出的微生物组合物的粪菌液；粪菌液中添加保护剂，保护剂能够用于在粪菌液处理环境中定向保护本发明提出的微生物组合物中的微生物；处理添加了保护剂的粪菌液，使处理后的粪菌液能够施用于人体。
根据一种优选实施方式，一种用于肠道菌群调和的微生物组合物的制备方法，包含以下步骤：
患者肠道菌群检测，获知患者肠道菌群是否失衡及其失衡程度；
根据患者的肠道菌群检测数据分析，进行针对性的肠道菌群缺失种类的选择；
提供包含患者肠道缺失的微生物的粪菌液；
粪菌液中添加保护剂，保护剂能够用于在粪菌液处理环境中定向保护粪菌液中的患者肠道缺失的微生物；
处理添加了保护剂的粪菌液，使处理后的粪菌液能够施用于人体；
通过上述步骤即得能够用于肠道菌群调和的微生物组合物。
根据一种优选实施方式，一种用于肠道菌群调和的微生物组合物的制备方法，包含以下步骤：
患者肠道菌群检测，获知患者肠道菌群是否失衡及其失衡程度；
根据患者的肠道菌群检测数据分析，进行针对性的肠道菌群缺失种类的选择；
体外培育并获取患者肠道缺失的微生物；
将培育的微生物混合即得能够用于肠道菌群调和的微生物组合物。
根据一种优选实施方式，患者肠道菌群检测能够以定性或定量的方式进行检测。
根据一种优选实施方式，所得的粪菌液能够被冻干处理或进行其他处理，使粪菌液能够被以口服或肠道移植的方式施用于患者肠道。
根据一种优选实施方式，所得的粪菌液能够基于特殊的处理手段或特殊的保护剂在处理过程中被排除或被保护其包含的菌种。
附图说明
图1是本发明提供的实施例3的IBS-SSS评分量表；
图2是本发明提供的实施例7的IBS-SSS评分结果折线图。
具体实施方式
下面结合附图进行详细说明。
本发明提供一种用于肠道菌群调和的微生物组合物、组合物的筛选方法及制备方法。
在本发明的上下文中，FMT胶囊是指包含处理后的健康人群的标准粪菌的胶囊，其包含健康人群的肠道全菌株。P-fhw是指益生菌组合物。
目前对于肠易激综合征的主要治疗药物包含止泻药、解痉药、抗抑郁药，而治疗手段涉及肠道微生态治疗等。
例如，慢性严重便秘的患者接受了经结肠镜途径的粪菌移植加第二天粪菌液灌肠治疗，其中40名患者(占69％)在粪菌移植后不久症状得到缓解，包括排便情况改善，没有出现腹胀和腹痛，并且在随后9-19个月的随访中，有18名患者排便恢复正常。2013年关于“粪菌移植”治疗难治性IBS的研究中，13名患者接受了“粪菌移植”治疗后，其中50％的患者症状缓解。
然而在实际的“粪菌移植”治疗过程中，微生物的数量和种类是很难定量定性的被控制的。由于个体差异化，肠道内菌群的重建需求不同，因此“粪菌移植”技术会存在一定的低效甚至无效性。
现有技术中涉及对于肠道保护的益生菌有很多，譬如双歧杆菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌和双歧杆菌能够在四个作用方向调节肠道生态环境。第一，乳酸杆菌和双歧杆菌的分泌产物，如乳酸、过氧化氢、细菌素，对肠道炎症免疫应答、有害细菌的外披消融等具有一定作用；第二，乳酸杆菌和双歧杆菌能够在肠道营养、肠道黏附位点方面与有害细菌产生竞争作用，从而缩减有害细菌的生存空间；第三，乳酸杆菌和双歧杆菌能够诱导肠道上皮组织的效应因子的正向调节，从而调动肠道上皮组织屏障功能；第四，乳酸杆菌和双歧杆菌还能够通过表面配体或其他分泌因子引导肠道的非特异性免疫调节。基于上述作用机理，乳酸杆菌和双歧杆菌能够参与肠道的各类生理调节通路以提高肠道对有害细菌的拮抗。但由于乳酸杆菌和双歧杆菌具有众多品类，在进行对肠道进行益生菌供给时，选择性和配比数值成为最优效果的关键。由于乳酸菌是主动性促进肠道蠕动、灭杀有害细菌的益生菌，而双歧杆菌更多偏向于提高人体免疫应答和促进人体组织发育来拮抗有害细菌，因此，两者之间的合理搭配，能够更好地保护人体肠道。
例如，短双歧杆菌用于肠道保护的用途是已知的。短双歧杆菌能够维持肠道免疫稳定，维持黏膜免疫应答的稳定状态，通过抑制肠道黏膜过度生成炎症因子降低***全身性免疫应答反应。短双歧杆菌还能够通过激活巨噬细胞、增强killer细胞活性和增加免疫球蛋白A的水平等来增强非特异性免疫和特异性免疫应答。进一步地，处于肠道的短双歧杆菌能够有效抑制幽门螺杆菌的生长繁殖，从而对于治疗胃炎和胃溃疡起到促进作用。
嗜酸乳杆菌主要存在小肠中，其能分泌抗生物素类物质(嗜酸乳菌素、嗜酸杆菌素、乳酸菌素)，对肠道致病菌产生的拮抗作用，从而预防肠道黏膜被破坏。
植物乳杆菌能够降解氨氮、亚硝酸盐等有害物质，从而减少肠道内腐坏物质对肠道的破坏。植物乳杆菌还能够通过在大肠或小肠的黏膜组织与致病性细菌进行生存性竞争，从而减少由致病性细菌引起的肠道不适或应激。
本发明基于粪便中可能存在的多种益生菌提出了通过自主选择的益生菌组合物，尤其是存在于粪菌中的益生菌种类的组合物，缓解人体肠道应激和/或修复人体肠道生态微环境。通过临床试验发现了多种对于肠易激综合征患者具有缓解甚至治疗效果的益生菌及其组合物，发现该类组合物能够对引起肠易激综合征的肠道生态屏障的修补和构建具有正向促进作用。临床试验内容包含：筛选肠易激综合征患者，提供FMT胶囊和P-fhw胶囊(该胶囊包含由多种益生菌构成的微生物组合物)，并通过患者的IBS-SSS评分量表获取FMT胶囊和P-fhw胶囊对于肠易激综合征患者的效果。
实施例1
P-fhw胶囊中涉及的微生物组合物能够包含：短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌中的一种或几种。优选地，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌。
根据一种优选实施方式，选自双歧杆菌属菌株、乳杆菌属菌株和/或具有基本相同性质的其他属菌株的组合物配比能够为：双歧杆菌株：乳杆菌属菌株＝1:1。优选地，短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌为等比例配比。
根据一种优选实施方式，双歧杆菌属菌株和乳杆菌属菌株的配比能够为5:1、4:1、3:1、2:1、1:1，以及5:1和1:1之间的任意范围比例。
根据一种优选实施方式，乳杆菌属菌株和双歧杆菌属菌株的配比能够为5:1、4:1、3:1、2:1及1:1，以及5:1和1:1之间的任意范围比例。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌和嗜酸乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含婴儿双歧杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌和鼠李糖杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、长双歧杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、瑞士乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、植物乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖杆菌、植物乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、瑞士乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含长双歧杆菌和植物乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含长双歧杆菌和鼠李糖杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含长双歧杆菌和干酪乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含长双歧杆菌和瑞士乳杆菌。
根据一种优选实施方式，微生物组合物包含长双歧杆菌和嗜酸乳杆菌。
实施例2
虽然以上研究初步提示了“粪菌移植”对于IBS可能的治疗作用，但是用作FMT治疗的粪菌就当前的认识几乎无法为这种微生物群体提供确切的定量数据或定植量化指标，且不同供体提供的样本差异性较大，因此，粪菌在制备、标准型和质量控制方面很难达到符合的标准。因此，亟需针对IBS患者的粪便改变情况精准的给与肠道菌群的补充，选择性粪菌移植(Selective Microbiaota Transplantation,SMT)，即通过培养定量定性的有益菌，并提供给患者，实现对IBS患者群体的精准治疗。
粪菌移植的治疗过程，即标准粪菌移植，无法控制施用于不同患者的微生物的施用种类和施用量，因此，在针对由不同因素引发的IBS患者时，标准粪菌移植仅能够进行未知微生物种类含量的粪菌移植，从而使诊治方法不受控。本发明提出针对患者的选择性粪菌移植概念，达到对患者的个性化和精准化治疗，从而提高疾病诊治和身体保健的效益。
选择性粪菌移植中涉及的微生物组合物能够以冻干粉的状态存在。冻干粉的处理方式能够尽可能使微生物处于不受环境影响的低活状态。
根据一种优选实施方式，标准粪菌，或者说用于标准粪菌移植的粪菌，能够通过保护剂使其含有的本发明提出的微生物组合物在人工处理的情况下被保存。
例如，通过在保护剂中添加谷氨酸、脱脂乳、甘露醇、果糖和维生素C，保护剂能够在粪菌冻干过程中定向保护粪菌液中的双歧杆菌、乳酸菌和拟杆菌的菌群，使双歧杆菌、乳酸菌和拟杆菌达到90％以上的存活率。
通过不同配比的保护剂能够定向的排除或保护一些特殊的菌种，达到粪菌液中菌种筛选的目的，从而实现选择性粪菌移植的目的。
选择性粪菌移植的制备方法包含：确定患者的生理状态和肠道环境；筛选患者所需微生物组合物成分；定向处理标准粪菌液，并以口服或肠道移植的方式提供给患者。
通过不同肠易激综合征或其他肠道相关疾病的患者的诊断，以判断补给菌群种类，从而达到精准性的有益菌群补给。由于很多肠道的菌群为中性菌群，其特点为：人体健康时中性菌群为有益菌，当人体内菌群失衡或出现其他问题时，中性菌群可能会对人体产生负向影响，因此，标准粪菌移植在通过补给菌群以维护肠道菌群健康的同时，可能存在过量补给其他菌群导致人体肠道生态环境受影响的问题。
本发明通过对粪菌液处理或体外合成/提取对个体肠道有益的微生物菌群种类，避免额外补充多余中性菌群带来的肠道菌群破坏问题，同时补给肠道缺乏菌群，达到真正的肠道微生态的稳定。
同时，本发明区别于现有技术中肠道移植的方法，精准的成分和剂量补给。基于个体的差异性，如性别、身高、体重、年龄等，本发明的组合物能够实现成分精准、剂量精准的给药方式，通过精确治疗，达到更优的肠道治愈效果。同时，使用口服的方法，增加患者心理和生理的舒适感，使患者能够达到更积极的施用状态，增加治疗的舒适度和效率。
实施例3
基于上述微生物组合物形成的针对筛选后患者的FMT胶囊和P-fhw胶囊供给，进行服用后临床观测，以判断精准P-fhw胶囊对IBS患者及肠微生态混乱而引起相关疾病的患者的疗效。
本次试验设计包含流程设计和样本量设计。
本次试验流程包含：
受试者筛查；符合要求的IBS-D患者进入分组，并对符合入组的患者进行随机分组；分组后的患者按照分组要求服用FMT胶囊和P-fhw胶囊，并观察基线时和干预后IBS-D患者临床缓解的有效率，并观察患者的大便菌群变化、焦虑抑郁状况改变等临床特征。
本试验是一项随机对照试验，观察终点为IBS症状缓解率。比较组间缓解率，按照α＝0.05(双侧)，β＝0.2，自由度v＝k-1，考虑10％的脱落等因素，采用PASS 11.0计算样本量N(每组)＝24满足统计学要求。
本次试验所用的生物制品包括FMT胶囊、P-fhw胶囊及相应安慰剂。
根据一种优选实施方式，本次试验中涉及的P-fhw胶囊能够为本发明提供的一种用于肠道菌群调和的微生物组合物。微生物组合物中的成分选自双歧杆菌属菌株、乳杆菌属菌株和/或具有基本相同性质的其他属或菌株。
根据一种优选实施方式，双歧杆菌属菌株选自包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌的组。
根据一种优选实施方式，乳杆菌属菌株选自包含嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌的组。根据一种优选实施方式，双歧杆菌属菌株：乳杆菌属菌株＝1：1。具体地，短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌在微生物组合物中等比例，即配比均为1：1。本次试验中P-fhw胶囊包含等比例混合的短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌。
受试者在入组后必须完成各项临床检查以评估继续用药的耐受性。完成各项临床检查后，记录受试者的初始病情。自筛选合格后，进行药剂服用。
在按照规定进行服用持续4周后，能够对受试者进行长时间且持续的追踪。
进一步地，将本次试验流程进行简述。拟选IBS患者72位，随机分为2组，一组予以“FMT胶囊”，一组予以“P-fhw胶囊”，观察临床缓解的有效率，评估患者干预前后胃肠道症状的表现及行为症状的改善情况。基于试验进程，本次试验能够分为多个进展时期。
第一个时期为基线检查，为开始试验的第一个周。筛选合格的受试者进行大便标本采集、肠道黏膜观察及相关评分表填写的相关检测。
第二个时期为治疗期，自开始试验计时，为期一年。将基线检查时期结束的患者随机分为“选择性粪菌移植”组或标准“粪菌移植”组，接受相关治疗。在此期间，患者将于第一次移植后的规律性间隔时间被随访。随访的检查方法包含上述的检查方法。
第三个时期为治疗结束，自开始试验计时，第一年年末不再服用提供的药物的初始阶段。受试者接受全面的检查以评估“选择性粪菌移植”的疗效和安全性。
收集数据。按照各测量指标的数据类型选择合适的统计分析方法。本次试验为一项随机平行对照的的临床干预研究，统计数据定量指标的描述将计算均数、标准差；分类指标将描述各类的例数及百分比，使用SPSS统计软件。
两组间主要疗效指标IBS缓解率的比较，假设检验采用双侧检验(two-sidetest)，取α＝0.05。单侧P≤0.025，双侧P≤0.05者，认为差异有统计学意义。所有可信区间的可信度均取95％。
本试验的主要疗效指标为IBS缓解率，精准菌群组与肠菌胶囊组的组间比较采用Log-Rank检验。假设：HO：给予FMT胶囊的组与给予P-fhw胶囊的组的IBS缓解率相同；H1：给予FMT胶囊的组与给予P-fhw胶囊的组的IBS缓解率不同。α水准：0.05双侧。
结果如下表1显示，通过开展人体临床试验，与粪菌移植进行比对，试验结果验证给予FMT胶囊的组的有效率为66.7％，给予P-fhw胶囊的组的有效率为68％。
给予FMT胶囊的组的IBS-SSS评分从206降到114.5。给予P-fhw胶囊的组的IBS-SSS评分从197.6降到93.5。
表1
试验药品信息 有效率 用药前IBS-SSS评分 用药后IBS-SSS评分
FMT胶囊 66.7％ 206 114.5
P-fhw胶囊 68％ 197.6 93.5
IBS-SSS评分量表如图1所示，其包含多种患者自主判断自身变化的生理状态。通过变化趋势和治愈/缓解有效率，能够显示出选择性粪菌移植在针对肠易激综合征患者治愈/缓解和舒适度的优势性。
上述实验证明了选择性粪菌移植在应对肠道易激综合征时，其治愈有效率相较标准粪菌移植具有相同甚至更优越的效果。同时，对于肠道易激综合征的患者，其使用选择性粪菌移植的效果和舒适度同样不弱于甚至高于使用标准粪菌移植的效果和舒适度。
在实际使用中，标准粪菌移植中使用的粪菌为全菌株，因此其来源仅能够为健康人体，而无法实现科学的复制，同时其施用剂型和施用方法极其受限。选择性粪菌移植仅采集或复制健康人体的部分菌群，以实现针对性菌株的施用。同时，选择性粪菌移植由于使用部分菌株，因此其成分和剂量均为可控的，并能够通过科学手段达到体外的复制和培养。选择性粪菌移植还具有多种施用剂型和施用方法，例如以药丸、悬液的方式口服，以喷雾、粉剂、悬液或药丸的方式直接施用于人体***、肠道或皮肤处。
标准粪菌移植在使用中存在一定的并发症风险，例如，标准粪菌移植后发生肺炎并致死。而选择性粪菌移植由于成分、剂量均在控制范围，且不存在多余成分和菌株，因此，出现副作用或并发症的概率极低。
本发明中的选择性粪菌移植设计的组合物能够以不弱于甚至强于标准粪菌移植的效果和舒适度，同时实现粪菌移植的体外培养和精准治疗，一方面降低了药品及施用过程的医疗成本，并且减少了全菌施用带来的额外并发症风险；另一方面，剂量、成分精准的益生菌能够形成口服或其他的多选择性的施用方法，尤其是对于儿童而言，治疗过程中的药剂比例的精确性能够大大提高其肠道问题治愈的可能。
实施例4
本次试验中还设置了包含由短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌等比混合的P-fhw胶囊，显示相较于FMT胶囊对照组，具有上述成分的P-fhw胶囊对于患者的肠道应激征缓解效果更好。
实施例5
本次试验中还设置了包含由两份短双歧杆菌、一份婴儿双歧杆菌、两份嗜酸乳杆菌、一份干酪乳杆菌、一份植物乳杆菌混合的P-fhw胶囊，显示相较于FMT胶囊对照组，具有上述成分的P-fhw胶囊对于患者的肠道应激征缓解效果更好。
实施例6
传统的“粪菌移植”技术主要通过肠道的粪菌移植方式进行肠易激综合征治疗。然而，在实际操作中，肠道移植的方式不仅增加了移植的时间和成本，还为治疗带来了手术风险。
因此，在将本发明提供的微生物组合物进行特殊的冻干处理后，本发明提供的微生物组合物能够存储于胶囊内部，形成一种包含本发明提供的微生物组合物的P-fhw胶囊。
P-fhw胶囊能够使患者服用微生物组合物定性定量。在选择口服时，能够增加患者服用的舒适度。
实施例7
按照IBS临床诊断标准，本次试验共招募患者60人，30人给予P-fhw胶囊(包含复合益生菌)治疗，30人给予FMT胶囊治疗。P-fhw胶囊干预方式为每天1次，连续干预4周；FMT胶囊干预1次。分别在第0周、2周、4周、8周、12周进行跟踪随访，了解治疗效果。
通过上述方法得到如图2所示的IBS-SSS量表。具体地，图2所示的IBS-SSS量表包括腹痛程度、腹痛天数、腹胀程度、排便满意度及生活干扰等5项，每项积分为100分，总分500分。根据积分水平，IBS分为轻中重三度，轻度为76～175分，中度为176～300分，超过300分为重度。
结果显示在不借助化药的情况下，服用本发明中涉及的用于肠道微生态调节的P-fhw胶囊两周，患者的IBS症状可以由中度改善为轻度。持续服用1个月症状持续缓解，整体有效率达64.3％。停止干预后第8周和第12周效果能够继续保持肠道健康状态，本发明中涉及的用于肠道微生态调节的P-fhw胶囊的有效率分别为69.2％(18/26)和68％(17/25)。
与FMT相对比，通过差异分析显示，干预结束时(4W)的P值为0.994，干预结束后的2个月(12w)P值0.999，干预效果就有效率统计结果来看整体效果略优于FMT，且能够保持长久的治愈效果。因此，本发明涉及的微生物组合物能够等效替代粪菌移植治疗肠道疾病的微生物组合物。详细数据请见如下表2所示。
表2
Figure BDA0003458839780000131
Figure BDA0003458839780000141
本发明涉及的肠道菌群微生态保护和调节的方法，通过服用本发明提供的益生菌组合物，以明确菌种种类和数量的方式对肠易激综合征的患者进行肠道菌群调节。肠道菌群失衡导致的肠易激综合征患者需要补充额外的菌群以调整自身的菌群状态，而区别于现有技术中无差别的未知菌群的补给，本发明根据患者的肠道菌群数据分析，进行针对性的肠道菌群缺失种类补给，从而实现整个肠道微生态的调控。通过个体的肠道精准分析，达到精准医疗的目的。具体地，通过宏基因组测序和测序数据的分析的方式了解患者的肠道菌群的分布后，明确患者肠道内益生菌菌种的种类丰度，从而分析得到需要补充的益生菌菌种和数量，并进行精准菌群的补给。例如，患者在进行肠道菌群检测和数据分析后，明确自身肠道缺乏短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌，且上述缺乏的菌种在肠道内丰度基本相同后，进行短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌的等比补给，从而维护肠道内的健康菌种的微生态群。
需要注意的是，上述具体实施例是示例性的，本领域技术人员可以在本发明公开内容的启发下想出各种解决方案，而这些解决方案也都属于本发明的公开范围并落入本发明的保护范围之内。本领域技术人员应该明白，本发明说明书及其附图均为说明性而并非构成对权利要求的限制。本发明的保护范围由权利要求及其等同物限定。本发明说明书包含多项发明构思，诸如“优选地”、“根据一个优选实施方式”或“可选地”均表示相应段落公开了一个独立的构思，申请人保留根据每项发明构思提出分案申请的权利。在全文中，“优选地”所引导的特征仅为一种可选方式，不应理解为必须设置，故此申请人保留随时放弃或删除相关优选特征之权利。

Claims (10)

1.一种用于肠道菌群调和的微生物组合物，其特征在于，所述微生物组合物包含双歧杆菌属菌株和/或乳杆菌属菌株。
2.根据权利要求1所述的微生物组合物，其特征在于，所述双歧杆菌属菌株选自包含短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌的组。
3.根据权利要求1或2所述的微生物组合物，其特征在于，所述乳杆菌属菌株选自包含嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖杆菌、罗伊氏乳杆菌、瑞士乳杆菌的组。
4.根据权利要求1～3任一项所述的微生物组合物，其特征在于，所述微生物组合物能够通过与肠道微生态环境互作，以缓解或治疗由肠道蠕动异常、内脏高敏感、肠道细菌感染和/或食物过敏引起的非健康状态。
5.根据权利要求1～4任一项所述的微生物组合物，其特征在于，所述微生物组合物为冻干粉剂。
6.根据权利要求1～5任一项所述的微生物组合物，其特征在于，所述组合物还能够用于治疗肠易激综合征。
7.一种微生物组合物的用途，其特征在于，权利要求1～6中任一项微生物组合物用于预防或治疗难辨梭菌感染、炎症性肠病、肠易激综合征、多器官功能障碍综合征、药物超敏反应综合征或合并肠道菌群失调之用途。
8.一种P-fhw胶囊，其特征在于，包含权利要求1～6中任一项所述微生物组合物。
9.一种微生物组合物的施用方法，其特征在于，其包含以下步骤：
提供权利要求1～6中任一微生物组合物；
以口服或肠道移植的方式植入人体内部。
10.一种用于肠道菌群调和的微生物组合物的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
提供包含权利要求1～6中任一微生物组合物的粪菌液；
所述粪菌液中添加保护剂，所述保护剂能够用于在粪菌液处理环境中定向保护权利要求1中涉及的微生物；
处理添加了保护剂的所述粪菌液，使所述处理后的粪菌液能够施用于人体。
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