CN114159332B - 一种脂质体组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种脂质体组合物及其制备方法，包括双分子层；双分子层包括卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63；脂质体组合物的制备方法：将卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63混合，加入溶剂进行溶解，然后挥干溶剂，加入纯水水化，超声处理，得到脂质体组合物；该脂质体组合物含有四次跨膜蛋白CD63，能够提高脂质体组合物的稳定性，使其具有外泌体的透皮性能，可用于护肤领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种脂质体组合物及其制备方法，属于功能性组合物技术领域。
背景技术
化妆品透皮吸收指的是化妆品中的功能性成分按产品的有效性作用于皮肤表面或进入表皮或真皮等不同肤层，并在该部位积聚和发挥作用的过程。化妆品透皮吸收的生理结构主要包括角质层、毛囊、皮脂腺和汗管口。经角质层渗透的途径可分为两种：细胞间途径和跨细胞途径。一般认为，透皮渗透的主要屏障来自角质层。有研究表明，在离体透皮实验中，将皮肤角质层剥除后，物质的渗透性可增加数十倍甚至数百倍。分子质量小的药物，能向吸收的最大屏障角质层中扩散，尽管数量上很有限，但其扩散速度越往里越大。在角质层中的扩散途径有细胞间隙扩散和细胞膜的扩散两种。一般认为脂溶性、非极性物质易通过细胞间隙的脂质双分子层扩散，而水溶性和极性物质易通过角质细胞扩散。
由卵磷脂和神经酰胺等制得的脂质体(空心)，具有的双分子层结构与皮肤细胞膜结构相同，有包封作用，用于包封保湿物质如透明质酸、聚葡糖苷等的脂质体是更优秀的保湿性物质，对皮肤有优良的保湿作用，有利于皮肤通过透皮吸收获取营养或功能性成分。但脂质体的分子大小差异较大，分子越小，则脂质体的稳定性无法保证，发挥的功能亦逐渐减弱。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种脂质体组合物，该脂质体组合物含有四次跨膜蛋白CD63，能够提高脂质体组合物的稳定性，使其具有外泌体的透皮性能，可用于护肤领域。
本发明的第二个目的在于提供一种上述脂质体组合物的制备方法，该制备方法能够维持脂质体的稳定性。
本发明的第三个目的在于提供一种上述脂质体组合物的应用。
实现本发明的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种脂质体组合物，包括双分子层；双分子层包括卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63。
进一步地，双分子层包括按重量份计的组分：
进一步地，双分子层包括按重量份计的组分：
进一步地，脂质体组合物还包括活性成分；双分子层包覆活性成分。
进一步地，活性成分为油溶性活性成分。
进一步地，油溶性活性成分为红没药醇。
进一步地，活性成分的重量份为0.1-9份。
进一步地，脂质体的粒径为a，0＜a≤100nm。
实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种脂质体组合物的制备方法，将卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63混合，加入溶剂进行溶解，然后挥干溶剂，加入纯水水化，超声处理，得到脂质体组合物。
进一步地，将卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63混合，加入三氯甲烷进行溶解，然后挥干三氯甲烷，加入纯水水化，400W超声处理，得到脂质体组合物。
实现本发明的第三个目的可以通过采取如下技术方案达到：将如上所述的脂质体组合物用于涂抹皮肤。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
1、本发明脂质体组合物以卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63组合使用形成双分子层，可直接使用或用于包覆多种类型的活性成分，维持活性成分的性能；
2、本发明脂质体组合物形成的粒径较小，具有良好的稳定性，具有与外泌体类似的性质和透皮性能，可用于护肤领域，有利于皮肤吸收活性成分；
3、本发明制备方法使得脂质体组合物的双分子层均匀度好，形成的脂质体粒径较小，但稳定性更好。
具体实施方式
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述：
一种脂质体组合物，包括脂质体和活性成分；脂质体包覆活性成分；
脂质体的双分子层包括按重量份计的组分：
其中，活性成分为油溶性活性成分；
其中，活性成分的重量份为0.1-9份；
其中，脂质体的粒径为a，0＜a≤100nm。
脂质体组合物的制备方法：将卵磷脂、胆固醇、糖蛋白、四次跨膜蛋白CD63和活性成分混合，加入三氯甲烷进行溶解，然后挥干三氯甲烷，加入纯水水化，400W超声处理，得到脂质体组合物。制备方法使得脂质体组合物的双分子层均匀度好，包裹性良好，粒径a，0＜a≤100nm且保持良好的稳定性和包覆性能。
上述脂质体组合物可以单独使用也可以稳定存在于水剂、乳液面霜等乳化体系中，可用于涂抹皮肤，例如面部、颈部和腹部等。
外泌体是更小尺寸的由细胞分泌的脂质体。由于外泌体本身具有一定的不稳定性，不能在化妆品里面长期保存，因此外泌体在化妆品里面几乎没有直接应用。本申请通过卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63制备一种人工的外泌体，四次跨膜蛋白CD63是四次跨膜蛋白超家族的成员，在外泌体细胞膜中，也被认为是经典外泌体标记物。实验结果表明，敲除CD63的表达会减少直径较小的胞外囊泡(外泌体)的分泌，但不会影响直接较大的胞外囊泡的分泌，表明CD63控制和调控了脂质体组合物的尺寸和形成。进一步分析表明，CD63可以调节细胞内外泌体发生泡形成时的细胞膜弯曲，进而影响其尺寸。此外，CD63还在稳定脂质体组合物和细胞识别中发挥重要作用。本发明中，通过引入CD63可以有效的控制脂质体组合物的粒径。
本发明所使用的糖蛋白为外泌体膜蛋白通过糖基化与寡糖链共价相连构成的分子，其中包括了糖基磷脂酰肌醇(glycophosphatidylinositol，GPI)锚定糖基化和N-糖基化两种方式。这种糖基化修饰一方面构成了参与细胞识别，作为特定细胞的表面标志物，具有显著的靶向能力；另外一方面可以显著的降低人体免疫细胞的排斥反应，使构建的脂质体组合物具有更高的生物相容性。
本发明脂质体组合物以卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63组合使用形成双分子层，可有效包覆多种类型的活性成分，维持活性成分的性能；脂质体粒径a，0＜a≤100nm，且稳定性好，具备外泌体的性质和透皮性能。
实施例1-3和对比例1-2：
一种脂质体组合物，包括脂质体和活性成分；脂质体包覆活性成分，脂质体的双分子层和活性成分的重量份如表格1所示：
表格1实施例1-2和对比例1-2的脂质体成分重量份
| 双分子层组分 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 对比例1 | 对比例2 |
| 卵磷脂 | 85 | 88.5 | 82 | 89.5 | 85 |
| 胆固醇 | 5 | 8 | 6 | 0 | 5 |
| 糖蛋白 | 1 | 3.9 | 3 | 5 | 5 |
| 四次跨膜蛋白CD63 | 0.5 | 0.4 | 0.8 | 0.5 | 0 |
| 活性成分(红没药醇) | 8.5 | 0.15 | 6 | 5 | 5 |
脂质体的质量总量为300mg。
脂质体组合物的制备方法：将卵磷脂、胆固醇、糖蛋白、四次跨膜蛋白CD63和红没药醇混合，加入8mL三氯甲烷进行溶解，然后挥干三氯甲烷，加入10mL纯水水化30min，35℃下搅拌1h，400W超声处理10min，得到脂质体组合物。使用Zetasizer3000SH激光测粒仪(Malvern Instruments Ltd)测试所得纳米脂质体的粒径，评价纳米脂质体的粒径尺寸。结果如表格2所示：
表格2实施例和对比例的粒径
由测试结果可知，在同时使用卵磷脂、胆固醇、糖蛋白、四次跨膜蛋白CD63时，可以获得稳定的粒径小于100nm的脂质体。同时，胆固醇和四次跨膜蛋白CD63均在调节脂质体粒径的过程中发挥着关键作用，胆固醇可以提高脂质体膜***的流动性，而四次跨膜蛋白CD63可以调节细胞膜的弯曲效率。当组合物中没有胆固醇或者没有四次跨膜蛋白CD63时，脂质体粒径会迅速变大，无法有效形成粒径小于100nm的脂质体。因此四种成分组合使用，可以协同且有效调节脂质体的粒径。
对于本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及变形，而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种脂质体组合物，其特征在于包括双分子层；所述双分子层包括卵磷脂、胆固醇、糖蛋白和四次跨膜蛋白CD63；所述双分子层包括按重量份计的组分：
所述脂质体组合物还包括活性成分0.1-9份；所述双分子层包覆活性成分；所述活性成分为红没药醇。
2.如权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述双分子层包括按重量份计的组分：
3.如权利要求1所述的脂质体组合物，其特征在于，所述脂质体的粒径为a，0＜a≤100nm。
4.一种脂质体组合物的制备方法，其特征在于，包括将卵磷脂、胆固醇、糖蛋白、四次跨膜蛋白CD63和红没药醇混合，加入三氯甲烷进行溶解，然后挥干三氯甲烷，加入纯水水化，超声处理，得到脂质体组合物；
卵磷脂、胆固醇、糖蛋白、四次跨膜蛋白CD63和红没药醇的重量份为：
5.如权利要求4所述的脂质体组合物的制备方法，其特征在于，400W超声处理，得到脂质体组合物。
6.一种脂质体组合物的应用，其特征在于，将如权利要求1所述的脂质体组合物用于涂抹皮肤；所述涂抹皮肤以非疾病治疗为目的。
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